JPH07507213A - 消化器デフェンシン，そのｃＤＮＡ配列及び製造方法並びにその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 消化器デフエンジン、そのｃＤＮＡ配列及び製造方法並びにその使用発明の分野 本発明は、広くは、ここで消化器デフエンジンペプチドというデフエンジンペプ チドに関する。より詳しくは、本発明は、抗微生物及び抗炎症活性を有するポリ ペプチドのクラスの新規なメンバー、このペプチドをコードするｃＤＮＡ及びゲ ノミック配列、その製造方法及びその使用に関する。

発明の背景 多細胞生物は、微生物の侵入に対して防衛するための種々のメカニズムを用いて いる。これらには、解剖学的及び化学的バリヤー、並びに多数の細胞媒介及び体 液性応答が含まれる。総じて、これら防衛機能は攻撃してくる微生物を排除する ことを目的としている。多くの組織の上皮表面は潜在的な病原性生物に継続的に 露出しているにも拘らず、これら遭遇による感染性疾患の発生は比較的小さいの で、これらの視点において防衛メカニズムの有効性が注目される。腸管内でこれ ら防衛機能が異常を来すと、病原性細菌が関係した種々の形の下痢並びに炎症性 腸疾患、壊死性全腸炎及び胃潰瘍疾患を含む潰瘍性疾患が現れる。

ペプチドをベースとする抗微生物性防衛物質は、宿主防衛物質の保存された成分 であり、動物及び植物界のいずれにも見られる（委細については、ポーマン（Ｂ ｏａ＋ａｎ）とハルトマーク（Ｈｕｌｔｍａｒｋ）、　Ａｎｎ、Ｒｅｖ、　Ｍｉ ｃｒｏｂｉｏｌ、、　４１：　１０３−１２６　（１９８７）；ベビ７．　（Ｂ ｅｖｉｓ）とザスロフ（Ｚａｓｌｏｆｆ）、Ａｎｎ　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ 、　５９：　３９５−４１４（１９９０）　；スピッツナーゲル（Ｓｐｉｔｚｎ ａｇｅｌ）、　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　８６：　１３８１−８６（ １９９０）：ポーマン、　Ｃｅ１ｌ　６５：　２０５−２０７　（１９９１）　 ：レーラー（Ｌｅｈｒｅｒ）ら、　Ｃｅ１ｌ　６４二２２９−２３０　（１９９ １）を参照のこと）。これら抗微生物性ペプチドの大きさ及び構造はかなりの多 様性を示すが、一般には、それらは中性ｐＨで正味の正電荷を有する膜活性両親 媒性分子である。これらカチオン性ペプチドには、大まかに区分された２つのフ ァミリー：つまり線状ペプチド（例えば、セクロピン類（ｃｅｃｒｏｐｉｎｓ） ；ステイナー（Ｓｔｅｉｎｅｒ）ら、　Ｎａｔｕｒｅ　２９２：　２４６−２４ ８　（１９８１）　；及びマガイニン類（ｍａｇａｉｎｉｎｓ）　；ザスロフ（ Ｚａｓｌｏｆｆ）、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、υＳＡ　 ８４：　５４４９−T４５ ３　（１９ｇ？））及びシスティンに富むペプチドがある。後者には、哺乳動物 デフエンジン（ガング（Ｇａｎｚ）ら、　Ｅｕｒ　Ｊ　Ｈａｅｓ＋ａｔｏｌ　４ ４：　１−８　（１９９０））、気管抗微生物性ペプチド（ダイヤモンド（Ｄｉ ａｍａｎｄ）ら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳ＾８ ８：　３９５２−３９５６　（１９９１））、ウシバクテネシン類（ｂｏｖｉｎ ｅ　ｂａｃｔｅｎｅｃｉｎｅｓ）、（ロメオ（Ｒｏｗｅｏ）ら、　Ｊ、　Ｒｉｏ ｔ、　Ｃｈｅｗ、　２６３：　９５７３−９５７５　（１９８ｇ））　、昆虫ロ イヤリシン（ｉｎｓｅｃｔ　ｒａｙａｌｉｓｉｎ）、（フジワラら、　Ｊ、　Ｂ ｉｏｌ、Ｃｈｅｗ、　２６３：　１１３３３−１１３３７　（１９９０））　、 クキプレシン類（ｔａｃｈｙｐｌｅｓｉｎｓ）　（ナカムラら、　ｌ　Ｂｉｏｌ 、Ｃｈｅｗ、　２６３：　１６７０９−１６７１３　（１９８ｇ）　；シゲナガ ら、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｔ　２６５：　２１３５０−２１３５４　（１ ９９０））　、及び植物チオエン類（オルセン（Ｏｌｓｅｎ）とサムエルシン（ Ｓａｓｕｅｌｓｓｏｎ）、＾ｅｔａ　Ｃｈｅｌ　５ｃａｎｄ　２６二５８５−５ ９５　（１９７２）　：オザキら、　Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ　８７：　５４９−５ ５５　（１９８０）　；ボールマン（Ｂｏｈｌｍａｎｎ）とアペル（Ａｐｅｌ） 、　ｌ１ｏｌ　Ｇｅｎ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　２０７：　４４６−４５４　（１９ ８７）　：ボールマンら、　ＥＭＢＯＪ　７：　１５５９−１５６５　（１９８ ｇ））が含まれる。

デフエンジンは、幾つかの哺乳動物種の骨髄由来細胞から単離されたシスティン に富む塩基性ペプチドである（最近の委細については、ガングら、　Ｅｕｒ　Ｊ 　Ｈａｅ■ａｔｏｌ　４４：　１−８　（１９９０）　；レーラーら、　Ｃｅ１ ｌ　６４：　２２９−２３０　（１９９１）を参照のこと）。

デフエンジンは、細菌（セルステッド（Ｓｅｌｓｔｅｄ）ら、　Ｉｎｆｅｃｔ　 Ｉｍｍｕｎ　４５：　１５Ｇ　（１９８４）　；ガングら、　Ｊ、Ｃｌ１ｎ、　 Ｉｎｖｅｓｔ、　７６：　１４２７−１４３５　（１９８５））　、真菌（ガン グら。

Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　７６：　１４２７−１４３５　（１９８５ ）　；ボレンシュタイン（Ｂｏｒｅｎｓｔｅｉｎ）ら。

Ｉｎｆｅｃｔ　Ｉａ＋ｍｕｎ　５９：　１３５９−６７　（１９９１））及び外 膜のついたウィルス（レーラーら。

Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、　５４：　４６７　（１’１ｇ５）　；ダ”　（Ｄａｈｅｒ ）ら、　Ｉ、　Ｖｉｒｏｌ、　６０：　１０６８−１０７４@（１９ ８６））に対してｉｎ　ｖｉｔｒｏで抗微生物活性を有する。デフエンジンは、 分子間ジスルフィド結合に関与する６システインを含むその配列内の１１の保存 された残基によって特徴付けられる（セルステッドとハーウイッグ（ｔｌａｒｗ ｉｇ）、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｗ、　２６４：　４００３−４００７　（１９８９））。このジスルフィ ドの並びは、デフエンジンの構造及び活性に重要である。それらの抗微生物活性 は、膜を選択的に崩壊させるそレラノ活性ノ直接の結果であッテ（レーラーら、 　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　８４：　５５３−５６１（１９８９）　 ；リヒテンシュタイン（Ｌｉｃｈｔｅｎｓｔｅｉｎ）、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉ ｎｖｅｓｔ、　８８二９３−１００（１９９１））、それはおそらく溝の形成に よるものである（カーガン（Ｋａｇａｎ）ら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃ ａｄ、　Ｓｃｉ、　（ＵＳＡ’）　８７：　２１０−２１４　（１９９０））と いうことを示唆する証拠がある。ヒトデフェンシン−３の高解像度結晶構造が最 近になって測定されたが（ヒル（■１ｌｌ）ら、　５ｃｉｅｎｃｅ　２５１：　 １４８１−１４８５　（１９９１））、それは脂質膜、つまりデフエンジン抗微 生物活性部位とデフエンジンとの相互作用の幾つかの特有のモデルを示唆するも のとなっている。抗微生物活性に加えて、一定のデフエンジンは、単球走化性（ テリト（Ｔｅｒｒｉｔｏ）ら、　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　８４：　 ２０１７−２０２０　（１９８９））、副腎皮質抑制（サイン（Ｓｉｎｇｈ）ら 、　Ｂｉｏ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　１５５：　５２ ４−５２９（１９８８））　、ニフェジピン感受性カルシウムチャネル活性化（ マクロード（ＭａｃＬｅｏｄ）ら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓ ｃｉ、　８８二５５２−５５６　（１９９１））及び真核細胞細胞障害（オクレ ント（Ｏｋｒｅｎｔ）ら、＾ｔ　Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｐｉｒｅ、　Ｄｉｓ、　１４ １：　１７９−１８５　（１９９０））を含む他の生物活性を有する。骨髄発現 に加えて、マウスでの最近の研究（オエレッテ（Ｏｕｅｌｌｅｔｔｅ）とコルデ ル（Ｃｏｒｄｅｌｌ）、　Ｇａ５ｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ　９４：　１１４−１２ １　（１９８８）、オエレッテら、　Ｊ、　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、　１０８： 　１６８７−１６９５　（１９８９）、オエレッテとルアルジ（Ｌｕａｌｄｉ） 、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｓ、　２６５：　９８３１−９８３７　（１９９ ０））及びウシでの最近の研究（ダイヤモンドとベビンス（Ｒｅｖｉｎｓ）、　 （Ｉｎ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）（１９９１）、ダイヤモンドら。

Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　（ＵＳＡ）８８：　３９５２ −３９５６　（１９９１））は、デフエンジン関連ペプチド、つまりクリプトジ ン（ｃｒｙｐｔｄｉｎ）及び気管抗微生物性ペプチドも上皮組織内で発現される ことを示している。

ヒトでは、デフエンジンは、好中球のアズール顆粒の主要な構成成分であり（ガ ンツら、　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、　７６：　１４２７−１４３５　（ １９８５）　；セルステッド、　Ｊ、Ｃ１１ｎ。

Ｉｎｖｅｓｔ、　７６：　１４３６−１４３９　（１９８５）　；ライス（Ｒｉ ｃｅ）、　Ｂｌｏｏｄ　７０：　７５７−７６５　（１９８V）　； レーラーら、　Ｈｅｍａｔｏｌ、　０ｎｃｏｌ、　Ｃ１１ｎ、　Ｎｏｒｔｈ、＾ ｍ、　２：　１５９−１６９　（１９８８））、これら循環白血球による微生物 の非酸化的死滅に貢献していると考えられる（レーラーら、　Ｂｅｍａｔｏｌ、 　０ｎｃｏ１．　Ｃｌ１ｎ、　Ｎｏｒｔｈ、＾ｔａ、　２：　１５９−１６９　 （１９８８））、デフエンジン及びアズール顆粒の他のタンパク質は、細菌の食 作用の間に好中球の食胞融解小体小胞に入ることが示された（ジョイナ−（Ｊｏ ｉｎｅｒ）ら、　Ｊ、　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、　１０９：２７７１−２７８２ 　（１９８９））。４つの骨髄由来ヒトデフェンシンが単離され、特徴が明らか にされた（ガンツら、　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、　７６：　１４２７− １４３５　（１９１！５）　；セルステッドら、　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、Ｉｎｖｅｓ ｔ、　７６：　１４３６−１４３９　（１９８５）　：サインら、　Ｂｉｏｃｈ ｅｍ、　ＢｉｏｐｈｙｓA　Ｒ ｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、１５５：　５２４−５２９　（１９８８）　；ガベイ　 （Ｇａｂａｙ）ら、Ｊ、Ｉｍ＋１ｕｎｏ１．　１４３：　１R５ ８７１３６５　（１９８９）　；ワイルデ（Ｖｉｌｄｅ）、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、 　Ｃｈｅｔ　２６４：　１１２００−１１２０３　（１９８X）） 。ヒトデフェンシン１及び３は３０アミノ酸ペプチドであるが、それらのアミノ 末端における１個の残基だけで配列が相違している（セルステッド、　Ｊ、Ｃ１ １ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　７６：　１４３６−１４３９　（１９８５））。これ ら２つのデフエンジンのクローン化されたｃＤＮＡ（ダハ−ら、　Ｐｒｏｃ、　 Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ８５：　７３２７−７３３１　（１９ ８ｇ）　；マース（Ｉｌａｒｓ）ら、　Ｂｌｏｏｄ　７１：　１７１３−１７１ ９　（１９８８）　；ビープ？　ン（ｌｉｅｄｅｍａｎｎ）ら。

Ｌｅｕｋｅｍｉａ　３：　２２７−２３４　（１９８９））は、ヌクレオチド配 列が９８％以上同一であるが、成熟デフエンジン１及び３内のアラニン又はアス パラギン酸残基に対応する推定上のプレプロペプチドのコドン６５で１個のヌク レオチドの相違がある。２９アミノ酸ペプチドであるデフエンジン２は、そのア ミノ末端でこれらアミノ酸のいずれかを欠いている以外は、デフエンジン１及び ３と同一である（セルステッド、　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　７６： 　１４３６−１４３９　（１９８５））、このデフエンジンのｃＤＮＡはまだク ローン化されていないので、それが明確に異なる遺伝子の産物であるのか、又は デフエンジン１又は３の翻訳後タンパク質分解修飾体であるのか不明である。デ フエンジン４は、−次構造において他のヒトデフェンシンと太き（相違している 。この３３残基ペプチドは、デフエンジンを特徴付けるコンセンサス残基を本質 的に共有するだけであり（サインら、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　 Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ。

１５５：　５２４−５２９　（１９８８）　；ワイルデ、　Ｊ、　Ｒｉａｌ、　 Ｃｈｅｔ　２６４：　１１２００−１１２０３（１９８９）j、 そのｃＤＮＡも遺伝子も記載されていない。ｉｎ　５ｉｔｕハイブリダイゼ一シ ヨン組織化学によって、デフエンシンｃＤＮＡプローブは、顆粒球発達の比較的 狭いウィンド内で発現されるメツセージを検出する。そのｍＲＮＡは、後期前骨 髄球及び初期単球、つまり成熟循環好中球の前駆体内（マースら、　Ｌｅｕｋｅ ｍｉａ　１：　１６７−１７２　（１９８７）　；ビープマンら、　Ｌｅｕｋｅ ｍｉａ　３：　２２７−２３４　（１９８９））　、並びにヒト骨髄の他の顆粒 性白血球内（マースら、　Ｌｅｕｋｅｍｉａ　１：　１６７−１７２　（１９８ ７））で豊富であるが、循環好中球のノーザンプロット分析によっては検出不能 である（ダハ−ら、　Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ８５：　７３２７−７３３１　（１ ９８ｇ））。

抗微生物及び抗炎症活性を有する新規なデフエンジンペプチドが切望される。

ヒトの消化管に用いるのに特に適するデフエンジンペプチドが特に望ましい。と いうのは、それらは、病原性細菌が関係した種々の形態の下痢及び炎症性腸疾患 、壊死性全腸炎及び胃潰瘍疾患を含む潰瘍性疾患の如き消化器の障害の治療に有 効であり得るからである。

発明の要旨 内因性宿主防衛ペプチドの一次配列は、特殊な局所環境におけるペプチドの高活 性に必要な化学的特性のための進化的選択を反映している。ヒト消化管にとって 内因性のデフエンジンペプチドは、この器官系における薬学的用途に適している と考えられ、特に望ましい。というのは、それらは、細菌性下痢、へりコバフタ −・ピロリ（ｔｌｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ）に関連する胃潰瘍疾 患、炎症性腸疾患、及び壊死性全腸炎の如き消化器障害の治療に有効であり得る からである。更に、内因性デフエンジンペプチドをコードするｃＤＮＡ及び遺伝 子のヌクレオチド配列は、発現の調節に重要な情報を含んでいる。この情報を薬 学的に利用して体内発現を変化させることができる。これらヌクレオチド配列を これら遺伝子内の突然変異を検出するため及び生検材料を評価するために診断に 用いることができる。

か（して、本発明は、微生物感染症及び消化器系炎症の治療に有用であり得る消 化管内に内因的に局在する新規なデフエンジンペプチドを提供する。

本発明の幾つかの態様によれば、配列番号＝５又は配列番号ニアで定義されるア ミノ酸配列の少なくとも一部分を含む実質的に純粋な消化器デフエンジンペプチ ドが提供される。本発明の他の態様では、配列番号＝４又は配列番号＝６で定義 される配列の少な（とも一部分を含むｃＤＮＡ配列から産生される消化器デフエ ンジンペプチドが提供される。選択された発現系に適合性の制御配列に連結した 消化器デフエンジンペプチドをコードするＤＮＡ配列を含む適する発現系内で発 現することができる組換え発現ベクターが提供される。かかるベクターから産生 される消化器デフエンジンペプチドも本発明によって提供される。有効量の消化 器デフエンジンペプチドを含む接触消毒剤が、本発明の幾つかの態様において提 供される。本発明のなお他の態様では、消化器デフエンジンペプチドを薬学的に 許容できるキャリヤー中に含む医薬組成物が提供される。本発明の他の態様によ って、抗微生物有効量の消化器デフエンジンペプチドを微生物感染症又は消化器 系炎症を患っている哺乳動物に投与する、微生物感染症及び消化器系炎症を治療 する方法が提供される。また、本発明によって、患者からサンプルを採取し、そ してそのサンプル中に存在するデフエンジンペプチド又はデフエンジンペプチド をコードするｍＲＮＡの量を検出する、消化管の微生物感染症を診断する方法が 提供される。そのサンプル中の消化器デフエンジンペプチド又はｍＲＮＡの量を 、正常な哺乳動物の消化管内に存在するペプチド又はｍＲＮＡの量と比較し、そ れによって消化器デフエンジンペプチド又はｍＲＮＡのより多いか又はより少な い量を感染の可能性の指標とする。同じ（、患者からサンプルを採取し、そして そのサンプル中に存在するデフエンジンペプチド又はデフエンジンペプチドをコ ードするｍＲＮＡの量を検出する、消化器系炎症を診断する方法が提供される。

そのサンプル中の消化器デフエンジンペプチド又はｍＲＮＡを、正常な哺乳動物 の消化管内に存在するペプチド又はｍＲＮＡ量と比較し、それによって、消化器 デフエンジンペプチド又はｍＲＮＡのより多いか又はより少ない量を炎症の可能 性の指標とする。本発明の他の方法によれば、ヒトの患者からＤＮＡ含有試験サ ンプルを採取し、そのＤＮＡ含有試験サンプルからのＤＮＡを、配列番号＝１、 配列番号：４及び配列番号：５からなる群から選ばれるデフエンジン配列の上流 部分に相補的な配列を有する上流プローブとその選んだデフエンジン配列の下流 部分に相補的な配列を有する下流プローブを用いて増幅することにより、患者の 消化器系障害へのかかり易さを診断することができる。その増幅したＤＮＡを正 常サンプルからのＤＮＡと比較して、正常ＤＮＡに比べた増幅ＤＮＡの突然変異 を同定することができ、それによって、突然変異をその患者が消化器系障害にか かる高い可能性を有しているという指標にする。ゲノミッククローンのライブラ リーを進化的に保存されたデフエンジン配列由来のオリゴヌクレオチドプローブ を用いてスクリーニングする、デフエンジンを同定する方法も提供される。その プローブのクローンへのハイブリダイゼーションにより、そのクローンがデフエ ンジンペプチドをコードするＤＮＡ配列を含有する可能性が示される。このクロ ーンは、本発明の幾つかの態様において、デフエンジンペプチドのＤＮＡ配列を 確認するために特徴が明らかにされている。

