JPH07504817A - Ｂ２９（Ｉｇ‐βまたはＩｇ−γ）を含むレセプタ複合体およびその利用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３１、請求の範囲第７〜１１項の何れか１項に記載のＲＮＡ分子て形質転換され た単細胞宿主。

３４、該抗体がモノクローナル抗体である請求の範囲第３２項記載の単細胞宿主 。

３５、該モノクローナル抗体か腫瘍細胞またはその成分を認識する請求の範囲第 ３４項記載の単細胞宿主。

３６、該モノクローナル抗体がウィルスまたはその一部を認識する請求の範囲第 ３４項記載の単細胞宿主。

３７、該モノクローナル抗体が、少なくともｇｌ１１２０サイトのＣＤ４レセプ タに結合する部分を認識する請求の範囲第３６項記載の単細胞宿主。

３８、請求の範囲第４〜６項の何れか１項に記載のＤＮＡ構築物を含有する組み 換えウィルス。

３９、請求の範囲第７〜１１項の何れか１項に記載のＲＮＡ分子含有する組み換 えウィルス。

４０、発現に際して、ヒト膜固定１ｇＭ定常部を含むＩｇｌＪ重鎮またはそのフ ラグメントをコードする遺伝子またはその誘導体を含むことを特徴とする組み換 えウィルス。

４１、発現に際して、ヒト膜固定１ｇＭ定常部を含む［ｇＭ重鎮またはそのフラ グメントをコードする遺伝子の誘導体を、ＲＮＡ配列の形として含有する組み換 えウィルス。

４２、請求の範囲第１〜６項の何れか１項に記載のＤＮＡ構築物または請求の範 囲第７〜１１項の何れか１項に記載のＲＮＡ分子で形質転換されたＴ−リンパ細 胞、マスト細胞またはマクロファージ。

４３、含まれるゲノムから、発現に際してＣＤ４レセプタをコードする遺伝子を 欠落させることにより更に変性された請求の範囲第４２項に記載のＴ−リンパ細 胞、マスト細胞またはマクロファージ。

４４、更に、抗体で形質転換された請求の範囲第４２項に記載のＴ−ＩＪンパ細 胞、マスト細胞またはマクロファージ。

４５、　Ｈ［Ｖウィルスまたはその成分に結合する抗体で更に形質転換された請 求の範囲第４３項に記載のＴ−リンパ細胞、マスト細胞またはマクロファージ。

４６、該抗体が、腫瘍、ミコバクテリア生物またはウィルス、もしくは該腫瘍、 ミコバクテリア生物またはウィルスの成分に結合するモノクローナル抗体である 請求の範囲第４４項に記載のＴ−リンパ細胞、マスト細胞またはマクロファージ 。

４７、Ｔ−リンパ細胞を、発現に際してＢ−リンパ細胞由来の免疫グロブリンお よびタンパク８２９両者をコードする遺伝子でトランスフェクションすることを 含む、Ｔ−リンパ細胞の免疫性を改善する方法。

４８、更に、該Ｔ−リンパ細胞を、発現に際してタンパクＭＢＩをコードする遺 伝子でトランスフェクションする工程をも含む請求の範囲第４７項に記載の方法 。

４９、更に、該トリンバ細胞を抗体でトランスフェクションする工程をも含む請 求の範囲第４７項に記載の方法。

５０、該抗体が、腫瘍、ウィルス、寄生体またはミコバクテリア、もしくは該腫 瘍、ウィルス、寄生体またはミコバクテリアの成分に対して生成されたモノクロ −ナル抗体である請求の範囲第４９項に記載の方法。

５１．化合物をその免疫調節活性につきスクリーニングする方法であって、該化 合物と請求の範囲第４７．４８または４９項に記載の変性されたＴ−リンパ細胞 と結合し、 抗原の攻撃に対する応答における、カルシウムフラックス、ホスホイノシトール 代謝回転またはｒ−リンパ細胞内のリンホカイン発現を測定し、標準値と、該カ ルシウムフラックス、ホスホイノシトール代謝回転または該リンホカイン発現と を比較する、 各工程を含むことを特徴とする上記方法。

５２、請求の範囲第１〜６項の何れか１項に記載のＤＮＡ構築物または請求の範 囲第７〜１１項の何れか１項に記載のＲＮＡ分子で形質転換されたＴ−リンパ細 胞、マスト細胞またはマクロファージ細胞の細胞表面上における、Ｂ−リンパ細 胞由来のＩｇＭの免疫反応性を高める方法であって、ｒ−リンパ細胞、マスト細 胞またはマクロファージ細胞をタンパクＭＢ＋で処理するか、あるいはｒ−リン パ細胞を、発現に際して該タンパクＭＨＩをコードする遺伝子またはその誘導体 でトランスフェクションする工程を含むことを特徴とする上記方法。

５３、治療を必要とする哺乳動物の患者における、免疫系疾患、腫瘍、またはミ コバクテリア、寄生体もしくはウィルス感染を治療する方法であって、該哺乳動 物に、有効量の請求の範囲第４２項に記載のＴ−リンパ細胞、マスト細胞または マクロファージ細胞を投与することを特徴とする上記方法。

５４、治療を必要とする哺乳動物の患者における、免疫系疾患、腫瘍、またはミ コバクテリア、寄生体もしくはウィルス感染を治療する方法であって、該哺乳動 物に、有効量の請求の範囲第４４項に記載のＴ−リンパ細胞、マスト細胞または マクロファージ細胞を投与することを特徴とする上記方法。

５５、治療を必要とする哺乳動物の患者におけるウィルス感染を治療する方法で あって、該哺乳動物に、有効量の請求の範囲第４９項に記載の変性されたＴ−リ ンパ細胞、マスト細胞またはマクロファージ細胞を投与することを特徴とする、 上記方法。

５６、治療を必要とする哺乳動物の患者における、ＨＩＶ感染を治療する方法で あって、該患者に、有効量の請求の範囲第４３項に記載のＴ−リンパ細胞、マス ト細胞またはマクロファージ細胞を投与することを特徴とする上記方法。

５７、治療を必要とする哺乳動物の患者における、ＨＩＶ感染を治療する方法で あって、該患者に、有効量の請求の範囲第４５項に記載のＴ−リンパ細胞、マス ト細胞またはマクロファージ細胞を投与することを特徴とする上記方法。

５８、治療を必要とする哺乳動物の患者における腫瘍または感染サイトにリンホ カインを投与する方法であって、発現の際にＢ−リンパ細胞由来の１−タンパク およびタンパク８２９両者をコードするＤＮＡ配列でトランスフェクションし、 更に該腫瘍または腫瘍型、感染性の生物または該腫瘍または生物のフラグメント でトランスフェクションしたＴ−リンパ細胞、マスト細胞またはマクロファージ 細胞の有効量を、該患者に投与することを含み、該トリンパ細胞が存在する！１ Ｇ（ＣキたはＡＰＣ活性に本質的に独立であり、かつ該腫瘍または感染性生物に 結合した際に、該リンホカインを発現するのに適したものであることを特徴とす る上記方法。

５９、サンプル中における腫瘍組織の存在、その濃度または活性を検出する方法 であって、 該サンプルを、発現の際にＢ−リンパ細胞由来の１ｇＭタンパクおよびタンパク ８２９両者をコードする遺伝子および発現に際して腫瘍組織を認識し、かつ結合 する抗体をコードする遺伝子によって形質転換されたＴ−リンパ細胞、マスト細 胞またはマクロファージ細胞の一定量と結合し、該トリンバ細胞、マスト細胞ま たはマクロファージ細胞により発現されたリンホカインの量を測定し、 発現された該リンホカインの量を標準値と比較する、工程を含むことを特徴とす る上記方法。

６０、サンプル中における感染性生物の存在、その量または活性を検出する方法 であって、 該サンプルを、発現の際にＢ−リンパ細胞由来の１ｇＭレセプタタンパクをコー ドする遺伝子、発現に際して８２９タンパクをコードするもう一つの遺伝子およ び感染性生物を認識する抗体によって形質転換されたＴ−リンパ細胞、マスト細 胞またはマクロファージ細胞と結合し、該トリンバ細胞、マスト細胞またはマク ロファージ細胞により発現されたリンホカインの量を測定し、 発現された該リンホカインの量を標準値と比較する、工程を含むことを特徴とす る上記方法。

６１、請求の範囲第５９または６０項記載の方法を実施するためのキ・ントであ って、一定量の、該請求の範囲に記載の如くトランスフェクションされたＴ−リ ンパ細胞、マスト細胞またはマクロファージ細胞と、リンホカインを検出する標 識化合物と、該方法を実施するための指針とを含むことを特徴とする上記キット 。

６２、製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第１〜６項の何 れか１項に記載のＤＮＡ構築物または請求の範囲第７〜１１項の何れか１項に記 載のＲＮＡ分子を含む薬理組成物。

６３、製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第１９項に記載 の抗体を含むことを特徴とする薬理組成物。

６４、製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第３０項に記載 の単細胞宿主を含むことを特徴とする薬理組成物。

６５、製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第３１項に記載 の単細胞宿主を含むことを特徴とする薬理組成物。

６６、製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第３２項に記載 の単細胞宿主を含むことを特徴とする薬理組成物。

６７、製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第３３項に記載 の単細胞宿主を含むことを特徴とする薬理組成物。

６８、製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第３８項に記載 の組み換えウィルスを含むことを特徴とする薬理組成物。

６９、製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第３９項に記載 の組み換えウィルスを含むことを特徴とする薬理組成物。

７０、製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第４０項に記載 の組み換えウィルスを含むことを特徴とする薬理組成物。

７１、製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第４１項に記載 の組み換えウィルスを含むことを特徴とする薬理組成物。

７２、製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第４２項に記載 のＴ−リンパ細胞、マスト細胞またはマクロファージ細胞を含むことを特徴とす る薬理組成物。

７３、製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第４３項に記載 のＴ−リンパ細胞、マスト細胞またはマクロファージ細胞を含むことを特徴とす る薬理組成物。

７４、製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第４４項に記載 の組み換えウィルスを含むことを特徴とする薬理組成物。

７５、製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第４５項に記載 の組み換えウィルスを含むことを特徴とする薬理組成物。

