JPH0770164A - 生理活性物質ｔａｎ−１７１３、その製造法および用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 新しい生物活性を示す抗ウイルス物質の提
供。 【構成】 中性脂溶性の新規生理活性物質ＴＡＮ−１７
１３を開示する。ＴＡＮ−１７１３はシュードモナス属
に属する生産菌の培養により製造でき、抗ウイルス剤と
して有用である。 【効果】 新規生理活性物質ＴＡＮ−１７１３が提供さ
れる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は抗ウイルス作用を示す新
規生理活性物質ＴＡＮ−１７１３、その製造法および用
途に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来から抗ウイルス性を示す種々の生理
活性物質が知られている。本発明の生理活性物質ＴＡＮ
−１７１３は抗ウイルス性を有する物質であるが、その
物理化学的および生物学的データなどから新規な生理活
性物質と判断され、このような抗ウイルス性物質はこれ
まで報告されていない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】ヒトヘルペスウイルス
は２重鎖ＤＮＡを有しその感染にともなって広範な疾患
を引き起こすことが知られている。本ウイルス群とし
て、単純ヘルペスウイルス１型、２型（ＨＳＶ１、
２）、水痘一帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイル
ス（ＣＭＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）お
よびヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ６）が知られてい
る。これらのウイルスの特徴は、一旦その宿主に感染し
た後に潜伏感染を成立させ、生涯にわたって、生体と共
存することである。そして、生体側の免疫能の低下にと
もなって再活性化して、時として重篤な疾患を引き起こ
し、死に到らしめることもある。臓器移植時の免疫抑制
剤投与中における、あるいは後天性免疫不全症候群（Ａ
ＩＤＳ）における本ウイルスの再活性化、再感染は重症
となることが知られており効果的な抗ヘルペスウイルス
剤の開発が急がれている。また本ウイルスは、出産時の
経産道感染等によって母子感染をおこし、新生児に脳炎
をはじめとする致死的な疾患をもたらす。このように、
本ウイルスは、きわめて病原性が高いウイルスであるに
もかかわらず、現在使用されている薬剤はアシクロビル
（ＵＳＰ４,１９９,５７４、ウェルカム社）、ガンシク
ロビル（ＵＳＰ４,３５５,０３２、シンテックス社）が
あるのみである。

【０００４】しかしながら、これら薬剤は核酸合成阻害
剤であることに起因する催奇性等の副作用の現れる可能
性は否定出来ず、また耐性株の出現も知られているため
その使用は限られている。これらの問題を克服するため
に、当分野では、常に毒性や副作用が弱く、新規骨格を
有し、新しい生物活性を示す抗ウイルス物質、あるいは
それらを合成するための中間原料が求められている。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、新規な抗
ウイルス性物質の探索を目的として多数の微生物を土壌
より分離し、その生産する抗ウイルス性物質を分離探索
したところ、ある種の微生物が数種の近似した新規な抗
ウイルス性物質を生産すること、該微生物がシュードモ
ナス属に属する菌種であること、該微生物を適宜の培地
に培養することによって抗ウイルス力を示す該物質を、
培地中に蓄積しうることなどを知り、この抗ウイルス性
物質を単離し、その物理化学的および生物学的諸性質か
ら、当該物質が新規な抗ウイルス性物質であることを確
かめ、これらを生理活性物質ＴＡＮ−１７１３と称する
ことにした。本発明者らは、これらの知見に基づいてさ
らに研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。

【０００６】すなわち、本発明は、（１）後記する物理
化学的活性を有する新規生理活性物質ＴＡＮ−１７１３
Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄまたはその塩、（２）シュードモナス属
に属し、該ＴＡＮ−１７１３Ａ，Ｂ、ＣまたはＤを生産
する能力を有する微生物を培地に培養し、培養物中にＴ
ＡＮ−１７１３Ａ、Ｂ、ＣまたはＤを生成蓄積せしめ、
これを採取することを特徴とするＴＡＮ−１７１３Ａ、
Ｂ、Ｃ、Ｄまたはその塩の製造法、および（３）該生理
活性物質ＴＡＮ−１７１３Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、その塩また
はそれら２種以上の混合物を含有する抗ウイルス剤、を
提供するものである。

【０００７】本明細書においては、生理活性物質ＴＡＮ
−１７１３Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、その塩またはそれら２種以
上の混合物を単にＴＡＮ−１７１３と称することもあ
る。本発明の新規生理活性物質ＴＡＮ−１７１３の生産
菌としては、シュードモナス（Ｐseudomonas）属に属
し、ＴＡＮ−１７１３を生産する能力を有するものであ
れば如何なる微生物でもよい。例えばシュードモナス属
に属する微生物が挙げられる。その例としては、例え
ば、静岡県南伊豆町の土壌から採取したシュードモナス
・エスピー・ＨＶＢ−１９０株（Ｐseudomonas sp．Ｈ
ＶＢ−１９０）が挙げられる。（以下、「ＨＶＢ−１９
０株」と略称することもある。）ＨＶＢ−１９０株の菌
学的性状は下記のとおりである。

【０００８】（Ｉ）形態 肉汁寒天斜面上で２４℃、５日間培養後の観察では、細
胞は直径０.６〜１.０μm、長さ１.５〜２.５μmの桿状
であり、鞭毛は極多毛で運動性を有する。胞子を形成せ
ず、またグラム染色は陰性である。

