JPH0789990A - ペプチドアミド - Google Patents
ペプチドアミドInfo
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- JPH0789990A JPH0789990A JP3130229A JP13022991A JPH0789990A JP H0789990 A JPH0789990 A JP H0789990A JP 3130229 A JP3130229 A JP 3130229A JP 13022991 A JP13022991 A JP 13022991A JP H0789990 A JPH0789990 A JP H0789990A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/75—Fibrinogen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
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Abstract
(57)【要約】
式Ｉ
ＧＰＲＰ−Ｘ−ＮＲ1−Ｒ2 Ｉ
（式中、Ｇはアミノ酸グリシンであり、Ｐはアミノ酸Ｌ
−プロリンであり、Ｒはアミノ酸Ｌ−アルギニンであ
り、Ｘはプロリン以外のタンパク質原アミノ酸またはプ
ロリンを含むこれらのアミノ酸より成るジペプチドであ
り、Ｎは窒素であり、そしてＲ1およびＲ2は同一かまた
は異なりそして水素または４個までの炭素原子を有する
低級アルキル鎖である）で示されるペプチドアミド、そ
れらの製造方法およびそれらの医薬としてのまたは診断
目的のための使用が記載される。
−プロリンであり、Ｒはアミノ酸Ｌ−アルギニンであ
り、Ｘはプロリン以外のタンパク質原アミノ酸またはプ
ロリンを含むこれらのアミノ酸より成るジペプチドであ
り、Ｎは窒素であり、そしてＲ1およびＲ2は同一かまた
は異なりそして水素または４個までの炭素原子を有する
低級アルキル鎖である）で示されるペプチドアミド、そ
れらの製造方法およびそれらの医薬としてのまたは診断
目的のための使用が記載される。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はオリゴペプチドアミドお
よびそれらの製造方法に関する。記載される化合物は血
餅の血中形成、すなわち血液凝固を妨げることができ
る。それ故、これらのペプチドは治療および診断上重要
である。
よびそれらの製造方法に関する。記載される化合物は血
餅の血中形成、すなわち血液凝固を妨げることができ
る。それ故、これらのペプチドは治療および診断上重要
である。
【０００２】
【従来の技術】従来技術によれば、血餅形成を阻害し得
る化合物が知られている。特にそのような物質としてペ
プチド誘導体およびタンパク質がある。特に、治療に用
いられている抗トロンビンIIIおよび診断に用いられて
いるペプチドクロロメチルケトンはこのグループに属す
る。これらの物質の効能はトロンビンの阻害に基づいて
いる、すなわちフィブリノーゲンはもはやフィブリンに
分解されず、またＦ XIIIは活性化されない。しかしな
がら様々な診断目的に対しては、血餅形成カスケードを
十分活性化してトロンビンを形成するかあるいはトロン
ビンを試験混合物に直接添加し、しかし血餅は形成させ
ないことが重要である。このことは、トロンビンによっ
て既に形成されているフィブリンの血餅形成を妨げるこ
とができる血餅形成阻害剤を用いなければならないこと
を意味している。
る化合物が知られている。特にそのような物質としてペ
プチド誘導体およびタンパク質がある。特に、治療に用
いられている抗トロンビンIIIおよび診断に用いられて
いるペプチドクロロメチルケトンはこのグループに属す
る。これらの物質の効能はトロンビンの阻害に基づいて
いる、すなわちフィブリノーゲンはもはやフィブリンに
分解されず、またＦ XIIIは活性化されない。しかしな