７６、製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第４６項に記載 の組み換えウィルスを含むことを特徴とする薬理組成物。

明　細　書 ８２９　（ｒｇ−βまたは【ｇ−γ）を含むレセプタ複合体およびその利用本明 細書に記載する発明は、一般に細胞性免疫および細胞性免疫系成分による抗原の 認識に関する。このような細胞性成分は抗原−認識レセプタを含み、該レセプタ は一般にＩｇ超超遺伝子群範嗜に入る。このような細胞性成分間の差異、例えば Ｔ−およびＢ−リンパ細胞間の差異か、本明細書に含まれる教示に従って利用で きる。

発明の背景 体液性免疫応答は、一般に細胞膜上に存在する免疫グロブリンに対する抗原の結 合により開始する。該細胞表面上において、該抗原と免疫グロブリンタンパクと は、レセプターアセンブリ中に含まれる１種以上の非−免疫グロブリンタンパク 、例えｌｉ’ＭＢｌおよびＢ２９の存在下で反応できる。

Ｂ−およびＴ−リンパ細胞の抗原レセプタは、ｒｇ超超遺伝子群その特異性は一 連のゲノム再配列によって決定される）の構成員である。何れの場合にも、これ ら細胞上に存在する該レセプタのリガンド結合ドメインは、ジスルフィド結合に より一緒に結合されている、別々にコードされるポリペプチドの組み合わせによ り規定される。更に、両レセプタ共に該細胞表面において数個の他のタンパクと 結合している。

長い間、抗原発現細胞（Ａｎｔｉｇｅｎ　Ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ　Ｃｅ１ｌｓ　 （ＡＰＣ））および／または主要組織適合複合体（ｌｉｏ（Ｃ）により複合化さ れたもしくは発現された化合物に対して、Ｔ−リンパ細胞か反応性であることか 認識されている。通常、Ｔ−リンパ細胞は、聞Ｃとの関連でＡＰＣの表面上に発 現する抗原を認識する。従って、ＭＨＣは該Ｔ−リンパ細胞による抗原認識を誘 発し得る。

ＭＨＣは抗原を識別し、かつ「活性化する」多数の分子を含み、該ト細胞レセプ タによる認識、結合および該細胞による該抗原の後のインターナリゼーションを 生ずる。

このＴ−細胞レセプタ（ＴＣＲ）は少なくとも７個の異なるポリペプチドを含み 、該ポリペプチドは抗原特異的αおよびβ鎖、シグナル発生分子であるζ鎖、並 びに第二のシグナル発生成分を形成するγ、δおよびε鎖を含む。これら全てが 効果的な会合（ａｓｓｅｍｂｌｙ）および表面輸送のために必要とされる（バイ ス＆ストボ（Ｗｅｉｓｓ　ａｎｄ　５ｔｏｂｏ）、　１９８４Ｈオオハシ（Ｏｈ ａｓｈｉ）等、　１９８５；バークハウト（Ｂｅｒｋｈｏｕ　ｔ　）等、　１９ ８８．サスマン（Ｓｕｓｓｍａｎ）等、　１９８８）　、　Ｂ−細胞中の、該ト 細胞レセプタ結合タンパクに匹敵するタンパクは、それぞれＩｇＭａおよびｌ　 ｇｌＪｂとしても知られるＭＢＩおよびＢ２９を含む（バーマンソン（Ｈｅｒｍ ａｎｓｏｎ）等、　１９８８：ホンバッハ（Ｈｏｍｂａｃｈ）等、　１９８８． サカグチ（Ｓａｋａｇｕｃｈｉ）等、　１９８８；ホンバッハ（ＨＯｍｂａＣｈ ）等、　１９９０；キャンベル（Ｃａｍｐｂｅ　ｌ　ｌ）等、　１９９１）。Ｍ ＢＩおよびＢ２９はジスルフィド結合したヘテロダイマーを形成し、該ヘテロダ イマーはＩｇＭ（ホンバッハ（Ｈｏｍｂａｃｈ）等、１９９のと結合し、かつ両 タンパクは、ＣＤ３　ｇ、　ｄおよび２（レス（Ｒｅｔｈ）、　１９８９）をも つ負に帯電した一つの細胞質問配列モチーフ（ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉ ｃ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｍｏｔｉｆ）を分は合っている。ＭＢＩおよびＢ２９は 、トランスフェクションされた繊維芽細胞およびＢ−細胞の原形質膜にＩｇＭを 輸送するのに必要とされるものと考えられる（ホンバッハ（Ｈｏｍｂａｃｈ）等 、　１９９０．フエンキタラマン（Ｖｅｎｋｉ　ｔａｒａｍａｎ）等、　１９９ １）。

変異Ｔ−細胞系および単離ＴＣＲ成分を使用した実験は、該Ｚ鎖がシグナル形質 導入にとって必要かつ十分であることを確立した（バイスマン（Ｗｅｉｓｓｍａ ｎ）等、　１９８９：フランク（Ｆｒａｎｋ）等、　１９９０．イルピング＆バ イス（ｆｒｙｉｎｇ　ａｎｄ　Ｗｅｉｓｓ）、　１９９１；ロメオ＆シード（Ｒ ｏｍｅｏ　ａｎｄ　５ｅｅｄ）、　１９９１）　ｏ更に、該ＣＤ３　ｅ鎖も、多 分割の様式でＴ−細胞の活性化を誘発できる。

該Ｔ−細胞、または該単離Ｚもしくはｅ鎖の架橋は、プロティンキナーゼのＣＤ ４５−依存性活性イし高いホスホイノシトール代謝回転およびカルシウム動態化 に導（。極めて類似する一連の事象かＢ−細胞表面上での１ｇＭの架橋により誘 発されるが、該１ｇＭ結合タンパクの機能的役割はこれまでのところ十分に明確 にされていない。

Ｔ−リンパ細胞レセプタの反応性を改善して、Ｍｌ（Ｃおよび／またはＡＰＣの 必要性を排除することか、長い間望まれていた。

従って、本発明の一つの目的は、ＩｇＭ−関連ルー免疫グロブリンタンパクの役 割を明確にすることにある。

本発明のもう一つの目的は、Ｔ−リンパ細胞の免疫性を改良して、該免疫性を本 質的にＭＢＣ独立性とする方法を提供することにある。

更に別の本発明の目的は、Ｔ−およびＢ−リンパ細胞および免疫系活性（例えば 、抗原認識、ＭＭＣ複合化または反応性、Ｂ−細胞表面の［ｇＭ活性および他の ファクタを包含する免疫系の活性を評価する方法を提供することにある。

これらのおよび他の本発明の目的は、本明細書の教示から、当業者には明らかで あろう。

発明の概要 本発明は、細胞性免疫を改善する方法を開示し、該方法はＴ−リンパ細胞をＢ− 細胞由来の免疫グロブリンおよびＢ２９でトランスフェクションする工程を含む 。

このトランスフェクションされたＴ−リンパ細胞は、種々の利用法として本明細 書に含まれる。

本発明は、Ｂ−細胞由来の免疫グロブリンおよび８２９でトランスフェクション されたマスト細胞およびマクロファージ細胞をも包含する。

また、本発明は本明細書に記載されるＤＮＡおよびＲＮＡ構築物、並びにかかる 分子を認識する抗体構築物、Ｔ−リンパ細胞表面上に存在する免疫グロブリンお よび非−１ｇタンパクをも包含する。

図面の簡単な説明 本発明を、以下の図面と関連して詳細に説明する。

第１図はＤＮＡ構築物、およびヒト免疫グロブリンの細胞表面での発現を示すも のである。

（Ａ）免疫グロブリン、８２９およのｉＢ１発現ベクターのマツプ。スブリーン フォーカスフオーミングウイルスーロングタームリピート（Ｓｐｌｅｅｎ　Ｆｏ ｃｕｓ　ＦｏｒｍｉｎｇＶｉｒｕｓ−Ｌｏｎｇ　Ｔｅｒｍ　Ｒｅｐｅａｔ：　５ ＦＦＶ　ＬＴＲ）プロモータを、Ｔｍ胞発現用の全ての構築物で使用した。ヒト 成長ホルモン（ｈＧＨ）イントロンおよびポリアデニル化シグナルをＢ２９およ ｎＢＩ　ｃＤＮＡ両者に添加し、ヒスチジノール耐性遺伝子をＭａ＋プラスミド に含めた。

５１０７からのホスホリルコリン（ＰＣ）特異的マウス可変部を、膜結合型のみ に組み立てられるように操作されたヒト重鎮定常部と結合した。その軽鎖は５１ ０７に可変部およびヒトに定常部を含んていた。該重鎮および軽鎖はネオマイシ ン耐性遺伝子として同一のプラスミド上にあった。

（Ｂ）トランスフェクションされたジャーカット細胞上での、ヒトＩｇＭの表面 発現のフローサイトメトリー分析。相対的細胞数を、対数尺度で蛍光強度に対し てプロットする。トランスフェクションされた構築物、細胞系および細胞選別に より該細胞系を富化した回数（ＳＸ　−）を各パネルの上部に示す。「コントロ ール」とは、未染色細胞を示し、ＧＡＨ［ＧＭとはＦＩＴＣ複合山羊抗−ヒトＩ ｇＭにより染色したことを示す。５ＦＦＶ　：スブリーンフオーカスフオーミン グウイルスーロングタームリピート；　Ｂ２９：　Ｂ２９　ｃＤＮＡ；　ＭＢＩ ：　ＭＢＩ　ｃＤＮＡ；　ｈＧＨ：ヒト成長ホルモンスプライスおよびポリアデ ニル化シグナル；　Ｈｉｓ：ヒスチジノール耐性遺伝子：　ｍ１ｇＭ：ヒトＩｇ Ｍ重鎮のホスホリルコ１ル特異的、膜結合形；にコホスホリルコリン特異的に軽 鎖；Ｎｅｏ：ネオマイシン耐性遺伝子、＃：細胞系数；ＳＸ−：細胞選別により 、細胞系を表面１ｇＭに対して富化した回数：　ｐ４６７：　８２９発現ベクタ ー；　ｐ４７４：　ＭＢＩ発現ベクター；　ｐ４６８：　Ｉｇ）Ｊ発現ベクター 。

