JPH0799984A - ポリ−３−ヒドロキシ酪酸の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 ポリ−３−ヒドロキシ酪酸を生産する能力を
有するメタノール資化性細菌を、単一の培養槽で、メタ
ノールを炭素源とし、平均滞留時間が１０時間以上にな
るようにリンの供給速度を制限した連続培養をすること
によりポリ−３−ヒドロキシ酪酸を菌体内に蓄積させ
る。 【効果】 本発明によるポリ−３−ヒドロキシ酪酸生産
は、連続培養プロセスであるので、従来の回分培養の繰
り返しで行うプロセスに比べ飛躍的な省力化がはかれ
る。また原料（培養の基質）がメタノールであるので、
原料コストが安くなり、また雑菌汚染の心配がない。し
たがって、ポリ−３−ヒドロキシ酪酸を大規模に、しか
も経済的かつ安定的に生産することが可能となる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はポリ−３−ヒドロキシ酪
酸（以下ＰＨＢと記す）の製造法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】ＰＨＢは、エネルギー貯蔵物質として数
多くの微生物の菌体内に生成、蓄積され、優れた生物分
解性と生体適合性とを示す熱可塑性高分子であることか
ら、環境にやさしい“クリーン”プラスチックとして注
目され、手術糸や骨折固定用材などの医用材料、および
医薬や農薬を徐々に放出する徐放性システムなどの多方
面への応用が永年にわたり期待されてきた。特に、近
年、合成プラスチックが環境汚染や資源環境の観点から
深刻な社会問題になるに至り、ＰＨＢは石油に依存しな
いバイオポリマーとして注目され、これまでにもＰＨＢ
の製造法がいくつか報告されている（特開昭６０−２１
４８８８、特開昭６０−２５１８８９、特公平０２−２
０２３８、特公平０３−６５１５４）。これらの公報に
は、炭素源（以後、基質ともいう）としてグルコースを
用いて、アルカリゲネス属の菌体を、窒素あるいはリン
を制限するなどの方法による増殖制限条件下で連続培養
することによりＰＨＢを製造する方法（特公平０２−２
０２３８）や、アゾトバクター属、プロトモナス属の菌
体をアルカリゲネス属の菌体の場合と同様に増殖制限条
件下で回分培養することによりＰＨＢを製造する方法
（特開昭６０−２１４８８８、特公平０３−６５１５
４）などが記載されているが、これらの方法は生産コス
トが高いなど工業的生産には不十分である。

【０００３】即ち、上記の発明では、菌体を増殖させる
ための主栄養素、すなわち炭素源が高価でＰＨＢの製造
コストを低く抑えることができなかったり、連続培養に
よるＰＨＢの蓄積が不十分であったり、二段階培養を行
うなど製造プロセスが複雑であるなどの欠点がある。

【０００４】原料（すなわち基質）のコストは、ＰＨＢ
生産の全体コストにおいて重要な要素である。グルコー
ス、蔗糖等を原料とするＰＨＢの生産法についての記載
が特公平０２−２０２３８、特開昭６０−２１４８８８
にあるが、これらの方法ではＰＨＢ生産コストの上昇が
さけられない。安価なメタノールを基質とした培養法に
ついては、例えば特開昭５６−１１７７９３号明細書の
記載によれば、メタノールを基質としてメチロバクテリ
ウム オルガノフィラム種の微生物を第一の培養槽にお
いて栄養素を制限せずに連続的に培養する。この際、細
胞内にはＰＨＢの蓄積が生じない。次いで、第二の培養
槽へ連続的に移送し第二の培養槽において窒素またはリ
ンを増殖の律速因子として培養する。この際に初めて細
胞内にＰＨＢの蓄積が生じる。明細書中の記載によれば
この方法で得られるＰＨＢ含有量は細胞乾燥重量の２５
〜４７重量％にすぎない。培養槽をシリーズで２槽用い
て二段階培養を行う方法は、プロセスが複雑であること
と満足のいくＰＨＢ含量を得られないことの欠点を有し
ている。