がら様々な診断目的に対しては、血餅形成カスケードを
十分活性化してトロンビンを形成するかあるいはトロン
ビンを試験混合物に直接添加し、しかし血餅は形成させ
ないことが重要である。このことは、トロンビンによっ
て既に形成されているフィブリンの血餅形成を妨げるこ
とができる血餅形成阻害剤を用いなければならないこと
を意味している。
【０００３】治療目的からは、可溶性フィブリンの存在
下にフィブリン血餅形成を妨げることが重要である。こ
れは、例えば播種性血管内凝固の場合の細動脈閉塞を妨
げるとき、あるいはリジン療法で血餅形成の局所的活性
化を保ちながらフィブリン血餅再形成を妨げるときなど
である。
下にフィブリン血餅形成を妨げることが重要である。こ
れは、例えば播種性血管内凝固の場合の細動脈閉塞を妨
げるとき、あるいはリジン療法で血餅形成の局所的活性
化を保ちながらフィブリン血餅再形成を妨げるときなど
である。
【０００４】独特許第３,８１１,６４７号に示されてい
るように、血餅形成因子XIIIの試験系は血餅形成阻害剤
の添加により確立することができる。添加される血餅阻
害剤はトロンビンは阻害しないが可溶性フィブリン鎖の
会合を妨げる。使用ペプチドはＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ
−Ｐｒｏなるペプチド配列を有する。しかしながら、血
餅形成を完全に避けるには比較的多量のこのペプチドを
添加しなければならないという欠点がある。このテトラ
ペプチドの治療への使用にも同じことがいえる。
るように、血餅形成因子XIIIの試験系は血餅形成阻害剤
の添加により確立することができる。添加される血餅阻
害剤はトロンビンは阻害しないが可溶性フィブリン鎖の
会合を妨げる。使用ペプチドはＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ
−Ｐｒｏなるペプチド配列を有する。しかしながら、血
餅形成を完全に避けるには比較的多量のこのペプチドを
添加しなければならないという欠点がある。このテトラ
ペプチドの治療への使用にも同じことがいえる。
【０００５】（１９８９年７月の）ペプチドに関する第
１１回米シンポジウム（The XIth American Symposium
on Peptides)において多くの他の活性ペプチド誘導体が
発表された（略語は更にあとで説明する）。
１１回米シンポジウム（The XIth American Symposium
on Peptides)において多くの他の活性ペプチド誘導体が
発表された（略語は更にあとで説明する）。
【０００６】
【表１】
【０００７】示されたペプチドの作用増大は、Ｃ末端構
築ブロックとして環式アミン誘導体を取り込んだことに
基づいている。
築ブロックとして環式アミン誘導体を取り込んだことに
基づいている。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は従来技
術に比べ一般と活性の高いペプチドを見出すことにあっ
た。
術に比べ一般と活性の高いペプチドを見出すことにあっ
た。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明は式Ｉ ＧＰＲＰ−Ｘ−ＮＲ1−Ｒ2 Ｉ （式中、Ｇはアミノ酸グリシンであり、Ｐはアミノ酸Ｌ
−プロリンであり、Ｒはアミノ酸Ｌ−アルギニンであ
り、Ｘはプロリン以外のタンパク質原アミノ酸、または
プロリンを含むこれらのアミノ酸より成るジペプチドで
あり、Ｎは窒素であり、そしてＲ1およびＲ2は同一かま
たは異なりそして水素または４個までの炭素原子を有す
る低級アルキル鎖である）で示されるペプチドアミド。
−プロリンであり、Ｒはアミノ酸Ｌ−アルギニンであ
り、Ｘはプロリン以外のタンパク質原アミノ酸、または
プロリンを含むこれらのアミノ酸より成るジペプチドで
あり、Ｎは窒素であり、そしてＲ1およびＲ2は同一かま
たは異なりそして水素または４個までの炭素原子を有す