【０００９】（ＩＩ）各種培地上での生育状態 ２４℃で培養し、１ないし１４日間にわたって観察し
た。 （１）肉汁寒天平板培養：コロニーは白色で、円形、表
面は偏平状、周縁は全縁である。 （２）肉汁寒天斜面培養：良好な拡布状の生育を示し、
白色を呈する。 （３）肉汁液体培養：混濁状に生育し、菌膜と沈澱を生
じる。 （４）リトマス・ミルク：ペプトン化活性が認められ
る。

【００１０】（ＩＩＩ）生理的性質 （１）硝酸塩の還元：＋ （２）脱窒反応：± （３）ＭＲ（メチルレッド）テスト：− （４）ＶＰ（フォーゲス・プロスカウエル）テスト：− （５）インドールの生成：− （６）硫化水素の生成（ＴＳＩ寒天および酢酸鉛紙）：
− （７）デンプンの加水分解：− （８）クエン酸の利用（コーゼル、クリステンセンおよ
びシモンズの各培地）：＋ （９）無機窒素源の利用 １）硝酸カリウム：＋ ２）硫酸アンモニウム：＋ （１０）色素の生成 １）キングＡおよびマンニット酵
母エキス寒天の各培地：− ２）キングＢ：±（キミドリ） （１１）ウレアーゼ：＋ （１２）オキシダーゼ：＋ （１３）カタラーゼ：＋ （１４）生育の範囲 １）ｐＨ：ｐＨ５.０〜９.９で生
育するが、最適ｐＨは５.０〜７.５。[培地：グルコー
ス０.１％、イーストエキストラクト０.０１％、硫酸ア
ンモニウム０.１％、食塩０.１％、硫酸マグネシウム
（７水塩）０.０５％、リン酸バッファー０.１Ｍ（別滅
菌）]。２）温度：５〜２８℃で生育するが最適温度は
１７〜２８℃。（培地：肉汁液体培地）。 （１５）酸素に対する態度：好気的 （１６）Ｏ−Ｆ（オキシダティブ−ファーメンタティ
ブ）テスト[ヒュー・レイフソン法]：酸化的。 （１７）糖からの酸、ガスの生成および利用性：

【００１１】

【表１】

【００１２】（１８）ＤＮＡのＧＣ（グアニン−シトシ
ン）含量：６２.２％±１.０％ＨＰＬＣ法） （１９）ツィーン（Ｔween）８０の分解：＋

【００１３】以上の菌学的性状を有するＨＶＢ−１９０
株は、バージーズ・マニュアル・オブ・システマティッ
ク・バクテリオロジー（Ｂergey's Ｍanual of Ｓystem
aticＢacteriology）によって検索した結果、シュード
モナス属に属する細菌と考えられた。そこで、ＨＶＢ−
１９０株をシュードモナス属の一菌種と考え、シュード
モナス・エスピー・ＨＶＢ−１９０（Ｐseudomonas s
p．ＨＶＢ−１９０）と呼称することとした。このシュ
ードモナス・エスピー・ＨＶＢ−１９０株は、平成５年
３月３日から財団法人発酵研究所（ＩＦＯ、日本国大阪
府大阪市淀川区十三本町２丁目１７番地８５号）に寄託
番号ＩＦＯ １５４４４として、また、本微生物は平成
５年６月２１日から通商産業省工業技術院生命工学工業
技術研究所（ＮＩＢＨ、日本国茨城県つくば市東１丁目
１番３号）にブタペスト条約の下、寄託番号ＦＥＲＭ
Ｐ−１３６９６としてそれぞれ寄託されている。

【００１４】本発明に用いられるシュードモナス属細菌
は、一般にその性状が変化しやすい。したがって、本菌
の性質も前記のとおりに一定のものではなく種々の変異
株が容易に得られる。しかし、これらの変異株にあって
もＴＡＮ−１７１３を生産する性質を失わないかぎり本
発明のＴＡＮ−１７１３の製造に使用することができ
る。もちろん、それらの変異が自然の原因に由来するも
のであっても各種変異誘起剤（例えば紫外線、エックス
線、放射線、ニトロソグアニジン等）を用いて人工的に
行なわれたものであってもさしつかえない。

【００１５】ＴＡＮ−１７１３は、かかるＴＡＮ−１７
１３生産菌を培地で培養することにより得られる。培養
に際しては、一般に、微生物が同化しうる炭素源、消化
しうる窒素源および無機塩などを含有させた培地が使用
される。また、培地には必要に応じて微量栄養素、発育
促進物質、前駆物質などの微量有効物質を添加してもよ
い。一般に微生物が同化しうる炭素源としては、例え
ば、グルコース、フラクトース、可溶性澱粉、デキスト
リン、油脂類（例、大豆油、オリーブ油など）、有機酸
類（例、クエン酸、コハク酸、グルコン酸など）などが
適宜用いられ、窒素源としては、肉エキス、大豆粉、コ
ーンスティープリカー、ペプトン、カゼイン、綿実粕な
ど、および硝酸塩類、アンモニウム化合物などの無機窒
素化合物などがあり、それらはいずれも有効に利用され
る。また、無機塩としては、例えば、塩化ナトリウム、
塩化カリウム、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、リ
ン酸一カリウム、リン酸二ナトリウムなどの通常微生物
の培養に必要な無機塩類が単独もしくは適宜組み合わせ
て使用される。また、硫酸第一鉄、硫酸銅などの重金属
類、ビタミンＢ₁、ビオチンなどのビタミン類なども必
要に応じて添加される。さらに、シリコーンオイルやポ
リアルキレングリコールエーテルなどの消泡剤や界面活
性剤を培地に添加してもよい。その他、菌の生育を助け
ＴＡＮ−１７１３の生産を促進するような有機物や無機
物を適宜添加してもよい。