【０００５】また、特公平０２−２０２３８号明細書中
に、窒素制限下でメタノール基質でメチロバクテリウム
オルガノフィラム ＮＣＩＢ １１４８３菌株を連続
培養した記載があるが、この条件で達成された最高のＰ
ＨＢ含有量は約１１％と低いものである。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、従来
技術における上記したような課題を解決し、安価なメタ
ノールを資化し得る細菌を用いてＰＨＢをより安定に、
大量にかつ安価に製造できる連続培養による生産方法を
提供することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、ＰＨＢを
生産する能力を有するメタノール資化性細菌を用いて、
安価にＰＨＢを生産する方法を鋭意検討したところ、こ
れらの細菌を単一の培養槽で供給培地成分中のリンの供
給速度により増殖を制限する、いいかえれば増殖速度の
制限因子がリンであるリン律速条件下で連続培養する
（以下リン律速培養という）に際して、増殖速度の制限
因子がない場合の細菌の世代時間に比較して増殖速度を
非常に遅くすることにより、即ち平均滞留時間を非常に
長くすることにより細胞の増殖と並行して多量にＰＨＢ
を蓄積させ得ることを見いだし、本発明に到達した。

【０００８】すなわち、本発明はＰＨＢを生産する能力
を有するメタノール資化性細菌を、メタノールを炭素源
として連続培養し、該菌体中にＰＨＢを合成蓄積させ、
当該菌体からＰＨＢを取得するＰＨＢの製造法におい
て、単一の培養槽で平均滞留時間が１０時間以上になる
ようにリンの供給速度を制限した連続培養をすることを
特徴とするＰＨＢの製造法である。

【０００９】本発明において、ＰＨＢは −ＯＣＨ
（ＣＨ₃ ）ＣＨ₂ ＣＯ− なる繰り返し単位から構
成されるポリエステル物質である。本発明に使用される
細菌は、ＰＨＢを生産する能力を有し、メタノール資化
性を持つ細菌であればよく、たとえば、メチロバクテリ
ウム属、キサントバクター属、ハイホミクロビウム属、
パラコッカス属、メチロバチルス属およびアンキロバク
ター属の細菌などが挙げられる。

【００１０】培養のリン源としては、使用する細菌が資
化しうる物質であれば特に制限はなく、例えばリン酸ま
たはリン酸塩等が用いられる。リン酸塩としては例えば
カリウム塩、ナトリウム塩、アンモニウム塩等が用いら
れる。

【００１１】培養条件は、使用する菌株により異なる
が、一般的には、温度は２５〜４０℃、好ましくは３０
〜３８℃とされる。良好なＰＨＢ生産性を得る最適温度
は、菌株により異なることが多い。また、ｐＨは５〜
８、好ましくは６．０〜７．５が用いられる。このよう
な条件で好気的に培養されるが、そのために空気、又は
酸素を通気し、かつ酸素を培養液に有効に溶け込ませる
ために必要に応じて撹拌する。一般的には培養液中の溶
存酸素濃度は０．３ｐｐｍ以上が望ましい。

【００１２】培養槽の形式は、通気攪拌槽であればいず
れでも使用可能であり、例えば機械的撹拌槽、エアーリ
フト式培養槽および気泡塔型培養槽などを利用すること
ができる。培地の供給方法は、炭素源、窒素源、各種無
機塩類、各種添加剤などが、一括してあるいは個別に連
続的あるいは間欠的に供給される。たとえば、メタノー
ルは他の培地成分との混合物として培養槽に供給しても
よく、また他の培地成分とは別に独立して培養槽に供給
することもできる。培養液のｐＨ制御は、通常アンモニ
アガス又はアンモニア水を用いて行われる。培地成分と
して菌体の増殖に必要な窒素を十分供給している場合に
は、非窒素系塩基、例えば苛性ソーダ、苛性カリなどを
用いてｐＨを制御することもできる。