る低級アルキル鎖である）で示されるペプチドアミド。
【００１０】例えば次のペプチドが挙げられる：ＧＰＲ
ＰＡ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＳ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＫ−Ｎ
Ｈ2、ＧＰＲＰＦ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＧ−ＮＨ2、ＧＰＲ
ＰＷ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＹ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＶ−Ｎ
Ｈ2、ＧＰＲＰＩ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＤ−ＮＨ2、ＧＰＲ
ＰＥ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＧ−ＮＨ（エチル）、ＧＰＲＰ
Ｇ−Ｎ（エチル）2、ＧＰＲＰＳ−ＮＨ（イソプロピ
ル）、ＧＰＲＰＷ−Ｎ（メチル）2、ＧＰＲＰＧ−ＮＨ
（ブチル）、ＧＰＲＰＰＰ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＧＧ−Ｎ
Ｈ2、ＧＰＲＰＰＲ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＲＰ−ＮＨ2、Ｇ
ＰＲＰＰＰ−ＮＨ（イソプロピル）、ＧＰＲＰＡＧ−Ｎ
Ｈ2およびＧＰＲＰＧＧ−ＮＨ2。
ＰＡ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＳ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＫ−Ｎ
Ｈ2、ＧＰＲＰＦ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＧ−ＮＨ2、ＧＰＲ
ＰＷ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＹ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＶ−Ｎ
Ｈ2、ＧＰＲＰＩ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＤ−ＮＨ2、ＧＰＲ
ＰＥ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＧ−ＮＨ（エチル）、ＧＰＲＰ
Ｇ−Ｎ（エチル）2、ＧＰＲＰＳ−ＮＨ（イソプロピ
ル）、ＧＰＲＰＷ−Ｎ（メチル）2、ＧＰＲＰＧ−ＮＨ
（ブチル）、ＧＰＲＰＰＰ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＧＧ−Ｎ
Ｈ2、ＧＰＲＰＰＲ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＲＰ−ＮＨ2、Ｇ
ＰＲＰＰＰ−ＮＨ（イソプロピル）、ＧＰＲＰＡＧ−Ｎ
Ｈ2およびＧＰＲＰＧＧ−ＮＨ2。
【００１１】立体型が規定されていないアミノ酸は好ま
しくはＬ−型として存在するがＤ−型として存在しても
よい。
しくはＬ−型として存在するがＤ−型として存在しても
よい。
【００１２】本発明によるペプチド誘導体はそれ自体知
られた方法により製造され、そして非アルキル化アミド
（Ｒ1およびＲ2が水素であるもの）の合成には固相法が
用いられる。好ましくはこの場合にInt. J. Peptide Pr
otein Res., ３４，２１５〜２２１，１９８９に記載の
手順が用いられる。
られた方法により製造され、そして非アルキル化アミド
（Ｒ1およびＲ2が水素であるもの）の合成には固相法が
用いられる。好ましくはこの場合にInt. J. Peptide Pr
otein Res., ３４，２１５〜２２１，１９８９に記載の
