JPH08143454A

JPH08143454A - 神経成長因子産生増強剤

Info

Publication number: JPH08143454A
Application number: JP28308494A
Authority: JP
Inventors: Kazuyoshi Yazawa; 一良矢澤; Mayumi Kano; 真弓鹿野; Koji Yamaguchi; 宏二山口; Tomoko Tsuji; 智子辻
Original assignee: KANAGAWA KAGAKU KENKYUSHO KK; Sagami Chemical Research Institute
Current assignee: KANAGAWA KAGAKU KENKYUSHO KK; Sagami Chemical Research Institute
Priority date: 1994-11-17
Filing date: 1994-11-17
Publication date: 1996-06-04

Abstract

(57)【要約】【目的】副作用の少ない、優れた活性を有する神経成
長因子の産生増強剤の提供。【構成】炭素数２０〜２２のｎ−３系高度不飽和脂肪
酸であるイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエ
ン酸、それらのエステル及び薬学上許容し得る塩を有効
成分として含有する神経成長因子産生増強剤。【効果】イコサペンタエン酸やドコサヘキサエン酸が
強いＮＧＦ産生増強活性を示すことから、中枢機能障
害、特に、アルツハイマー痴呆症や脳虚血病態に対する
予防及び治療薬、また、末梢神経機能回復および神経再
生促進などの神経成長因子産生増強剤として利用されう
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、炭素数２０〜２２のｎ
−３系高度不飽和脂肪酸を有効成分として含有する神経
成長因子〔(Nerve growth factor)、以下ＮＧＦと称
する。〕産生増強剤に関するものであり、更に詳しく
は、本発明の炭素数２０〜２２のｎ−３系高度不飽和脂
肪酸として、イコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキ
サエン酸、それらのエステル及び薬学上許容し得る塩を
含むものである。

【０００２】

【従来の技術】ＮＧＦは、神経組織の成長や機能維持に
必要な栄養、成長因子の一つであり、末梢神経系では、
知覚、交感神経の、また、中枢神経系では、大細胞性コ
リン作動性ニューロンの成熟、分化、生命維持に不可欠
なものと考えられている。そこで、ＮＧＦレベルを上昇
させることは、アルツハイマー病、血管性痴呆症などの
中枢機能障害、脊髄損害、末梢神経損傷、糖尿病性神経
障害および筋萎縮性側索硬化症などの末梢機能障害の治
療に有用と考えられている。

【０００３】しかしながら、ＮＧＦは、分子量が１万３
千（モノマー）もしくは２万６千（ダイマー）の蛋白質
であり、血液脳関門を通過することが出来ないことか
ら、生体中でＮＧＦの産生を促進する物質を投与して、
ＮＧＦの生合成を促進することにより、中枢機能障害お
よび末梢機能障害を改善することが好ましいと考えられ
ている。

【０００４】この考えに基づいてＮＧＦの産生を促進・
増強する物質の探索が試みられ、これまでに、エピネフ
リン、ノルエピネフリンおよびドーパミンなどのカテコ
ールアミン類が見い出されているが、これらの化合物は
ホルモン物質であることから、その投与は、生体内での
ホルモンの量的バランスを崩すという弊害を伴うことが
知られている。また、特開平６−１５７３３８号公報に
は炭素数１２〜２４の飽和もしくは不飽和脂肪酸より誘
導されるジアシル型のグリセロリン脂質がＮＧＦの産生
を促進すると開示されているが、炭素数２０〜２２のｎ
−３系高度不飽和脂肪酸であるイコサペンタエン酸やド
コサヘキサエン酸、それらのエステル及び薬学上許容し
得る塩がＮＧＦの産生促進あるいは増強作用を有するこ
とは知られていない。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、副作用を伴
うことのない、優れたＮＧＦ産生増強剤を提供せんとす
るものである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、ＮＧＦの
産生を増強する薬剤について鋭意研究を進めたところ、
炭素数２０〜２２のｎ−３系高度不飽和脂肪酸、とくに
イコサペンタエン酸やドコサヘキサエン酸がＮＧＦの産
生を増強する効果を示すことを見いだし、本発明を完成
した。