【００１３】ＰＨＢの蓄積には通常、炭素源以外の培地
成分を制限する方法が用いられる。窒素、リン、イオ
ウ、カリウム、および微量元素、例えばマンガン、亜
鉛、銅などの成分を制限するのが好ましい。本発明の場
合にはリンが制限される。リン源の供給方法は、連続的
に供給する培地成分に混合して用いるのが一般的である
が、連続的に供給する他の培地成分とは別に一定量連続
的に供給することもできる。このようにして供給するリ
ン源を菌体が活発に増殖するうえで必要とされる量より
減少させ、すなわちリン供給速度を菌体増殖の制限因子
になるように制限して行う培養法が用いられる。

【００１４】培養液中の残存リン濃度の測定は、常法に
従いイオンクロマトグラフィ（１ｐｐｍまで測定可能）
によりリン酸イオン濃度として連続的に測定されるが、
本発明の培養法によれば、実質的にリン酸イオンが検出
できない程度となる。ただし混合特性の悪いときは、培
養液中の残存リン酸イオンは、部分的に数ｐｐｍを示す
ことがあり得る。

【００１５】連続培養系で定常状態を保つ方法として
は、基質の節約という立場から基質の供給速度を制限し
ながら培養する、いわゆる基質律速培養によるものが一
般的であるが、本発明における培養法は前記の基質律速
培養とは異なり、培養槽へのリン供給速度を制限するこ
とにより定常状態を保ちながら培養を行う、すなわち増
殖を制限する因子が唯一リンのみであるリン律速培養法
である。

【００１６】本発明の連続培養に切り替えられた後は、
リン源の供給を調節して培養液中の残存リン酸イオン濃
度を通常使用されるイオン分析計では検出できない程に
低くすると同時に、培養液中の残存メタノール濃度が一
定となるように培地供給量、又はメタノール供給量を制
御する。工業的にはメタノール供給量および培地供給量
は、残存メタノール濃度をガスクロマトグラフィなどの
分析計により経時的に測定し、その信号により自動的に
調節される。培養液中の残存メタノール濃度は通常は１
０〜３０００ｐｐｍ程度、好ましくは２００〜２０００
ｐｐｍ程度に維持される。残存メタノール濃度は、培養
廃ガス中のメタノールを炭化水素計あるいは、ガスクロ
マトグラフィ等の分析計により測定することによっても
知ることができる。このようにして、一定の通気条件下
で一定の定常状態が得られ、この定常状態においては菌
の増殖を制限しているのはリンのみである。

【００１７】本発明における連続培養初期における培養
液中の菌体濃度（乾燥菌体基準、以下同様）は特に制限
はないが、通常は本発明の定常状態時の菌体濃度と同程
度か、やや低い濃度に到達したのち本連続培養へ移行す
ることが望ましい。また、本発明における連続培養中に
おける培養液中の菌体濃度は通常１０〜１００ｇ／ｌで
ある。菌の増殖速度を変えるには、リン供給速度を調節
することにより任意に変更できる。即ち、増殖速度を速
くする（平均滞留時間を短くする）にはリン供給速度を
大きくするように条件を選択すればよく、逆に増殖速度
を遅くする（平均滞留時間を長くする）にはリン供給速
度を小さくするように条件を選択すればよい。