第２図　１ｇＭタンパク、Ｂ２９およびＭＢＩ　ｍＲＮＡの発現（Ａ）トランス フェクションしたジャーカット細胞由来のアフィニティー精製されたホスホリル コリン結合免疫グロブリンおよびコントロールの銀染色したＳＯＳアクリルアミ ドゲル。

（Ｂ）該トランスフェクションした細胞系における８２９およｎＢ１発現のノー ザン分析。該細胞の型、トランスフェクションした構築物、および細胞系の数（ 第１Ｂ図）を各レーンの上部に示した。ＩｇＭか［ｇＭ、　＃３の産生のための 出発細胞系であった。これは１−２％の表面［ｇＭ発現を示した。ｍおよびｋは 精製された標準物質に基づいて決定した重鎮および軽鎖の位置を示す。Ｋｂはキ ロ塩基対を、またＫｄはキロダルトンを表す。

＊３［ｇ：トランスフェクションした細胞系由来の表面沃素化タンパクのアフィ ニティー精製 ホスホリルコリン結合免疫グロブリンおよび関連ポリペプチドを、表面沃素化し た細胞の１％ジギトニン溶解物からアフィニティー精製した。その細胞型、トラ ンスフェクションした構築物および細胞系の数を各レーンの上部に示す。ｍおよ びｋは精製された標準物質に基づき決定した重鎮および軽鎖の位置を示す。Ｋｄ はキロダルトンを表す。

＊４［Ｚ：トランスフェクションしたジャーカット細胞のカルシウムフラックス アッセイ フラー２（Ｆｕｒａ−２）を有する細胞を、１．５μｇ／ｍｌの抗−ＣＤ３、Ｉ Ｏμｇ／ｍｌの抗−ヒト１９Ｍ。

１０μｇ／＋ｎ　ｌのイソタイプコントロールモノクローナル抗体または５００ ｎｇ／ｍｌのウシ血清アルブミンに結合したホスホリルコリン（ＰＣ−ＢＳＡ） に応答するカルシウム動態化について、蛍光法によりアッセイした。細胞型およ びトランスフェクションした構築物を左側に、また添加した試薬を上部に示した 。

記号：ＩｇＧ］：イソタイプコントロールモノクローナル抗体；　ａ−ＣＤ３　 ：抗−ＣＤ３抗体；　ａ−１ｇＭ：　抗−１ｇＭ抗体：　ＰＣ−ＢＳＡ：ウシ血 清アルブミンに結合したボスボリルコリン、ジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ）：　 ）−ランスフエクションされていないジャーカット細胞；　ＩｇＭ：　ＩｇＭ　 ＃３でトランスフェクションしたジャーカット細胞（第１８図）：ＩｇＭ＋Ｂ２ ９：　ＩｇＭ＋Ｂ２９　＃４でトランスフェクションしたジャーカット細胞（第 １Ｂ図）；ＩｇＭ＋Ｂ２９＋ＭＢ１：　ＩｇＭ＋Ｂ２９１ＪＢＩ　＃９でトラン スフェクションしたジャーカット細胞（第１Ｂ図）３時間および［Ｃａ″２１は 右下部に示した。

＊５１１］：トランスフエクションしたジャーカット細胞によるイノシトールト リポスフエート（ＩＦ５）の生産 代謝的に［’Ｈ］　ミオイノシトールで標識した細胞を抗−ＣＤ３、抗−ヒト！ ｇＭまたはＩｇＧＩイソタイプコントロール抗体で刺激し、かつイノントー／Ｉ 、）リボスフエート（ＩＦ５）を抽出およびアニオン交換クロマトグラフィーに より測定した。刺激されなかったＩＦ５の産生の％をＹ軸上にプロットした。誤 差バーは平均（ｎ＝２）からの標準偏差を表す。記号：コントロール：一次抗体 を含まず。他の記号は第４図と同様である。

１’Ｅ６１１：　）ランスフエクションしたジャーカット細胞による、抗−［ｇ Ｍに応答するＩＬ−２分泌 細胞系を、ホルボール−ミリステートアセテート（ＰＭＡ）の存在下で、抗−Ｃ Ｄ３、抗−ヒトＩｇＭまたはＩｇＧ１イソタイプコントロール抗体で、またはＰ ＭＡ単独で刺激した。２回の独立の実験に対して分泌されたＩＬ−２のＵ／ｍｌ 数の平均＋／−標準偏差（ｎ−３）をＹ軸に示した（バイオロジカルレスポンス モディファイヤーズプログラム（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅ　Ｍ ｏｄｉｆｉｅｒｓ　ＰｒｏｇｒａｍＸ［ＮＣバイオメディカル社（［ＮＣＢｉｏ ｍｅｄｉｃａｌ　Ｉｎｃ、））。記号：ＰＭＡ：ホルボール−ミリステートアセ テート；　ＩｇＭ＋Ｂ２９：［ｇＭ＋８２９　＃５でトランスフェクションした ジャーカット細胞（第１Ｂ図）；他の記号は第４図と同様である。

＠７１１Ｊ：トランスフエクションしたジャーカット細胞による、ホスホリルコ リンに応答したＩＬ−２の分泌 ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはウシ血清アルブミンと結合したホスホリル コリン（ＰＣ−ＢＳＡ）により、細胞系を刺激し、または刺激しなかった。２回 の独立の実験に対して分泌されたＩＬ−２のＵ／ｍｌ数の平均＋／−標準偏差（ ｎ＝３）をＹ軸に示した（バイオロジカルレスポンスモディファイヤーズプログ ラム（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ＲｅｓｐｏｎｓｅＭｏｄｉｆｉｅｒｓ　Ｐｒｏｇ ｒａｍＸＩＮＣバイオメディカル社（ＩＮＣＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｉｎｃ、） ）。記号：ＢＳＡ　＋ウシ血清アルブミン；　ＩｇＭ＋Ｂ２９：　ＩｇＭ＋Ｂ２ ９　＃５でトランスフェクションしたジャーカット細胞（第１Ｂ図）；他の記号 は第４図と同様である。

”！８［Ｎ：トランスフェクションしたジャーカット細胞における、ＰＣ−ＢＳ Ａに対するドーズ応答性およびモノマーホスホリルコリンによる遮断（Ａ）増大 するドーズのＰＣ−ＢＳＡに応答するカルシウム動態化につき、フラー２をもつ 細胞を蛍光法によりアッセイした。該カルシウム濃度（Ｙ軸）は実験手順に示す ようにして算出し、対数尺度でＰＣ−アルブミンの濃度（Ｘ軸）に対してプロッ トした。

このトランスフェクションした溝築物および細胞系＃を示す。ダイヤモンド形記 号はＩｇＭ＋８２９＋ＭＢ１でトランスフェクションしたジャーカット細胞を表 し、正方形の記号は１ｇＭ＋８２９でトランスフェクションしたジャーカット細 胞を表す。

ＣＢ）　１ｇＭ＋８２９でトランスフェクションした細胞系＃５を、矢印で示さ れたように、２．５−のホスホリルコリンで刺激し、次いで５００　ｎｇ／ｍｌ のＰＣ−ＢＳＡおよび最後に５ｍｇ／ｍｌの抗−ＣＤ３モノクローナル抗体で刺 激した。記号二ＰＣ：モノマーポスポリルコリン、他の記号は第４図と同様であ る。

１９１１　：　ＩｇＭ　、　Ｂ２９およｎＢ１でトランスフェクションした別の 細胞系のアッセイ （Ａ）　ＩｇＭ　、　Ｂ２９およびＭＢＩでトランスフェクションしたマクロフ ァージ細胞系Ｐ３８８Ｄ１．刺激はホスホリルコリン−ＢＳＡにより実施した。

（Ｂ）　ＩｇＭ　、　Ｂ２９およ汎ＢｌてトランスフェクションしたＭＯ細胞系 Ｐ３８８Ｄ１．刺激は抗−ヒトＩｇＭにより実施した。

！＋（＠　：　ＩｇｌＪ　、　Ｂ２９およびＭＢＩでトランスフェクションした マスト細胞のアッセイ （Ａ）抗−１ｇＭにより刺激したマスト細胞Ｐ８１５の刺激。

（Ｂ）　ＩｇＭ　、　Ｂ２９およびＭＢＩでトランスフェクションし、かつホス ホリルコリン−ＢＳＡによる刺激したマスト細胞Ｐ８１５の刺激。

（Ｃ）マスト細胞Ｐ８１５のコントロール。

詳細な説明 本発明は体液性免疫系細胞成分の表面上のレセプタおよび関連分子、例えばＴ− およびＢ−リンパ細胞、発現に際してこれらのレセプタ分子をコードするＤＮＡ 分子およびｍＲＮＡ等のその誘導体、同様にかがる分子または他の分子をコード するセンスおよびアンチ−センスＲＮＡ分子、このようなタンパクおよび核酸誘 導体を認識する抗体、Ｂ−細胞レセプタおよびレセプタ関連分子各々およびその 組み合わせ例えば複合体を認識する抗体、並びにこれら抗体およびリガンド両者 を認識する抗−イデオタイブ抗体に関し、これらＢ−細胞レセプタおよびレセプ タ関連分子に対するアゴニストおよびアンタゴニスト等をも包含する。多数の製 造法およびその使用をも含む。

本発明の好ましい局面は、Ｔ−リンパ細胞を改良して、該細胞を実質的にＭＨＣ の存在またはその活性に独立のものとする方法で表される。

本発明のもう一つの好ましい局面は、マスト細胞またはマクロファージ細胞を改 良して、ＭＢＣの存在または不在下での抗原の認識において、該細胞を活性なも のとする方法によって表される。

池の本発明の好ましい態様は、本明細書に記載するＤＮＡ構築物およびかかる構 築物を組み込んだプラスミドに関する。

更に他の本発明の好ましい態様は、本明細書に記載するプラスミドでトランスフ ェクションした単細胞宿主に関する。

本発明の更に別の好ましい態様は、ポリクローナル、モノクローナルおよびキメ ラ抗体を包含する本明細書に記載する抗体に関する。好ましいキメラ抗体はＢ２ ９タンパクまたはＢ２９のフラグメントと組み合わせた、免疫グロブリンタンパ クを含む。もう一つの好ましいキメラ抗体は、免疫グロブリン分子またはフラグ メントおよびＢ２９以外のタンパク分子またはフラグメント、例えｌ；！’Ｎａ ｔｕｒｅ、　Ｖｏｌ。

