JPH0812530A - 毛成長促進因子及びこれを含有する育毛促進剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 次の理化学的性質及び生理活性（ａ）〜
（ｃ）を有する毛成長促進因子及びこれを含有する育毛
促進剤。 （ａ）ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルを用いた電気泳
動による分子量が約１３，２００である。 （ｂ）ｐＨ３．０〜９．０において安定した活性を有
し、還元処理（５ｍＭ ジチオスリトール、２０℃）に
おいて安定であるが、熱処理（６５℃以上、３０分以
上）により活性を失う。 （ｃ）毛母細胞と毛乳頭細胞との相互作用を増強して、
毛母細胞の増殖を活性化させる作用を有する。 【効果】 本発明の毛成長促進因子は、毛の成長に重要
な毛母細胞と毛乳頭細胞の相互作用を増強して毛母細胞
の増殖を活性化する作用を有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、育毛、養毛及び脱毛防
止作用を与える毛成長促進因子及びこれを含有する育毛
促進剤に関し、詳しくは毛母細胞と毛乳頭細胞との相互
作用を増強し、毛母細胞の増殖を活性化することで、毛
の成長促進、抜毛防止効果などの優れた特性を有する毛
成長促進因子及びこれを含有する育毛促進剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】毛は成長期、退行期、休止期の毛周期を
もって成長している。毛が成長する期間、毛包は成長期
にあると呼ばれ、その後、退行期を経て毛の成長が停止
し、成長期よりも萎縮した状態の毛包を有するとき、毛
包は休止期にあると呼ばれる。この毛周期の障害は脱毛
症を引き起こす。例えば、ヒトにおいて最も普通の脱毛
症である男性型脱毛症は、毛包の数の減少ではなく、繰
り返される毛周期において、成長期間が短縮したために
硬毛がその大きさを漸次的に縮小化することに起因して
いる。従って、男性型脱毛症は硬毛から軟毛への変換が
起こる一連の進行的変化と考えられる。

【０００３】毛の成長機構については現在もまだ不明な
点が多いため、男性型脱毛症を引き起こす軟毛化の薬学
的治療法は未だ確立されていない。しかし、最近の組織
培養技術の進歩により、毛包組織を構成する細胞の培養
が可能になり、毛の成長機構を知る上で重要な知見が得
られてきている。

【０００４】例えば、Ｐｈｉｌｐｏｔｔら［Ｊ．Ｃｅｌ
ｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，９７，ｐ４６３〜４７１（１９９
０）］、及び今井ら［Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａ
ｌＳｃｉｅｎｃｅ，３，ｐ１６３〜１７１（１９９
２）］の毛包器官培養法を用いて各種成長因子の影響を
検討し、肝細胞成長因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ Ｇｒ
ｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ；ＨＧＦ）に毛母細胞活性化作
用があることが報告されている（特開平５−２７９２３
０号、特開平５−２１３７２１号公報）。また、線維芽
細胞成長因子（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ
Ｆａｃｔｏｒ；ＦＧＦ）の毛母細胞活性化作用も報告さ
れている（特開平４−２２４５２２号、特開平５−４３
４２４号公報）。

【０００５】ところで、本発明者らは、毛の成長に必要
な毛母細胞と毛乳頭細胞の相互作用を解析できる毛母細
胞培養法を開発した（特開平４−９９４８２号公報）。
さらに、この培養法を用いて種々の化合物について探索
した結果、血小板由来成長因子（Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｄ
ｅｒｉｖｅｄ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ；ＰＤＧ
Ｆ）に毛母細胞と毛乳頭細胞の相互作用を増強し、毛母
細胞の増殖を活性化する作用を見出した（特開平５−１
２４９３５号公報）。しかしながら、これらの毛母細胞
活性化物質が実際の生体において、毛の成長に促進的作
用をしているかどうかは不明であった。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】毛は休止期から成長期
に入る時期において、新しい毛包を形成するために毛母
細胞と毛乳頭細胞との相互作用を強め、毛母細胞の増殖
を誘導化、さらに活性化する。よって、毛周期の障害に
よる脱毛症で見られる縮小化した毛包を拡大化するため
には、生体内において毛母細胞と毛乳頭細胞との相互作
用を増強し、毛母細胞の増殖を促進する物質が求められ
るている。

【０００７】従って、本発明の目的は、生体内において
実際に毛母細胞の増殖を活性化し、毛の成長促進作用を
有する毛成長促進因子及びこれを含有する育毛促進剤を
提供することにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】このような実情におい
て、本発明者らは、体毛が初期成長期にある哺乳動物の
皮膚組織から、実際に生体において毛母細胞と毛乳頭細
胞の相互作用を増強し、毛母細胞の増殖を活性化する因
子を探索した。その結果、先の発明（特開平５−１２４
９３５号公報）よりも毛母細胞を極めて良好に増殖させ
る新規な活性物質を見出し、この活性物質の分離・精製
を行い、その物理化学的性状を明らかにし、さらにこれ
を配合すれば優れた育毛促進剤が得られることを見出
し、本発明を完成した。