【００１８】本発明のリン供給速度制限下での連続培養
に先立って、菌を活発に増殖させて培養液中の菌濃度が
所定値となるまで予備培養が行われる。予備培養とし
て、たとえば基質およびその他の培地成分ならびに酸素
を十分に供給しつつ行われる回分培養、もしくはリンの
みを制限して行われる回分培養、またはこれらの回分培
養に引き続いて基質およびその他の培地成分ならびにリ
ンを十分に供給しつつ行われる連続培養などがある。予
備培養は通常の方法により行われ、培養温度、ｐＨ、基
質および培地成分ならびに培地もしくは培養液中の基質
濃度などは前記の本発明の連続培養におけるものと同様
である。予備培養に引き続き、前記のリン供給速度を制
限した連続培養が行われる。リンの供給速度を小さく
し、培養槽での平均滞留時間を長くするに伴ない菌体中
のＰＨＢ含有量は増加し、平均滞留時間を１０時間以上
とした時に飛躍的なＰＨＢ含有量の増加が認められる。

【００１９】このようにして得られた培養液から、濾過
または遠心分離などの通常の固液分離によって菌体を分
離回収し、必要に応じて水などで洗浄して菌体を得る。
このようにして得られた菌体から、又は、さらに所望に
より超音波処理などで破壊された菌体から、たとえばク
ロロホルム、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化
炭化水素を抽剤として抽出して得られたＰＨＢ抽出液か
ら、これと貧溶媒とを混合するなどにより凝固沈澱させ
るなどのそれ自体公知の手段で処理してＰＨＢを分離す
る。必要に応じてさらに精製して高純度のＰＨＢを得る
ことができる。

【００２０】

【実施例】 次に本発明を実施例によりさらに具体的に
説明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるも
のではない。 実施例１ プロトモナス エクストルクエンス（Protom
onas extorquens ）Ｋ（微工研菌寄第８３９５号）を使
用した。なお、最近の文献によれば本菌は、メチロバク
テリウム（Methylobacterium）属に属するとされている
（I.J.Bousfieldand P.N.Green;Int.J.Syst.Bacterio
l.,35,209(1985)、T.Urakami et al.;Int.J.Syst.Bacte
riol.,43,504-513(1993) ）。

【００２１】工業用水１Ｌ当たり、つぎの組成を有する
回分培養用培地（培地Ａ）を調製した。

【００２２】回分培養用培地の組成 （培地Ａ） メタノール ５ ｇ ＫＨ₂ ＰＯ₄ ３ ｇ （ＮＨ₄ ）₂ ＳＯ₄ １ ｇ ＭｇＳＯ₄ ・７Ｈ₂ Ｏ １ ｇ 酵母エキス ０．２ｇ ＦｅＣ₆ Ｈ₅ Ｏ₇ ・ｘＨ₂ Ｏ ６０ ｍｇ ＺｎＳＯ₄ ・７Ｈ₂ Ｏ ２０ ｍｇ ＭｎＣｌ₂ ・４Ｈ₂ Ｏ １０ ｍｇ ＣａＣｌ₂ ・２Ｈ₂ Ｏ ４０ ｍｇ ＣｕＳＯ₄ ・５Ｈ₂ Ｏ １ ｍｇ ＫＩ １ ｍｇ ( ＮＨ₄)₆ Ｍｏ₇ Ｏ₂₄・４Ｈ₂ Ｏ １ ｍｇ ＣｏＣｌ₂ ・６Ｈ₂ Ｏ １ ｍｇ Ｈ₃ ＢＯ₃ １ ｍｇ ＮａＣｌ ５０ ｍｇ

【００２３】３Ｌ容培養槽に、この培地Ａを１．５Ｌ張
り込み、１２０℃で２０分間加熱滅菌し、冷却後、アン
モニア水でｐＨ６．５に調整し、これに別に調製された
種母２００ｍｌを植菌し、空気を通気しつつ３２℃で回
分培養を行った。回分培養時のｐＨは、２５％アンモニ
ア水で６．５に自動制御した。培養液中のメタノール濃
度は、ガスクロマトグラフィにより連続的に測定し、５
００〜１５００ｐｐｍの範囲になるように自動的にメタ
ノールを供給した。なお、撹拌機回転数を１０００ｒｐ
ｍ、通気量を１ｖｖｍとした。菌体濃度が約１０ｇ／ｌ
に達した時点で、自動的に供給されるメタノールを、別
に調製された連続用培地（培地Ｂ）に切り替え、培地の
連続供給と培養液の連続排出とを開始することにより、
連続培養に移行した。