従って、本発明の目的は、実質的に純粋な消化器デフエンジンペプチドを提供す ることである。本発明の他の目的は、消化器系微生物感染症及び炎症の治療に有 用な医薬組成物を提供することである。なお更なる本発明の目的は、消化器系微 生物感染症を治療及び予防する方法を提供することである。いま一つの更なる本 発明の目的は、消化器系炎症を治療及び予防する方法を提供することである。

消化器系微生物感染症及び消化器系炎症を診断する方法も本発明の目的である。

患者の消化器系障害へのかかり易さを診断する方法も本発明の目的である。いま 一つの他の本発明の目的は、デフエンンンペプチドを同定する方法を提供するこ とである。これら及び他の目的は、詳細な説明及び添付の請求項を参照すること により明らかになるであろう。

図面の簡単な説明 図１は、ウサギデフエンジン−１、ウサギデフエンジン−２、ヒトデフェンシン −１及びヒトデフェンシン３をコードするｃＤＮＡの５′部分のヌクレオチド配 列の比較である。短い間隙は、配列の比較を助けるために含めたものであるので 、同一性パーセンテージを計算する際はミス対合として考慮した。ヒトデフェン シン−１の配列（ダハ−ら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、 　ＵＳＡ　８５：　７３２７−７３３１　（１９８８）　；　マースら、　Ｂｌ ｏｏｄ　７１：　１７１３−１７１９　（１９８８））とヒトデフェンシン−３ の配列（ダハ−ら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ ８５：　７３２７−７３３１　（１９８８）　：ビープマンら、　Ｌｅｕｋｅｍ ｉａ　３：　２２７−２３４　（１９８９））は、示した領域内で同一である。

ウサギデフエンジンノ配列は、ガンツら、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１４３： 　１３５ｇ−１３６５（１９８９）からのものである。垂直線は、４つ全てのｃ ＤＮＡ内の同一配列を表す。右欄外のパーセンテージは、対応する列内のヌクレ オチド同一性を示す。推定上の開始メチオニンコドンを太字で示しており、推定 上のシグナル配列をコードするヌクレオチドに下線を付しである。オリゴヌクレ オチドプローブ、つまりＤ５°オリゴに対応するヌクレオチドには上線を付しで ある。

図２は、ＨＯ２−３ｅのヌクレオチド配列、つまりヒトデフェンシン５遺伝子と フランキング配列を含有するゲノミッククローンを示す。図２Ａは、ヒトデフェ ンシン５をコードする２゜９ｋＢ　ＥｃｏＲＩフラグメント、つまりＨＯ２−３ ｅの部分制限酵素地図を示す（Ｅｃｏ＝ＥｃｏＲ１、Ｘｈｏ＝Ｘｈｏｌ、Ｘｂａ ＝Ｘｂａｌ、Ｈｉｎ＝ＨｉｎｄＩＩＩ　）　。目盛りは１００塩基対毎のもので ある。太線は、２つのエキジンの位置を示す。矢印は、このクローンを分析する ために用いた配列決定戦略を示す。図２Ｂは、このＥｃｏＲ１部位に隣接する最 初のヌクレオチドから番号を付したＨＯ２−３６のヌクレオチド配列を示す。エ キジン配列を大文字で示し、そのコーディング領域のアミノ酸配列を３文字法で 示している。ＴＡＴＡボックスには下線を付し、ＣＡＡＴボックスに二重下線を 付している。コンセンサススプライス部位残基を太字で示している。ポリアデニ ル化シグナルをボックスで囲んでいる。

図３は、ヒトの８組繊中のヒトデフェンシン５遺伝子の可能な発現のＰＣＲ分析 から得られたデータである。図３Ａは、鋳型として８組織からのｃＤＮＡ及びゲ ノミックＤＮＡを用いたＰＣＲ反応の結果を示す。このＰＣＲ反応に用いた２つ のプライマーは、このゲノミック配列の潜在的なオーブンリーディングフレーム （ＯＲＦ）から選んだ。ＨＮＰ６３Ｓは上流ＯＲＦからのセンスオリゴヌクレオ チドであり、そしてＨ３ＩＡ２６１ａは下流ＯＲＦからのアンチセンスオリゴヌ クレオチドであった。それぞれのヒト組織からのλファージｃＤＮＡのプールを ＰＣＨの鋳型として用いた。鋳型としてのヒトデノミックＤＮＡをコントロール として含めた。標準的増幅手順を用いた。増幅産物を３％アガロースゲルで大き さ毎に分画した。約１．２　ｋ　ＢのバンドがアノミックＤＮＡサンプル中に見 られた。小腸サンプル中に２３０ヌクレオチドのバンドが見られたが、これはイ ントロンを跨いで増幅したことに一致する。その他のｃＤＮＡサンプル中には如 何なるバンドも見られなかった。図３Ｂは、全ての組織からの妥当なｃＤＮＡ鋳 型の存在を証明するための、α−チューブリンプライマ一対のＨＴＵＢｓと）（ ＴＵＢａを用いたコントロール増幅を示す。図３０は、３Ａからの増幅産物と、 デフエンジン５ｃＤＮＡのヌクレオチド＋１２１〜＋４５０からなるプローブ（ ｐＳＩ２５−３°Ｍｂ　ｏ　２）との、高ストリンジエンシーの条件（最終洗浄 ６５℃、０゜ｌＸ５ＳＣ，−晩感光）下でのフィルターハイプリダイゼーシコン である。

図４は、ヒトデフェンシン５ｃＤＮＡの特徴付けを示す。図４Ａは、Ｄ５’オリ ゴでプローブ処理したヒト小腸ｃＤＮＡライブラリーから単離した４つのλｇｔ ｌｌファージ挿入片のサザーンブロットハイブリダイゼーションである。２×Ｓ ＳＣでの最終洗浄を示した温度で行った。図４Ｂは、このプローブに対応する領 域内の図４Ａに示した４クローンの部分配列である。このプローブと同一のヌク レオチドを：″で表している。図４０は、ヒトデフェンシン５ｃＤＮＡのヌクレ オチド配列を示す。この配列は、２つのλｃＤＮＡクローン（Ｓ、１．２５：ヌ クレオチド−１０〜＋４１５；Ｓ、１．３４：ヌクレオチド−１９〜＋４１３） とプライマー伸長／ＲＡＣＥ　ＰＣＲ法からの２つのクローン（ｐＤＪ１１７− ４及びｐＤＪ１１７−５ニー１９〜−４０）の配列からの混成体を表し、推定上 の開始メチオニンコドンが＋１〜＋３に割り当てられている。このオーブンリー ディングフレームの推定アミノ酸配列を１文字法で示している。ポリアデニル化 付加シグナルをボックスで囲んでいる。図４Ｄは、ｐｓＩ２５−３°Ｍｂ　Ｏ２ 、つまりヒトデフェンシン５ｃＤＮＡ３°からＭｂｏ２部位までのセグメント（ ヌクレオチド＋１２１〜＋４５０）でプローブ処理したヒトデノミックＤＮＡの サザーンブロットハイブリダイゼーションである。このフィルターは、プローブ を取り除いた後に図２Ｂで用いたものと同じであった。ハイブリダイゼーション は、５０％ホルムアミド／５ＸＳＳＣ中で４２℃であり、高ストリンジエンシー 洗浄は、０、ｌＸ５ＳＣ中で６５℃で３０分間であった。オートラジオグラフィ ー感光は１４日間であった。

図５は、ヒト組織内でのデフエンジン発現のノーザンブロットハイブリダイゼー ションである。図５Ａでは、成人小腸からの全ＲＮＡ（１０μｇ）を標準的なホ ルムアルデヒド／アガロースゲル内に大きさ毎に分画し、ナイロン膜に毛細管現 象を利用してプロットし、そしてデフエンジン５オリゴヌクレオチドプローブで プローブ処理した。ハイブリダイゼーション及び最終洗浄のための高ストリンジ エンシーの条件は、実施例８に記載するｉｎ　５ｉｔｕ　／ゾブリダイゼーショ ン実験で用いるものと同一であった。サイズマーカーは、並行レーンからのＲＮ Ａスタンダードに対応する。このオートラジオグラフィーの感光は２日間であっ た。

図５Ｂは、図５Ａにおけるのと同じ溶液中でハイブリダイズ及び洗浄した８成人 組織からのポリアデニル化に富むＲＮＡのノーザンプロットである。この感光は １０日間であった。このプロットを引き続き図５Ｂ及び５Ｄに示した陽性コント ロール実験で用いた。図５Ｄは、アンチセンスシグナル配列オリゴヌクレオチド Ｓ　ｉ　ｇ６８ａとの、図５Ａにおけるのと同じノーザンプロットのハイブリダ イゼーションである。肺と胎盤レーンにバンドが出現している。この感光は１０ 日間であった。

図６は、ヒトプレプロデフエンシン５及び６及び推定上の成熟デフエンジン５及 び６と既知のデフエンジンファミリーメンバーとの推定アミノ酸配列の比較であ る。６つのプレプロデフエンシンの推定アミノ酸配列は、公表されたｃＤＮＡか らのものである。ヒトプレプロデフエンジン５内のカチオン性残基を“＋１によ って示し、アニオン性残基を“−”によって示した。プレプロデフエンジン５の ものと同一の残基を、ヒト（ダハ−ら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、 　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ８５；７３２７−７３３１　（１９８８）　；マースら、　 Ｂｌｏｏｄ　７１：　１７１３−１７１９　（１９８８）　；ビープマンら、　 Ｌｅｕｋｅｓｉａ　３：　２２７−２３４　（１９８９））　、ウサギ（ガン゛ ンら、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１４３：　１３５８−１３６５　（P ９ｇ９））及びマウス（オエレ・ソテとルアルジ、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅ ｗ、　２６５：　９８３１−９８３７（１９９０））配列中で°：″によって示 した。ヒトプレプロデフエンジン１と３は、示した１個のアミノ酸以外は同一で あり、２つのウサギ配列は位置２以外は同一である。ヒトデフェンシン１及び３ 及びウサギデフエンジン１及び２のアミノ末端残基は、入手可能なペプチドデー タ（セルステッドら、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅ■、　２５８：１４４８５−１ ４４８９　（１９８３）　；セルステッドら、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、 　２６０：　４５７９−４５８５　（１９８５）　G セルステッド、　Ｊ、Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　７６：　１４３６−１４３ ９　（１９８５））に基づきΔで示している。デフエンジン５．６又はマウスク リプトジンについては未だ如何なるペプチドデータも報告されていないので、示 したアミノ末端は、他のデフエンジンにおけるようにこのプロペプチド中に保存 されたカチオン性アミノ酸からの２つの残基の開裂に基づいて推測したものであ る。短い間隙（“−”により示した）は、整列を助けるために配列中に含めた。

報告されたプレプロデフエンジンについてのコンセンサス配列を示しており、こ こで大文字は全６配列中での同一性を示し、小文字はそれら６つのうちの４つ（ 又は５つ）で保存されているものである。

図７は、５種の哺乳動物からの成熟デフエンジンペプチドの一次配列である。

その全体としての構成は、先に提示されたものと類似している（ヒルら、　５ｃ ｉｅｎｃｅ　２５１：　１４８１−８５　（１９９１）　；レーラーら、　Ｊ、 　Ｖｉｒｏｌ、　５４：　４６７　（１９９１））　。実線ボックスは、公表さ れた配列データ（セルステッドら、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｔ　２５８：　 １４４８５−１４４８９　（１９８３）　；セルステッドら、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ 、　Ｃｈｅｗ、２６０：　４５７９−４５８５　（１９８５）　；セルステッド 、　Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　７６：　１４３６−１４３９　（１９ ８５）　；セルステッドとハーウィッグ、　Ｉｎｆｅｃｔ　Ｉｍｇ＋ｕｎ　５５ ：　２２８１−２２８６　（１９８７）　；サインら、　Ｂｉｏｃｈｅｔ　Ｂｉ ｏｐｈｙｓ、　Ｒ■刀B Ｃｏｍ閣ｕｎ、　１５５：　５２４−５２９　（１９８ｇ）　；アイゼンハワー （Ｉ＋ｕｕｎ　５７：　２０２１−２０２７　（１９８９）；オエレッテら、　 Ｊ、　Ｃｅ１ｌ、　Ｂｉｏｌ、　１０８：　１６８７−１６９５　（１９８９） 　；ワイルデら、　Ｊ、　Ｂｉ。

１、　Ｃｈｅｔ　２６４：　１１２００−１１２０３　（１９８９））からの配 列同一性を示し、破線ボックスは、殆ど完璧なコンセンサスを示す。ヒトデフェ ンシン５とマウスクリプトジンのアミノ末端残基に下線を付して、それらがｃＤ ＮＡ分析に基づくものであってペプチドデータに基づくものでないことを示して いる。

発明の詳細な説明 本発明は、消化器抗微生物及び抗炎症剤として有用な実質的に純粋なポリペプチ ドを提供する。ここで用いる“抗微生物”という用語は、微生物を死滅させるこ と又はそれらの増殖及び生育を抑制することをいう。ここで用いる“抗炎症”と いう用語は、結果として過剰局所血流を伴う局所血管の血管拡張、間質空間内へ の大量の液体の漏れで増加した毛細血管の浸透、間質空間内での液体の凝固、そ の組織内への多数の顆粒球及び単球の移動、及びその組繊細胞の膨張を含む、炎 症に関係する１又は２以上の徴候の抑制のことをいう。ここで用いる“実質的に 純粋”という用語により、組成物中の５０％より多い物質が目的のペプチドから なることが意味される。このクラスのデフエンシンポリペプチドをコードする配 列は、ヒト及びウサギ骨髄由来デフエンジンをコードするｍＲＮＡの５゛部分の 配列が有意なヌクレオチド類似性を有するという観察結果（図１）に基づいて同 定された。かくして、本発明の方法によれば、進化的に保存された配列に基づい てプローブを構築することができる。本発明の好ましい態様では、配列ＣＴＴＧ ＣＴＧＣＣＡＴＴＣＴＣＣＴＧＧＴＧＧＣＣＣＴＧＣＡＧＧＣＣＣＡＧＧＣＴＧ ＡＧＣ（配列番号：３５）を有するプローブ（Ｄ５′オリゴ）を用いてクローン の固体群をスクリーニングし、新規なデフエンシンペプチドを同定した。本発明 の好ましい態様では、このＤ５’オリゴプローブを用いてヒトゲノミツク及びｃ ＤＮＡライブラリーをスクリーニングして、幾つかのクローンを単離した。ハイ ブリダイゼーション及び部分配列分析により、これら同定したクローンの中には 、以前に特徴が明らかにされた骨髄由来デフエンジン配列並びに新規なデフエン ジン関連配列があることが証明された。かかる新規なデフエンジン関連配列を発 現する２つのクローンの特徴を十分に明らかにし、そして小腸のバネート（Ｐａ ｎｅｔｈ）細胞内で選択的に発現される遺伝子を含有することを見出した。これ らバネート細胞由来デフエンジンをヒトデフェンシン５及びヒトデフェンシン６ と名付け、ここでは消化器デフエンシンペプチドということにする。これら方法 を用いて他の消化器デフエンジンペプチドを同じように同定することができる。

デフエンジン５のゲラミックＤＮＡ配列を図２に示す。デフエンジン５のｃＤＮ Ａ配列及び推定アミノ酸配列を図４に示す。成熟デフエンジン５ペプチドの一部 アミノ酸配列を図７に示す。デフエンジン５ゲノミツク（図２）及びｃ　ＤＮＡ （図４）配列の比較により、２つのエキソンとしてのこの遺伝子が９９４ヌクレ オチドのイントロンによって分離されていることが示される。このゲノミックク ローン中のエキソンのヌクレオチド配列は、そのｃＤＮＡ配列中のものと完全に 一致している。そこにはスプライス部位（図２、太字）及びポリアデニル化（ブ ロードフート（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ）とブラウンリー（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ）、　 Ｎａｔｕｒｅ　２６３：　２１１−２１４（１９７６））　（図２、ボックスで 囲まれている）のためのコンセンサス配列がある。

この遺伝子の約１．４　ｋ　Ｂの５′フランキング領域を配列決定した（図２） 。それにはＲＡＣＥ−ＰＣＲにより同定される２つの最も伸びたｃＤＮＡの５゛ 末端から２４ヌクレオチド上流のヌクレオチド１３２８〜１３３４にＴＡＴＡボ ックスがある（図２、下線を付している）。この伸びたｃＤＮＡのその末端から ８７ヌクレオチド上流の位置１２６７〜１２７１にＣＡＡＴボックスが見られる （図２、二重下線を付している）。このｃＤＮＡ配列（図４）は、デフエンジン ５　ヲ：ｌ−ドする成熟メツセンジャーＲＮＡが、ポリアデニレートテールに加 えて４４９ヌクレオチド長であることを示唆しており、これはノーザンプロット データ（図５）と一致する。このｃＤＮＡ配列は、最初のＡＴＧコドン（ヌクレ オチド＋１〜＋３）から長さが９４コドンのオーブンリーディングフレームを含 有する。このメチオニンコドンの前後（ＣＡＧＣＣＡＴＧＡ）は、その他の２つ のヒトデフェンシンｃＤＮＡに見出されるものと同一であり、有利な翻訳開始配 列と一致する（コザック（Ｋｏｚａｋ）、　Ｊ、　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、　１ １５：　８８７−９０３　（１９９１））、推定上のシグナル配列をコードする ヌクレオチド配列は先にクローン化されたヒトデフェンシンｃＤＮＡと９５％同 一であるが、その推定上のコーディング領域の残りをコードするヌクレオチドは ３６％同一に過ぎない。これは、デフエンジンファミリーにおける先の観察結果 と一致する。

デフエンジン５ｃＤＮＡの推定アミノ酸配列と先に報告されたプレプロデフエン ジンを比較すると、大きさ及び電荷分布に関して有意な類似性が見られる（図６ ）。推定上の成熟デフエンジン５ペプチドのカルボキシル及びアミノ末端を、ペ プチド及びｃＤＮＡデータが入手可能な２種のウサギ及び２種のヒトデフェンシ ンの分析から明らかなパターンから推定した。フレーム内（ｉｎ−ｆｒａ＋ｎｅ ）停止コドンは、それら全てのペプチドの最終残基の後ろにある。成熟ペプチド のアミノ末端アミノ酸は、推定上のプレプロペプチド中に保存されたカチオン性 アミノ酸から２残基目である（図６）。しかしながら、他のデフエンジンとの配 列比較は、−次構造保存は、組織源又は種の起源によっては容易に予測できない ことを示している（図７）。

デフエンジン６のｃＤＮＡ及び推定アミノ酸配列をそれぞれ配列番号＝６及び７ に示す。成熟デフエンジン６ペプチドの予測される一部アミノ酸配列を図７に示 す。デフエンジン６ｃＤＮＡの推定アミノ酸配列は、デフエンジン５及び先に報 告されたプレプロデフエンシン（図６）と類似の特徴を有している。プレプロデ フエンシン６の他のものとの注目に値する１つの相違は、アミノ末端から位置２ ８〜３３における７アミノ酸残基の付加である。このセグメントは、推定上のプ ロペプチド領域の一部であり、他の多くのペプチド系において翻訳後の運搬及び プロセシングに重要な領域である。他のデフエンジンのように、フレーム内停止 コドンは予測されるカルボキシ末端の後ろにあり、そしてカチオン性プロペプチ ド残基は予測されるアミノ末端から２残基目に位置している。