３３８：　３８３　（１９８９，３月３０日）に記載されているものを含む。

これらキメラ抗体の多くが本明細書に記載する共通アミノ酸配列を含むであろう 。

この詳細な説明に従って、以下の定義を適用する。

発現制御配列：他のＤＮＡ配列の転写および／または翻訳を制御並びに調節する ＤＮＡ配列を意味する。

機能可能に結合した（ｏｐｅｒａｔｉｖｅｌｙ　１ｉｎｋｅｄ）：発現制御配列 があるＤＮＡ配列の転写および／または翻訳を制御並びに調節する場合に、該Ｄ ＮＡ配列は該発現制御配列に機能可能に結合した、という。この用語［機能可能 に結合した」とは、発現すべきＤＮＡ配列の上流側（前部）に適当な出発シグナ ル（例えば、ＡＴＧ）を有し、かつ正確な読み取り枠か該発現制御配列の制御下 での該ＤＮＡ配列の発現並びに該ＤＮＡ配列によってコードされる所定の生成物 の生産を可能とするように維持する。

組み換えＤＮＡ分子内に挿入しようとする遺伝子が適当な出発シグナルを含まな い場合には、このような出発シグナルは該遺伝子の前部に挿入できる。

坊μシ免疫グロブリン分子またはその機能性のフラグメント、例えばＦＡｂ　。

Ｆ（ａｂ’　）　！またはｄＡｂ、ある抗体処方物は、該処方物中の個々の免疫 グロブリン分子の少なくとも一部が特定の抗原を認識（即ち、結合）する場合に 、該特定の抗原に対して反応性である。ある抗体処方物は、該処方物中の個々の 免疫グロブリン分子のある抗原に対する結合が、一般に利用されている方法によ り検出不能である場合には、該抗原に対して非−反応性である。本明細書に記載 する抗体のフラグメントは、特に５１０７由来のホスホリルコリン特異的マウス 可変部、ヒト重鎮定常部、膜に結合した状態の該ヒト重鎮定常部の誘導体、およ び（単独およびヒトに定常部と機能可能に結合した）該軽鎖５１０７に可変部を 含む。従って、キメラ体も同様に含まれる。

標準ハイブリダイゼーション条件、ハイブリダイゼーションおよび洗浄両者に対 して、塩および温度条件は実質的に５ＸＳＳＣおよび６５°Ｃに等しい。

ＤＮＡ配列：組み換えＤＮＡ技術を使用して調製または単離したポリヌクレオチ ド配列。これらは、ｃＤＮＡ配列、天然のゲノムから単離されたＤＮＡ配列およ び合成りＮＡ配列を特徴する請求の範囲で使用するようなこの用語は、自然に存 在するような天然産のＤＮＡ配列を含むことを意図しない。

レセプタおよびレセプタ複合体・単一および複数両者を含み、リガンド認識サイ トを樹立するタンパクを含むｌまたはそれ以上の構造の存在を意図する。従って 、１種以上のタンパクを含む可能性があり、またリガンドの認識に直接関与して いない１種以上の化合物、例えＩ；！’ＭＢＩ　、　Ｂ２９および他の化合物（ これらは該認識反応に関与していないが）が必要とされ、かつ好ましく、あるい は典型的には該認識反応が起こる場合に存在する。この種の全ての化合物を包含 し、これらは単独でも、組み合わせであってもよい。

本発明で使用するような組み換え分子の発現は、該宿主細胞中に存在する配列に よってコードされる生成ポリペプチドの翻訳後の変性を含む可能性がある。例え ば、哺乳動物細胞中において、発現はとりわけｍＲＮＡ分子またはポリペプチド の生産、グリコジル化、該ポリペプチドのりビデ−ジョン（ｌ　１ｐｉｄａｔｉ ｏｎ）またはホスホリル（［１，、またはシグナル配列の開裂による「成熟」タ ンパクの生成を含む可能性かある。従って、本明細書で使用するような、用語「 ポリペプチド」は完全な長さのポリペプチド、成熟タンパクのフラグメントおよ びその変性体または誘導体、例えば該ポリペプチド、シグナル配列を保持するポ リペプチド、匹敵する生物学的活性を有する端を切り取ったポリペプチド等のグ リコジル化変性体を包含する。

同様に上記した如く、該配列の「誘導体」なる表現は、該タンパクの発現中に発 生する、中間的分子の生産を包含し得る。典型的には、この表現は、同様に後に 発現されるはずの特定のポリペプチドをコードするｍＲＮＡの発現を含む。この 例において、該ｍＲＮＡ分子は特定の発現ベクター中に含まれる該ＤＮＡコード 配列の誘導体であると考えられる。

本発明明細書で使用するシグナルおよびシグナル形質導入とは、該レセプタの架 橋（結合）に応答して、リガンドとの反応により該細胞内に生ずる変化を意味す る。このような細胞変化の例は、酵素反応のカスケードの開始、カルシウムフラ ックスにおける急速な増加、ホスホイノシトール（ＩＦ５）の代謝回転の増加お よびリンパ細胞からのリンホカインの分泌を包含する。

免疫グロブリンによるシグナル形質導入に関するこれらの構造上および機能上の 要件を立証する最初の工程として、Ｔ−リンパ細胞内の該免疫グロブリン抗原レ セプタ（ジャーカットＴ細胞系）は、Ｂ−リンパ細胞由来のクローン化成分のト ランスフェクションにより回復した。Ｔ−細胞表面への［ｇＭの輸送は、Ｂ２９ と共に該免疫グロブリンの重鎮および軽鎖の同時発現を必要とした。更に、この トランスフェクションしたレセプタは、Ｂ２９の存在下で十分に活性であった。

ＭＢＩ即ち第二ＩｇＭ関連ポリペプチドは、輸送またはシグナル形質導入何れに 対しても必要とされなかった。

免疫グロブリンレセプタ機能は、Ｂ−細胞クローン化レセプタ成分のヒトＴ−リ ンパ細胞へのトランスフェクションにより「回復し」、かつＴ−細胞（「宿主」 ）表面へのＩｇＭの輸送は、８２９の同時発現を必要とすることに気付いた。更 に、［ｇＭと８２９との組み合わせによる発現は、該トランスフェクションされ たＴ−細胞内で発現された免疫グロブリンによる抗原特異的シグナル形質導入を 回復するのに十分てあった。このことは８２９に関する機能的要求を確立し、か つＴ＝およびト細胞のシグナル発生機構が構造的に相同であることを示唆してい る。

Ｔ−細胞内でのＩｇＭの表面発現 ホスホリルコリン特異的免疫グロブリンレセプタ成分は、スブリーンフォーカス フォーミングウイルスーロングターミナルリピート（ＳＦＦＶ−ＬＴＲ）プロモ ータに基＜　ＤＮＡ構築物の安定なトランスフェクションにより、Ｔ−細胞中に 発現された（サイト−（Ｓａｉｊｏ）等、　１９８７Ｘ第１Ａ図）。膜に固定さ れたｒｇＭの合成を行うヒト［ｇｌＪ重鎮ミニジーン（ダナー＆レダー（Ｄａｎ ｎｅｒ　ａｎｄ　Ｌｅｄｅｒ）、　１９８５）を、ホスホリルコリン特異的重鎮 の可変部（クルーズ（Ｃｒｅｗｓ）等、　１９８１）と結合した。その軽鎖は、 ヒトに定常部遺伝子（ハイクー（Ｈｉｅｔｅｒ）等、　１９８２）と結合した、 対応するに可変部（コリン（Ｋｗａｎ）等、　＋９８１）を含んでいた。該免疫 グロブリンの重鎮および軽鎖の協調発現を保証するために、２個の転写単位を、 ネオマイシン耐性遺伝子をもつ単一のプラスミド内に組み込んだ。ヒト成長ホル モン（ｈＧＨ）ポリアデニル化およびスプライス共通配列（サイト−（Ｓａｉｔ ｏ）等、　１９８７）をマウスＭＢＩおよび８２９ｃＤＮＡに添加し、かつヒス チジノール耐性遺伝子を該ＭＢＩ発現ベクター中の第二の薬物耐性マーカーとし て含めた（ハートマン＆マリガン（Ｈａｒｔｍａｎ　ａｎｄ　Ｍｕｌｌｉｇａｎ ）。

＋９８８）。

［ｇＭの発現は、ＩｇＭと８２９、または［ｇＭとＭＢＩと８２９との組み合わ せによってトランスフェクションしたジャーカット細胞の表面上で容易に検出さ れた。これとは対照的に、重鎮および軽鎖単独またはＩｇＭとＭＢＩとの組み合 わせでトランスフェクションしたジャーカット細胞上にＩｇＭを検出することは 困難であった。全ての場合において、蛍光活性化細胞選別器を使用した選別によ り、表面［ｇＭ正の細胞を富化した（第１Ｂ図）。高いレベルの表面［ｇＭ発現 が、ｒｇＭと８２９、またはＩｇＭ　＆ＭＢｌ　と８２９との組み合わせによっ てトランスフェクションした細胞系の１〜２回の選別後に達成された。しかしな がら、１８Ｍ単独でトランスフェクションした細胞系に対しては８回の選別が必 要であり、またＩｇＭとＭＢＩとの組み合わせは常に負であった（第１Ｂ図）。

該トランスフェクションしたホスホリルコリン特異的免疫グロブリン遺伝子の生 成物を、セファロースに結合したホスホリルコリン（ＰＣ）　（ＰＣ−セファロ ース）を用いたアフィニティー精製により、適宜集めた。等価な量の重鎮および 軽鎖両者を、表面発現のレベルとは無関係に、全ての細胞系およびクローン誘導 体から得た（第Ｕ図）。かくして、表面１ｇＭ発現のレベルは単にＩｇｌＪ合成 量の関数ではなかった。更に、トランスフェクションされたＢ２９およｒＪＭＢ ｌのｍＲＮＡの定常状態のレベルはＢ−細胞コントロールに匹敵した（第２Ｂ図 ）。該トランスフェクションされた遺伝子から生成された該ｍＲＮＡは、Ｂ−細 胞の片割れのものよりも幾分大きい。