【００２４】連続用培地の組成は、下記のごとくであ
り、１２０℃で２０分間加熱滅菌し、冷却後使用した。
ただしメタノールは、ミクロフィルターで除菌濾過して
注入した。

【００２５】 連続培養用培地組成 （培地Ｂ） 工業用水１Ｌ当り メタノール ６０ ｇ Ｋ₂ ＳＯ₄ ０．８ｇ ＭｇＳＯ₄ ・７Ｈ₂ Ｏ １ ｇ （ＮＨ₄ ）₂ ＳＯ₄ ０．５ｇ ＦｅＣ₆ Ｈ₅ Ｏ₇ ・ｘＨ₂ Ｏ ６０ ｍｇ ＺｎＳＯ₄ ・７Ｈ₂ Ｏ ２０ ｍｇ ＭｎＣｌ₂ ・４Ｈ₂ Ｏ １０ ｍｇ ＣａＣｌ₂ ・２Ｈ₂ Ｏ ４０ ｍｇ ＣｕＳＯ₄ ・５Ｈ₂ Ｏ １ ｍｇ ＫＩ １ ｍｇ ( ＮＨ₄)₆ Ｍｏ₇ Ｏ₂₄・４Ｈ₂ Ｏ １ ｍｇ ＣｏＣｌ₂ ・６Ｈ₂ Ｏ １ ｍｇ Ｈ₃ ＢＯ₃ １ ｍｇ ＮａＣｌ ５０ ｍｇ 消泡剤（Silicone KM-75） １ ｇ

【００２６】連続用培地の供給と並行して、１０％リン
酸液を連続的に供給した。１０％リン酸液の供給速度
は、連続用培地として供給されるメタノールの供給速度
に連動して、すなわちメタノールとリン酸の供給モル比
（以下Ｃ／Ｐ比と記す）が１０００となるように供給し
た。培養液中のメタノール濃度は、メタノールの損失を
少なくするため、可能な限り低くし、３００〜５００ｐ
ｐｍに制御した。イオンクロマトグラフィで培養液中の
リン酸イオン濃度を連続的に測定したが、連続培養へ移
行後、リン酸イオン濃度は次第に低下し、まもなく検出
限界（１ｐｐｍ）以下となった。平均滞留時間が約２０
時間で定常状態となった。この条件で１０日間培養を継
続したが、培養結果は安定していた。この時の培養液中
には約４２％のＰＨＢを含んだ菌体が１Ｌ当り２５ｇ存
在した。メタノール１ｇ当りの菌体収量は０．４２ｇで
あり、ＰＨＢの収量は０．１８ｇであった。その後、リ
ン酸の供給速度を変更することにより（すなわちＣ／Ｐ
比を変更することにより）平均滞留時間を変更し、平均
滞留時間とＰＨＢ含有量との関係を調べた。結果を表１
に示した。

【００２７】ＰＨＢの分析は以下により行った。菌体を
遠心分離機で集菌した後、純水で２回洗浄し、これを熱
風乾燥（１００℃）して乾燥菌体を得た。約８０ｍｇの
乾燥菌体をスクリューキャップ付き試験管にとり、クロ
ロホルム１ｍｌ、内部標準入りメタノール−硫酸溶液
（内部標準：安息香酸２００ｍｇ／１００ｍｌ、硫酸
３．５容量％）１ｍｌを加え、１２０℃で９０分加熱処
理し、菌体に含まれているポリマーの分解およびメチル
エステル化を行った。反応終了後純水を１ｍｌ加え、激
しく撹拌した後、遠心分離を行い有機溶媒層を得た。こ
の有機溶媒層をガスクロマトグラフィーで分析すること
により、ＰＨＢ成分含量を算出した。