本発明の消化器デフエンジンペプチドは、懸濁しているか又は溶液中にある場合 はその周囲のｐＨに依存して、固体形態にある場合は結晶化しているか又は沈殿 しているその周囲のｐＨに依存して、薬学的に許容できる塩の形態であっても中 性形態であってもよい。このタンパク質の遊離のアミノ基はもちろん、例えば、 塩酸、リン酸、又は硫酸の如き無機酸と又は、例えば、酢酸、グリコール酸、コ ハク酸、又はマンデル酸の如き有機酸と酸付加塩を形成することができる。この 遊離のカルボキシル基は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム又は水酸化カルシ ウムの如き無機塩基、及びピペリジン、グルコサミン、トリエチルアミン、コリ ン及びカフェインの如き有機塩基を含む塩基と塩を形成することができる。更に 、このタンパク質を、脂質及び糖類の如き他の生体物質と組み合わせることによ って又はアミノ基のアセチル化、ヒドロキシル側鎖のリン酸化、又はスルフヒド リル基の酸化の如き側鎖の修飾によって修飾してもよい。

消化器デフエンジンペプチドの修飾体は、その生物活性が保持されている限りデ フエンジンの範囲内に含まれる。生物活性により、とりわけ抗微生物及び／又は 抗炎症活性が意味される。最後に、消化器デフエンジンペプチドの重要でない修 飾により、配列番号＝５及び配列番号＝７に示した配列に比較して実質的に同等 又は向上した生物活性を有するタンパク質ができ得ると理解される。これら修飾 は、部位特異的突然変異誘発法によるように故意のものであっても、消化器デフ エンシンペプチド産生体である宿主内での突然変異による如き偶発的なものであ ってもよい。生物活性が保持される限りこれら全ての修飾が含まれる。

これらデフエンジンは、一般に、ジスルフィド結合に関与する６つのシスティン 、アルギニン−６、グルタミン酸−１４及びグリシン−２４を含む一定の保存さ れた極めて重要なデフエンシンペプチドの残基を保持している。他の残基、即ち 、システィン−５、グリシン−１８、システィン−２０、及び位置２２と２８に おける疎水性残基は、二量体四次構造において鍵になると考えられる。デフエン ジン５及び６は、これら極めて重要な残基の全ての保存を有している。これら配 列類似性に基づき、デフエンジン５及び６の生物活性、特に抗微生物活性は、他 のデフエンシンペプチドの生物活性を反映すると考えられる。更には、これら消 化器デフエンジンペプチドの局在性及び炎症性腸症候群を患っている患者の消化 管内で認められる高濃度の消化器デフエンシンペプチドのために、これらデフエ ンジンは、消化器系炎症の変調に関連していると考えられる。

ＰＣＲ（図３Ａ）及びノーザンプロット分析（図５Ａ及び５Ｂ）を用いる実験は 、デフエンジン５遺伝子の発現する組織が限られていることを示している。デフ エンジン５遺伝子を発現する具体的な小腸細胞は、ｉｎ　５ｉｔｕ組織化学デー タに基づけば、パネート細胞である。同じ（、デフエンジン６はパネート細胞内 に局在している。

パネート細胞の具体的な系列及びそれらの生理学的役割はよく分かっていない（ サンドウ（Ｓａｎｄｏｗ）とホワイトヘッド（Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ）、　Ｇｕｔ 　２０：　４２０−４３１　（１９７９））。バネート細胞は腸全体にわたって 見出されるが、特に小腸の回腸に豊富である（ヘルツオフ（Ｈｅｒｔｚｏｇ）、 ＾ｓ、　Ｊ、　Ｐａｔｈｏｌ、　１３：　３５１−３５８　（１９３７））。こ れら細胞は、粗面小胞体、精巧なゴルジ体及び分泌細胞に典型的な大きな分泌小 胞を有している（ドライヤー（Ｔｒｉｅｒ）、　Ｊ、　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、 　１８：　５９９−６２０　（１９６３）　；ベンテ（Ｂｅｎｋｅ）とモエ（Ｍ ｏｅ）、　Ｊ、　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、　２２：　６３３−６５２　（１９６ ４））。これら細胞の化生は、炎症性腸疾患（パダーリン（Ｐａｔｅｒｓｏｎ） とワトソン（ｆａｔｓｏｎ）、　／ｖ＋、　Ｊ、　Ｐａｔｈｏｌ。

’３８：　２４３−２４９　（１９６１））を含むヒトにおける種々の病的状態 に見られる（ゲラ−（Ｇｅｌｌｅｒ）とサンプ（Ｔｈｕｎｇ）、＾ｒｃｈ、　Ｐ ａｔｈｏｌ、　Ｌａｂ、　１ｌｅｄ、、　１０７：　４７６−４７９　（１９８ R）） 。一連の証拠が、これら細胞が抗微生物防衛において一定の役割を有することを 示唆している。パネート細胞は、腫瘍壊死因子ｍＲＮＡを発現すること（ケシャ ブ（Ｋｅｓｈａｖ）ら、　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１７１：　３２７−３３ ２　（１９９０））及びライソザイムを含有すること（パダーリンとワトソン、 ＾ｍｅｒ、　Ｊ、　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、　３８：　２４３−２４９　（１９６ １）　；エルランドセン（Ｅｒｌａｎｄｓｅｎ）ら、　Ｊ、　Ｈｉｓｔｏｃｈｅ ｔ　Ｃｙｔｏｃｈｅｍ、　２２：　４０１−４１３　（１９７４）：クロッカー ズ（Ｋｌｏｃｋｅｒｓ）とレイタモ（Ｒｅｉｔａｍｏ）、　Ｊ、　［ｌ１ｓｔｏ ｃｈｅｓ、Ｃｙｔｏｃｈｅｗ＋。

２３二９３２−９４０　（１９７５）　；ピータース（Ｐｅｅｔｅｒｓ）とパン ドラ・ソペン（Ｖａｎｔｒａｐｐｅｎ）。

Ｇｕｔ　１６：　５５３−５５８　（１９７５））が分かっている。ライソザイ ムは、これら細胞内の分泌顆粒に局在しており（デックス（Ｄｅｃｋｘ）ら、　 Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ、　１３９：　２０４−２０７ 　（１９６７）　；ピータースとパントラフペン、　Ｇｕｔ　１６：　５５３− ５５８　（１９７５））、種々の刺激がこれら細胞の脱顆粒をもたらすことが分 かっている（タロッカーズとレイタモ、　Ｊ、　Ｈｉｓｔｏｃｈｅｗ、　Ｃｙｔ ｏｃｈｅｍ、　２３：　９３２−４０　（１９７５）　；ピータースとパントラ フペン、Ｇｕｔ　１６：　５５３−５５８　（１９７５）　：サトウら、Ｄｉｇ ｅｓｔｉｏｎ　３４：　１１５−１２１　（１９８６）：サトウとポルラフ、　 （Ｖｏｌｌａｔｈ）、　Ａｎａｔ、　Ｅｍｂｒｙｏｌ、　１７３：　３１７−３ ２２　（１９８６）　；サトウら、＾ｎａｔｏａ＋、Ｒｅｃ、　２２５：　１２ ４−１３２　（１９８９））　。かくして、これら発見は、デフエンジン５及び ６の抗微生物性及び抗炎症性ペプチドとしての役割を更に立証する。

本発明の方法を用いて同定されるバネート細胞に局在する他のペプチドも抗微生 物及び抗炎症活性を示すであろう。

デフエンジン５のＤＮＡ及びアミノ酸配列（配列番号：４及び配列番号：５）及 びデフエンジン６のＤＮＡ及びアミノ酸配列（配列番号：６及び配列番号ニア） をここに開示したので、これら消化器デフエンジンペプチド又はその部分は、米 国特許第４．６７７．０６３号に記載されたものの如き多数の周知の組換え技術 のいずれかに手を加えて調製することができると考えられる。なお、この米国特 許は、あたかも十分に記載されたかのように、参照によってここに組み入れられ るものとする。ここで用いる゛その部分”の用語は、目的の生物活性、特に抗微 生物及び抗炎症活性を保持するのに十分な大きさのペプチド又は核酸の任意の部 分を意味する。例えば、幾つかの好ましいデフエンシンペプチド“部分”は、配 列番号：２２又は配列番号＝５１に記載した成熟ペプチドである。生物活性を保 持する他の部分も本発明によって意図されている。

簡単に言えば、細胞の形質転換、ベクターの構築、メツセンジャーＲＮＡの抽出 、ｃＤＮＡライブラリーの調製等を行うのに用いる殆どの方法が、この技術にお いて幅広（実施され、そして殆どの実施者は、具体的な条件及び操作を説明する 標準的原料をよ（知っている。しかしながら、便宜のために、次にガイドライン を示す。

最も頻繁に用いる原核細胞は、大腸菌の種々の株によって代表される。しかしな がら、バシラス属、例えば、枯草菌、シュードモナス属の種々の種、又は他の細 菌株の如き他の微生物株も使用できる。かかる原核細胞系では、宿主適合種由来 の複製部位及び制御配列を含有するプラスミドベクターが用いられる。かかる１ つの“発現系”では、例えば、大腸菌は、ポリバー（Ｂｏｌｉｖａｒ）ら、　Ｇ ｅｎｅ　２：９５（１９７７）により大腸菌種から誘導されたプラスミドである ｐＢ３３２２の誘導体を用いて形質転換される。ｐＢＳ３２２はアンピシリン及 びテトラサイクリン耐性のための遺伝子を含有するので、目的のベクターの構築 に際して保持又は破壊のいずれでもできる追加のマーカーを提供する。普通に用 いられる原核細胞の制御配列は、オペレーター遺伝子を所望により伴ってもよい 転写開始のためのプロモーターをリポソーム結合部位配列と共に含み、かかる普 通に用いられるプロモーターには、β−ラクタマーゼ（ペニシリナーゼ）及びラ クトース（Ｉａｃ）プロモーター系（チャン（Ｃｈａｎｇ）ら、　Ｎａｔｕｒｅ 　１９８：　１０５６　（１９７７））及びトリプトファン（ｔｒｐ）プロモー ター系（ジョエデル（Ｇｏｅｄｄｅｌ）ら、　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒ ｅｓ。

８：　４０５７　（１９８０））及びλ由来ＰＬプロモーター及びＮ−遺伝子リ ポソーム結合部位（シマトアケ（Ｓｈｉｍａｔｏａｋｅ）ら、　Ｎａｔｕｒｅ　 ２９２：　１２８　（１９８１））が含まれる。　細菌に加えて、酵母の如き真 核微生物を宿主として用いてもよい。サツカロミセス・セレビシェ、パン用酵母 の実験室用味が最も多（用いられるが、幾つかの他の株が普通に入手可能である 。２ミクロン開始起点を用いるベクターが説明されている（ブローチ（Ｂｒｏａ ｃｈ、　Ｊ、Ｒ，）、　Ｍｅｔｈ、　Ｅｎｚ、　１０１：　３０７　（１９８３ ））が、酵母発現に適する池のプラスミドベクターも知られている（例えば、ス テインクコム（Ｓｔｅｉｎｃｈｃｏａ＋ｂ）ら、　Ｎａｔｕｒｅ　２８２：　３ ９　（１９７９）　；チェンペ（Ｔｓｃｈｅｍｐｅ）ら、Ｇｅｎｅ　１０：　１ ５７（１９８０）及びクラーク（Ｃ１ａｒｋ、　Ｌ）ら、　Ｍｅｔｈ、　Ｅｎｚ 、　１０１：　３００　（１９８３）を参照のこと）。酵母ベクターの制御配列 には、解糖酵素の合成のためのプロモーター（ヘス（■ｅｓｓ）ら、　Ｊ、　Ａ ｄｖ、Ｅｎｚｙ＋ｏｅ　Ｒｅｑ、　７：　１４９　（１９６８）　；ホーランド （Ｈｏｌｌａｎｄ）ら。

Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１７：　４９００　（１９７ｇ））が含まれる。当 該技術分野で知られている追加のプロモーターには、３−ホスホグリセレートキ ナーゼのためのプロモーター（ヒッツェマン（■１ｔｚｅｓａｎ）ら、　Ｊ、　 Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅ（２５５：　２０７３　（１９８０））　、及びグリセルアル デヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルベートデカ ルボキンラーゼ、ホスホグリセレートムターゼ、ピルベートキナーゼ、トリオー スホスフェートイソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、及びグルコキナ ーゼの如き他の解糖酵素のためのものが含まれる。生育条件により制御される転 写に追加の利点を有する他のプロモーターは、アルコールデヒドロゲナーゼ２、 イソシトクロームＣ１酸性ホスファターゼ、窒素代謝に関係する分解酵素、及び マルトースとガラクトース利用を司る酵素（ホーランド、同文献）のためのプロ モーター領域である。また、ターミネータ−配列はコーディング配列の３゛末端 にあるのが望ましいと考えられる。かかるターミネータ−は、酵母由来遺伝子内 のコーディング配列の後ろの３′未翻訳領域内に見出される。説明されている多 くのベクターは、エノラーゼ遺伝子含有プラスミドｐｅｎｏ４６から誘導される 制御配列（ホーランド（Ｈｏｌｌａｎｄ、　Ｍ、Ｊ、）ら、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、 　Ｃｈｅｗ、　２５６：　１３８５　（１９８１））又はＹＥｐ１３から得られ るＬＥＵ２遺伝子（ブローチら、　Ｇｅｎｅ　８：１２１　（１９７ｇ））を含 有するが、酵母に適合性のプロモーター、複製起点及び他の制御配列を含有する あらゆるベクターが適している。

もちろん、多細胞生物由来の真核性宿主細胞培養でポリペプチドをコードする遺 伝子を発現することも可能である。例えば、Ｔｉ５ｓｕｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ、 　Ａｃａｄｅｍｉｃ　ＰｒｅｓＳ、グルコ（Ｃｒｕｚ）とパダーリン（Ｐａｔｔ ｅｒｓｏｎ）編（１９７３）を参照のこと。有用な宿主細胞系には、ＶＥＲＯ１ ＨｅＬａ細胞、及びチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が含まれる。真 核性宿主内でポリペプチドをコードする遺伝子のｉｎ　ｖｉｖｏ発現も、消化器 デフエンジンペプチドのうまくゆきそうな調製方法である。

かかる細胞のための発現ベクターには、通常、例えば、普通に用いられるシミア ンウィルス４０　（ＳＶ４０）からの初期と後期のプロモーター（フィアース（ Ｆｉｅｒｓ）ら、　Ｎａｔｕｒｅ　２７３：　１１３　（１９７ｇ））　、又は ポリオーマ、アデノウィルス２、ウシ乳頭腫ウィルス、又は鳥類サルコーマウィ ルスの如き他のウィルスプロモーターの如き哺乳動物細胞に適合性のプロモータ ー及び制御配列が含まれる。哺乳動物細胞宿主系形質転換の一般的側面は、例え ば、アクセル（Ａｘｅｌ）らにより米国特許第４．３９９．２１６号に記載され ている。今日では、“エンハンサ−°領域が発現を最大にするのに重要であるこ とも明らかになっている。これらは、一般に、非コーディングＤＮＡ領域内のプ ロモーター領域の上流又は下流に見出される。必要であれば、ウィルス供給源か ら複製起点を得ることができる。しかしながら、染色体内への組み込みが、真核 細胞内でのＤＮＡ複製の共通のメカニズムである。今日では植物細胞が宿主とし て利用可能であり、ツバリン（ｎｏｐａｌｉｎｅ）ンンターゼプロモーター及び ポリアデニル化シグナル配列の如き植物細胞と適合性の制御配列（デピッカー（ Ｄｅｐｉｃｋｅｒ、　Ａ、）ら、　Ｊ、　Ｍｏ１．　Ａｐｐｌ、　Ｇｅｎ、　１ ：　５６１　（１９８２））が利用可能である。

用いる宿主細胞に依存して、かかる細胞に適切な標準的技術を用いて形質転換が 行われる。コーエン（Ｃｏｈｅｎ、　Ｎ、）によりＰｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、＾ｃ ａｄ、　Ｓｃｉ、　（ＵＳＡ）　６９：２１１０　（１９７２）に記載された塩 化カルシウムを用いるカルシウム処理、又はＭｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎ ｇ：　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｎｕａｌ　（１９８ｇ）　Ｃｏ１ｄ　 Ｓｐｒｆｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｐ窒■唐唐■L 載された方法を、原核細胞又は実質的な細胞壁バリヤーを含有する他の細胞に用 いることができよう。アグロバクテリウム会ツメファシェンス（ｔｕｍｅｆａｃ ｉｅｎｓ）（シャク（Ｓｈａｍ、　ＣＨ，）ら、　Ｇｅｎｅ、　２３：　３１５ 　（１９８３））での感染が一定の植物細胞に有用であると考えられる。かかる 細胞壁を持たない哺乳動物細胞については、グラハム（Ｇｒａｈａｍ）とジエン ・デルＥ　ｂ　（ｖａｎ　ｄｅｒ　Ｅｂ）、　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　５２：　５４ ６　（１９７８）のリン酸カルシウム沈殿法を用いることができる。ベクター内 に組み込まれた遺伝子を、例えば、風船カテーテル法を用いて血管壁内の細胞に 直接に導入することによって、細胞をｉｎ　ｖｉｖｏで形質転換することもでき る。１９９０年１０月１８日に発行したＷ０９０／１１７３４゜酵母への形質転 換は、ジエン・ゾリンゲン（Ｖａｎ　Ｓｏｌｉｎｇｅｎ、　Ｐ、）ら、　Ｊ、　 Ｂａｃｔ。

１３０：　９４６　（１９７７）及びフシアオ（Ｈｓｉａｏ、　Ｃ，Ｌ、）ら、 　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ。

（ＵＳＡ）　７６：　３８２９　（１９７９）の方法に従って行うことができる 。

ｃＤＮＡ又はゲノミックライブラリーは、コロニーハイブリダイゼーション操作 を用いてスクリーニングすることができる。一般に、各マイクロタイタープレー トを二重にしたニトロセルロースフィルターペーパー（ＳＡＳタイプＢＡ−８５ ）上に写し、５０μｇ／ｍｌアンピシリンを含有するし寒天上でコロニーを３７ ℃で１４〜１６時間生育させる。これらコロニーを溶解して５００ｍＭＮａＯＨ ，１，５Ｍ　ＮａＣｌで５分間の連続処理によりＤＮＡをこのフィルターに固定 し、モして５×標準食塩加クエン酸（Ｓ　Ｓ　Ｃ）で１回当たり５分間で２回洗 浄する。フィルターを風乾して８０℃で２時間焼（。二重にしたフィルターをフ ィルター当たり１０ｍ１のＤＮＡハイブリダイゼーション緩衝液（５ＸＳＳＣ， ｐＨ７，０５Ｘデンハルツ溶液（ポリビニルピロリジン、＋フィコール及びウシ 血清アルブミン＝Ｉ×＝各々の０，０２％）、ｐＨ７，０の５０ｍＭリン酸ナト リウム緩衝液、０．０２％ＳＤＳ、２０μｇ／ｍｌポリＵ１及び５０μｇ／ｍｌ 変性サケ精子ＤＮＡ）で４２℃で６〜８時間ハイブリダイズする。

サンプルを目的のストリンジエンシーに依存する条件下でキナーゼ処理したプロ ーブとハイブリダイズさせてもよい。典型的な適度にストリンジェントな条件は 、プローブを含有する１〜５ｍ１／フイルターのＤＮＡハイブリダイゼーション 緩衝液で４２℃で２４〜３６時間である。より高いストリンジエンシーについて は、より高温かつより短時間にする。一般に、フィルターを２ｘＳＳＣ，０，２ ％ＳＤＳ及びｐＨ７，０の５０ｍＭリン酸す）・リウム緩衝液で１回当たり３０ 分間で３７℃で４回洗浄し、次いで２ＸＳＳＣ及び０．２％ＳＤＳで２回洗浄し 、風乾し、そして−７０℃で２〜３日間日間−オートラジオグラフィーする。