というのは、これらが付随的なヒト成長ホルモン配列を含むからである。重鎖、 軽鎖およびＢ２９の組み合わせか、Ｔ−細胞表面へのＩｇＭの効果的な輸送にと って十分であるものと結論付けた。これとは対照的に、８２９の不在下では、表 面［ｇＭ正細胞を得るのに強力な選別が必要であった。

トランスフェクションしたｌｄｌを８２９およびＭＢＩと結合するＢ２９およｒ ＪＭＢｌがＩｇＭと結合するか否かを決定するために、我々はトランスフェクシ ョンされたＴ−細胞系およびアフィニティー精製したホスホリルコリン結合［ｇ Ｍを沃素化し、かつ分子をジギトニン溶解物由来のＰＣ−セファロースと結合し た（第３図）。Ｂ２９（４４Ｋｄ）に対する適当な電気泳動移動度をもつポリペ プチドを、ＩｇＭおよび８２９でトランスフェクションしたジャーカット細胞由 来の免疫グロブリン重鎮および軽鎖と共に精製した。同じポリペプチドと３種の 付随的な種を［ｇＭ　５Ｂ２９およｎＢ！　トランスフェクシント（ｔｒａｎｓ ｆｅｃｔａｎｔｓ）から同時に精製した（第３図）。得られた３２Ｋｄのバンド はＭ旧と一致した。５２ｋＤおよび３９Ｋｄにおける付随的なバンドはＢ２９お よｎＢ１の交互ｆｆ１（ａｌ　ｔｅｒｎａｔｅ　ｆｏｒｍ）またはＴ−細胞コー ドタンパクである可能性がある。

コントロールとして、同一の実験を、表面［ｇＭのみを発現するジャーカット細 胞（細胞系＃３）を使用して実施した（第１Ｂ図）。この［ｇＭコントロールか らは、沃素化した免疫グロブリン重鎮および軽鎖を精製できたが、関連タンパク は何等観測されなかった（第３図）。結局、Ｂ２９はＴ−細胞表面上のＩｇＭと 結合し、またこの相互作用はＭＢＩの不在下で生じた。更に、ＭＢＩおよび８２ ９両者が該トランスフェクションされたＴ−細胞中に存在する場合、これら両者 かＩｇＭと結合した。

抗−レセプタ抗体によるＩｇＭの架橋はカルシウム動態化、ホスホイノシトール 代数トランスフェクションされた免疫グロブリンの機能は、最初にレセプタの架 橋に応答するカルシウムフラックスの測定により評価した。フラー２をもつ細胞 系を、モノクローナル抗−ヒトＩｇＭ抗体、モノクローナル抗−ＣＤ３またはイ ソタイプと適合させたモノクローナル抗体コントロールで処理した。ＩｇＭと８ ２９、またはＩｇＭとＢ２９とＭＢＩの何れかでトランスフェクションされたジ ャーカット細胞は、抗−１２Ｍ架橋に対して応答し、遊離状態の細胞内カルシウ ムの迅速な増加を伴った（第４図）。トランスフェクションされていないジャー カット細胞および高いレベルでＩＢＭのみを発現するジャーカット細胞は抗−１ ｇＭ架橋に対して応答しなかったが、抗−ＣＤ３に対する応答に対しては十分に 競合的であった（第４図）。更に、該イソタイプコントロール１ｇＭ抗体は何の 効果も示さず（第４図）、ポリクローナル山羊抗−１ｇＭ抗体は、モノクローナ ル抗−１ｇＭ（図示せず）と同様の効果を示した。

ホスホリパーゼＣの活性化により誘発されるイノシトールホスフェート代謝回転 は免疫グロブリンによるソゲナル形質導入のもう一つの尺度である。このカルシ ウムフラックスアッセイで得られた結果を確認しかつ拡張するために、イノシト ール代謝回転を抗−１ｇＭに応じて測定した（第５図）。ＩｇＭと８２９、また はＩｇＭと８２９とＭＢＩの何れかでトランスフェクションしたＴ−細胞系の表 面上での免疫グロブリンの架橋は、細胞性のイノシトール−３−ホスフェート（ ＩＦ５）の増加をもたらした。同じ実験において、抗−１ｇＭ抗体はトランスフ ェクションされていないジャーカット細胞に何の効果も及はさなかった（ｔＪｃ Ｓ図）。かくして、免疫グロブリンとＴ−細胞表面上で発現するＢ２９と免疫グ ロブリンとの組み合わせは、十分に機能的であり、細胞内カルシウム動態化とホ スホイノシトール代謝回転とを活性化した。

該Ｔ−細細胞レゾブタ噛み合いにより誘発される一つの生物学的エフェクター機 能はＩシー２の分泌である。トランスフェクションされた免疫グロブリンがＴ− 細胞におけるこの下流側の応答を活性化するか否かを決定するために、ＩＬ−２ の生産を抗−ＩｇＭに応して測定した（第６図）。１ｇＩｔｌと８２９、または ＩｇＭとＢ２９とムＩＢＩの何れかを発現したジャーカット細胞は抗−１ｇ１Ｊ 処理に応答してＩＬ−２を分泌した。この応答は特異的であり、トランスフェク ションされていないジャーカット細胞は抗−［ｇＭに応答しなかった。更に、同 一のコントロール細胞系は抗−ＣＤ３による刺激に応答してＩＬ−２を生産した 。細胞系の何れも、該イソタイプのコントロールモノクローナル抗体により誘発 されなかった（第６図）。

抗原により誘発されるシグナル形質導入上記の如く、Ｔ−リンパ細胞は、他の細 胞の表面上のＭＭＣと結合した処理ペプチドに応答するが、Ｂ−細胞は天然の抗 原に応答する。抗−ホスホリルコリン特異的ＩｇＭでトランスフェクションした ジャーカット細胞が、ＭＨＣの不在下で抗原を認識するか否かを決定するために 、トランスフェクションしたジャーカット細胞を、ウシ血清アルブミンと結合し たホスホリルコリン（ＰＣ−アルブミン）で攻撃した（第４および７図）。この ＰＣ−アルブミンによる攻撃はＩｇＭに加えてＢ２９を発現するＴ−細胞系内で 、カルシウムフラックスおよびＩＬ−２分泌を誘発し、一方でアルブミンのみを もつコントロールは負であった。再度、抗原刺激実験において、表面［ｇＭのみ を発現するＴ−細胞は応答を示さなかった（第４図）。

ＭＢＩの高い加算的または相乗的効果を、ドーズ応答実験で評価した（第８Ａ図 ）。

等価な量の［ｇＭを発現する細胞系は、Ｍａｌの存在に拘らず、ＰＣ−ＢＳＡの 増加する濃度に対して同様な応答を示した。何れの場合も、０．５　ｎｇ／ｍ１ 程度の低いＰＣ−アルブミンによって得られ、０．１−０．５■／ｍｌにおいて プラトーに達した。この応答はＩ　ｍｇ／ｍｌを越えるドーズにおいて減少し、 このことはシグナル発生がレセプタの架橋に依存する可能性と一致する。

従って、モノマーホスホリルコリンを使用した細胞の刺激による、シグナル発生 におけるレセプタ架橋の役割を更に調へた（第８Ｂ図）。このモノマー抗原は、 シグナル発生を誘発しないが、ＰＣ−アルブミンにより誘発される応答を遮断で きた（第８Ｂ図）。かくして、該トランスフェクションされた免疫グロブリンの 架橋はこのシグナル発生のメカニズムの重要な特徴であると考えられる。免疫グ ロブリンかＢ−細胞の原形質膜上の幾つかの他のタンパクと結合するという発見 は、レセプタ会合およびシグナル形質導入におけるこれらのアクセサリ−分子の 役割に関連する興味ある幾つかの問題をもたらす。ＩｇＭと８２９との同時発現 は、免疫グロブリンの表面発現およびそのＴ−細胞における機能両者を回復する のに十分である。

２種の免疫グロブリン関連タンパク、即ぢλＩＢ＋およびＢ２９かＢ−細胞およ び繊維芽細胞の表面上への免疫グロブリンの輸送にとって重要であるという説得 力のある証拠がある。ＭＢＩに乏しいＢ−細胞系は表面１ｇＭを発現せず、この フェノタイプはクローン化したＭＢＩの）・ランスフエクションにより回復でき る（ホンバッハ（Ｈｏｍｂａｃｈ）等、　１９９０）。かくして、ＭａｌはＢ− 細胞におけるレセプタアセンブリーに必要とされる。同様に、繊維芽細胞におい ては、ＭＢＩおよび８２９両者が［ｇＭの表面発現のために必要とされる。しか しながら、他の免疫グロブリンイソタイプはＭａｌの不在下においてさえ、Ｂ２ ９により繊維芽細胞の表面上で発現できる（ペンキタラマン（Ｖｅｎｋｉ　ｔａ ｒａｍａｎ）等、　＋９９１）。一つのモデル１１７Ｍレセプタ構造は、ＩｇＭ か、一対の１．ｌＢＩ　と８２９とのへテロダイマーと相互作用することを提案 している。

このモデルにおいて、！ＩＩＢＩと８２９はジスルフィド結合されており、かつ 部分的に貫膜ドメインの極性アミノ酸を介してＩｇＭと相互作用する。この提案 された構造から、トランスフェクションされたＴ−細胞上での、１ｇＭ抗原レセ プタの表面発現または機能にとってＭＨＩが不要であることを見い出したことは 箕くべきことであった。ＭＢＩ単独による該抗原レセプタの機能的な復元が達成 できなかったことは、単純にトランスフェクションされた遺伝子の発現の欠如（ 第２Ｂ図）または不活性ＭＢＩタンパクによるものではない。というのは、これ ら全ての成分によりトランスフェクションされたＴ−細胞中で、λｔｅｌかＩｇ Ｍおよび８２９と結合しているからである（第３図）。更に、ＩｇＭおよびＢ２ ９を発現するが、表面１ｇＭのレベルが低い細胞系に対するλ１８１の添加は、 高いレベルの表面免疫グロブリンを誘発した（図示せず）。一つの解釈は、繊維 芽細胞またはＢ−細胞中に存在しない１種以上のＴ−細胞成分か！ＩＩＢＩ　と 置換てきることである。