【００２８】ガスクロマトグラフィ分析条件 装置：島津ＧＣ−７ＡＧ カラム：Ｒｅｏｐｌｅｘ ４００ ｃｈｒｏｍｏｓｏｒ
ｂ Ｇ ＡＷ−ＤＭＣＳ １０％ （６０〜８０ｍｅｓｈ） カラム温度： １６０℃ 注入口温度： ２５０℃

【００２９】

【表１】 表１ 平均滞留時間 ＰＨＢ含有量 対メタノール 菌体収率 対メタノール ＰＨＢ収率 （ｈｒ） （％） （ｇ／ｇ） （ｇ／ｇ） ７ １７ ０．４１ ０．０７ １０ ３０ ０．４１ ０．１２ ２０ ４２ ０．４２ ０．１８ ３０ ４９ ０．４２ ０．２１ ４０ ５３ ０．３８ ０．２０

【００３０】表１は平均滞留時間と、菌体中のＰＨＢ含
有量、対メタノール菌体収率及び対メタノールＰＨＢ収
率のそれぞれとの関係を示している。表１から本発明の
リン律速連続培養においては平均滞留時間が長くなるに
伴ない菌体中のＰＨＢ含有量が増加し、平均滞留時間を
１０時間以上としたときにＰＨＢ含有量の顕著な増加が
認められることがわかる。

【００３１】比較例１ リン律速連続培養を基質律速連続培養に変えたほかは、
実施例１と同様にして菌を培養した。即ち、連続的に供
給するリン酸の量を制限せずに行った。培地の供給速度
を変更することにより平均滞留時間を変更した。平均滞
留時間を２０時間としたときのＰＨＢ含有量は０％であ
った。この時の培養液中のリン酸イオン濃度は１５００
〜２０００ｐｐｍであった。培養液中にメタノールは検
出されなかった。培地の供給速度を変更することにより
平均滞留時間を変更し、滞留時間とＰＨＢ含有量との関
係を見たが、いずれの条件においてもＰＨＢ含有量は０
〜７％と非常に低いものであった。

【００３２】実施例２ プロトモナス エクストルクエンス（Protomonas extor
quens ）Ｋ（微工研菌寄第８３９５号）を使用した。３
Ｌ容培養槽に、培地Ａを１．５Ｌ張り込み、１２０℃で
２０分間加熱滅菌し、冷却後、アンモニア水でｐＨ６．
５に調整し、これに別に調製された種母２００ｍｌを植
菌し、空気を通気しつつ３３℃で回分培養を行った。回
分培養時のｐＨは、２５％アンモニア水で６．５に自動
制御した。培養液中のメタノール濃度は、ガスクロマト
グラフィにより連続的に測定し、５００〜１５００ｐｐ
ｍの範囲になるように自動的にメタノールを供給した。
撹拌機回転数を１４５０ｒｐｍ、通気量を１ｖｖｍとし
た。菌体濃度が約１５ｇ／ｌに達した時点で、別に調製
されたＨ₃ ＰＯ₄ 添加量を０．２２ｇ／ｌとした連続用
培地（培地Ｃ）の連続供給と培養液の連続排出とを開始
し、連続培養に移行した。メタノールは回分培養に引き
続き培地Ｃとは別途に、しかし培地Ｃの供給と連動させ
ながら自動的に供給された。消泡剤としてＰＰＧ（ポリ
プロピレングリコール）をメタノール中へ１％添加して
使用した。