【００１６】培養方法は、一般の抗生物質の生産方法と
同様に行なえばよく、固体培養でも液体培養でもよい。
液体培養の場合は、静置培養、攪拌培養、振盪培養、通
気培養などいずれを実施してもよいが、特に、通気攪拌
培養が望ましい。また、培地のｐＨは約５〜７.５にす
るのがよく、培養時の温度は５〜２８℃付近、好ましく
は１７〜２８℃に保つのがよく、およそ８時間〜１４０
時間、好ましくは２４〜９６時間培養する。しかし、こ
れらの培養組成物、培地の液性、培養温度などの培養条
件は使用する菌株の種類や外部の条件などに応じて好ま
しい結果が得られるように適宜調節、選択されることは
いうまでもない。

【００１７】このように培養することにより、通常、Ｔ
ＡＮ−１７１３Ａ〜Ｄの混合物が菌体ないしは培地中に
蓄積される。以下に、培養物から目的とする化合物ＴＡ
Ｎ−１７１３を採取する方法を説明する。該化合物は中
性で脂溶性を示すため、この性質を利用する一般的手段
を採用すればよい。培養物中ＴＡＮ−１７１３は菌体お
よび濾液中に含まれるので、まず、培養液をｐＨ１.５
ないし１０好ましくはｐＨ４ないし８に調整後、水と混
和しない有機溶媒、例えば、クロロホルム、酢酸エチ
ル、メチルイソブチルケトンあるいはブタノールなどを
加え、１０分ないし１０時間、好ましくは３０分ないし
２時間攪拌混和し、濾過助剤を加えて濾過、あるいは遠
心分離によって菌体を除去する。得られた有機溶媒層を
水で洗浄後、濃縮することによって、あるいは得られた
有機層を適当な無機酸類例えば、塩酸、硫酸、燐酸など
の水溶液、あるいは適当な無機塩類、例えば、重曹、炭
酸ナトリウム、塩化アンモニウムなどの水溶液により適
宜洗浄後、水洗、濃縮してＴＡＮ−１７１３を含有する
粗物質が得られる。

【００１８】粗物質をさらに精製し、純粋なＴＡＮ−１
７１３を得るには、種々のクロマトグラフィー法が有利
に用いられる。担体としてはシリカゲル、結晶セルロー
ス、セファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製、ス
ウェーデン）などが用いられ、これらは通常カラムクロ
マトグラフィー法で行なわれる。担体から活性物質を溶
出するには適当な有機溶媒、例えば、ｎ−ヘキサン、ク
ロロホルム、トルエン、酢酸エチル、ジクロロエタン、
アセトン、メタノールなどの単独あるいは混合溶媒が用
いられる。また、分取用高速液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）によってもＴＡＮ−１７１３を精製するこ
とができる。担体としては、オクタデシルシラン（ＯＤ
Ｓ）系およびシリカゲル系のものが有利に用いられる。
例えば、ＯＤＳの場合、メタノールあるいはアセトニト
リルと塩類含有水溶液の混合溶液が有利に用いられる。
溶出液を濃縮、あるいは水溶液の場合は水と混和しない
適当な有機溶媒で抽出して濃縮乾固し、粗粉末が得られ
る。粗粉末を適当な溶媒、例えば、石油ベンジン、石油
エーテル、ｎ−ヘキサン、ジエチルエーテル、クロロホ
ルム、酢酸エチル、エタノール、メタノールあるいはこ
れらの混合液で溶解し、冷所で放置結晶化あるいは粉末
化するとＴＡＮ−１７１３Ａ〜Ｄが、各々、無色針状晶
あるいは白色粉末として得られる。これらは中性脂溶性
物質で、共通する性状として、呈色反応では過マンガン
酸カリウム、リンモリブデン酸、バートンに対して陽性
を示し、ペプチド、ドラーゲンドルフ、ニンヒドリンに
対して陰性を示す。また以下の分析用ＨＰＬＣおよび薄
層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）における挙動を表２に
示す。

【００１９】

【表２】

【００２０】ＨＰＬＣ条件：担体；ＯＤＳ，ＹＭＣ−Ｐ
ack Ａ−３１２（ＹＭＣ社製） 移動相；７２％v／vメタノール／０.０１Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ６.３） 流速；２ml／min 検出法；ＵＶ吸収，２１４，２５４nm ＴＬＣ条件： 担体；Ｓilica gel ６０ Ｆ２５４
（Ｅ．Ｍerck ＡＧ．） 展開溶媒；酢酸エチル：ヘキサン（１：１） また、ＴＡＮ−１７１３はフェノール性水酸基を有し、
例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の無機塩
基あるいはトリエチルアミン、エチレンジアミン等の有
機アミン類など生理学的に許容される塩基と塩を形成さ
せることもできる。後記する実施例２で得られた生理活
性物質ＴＡＮ−１７１３Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの物理化学
的性質を以下に示す。