シグナル発生における該免疫グロブリンレセプタサブユニットの機能的役割の理 解における進歩は、該レセプタの多重−サブユニット特性のために隠蔽されてい る。更に、繊維芽細胞の表面上で発現されるトランスフェクションされた免疫グ ロブリンは、ＭＢＩおよびＢ２９の存在下においてさえ、シグナル形質導入に関 して機能性であるとは考えられない（フェンキタラマン（Ｖｅｎｋｉ　ｔａｒａ ｍａｎ）等、　１９９１）。

Ｔ−細胞中てのトランスフェクションによる、機能性レセプタの生成能力は、Ｔ −およびＢ−細胞のシグナル形質導入経路間に構造上の類似性があることを立証 する。

この観測は該１ｇＭ抗原レセプタの構造的並びに機能的解析を著しく簡略化する はずである。

このＢ−細胞由来の１ｇＭレセプタは該Ｔ−細胞のシグナル形質導入機構と相互 作用できる。これら２個のレセプタのシグナル発生経路間には多くの類似性と幾 つかの重大な違いがある。例えば、多（の実験的証拠は、該ＴＣＲのシグナル形 質導入経路の第一段階の一つとしての、チロシンキナーゼの活性化に向けられて いる（タラウスナー＆サメルソン（Ｋｌａｕｓｎｅｒ　ａｎｄ　Ｓａｍｅｌｓｏ ｎ）、　１９９１およびキャンベル＆セフトン（Ｃａｍｐｂｅｌｌ　ａｎｄ　５ ｅｆｔｏｎ）、　１９９０；ゴールド（Ｇｏｌｄ）等、　１９９０に概説されて いる）。Ｂ２９およｆｆｌＢｌ両者は、Ｂ〜細胞におけるＩｇｌＪ架橋の際に迅 速にホスホリル化され（キャンベル＆セフトン（Ｃａｍｐｂｅｌｌ　ａｎｄ　５ ｅｆｔｏｎ）、　１９９０；キャンベル（Ｃａｒｎｐｂｅｌ　ｌ）等、　１９９ １：ゴールド（Ｇｏ　ｌｄ）等、　１９９１）　、またＺおよびＺＡＰ−７０両 者はＴ−細胞におけるＴＣＲ架橋の際に、ホスホリル化される（バニャッシュ（ Ｂａｎ　１ｙａｓｈ）等。

１．９８８：チャン（Ｃｈａｎ）等、　＋９９１）、しかしながら、Ｂ−細胞内 でＩｇＭと共に同時免疫沈殿される特定のキナーゼ（ｐ５６１ｙｎ　、　ｆｙｎ およびｂｌｋ）　（バークハート（Ｂｕｒｋｈａｒｄｔ）等、　１９９１：　（ Ｙａｍａｎａｓｈｉ）等、　＋９９１）はＴＣＰ（ｆｙｎ）と結合したものとは 異なっている（サメルソン（Ｓａｍｅｌｓｏｎ）等、　１９９０）。

ＩｇＭおよびＢ２９かＴ−およびＢ−細胞の該シグナル形質導入機構開の差異を 克服できる、少なくとも２つのメカニズムかある。第一に、これらの分子は、Ｃ Ｄ３　ｚまたはｅと構造上の類似性をもつ複合体を形成することにより、多くの 該ト細胞タンパクチロシンキナーゼの一つと直接相互作用しかつこれを活性化す ることができた。該単離された２またはｅｉｌの架橋はトランスフェクションさ れたＴ−細胞内にソゲナル発生を誘発するのに十分である（イルピング＆バイス （［ｒｖｉｎｇ　ａｎｄＷｅｉｓｓ）、　１９９１：　ロメオ＆シード（Ｒｏｍ ｅｏ　ａｎｄ　５ｅｅｄ）、　１９９１；ルトゥフヌ＆クラウスナー（Ｌｅｔｏ ｕｒｎｅｕｒ　ａｎｄ　Ｋｌａｕｓｎｅｒ）、　＋９９２）、またｚ、　ｅおよ びＢ２９の間には配列相同がある（レス（Ｒｅｔｈ）、　＋９８９）。割り当て られた共通配列における変異は、該ｅ鎖によるシグナル形質導入を破壊する。

Ｔ−細胞内での１ｇＭおよびＢ２９によるシグナル形質導入を説明する第二のメ カニズムは、Ｔ−細胞コードタンパクと１ｇＭとの直接的結合（これは更に適当 な細胞接続をもたらす）を含む。該ＣＯ３成分はこの機能にとって特に魅力のあ る候補である。というのは、これらか構造的かつ機能的に８２９およｎＢ１と関 連しているからである（レス（Ｒｅｔｈ）、　１９８９）。

付随的なポリペプチドが［ｇＭ　、　Ｂ２９およびＭＢＩ　Ｉ−ランスフェクタ ント中に検出されたが、カルシウムフラックス、イノシトール代謝またはＩＬ− ２分泌に関する有意な結果は観測されなかった（第４．５．６．７および８図） 。更に、我々の実験は、クローン化された成分から１−細胞レセプタを機能的に 復元するのに、Ｂ−細胞系が利用できることを示唆する。

Ｔ−細胞レセプタと免疫グロブリン抗原レセプタとの間のもう一つの主要な差異 は、これら２種のレセプタにより認識される抗原の特性である。免疫グロブリン は直接抗原を認識するが、ｖＣＲによる抗原の認識は朋Ｃの存在を必要とする。

Ｔ−細胞認識と関連するまたは該認識に先立つ聞Ｃの必要性は、Ｔ−細胞により 認識される該ターゲットに苛酷な制限をもたらし、かつ細胞性免疫ＭＨＣを制限 する。

このために、Ｔ−細胞認識を改善して該１ｔｌＨＣの必要性を排除することにか なりの興味かもたれていた。

幾つかのグループは、免疫グロブリンの可変部およびＴＣＰの定常部を含むキメ ラレセプタがｋ（ＨＣとは独立に機能し得ることを示した。しかしながら、この 方法はＶｈ−Ｃｂホモダイマーの形成により制限され、該重鎮および軽鎖可変部 の対形成はこれまて成功しなかった（クワナ（にｕｗａｎａ）等、　１．９８７ ：ベラカー（Ｂｅｃｋｅｒ）等。

１９８９；グロス（Ｇｒｏｓｓ）等、　１９８９；ゴバーマン（Ｇｏｖｅｒｍａ ｎ）等、　１９９０）。

もう一つの方法が、ｚ−ＣＤ４キメラタンパクを生成するのに利用されてきた。

該キメラタンパクは、ＨＩＶエンベロープタンパクを発現するターゲットにＴ− 細胞を送ることを可能とする（ロメオ＆シード（Ｒｏｍｅｏ　ａｎｄ　５ｅｅｄ ）、　１９９１）　ａこの系において、抗原の結合はｚ−ＣＤ４架橋を介するＴ −細胞の活性化をもたらす。

我々の復元実験は、該細胞性免疫の輸送における１１１１ＩＣ制限の困難な問題 に対する別の解を与える。Ｔ−細胞表面上で機能性の免疫グロブリン抗原レセプ タを発現する１−細胞は、Ｌ（ｌ（Ｃに依存した様式で、抗体により認識された 任意の抗原を認識する能力を有する。

上記手順かＴ−ＩＪンパ細胞の機能に依存するか否かを決定するために、免疫グ ロブリン［ｇＭおよびＢ−細胞由来のレセプタ分子、即ち１ｉｌＢＩおよびＢ２ ９を、クローン化したマスト細胞およびマクロファージにトランスフェクション した。これらの構築物を、次いて抗原、ホスホリルコリン−ＢＳＡ（ＰＣ−ＢＳ Ａ）または抗−ヒト【ｇＭ抗体で刺激した。この結果を第９図および第１０図に 示した。これら他の細胞中でのトランスフェクションによる機能性レセプタを生 成する能力は、これら種々の細胞型の間に、シグナル形質導入における構造的並 びに機能的類似性があることを示す。従って、これら他の細胞系はクローン化し た成分からの１−細胞レセプタを機能的に復元するのに使用することを可能とす る。

ＤＮＡ配列および構築物は実施例に記載するように作成でき、これらは該Ｂ−細 胞由来の免疫グロブリンおよび関連タンパクをコードする。このような構築物を 宿主生物に挿入して、これらタンパクの発現を誘発することを可能とする。

このＤＮＡ配列から、容易にこれらＢ−細胞由来のタンパ入即ち［ｇＭ、　Ｂ２ ９　、ＭＢＩおよび他の関連タンパク、例えば単離された抗体ポリペプチド鎖の アミノ酸配列を確認できる。これは既に達成されており、また該ポリペプチド配 列の実質的な変更（挿入並びに欠失を含む）を行って、実質的に同一の生物学的 活性または免疫学的活性プロフィールをもつ種々の分子を得ることを可能とする 。

例えば、該リガンドＤＮＡ配列を使用して、翻訳レベルでリガンド発現に関与す る核酸分子を生成することか可能となる。この方法は、アンチセンス核酸および リボザイムを使用して、アンチセンス分子てｍＲＮＡをマスクし、あるいはりボ ザイムによってこれを開裂することにより、特定のｍＲＮＡの翻訳を遮断するこ とを可能とする。このようにして、これらタンパクのコードおよび発現を阻害で きる。

アンチセンスＤＮＡおよびＲＮＡ分子は、特定のｍＲＮＡ分子の少なくとも一部 に対して相補的である。これらをハイブリッド化して、二本ｊ１ｍＲＮＡを形成 できる。この細胞はこの二本鎖形においては、ｍＲＮＡを翻訳せず、従ってこの ｍＲＮＡコードタンパクの発現を阻害する。このようなアンチセンス法はインビ トロにおける遺伝子発現を阻害するのに利用されていた。

リボザイムはＲＮＡ分子であり、該分子は、おおよそＤＮＡ制限エンドヌクレア ーゼと類似の他の一本ｊｌｔＲＮＡ分子を開裂できる。リホザイムは、独自のイ ントロンを切り取る、ＲＮＡ分子中に見出された。これらのＲＮＡ分子を変性す ることにより、認識されかつ開裂される特定のヌクレオチド配列を生成し得る。