手順が用いられる。
【００１３】前記ペプチドは、好ましくは、酸に不安定
なアミド係留官能部（acid-labileamide anchor functi
onality)をもって誘導体化された１％架橋ポリスチレン
／ジビニルベンゼン共重合体上で合成した。初期アミノ
基形成は樹脂１ｇあたり０.３〜０.８mmolの範囲であ
る。
なアミド係留官能部（acid-labileamide anchor functi
onality)をもって誘導体化された１％架橋ポリスチレン
／ジビニルベンゼン共重合体上で合成した。初期アミノ
基形成は樹脂１ｇあたり０.３〜０.８mmolの範囲であ
る。
【００１４】合成のペプチドのＣ−末端からＮ−末端ま
で個々の保護されたアミノ酸を繰り返しカップリングさ
せて行った。アミノ酸はそれらの化学構造に応じて、Ｎ
−アルファ窒素において、そして適切な場合には第三官
能部において保護される。窒素官能部（Ｎ−アルファ）
はＦｍｏｃ基により、アルコール性側部基はtert−ブチ
ルエーテルとして、側鎖のカルボキシル基はtert−ブチ
ルエステルとして、またグアニジン基はＭｔｒまたはＰ
ｍｃ基により保護された。
で個々の保護されたアミノ酸を繰り返しカップリングさ
せて行った。アミノ酸はそれらの化学構造に応じて、Ｎ
−アルファ窒素において、そして適切な場合には第三官
能部において保護される。窒素官能部（Ｎ−アルファ）
はＦｍｏｃ基により、アルコール性側部基はtert−ブチ
ルエーテルとして、側鎖のカルボキシル基はtert−ブチ
ルエステルとして、またグアニジン基はＭｔｒまたはＰ
ｍｃ基により保護された。
【００１５】この場合にペプチド合成は、次の工程より
成る半自動式または完全自動式ペプチドシンセザイザー
で行った： −樹脂洗浄（１５ml／ｇ樹脂） 溶媒ＤＭＦ（またはジクロロメタンまたはＮ−メチルピ
ロリドン） −ＤＭＦ中２０％ピペリジンを用いたＦｍｏｃ基の分解
除去 −ＤＭＦ（またはＮ−メチルピロリドン）による樹脂洗
浄 −縮合剤例えばカルボジイミドを用いる（そして適切な
場合にはＨＯＢｔを添加する）かまたはこの代わりに混
合または対称無水物または活性エステルを用いることに
よりアミノ酸をカップリングさせる −カップリング完了後、過剰試薬を洗浄除去する（ＤＭ
Ｆ）。
成る半自動式または完全自動式ペプチドシンセザイザー
で行った： −樹脂洗浄（１５ml／ｇ樹脂） 溶媒ＤＭＦ（またはジクロロメタンまたはＮ−メチルピ
ロリドン） −ＤＭＦ中２０％ピペリジンを用いたＦｍｏｃ基の分解
除去 −ＤＭＦ（またはＮ−メチルピロリドン）による樹脂洗
浄 −縮合剤例えばカルボジイミドを用いる（そして適切な
場合にはＨＯＢｔを添加する）かまたはこの代わりに混
合または対称無水物または活性エステルを用いることに
よりアミノ酸をカップリングさせる −カップリング完了後、過剰試薬を洗浄除去する（ＤＭ
Ｆ）。
【００１６】Ｂｏｃ−アミノ酸が通常、最後のアミノ酸
として用いられた。次いでペプチドをトリフルオロ酢酸
（好ましくは９０％）の混合物を用い、またスカベンジ
ャー例えばエタンジチオール、水、レゾルシノール、ア
ニソールまたはチオアニソール（単独またはスカベンジ
ャー混合物として）の存在下に室温または４０°までの
温度で１〜２時間分解除去した。そのペプチドをエーテ
ル中で沈殿させることにより結晶化させ、そしてゲル浸
透により精製した。ペプチド純度はＨＰＬＣおよびアミ
ノ酸分析により求めた。
として用いられた。次いでペプチドをトリフルオロ酢酸
（好ましくは９０％）の混合物を用い、またスカベンジ
ャー例えばエタンジチオール、水、レゾルシノール、ア
ニソールまたはチオアニソール（単独またはスカベンジ
ャー混合物として）の存在下に室温または４０°までの
温度で１〜２時間分解除去した。そのペプチドをエーテ
ル中で沈殿させることにより結晶化させ、そしてゲル浸
透により精製した。ペプチド純度はＨＰＬＣおよびアミ
ノ酸分析により求めた。