【００２１】ＴＡＮ−１７１３Ａ （１）外観：白色粉末 （２）旋光度：[α]_D ²⁴ −９２.７°（ｃ ０.３５５，
メタノール中） （３）分子量：ｍ／ｚ ４２５（Ｍ＋Ｈ）、（ＳＩ−マ
ススペクトルより） （４）元素分析値：（％） （水分０.５モルとして） 実測値；Ｃ，６３.４５；Ｈ，５.８９；Ｎ，６.０１ 計算値；Ｃ，６３.７３；Ｈ，５.８１；Ｎ，６.４６；
Ｏ，２４.００ （５）分子式：Ｃ₂₃Ｈ₂₄Ｎ₂Ｏ₆ （６）紫外部吸収（ＵＶ）スペクトル：メタノール中、
（図１） 極大値：２１７nm（ε２２,９００），２４２nm（sh，
ε１９,９００），２８７nm（ε２４,０００） （７）赤外部吸収（ＩＲ）スペクトル：ＫＢr錠剤中，
（図２） 主な吸収を示す（波数，cm^-1） ３３１０，２９４０，１７１０，１６６０，１５３０，
１４４０，１２９０，１２５０，１２２０，１１１０，
１０５０，８６０ （８）¹³Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：７５ＭＨ
z，重クロロホルム中，（図３） δppm；１７０.６
（Ｑ），１６１.６（Ｑ），１６１.２（Ｑ），１４３.
２（ＣＨ），１４０.９（Ｑ），１３４.９（ＣＨ），１
３３.０（ＣＨ），１３２.６（ＣＨ），１２９.４（Ｃ
Ｈ），１２７.５（ＣＨ），１２５.８（ＣＨ），１２
５.２（ＣＨ），１２３.０（ＣＨ），１２１.８（Ｃ
Ｈ），１１６.５（ＣＨ），１１１.７（Ｑ），１０８.
３（ＣＨ），７２.８（ＣＨ），６２.３（ＣＨ₃），５
７.７（ＣＨ），５５.５（ＣＨ），３７.２（ＣＨ₂），
２９.２(ＣＨ₂)

【００２２】ＴＡＮ−１７１３Ｂ （１）外観：白色粉末 （２）旋光度：[α]_D ²⁴ −７７.９°（ｃ ０.４０８，
メタノール中） （３）分子量：ｍ／ｚ ４２５（Ｍ＋Ｈ）、（ＳＩ−マ
ススペクトルより） （４）元素分析値：（％） （水分０.５モルとして） 実測値；Ｃ，６３.５８；Ｈ，５.９７；Ｎ，６.０９ 計算値；Ｃ，６３.７３；Ｈ，５.８１；Ｎ，６.４６；
Ｏ，２４.００ （５）分子式：Ｃ₂₃Ｈ₂₄Ｎ₂Ｏ₆ （６）紫外部吸収（ＵＶ）スペクトル：メタノール中、
（図４） 極大値：２１５nm（ε２１,９００），２４２nm（sh，
ε２２,９００），２７６nm（ε３０,８００），３０２
nm（sh，ε２４,２００） （７）赤外部吸収（ＩＲ）スペクトル：ＫＢr錠剤中，
（図５） 主な吸収を示す（波数，cm^-1） ３３００，１７３０，１６６０，１５２０，１４４０，
１２９０，１２５０，１２２０，１１２０，１０４０，
９５０ （８）¹³Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：７５ＭＨ
z，重クロロホルム中、（図６） δppm；１７０.６
（Ｑ），１６１.８（Ｑ），１６１.２（Ｑ），１４７.
６（ＣＨ），１４０.９（Ｑ），１３５.６（ＣＨ），１
３４.９（ＣＨ），１３３.０（ＣＨ），１３２.６（Ｃ
Ｈ），１２９.４（ＣＨ），１２５.３（ＣＨ），１２
４.２（ＣＨ），１２３.０（ＣＨ），１２１.８（Ｃ
Ｈ），１１６.５（ＣＨ），１１１.７（Ｑ），１０７.
９（ＣＨ），７２.８（ＣＨ），６２.４（ＣＨ₃），５
７.７（ＣＨ），５５.５（ＣＨ），３７.２（ＣＨ₂），
２９.２（ＣＨ₂）