【００３３】 連続培養用培地組成 （培地Ｃ） 工業用水１Ｌ当り Ｈ₃ ＰＯ₄ ０．２２ｇ Ｋ₂ ＳＯ₄ １．５ ｇ ＭｇＳＯ₄ ・７Ｈ₂ Ｏ ２ ｇ （ＮＨ₄ ）₂ ＳＯ₄ １ ｇ ＦｅＣ₆ Ｈ₅ Ｏ₇ ・ｘＨ₂ Ｏ １２０ ｍｇ ＺｎＳＯ₄ ・７Ｈ₂ Ｏ ４０ ｍｇ ＭｎＣｌ₂ ・４Ｈ₂ Ｏ ２０ ｍｇ ＣａＣｌ₂ ・２Ｈ₂ Ｏ ８０ ｍｇ ＣｕＳＯ₄ ・５Ｈ₂ Ｏ ２ ｍｇ ＫＩ ２ ｍｇ ( ＮＨ₄)₆ Ｍｏ₇ Ｏ₂₄・４Ｈ₂ Ｏ ２ ｍｇ ＣｏＣｌ₂ ・６Ｈ₂ Ｏ ２ ｍｇ Ｈ₃ ＢＯ₃ ２ ｍｇ ＮａＣｌ １００ ｍｇ

【００３４】培地の供給速度は、平均滞留時間が４０時
間となるように調整した。培養液中の残存メタノール濃
度は、メタノールの損失を少なくするため、可能な限り
低くし、３００〜５００ｐｐｍに制御した。イオンクロ
マトグラフィで培養液中のリン酸イオン濃度を連続的に
測定したが、連続培養へ移行後、リン酸イオン濃度は次
第に低下し、まもなく検出限界（１ｐｐｍ）以下となっ
た。平均滞留時間が約４０時間で定常状態となった。こ
の時のメタノール供給速度と連続用培地として供給され
るリン酸イオンの供給速度は、Ｃ／Ｐ比として１６７０
であった。この条件で１０日間培養を継続したが、培養
結果は安定していた。この時の培養液中には約５３％の
ＰＨＢを含んだ菌体が１Ｌ当り４５．６ｇ存在した。メ
タノール１ｇ当りの菌体収量は０．３８ｇであり、ＰＨ
Ｂの収量は０．２０ｇであった。

【００３５】実施例３ 菌株としてハイホミクロビウム メチロボラム（Hyphom
icrobium methylovorum ）ＩＦＯ １４１８０を用いた
ほかは、実施例１と同様に行った。連続培養へ移行後、
平均滞留時間が約２０時間で定常状態となった。この条
件で１０日間培養を継続したが、培養結果は安定してい
た。この時の培養液中には約４８％のＰＨＢを含んだ菌
体が１Ｌ当り２７ｇ存在した。メタノール１ｇ当りの菌
体収量は０．４５ｇであり、ＰＨＢの収量は０．２２ｇ
であった。

【００３６】

【発明の効果】本発明によりＰＨＢを、大規模に、しか
も経済的かつ安定的に生産することが可能となった。本
発明によるＰＨＢ生産は、連続培養プロセスであるので
最適条件に設定した後の運転管理が容易であり、従来の
回分培養の繰り返しで行うプロセスに比べ、滅菌作業、
種母の調製等の作業の簡素化が可能であり、飛躍的な省
力化がはかれる。更に原料（基質）がメタノールである
ので、原料コストが非常に安価となるが、基質がメタノ
ールである更によい点は、非常に限定された基質である
ため、一般性細菌による雑菌汚染がなく、長期間の安定
した連続培養が容易に継続できることにある。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 田原 寅一 新潟県新潟市太夫浜字新割182番地 三菱 瓦斯化学株式会社新潟研究所内

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ポリ−３−ヒドロキシ酪酸を生産する能
   力を有するメタノール資化性細菌を、メタノールを炭素
   源として培養することにより、該菌体内にポリ−３−ヒ
   ドロキシ酪酸を合成蓄積させ、当該菌体からポリ−３−
   ヒドロキシ酪酸を取得するポリ−３−ヒドロキシ酪酸の
   製造法において、単一の培養槽で平均滞留時間が１０時
   間以上になるようにリンの供給速度を制限した連続培養
   をすることを特徴とするポリ−３−ヒドロキシ酪酸の製
   造法。