【００１７】ペンタ−およびヘキサペプチド−アルキル
アミドは溶液中で行われる古典的方法により合成した。
まず固相法と同じ方法を用いて保護された（Ｂｏｃ−ま
たはＺ−）アミノ酸を適切なアルキルアミンにカップリ
ングした。中間体はそれらの物理的特徴に応じて、再結
晶、抽出および再沈殿により精製した。Ｎ−末端保護基
を、Ｂｏｃの場合には氷酢酸中１.２Ｎ ＨＣｌまたはジ
クロロメタン中５０％を用いた酸分解により、またＺの
場合には水素添加分解により分解除去した後、前述の如
く次のアミノ酸をカップリングする。アルギニンの場合
には単にプロトン化されるにすぎないグアニジノ基には
通常保護基は用いなかった。
アミドは溶液中で行われる古典的方法により合成した。
まず固相法と同じ方法を用いて保護された（Ｂｏｃ−ま
たはＺ−）アミノ酸を適切なアルキルアミンにカップリ
ングした。中間体はそれらの物理的特徴に応じて、再結
晶、抽出および再沈殿により精製した。Ｎ−末端保護基
を、Ｂｏｃの場合には氷酢酸中１.２Ｎ ＨＣｌまたはジ
クロロメタン中５０％を用いた酸分解により、またＺの
場合には水素添加分解により分解除去した後、前述の如
く次のアミノ酸をカップリングする。アルギニンの場合
には単にプロトン化されるにすぎないグアニジノ基には
通常保護基は用いなかった。
【００１８】最終の脱保護基の後、ペプチドを常法によ
り精製した。この目的にはゲルパーミエーション、およ
び例外としてそのほかＲＰ−１８材料でのＨＰＬＣ精製
も適切な方法であった。ＨＰＬＣおよびアミノ酸分析お
よび13Ｃ−ＮＭＲ分光法を用いて化合物の均質性および
構造を分析した。
り精製した。この目的にはゲルパーミエーション、およ
び例外としてそのほかＲＰ−１８材料でのＨＰＬＣ精製
も適切な方法であった。ＨＰＬＣおよびアミノ酸分析お
よび13Ｃ−ＮＭＲ分光法を用いて化合物の均質性および
構造を分析した。
【００１９】本発明によるペプチドの阻害能についても
試験した。このために阻害剤を血漿検体に添加しそして
トロンビン添加後、検体が血餅を形成するまでの時間を
測定した。代表的な結果を実施例に詳述する。
試験した。このために阻害剤を血漿検体に添加しそして
トロンビン添加後、検体が血餅を形成するまでの時間を
測定した。代表的な結果を実施例に詳述する。
【００２０】そこから分かるように、本発明によるペプ
チドは既知の化合物に比べ顕著に増大した阻害能を有す
る。ペンタペプチドアミドの場合には、驚くべきこと
に、特に小さなアミノ酸例えばグリシンおよびアラニン
がＣ−末端アミノ酸として有利であることがわかった。
しかしながら、従来技術によれば環状構造例えばプロリ
ンまたはピペリジン誘導体がこの場合好適とされてい
る。
チドは既知の化合物に比べ顕著に増大した阻害能を有す
る。ペンタペプチドアミドの場合には、驚くべきこと
に、特に小さなアミノ酸例えばグリシンおよびアラニン
がＣ−末端アミノ酸として有利であることがわかった。
しかしながら、従来技術によれば環状構造例えばプロリ
ンまたはピペリジン誘導体がこの場合好適とされてい
る。
【００２１】 略 語 Ａｌａ＝Ａ アラニン Ａｓｐ＝Ｄ アスパラギン酸 Ａｓｎ＝Ｎ アスパラギン Ｇｌｙ＝Ｇ グリシン Ｖａｌ＝Ｖ バリン Ｌｅｕ＝Ｌ ロイシン Ｉｌｅ＝Ｉ イソロイシン Ｓｅｒ＝Ｓ セリン Ｔｈｒ＝Ｔ トレオニン Ｍｅｔ＝Ｍ メチオニン Ｐｒｏ＝Ｐ プロリン Ｌｙｓ＝Ｋ リジン Ａｒｇ＝Ｒ アルギニン Ｇｌｕ＝Ｅ グルタミン酸 Ｇｌｎ＝Ｑ グルタミン Ｐｈｅ＝Ｆ フェニルアラニン Ｔｙｒ＝Ｙ チロシン Ｔｒｐ＝Ｗ トリプトファン ＨＯＢｔ ヒドロキシベンゾトリアゾール ＤＩＣ ジイソプロピルカルボジイミド ＴＦＡ トリフルオロ酢酸 Ｚ ベンジルオキシカルボニル Ｂｏｃ ブチルオキシカルボニル Ｆｍｏｃ フルオレニルメチルオキシカルボニル Ｐｍｃ ペンタメチルクロマンスルホニル ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