【００２３】ＴＡＮ−１７１３Ｃ （１）外観：無色針状晶 （２）融点：１８０−１８２℃ （３）旋光度：[α]_D ²⁴ ＋３６.４°（ｃ ０.４２８，
メタノール中） （４）分子量：ｍ／ｚ ４０９（Ｍ＋Ｈ）、（ＳＩ−マ
ススペクトルより） （５）元素分析値：（％） 実測値；Ｃ，６７.５２；Ｈ，５.８９；Ｎ，６.７８ 計算値；Ｃ，６７.６３；Ｈ，５.９２；Ｎ，６.８６；
Ｏ，１９.５９ （６）分子式：Ｃ₂₃Ｈ₂₄Ｎ₂Ｏ₅ （７）紫外部吸収（ＵＶ）スペクトル：メタノール中、
（図７） 極大値：２１４nm（ε３６,６００），２９６nm（ε３
１,５００） （８）赤外部吸収（ＩＲ）スペクトル：ＫＢr錠剤中，
（図８） 主な吸収を示す（波数，cm^-1） ３３００，１６５０，１５２０，１４５０，１２９０，
１２４０，１２１０，１０５０，８６０ （９）¹³Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：７５ＭＨ
z，重クロロホルム中，（図９） δppm；１７１.２
（Ｑ），１６１.５（Ｑ），１６１.２（Ｑ），１４３.
２（ＣＨ），１４１.３（Ｑ），１３５.１（ＣＨ），１
３３.３（ＣＨ），１３１.９（ＣＨ），１３０.０（Ｃ
Ｈ），１２８.６（ＣＨ），１２８.５（ＣＨ），１２
８.２（ＣＨ），１２７.５（ＣＨ），１２５.８（Ｃ
Ｈ），１２５.０（ＣＨ），１２２.０（ＣＨ），１１
６.５（ＣＨ），１１０.８（Ｑ），１０８.６（Ｃ
Ｈ），７５.２（ＣＨ），６２.３（ＣＨ₃），３６.６
（ＣＨ₂），３４.３（ＣＨ₂）

【００２４】ＴＡＮ−１７１３Ｄ （１）外観：白色粉末 （２）旋光度：[α]_D ²⁴ ＋５３.６°（ｃ ０.３７９，
メタノール中） （３）分子量：ｍ／ｚ ４０９（Ｍ＋Ｈ）、（ＳＩ−マ
ススペクトルより） （４）元素分析値：（％） 実測値；Ｃ，６７.２０；Ｈ，５.８７；Ｎ，６.８９ 計算値；Ｃ，６７.６３；Ｈ，５.９２；Ｎ，６.８６；
Ｏ，１９.５９ （５）分子式：Ｃ₂₃Ｈ₂₄Ｎ₂Ｏ₅ （６）紫外部吸収（ＵＶ）スペクトル：メタノール中、
（図１０） 極大値：２１２nm（ε３０,４００），２３８nm（sh，
ε２３,２００），２７３nm（sh，ε３０,２００），２
８３nm（ε３１,７００），３０５nm（sh，ε２７,８０
０） （７）赤外部吸収（ＩＲ）スペクトル；ＫＢr錠剤中，
（図１１） 主な吸収を示す（波数，cm^-1） ３３００，１６５０，１５２０，１４５０，１３００，
１２４０，１２１０，１１２０，１０５０，９５０ （８）¹³Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：７５ＭＨ
z，重クロロホルム中，（図１２） δppm；１７１.３
（Ｑ），１６１.６（Ｑ），１６１.３（Ｑ），１４７.
６（ＣＨ），１４１.３（Ｑ），１３５.６（ＣＨ），１
３５.１（ＣＨ），１３３.３（ＣＨ），１３２.０（Ｃ
Ｈ），１３０.０（ＣＨ），１２８.６（ＣＨ），１２
８.５（ＣＨ），１２８.２（ＣＨ），１２５.１（Ｃ
Ｈ），１２４.１（ＣＨ），１２２.０（ＣＨ），１１
６.５（ＣＨ），１１０.７（Ｑ），１０８.１（Ｃ
Ｈ），７５.２（ＣＨ），６２.４（ＣＨ₃），３６.６
（ＣＨ₂），３４.３（ＣＨ₂）

【００２５】

【作用】

試験例 ＴＡＮ−１７１３の単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ
１）の増殖抑制作用の測定法は以下のとおりである。５
％牛血清を含むＵＣメディウム２０２「ニッスイ」（日
水製薬社製）中で、３７℃、５％炭酸ガス下で培養した
アフリカミドリ猿腎臓由来細胞（Ｖero細胞）をトリプ
シン処理してはがしたのち、９６穴組織培養用プレート
の各穴に約１０,０００個ずつまき、１晩培養してプレ
ートによく固着させた。これにＨＳＶ１を各穴あたり４
００ＰＦＵ（ＰＦＵ：プラーク形成単位）接種し１時間
吸着させたのち、ＴＡＮ−１７１３の段階希釈液１０μ
lを加えて１日培養した。ＨＳＶ１の増殖量はＥＬＩＳ
Ａ法（メソッド・オブ・エンチマティックアナリシス、
１０巻、２２６頁、１９８６年）で測定し、試料のＨＳ
Ｖ１抑制効果は、ＨＳＶ１の増殖を５０％抑制するのに
必要なＴＡＮ−１７１３の濃度、ＥＤ₅₀（μg／ml）で
示した。一方、試料の宿主細胞に対する毒性は、以下の
ようにして調べた。Ｖero細胞を上記試験例と同じ条件
下で培養してトリプシン処理してはがしたのち、９６穴
組織培養用プレートの各穴に約５,０００個ずつまき、
４日間培養した。細胞の増殖はＭＴＴ還元法（多田ら、
ジャーナル・オブ・イムノロジカル・メソッド、９３
巻、１５７頁、１９８６年）で測定し、試料の細胞毒性
は、細胞の増殖を５０％抑制するのに必要なＴＡＮ−１
７１３の濃度、ＣＤ₅₀（μg／ml）で示した。ＣＤ₅₀／
ＥＤ₅₀値をＨＳＶ１増殖抑制作用の選択係数（ＳＩ）と
した。結果を表３に示す。