【０００９】すなわち、本発明は、次の理化学的性質及
び生理活性（ａ）〜（ｃ）： （ａ）ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルを用いた電気泳
動による分子量が約１３，２００である、（ｂ）ｐＨ
３．０〜９．０において安定した活性を有し、還元処理
（５ｍＭ ジチオスリトール、２０℃）においても安定
であるが、熱処理（６５℃以上、３０分以上）により活
性を失う、（ｃ）毛母細胞と毛乳頭細胞との相互作用を
増強して、毛母細胞の増殖を活性化させる作用を有す
る、を有する毛成長促進因子を提供するものである。

【００１０】また本発明は、この毛成長促進因子を含有
する育毛促進剤を提供するものである。

【００１１】以下、上記（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）につ
いて説明する。 （ａ）分子量 本発明の毛成長促進因子を脱塩した後、非還元状態でＳ
ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行う。分子量
マーカーとしては、チトクロームＣ、α−ラクトアルブ
ミン、トリプシンインヒビター、カーボニックアンヒド
ラーゼ、オブアルブミン、アルブミンを使用した。分子
量マーカーによる計算値から、本発明の毛成長促進因子
は分子量約１３，２００のバンドとして検出される。

【００１２】（ｂ）性状 本発明の毛成長促進因子の性状は、ｐＨ３．０〜９．０
において安定した活性を有し、還元処理［５ｍＭ ジチ
オスリトール（ｄｉｔｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ）、２０
℃］でも安定であるが、熱処理（６５℃以上、３０分以
上）により活性を失うものである。

【００１３】（ｃ）毛母細胞増殖促進活性 本発明の毛成長促進因子は、新生児ラット体毛の毛母細
胞又は毛乳頭細胞をそれぞれ単独でコラーゲンゲル中に
包埋培養した培養系に添加しても細胞増殖は活性化され
ないが、毛母細胞と毛乳頭細胞とを混合してコラーゲン
ゲル中に包埋培養した培養系に添加することにより、毛
母細胞の増殖を濃度依存的に活性化するものである。

【００１４】本発明の毛成長促進因子は、例えば次のよ
うにして得ることができる。すなわち、体毛が初期成長
期にある哺乳動物を屠殺後、新鮮な皮膚を取り出し、は
さみ等で細断した後、ポリトロン等で皮膚のホモジェネ
イトを作製する。または、上記と同様にして取り出した
皮膚をドライアイス又は液体窒素下でミキサーを用いて
凍結粉砕し、皮膚の粉末を調製する。ここで、哺乳動物
としては、例えばウシ、ウマ、ヒツジ、ウサギ、ラッ
ト、マウス等いずれも利用することができる。

【００１５】このようにして調製した皮膚のホモジェネ
イト又は粉末を適当量（例えば皮膚１ｋｇに対して３〜
２０リットル）の酢酸バッファー（５０ｍＭ、ｐＨ５．
２、０．１Ｍ ＮａＣｌ）等の緩衝液を加えて洗い、不
溶画分を収集し、さらに４Ｍの塩酸グアニジンを例えば
不溶物３００ｇに対して１〜３リットル用いて抽出す
る。

【００１６】得られた皮膚組織抽出液を７Ｍ尿素で透析
し、可溶性皮膚組織抽出画分を得る。次に本画分をＤＥ
ＡＥ−セファロースカラムに吸着させ、毛成長画分が含
まれるＮａＣｌ溶出画分を逆相カラムに吸着させ、アセ
トニトリル−水の溶媒系で溶出することにより精製する
ことができる。

【００１７】本発明の毛成長促進因子を含有する育毛促
進剤は、医薬品、医薬部外品、化粧品などの外用剤とし
て用いることが好ましく、例えばクリーム、ローショ
ン、乳剤、軟膏、ゲル、ヘアトニック、ヘアリキッド、
リニメント、ヘアーリンス、ヘアーシャンプー、ヘアー
トリートメント、ヘアーコンディショナー、エアゾー
ル、ムースなどの種々の形態に製剤化でき、その基剤も
毛髪施用上許容し得る液状及び固形状の原料を幅広く使
用できる。その際、必要に応じて防腐剤、香料、安定
剤、着色剤、紫外線吸収剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘
剤など種々の公知の添加剤を加えることもできる。