これらは配列特異性であるので、Ｂ−細胞由来のタンパクをコードするもの等の 特定のｍＲＮＡのみが不活性化されるであろう。

本発明のもう一つの特徴は、Ｂ−細胞由来のＩｇｌＪ　、　ＭＢＩおよびＢ２９ に対するＤＮＡ配列の発現を含む。ＤＮＡ配列はこれらを機能可能に発現制御配 列に結合し、適当な発現ベクターに挿入し、該発現ベクターを使用して、適当な 宿主を形質転換することにより発現てきる。

本発明によるＤＮＡ配列の発現制御配列へのこのような機能可能な結合は、勿論 まだ該ＤＮＡ配列の一部となっていない場合には、該コードＤＮＡ配列の上流側 の正確な読み取り枠内の開始コドン、例えばＡＴＧを準備することを含む。

広範囲の発現ベクター／宿主の組み合わせを、本発明のＤＮＡ配列の発現の際に 利用できる。作用な発現ベクターは、例えば染色体、非−染色体および合成りＮ Ａ配列のセグメントを含むことができる。適当なベクターはＳＶ４０の誘導体お よび公知のバクテリアプラスミド、例えばＥ、コリ（ｃｏｌｉ）プラスミドｃｏ ｔ　ＥＩＳｐｃＲｌ、ｐＢＲ３２２、ｐｌＪＢ９およびその誘導体、プラスミド 例えばＲＰ４　、ファージＤＮＡ例えばファージλの多数の誘導体、例え１１Ｍ ＋９８９および他のファージＤＮＡ例え（よｍ１３および糸状菌（Ｆｉ　ｌａｍ ｅｎ＋ｏｕｓ）−重鎖ファージＤＮＡ　、酵母プラスミド例えば２μプラスミド またはその誘導体、真核細胞中て作用なベクター、例えば昆虫または哺乳動物細 胞で有用なベクター、プラスミドおよびファージＤＮＡの組み合わせ由来のベク ター、例えばファージＤＮＡまたは他の発現制御配列を利用するために変性され ているプラスミド、等を包含する。

適当な発現制御配列を選択する際に、種々のファクタが通常考えられるであろう 。これらは、例えば該系の相対的な強度、その制御性、その特定の発現すべきＤ ＮＡ配列または遺伝子との適合性、特に潜在的な二次的構造を含む。

多くの単細胞型宿主細胞が本発明で使用するＤＮＡ配列を発現する上で作用であ る。これらの宿主は周知の真核および原核宿主、例えばＥ、コリ、シュウトモナ ス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）　、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ストレプト マイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、酵母等の真菌、および動物細胞、例え ばＣＨＯ、Ｒ１，１、Ｂ−Ｗ　、　Ｌ−Ｍ　、アフリカミドリザル（Ａｆｒｉｃ ａｎ　Ｇｒｅｅｎ　１Ｊｏｎｋｅｙ）の腎細胞（例えば、ＣＯ３１、Ｂ５Ｃｌ５ ＢＳＣ３０およびＢＭＴＩＯ）およびヒトの細胞並びに組織培養中の植物細胞等 を含むことができる。

適当な単細胞壓宿主は、例えば選択されたベクターとの適合性、分泌特性、正確 にタンパクを折り畳む能力、および醗酵要件、該宿主に対する発現すべき該ＤＮ Ａ配列によりコードされる生成物の毒性、並びに該発現生成物の精製の容易さを 考慮することにより選択されるであろう。

全てのベクターではないが、発現制御配列および宿主が、等しく良好に使用する 該ＤＮＡ配列を発現するように機能することが理解されよう。同一の発現系につ いて、全ての宿主か等しく良好に機能する訳ではないが、本発明の範囲を逸脱す ることなしに、該所定の発現を達成するための不当に多大な実験を実施すること なしに、当業者は適当なベクター、発現制御配列および宿主を選択することがで きるであろう。例えば、ベクターを選択する際に、該宿主をも考慮する必要があ る。というのは、該ベクターはその中で機能するはずであるからである。該ベク ターのコピー数、該コピー数を制御する能力、および該ベクターによってコード される任意の他のタンパク、例えば抗生物質マーカーの発現も考慮する必要があ ろう。

これらのおよび他のファクタを考慮すれば、当業者は醗酵または大規模の動物培 養に際して、該適当なりＮＡ配列を発現する、種々のベクター／発現制御配列／ 宿主の組み合わせを構築できよう。

適当なＩｇＭまたは関連タンパクを発現する細胞からｍＲＮＡを単離することお よび該細胞からｃＤＮＡライブラリーを生成することが可能である。ｍＲＮＡを 単離するためのおよびこれからｃＤＮＡを生成するための多くの方法か知られて いる。

このｃＤＮＡは適当なベクター、例えば真核発現ベクター９ＣＤＭ８に挿入でき る。このプラスミドは幾つかの利点をもち、該利点はε、コリにおける高いコピ ー数、真核生物プロモータおよび高いレベルの発現を包含する。しかしながら、 他のベクター発現系も利用できる。

ｃＤＮＡライブラリーを構築した後、Ｂ−細胞由来のＩｇＭ　、　Ｂ２９　、Ｍ ＢＩおよび他の分子をコードするｃＤＮＡ配列を含むクローンを単離することが できる。弁別的に発現されたｍＲＮＡに対するＤＮＡを単離するだめの数種の方 法、例えば標識ｃＤＮＡによる＋／−スクリーニング、消去（ｓｕｂｔｒａｃｔ ｅｄ）ｃＤＮＡライブラリーの生成、消去ｃＤＮＡプローブによるスクリーニン グ等かある。

同様に、種々の発現技術も利用できる。例えば、該ベクター内でクローン化され たｃＤＮＡによりコードされるタンパクの抗体スクリーニング、クローン化ｃＤ ＮＡ由来のＲＮＡの注入後の状態調節された媒体の活性についてのアッセイ、ま たはプラスミド／ファージ担持プロモータまたは他の指標配列が評価できる。

トランスフェクションも種々の方法により達成できる。例えば、スフェロプラス ト（ｓｐｈｅｒｏｂｌａｓｔ）融合、ＤＥＡＥデギストランおよびエレクトロポ レーションが、主として一過性の発現に対して利用できる。典型的に、安定な発 現のためには、リン酸カルシウム、スフェロプラスト融合およびエレクトロポレ ーションを利用する。

本発明のタンパクまたはその部分の部分的アミノ酸配列に対応する部分的ＤＮＡ 配列、または該部分的ＤＮＡ配列の縮重した変異体は、同一のまたは別の種、例 えばヒト内の相補的配列およびゲノムクローンのスクリーニングのためのプロー ブとして調製できる。従って、本発明はかくして調製されるプローブにも及び、 これは各タンパクを発現する遺伝子に対応するはずのクローンに対するｃＤＮＡ およびゲノムライブラリーをスクリーニングするのに利用できる。例えば、この プローブは種々の公知のベクターを使用して調製できる。本発明は、またこのよ うなベクターを含有するプラスミドの調製をも含む。

これらのレセプタタンパクは、理想的には本明細書に記載する組み換え技術、該 レセプタタンパクを担持もしくは生成することが知られている細胞、例えばＢ− リンパ細胞から単離および精製することにより調製される。レセプタタンパクの 合成に関与または結合した関連タンパクを含むと考えられる該細胞または活性フ ラグメントを、一連の単離技術、例えばアフィニティーマトリックスからの洗浄 剤−可溶化タンパクの溶出（その際にこのレセプタタンパクが回収される）にか １プることかできる。当然、該レセプタ成分タンパクの調製のための池の手順を も意図し、本発明は本明細書に記載した手順のみに限定されない。

本発明は、また抗体にも及び、該抗体はポリクローナル、モノクローナルおよび キメラ抗体を包含し、これらは１ｇＭレセプタおよび非−免疫グロブリンタンパ クを含み、これを認識する。これら抗体は種々の研究分野、診断および治療用途 における有用性を見出すことかできる。例えば、該抗体を発現ライブラリーのス クリーニングのために使用して、該レセプタ複合体または非−【ｇタンパクの何 れかをコニドする遺伝子を得ることを可能とする。更に、レセプタ成分の活性を 中和するこれら抗体を、完全な動物中で使用して、該レセプタおよびその関連タ ンパクが演する生物学的役割をうまく導き出すことを可能とする。また、このよ うな抗体を薬物スクリーニングアッセイで使用して、該タンパクと同一のまたは 対抗する活性を示す薬物または他の薬剤を同定することを可能とする。

従って、本発明では該レセプタおよびその成分に対するポリクローナル、モノク ローナルおよびキメラ抗体を意図している。これら分子は公知の技術、例えばハ イブリドーマ技術（例えば、融合されたマウス牌臓リンパ細胞およびミエローマ 細胞を使用する）によって調製できる。不死の抗体−産生細胞系は、融合以外の 技術、例えば癌ＤＮＡによるＢ−リンパ細胞の直接的形質転換、またはニブシュ タイン−バール（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ）ウィルスによるトランスフェクシ ョンにより生成し得る。当然のことながら、これらの抗体は、本発明に従って作 成できる抗体処方物の単なる例示である。

該キメラ分子はポリペプチド分子Ｂ２９との組み合わせで、免疫グロブリンタン パクまたは免疫グロブリンタンパクのフラグメントを含むことができる。同様に 、該キメラ分子は、また本明細書に記載した如く活性な他のポリペプチドまたは ポリペプチドフラグメントとの組み合わせとして、上記の如き免疫グロブリンま たは免疫グロブリンフラグメントをも含むことができる。例えば、かかる他のポ リペプチドは以下のものを包含する。

マスト細胞上のＩｇＥ　ｍレセプタタンパ穴Ｆｃｌ　Ｒ１）、Ｔ−細胞のＣＤ３ −γ、δおよびζ成分タンパク、２個のアミノ酸が負に帯電したアスパラギン酸 またはグルタミン酸基であり、第三および第五のアミノ酸がチロシンであり、カ リ第四および第六のアミノ酸がロイシンまたはイソロイシン基である他のポリペ プチド。