【００２６】

【表３】

【００２７】対照のＨＳＶ１感染細胞ではＨＳＶ１は活
発に増殖し、感染細胞を死に到らしめたが、表３に示す
ごとく、ＴＡＮ−１７１３はその濃度に依存してＨＳＶ
１の増殖を抑制し、感染細胞の生残率を高めた。すなわ
ち、表３のＥＤ₅₀から明らかなように著明な抗ＨＳＶ１
活性を示した。また、ＴＡＮ−１７１３のＨＳＶ１非感
染Ｖero細胞に対する細胞毒性（ＣＤ₅₀）は低いもので
あった。以上の結果よりＴＡＮ−１７１３は強いＨＳＶ
増殖抑制効果を示しかつ高い選択係数（ＳＩ）を有する
ことが明らかとなった。

【００２８】前記した物理化学的および生物学的性質よ
り、ＴＡＮ−１７１３は新規化合物であることが判明し
た。これらのデータから明らかなように、生理活性物質
ＴＡＮ−１７１３は低毒性で抗ウイルス活性を示し、ヒ
トおよび家畜（例、ウマ、ウシ、ブタ）、家きん（例、
ニワトリ、シチメンチョウ）などの、ＨＳＶ１、ＨＳＶ
２、水痘、帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス
（ＣＭＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ヒ
トヘルペスウイルス（ＨＨＶ６）などによるウイルス感
染症の治療に用いることが出来る。この治療用に、ＴＡ
Ｎ−１７１３Ａ〜Ｄまたはその塩を単独で、あるいは２
種以上を組み合わせて公知の製剤化技術にしたがって種
々の剤形の医療組成物に処方して用いることができる。
投与に際しては、有効成分を経口投与または非経口投与
（例、局所投与方法）方法に適した固体または液体の医
薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬製剤の形態で投
与することができる。このような製剤としては、例え
ば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等の固形剤、溶液
剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、凍結乾燥剤、注射剤、シロ
ップ剤、坐剤等が挙げられ、これらの経口剤または非経
口剤の製剤は、製剤上の常套手段により調製することが
できる。また、必要に応じて、安定化剤（例、ポリエチ
レングリコール、ポリ乳酸など）、結合剤（例、デンプ
ン、アラビアゴムなど）、等張化剤（例、グルコース、
ソルビトール、マンニトール、塩化ナトリウムなど）、
保存剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤等の
慣用の添加剤を適宜添加することができる。

【００２９】ＴＡＮ−１７１３をヒトに用いる場合の投
与量は対象の疾患、投与経路、治療する患者個々の年齢
および疾病の程度によって変動し得るが、通常、体重５
０kgの成人患者の場合有効成分１日約０.１〜２００m
g、好ましくは約１〜１５０mgが疾病の治療に用いられ
る。さらに好ましくは約５〜１００mgが用いられる。ま
たＴＡＮ−１７１３を外用剤として用いる場合、例え
ば、ワセリン、ラノリンを基剤として、１ｇあたり通常
約０.１〜１００mg含有する軟膏剤として、皮膚あるい
は、粘膜などの疾病の治療に用いることができる。

【００３０】

【実施例】以下に実施例および製剤例を挙げて、本発明
をさらに具体的に説明するが、これによって本発明が限
定されるものではない。培地におけるパーセント（％）
は、特に断わりのない限り重量／容量パーセントをあら
わす。また、混合溶媒において混合比を示した数値は各
溶媒の容量混合比である。¹³Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）ス
ペクトルは内部標準としてテトラメチルシランを用いて
（７５ＭＨz）型スペクトルメーターで測定し、全δ値
をppmで示した。実施例中の¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトル
に関する略号Ｑは４級炭素を意味する。

【００３１】実施例１ 栄養寒天斜面上に生育させたシュードモナス・エスピー
・ＨＶＢ−１９０（ＦＥＲＭ Ｐ−１３６９６：ＩＦＯ
１５４４４）の菌株を、グルコース２％、ソルブル・
スターチ３％、生大豆粉１％、コーンスティープ・リカ
ー０.３％、ポリペプトン（日本製薬社製）０.５％、食
塩０.３％を含有する水溶液（ｐＨ７.０）に沈降性炭酸
カルシウム０.５％を添加した培地５００mlを含む２リ
ットル容坂口フラスコに接種して、２４℃で４８時間往
復振盪培養した。この培養液全量を上記培地に消泡剤ア
クトコール（武田薬品工業社製）０.０５％を添加した
培地１２０リットルを含む容量２００リットルのタンク
に接種し、２０℃で通気量１２０リットル／分、１８０
回転／分の条件下で、９０時間培養した。