【００１８】本発明育毛促進剤への毛成長促進因子の配
合量は、症状の度合、剤型などによって適宜選定するこ
とができるが、通常、製剤中０．０００１〜３重量％程
度、好ましくは０．００１〜０．１重量％程度とするこ
とができる。また、育毛促進剤への毛成長促進因子の配
合にあたっては、精製したものを配合してもよいし、粗
精製物として配合してもよい。

【００１９】本発明育毛促進剤は、この毛成長促進因子
を、単独で配合する以外に毛髪用外用剤に通常用いられ
るｃ−ＡＭＰ及びその誘導体、フォルスコリン、塩化カ
ルプロニウム、ペンタデカン酸グリセリド、ミノキシジ
ル、ｂＦＧＦ（塩基性線維芽細胞成長因子）などの他の
薬剤と組み合せて配合することによって、毛成長促進因
子の作用を増強することができる。その他にも例えば、
セファランチン、ビタミンＥ、ビタミンＥニコチネー
ト、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジ
ル、ショウキョウチンキ、トウガラシチンキ等の末梢血
管拡張剤、カンフル、メントール等の清涼剤、ヒノキチ
オール、塩化ベンザルコニウム、ウンデシレン酸等の抗
菌剤、塩化リゾチーム、グリチルリチン、アラントイン
等の消炎剤、センブリエキス、ニンニクエキス、ニンジ
ンエキス、オウゴンエキス、ローズマリーエキス、アロ
エエキス、胎盤抽出液等の細胞賦活剤などから適宜選択
して使用することができる。

【００２０】

【発明の効果】本発明の毛成長促進因子は、毛の成長に
重要な毛母細胞と毛乳頭細胞の相互作用を増強して毛母
細胞の増殖を活性化する作用を有する。従って、種々の
脱毛症の治療や予防に有用である。さらには、毛母細胞
を生体外で増殖させるための研究用試薬としても有用で
ある。

【００２１】

【実施例】以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に
説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるもの
ではない。

【００２２】実施例１ ラット（ＳＤラット、生後３〜４日齢）の皮膚１ｋｇを
細かく切り、液体窒素で凍結した後、ホモゲナイザーで
３分間粉砕した。皮膚粉末を１０リットルの酢酸バッフ
ァーに一晩浸漬することにより洗浄し、不溶画分を遠心
分離処理（３，５００Ｇ、３０分間）して収集した。不
溶画分をさらに２リットルの４Ｍ塩酸グアニジンで２日
間抽出し、濁液を遠心分離処理（３，６００Ｇ、３０分
間）して上清を得た。この上清を５倍容の７Ｍ尿素で３
回透析した。透析内液を以下の精製に供した。

【００２３】透析内液を予め７Ｍ尿素で平衡化したイオ
ン交換カラム（ＤＥＡＥ−セファロースカラム及びＭｏ
ｎｏＱカラム）に付したところ、図１に示すように０．
２〜０．４Ｍ ＮａＣｌ溶出画分に毛成長促進因子が存
在した。ここで、図１においてＡは毛母細胞増殖活性を
示し、Ｂは紫外光（２８０nm）の吸光度を示し、ＣはＮ
ａＣｌ濃度を示す。この溶出画分を０．５Ｍ ＮａＣｌ
−ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）に対して透析し、予
め０．５Ｍ ＮａＣｌ−ＰＢＳで平衡化しておいたスー
パーロース１２カラム（ファルマシア社製）でゲル濾過
クロマトグラフィーを行い、毛成長促進因子溶出画分を
得た。

【００２４】この画分を限外濾過により濃縮後、アセト
ニトリル１％（トリフルオロ酢酸０．０５％）で平衡化
した逆相カラムに吸着させた。２５％アセトニトリル
（トリフルオロ酢酸０．０５％）で洗浄した後、２５〜
４０％アセトニトリル（トリフルオロ酢酸０．０５％）
のグラディエントで溶出したところ、図２に示すように
３５〜４０％アセトニトリル付近に毛成長促進因子が溶
出した。ここで、図２においてＤは毛母細胞増殖活性を
示し、Ｅは紫外光（２２０nm）の吸光度を示し、Ｆはア
セトニトリルの濃度を示す。

【００２５】さらに、上記溶出画分を遠心エバポレータ
ーで溶媒を除去し、ＰＢＳで溶解し、予めＰＢＳで平衡
化しておいたアサヒパックＧＳ５２０カラム（旭化成社
製）でゲル濾過クロマトグラフィーを行い、図３に示す
ように溶出時間１７〜１９分付近に毛成長促進因子が単
一のピークとして得られた。ここで、図３においてＧは
毛母細胞増殖活性を示し、Ｈは紫外光（２２０nm）の吸
光度を示す。