【０００７】本発明において、ｎ−３系高度不飽和脂肪
酸とは、遊離酸、そのエステル、及びその薬学上許容し
得る塩を意味するものである。即ち、本発明においてイ
コサペンタエン酸とは、イコサペンタエン酸、イコサペ
ンタエン酸メチルエステル、イコサペンタエン酸エチル
エステル、イコサペンタエン酸プロピルエステル、イコ
サペンタエン酸ｎ−ブチルエステル等の化合物および
イコサペンタエン酸の薬学上許容し得る塩などを意味す
るものである。また、本発明においてドコサヘキサエン
酸とは、ドコサヘキサエン酸、ドコサヘキサエン酸メチ
ルエステル、ドコサヘキサエン酸エチルエステル、ドコ
サヘキサエン酸プロピルエステル、ドコサヘキサエン酸
ｎ−ブチルエステル等の化合物およびドコサヘキサエ
ン酸の薬学上許容し得る塩などを意味するものである。

【０００８】本発明の炭素数２０〜２２のｎ−３系高度
不飽和脂肪酸を有効成分として含有する神経成長因子産
生増強剤は、経口または非経口のいずれの投与形態も可
能である。経口投与の場合は、カプセル剤、錠剤、粉剤
などの通常の方法で投与することもできる。また、非経
口投与の場合には、注射剤、輸液剤などの剤形で投与さ
れる。さらに徐放剤も効果的である。

【０００９】本発明の有効成分を製剤化するには、界面
活性剤、賦形剤、着色料、保存料およびコーティング助
剤などが適宜使用される。また、他の薬剤との併用も行
うことができる。本発明の神経成長因子産生増強剤は、
それ自体ＮＧＦの産生を増大させると共に、既知のＮＧ
Ｆの産生促進剤と組合わせると、ＮＧＦ産生促進作用を
増大させる。

【００１０】以下に、実施例を示すが、本発明はこれら
の実施例に何ら限定されるものではない。

【００１１】

【実施例】

実施例１マウス結合組織由来の繊維芽細胞樹立株Ｌ−Ｍ細胞を、
０．５％バクトペプトン（Difco Laboratories社製）を
含む１９９培地（Flow Laboratories社製）に細胞数が
０．８〜１．０×１０⁵個／穴になるように懸濁させ、
平底９６穴マイクロプレート（Nunc社製）に入れ、ＣＯ
₂インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ₂−９５％空気の
雰囲気下）で３日間培養した。各穴を０．５％脂肪酸不
含牛血清アルブミン（Armour Pharmaceutical社製）／
リン酸緩衝溶液２００μｌで３回洗浄した後、ドコサヘ
キサエン酸〔ＤＨＡ、３０μmol/L〕を含む０．５％牛
血清アルブミン／１９９培地２００μｌに培地交換して
２４時間ＣＯ₂インキュベーター中で培養後、各穴を
０．５％牛血清アルブミン／リン酸緩衝溶液２００μｌ
で３回洗浄して脂肪酸（ドコサヘキサエン酸）を除去
し、次いで４−メチルカテコールを含む０．５％牛血清
アルブミン／１９９培地２００μｌを各穴に加え、更
に、２４時間ＣＯ₂インキュベーター中で培養した。培
養後、上澄液中に含まれるＮＧＦ量を下記の酵素免疫測
定法(KorschingとThoenen、Proc. Natl. Acad. Sci.,
U.S.A., 80. 3513-3516, 1983.)で測定した。結果を表
１に示す。

【００１２】ＮＧＦの測定法ポリスチレン製の９６穴マ
イクロプレート（住友ベークライト社製 MS-3496F）に
抗マウスβＮＧＦ抗体（マウス顎下腺より調製したβＮ
ＧＦを抗原にして作製したもの）溶液（ｐＨ８．３）を
各穴に５０μｌずつ分注し、３７℃で４時間放置した。
マイクロプレートに吸着されなかった抗体を除去後、洗
浄液で各穴を３回洗浄した。標準試料溶液（βＮＧＦ
東洋紡社製）あるいは試料溶液をそれぞれ４０μlずつ
各穴に分注し、４℃で１８時間放置した後、試料溶液を
除去し、各穴を３回洗浄した。β−ガラクトシダーゼ標
識抗体βＮＧＦモノクロナール抗体（Boehringer Mammh
eim社製）溶液（４０mU/ml、pH7.6）を各穴に50μｌず
つ分注し、３７℃で４時間放置した後、標識抗体を除去
し、３回洗浄した。４−メチルウンベリフェリル−β−
Ｄ−ガラクトシド（Sigma社製）溶液（20μg/ml、pH7.
6）を各穴に100μlずつ分注し、室温で１．５時間反応
させた後0.2Mグリシン−水酸化ナトリウム緩衝液（pH1
0.3）を各穴に100μlづつ分注して酵素反応を停止さ
せ、生成した４−メチルウンベリフェロンの蛍光強度を
プレートリーダーで測定し、標準曲線よりＮＧＦ量を算
出した。