【００３２】得られた培養液（２.８リットル）を酢酸
エチルで３０分間攪拌抽出し、得られた有機層（２.３
リットル）を２％炭酸水素ナトリウム、水で順次洗浄し
た後、無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、減圧下濃
縮、乾固して油状物（１.８１ｇ）を得た。これをシリ
カゲルカラムクロマトグラフィー（１００ml）に付し、
ヘキサン（２００ml）、ヘキサン：酢酸エチル（９：
１，５００ml）で洗浄後、ＴＡＮ−１７１３ＣおよびＤ
を含む活性画分をヘキサン：酢酸エチル（４：１，４０
０ml）で溶出した。更に、ヘキサン：酢酸エチル（２：
１，３００ml）で洗浄した後、ＴＡＮ−１７１３Ａおよ
びＢを含む活性画分をヘキサン：酢酸エチル（２：１，
２００ml次いで３：２，５００ml）で溶出した。溶出画
分をそれぞれ減圧下濃縮し、ＴＡＮ−１７１３Ｃおよび
Ｄの粗粉末（２１２mg）およびＴＡＮ−１７１３Ａおよ
びＢの粗粉末（７０２mg）を得た。

【００３３】ＴＡＮ−１７１３ＡおよびＢの粗粉末を分
取用逆相系高速液体クロマトグラフィー[ＨＰＬＣ，担
体：ＹＭＣ−Ｐack Ｓ−３６３−１５ Ｉ−１５ １２０
Ａ，ＹＭＣ社、日本、移動相：６０％メタノール／０.
０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．３）、流速：１０ｍｌ／
min．、検出法：２１４nm]に付した。溶出容量１.２−
１.５ リットル（Ａ画分）および１.５９−１.８１リッ
トル（Ｂ画分）を各々減圧下濃縮、酢酸エチル抽出し、
抽出有機層を水洗後、無水硫酸ナトリウムを用いて乾
燥、減圧下で濃縮乾固し、ＴＡＮ−１７１３Ａ淡黄色粉
末（２８０mg）、ＴＡＮ−１７１３Ｂ淡黄色粉末（２１
４mg）を得た。

【００３４】ＴＡＮ−１７１３ＣおよびＤの粗粉末をＨ
ＰＬＣ[担体：前出、移動層：６９％メタノール／０.０
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６.３）]に付した。溶出容量
０.９−１.０４リットル（Ｃ画分）および１.２０−１.
３４リットル（Ｄ画分）を各々同様に処理し、ＴＡＮ−
１７１３Ｃの白色粉末（４０mg）およびＴＡＮ−１７１
３Ｄの白色粉末（１６mg）を得た。

【００３５】製剤例１ 実施例１によって得られたＴＡＮ−１７１３ＡまたはＴ
ＡＮ−１７１３Ｂを用いて、下記に示す処方の全成分を
混和し、ゼラチンカプセルに充填し、カプセル１個当た
り、３０mgのＴＡＮ−１７１３ＡまたはＴＡＮ−１７１
３Ｂを含有するカプセル剤をそれぞれ製造した。 ＴＡＮ−１７１３ＡまたはＴＡＮ−１７１３Ｂ ３０mg 乳糖 １００mg コーンスターチ ４０mg ステアリン酸マグネシウム １０mg 合計 １８０mg

【００３６】製剤例２ 実施例１によって得られたＴＡＮ−１７１３ＡまたはＴ
ＡＮ−１７１３Ｂとステアリン酸マグネシウムを可溶性
デンプンの水溶液で顆粒化し、乾燥後、乳糖およびコー
ンスターチと混合した。混合物を圧縮成型し、下記に示
す処方の錠剤をそれぞれ製造した。 ＴＡＮ−１７１３ＡまたはＴＡＮ−１７１３Ｂ ３０mg 乳糖 ６５mg コーンスターチ ３０mg 可溶性デンプン ３５mg ステアリン酸マグネシウム ２０mg 合計 １８０mg