目的のコーディング及び制御配列を含有する適するベクターの構築は、当該技術 分野で十分に理解される標準的な連結及び制限技術を用いる。単離したプラスミ ド、ＤＮＡ配列、又は合成オリゴヌクレオチドを切断し、適合するように調製し 、そして目的の形に再連結する。

部位特異的ＤＮＡ切断は、当該技術分野で広く理解されている条件下で、ＤＮＡ を適する単一の制限酵素（又は複数の酵素）で処理することにより行うことがで きる。なお、個々の条件は、これら市販の制限酵素のメーカーにより特定されて いる。例えば、ニューイングランド・バイオラボズ（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　 Ｂｉｏｌａｂｓ）の製品カタログを参照のこと。一般に、約１μｇのプラスミド 又はＤＮＡ配列を約２０μｌの緩衝溶液中で１単位の酵素により切断する。約３ ７℃で約１〜２時間のインキュベーション時間で行うことができるがこれを変動 させてもよい。各インキュベーション後は、フェノール／クロロホルムで抽出す ることによりタンパク賃を除いてもよく、そして続いてエーテル抽出を行っても よ（、そしてエタノールでの沈殿後にセファデックスＧ−５スピンカラムにかけ ることによりて、水性画分から核酸を回収することができる。所望により、切断 したフラグメントのサイズセパレーションを、標準的技術を用いるポリアクリル アミドゲル又はアガロースゲル電気泳動によって行ってもよい。サイズセパレー ションの一般的説明は、Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙ＋ｗｏｌｏｇｙ　（１ ９８０）　６５：　４９９−５６０に見出すことができる。

制限切断フラグメントは、４種のデオキシヌクレオチドトリホスフェート（ｄＮ ＴＰ）存在下、２０〜２５℃で約１５〜２５分間、５０ｍＭ）リスｐＨ７，５゜ ５０ｍＭ　ＮａＣｌ、６ｍＭ　ＭｇＣ１，，６ｍＭ　ＤＤＴ及び５〜１０μＭｄ ＮＴＰ中で大腸菌ＤＮＡポリメラーゼＩ　（Ｉｌｅｎｏｗ）ラージフラグメント で処理することによってプラントエンド型にすることができる。このＫｌｅｎｏ ｖフラグメントは、たとえ４種のｄＮＴＰが存在していても、５°粘着末端を充 填するが張り出した３°一本鎖を砕いてしまう。所望により、粘着末端の性質に より決まる限度内でそれらｄＮＴＰのうちのただ１種だけを又は選択されたｄＮ ＴＰを供給することによって、選択的修復を行うことができる。Ｋｌｅｎｏｗで 処理した後、この混合液をフェノール／クロロホルムで抽出し、エタノールで沈 殿させた後にセファデックスＧ−５スピンカラムにかける。適切な条件下で８１ ヌクレアーゼで処理するとあらゆる一本鎖部分の加水分解が起こる。

合成オリゴヌクレオチドは、メチウシ（Ｍｅｔｔｅｕｃｃｉ）ら、　Ｊ、　Ａｔ 　Ｃｈｅｔ　Ｓｏｃ、１０３：　３１８５　（１９８１）のトリエステル法によ り、又は市販の自動オリゴヌクレオチド合成装置を用いて調製することができる 。アニーリング前の又は標識化のための一本鎖のキナーゼ処理は、過剰の、例え ば、０．１ナノモルの基質に対して約１０単位のポリヌクレオチドキナーゼを用 いて、５０ｍＭトリス、ｐＨ７，５，１０ｍＭ　ＭｇＣＩｔ、５ｍＭジチオスレ イトール、１〜２ｍＭ　ＡＴＰ、１．７ピコモルのｒ”Ｐ−ＡＴＰ　（２，９ｍ Ｃ１／ミリモル）、０．１ｍＭスペルミジン、０．１ｍＭＥＤＴＡの存在下で行 われる。

連結は１５〜３０μ！容量で次の標準的条件下及び温度：２０ｍＭトリス−ＣＩ 　ｐＨ７，５，１０ｍＭ　ＭｇＣｈ、１０ｍＭ　ＤＴＴ、３３μｇ／ｍｌ　ＧＳ Ａ。

１０〜５０ｍＭ　ＮａＣｌ、及び（“粘着末端”の連結には）０℃で４０．ＣＺ ＭＡＴ　Ｐ、　０．０１〜０．０２　（Ｖｅｉｓｓ）単位Ｔ４ＤＮＡリガーゼ又 は（“プラントエンド１の連結には）１４℃で１　ｍＭ　ＡＴ　Ｐ、　０．３〜 ０．６　（Ｗｅｉｓｓ）単位Ｔ４ＤＮＡリガーゼのいずれかで行うことができる 。分子間“粘着末端”連結は、通常、３３〜１００μｇ／ｍｌ全ＤＮＡ濃度（５ 〜１００ｍＭ全末端濃度）で行われる。

分子間プラントエンド連結は、（通常は１０〜３０倍モル過剰のリンカ−を用い て）１ｄＭ全末端濃度で行われる。

“ベクターフラグメント”を用いるベクター構築では、５°ホスフエートを除去 するため及びベクターの再連結を防止するために、ベクターフラグメントを細菌 性アルカリ性ホスファターゼ（ＢＡＰ）で処理してもよい。ＢＡＰ消化は、ｐＨ ８で約１５０ｍＭのトリス中、Ｎａ”及びＭ　ｇ２“の存在下、ベクター構築当 たり約１単位のＢＡＰを用いて６０℃で約１時間行うことができる。核酸フラグ メントを回収するために、この試料をフェノール／クロロホルムで抽出し、そし てエタノール沈殿させ、セファデックスＧ−５スピンカラムにかけることによっ て脱塩する。また、不要なフラグメントの追加の制限酵素消化により二重消化さ れたベクターにおける再連結を防止してもよい。

配列修飾を要するｃＤＮＡ又はゲノミックＤＮＡから誘導したベクターの部分に は、部位特異的プライマー定方向突然変異誘発法（ｓｉｔｅ　５ｐｅｃｉｆｉｃ 　ｐｒｉｍｅｒ　ｄｉｒｅｃｔｅｄ　ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）を用いることが できる。これは、目的の突然変異に相当する限られたミス対合を除いては、突然 変異誘発されるべき一本鎖ファージＤＮＡに相補的なプライマー合成オリゴヌク レオチドを用いて行われる。簡単に言えば、そのファージに相補的な鎖の直接合 成にこの合成オリゴヌクレオチドをプライマーとして用い、得られた二本鎖ＤＮ Ａをファージ支持宿主細菌（ｐｈａｇｅ−ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ　ｈｏｓｔ　ｂ ａｃｔｅｒｉｕ＋ｍ）の中に形質転換するのである。形質転換した細菌の培養液 を上層寒天（ｔｏｐ　ａｇａｒ）中にプレートし、ファージを収容している単細 胞からプラークを形成させる。

理論的には、新プラークの５０％がこの突然変異型を一本鎖として有するファー ジを含有し、５０％がもとの配列を有するであろう。得られたプラークをキナー ゼ処理した合成プライマーと、正確な対合のハイブリダイゼーションは可能であ るかもとの鎖とのミス対合が十分にハイブリダイゼーションを阻止できる温度で ハイブリダイズさせることができる。次いで、このプローブとハイブリダイズす るプラークを採取し、培養し、そしてそのＤＮＡを回収する。

プラスミド構築のための連結の正確さは、まず、その連結混合物で適当な宿主を 形質転換することにより確認することができる。うまくいった形質転換体を、ア ンピシリン、テトラサイクリン又は他の抗生物質耐性により又は当該技術分野で 理解されているようにプラスミド構築の様式に依存して他のマーカーを用いて選 択する。次いで、この形質転換体からのプラスミドをフレウェル（Ｃｌｅｗｅｌ ｌ、　Ｄ。

Ｂ、）ら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　（ＵＳＡ）　６ ２：　１１５９　（１９６９）に従って調製することができる。これをタロラム フェニコール増幅後に行うのは任意である（フレウェル、　Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒ ｉｏｌ、、　１１０：　６６７０　（１９７２））　、単離したＤＮＡを切断に よって分析し及び／又はメリック（Ｍｅｓｓｉｎｇ）ら、　Ｆ、　５ｕｐｐ、　 Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、　９：　３０９　（１９８１）に更に詳 しく記載されているサンガー（Ｓａｎｇｅｒ、　Ｆ、）ら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａ ｔｌ、Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、　（ＵＳＡ）　７４：　５４６３　（１９７７）のジデオキシ法により 又はマキサム（ｌｌａｘａｍ）ら。

Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　６５：　４９９　（１９８０） の方法により配列決定する。

抗微生物又は抗炎症剤として用いるには、消化器デフエンジンペプチドを、有効 量の消化器デフエンジンペプチドと当該技術分野で知られているキャリヤーの如 き有用な無毒キャリヤーを含有する医薬組成物に製剤することができる。この組 成物は、組成物の形態に適した投与ルートにより投与することができる。かかる 組成物は、経口、静脈内、皮下又は筋肉内で投与できる、例えば、溶液、懸濁液 、乳濁液等を含む通常の液体製剤の形である。この組成物は、抗微生物又は抗炎 症有効量で投与することができる。なお、これは患者、年齢、体重、及び体調に 依存するであろう。

更に、微生物感染症又は消化器系炎症の治療には、消化器デフエンジンペプチド の体内発現を細胞内で誘発することができる。消化器デフエンジンペプチドの体 内産生を、これらペプチドを発現する細胞を消化器デフエンジンペプチドをコー ドする遺伝子を調節する物質と接触させることによって変調させることができる 。特に、消化器デフエンジンペプチドをコードするＤＮＡに結合するか又は別の やり方としてこのＤＮＡの正規の転写を変調する物質、又は消化器デフエンジン ペプチドをコードするｍＲＮＡに結合するか又は別のやり方としてこのｍＲＮＡ の翻訳を阻害する物質が、消化器デフエンジンの産生を変調するのに有用である 。ポリペプチドの如き効果的な物質を同定又はデザインする方法は、当業者に知 られている。好ましくは、かかる物質は、配列番号：１、配列番号＝４及び／又 は配列番号：６で定義した核酸配列のうちの１つの少なくとも一部分に結合する 。より好ましくは、ポリペプチドの如き物質が、配列番号＝１のシス作用性制御 要素に結合する。

一方、先に説明したように、消化器デフエンジンペプチドの発現のために選択さ れる細胞をｉｎ　ｖｉｔｒｏ又はｉｎ　ｖｉｖｏで消化器デフエンジンペプチド ｃＤＮＡ又はゲノミック配列の一部分を含むＤＮＡで形質転換してもよい。ｉｎ 　ｖｉｔｒｏで形質転換した細胞を、細胞移植の如き当業者によく知られた方法 によって哺乳動物に導入してもよい。ｉｎ　ｖｉｖｏ形質転換も、先に記載した 組換えベクターの導入によりて行うことができる。１９９０年１０月１８日に発 行されたＷＯ９０／１１７３４゜ 消化器デフエンジンペプチドは、管腔の微生物学的フロラのレベルを調節で舎る と考えられる。遠位の回腸の近傍のバネート細胞の密度が高いことが、腸の微生 物学的フロラの豊富さを結腸までに制限するバリヤーに貢献しているかも知れな い。第２に、消化器デフエンジンペプチドは、微生物侵入からの粘膜の防衛に重 要であるといえる。大した炎症がない小腸内で有効な宿主防衛系は絨毛上皮の完 全性を保存し、それによって栄養分の吸収という重要な機能を維持するだろう。

消化器デフエンジンペプチドは、そのような防衛に貢献することができる。しか しながら、ある場合には、腸管に消化器デフエンジンペプチドが殆ど存在せず、 その上皮の微生物感染症、過敏症及び炎症をもたらす。他の場合には、天然又は 人口の刺激に応答して、多過ぎる消化器デフエンジンペプチドが不適切に産生さ れ得る。消化管の上皮は、デフエンジンペプチドの産生過剰に応答して炎症を起 こし得る。かくして、下痢、炎症性腸疾患、壊死性全腸炎及び胃潰瘍疾患の如き 障害が、これら消化器デフエンジンペプチドの産生不足又は産生過剰の結果とし て起こり得る。消化管の障害を受けた又は異常な状態は、哺乳動物の消化管から 採取したサンプル中に存在するデフエンジンペプチド又はデフエンジンペプチド をコードするｍＲＮＡの量を測定し、そして正常な哺乳動物消化管内に存在する ペプチド又はｍＲＮＡの量と比較することによって診断することができる。デフ エンジンペプチド又はデフエンジンペプチドをコードするｍＲＮＡの異常な量は 、微生物感染症又は炎症の如き消化器系障害の可能性の指標となる。

更には、患者の下痢、炎症性腸疾患、壊死性全腸炎、及び胃潰瘍疾患の如き消化 器系障害へのかかり易さを、本発明の方法によって予測することができる。これ ら方法は、前記ヒト患者からのＤＮＡ含有試験サンプルを供給する工程を含む。

血液又は組織サンプルの如き適切な試験サンプルは当業者に周知である。ＤＮＡ 含有試験サンプルからのＤＮＡを、配列番号：１、配列番号：４又は配列番号＝ ５で定義した配列の如き選択したデフエンジン配列の上流部分に相補的な配列を 有する上流プローブとその選んだデフエンジン配列の下流部分に相補的な下流プ ローブを用いて、ムリス（Ｍｕｌｌｉｓ）に発行された米国特許第４，３８６． ２０２号に記載されたポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による如き当該技術分野 で知られた方法により増幅することができる。本発明の幾つかの好ましい態様に おいては、配列番号：４８で定義した配列を有する上流プローブと配列番号：３ ９で定義した配列を有する下流プローブを用いる。“上流”という用語は、核酸 配列の５゜又は３°末端に関してＤＮＡ領域の位置のことを意味している。５° 側の領域が、当業者により上流であると言われている。同じく、下流は、核酸配 列の３″末端におけるＤＮＡ領域の位置のことを意味している。ここで用いられ る相補的という用語は、ワトソン・クリック塩基対合の結果として生じる安定な 二重体形成のことをいう。プローブの長さの如き幾つかのパラメーターは選択し た増幅方法に依存して変動してもよいが、最適条件の決定は実施者の熟練の範囲 内のものであることが、当業者によって理解されるべきである。そのあと、当該 技術分野で既知の一定範囲の方法により、増幅したＤＮＡを正常サンプルからの ＤＮＡと比較して、正常ＤＮＡに比べた増幅ＤＮＡの１又は２以上の突然変異を 同定することができ、それによって、突然変異をその患者が消化器系障害にかか る高い可能性を有しているという指標にする。突然変異は、塩基置換、塩基欠失 又は塩基付加の如き、正常な又は野生型の核酸デフエンジン配列に存在しない核 酸配列のあらゆる逸脱型であってもよい。

本発明の１態様においては、検出できるように標識された核酸プローブを試験サ ンプル又は試験サンプルから増幅したＤＮＡとハイブリダイズ条件下で接触させ てもよい。このプローブは、特に消化器系障害にかかる可能性が高いことに関係 する共通の突然変異を保持することが知られているか又は推測される領域の野生 型デフエンジン配列に実質的に相補的であるようにデザインされるべきである。

例えば、プローブは、配列番号：１、配列番号：４及び配列番号＝５で定義した デフエンノン配列の少なくとも一部分に実質的に相補的であってもよい。検出で きるように標識されたプローブと試験サンプルとのハイブリダイゼーションは、 当業者にとって明らかであろうハイブリダイゼーション条件下で起こる。例えば 、５０％ホルムアミド、０，１ｘＳＳＣ，０，１％ＳＤＳ、３ｘＳＳＣ，１％Ｓ ＤＳ。

５％硫酸デキストラン、変性ニシン精子ＤＮＡ（１００μｇ／ｍｌ）で４２℃で ハイブリダイゼーションを行ってもよい。また、１％ＳＤＳ、ＬＭ　ＮａＣｌ及 び１０％硫酸デキストランで６５℃でハイブリダイゼーションを行ってもよい。

もちろん、当業者には明らかであろうが、ハイブリダイゼーションを最大にする ためにこれら条件のパラメーターを変更してもよい。選択した野生型デフエンジ ン配列に実質的に相補的である検出できるように標識されたプローブが、ハイブ リダイズ条件下で野生型デフエンジン配列にハイブリダイズしてシグナルが検出 されるだろう。しかしながら、ハイブリダイゼーションが存在しなければ如何な るシグナルも検出されないだろう。ハイブリダイゼーションの不存在は、そのデ フエンジン遺伝子が突然変異を保持している可能性があること及びその患者が消 化器系障害にかかり得る高い可能性があることを診断するものである。

患者の消化器系障害へのかかり易さを診断するために、増幅ＤＮＡを正常ＤＮＡ と比較するのに用いることができるなお池の方法には、ギレンステン（Ｇｙｌｌ ｅｎｓｔｅｎ）とエールリッヒ（Ｅｒｌｉｃｈ）、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃ ａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８５：　７６５２−７６５６（１９８ｇ）　；イニ ス（Ｉｎｎｉｓ）ら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｅｔ、　ＵＳＡ 　８５：　９４３６−９４４０　（１X８ ８）：マクブライド（ＭｃＢｒｉｄｅ）ら、　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｃｈｅｔ　３ ５：　２１９６−２２０１　（１９８９）　；オオハラら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａ ｔｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８６：　５６７３−５６７７　（１９８９ ）　；ナカマエら、　Ｐｒ。

ｃ、　Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　１６：　９９４７−９９５９ 　（１９８８）　；ストフレット（Ｓｔｏｆｌｅｔ）ら。

５ｃｉｅｎｃｅ　２３９：　４９１−４９４　（１９８ｇ）及びショパルター（ Ｓｃｈｏｖａｌｔｅｒ）ら、　Ｇｅｎｏｍｉｃｓ５：　２３−３２　（１９９０ ）により記載された方法に手を加えた方法による如き直接配列決定法が含まれる 。チェンバレン（Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎ）ら、　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ 　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　１６：　１１１４１−１１１５６　（１９８８）及びチェ ンバレンら、　ＰＣＲｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：＾Ｇｕｉｄｅ　ｔｏ麗ｅｔｈ。