【００１３】

【表１】４−メチルカテコールＤＨＡ処理した細胞のの添加量ＮＧＦ産生相対値 ──────────────────── 無添加 1.52 1.56mg/ml 1.34 3.13mg/ml 2.19 6.25mg/ml 6.07 ────────────────────

【００１４】なお、被験化合物（ドコサヘキサエン酸）
のＮＧＦ産生増強活性は、無処理細胞（被験化合物無添
加）が産生したＮＧＦ量に対する相対値で表した。上記
の結果から明らかなように、ＤＨＡは単独で１．５倍の
ＮＧＦを産生すると共に、既知のＮＧＦ産生剤である４
−メチルカテコールと組合わせ場合、６倍以上のＮＧＦ
を産生した。

【００１５】実施例２被験化合物としてイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を用い
た以外は実施例１と同様にして、ＮＧＦ産生増強活性を
調べた。結果を表2に示す。

【００１６】

【表２】４−メチルカテコールＥＰＡ処理した細胞のの添加量ＮＧＦ産生相対値 ──────────────────── 無添加 3.20 1.56mg/ml 1.69 3.13mg/ml 3.28 6.25mg/ml 3.41 ────────────────────

【００１７】上記の結果から明らかなように、ＥＰＡ
は、既知のＮＧＦ産生促進剤である４−メチルカテコー
ルと組合わせ場合、３倍以上のＮＧＦを産生した。

【００１８】参考例１被験化合物としてリノール酸を用いた以外は実施例１と
同様にして、ＮＧＦ産生増強活性を調べた。結果を表３
に示す。

【００１９】

【表３】４−メチルカテコールリノール酸処理した細胞のの添加量ＮＧＦ産生相対値 ──────────────────── 無添加 1.25 1.56mg/ml 1.24 3.13mg/ml 1.50 6.25mg/ml 1.69 ────────────────────

【００２０】参考例２被験化合物としてリノレン酸を用いた以外は実施例１と
同様にして、ＮＧＦ産生増強活性を調べた。結果を表４
に示す。

【００２１】

【表４】４−メチルカテコールリノレン酸処理した細胞のの添加量ＮＧＦ産生相対値 ──────────────────── 無添加 0.92 1.56mg/ml 0.92 3.13mg/ml 1.24 6.25mg/ml 1.29 ────────────────────

【００２２】参考例３被験化合物としてアラキドン酸を用いた以外は実施例１
と同様にして、ＮＧＦ産生増強活性を調べた。結果を表
５に示す。

【００２３】

【表５】４−メチルカテコールアラキドン酸処理した細胞のの添加量ＮＧＦ産生相対値 ──────────────────── 無添加 1.27 1.56mg/ml 1.09 3.13mg/ml 0.81 6.25mg/ml 1.97 ────────────────────

【００２４】

【発明の効果】炭素数が２０〜２２のｎ−３系高度不飽
和脂肪酸である、イコサペンタエン酸やドコサヘキサエ
ン酸が強いＮＧＦ産生増強活性を示すことから、本発明
の神経成長因子産生増強剤は、中枢機能障害、特に、ア
ルツハイマー痴呆症や脳虚血病態に対する予防及び治療
薬、また、末梢神経機能回復および神経再生増強剤とし
て利用される。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】炭素数２０〜２２のｎ−３系高度不飽和
脂肪酸を有効成分として含有する神経成長因子産生増強
剤。
【請求項２】炭素数２０〜２２のｎ−３系高度不飽和
脂肪酸がイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエ
ン酸、それらのエステル及び薬学上許容し得る塩である
請求項１に記載の神経成長因子産生増強剤。