【００２２】以下の実施例を挙げて本発明を詳述する：
【００２３】
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−ＮＨ2の製
造 １ｇのＦｍｏｃ−アミド係留樹脂（アミノ基０.４７mmo
l／ｇ）を１５mlのＤＭＦで３回洗浄し、そしてＦｍｏ
ｃ基をＤＭＦ中２０％ピペリジン（１×３分；１×１０
分）を用いて分解除去した。その樹脂を各々ＤＭＦおよ
びイソプロパノールを用いて２回洗浄した。次いで、２
mmolのＦｍｏｃ−Ａｌａを１５mlのＤＭＦ中で前記樹脂
と共に３mmolのＨＯＢｔおよび２.２mmolのＤＩＣと１
時間インキュベートした。次いで過剰の試薬を濾去しそ
してその樹脂を各々ＤＭＦおよびイソプロパノールを用
いて２回洗浄した。ニンヒドリン試験を用いて転化完了
度を点検しそして完了していない場合にはカップリング
を繰り返した。他のアミノ酸のカップリングにもこの方
法を用いた。Ａｒｇの場合にはＰｍｃ保護基を用いた。
Ｂｏｃ−アミノ酸を最後のアミノ酸として用いた。ペプ
チド−樹脂をメタノールおよびジエチルエーテルで洗浄
しそして真空乾燥した。樹脂を９０％ＴＦＡおよび１０
％エタンジチオールの混合物２０mlを用いて３５℃で１
時間処理した。溶存ペプチドをエーテル中で析出させ、
そして０.５％酢酸中RSephadex−Ｇ２５でのクロマトグ
ラフィーにかけた。プールされたペプチドを凍結乾燥し
たところ、ＨＰＬＣによれば９５％純度であった。アミ
ノ酸分析は６８％のペプチド含量を示した。
造 １ｇのＦｍｏｃ−アミド係留樹脂（アミノ基０.４７mmo
l／ｇ）を１５mlのＤＭＦで３回洗浄し、そしてＦｍｏ
ｃ基をＤＭＦ中２０％ピペリジン（１×３分；１×１０
分）を用いて分解除去した。その樹脂を各々ＤＭＦおよ
びイソプロパノールを用いて２回洗浄した。次いで、２
mmolのＦｍｏｃ−Ａｌａを１５mlのＤＭＦ中で前記樹脂
と共に３mmolのＨＯＢｔおよび２.２mmolのＤＩＣと１
時間インキュベートした。次いで過剰の試薬を濾去しそ
してその樹脂を各々ＤＭＦおよびイソプロパノールを用
いて２回洗浄した。ニンヒドリン試験を用いて転化完了
度を点検しそして完了していない場合にはカップリング
を繰り返した。他のアミノ酸のカップリングにもこの方
法を用いた。Ａｒｇの場合にはＰｍｃ保護基を用いた。
Ｂｏｃ−アミノ酸を最後のアミノ酸として用いた。ペプ
チド−樹脂をメタノールおよびジエチルエーテルで洗浄
しそして真空乾燥した。樹脂を９０％ＴＦＡおよび１０
％エタンジチオールの混合物２０mlを用いて３５℃で１
時間処理した。溶存ペプチドをエーテル中で析出させ、
そして０.５％酢酸中RSephadex−Ｇ２５でのクロマトグ
ラフィーにかけた。プールされたペプチドを凍結乾燥し
たところ、ＨＰＬＣによれば９５％純度であった。アミ
ノ酸分析は６８％のペプチド含量を示した。
【００２４】
【試験】１００マイクロリットルの各種濃度の血餅形成
阻害剤（ペプチド）を２５マイクロリットルの血漿に添
加した。フィブリノーゲンからフィブリンへの転化を２
５マイクロリットルのトロンビン（５０ＩＵ／ml）の添
加により開始させた。その混合物の血餅形成は濁度を血
餅形成分析装置（コンピューターに接続されたＡＣＬ３
００）で測定することによりモニターした。
阻害剤（ペプチド）を２５マイクロリットルの血漿に添
加した。フィブリノーゲンからフィブリンへの転化を２
５マイクロリットルのトロンビン（５０ＩＵ／ml）の添
加により開始させた。その混合物の血餅形成は濁度を血
餅形成分析装置（コンピューターに接続されたＡＣＬ３
００）で測定することによりモニターした。
【００２５】第二の混合物として、５０マイクロリット
ルのペプチド溶液および５０マイクロリットルのトロン
ビン溶液を各々１００マイクロリットルの血漿に添加し
そして前述の如く測定した。血餅形成開始は、血漿検体
の場合のプロトロンビン測定のために装置の製造元（In
strumentation Laboratory、ミラノ）により規定された