ｄｓ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、 　０ｒｌａｎｄｏ、　ＦＬ　１９９０）　ｐｐ、　２７２−Q８１に記 載された如き方法による多重ＰＣＲもかかる診断に有用であるといえる。患者の ＤＮＡの突然変異は、増幅ＤＮＡ／正常ＤＮＡへテロ二本鎖を、ＲＮアーゼＡ切 断（マイヤース（Ｍｙｅｒｓ）ら、　５ｃｉｅｎｃｅ　２３０：　１２４２−１ ２４６　（１９８５））の如き酵素的切断、又はヒドロキシルアミンと四酸化オ スミウム（ＨＯＴ）による如き化学的切断（コツトン（Ｃｏｔｔｏｎ）ら、　Ｐ ｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ８５：　４３９７−４４０ １　（１９８８））に付することによっても検出することができる。患者のデフ エンジンＤＮＡ配列内の突然変異を検出するのに用いることができる追加の方法 には、変性勾配ゲル電気泳動法（ＤＧＧＥ）（？イヤースら、　Ｎａｔｕｒｅ　 ３１３：　４９５−４９８（１９８５））及び温度勾配ゲル電気泳動法（ローゼ ンパーム（Ｒｏｓｅｎｂａｕ−）とリースナ−（の核酸及びタンパク質中心施設 （Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄ　ａｎｄ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｃｏｒｅ　Ｆａｃｉｌ ｉｔｙ）により作られたものであった。オリゴヌクレオチドプローブは、γ−（ ”Ｐ）　ＡＴＰ　（３００Ｃｉ　／ｍｅａｌ、デュポン、ウィルミントン、ＤＥ ）とＴ４ポリヌクレオチドキナーゼ（ストラタジｘ　ン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ ）、　ラジョラ、ＣＡ）を用いて、約１１０７ＤＰ／ｐｍｏｌの比活性に末端標 識した。二本鎖ＤＮＡプローブは、α−（”ＰｌｄＣＴＰ　（８００Ｃｉ／ｓｇ ＋ｏｌ、デュポン）゛とＴ７ＤＮＡポリメラーゼ（υ、Ｓ、バイオケミカルズ、 クリーブランド、ＯＨ）を用いて、又は蛍光標識したプライマーオリゴヌクレオ チドとＴａｑＤＮＡポリメラーゼ（アプライド・バイオケミカル・システムズ、 フォスターシティ、ＣＡ）での熱環化法を用いて、約１１０９ＤＰ／μｇの比活 性に標識した。ガラスミルク吸着（Ｂ　ｉ　ｏ　１０１．ラジョラ、ＣＡ）によ り精製したＰＣＲ産物は、標準的フィル・イン反応器（ｆｉｌｌ−ｉｎｒｅａｃ ｔｉｏｎ）内でＴ４ポリメラーゼ（ファルマシア、ビスカタウエイ、ＮＪ）と共 にインキュベートし、次いで線状のプラントエンド型プラスミドＤＮＡ　（ブル ースクリプト（Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ）、ストラタジエン）への連結によってサ ブクローン化した。配列データは、ＤＮＡ及びタンパク質分析ソフトウニアーマ ツクベクター０１ａｃＶｅｃｔ。

ｒ）（ＩＢｌ、ニューヘイブン、ＣＴ）を用いて分析した。

実施例１ プローブ構築 ウサギデフエンジン１及び２のシグナル配列をコードするヌクレオチド（ガンツ ら、　Ｊ、　ｌｌａｎｎ１．１４３：　１３５８−１３６５　（１９８９））は 、ヒトデフェンシン１及び３のそれと９５％同一である（５４１５７同一ヌクレ オチド、図１）（ダハ−ら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｅｔ、　 ＵＳＡ８５：　７３２７−７３３１　（１９８８）　；マースら、　Ｂｌｏｏｄ 　７１：　１７P３− １９　（１９８ｇ）　；ビープマンら、　Ｌｅｕｋｅｍｉａ　３：　２２７−２ ３４　（１９８９））、このヌクレオチド同一性は、他の領域では低下して、そ の成熟ペプチドをコードするセグメントでは低いままである（５３％ヌクレオチ ド同一性）。これら２つのｃＤＮＡ配列間の全体の同一性は平均で約６２％とな る。我々は、同一である領域内の配列に基づいて、配列ＣＴＴＧＣＴＧＣＣＡＴ ＴＣＴＣＣＴＧＧＴＧＧＣＣＣＴＧＣＡＧＧＣＣＣＡＧＧＣＴＧＡＧＣ（Ｄ５’ オリゴ；配列番号＝３５）を有する４３塩基オリゴヌクレオチドをデザインした （図１）。我々は、ヒトデフェンシン１ｃＤＮＡ　（ダハ−ら、　Ｐｒｏｃ、　 Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８５：　７３２７−７３３１　（１ ９８８））の残基−２９から＋１８４（推定上の開始コドンの最初のヌクレオチ ドに相関させて番号付けをした）に及ぶ二本鎖プローブも構築した。ＣＢ５８７ のＤＮＡ配列の約半分は高度に保存された領域からなり、あと半分はヒトデフェ ンシン１及び３に対してより特異的である。ライスコンシン大学ジエネティック ス分析ソフトウェア−（デベロークス（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ）ら、　Ｎｕｃｌ　Ａ ｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ　１２：　３８７−３９５　（１９８４））を用いてジエンバ ンクデータベース（リリース６０．０）を検索したが、既知のデフエンジン以外 にこれらプローブと有意な類似性を有する配列は見出せなかった。

更に次のプローブを構築した：ＨＮＰ１９ｓ　（５°未翻訳領域）：ＣＣＣＴＧ ＣＣＴＡＧＣＴＡＧＡＧＧＡＴＴＴ　（配列番号：　４９）　、ＨＮＰ３６７ａ 　（３’未翻訳領域）：ＴＴＣＣＣＴＧＴＡＧＣＴＣＴＣＡＡＡＧＣＡＡＡＴ　 （配列番号：３７）、及びＨＮＰ３１７ｓ　（：Ｉ−ディング領域）：ＧＡＧＡ ＣＣＣＧＴＡＡＧＡＣＧＡＣＧＡＣＴ　（配列番号＝３６）。

プローブは、自動ＤＮＡ合成装置（アプライド・バイオシステムズ　モデル３８ ０Ｂ）で構築した。

実施例２ デフエンジンファミリー多様性を検出するためのＤＮＡ消化物のサザーンプロッ ト分析 供給業者の推奨するところに従って、ゲノミックＤＮＡを制限酵素で完全に消化 した。ＤＮＡサンプルをアガロースゲル電気泳動により大きさ毎に分画し、標準 的技術を用いてナイロン膜にプロットした（リード（Ｒｅｅｄ）とマーン（ｌｌ ａｎｎ）。

Ｎｕｃｌ、＾ｃｉｄｓ　Ｒｅｓ、　１３：　７２０７−７２２１　（１９８５） 　：サムブルーフ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら、　１ｌｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎ ｉｎｇ：　ａ　１ａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｍａｎｎｕａＬ　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎ ｇ　Ｈａｒｂｏｒ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐ窒奄獅■@Ｈａｒｂ ｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ　（１９８９））　ｏ　（”Ｐ）　５ °末端標識オリゴヌクレオチドプローブＤ５’オリゴ（配列番号：３５）、ＨＮ Ｐ１９ｓ　（配列番号：４９）、ＨＮＰ３６７ａ　（配列番号：３７）及びＨＮ Ｐ３１７ｓ　（配列番号：３６）とのハイブリダイゼーションを２０％ホルムア ミド、５ＸＳＳＣ，ｌｘデンハルツ及び１％ＳＤＳ中で４２℃で行った。二本鎖 プローブＣＢ５８７とｐｓ　Ｉ　２５−３’Ｍｂｏ２をランダムプライマー合成 法によって標識し、２５％（ＣＢ５８７）又は５０％（ｐＳＩ２５−３゛Ｍｂ　 ｏ　２）ホルムアミド、５ｘＳＳＣ，ＬＸＸシンルッ及び１％ＳＤＳ中で４２℃ でハイブリダイズした。これらプロットを２ＸＳＳＣ中で室温で１時間洗浄し、 次いで２ＸＳＳＣ中で３０分間５５℃（ＨＮＰ１９ｓ、ＨＮＰ３６７ａ、ＨＮＰ ３１７ｓ）　、５８℃（ＣＢ５８７；配列番号：３８）、６０℃（Ｄ５゛オリゴ ）又は６３℃（Ｄ５′オリゴ）の高温で洗浄した。ｐＳＩ２５−３“Ｍｂｏ２と ハイブリダイズしたプロットについての最終の高ストリンジエンシー洗浄は、０ ．ｌＸ５ＳＣ中で６５℃で３０分間行った。次いで、その濡れたフィルターを、 クロネックス・ライトニング＋増感スクリーン（ＣｒｏｎｅｘＬｉｇｈｔｅｎｉ ｎｇ　Ｐｌｕｓ　ｉｎｔｅｎｓｉｆｙｉｎｇ　５ｃｒｅｅｎ）　（デュポン）の 存在下で一７０℃でオートラジオグラフィーに付した。０．５Ｍ　ＮａＯＨ／１ ．５Ｍ　ＮａＣｌ中で室温で２０〜４０分間インキュベートすることによってプ ロットからプローブを剥ぎ取り、中和し、次いで先行するシグナルの除去を実証 するためにフィルムに感光した。

Ｄ５°オリゴ多ハイブリダイゼーションで探り当てたヒトＤＮＡ消化物のサザー ンプロットにおいて、類似の強度のバンドが４レーンの各々に認められ、５ａ１ −１及びＸｈｏ−１で消化したサンプルについて高分子量ＤＮＡへのハイブリダ イゼーションが認められた。これら２種の酵素の活性はＤＮＡのメチル化状態に 感受性であるので、このサンプル中の高度にメチル化されたＤＮＡ領域にこのプ ローブがハイブリダイズしたことを示唆している。最終洗浄条件が２ＸＳＳＣ中 で６３℃である場合に、匹敵する結果が見られる。引き続いてプロットからプロ ーブを剥ぎ取ってＣＢ５８７又はＨＮＰ１９ｓと再ハイブリダイズした場合にも 定性的に類似の結果が認められた。これら観察結果とは対照的に、ヒトデフェン シン１及び３ｃＤＮＡの３゛−未翻訳領域内の配列に対応するＨＮＰ３６７ａプ ローブに同じプロットをハイブリダイズさせると、類似のストリンジエンシーの 条件下で、これら制限消化物中に単一バンドを生じた。ハイブリダイゼーション の単一バンドは、ヒトデフェンシン１及び３ｃＤＮＡのコーディング領域の一部 分からのＨＮＰ３１７ｓプローブで見られた。これら後者のコントロール実験は 、この一連の実験で用いたストリンジエンシーの条件がゲラミックＤＮＡ内で高 度に相補的な配列を同定するのに適切なものであることを示した。ＨｉｎｄＩＩ ■で完全に消化してＣＢ５８７でプローブ処理した７種の動物の各々からのＤＮ Ａのサザーンプロットで、幾つかの強いバンドがヒト及びサルの両方に見られ、 その他の全ての種でより弱いバンドが見られた。非常に弱いバンドがマウスのレ ーンで見られた。これら結果は、ヒトＤＮＡが、デフエンジンｍＲＮＡの保存さ れた部分にかなりの類似性を有する多数の配列を含有しており、そしてその配列 の保存が種間に及んでいることを示している。用いた条件は、ハイブリダイゼー ションについては２５％ホルムアミド１５ＸＳＳＣ中で４２℃であり、最終洗浄 については２ＸＳＳＣ中で５８℃であった。

実施例３ 未増幅ヒトゲノミックライブラリーのスクリーニングコロニー／プラーク・スク リーン・フィルター（デュポン）を用いてリフトを作り、これらフィルターを標 準的技術を用いてスクリーニングした（サムブルーフら、　１ｌｏｌｅｃｕｌａ ｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：　ａ　１ａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｍａｎｎｕａｌ　Ｃｏ１ｄ 　Ｓｐｒｉｎｇ　ＨａｒｂｏｒA　Ｃｏ１ｄ　Ｓ ｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ　（１９８９） ）　ｏアニーリング及び洗浄の標準的条件（サムブル−クら、輩ｏ１ｅｃｕｌａ ｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：　ａ　１ａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｍａｎｎｕａｌ　Ｃｏ１ｄ 　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌ ａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ　（１９８９））に手を加えた：ハイブリダイ ゼーションについては４２℃、２０％ホルムアミド１５　Ｘ　Ｓ　Ｓ　Ｃ，及び 高ストリンジエンシー洗浄については５５℃、２ＸＳＳＣ０３〜４ラウンドの精 製を通して次第に低密度にプラークを採取した。ファージＤＮＡをラムダーソル ブ（Ｌａｌ！ｂｄａ−ｓｏｒｂ）　（プロメガ（Ｐｒｏ＊ｅｇａ）、　７ジソン 、Ｗｌ）を用いて単離した。ファージ挿入ＤＮＡをブルースクリプトプラスミド ＤＮＡの多クローニング部位に連結することによってサブクローン化した。エキ ソヌクレアーゼＩＩＩ　／ヤエナリヌクレアーゼ試薬キット（ストラタジェン） を供給業者の使用手順に従って用いて、配列分析のためにプラスミド挿入ＤＮＡ に欠失を繰り込んだ。ＤＮＡの両方の鎖から報告された全ての配列が得られた。

未増幅ヒトゲノミックライブラリー（ブダルフ０１．Ｂｕｄａｒｆ）及びエマニ エル（Ｂ、　Ｅ閲ａｎｕｅｌ）両博士から供与して貰った）（マクデルミド（ｌ ｃＤｅｒａ＋ｉｄ）ら、　Ｇｅｎ０■ｉｃｓ　５：　１−８　（１９８９））を 実施例２に記載したようにしてＤ５°オリゴでスクリーニングした。個々のクロ ーンが２Ｘ１０’／１５０ｍｍプレートの密度の約４のゲノム同等物から、比較 的強い３５シグナルが一重のフィルターで得られた。２０シグナルを二次スクリ ーニングに取り、これらシグナルのうちの１２が陽性を維持したのでプラーク精 製した。これら１２クローンを、制限酵素、ハイブリダイゼーション及び部分的 配列分析を組み合わせることによって類別した。１２全てのゲノミッククローン は、１２〜１５ｋＢの範囲内の挿入片を有し、多くのものは、デフエンジン関連 配列を含有する１を越える制限フラグメントを含有した。

オリゴヌクレオチドのパネルへのハイブリダイゼーション特性及び部分的配列分 析は、これらクローンのうちの５が骨髄由来デフエンジン１及び３に対応する遺 伝子と一致する配列を含有することを示した。これらクローンをひとまず別にし た。他の幾つかのクローンの特徴を部分的に明らかにしたところ、それらもデフ エンジン配列を含有したことが明らかとなっている。１クローン、つまりＨＧ− ２を選んでその特徴を詳細に明らかにした。このクローン内のデフエンジン様配 列を含有するＥｃｏＲＩ制限フラグメントを単離して、そのヌクレオチド配列を 決定した（図２）。配列分析で、推定上のプレプロデフエンシン分子の数部分を コードするとみられる２つのオーブンリーディングフレームが明らかになりだ。

実施例４ デフエンジン遺伝子の組織発現を確認するためのＰＣＲ増幅ＰＣＲ増幅を記載さ れた標準的手順を用いて行った（サイキ（Ｓａｆｋｉ）ら、　５ｃｉｅｎｃｅ　 ２３９：　４８７−４９１）。初期変性は９４℃で行い；９４℃で１分、５５℃ で１分及び７２℃で２分サイクルすることによって３５サイクルの増幅を行った 。ＰＣＲ鋳型として用いるｃＤＮＡのプールは、３〜５Ｘ１０’フアージを含有 するプレート溶解産物から調製した。用いた全ヒトｃＤＮＡライブラリーは、ベ イラー医科大学（Ｂａｙｌｏｒ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　５ｃｈｏｏｌ　ｏｆ　 Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）のチャン（Ｌ、　Ｃｈａｎ）からの寄贈品として入手した小 腸からのものを除いては、市販品（クローンチック（Ｃ１ｏｎｔｅｃｈ））であ る。デフエンジン５関連配列の増幅には、上流センスプライマーを１つのデフエ ンジン関連オーブンリーディングフレームから選び（ＨＮＰ６３Ｓ　：ＴＣＧＣ ＣＡＴＣＣＴＴＧＣＴＧＣＣＡＴＴ、配列番号：４８）、そして下流アンチセン スプライマーをそれとは池のものから選んだ（ＨＳＩ２６１ａ：ＣＧＧＣＣＡＣ ＴＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＡＣ，配列番号＝３９）。これらプライマーは、その鋳 型がゲノミックＤＮＡである場合に、その増幅産物がｃＤＮＡのプール中の不純 物であり得るイントロンを含むように選んだ。図３Ａは、８組織からのｃＤＮＡ とゲノミックＤＮＡを鋳型として用いるＰＣＲ反応の結果を示す。

約１．、２　ｋ　ＢのバンドがゲラミックＤＮＡサンプル中に見られたが、これ はイントロンを跨いで増幅したことに一致する。２３０ヌクレオチドのバンドが 小腸サンプル中に見られた。その他のｃＤＮＡサンプル中にはバンドは見られな かった。

類似の結果がデフエンジン６関連配列の増幅後に見られた。

ｃＤＮＡ鋳型からのコントロール増幅では、α−チューブリン配列からのプライ マー対（ＨＴＵＢｓ　：ＧＡＴＴＧＧＣＡＡＴＧＣＣＴＧＣＴＧＧＧＡ；配列番 号：４０及びＨＴＵＢａ　：ＣＡＧＧＴＴＧＧＴＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＴ；配 列番号：４２）を用いた（コパン（Ｃｏｗａｎ）ら、　Ｍｏ１．　Ｃｅ１ｌ、　 Ｂｉｏｌ、　３：　１７３８−１７４５（１９８３））。この増幅は、全てのｃ ＤＮＡサンプルが増幅可能な鋳型を含有したことを示した（図３Ｂ）。

続いて、この増幅産物を高ストリンツエンシー下で推定上のエキマン２の殆どに 及ぶｐＳＩ２５−３’Ｍｂｏ２プローブにハイブリダイゼーションさせて、この 増幅ＤＮＡの真正さを確認したが、これは小１！１ｌｃＤＮＡブール内にこの配 列が相当豊富であることを示唆したく図３Ｃ）。長く感光すると、ファロビウス 管と胎盤中にあるシグナルが出てくる。類似の結果がデフエンシン６について認 められた。ヒトデフェンシン１及び３ｃＤＮＡの配列からの同じ（デザインした プライマー対を用いた第２コントロール実験で、骨髄ｃＤＮＡ及びゲノミツクＤ ＮＡ鋳型から強い臭化エチジウム染色性バンドが生じたが、小腸及び他のｃＤＮ Ａからは生じなかった。

実施例５ ｃＤＮＡクローニング 我々は、ヒト小腸ライブラリーの２．５Ｘ１０’　２ｃＤＮＡクローンをＤ５° オリゴテスクリーニングした（チェノ（Ｃｈｅｎ）ら、　５ｃｉｅｎｃｅ　２３ ８：　３６３−３６６　（１９８７））（ベイラー大学のローレンス・チャン博 士の寄贈品）。我々は、−次スクリーニングで４０の二重シグナルを認めた。３ ラウンドのプラーク精製及びファージＤＮＡの単離を通して１２クローンを得た 。これらクローンのうち１０が、プローブＤ５’オリゴ及びＣＢ５８７と強くハ イブリダイズし、ハイブリダイゼーションパターンから、これら１０クローンに は２つのクラスのクローンがあることが明らかになった。図４Ａは、Ｄ５’オリ ゴでプローブ処理してから段々に高くなる温度で洗浄し７たときの各クラスの２ つの代表クローンについて見られるノ）イブリダイゼーションパターンを示す。

これら４クローンからの挿入片をサブクローン化し、両方向で完全に配列決定し た。配列分析は、クローン３４が５゛末端で更に９塩基伸長している（ヌクレオ チド−１９まで）ことを除いてはクローン２５と同一であること、及びクローン １４がクローン３０に同じような具合に重複していることを示した。図４Ｂは、 小腸クローンの各クラスの配列をそのプローブ、つまりＤ５’オリゴの配列と一 緒に整列させたものである。クローン１と２はこのオリゴヌクレオチドプローブ と正確に一致する配列を有し；クローン３と４は８５％同一であった。これら２ つのクラスのクローンのいずれもオープンリーディングフレームを有し、そして その推定アミノ酸配列は、それぞれが新規な推定上のプレプロデフエンシンをコ ードすることを示している。これらクローンの３°部分からのプローブを用いる 更なるハイブリダイゼーション実験は、これら１０の単離されたｃＤＮＡクロー ン間の異質性が２つのクラスに限られるらしいことを証明している。