【００２６】試験例 実施例で得られた検体（図３に示すように溶出時間１７
〜１９分付近に溶出された毛成長促進因子）について、
分子量を測定したところ、ＳＤＳ−ポリアクリル電気泳
動法で１３，２００であった。また、この毛成長促進因
子の性状を種々の処理条件で性状を調べたところ、表１
に示す結果が得られた。

【００２７】

【表１】

【００２８】更に上記で得られた毛成長促進因子を、以
下に記載する毛母細胞増殖活性の測定法により調製した
細胞培養液中に添加し、毛成長促進因子の毛母細胞増殖
活性を検討した。結果を図４に示す。

【００２９】（毛成長促進因子の活性測定法）ＳＤ系新
生児ラットを用い、皮膚組織より酸素処理法（特開平４
−００４８２号公報）を用いて毛母細胞と毛乳頭細胞を
分離し、調製した。メディウム１９９（ギブコ社製）で
ゲル化したコラーゲンゲル溶液２容に対し、上記毛母細
胞懸濁液１容を混合して十分に攪拌し、マイクロ・ウエ
ル・マルチプレートにそれぞれ２×１０⁴ 個／ウエル、
６×１０⁴ 個／ウエルとなるように植え込み、ゲルの硬
化が観察されたところでゲルと同量のメディウム１９９
を添加した。これを５％炭酸ガス存在下で３７℃にて培
養した。２４時間後に培地を除去し、メディウム１９９
に更に所定量の検体を添加した培地を加え培養した。４
８時間後に、³Ｈ−チミジン（終濃度５μＣｉ／ｍｌ）
を添加し、更に４時間培養した。この間にＤＮＡに取り
込まれた放射活性を測定することにより毛成長促進因子
の活性を調べた。

【００３０】また、各々の細胞を単独に培養し、同様に
細胞増殖活性の測定を行い、上記混合培養時の毛母細胞
増殖の活性化と比較した。その結果、各々の細胞単独の
培養系では、本発明の毛成長促進因子は増殖活性を示さ
ず、毛母細胞と毛乳頭細胞の混合培養時にのみ濃度依存
的に毛母細胞の増殖を活性化することがわかった。

【００３１】実施例２ 毛髪成長促進用ヘアートニックを調製した。

【００３２】

【表２】 ｗ／ｖ％ 毛成長促進因子 ０．０５ グリチルレチン酸 ０．０１ ｌ−メントール ０．１ エタノール ６０．０ 香料 適量 精製水 バランス

【００３３】実施例３毛髪成長促進用ヘアパックを調製
した。

【００３４】

【表３】 ｗ／ｖ％ 毛成長促進因子 ０．０５ ヒドロキシエチルセルロース ２．０ エタノール ５０．０ 香料 適量 精製水 バランス

【００３５】実施例４ 毛髪成長促進用エアゾールタイプの育毛剤を調製した。

【００３６】

【表４】 ｗ／ｖ％ 毛成長促進因子 ０．１ エチルセルロース ８．０ グリセリン １．０ ハッカ油 ０．２ エタノール ２５．７ 噴射剤（ジメチルエーテル） ６５．０

【００３７】実施例５ 脱毛防止用ローションを調製した。

【００３８】

【表５】 ｗ／ｖ％ 毛成長促進因子 ０．０５ イソプロパノール １．０ エタノール ４．０ 香料 適量 精製水 バランス

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の実施例におけるＤＥＡＥ−セファロー
スカラムクロマトグラフィーによる測定結果を示す図で
ある。

【図２】本発明の実施例における逆相カラムクロマトグ
ラフィーによる測定結果を示す図である。

【図３】本発明の実施例におけるアサヒパックＧＳ５２
０カラムによるゲル濾過クロマトグラフィーの結果を示
す図である。

【図４】本発明の実施例における毛成長促進因子が毛母
細胞のＤＮＡ増殖能に及ぼす効果を示す図である。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 次の理化学的性質及び生理活性（ａ）〜
   （ｃ）： （ａ）ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルを用いた電気泳
   動による分子量が約１３，２００である、（ｂ）ｐＨ
   ３．０〜９．０において安定した活性を有し、還元処理
   （５ｍＭ ジチオスリトール、２０℃）においても安定
   であるが、熱処理（６５℃以上、３０分以上）により活
   性を失う、（ｃ）毛母細胞と毛乳頭細胞との相互作用を
   増強して、毛母細胞の増殖を活性化させる作用を有す
   る、を有する毛成長促進因子。
2. 【請求項２】 請求項１記載の毛成長促進因子を含有す
   る育毛促進剤。