のと同じ量だけ散乱光が増加した時点とみなした。
ルのペプチド溶液および５０マイクロリットルのトロン
ビン溶液を各々１００マイクロリットルの血漿に添加し
そして前述の如く測定した。血餅形成開始は、血漿検体
の場合のプロトロンビン測定のために装置の製造元（In
strumentation Laboratory、ミラノ）により規定された
のと同じ量だけ散乱光が増加した時点とみなした。
【００２６】特定されたすべてのペプチドはペプチドア
ミド（Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ）である。列挙した数値は血餅形成
時間を秒単位で示したものである。
ミド（Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ）である。列挙した数値は血餅形成
時間を秒単位で示したものである。
【００２７】
【表２】
【００２８】
【表３】
【００２９】
【表４】
Claims (8)
- 【請求項１】 式Ｉ ＧＰＲＰ−Ｘ−ＮＲ1−Ｒ2 （式中、Ｇはアミノ酸グリシンであり、Ｐはアミノ酸Ｌ
−プロリンであり、Ｒはアミノ酸Ｌ−アルギニンであ
り、Ｘはプロリン以外のタンパク質原アミノ酸またはプ
ロリンを含むこれらのアミノ酸より成るジペプチドであ
り、Ｎは窒素であり、そしてＲ1およびＲ2は同一かまた
は異なりそして水素または４個までの炭素原子を有する
低級アルキル鎖である）で示されるペプチドアミド。 - 【請求項２】 ＸがＧｌｙまたはＡｌａより成る群より
選択され、そしてＲ1およびＲ2が水素である請求項１記
載のペプチドアミド。 - 【請求項３】 アミノ酸がＬ型で存在する請求項１記載
のペプチドアミド。 - 【請求項４】 アミノ酸がＬ型で存在する請求項２記載
のペプチドアミド。 - 【請求項５】 ペプチドアミドＧＰＲＰＡ−ＮＨ2、Ｇ
ＰＲＰＳ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＫ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＦ−Ｎ
Ｈ2、ＧＰＲＰＧ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＷ−ＮＨ2、ＧＰＲ
ＰＹ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＶ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＩ−Ｎ
Ｈ2、ＧＰＲＰＤ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＥ−ＮＨ2、ＧＰＲ
ＰＧ−ＮＨ（エチル）、ＧＰＲＰＧ−Ｎ（エチル）2、
ＧＰＲＰＳ−ＮＨ（イソプロピル）、ＧＰＲＰＷ−Ｎ
（メチル）2、ＧＰＲＰＧ−ＮＨ（ブチル）、ＧＰＲＰ
ＰＰ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＧＧ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＰＲ−Ｎ
Ｈ2、ＧＰＲＰＲＰ−ＮＨ2、ＧＰＲＰＰＰ−ＮＨ（イソ
プロピル）、ＧＰＲＰＡＧ−ＮＨ2およびＧＰＲＰＧＧ
−ＮＨ2。 - 【請求項６】 保護されたアミノ酸、アミノ酸誘導体ま
たはペプチドセグメントを溶液中または固相で相互にカ
ップリングさせ、そして保護基を分解除去することによ
り、そして固相の場合には支持体樹脂から分解除去する
ことにより構造（Ｉ）を有するペプチドを得ることより
成る請求項１記載のペプチドアミドの製造方法。 - 【請求項７】 医薬として用いるための請求項１記載の
ペプチドアミド。 - 【請求項８】 請求項１記載のペプチドの診断目的のた
めのまたは診断剤としての使用。
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