実施例６ ＲＡＣＥ−ＰＣＲ このメツセージの５°−セグメントの追加のヌクレオチド配列を得るために、小 腸ｃＤＮＡのプールをｃＤＮＡ末端の急速増幅（ＲＡＣＥ）法を用いて増幅した 。このＲＡＣＥ−ＰＣＲ手順は、フローマン（Ｆｒｏｈｍａｎ）からの方法（フ ローマンら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　（ＵＳＡ）　 ８５：　８９９ｇ−９００２（１９８８））に手を加えたものであった。全ＲＮ Ａ（１０μｇ）及びポリｄＴプライマー（インビトロゲン（Ｉｎ　Ｖｉｔｒｏｇ ｅｎ）、サンディエゴ、ＣＡ）を逆転写工程に用いた。このＤＮＡ産物をｄＡＴ Ｐ及び末端基トランスフェラーゼで尾部を付加した。次いで、このＤＮＡ産物を 、上流プライマーとしてのＴ７ＲＡＣＥ　（ＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＴ ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴ、配列番号・４３）プライマー・リンカ−配列、 市販のＴ７オリゴヌクレオチド（ＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧ。

配列番号＝４４）及び下流プライマー、つまりこのｃＤＮＡの推定上のコーディ ング領域からのアンチセンスオリゴヌクレオチドであるＨ５Ｉ２２０ａ　（ＧＧ ＡＣＴＣＡＣＧＧＧＴＡＧＣＡＣＡＡＣ；配列番号＝４５）を、記載された方法 （フローマンら、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、（ＵＳＡ）　８ ５：　８９９８−９００２　（１９８８））に従ってＰＣＲプライマーとして用 いるＰＣＨにおいて鋳型として用いた。約２７０ヌクレオチドの広がったバンド が、臭化エチジウム染色により検出可能であった（データは示していない）。こ の増幅産物をプラスミドベクター内にサブクローン化して、メチオニンコドンま で伸長した３クローンを分析した。これらクローンのうち１つは、下流プライマ ーから伸長してヌクレオチド−１０で終止していたので、逆転写酵素の未熟終止 に該当するかも知れない。その他の２クローンの配列は同一で、下流プライマー からヌクレオチド−４０まで伸長していた。このプライマー伸長産物中のヌクレ オチド＋１７２から−４０までは、ＨＧ−２のゲノミック配列内の連続するヌク レオチド１５７０〜１３５９に対応する（図２）。

これら重複クローンからの混成ｃＤＮＡ配列を図４０に示し、ＲＡＣＥ−ＰＣＲ 研究から得られたヌクレオチドに下線を付した。この配列は、デフエンジン様プ レプロペプチドをコードする２８２ヌクレオチドのオープンリーディングフレー ムを有する。このｃＤＮＡの独特な３°部分は、サザーンプロット分析における ハイブリダイゼーションの単一バンドを検出しく図４Ｄ）、これはヒトゲノム内 のこの遺伝子のシグナルコピーと一致する。

実施例７ ノーザンプロツト分析 小腸及び他の幾つかのヒト組織からのＲＮＡサンプルを、このｃＤＮＡ配列から のオリゴヌクレオチドプローブ（Ｈ３ＩＡ３０９ａ）を用いてノーザンプロット 分析に付した（図５）。全ＲＮＡ　（クローンチック、パロアルト、ＣＡ）をホ ルムアルデヒド存在下でアガロースゲル電気泳動により分画し、毛細管法によっ てナイロン膜（ゼータバインド・キュノ社（Ｚｅｔａｂｉｎｄ、　Ｃｕｎｏ　Ｉ ｎｃ、）、メリデン。

ＣＴ）にプロットした（サムブルーフら、　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎ ｇ：　ａ　１ａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｅｒａｎｎｕａｌ　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ 　Ｈａｒｂｏｒ、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏ ｒｙ　Ｐｒｅｓｓ　（P９８９））。

並行するレーンにＲＮＡサイズスタンダード（ＢＲＬ）を泳動させた。ポリＡに 富りだＲＮＡを含有するフィルターを同じく調製した（クローンチック）。放射 標識したＤＮＡプローブを５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミド１５ｘＳＳＣ１５Ｘデ ンハルツ／１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ中でこの不動化したＲＮＡに３７℃でハイブリ ダイズさせ、１ｘｓｓｃ１０．１％ＳＤＳ中で５５℃で洗浄した。これは、ｉｎ 　５ｉｔＵハイブリダイゼ一シヨン手順（以下を参照のこと）で用いるストリン ジエンシーの条件と同じ条件である。これら実験で用いたオリゴヌクレオチドプ ローブは：５ＩＧ６８Ａ　（ＧＡＧＴＧＧＣＴＣＡＧＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＡ ＧＧＧＣＣＡＣＣＡＧＧＡＧＡＡＴＧＧＣＡＧＣＡＡＧ：配列番号：４１）、Ｈ ８ｌＡ２６２ｓ　（ＣＴＣＴＡＣＡＧＡＣＴＣＴＧＣＴＧＴＣＧＣＴＧＡＧＣＴ ＴＣＣＴＡＧＡＴＡＧＡＡＡＣＣＡＡＡＧＣＡ、配列番号＝４６）及びＨＳＩＡ ３０９ａ　（ＴＧＣＴＴＴＧＧＴＴＴＣＴＡＴＣＴＡＧＧＡＡＧＣＴＣＡＧＣＧ ＡＣＡＧＣＡＧＡＧＴＣＴＧＴＡＧＡＧ、配列番号：４７）であった。増感スク リーンでの一７０℃でのオートラジオグラフィー感光時間は、２〜１４日間であ った。０．ｌＸ５ＳＣ１０，１％ＳＤＳ中６５℃でのインキュベーションによっ てプロットからオリゴヌクレオチドプローブを剥ぎ取り、次いで先行するシグナ ルの除去を実証するためにフィルムに再感光した。

Ｈ３ＩＡ３０９ａプローブが、小腸ＲＮＡ内の約６００ヌクレオチドの豊富なメ ツセージを認識した（図５Ａ、１０μｇ全ＲＮＡ、３日間感光）。類似の結果が デフエンジン６プローブについて認められた。同じ実験条件下で、β−アクチン プローブへのハイブリダイゼーションにより証明されるように（図５Ｃ）これら レーン内に完全なＲＮＡが存在しているにも拘らず、膵臓、腎臓、骨格筋、肝臓 、肺、胎盤、脳又は心臓サンプルでは如何なるメツセージも検出されなかった（ 図５Ｂ、２μｇポリＡ　ＲＮＡ、１０日間感光）。やはり、類似の結果がデフエ ンジン６について認められた。シグナル配列オリゴヌクレオチドを用いるコント ロール実験は、非常によく似たストリンジエンシーの条件下で肺サンプル中にデ フエンジン関連ｍＲＮＡを示した（図５Ｄ）。この移動位置（約５５０ヌクレオ チド）においてずっと弱いシグナルが胎盤サンプルにおいても検出された。ヒト 肺組織におけるデフエンジン関連配列の存在は、デフエンジン１及び３のプロー ブを用いた先のノーザンプロット分析（ダハ−ら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、＾ ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳ＾８５１７３２７−７３３１　（１９８８））　、胎 児肺組織からの最近のタンパク質データ（ベイト？　ン（Ｂａｔｅｍａｎ）　ら 、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、　２６６：　７５２４−７５３０　（１９９ １））及びヒト肺ライブラリーからのＨＮＰ−１ｃＤＮＡのクローニングへと導 く我々の研究室における研究と一致するものである。

実施例８ ｉｎ　５ｉｔｕハイブリダイゼーシヨンデフエンジンメツセージの細胞局在性を ｉｎ　５ｉｔｕハイブリダイゼーシヨンによって確認した。成人腸粘膜の組織片 をセンス及びアンチセンス５ｓＳ−標識オリゴヌクレオチドでプローブ処理した 。成人回腸からの切片中の小腸陰窩の基底における上皮細胞中に、アンチセンス オリゴヌクレオチドプローブ、つまりＨ３ＩＡ３０９ａで強いシグナルが認めら れた。センスオリゴヌクレオチドプローブ、つまりＨ８ｌＡ２６２ｓを用いるか 、又はＨＳＩＡ３０８ａでのハイブリダイゼーションの前に切片を最初にリボヌ クレアーゼで処理した場合には、並行切片には何のシグナルも認められなかった 。コントロール実験により、センス及びアンチセンスオリゴヌクレオチドのいず れも、これら実験条件下でｐｓ　Ｉ　２５−３゜Ｍｂｏ２二本鎖プラスミドＤＮ Ａにハイブリダイズするのに等しく有効であることが証明された。同一ではない としても類似の形態学的特徴を有する陰窩細胞は、フロキシン−タートラジン（ ｐｈｌｏｘｉｎｅ−ｔａｒｔｒａｚｉｎｅ）、パネート細胞を検出するのに普通 に用いられる組織化学的染色材（レンドラム（Ｌｅｎｄｒｕｓ）、　Ｊ、　Ｐａ ｒｈｏｌ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　５９：　３９９−４０４　（１９４７）） で強く染色した。多数の小腸切片の基底膜に存在する好酸球も、これら実験に用 いたアンチセンスオリゴヌクレオチドプローブで弱く陽性であるようだったが、 そのシグナルはＲＮアーゼでの前処理で弱められず、センスオリゴヌクレオチド も同じく陽性を示した（データは示していない）。

これらコントロール実験から、最も単純に説明できることは、これら白血球内の シグナルはおそらく人為的なものであって、細胞ＲＮＡへのハイブリダイゼーシ ョンからのものではないということである。これら切片中の他の細胞は、どれも いずれのプローブともハイブリダイズしなかった。

実施例９ デフエンジン５の抗微生物活性 精製したデフエンジン５を、大腸菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌及びカンジダ・ア ルビカンスを含む幾つかの細菌株で試験してそのｉｎ　ｖｉｔｒｏでの抗微生物 活性を測定した。約２．５Ｘ１０’の微生物を０．２５ｘＴＳＢ中で５０．２５ ．１２．５．６．２５又は３．１２５μｇ／ｍｌのこのペプチドと共にインキュ ベートすることによって、最小発育阻止濃度を測定した。最小発育阻止濃度（μ ｇ／ｍりは、約３．１２５ｇｇ／ｍ＋である筈である。