【００３７】

【発明の効果】本発明によれば、抗ウイルス剤として有
用な新規化合物であるＴＡＮ−１７１３、その製造法お
よびそれを含有する抗ウイルス剤が提供される。

【図面の簡単な説明】

【図１】 ＴＡＮ−１７１３ＡのＵＶスペクトル。

【図２】 ＴＡＮ−１７１３ＡのＩＲスペクトル。

【図３】 ＴＡＮ−１７１３ＡのＮＭＲスペクトル。

【図４】 ＴＡＮ−１７１３ＢのＵＶスペクトル。

【図５】 ＴＡＮ−１７１３ＢのＩＲスペクトル。

【図６】 ＴＡＮ−１７１３ＢのＮＭＲスペクトル。

【図７】 ＴＡＮ−１７１３ＣのＵＶスペクトル。

【図８】 ＴＡＮ−１７１３ＣのＩＲスペクトル。

【図９】 ＴＡＮ−１７１３ＣのＮＭＲスペクトル。

【図１０】 ＴＡＮ−１７１３ＤのＵＶスペクトル。

【図１１】 ＴＡＮ−１７１３ＤのＩＲスペクトル。

【図１２】 ＴＡＮ−１７１３ＤのＮＭＲスペクトル。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下の物理化学的性質を特徴とする生理
   活性物質ＴＡＮ−ｌ７ｌ３Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄまたはその
   塩。ＴＡＮ−１７１３Ａ 分子式：Ｃ₂₃Ｈ₂₄Ｎ₂Ｏ₆（分子量４２４） 紫外部吸収（ＵＶ）スペクトル：メタノール中 極大値：２１７±３nm（ε２２,９００±２,０００）， ２８７±３nm（ε２４,０００±２,０００）¹³ Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：７５ＭＨz，重
   クロロホルム中 δppm；１７０.６（Ｑ），１６１.６（Ｑ），１６１.２
   （Ｑ），１４３.２（ＣＨ），１４０.９（Ｑ），１３
   ４.９（ＣＨ），１３３.０（ＣＨ），１３２.６（Ｃ
   Ｈ），１２９.４（ＣＨ），１２７.５（ＣＨ），１２
   ５.８（ＣＨ），１２５.２（ＣＨ），１２３.０（Ｃ
   Ｈ），１２１.８（ＣＨ），１１６.５（ＣＨ），１１
   １.７（Ｑ），１０８.３（ＣＨ），７２.８（ＣＨ），
   ６２.３（ＣＨ₃），５７.７（ＣＨ），５５.５（Ｃ
   Ｈ），３７.２（ＣＨ₂），２９.２（ＣＨ₂）ＴＡＮ−１７１３Ｂ 分子式：Ｃ₂₃Ｈ₂₄Ｎ₂Ｏ₆（分子量４２４） 紫外部吸収（ＵＶ）スペクトル：メタノール中 極大値：２１５±３nm（ε２１,９００±２,０００）， ２７６±３nm（ε３０,８００±３,０００）¹³ Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：７５ＭＨz，重
   クロロホルム中 δppm；１７０.６（Ｑ），１６１.８（Ｑ），１６１.２
   （Ｑ），１４７.６（ＣＨ），１４０.９（Ｑ），１３
   ５.６（ＣＨ），１３４.９（ＣＨ），１３３.０（Ｃ
   Ｈ），１３２.６（ＣＨ），１２９.４（ＣＨ），１２
   ５.３（ＣＨ），１２４.２（ＣＨ），１２３.０（Ｃ
   Ｈ），１２１.８（ＣＨ），１１６.５（ＣＨ），１１
   １.７（Ｑ），１０７.９（ＣＨ），７２.８（ＣＨ），
   ６２.４（ＣＨ₃），５７.７（ＣＨ），５５.５（Ｃ
   Ｈ），３７.２（ＣＨ₂），２９.２（ＣＨ₂）ＴＡＮ−１７１３Ｃ 分子式：Ｃ₂₃Ｈ₂₄Ｎ₂Ｏ₅（分子量４０８） 紫外部吸収（ＵＶ）スペクトル：メタノール中 極大値：２１４±３nm（ε３６,６００±３,０００）， ２９６±３nm（ε３１,５００±３,０００）¹³ Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：７５ＭＨz，重
   クロロホルム中 δppm；１７１.２（Ｑ），１６１.５（Ｑ），１６１.２
   （Ｑ），１４３.２（ＣＨ），１４１.３（Ｑ），１３
   ５.１（ＣＨ），１３３.３（ＣＨ），１３１.９（Ｃ
   Ｈ），１３０.０（ＣＨ），１２８.６（ＣＨ），１２
   ８.５（ＣＨ），１２８.２（ＣＨ），１２７.５（Ｃ
   Ｈ），１２５.８（ＣＨ），１２５.０（ＣＨ），１２
   ２.０（ＣＨ），１１６.５（ＣＨ），１１０.８
   （Ｑ），１０８.６（ＣＨ），７５.２（ＣＨ），６２.
   ３（ＣＨ₃），３６.６（ＣＨ₂），３４.３（ＣＨ₂）ＴＡＮ−１７１３Ｄ 分子式：Ｃ₂₃Ｈ₂₄Ｎ₂Ｏ₅（分子量４０８） 紫外部吸収（ＵＶ）スペクトル：メタノール中 極大値：２１２±３nm（ε３０,４００±３,０００）， ２８３±３nm（ε３１,７００±３,０００）¹³ Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル：７５ＭＨz，重
   クロロホルム中 δppm：１７１.３（Ｑ），１６１.６（Ｑ），１６１.３
   （Ｑ），１４７.６（ＣＨ），１４１.３（Ｑ），１３
   ５.６（ＣＨ），１３５.ｌ（ＣＨ），１３３.３（Ｃ
   Ｈ），１３２.０（ＣＨ），１３０.０（ＣＨ），１２
   ８.６（ＣＨ），１２８.５（ＣＨ），１２８.２（Ｃ
   Ｈ），１２５.１（ＣＨ），１２４.１（ＣＨ），１２
   ２.０（ＣＨ），１１６.５（ＣＨ），１１０.７
   （Ｑ），１０８.１（ＣＨ），７５.２（ＣＨ），６２.
   ４（ＣＨ₃），３６.６（ＣＨ₂），３４.３（ＣＨ₂）
2. 【請求項２】 シュードモナス属に属し、請求項１記載
   のＴＡＮ−１７１３Ａ、Ｂ、ＣまたはＤを生産する能力
   を有する微生物を培地に培養し、培養物中にＴＡＮ−１
   ７１３Ａ、Ｂ、ＣまたはＤを生成蓄積せしめ、これを採
   取することを特徴とするＴＡＮ−１７１３Ａ、Ｂ、Ｃ、
   Ｄまたはその塩の製造法。
3. 【請求項３】 請求項１記載の生理活性物質ＴＡＮ−１
   ７１３Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、その塩またはそれら２種以上の
   混合物を含有する抗ウイルス剤。