配列表 （２）配列情報ＳＥＱ　１０　ＮＯ：１：（ｉ）配列の特性： （＾）配列の長さ：　２８８０塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数二二本鎖 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｉｆ）配列の種類：　ＤＮＡ　（ｇｅｎｏｍｉｃ）（ｉｘ）特徴： （＾）　ＮＡＭＥ／ＫＥＹ：　ＣＤ５ （Ｂ）存在位置：　１３９９．．１５７２（ｉｘ）特徴二 （＾）　ＮＡＭＥ／ＫＥＹ：　ＣＤ５ （Ｂ）存在位置：　２５５２１．２６６３（Ｌｘ）特徴： （＾）　ＮＡＭＥ／ＫＥＹ：　ＴＡＴＡ　ｓｉｇｎａｌ（Ｂ）存在位置：　１３ ２ｇ、、１３３４（Ｌｘ）特徴： （＾）　ＮＡＭＥ／ＫＥＹ：　ＣＡＡＴ　ｓｉｇｎａｌ（Ｂ）存在位１：　１２ ６７、．１２７１（ｆｘ）特徴： （＾）　ＮＡＭＥ／ＫＥＹ：　ｍ１ｓｃ　ｓｉｇｎａｌ（Ｂ）存在位置：　１５ ６９．．１５７６（ｉｘ）特徴： （＾）　ＮＡＭＥ／ＫＥＹ：　ｍ１ｓｃ　ｓｉｇｎａｌ（Ｂ）存在位置：　２５ ３９．．２５４９（ｉｘ）特徴： （＾）　ＮＡＭＥ／ＫＥＹ：　ｐｏｌｙＡ　ｓｉｇｎａｌ（Ｂ）存在位置＋　２ ７７０．．２７７５（ｘｉ）配列：　ｓＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：１：ＣＴＧＣＡＧＧ ＴＧＡ　ＣＣＣＣＡＧＣＣＡＴＧ　ＡＧＧ　ＡＣＣＡＴＣＧＣＣＡＴＣＣＴＴ　 ＧＣＴ　ＧＣＣＡ買ＣＴＣ１４３１Ｍｅｔ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　 Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ａｌａ＾ｌａ　ｔｉｅ　ＬｅｕＣＴｔ；　ＧＴＧ　ＧＣＣＣＴ Ｇ　ＣＡＧ　ＧＣＣＣＡＧ　ＧＣＴ　ＧＡＧ　ＴＣＡ　ＣＴＣＣＡＧ　ＧＡＡ　 ＡＧＡ　ＧＣＴ　ＧＡＴ　１S７９ Ｌｅｕ　Ｖａｌ＾ｌａ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｇｉｎ＾ｌａ　Ｇｌｕ　Ｓｅ ｒ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ａｌａ　ＡｓｐＧＡＧ　ＧＣＴ　ＡＣＡ 　ＡＣＣＣＡＧ　ＡＡＧ　ＣＡＧ　ＴＣＴ　ＧＧＧ　ＧＡＡ　ＧＡＣＡＡＣＣＡ Ｇ　ＧＡＣＣＴＴ　ＧＣＴ　１５２V Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　 Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　ＡｌａＡＴＣＴＣＣＴＴＴ 　ＧＣＡ　ＧＧＡ’　ＡＡＴ　ＧＧＡ　ＣＴＣＴＣＴ　ＧＣＴ　ＣＴＴ　ＡＧＡ 　ＡＣＣＴＣＡ　ＧＧＴ　１５７２１１ｅ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　 Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　 ＧｌｙＣＴＣＴＣＴＴＣＴＴ　ＴＣＣＡＣＡＧＧＴ　ＴＣＴ　ＣＡＧ　ＧＣＡ　 ＡＧＡ　ＧＣＣＡＣＣＴＧＣＴＡＴ　ＴＧＣＣＧＡ　ＡＣＣ２５８S Ｓｅｒ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　 Ａｒｇ　ＴｈｒＧＧＣＣＧＴ　ＴＧＴ　ＧＣＴ　ＡＣＣＣＧＴ　ＧＡＧ　ＴＣＣ ＣＴＣＴＣＣＧＧＧ　ＧＴＧ　ＴＧＴ　ＧＡＡ　ＡＴＣＡＧＴ　２６３２Ｇｌｙ 　Ａｒｇ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ 　Ｇｌｙ　Ｖａｔ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　５ｅｒＧＧＣＣＧＣＣＴＣＴＡＣ ＡＧＡ　ＣＴＣＴＧＣＴＧＴ　ＣＧＣＴＧＡＧＣＴＴＣＣＴ　ＡＧＡＴＡＧＡＡ ＡＣ２６７９Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｃｙ ｓ　Ａｒｇ本（２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２：（ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ：５８アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直線状 （ｆｉ）配列の種類：タンパク質 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２：Ｍｅｔ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　 Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　 Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇ１ｎ＾１ａ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｇ ｉｎ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇ １ｎＬｙｓ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｇｉｎ　Ａｓ ｐ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　ｒｌｅ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ａｌａ　ＧＬｙＡｓｎ　Ｇｌｙ 　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ（２）配 列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３：（ｉ）配列の特性： （＾）配列の長さ＝３６アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー二直線状 （ｉｆ）配列の種類：タンパク質 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３：Ｓｅｒ　Ｇｉｎ＾ｌａ　Ａｒｇ　Ａ ｌａ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｃ ｙｓ　Ａｌａ　Ｔｈｒｌ　５　１０　１５ Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　 Ｉｌｅ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　ＡｒｇＬｅｕ　Ｃｙｓ　Ｃ ｙｓ　Ａｒｇ （２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４：（ｉ）配列の特性： （＾）配列の長さ＝４２４塩基対 （Ｂ）型；核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー：不明 （ｉｘ）特徴： （＾）　ＮＡＭＥ／ＫＥＹ：　ＣＤ５ （Ｂ）存在位置：　１０．．２９４ （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４：ＡＣＣＣＣＡＧＣＣＡＴＧ　ＡＧＧ 　ＡＣＣＡＴＣＧＣＣＡＴＣＣＴＴ　ＧＣＴ　ＧＣＣＡＴＴ　ＣＴＣＣＴＧ　Ｇ ＴＧ　４８１１ｅｔ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ａｌ ａ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｖａｌｌ　５　１０ ＧＣＣＣＴＧ　ＣＡＧ　ＧＣＣＣＡＧ　ＧＣＴ　ＧＡＧ　ＴＣＡ　ＣＴＣＣＡＧ 　ＧＡＡＡＧＡ　ＧＣＴ　ＧＡＴ　ＧＡＧαゴ　９６＾１ａ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　 Ａｌａ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　 Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ＾１ａＡＣＡ　ＡＣＣＣＡＧ　ＡＡＧ　ＣＡＧ　ＴＣＴ 　ＧＧＧ　ＧＡＡ　ＧＡＣＡＡＣＣＡＧ　ＧＡＣＣＴＴＧＣＴ　ＡＴＣＴＣＣ１ ４４Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ａｓ ｐ　Ａｓｎ　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　５ｅｒＴＴＴＧＣＡ　 ＧＧＡ　ＡＡＴ　ＧＧＡＣＴＣＴＣＴ　ＧＣＴＣＴｒ　ＡＧＡ　ＡＣＣＴＣＡ　 ＧＧＴＴＣＴＣＡＧ　ＧＣＡ　１９２Ｐｈｅ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ 　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ＾ｌａ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　 Ｇｉｎ　Ａｌａ＾ＧＡ　ＧＣＣＡＣＣＴＧＣＴＡＴ　ＴＧＣＣＧ＾＾ＣＣＧＧＣ ＣＧＴ　ＴＧＴ　ＧＣＴ　ＡＣＣＣＧＴ　ＧＡＧ　ＴＣＣ２４０＾ｒｇ　Ａｌａ 　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｃｙｓ 　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　５ｅｒＣＴＣＴＣＣＧＧＧＧＴＧ　ＴＧＴ 　ＧＡＡ　ＡＴＣＡＧＴ　ＧＧＣＣＧＣＣＴＣＴＡＣＡＧＡ　ＣＴＣＴＧＣＴＧ Ｔ　２８８Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｖａｔ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　Ｓｅｒ 　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ（２）配 列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５：（ｉ）配列の特性： （＾）配列の長さ：９４アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直線状 （ｉｆ）配列の種類：タンパク質 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５：Ｍｅｔ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　 Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　 Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇ１ｎＡｌａ　Ｇｉｎ＾ｌａ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｇｉ ｎ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ＾Ｉａ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇ１ｎ ２０　２５　３θ Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　 Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ＾ｌａ　Ｇｌｙ＾ｓｎ　Ｇｌｙ　Ｌｅ ｕ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｇｉ ｎ　Ａｌａ　Ａｒｇ　Ａｌａ　ＴｈｒＣｙｓ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ 　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ 　Ｓｅｒ　ＧＬｙＶａｌ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　 Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ（２）配列情報ＳＥ Ｑ　ｒＤ　ＮＯ：６：（ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ：４５２塩基対 ＣＢ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｉｘ）特徴： （＾）　ＮＡＭＥ／ＫＥＹ：　ＣＤ５ （Ｂ）存在位置：　１９．Ｊ２１ （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６：ＣＣＴＣＣＡＧＣＧＡ　ＣＣＣＴＡ ＧＣＣＡＴＧ　ＡＧＡ　ＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＣＣＴＣＡＣＴ　ＧＣＴ　ＧＴ Ｔ　ＣＴＣ５１Ｍｅｔ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｔ ｈｒ　Ａｌａ　Ｖａｌ　ＬｅｕＣＴＣＧＴＧ　ＧＣＣＣＴＣＣＡＧ　ＧＣＣ＾Ａ Ｇ　ＧＣＴ　ＧＡＧ　ＣＣＡ　ＣＴＣＣＡＡ　ＧＣＴ　ＧＡＧ　ＧＡＴ　ＧＡＴ 　９９Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｇ ｌｕ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　ＡｓｐＣＣＡ　ＣＴ Ｇ　ＣＡＧ　ＧＣＡ＾＾Ａ　ＧＣＴ　ＴＡＴ　ＧＡＧ　ＧＣＴ　ＧＡＴ　ＧＣＣ ＣＡＧ　ＧＡＧ　ＣＡＧ　ＣＧＴ　ＧＧＧ　１S７ Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｌｙｓ＾ｌａ　Ｔｙｒ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ａ ｓｐ＾ｌａ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　ＧｌｙＧＣＡ　ＡＡＴ　ＧＡＣ ＣＡＧ　ＧＡＣＴＴＴ　ＧＣＣＧＴＣＴＣＣＴＴＴ　ＧＣＡ　ＧＡＧ　ＧＡＴ　 ＧＣ＾＾ＧＣＴＣＡ　１９５＾１ａ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　Ｐｈｅ 　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ＾ｌａ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　 ５ｅｒＡＧＴ　ＣＴＴ　ＡＧＡ　ＧＣＴ　ＴＴＧ　ＧＧＣＴＣＡ　ＡＣＡ　ＡＧ Ｇ　ＧＣＴ　ＴＴＣＡＣＴ　ＴＧＣＣＡＴ　ＴＧＣＡＧＡ　２４３Ｓｅｒ　Ｌｅ ｕ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｐｈ ｅ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｈｉｓ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ６０　６５　７０　．７５ ＾ＧＧ　ＴＣＣＴＧＴ　ＴＡＴ　ＴＣＡ　ＡＣＡ　ＧＡＡＴＡＴ　ＴＣＣＴＡＴ 　ＧＧＧ　ＡＣＣＴＧＣＡＣＴ　ＧＴＣＡＴＧ　２９１＾ｒｇ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ 　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ 　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　ＭｅｔＧＧＴ　ＡＴＴ　ＡＡＣＣＡＣＡＧＡ　ＴＴ ＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＴＧＡＧＧＧＡＴＧＡ　ＧＡＡＣＡＧＡＧＡＧ　３３ｇＧ ｌｙ　Ｉｌｅ　Ａｓｎ　Ｈｉｓ　Ａｒｇ　Ｐｈｅ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ本＾ ＾ＡＴＡＴＡＴＴＣＡＴＡＡＴＴＴＡＣＴ　ＴＴＡＴＧＡＣＣＴＡ　ＧＡＡＧＧ ＾＾＾ＣＴ　ＧＴＣＧＴＧＴＧＴＣＣＣＡＴＡＣＡＴＴＧ@３９８ ＣＣＡＴＣＡＡＣＴＴ　ＴＧＴＴＴＣＣＴＣＡ　ＴＣＴＣＡＡＡＴＡＡ　ＡＧＴ ＣＣＴＴＴＣＡ　ＧＣＡ＾＾ＡＡ＾＾＾＾＾＾＾　４５２（２）配列情報ＳＥＱ 　ＩＤ　ＮＯニア：（ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ＝１００アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー二直線状 （ｉｉ）配列の種類：タンパク質 （ｘｉ）配列、　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯニア：Ｍｅｔ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　 Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ＾ ｌａ　Ｌｅｕ　Ｇ１ｎ＾１ａ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｇｉ ｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｌｙ ｓ＾１ａ　Ｔｙｒ　Ｇｌｕ＾Ｌａ　Ａｓｐ＾ｌａ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　Ａ ｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ　ＡｓｐＰｈｅ＾ｌａ　Ｖａｌ 　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ＾ｌａ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　 Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ａｌａ　ＬｅｕＧｌｙ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ＾ｌａ　Ｐｈ ｅ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｈｉｓ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｔｙ ｒ　５ｅｒＴｈｒ　Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ 　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｍｅｔ　Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　Ａｓｎ　Ｈｉｓ　ＡｒｇＰｈｅ　 Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ （２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８：（ｉ）配列の特性： （＾）配列の長さ＝２０２塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数二二本鎖 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：８：（２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ ：９：（ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ：１９５塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数二二本鎖 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：９：ＧＡＧＧＡＴＣＡＧＧ　ＡＣＧＴＧ 　１９５（２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０：（ｉ）配列の特性： （＾）配列の長さ：２０３塩基対 （Ｂ）型二核酸 （Ｃ）鎖の数：二本鎖 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１０：ＡＡＧＡＣＣＴＧＧＧ　ＡＣＡＧ ＡＧＧＡＣＴ　ＧＣＴＧＴＣＴＧＣＣＣＴＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴ Ａ　ＧＣＴＡＧＡＧＧ＾Ｔ@６０ （２）配列情報ＳＥＱ　１０　ＮＯ：１１：（ｉ）配列の特性： （＾）配列の長さ：２０３塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数二二本鎖 （Ｄ）トポロジー：不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１１：（２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎ Ｏ：１２：（ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ：９４アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー・不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１２：Ｍｅｔ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ ＾ｌａ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ＾１ａ＾ｌａ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ａｌ ａ　Ｌｅｕ　Ｇ１ｎＡｌａ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ 　Ａｌａ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｌａ Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｉｌｅ　Ｐｒｏ　 Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ＾１ａＴｒｐ　Ａｓｐ　Ｇｌ ｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｈｉｓ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｓｅ ｒ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｍｅｔ　Ａｓｎ＾１ａ　Ｃｙｓ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ 　Ｉｌｅ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ 　Ａｒｇ　ＴｙｒＧｌｙ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　 Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ（２）配列情報ＳＥ Ｑ　ＩＤ　Ｎｏ二１３：（ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ＝９４アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　１０　ＮＯ：１３：Ｍｅｔ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ 　Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ａｌａ＾ｌａ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　 Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇ１ｎＡｌａ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｇ ｉｎ　Ａｌａ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ａ ｌａＰｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　Ｉｌｅ＾１ａ＾ｌａ　Ａｓｐ　Ｉｌｅ　Ｐｒｏ　 Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｖａｔ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　ＡｌａＴｒｐ　Ａｓｐ　Ｇ ｌｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ＾ｌａ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｈｉｓ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｓｅ ｒ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｍｅｔ　ＡｓｎＡｓｐ　Ｃｙｓ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ 　Ｉｌｅ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ 　Ａｒｇ　ＴｙｒＧｌｙ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　 Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ（２）配列情報ＳＥ Ｑ　ｒＤ　ＮＯ・１４：（ｉ）配列の特性： （＾）配列の長さ：９５アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１４：Ｍｅｔ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ 　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ａｌａ＾ｌａ　ｌｉｅ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　 Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇ１ｎ＾１ａ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｈｉｓ　Ｖａｔ　Ｓ ｅｒ　Ｖａｔ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ｇ １ｎＧｉｎ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ　Ａｓ ｐ　ＶａｌＡｌａ　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ　Ｖａｔ　Ｌｙｓ　ＧｌｕＨｉｓ　Ｇｌｕ　 Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｖａｔ　 Ｌｙｓ　Ａｌａ　ＧＬｙ　Ｖａｔ　ＶａｔＣｙｓ＾ｌａ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ａｒ ｇ＾ｌａ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ａｒｇ 　Ａｌａ　ＧｌｙＡｒｇ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　 Ｉｌｅ　１（ｉｓ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ（２）配 列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１５：（ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ：９５アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー、不明 （ｘｌ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ二１５：Ｍｅｔ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ 　、Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｖａ ｔ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇ１Dｎ ｌ　５　１０　１５ ＾１ａ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｈｉｓ　ｌｉｅ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　 Ｉｌｅ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　ＶａＬ　Ａｓｐ　Ｇ１ｎＧｉｎ　Ｐｒｏ　Ｐ ｒｏ　Ｇｉｎ＾ｌａ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｇｌｎ　Ａｓｐ　ＶａｌＡｌａ　Ｉｌｅ 　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ［１ｉｓ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ａｌａ 　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｇｌｙ 　Ｖａｌ　Ｖａ■ Ｃｙｓ＾ｌａ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ＾ｌａ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ｐｒ ｏ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｇｌｙ＾ｒｇ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ 　Ｉｌｅ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ｈｉｓ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ 　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ（２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：Ｌ６：（ｉ）配 列の特性； （＾）配列の長さ：９３アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロン−二不明 （ｘｉ）配列＋　ＳＥｏ　１０　ＮＯ：１６：Ｍｅｔ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ 　Ｖａｔ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ 　Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ｇ１ｎＶａｌ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　 Ｇｉｎ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　 ＧｌｕＧｌｕ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ　Ａ ｌａ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ　ＡｓｐＰｒｏ　Ｇｌ ｕ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅ ｕ　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　ＣｙｓＴｙｒ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ 　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｍｅｔ 　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　ＴｈｒＣｙｓ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　［ｌｉｓ　Ｌｅｕ 　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ（２）配列情報ｓ ＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＋１７：（ｉ）配列の特性： （＾）配列の長さ：１００アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１７：１１ｅｔ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｌｅ ｕ　Ａｌａ　Ｘａａ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｖａ ｌ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇ１■ ＾１ａ　Ｇｉｎ＾ｌａ　Ｇｌｕ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｇｉｎ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘ ａａ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｇｉ ｎ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｇｌｕ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｇｉｎ　Ｖａｌ　Ｘａａ　Ｘａ ａ　Ｓｅｒ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ 　Ｓｅｒ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ 　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　 Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　ＸａａＸ ａａ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｘ ａａ　Ｇｌｙ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　ＸａａＸａａ　Ｃｙｓ　Ｃｙ ｓ　Ｘａａ （２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１８：（ｉ）配列の特性： （＾）配列の長さ：３０アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１８：Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ 　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ｐｒｏ＾ｌａ　Ｃｙｓ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　 Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｔｙｒｌ　５　１０　１５ Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　 Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ（２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ： １９二（ｉ）配列の特性： （＾）配列の長さ：２９アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー；不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１９：Ｃｙｓ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ＾ｒｇ　 Ｉｌｅ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　 Ａｒｇ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙｌ　５　１０　１５ Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｔｒｐ　 Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ（２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２０：（ ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ；３０アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯＯ２Ｏ３Ａｓｐ　Ｃｙｓ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ 　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ 　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｔｙｒｌ　５　１０　１５ Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　 Ｔｒｐ＾ｌａ　Ｐｈｅ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ（２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２ １：（ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ：３３アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２１：Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ 　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｐｈｅ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ 　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　ｖａｌｌ　５　１０　１５ Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ｉｌｅ　ＧＬｙ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　 Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ａｒｇａｌ （２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ＋２２：（ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ：３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー：不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２２：Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｔｙｒ 　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ 　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕｌ　５　１０　１５ Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　 Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ（２）配列情報ＳＥ Ｑ　ＩＤ　ＮＯ：２３：（ｉ）配列の特性： （＾）配列の長さ：３１アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数、一本舗 （Ｄ）トポロジー：不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２３＋Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ 　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ 　Ａｒｇ　Ｍｅｔ　ＡｓｎＧｌｙ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　 Ｈｉｓ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ（ ２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２４：（ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ：３１アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー：不明 （ｘｉ）配列二ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２４：Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｃｙｓ　Ｉｌｅ　 Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　 Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ａｒｇｌ　５　１０　１５ Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｉｌｅ　Ｐｈｅ　Ｇｉｎ　Ａｓｎ　Ａｒｇ　 Ｖａｌ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ（２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ 　ＮＯ：２５：（ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ：３３アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー：不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ二２５：Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ａｌａ 　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ＾ｒｇ　 Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ａｒｇｌ　５　１０　１５ ＾１ａ　Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　 Ｉｌｅ　Ｈｉｓ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ＾ｒｇ （２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２６二（ｉ）配列の特性： （＾）配列の長さ、３３アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （０鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２６：ＶａＬ　ＶａＬ　Ｃｙｓ＾ｌａ　 Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　 Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ａｒｇｌ　５　１０　１５ Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　 Ｉｌｅ　Ｈｉｓ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ａｒｇｒｇ （２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２７：（ｉ）配列の特性： （＾）配列の長さ：３４アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　１０　ＮＯ：２７：Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　Ｃｙｓ　ＡＬａ 　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｐｈｅ　Ｃｙｓ　Ｐｒｏ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ 　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｐｈｅｌ　５　１０　１５ Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｖａｔ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　 Ａｒｇ　Ｔｙｒ　Ｖａｔ　Ａｒｇ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　５ｅｒＡｒｇ　Ａｒｇ （２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２８：（ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ＝３４アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トボロジー：不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　１０　ＮＯ：２８：Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｃｙｓ　Ｖａｌ 　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ 　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ａｒｇｌ　５　１０　１５ Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　Ｉｌｅ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　 Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ　Ｃｙｓ　ＣｙｓＰｒｏ　Ａｒｇ （２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２９：（ｉ）配列の特性； （Ａ）配列の長さ：３３アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２９：Ｖａｔ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ 　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ 　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ａｌａｌ　５　１０　１５ Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　ＶａＬ　 Ａｒｇ　Ｈｉｓ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ＾ｒｇ （２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３０：（ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ：３３アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３０：Ｖａｌ　Ｐｈｅ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ 　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ 　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ａｌａｌ　５　１０　１５ Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　ＩＬｅ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　 Ａｒｇ　Ｈｔｓ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ａｒｇｒｇ （２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３１：（ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ：３２アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー：不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３１：Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｔｙｒ 　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ 　ＧＬｕ　Ａｒｇ　Ｌｅｕｌ　５　ｔｏ　１５ Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　 Ｉｌｅ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ（２）配列情報ＳＥ Ｑ　ＩＤ　ＮＯ：３２：（ｉ）配列の特性： （＾）配列の長さ：２９アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３２：Ｃｙｓ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ 　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ 　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙｌ　５　１０　１５ ＾１ａ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ　 Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ（２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３３：（ ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ二３１アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー：不明 （ｘｌ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３３＋＾１ａ　Ｃｙｓ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ 　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ｇｌｙ　Ａｈａ　Ｃｙｓ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ 　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒｌ　５　１０　１５ Ｇ１ｙ＾ｌａ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ｔ ｙｒ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ（２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　 ＮＯ：３４：（ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ＝３３アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー；不明 （ｘｉ）配列：　ｓＥｏ　ｒＤ　ＮＯ：３４：Ｘａａ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｘａａ 　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ 　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｘａａｔ　５　１０　１５ Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｇｌｙ　Ｘａａ　 Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｘａａ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ｘａａａａ （２）配列情報ＳＥＱ　ｒＤ　ＮＯ：３５：（ｉ）配列の特性： （＾）配列の長さ；４３塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー：不明 （ｆｉ）配列の種類：　ＤＮＡ　（ｇｅｎｏｍｉｃ）（ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　 ＩＤ　ＮＯ：３５：ＣＴＴＧＣＴＧＣＣＡ　ＴＴＣＴＣＣＴＧＧＴ　ＧＧＣＣＣ ＴＧＣＡＧ　ＧＣＣＣＡＧＧＣＴＧ　ＡＧＣ４３（２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　 ＮＯ：３６：（ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ：２１塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３６：ＧＡＧＡＣＣＣＧＴＡ　ＡＧＡＣ ＧＡＣＧＡＣＴ　２１（２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３７：（ｉ）配列の 特性： （＾）配列の長さ＝２４塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー木端 （Ｄ）トポロジー：不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥｏ　１０　ＮＯ：３７：ＴＴＣＣＣＴＧＴＡＧ　ＣＴＣＴ Ｃ＾＾＾（社）＾＾ＡＴ　２４（２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３８：（ｉ ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ：２１８塩基対 （Ｂ）型；核酸 （Ｃ）鎖の数ニー木端 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　１０　ＮＯ：３８：（２）配列情報ＳＥＱ　Ｉｎ　Ｎ Ｏ：３９：（ｉ）配列の特性： （Ａ）配列の長さ＝２０塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー木端 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３９：ＣＧＧＣＣＡＣＴＧＡ　ＴＴＴＣ ＡＣＡＣＡＣ２０（２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４０：（ｉ）配列の特性 ： （＾）配列の長さ：２１塩基対 ＣＢ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー木端 （Ｄ）トポロジー：不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４０：ＧＡＴＴＧＧＣＡＡＴ　ＧＣＣＴ ＧＣＴＧＧＧ　Ａ　２１（２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４１：（ｉ）配列 の特性： （＾）配列の長さ：４８塩基対 （Ｂ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニー木端 （Ｄ）トポロジー−不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４１：ＧＡＧＴＧＧＣＴＣＡ　ＧＣＣＴ ＧＧＧＣＣ丁　ＧＣＡＧＧＧＣＣＡＣＣＡＧＧＡＧＡＡＴＧ　ＧＣＡＧＣＡＡＧ 　４ｇ（２）配列情報ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４２：（ｉ）配列の特性： （入）配列の長さ一２１塩基対 （Ｂ）型：核酸 （０鎖の数ニー木端 （Ｄ）トポロジー：不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４２：ＣＡＧＧＴＴＧＧＴＣＴＧＧＡＡ ＴＴＣＴＧ　Ｔ　２１（２）配列情報ＳＥＱ　１０　Ｎｏ二４３：（ｉ）配列の 特性： （＾）配列の長さ：３０塩基対 ＣＢ）型：核酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本鎖 （Ｄ）トポロジー二不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４３：ＴＡＣＧＡＣ丁ＣＡＣ丁＾ＴＡＧ ＴＴＴＴＴ　ＴＴＴ丁ＴＴＴＴＴＴ　３０（Ａ）配列の長さ：３０アミノ酸 （Ｂ）型二アミノ酸 （Ｃ）鎖の数ニ一本舗 （Ｄ）トボロジー：不明 （ｘｉ）配列：　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：５１：Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｈｉｓ　Ｃｙｓ 　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｔｙｒ 　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙｌ　５　１０　１５ Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ｖａｔ　Ｍｅｔ　Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　Ａｓｎ　Ｈｉｓ　 Ａｒｇ　Ｐｈｅ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　ＬｅｕＴＣＴＧＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＣＣＡ ＧＧＡＣＣＴＴＧＣＴＡＴＣＴＣＣＴＴＴＧＣＡＧＧＡＡＡＴＧＧＡＣＴＣＴＣ ＴＧＣＴＣＴＴ　１５U０ Ｓｅ　ｒＧ　ｌｙＧ　］　ｕＡｓｐＡｓｎＧ　］　ｎＡｓｏＬｅｕＡ　ｌａ　Ｉ 　ｌ　ｅＳｅ　ｒＰｈｅＡ　ＩａＧ　ｌｙＡ　ｓｎＧ　ＩｙkｅｕＳｅ　ｒＡ　 ｌａＬｅｕ ９ａ９ａａａ９９ａｔＣｔＱ９ａ９ｔＣａａ９ｔ９ｔ９９ａａａ（ｎｔＣｔａＣ ＣｔＣａＣｔｔ９ａ９ｔＣＪａＣｔｔｔａＣｔｔａａｔ　１U８０ ＣｔｔＣＣｔ（］（ｌａＣＣｔｔ９ａｔｔｔｔＣｔＣａｔＣｔａｔａａａｔｔａ ａｔＣａ（ｌｔ（］ａＱａａＣＣａａａｔａａａｔＣｔａａ＝@１７４０ ａ（ｌａｔｔｔｔＣｔｔｔｔｔｔＣｔａａＣＩａＣｔｔｔＣａＣＩＣｔＣＣａａ ９ａｔａｔｔｔＣｔＣｌｔＣｌａａａｔｔｔ（ｌｃｔａｃｔ狽狽煤@１８００ ａａ９ａｔａ（ｌａａａ（ｌａ９ＣｔａＣａＣｔ（ＩａＣｔａ９ｔｔＣｔｔｔ９ ｔａ（ｌａｔｃｔａａａｔｃｌ９（］Ｃａ（ｌａｃｔｔａ（撃狽狽≠煤@１８６ ０ ａｔａｃｌａ（ｌａ（ｌｔ（ｌｔｔｔｔａｃｔｔｔ（＋ｔｃｃａｔｔ（］（ｌａ ａａａ（ＩＣｔｔｔｔａ（］ａａＣＣｔａ（Ｉａ（ｌａ（１i］ａａＣＣｔａｔ ａ　１９４０ ９９ｔ９℃９℃ｔｔｔ９ａｔ（Ｉｔａ（ｌｃＩｃｔａａｔａ（］ＣＩＣｔｔ（］ ＥｌｔｔａａａｔＣｔｔｔＣｔａＣａａｔａＣａｔＣＣｔｔ≠pａｔ　２０００ ＣａａａａＣａｔＣａｔａｔｔ（Ｉｔ（］ｔＣｔＣａｔａＣａｔａｔａＣａＣａ ａｔｔａｔｔ（ＪｔｔｔＱｔＣａａｔｉａａａａＣａａＣｌ煤@２０６０ ａａａｔａｔｑ℃ａａｄａｔ（ｌｉｉａａａａａａａａａａａａａａａａａａａ ａａａＱＣＩａ９ａＱａＣａ９ａｑａａｉＣＩａａ９ａａｊ@２１２０ ℃て（Ｊａａｔｔｔ（１（ｌａａａ９ｔＣｔｔＣａａａ９ａＣｔＣＣｔｔ（］ａ ９ＣａＣＣａａａ９ｔａｔｔｔ（］（］ｔＣＣａｔＯａＣａ狽狽＝@２１８０ ９Ｃａｔ９ＣａＣａａｔ（ＩＣ（１（ｌｃａｔｔｔｃａ（］ａａａＣｔ（Ｊａｔ ｔＣａ（１ｇｔ（］Ｃｔｔｔａ９Ｃｌ９ａ（］ＣＣｔｔ（］狽狽≠X（］ａＣ　 ２２４０ Ｃｉ９（ｌａａａｔＣａＣａＣａｉ９９ａ９ｇｔＣａａ（ｌａｔｉａ（］９Ｃ９ ｔ（ｉｔ（１（ｌａｔ（ｌａａ９ｃａ（］ａａｔＣｌａａＣ撃≠pｔａＱ（］　 ２３００ ｔａａｃｃｃｔ９ａ（１９ｔｔ９ａｃｌａ９！ｌｌｔａｔａｔｔ９ｔｔ（１（ｌ ａｃｃａ（］（１９ａＣＩＣａ９９ｔａａｔａａａｔａＣａ狽bＣｔＱＣｌ　２ ３６０ ａｔａ９ａｃｔｃａｃａｔｃｌ（ｌＣ］ＣｌａａａａａａａＣｔａｔ９ａｔＣｔ ｔ（］Ｃａｔ９ａＣｔａａＣａＣａｔａ９ＣｔａＣＩｔａａiｌａｔ　２４２０ ｉｔｃｔｔｃＩｔｃａｃｔｔａｃ（］ａＣａａａ９ａＣａｔｇａａｔｉｔｔＣｔ ＣＣａｔＣＣｔａａＣａｔ９ａＣｊ（］ａｔａＣａ９ｉＱｔ@２４８０ ＣｔＣｔｔａｔｔｔａＣｌａＣｔａｔＣｔＣａＣ］ｔｔａ（］ｔＣｔＣＩ（ｌｃ ｔ（Ｉｔ（ｌＣｔｔ９ｔＣＣｔｔｔｔｔＣＣＣａＣＣｔＣＣbｔＣ９２５４０ Ｃｔ９ｔ（ｌＣＣｔｌｌｌｌａＣＣＣｔＣｔＣｔｔＣｔｔｔＣＣａＣａ（ＩＧＴ ＴＣＴＣＡＧＧＣＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ丁ＧＣＴＡＴＴＧＣbＧ　２６００ （ｑ）　ｌｙＳｅｒＧｌｎＡｌａＡｒｑＡｌａＴｉｒＣｙｓＴｙｒＣｙｓＡｒＡ ＡＣＣＧＧＣＣＧＴＴＧＴＧＣＴＡＣＣＣＧＴＧＡＧＴＣＣＣＴＣＴＣＣＧＧＧ ＧＴＧＴＧＴＧＡＡＡＴＣＡＧＴＧＧＣＣＧＣＣＴ　２６U０ ｇＴｈ　ｒＧ　Ｉ　ＶＡ　ｒｃｌｃＹｓＡ　ｌａＴｌ１　ｒＡ　ｒｃＩＧ　ｌｕ ｓｅ　ｒＬｅｕｓｅ　ｒＧ　ＩＹＶａ　ＩｃＶｓＧ　ＩＵ　h　ｌ　ｅＳｅ　ｒ Ｇ　ＩＶＡ　ｒ（］ＬｅＴＣＡＡＧＧＴＣＣＴＧＡＡＡＡＡＡＧＡＡＡＡＡＣＡ ＴＴＴＴＡＣＴＣＴＧＴＧＴＡＣＣＴＴＧＴＧＴＣＴＴＴＣＴＡＡＡＴＴＴＣ　 ２７W０ ｖｃＴｃＴｃｃＡホ『豆恢ＴＴｃＡＡＧｃＡｎａａａｃｔｔａ９ｔ９ｔ９ｔｔｔ ｃ＋ａｃｃｔｔｔｔｔａａｔｔｔｔｃｔｔｔ　２８４０ｔＣｔｔｔｔｔＣＣｔｔ ｔｔｔｔｔｔＣｔｔｔｔ（ｌｃｔｔｔ（ｌｔｔａｔａｔ（］（ｌｔ（ｌｃＩｔｔ ｔ（］ｔａｔＣｌ（］ｔｔＣＣｔｔ狽bｌｔａｔｔ　２９００ ＦＩ６　２Ｂ−２ ０．２ＪＪＩ　−　＠　● 配列番号： ＣＴＴＧＣＴＧＣＣＡＴＴＣＴＣＣＴＧＧＴＧＧＣＣＣＴＧＣＡＧＧＣＣＣＡＧ ＧＣＴＧＡＧＣ−ブローブ３５配列番号　：　４ ＴＣＡＣＴＣＣＡＧＧＡＡＡＧＡＧＣＴＧＡＴＧＡＧＧＣＴＡＣＡＡＣＣＣＡＧ ＡＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＡＡ　１５１ＳＬＱＥＲＡＤＥＡＴＴＱ　κＱＳＧ ＥＧＡＴＴＣＡＧＴＴＣＡＡＧＧＴＣＣＴＧＡＡＡＡＡＡＧＡＡＡＡＡＣＡＴＴ ＴＴＡＣＴＣＴＧＴＧＴＡＣＣＴｒ　４０６ＧＴＧＴＣＴｒＴＣＴＡＡＡＴＴＴ ＣＴＣＴＣＴＣＣＡ心■仰ＴＴＣＡＡＧＣＡＴＴＡＡＡＡＡＡ　４５５Ｆ　Ｉ　 Ｇ．４Ｃ １．２ シグナル配列　プロペプチド 開刊Ａ　ＩＬＡＡ　Ｉ　ＬＬＶＡＬＱＡＱＡＥＳＬＱＥＲＡＤ−−−−−−−Ｅ −ＡＴＴＱＫＱＳＧＥＤＮＱＤＬＡ　ｌ５ＦＡＧＮＧＬ−■ ＭｒｔＬａＬａＡｉｌＬｖａｌＯａＱＡｅ　Ｑ　Ｄ　Ｅ　Ｑ　ｅ　ＱＶ　ＳＩＧ ６Ａ （’Ｊ？／’１　ζＬｎ　ｕ）　ト、 尿０１ｒ″　い　３　＄−！ｌ−１　ｐ−１＄　□　８喝稍 産〇−麓黛吊で＝　ロ　品＊概吊寞尽　；協　シ喝咋 フロントページの続き （５１）　ｉｎｔ、　Ｃ１，６識別記号　庁内整理番号Ｃ１２Ｎ　５／１０ Ｃ１２Ｐ　１９／３４　７４３２−４Ｂ２１１０２　Ｃ９２８２−４Ｂ ＣＩ２Ｑ　１／６８　Ａ　９４５３−４８ＧＯＩＮ　３３１５０　Ｔ　７０５５ −２Ｊ７７２９−４Ｂ （７２）発明者　ジョーンズ、ダグラス・イーアメリカ合衆国ニューシャーシー 州０８０９５゜ウィンスロー、アルバートソン・ロード（番地なし） Ｉ Ａ６１Ｋ　３７１０２　ＡＢＥ Ｃ１２Ｎ　５１００　Ａ

Claims (52)

【特許請求の範囲】
1. １．配列番号：５で定義されるアミノ酸配列の少なくとも一部分を含む実質的に 純粋な消化器デフェンシンペプチド。
2. ２．配列番号：７で定義されるアミノ酸配列の少なくとも一部分を含む実質的に 純粋な消化器デフェンシンペプチド。
3. ３．消化器デフェンシンペプチドをコードするｃＤＮＡの少なくとも一部分から 産生される実質的に純粋な消化器デフェンシンペプチドであって、前記ｃＤＮＡ が配列各号：４で定義されるＤＮＡ配列を含むデフェンシンペプチド。
4. ４．消化器デフェンシンペプチドをコードするｃＤＮＡの少なくとも一部分から 産生される実質的に純粋な消化器デフェンシンペプチドであって、前記ｃＤＮＡ が配列番号：６で定義されるＤＮＡ配列を含むデフェンシンペプチド。
5. ５．適する発現系で発現できる祖換えベクターであって、前記発現系と適合性の 制御配列に連結した消化器デフェンシンペプチドをコードするＤＮＡ配列を含む 組換えベクター。
6. ６．ＤＮＡ配列が配列番号：４により定義される配列の少なくとも一部分を含む 、請求項５のベクター。
7. ７．ＤＮＡ配列が配列番号：６により定義される配列の少なくとも一部分を含む 、請求項５のベクター。
8. ８．請求項６の組換え発現ベクターから産生される消化器デフェンシンペプチド
9. ９．請求項７の組換え発現ベクターから産生される消化器デフェンシンペプチド 。
10. １０．有効量の消化器デフェンシンペプチドを適するキャリヤー中に含む接触消 毒剤。
11. １１．消化器デフェンシンペプチドが、配列番号：５で定義される配列の少なく とも一部分を含むアミノ酸配列を有する、請求項１０の接触消毒剤。
12. １２．消化器デフェンシンペプチドが、配列番号：７で定義される配列の少なく とも一部分を含むアミノ酸配列を有する、請求項１０の接触消毒剤。
13. １３．消化器デフェンシンペプチドを薬学的に許容できるキャリヤー中に含む医 薬組成物。
14. １４．消化器デフェンシンペプチドが、配列番号：５で定義される配列の少なく とも一部分を含む、請求項１３の医薬組成物。
15. １５．消化器デフェンシンペプチドが、配列番号：７で定義される配列の少なく とも一部分を含む、請求項１３の医薬組成物。
16. １６．徴生物感染症を患っている哺乳動物に抗徴生物有効量の消化器デフェンシ ンペプチドを投与することを含む徴生物感染症を治療する方法。
17. １７．消化器デフェンシンペプチドが、配列番号：５で定義されるアミノ酸配列 の少なくとも一部分を含む、請求項１６の方法。
18. １８．消化器デフェンシンペプチドが、配列番号：７で定義されるアミノ酸配列 の少なくとも一部分を含む、請求項１６の方法。
19. １９．消化器デフェンシンペプチドが、該消化器デフェンシンペプチドを体内で 発現することによって投与される、請求項１６の方法。
20. ２０．消化器デフェンシンペプチドが、配列番号：４で定義されるｃＤＮＡ配列 の少なくとも一部分を含むｃＤＮＡで細胞をｉｎｖｉｖｏで形質転換することに よって体内で発現される、請求項１８の方法。
21. ２１．消化器デフェンシンペプチドが、配列番号：６で定義されるｃＤＮＡ配列 の少なくとも一部分を含むｃＤＮＡで細胞をｉｎｖｉｖｏで形質転換することに よって体内で発現される、請求項１８の方法。
22. ２２．細胞を形質転換する工程が、調節制御配列と機能できるように連結された 前記ｃＤＮＡ配列を含む組換えベクターを用いることを更に含む工程であって、 該調節制御配列が前記形質転換細胞内で前記コーディング配列の発現をもたらす ことができるものである、請求項２０の方法。
23. ２３．細胞を形質転換する工程が、調節制御配列と機能できるように連結された 前記ｃＤＮＡ配列を含む組換えベクターを用いることを更に含む工程であって、 該調節制御配列が前記形質転換細胞内で前記コーディング配列の発現をもたらす ことができるものである、請求項２１の方法。
24. ２４．消化器系炎症を患っている哺乳動物に抗炎症有効量の消化器デフェンシン ペプチドを投与することを含む消化器系炎症を治療する方法。
25. ２５．消化器デフェンシンペプチドが、配列番号：５で定義されるアミノ酸配列 の少なくとも一部分を含む、請求項２４の方法。
26. ２６．消化器デフェンシンペプチドが、配列番号：７で定義されるアミノ酸配列 の少なくとも一部分を含む、請求項２４の方法。
27. ２７．消化器デフェンシンペプチドが、該消化器デフェンシンペプチドを体内で 発現することによって投与される、請求項２４の方法。
28. ２８．消化器デフェンシンペプチドが、配列番号：４で定義されるｃＤＮＡ配列 の少なくとも一部分を含むｃＤＮＡで細胞をｉｎｖｉｖｏで形質転換することに よって体内で発現される、請求項２６の方法。
29. ２９．消化器デフェンシンペプチドが、配列番号：６で定義されるｃＤＮＡ配列 の少なくとも一部分を含むｃＤＮＡで細胞をｉｎｖｉｖｏで形質転換することに よって体内で発現される、請求項２７の方法。
30. ３０．細胞を形質転換する工程が、調節制御配列と機能できるように連結された 前記ｃＤＮＡ配列を含む組換えベクターを用いることを更に含む工程であって、 該調節制御配列が前記形質転換細胞内で前記コーディング配列の発現をもたらす ことができるものである、請求項２８の方法。
31. ３１．細胞を形質転換する工程が、調節制御配列と機能できるように連結された 前記ｃＤＮＡ配列を含む組換えベクターを用いることを更に含む工程であって、 該調節制御配列が前記形質転換細胞内で前記コーディング配列の発現をもたらす ことができるものである、請求項２９の方法。
32. ３２．細胞を、消化器デフェンシンペプチドをコードする遺伝子に結合する有効 量の物質と接触させることを含む細胞内の消化器デフェンシンペプチドの産生を 変調させる方法。
33. ３３．細胞を接触させる工程が、細胞を配列番号：１で定義される核酸配列の少 なくとも一部分に結合する物質と接触させることを更に含む、請求項３２の方法 。
34. ３４．物質が配列番号：１のシス作用性制御要素に結合する、請求項３３の方法 。
35. ３５．細胞を接触させる工程が、細胞を配列番号：４で定義される核酸配列の少 なくとも一部分に結合する物質と接触させることを更に含む、請求項３３の方法 。
36. ３６．細胞を接触させる工程が、細胞を配列番号：６で定義される核酸配列の少 なくとも一部分に結合する物質と接触させることを更に含む、請求項３２の方法 。
37. ３７．哺乳動物の消化管から採取したサンプル中に存在する消化器デフェンシン ペプチドの量を検出し、そして前記サンプル中に存在するペプチドの量を正常な 哺乳動物の消化管に存在するペプチドの量と比較し、それによって前記ペプチド の異常な量を感染の可能性の指標とすることを含む、消化管の徴生物感染症を診 断する方法。
38. ３８．増加した量の消化器デフェンシンペプチドを検出することが感染の指標と なる、請求項３７の方法。
39. ３９．減少した量の消化器デフェンシンペプチドを検出することが感染の指標と なる、請求項３７の方法。
40. ４０．哺乳動物の消化管から採取したサンプル中に存在する消化器デフェンシン ペプチドの量を検出し、そして前記サンプル中に存在するペプチドの量を正常な 哺乳動物の消化管に存在するペプチドの量と比較し、それによって前記ペプチド の異常な量を炎症の可能性の指標とすることを含む、消化器系炎症を診断する方 法。
41. ４１．増加した量の消化器デフェンシンペプチドを検出することが炎症の指標と なる、請求項４０の方法。
42. ４２．減少した量の消化器デフェンシンペプチドを検出することが炎症の指標と なる、請求項４０の方法。
43. ４３．哺乳動物の消化管から採取したサンプル中に存在する消化器デフェンシン ペプチドをコードするｍＲＮＡの量を検出し、そして前記サンプル中に存在する 前記ｍＲＮＡの量を正常な哺乳動物の消化管に存在する前記ｍＲＮＡの量と比較 し、それによって前記ｍＲＮＡの異常な量を感染の可能性の指標とすることを含 む、消化管の徴生物感染症を診断する方法。
44. ４４．消化器デフェンシンペプチドをコードする増加した量のｍＲＮＡを検出す ることが感染の指標となる、請求項４３の方法。
45. ４５．消化器デフェンシンペプチドをコードする減少した量のｍＲＮＡを検出す ることが感染の指標となる、請求項４３の方法。
46. ４６．哺乳動物の消化管から採取したサンプル中に存在する消化器デフェンシン ペプチドをコードするｍＲＮＡの量を検出し、そして前記サンプル中に存在する 前記ｍＲＮＡの量を正常な哺乳動物の消化管に存在する前記ｍＲＮＡの量と比較 し、それによって前記ｍＲＮＡの異常な量を炎症の可能性の指標とすることを含 む、消化器系炎症を診断する方法。
47. ４７．消化器デフェンシンペプチドをコードする増加した量のｍＲＮＡを検出す ることが炎症の指標となる、請求項４６の方法。
48. ４８．消化器デフェンシンペプチドをコードする減少した量のｍＲＮＡを検出す ることが炎症の指標となる、請求項４６の方法。
49. ４９．下記の工程を含む、患者の消化器系障害へのかかり易さを診断する方法： 前記ヒト患者からＤＮＡ含有試験サンプルを採取し；前記ＤＮＡ含有試験サンプ ルからのＤＮＡを、配列番号：１、配列番号：４及び配列番号：５からなる群か ら選はれるデフェンシン配列の上流部分に相補的な配列を有する上流プローブと その選んだデフェンシン配列の下流部分に相補的な配列を有する下流プローブと を用いて増幅し；そして前記増幅したＤＮＡを正常サンプルからのＤＮＡと比較 して、正常ＤＮＡに比べた増幅ＤＮＡの１又は２以上の突然変異を同定し、それ によって増幅ＤＮＡ中の突然変異を前記患者が消化器系障害にかかる高い可能性 を有しているという指標にする。
50. ５０．上流プローブが配列番号：４８で定義される配列を有し、下流プローブが 配列番号：３９で定義される配列を有する、請求項４９の方法。
51. ５１．下記の工程を含む、デフェンシンペプチドを同定する方法：ゲノミックク ローンのライブラリーを、進化的に保存されたデフェンシン配列由来のオリゴヌ クレオチドプローブを用いてスクリーニングし、その際、該プローブの該クロー ンヘのハイブリダイゼーシヨンが、該クローンがデフェンシンペプチドをコード するＤＮＡ配列を含有する可能性を示すものであり；そして 該クローンの特徴を明らかにして、デフェンシンペプチドをコードするＤＮＡ配 列を確認する。
52. ５２．プローブが配列各号：３５で定義される配列の少なくとも一部分を含む、 請求項５１の方法。