従って、ここに含まれる最も好ましいキメラ分子は以下の化合物から選択される 分子および分子状フラグメントを包含する。即ち、ｈＣＤ３−γ、ｍＣＤ３−δ 、ｈＣＤ３−δ、ｍＣＤ３−６、ｍＣＤ３−ζ、ＢＬＶＧＰ　３０、ｈＭＢＩ、 　ｍＭＢＩ、ｍＢ２９、ｐＦｃ＋ＲＩ−δおよびｒＦｃ＋ＲＩ−曳 これら分子は、典型的にレス（Ｒｅｔｈ）、　Ｍ、、　Ｎａｔｕｒｅ、　１９８ ９年３月３０日刊行（ｐ。

３８３）　（これを本発明の参考文献とする）により記載された１８個のアミノ 酸共通配列を含む。

該Ｂ−細胞由来のレセプタおよび関連タンパクは、診断または治療の目的で投与 するのに適した形状で、単独でまたは他の分子または薬剤との機能的な組み合わ せとして調製できる。従って、本発明は、該レセプタ複合体および／または該成 分タンパクを単独でまたは前者の例においては他の診断剤との組み合わせとして 、および製薬上許容される担体、および可能ならば他の治療剤（同時投与が適当 または望ましいと見做される場合）との組み合わせとして、含有する診断および 薬理組成物両者を包含する。

該レセプタ１ｇタンパクおよびその関連タンパクは、Ｔ−およびＢ−リンパ細胞 の活性に関連する状態および池の体液性免疫疾患、例えば自己免疫疾患、ウィル ス性の、例えば１１１ｖ等のおよびミコバクテリア性感染等に関連する大きな診 断並びに治療能を存する。

これらの種々の診断および治療用途は該レセプタおよびその関連タンパクの構造 および活性によるものである。診断用途は、標識量の該レセプタ、非−免疫グロ ブリンタンパ入抗体、リガンドおよびこれに対する結合相手を使用した免疫アッ セイ、レセプタアッセイ、および新規薬物をレセプタまたは非−レセプタタンパ ク生産または活性を促進し、もしくは阻害する能力を評価するだめの薬物スクリ ーニングアッセイ等のアッセイを包含する。上記アッセイは、また侵入性刺激、 病理または創傷に関するレセプタまたは非−レセプタタンパクの存在またはその 活性（該刺激等の存在または不在はかかるレセプタまたは非−レセプタタンパク の生産または活性に影響を与える）を検出するのに使用できる。

治療法および薬理組成物は、同一のまたはアンタゴニスト活性を有する物質をコ ードする配列を含む上記ベクター並びに該レセプタおよび関連タンパクに基づく 。治療法は、一般に該レセプタおよび非−レセプタタンパクの活性の増進または 阻害に基づき、従って過度の活性または該活性の不在に帰せられる疾病または機 能不全の治療にも及ぶ。

本明細書に記載する該治療組成物は、有効量の該レセプタ分子および非−免疫グ ロブリンタンパク、そのアゴニスト、アンタゴニスト、抗体または同様な薬物を 、製薬上許容される担体との組み合わせで含む。担体は、投与処方中で使用され る製薬上不活性な原料または成分、例えば注射用薬剤に対する水、錠剤用佐剤、 カプセル用フィラー等を含む。このような組成物は、適当な経口および／または 非経口投与を包含する種々のプロトコールに対して調製できる。正確な服用量お よび投与スケジュールは熟練した医師により決定されるであろう。

診断並びに研究用途は、一般にレセプタ活性に関与する該タンパク、免疫グロブ リン並びに非−免疫グロブリンおよびＢ−およびＴ−リンパ細胞レセプタ間の反 応性における差異にも及ぶ。

一つの好ましい診断用途は、一般に免疫機能の評価法にも及ぶ。体液、例えば血 液、血漿および尿、組織試料および生体分子、例えばＤＮＡ等を包含する動物中 の免疫機能のアッセイは、病理または池の全身的な機能不全の検出および評価の 助けとなるであろう。

該診断並びに研究用途は、アナライト、リガンドおよび１１１１以上の興味ある 結合相手を含む幾つかの競合アッセイプロトコールの実施を包含し、該結合相手 は典型的には本発明のレセプタ免疫グロブリンおよび／または非−免疫グロブリ ンタンパクから選択される。該結合相手は、一般には細胞および本発明のレセプ タ、該非−免疫グロブリンタンパクおよび他の細胞タンパクを含有する細胞成分 からなる群から選はれる。

これら用途において有用なリガンドは、一般にＢ−細胞レセプタ１ｇＭタンパク により認識される分子である。これらのリガンドは単独で、または第二の検出相 手、例えばアビジンとの組み合わせで検出し得る。

抽出フォーマットを利用する、該細胞成分またはタンパク自体に基く標準的アッ セイが利用できる。各アッセイは酵素結合および／または放射性標識されたりガ ントおよびその結合相手（本明細書に記載する該［ｇｍ−型のレセプタおよび非 −レセプタタンパクを包含する）に基くものであり得る。本発明の範囲内で可能 な該アッセイプロトコールの広いフォーマットは、検出のために標識を必要とし ないアッセイにまで及ぶ。例えば、該フォーマットの一つは結合タンパク−特異 的レセプタの使用を意図する。このような例において、該アナライトを該レセプ タに添加することのみか必要とされ、かつ該結合アナライトは該結合相手の特性 の変化によって、例えばレセプタにおける変化によって容易に検出できた。

更に、本発明で意図するアッセイは実施例に記載するようなアッセイをも包含し 、該実施例では特定の指標配列が該ＤＮＡ構築物に含まれる。かくして、該タン パクの発現が検出される。

本発明のアッセイは、該リガンドまたは該結合相手の何れか（これはレセプタま たは抗体であってよい）か結合しているフォーマットに従うことかできる。同様 に、該アッセイは標識の使用を含み、該標識は放射性元素、酵素および蛍光性の 化学物質から選択できる。

診断的用途は、またヒトを含む動物の免疫並びに他の疾患の評価法を含む。この 方法は、アナライトに加えて、進行したグリコジル化最終生成物の１種以上の結 合相手および１種以上のリガンドの関与するアッセイを含む。

これらの診断法は広義には以下の諸工程を含む。

Ａ、患者から採取した少なくとも一つの生物学的試料を調製する工程、Ｂ、　該 試料に対する少なくとも１種の対応する結合相手を調製する工程、Ｃ１該試料、 該結合相手に対するリガンドおよび該結合相手からなる群から選ばれる物質上に 検出可能な標識を配置する工程、Ｄ、工程Ｃからの標識物質を、標識されていな い工程Ｃの物質からなる群から選ばれる物質と接触状態に置く工程、およびＥ、 工程りの生成する試料を、該標識物質の該未標識物質との結合の程度を調べる工 程。

適当なアナライ１へは、典型的には血液、血漿、尿、脳を髄液、リンパ液および 組織から選択される。また、該アナライトは、典型的には免疫系機能につき評価 される。

本発明による典型的な競合アッセイにおいては、本発明のレセプタ免疫グロブリ ンタンパク、非−１ｇタンパクまたはかかるタンパクを有する細胞物質を該アナ ライトおよびリガンドと結合し、次いで該アナライトおよびリガンドの一方また は両者の該レセプタに対する結合活性を測定して、結合の程度を決定する。この ように、該アッセイにおける成分間のアフィニティーの差異は反応性を特徴付け るのに役立つ。

免疫アッセイにおいては、非−１ｇＭタンパク上の［ｇｍに対する結合相手のコ ントロール量を調製し、場合により例えば酵素、蛍光を発する化合物および／ま たは放射性元素により標識し、次いで哺乳動物の組織または流体試料に導入でき る。

該標識された物質またはその結合相手か該試料と反応する機会もった後に、生成 する集団を公知技術（該標識の性質により変えることができる）により検査する ことかできる。

一般に、該１ｇＭまたはそれに対するリガンドの何れかを使用し、場合により検 出可能なラベルで標識し、更に場合によって検出可能なラベルで標識した抗体Ａ ｂ、　、検出可能なラベルで標識した抗体Ａｂｔまたは検出可能なラベルで標識 した該タンパクに対する結合相手との化学的複合体をも含む、免疫学的アッセイ が含まれる。これらの手順は以下の式で要約できる。数式においてアステリスク は該粒子か標識されていることを示す。この例におけるｒＢＰ」とは研究中の化 合物の全ての結合相手を表す。

Ａ、ＢＰ”　＋　Ａｂｌ　＝　ＢＰ　＋　ＡｂｌＢ、ＢＰ　＋　Ａｂ　”　＝　 ＢＰＡｂ。

Ｃ，ＢＰ　＋　Ａｂｌ　＋　Ａｂｚ　＝　ＢＰＡｂ＋ＡｂｚＤ、　担体”　ＢＰ 　＋　Ａｂｌ　＝　担体”ＢＰＡｂ＋これらの一般的手順およびその適用は当業 者には馴染み深いものであり、かつ本発明の範囲内で利用可能な手順を例示する ものであり、該手順を制限するものではない。この「競合的」手順、即ち手順Ａ １は米国特許第３．６５４．０９０号および同第３．８５０．７５２号に記載さ れている。手順Ｃ１即ちＦサンドイッチ法」、は米国特許第ＲＥ　３１．００６ 号および同第４．０１６．０４３号に記載されており、一方で手順りは「二重抗 体法」またはｒＤＡｓＰ」として公知である。

更に別の診断法は、同時ラジオイムノアッセイのための単一の溶液中で多数の標 識化合物を使用する。米国特許第４．７６２．０２８号（オルソン（Ｏｌｓｏｎ ））に記載されたこの方法では、式：放射性同位元素−キレート剤−アナライ） ・を有する配位化合物中に、２種以上のアナライトを含有する組成物か調製でき る。

各個において、ＩｇＭおよび他のタンパクを使用して、１種以上の結合相手を含 む複合体を生成するために使用でき、また該複合体の一員は検出可能なラベルで 標識できる。複合体か形成されたという事実および必要ならばその量を公知の適 用可能な検出法により決定できる。

一つのアッセイフす一マットは、結合レセプタを意図しており、該レセプタには 該リガンドとアナライトか添加される。本例で使用するような該レセプタは、該 アナライトに結合する化合物、例えばキャプチャー抗体（ｃａｐｔｕｒｅ　ａｎ ｔｉｂｏｄｙ）等であり得る。得られた基質を、次に洗浄し、その後該レセプタ に結合したリガンドの量を測定することにより検出操作を進める。第二のフォー マットでは、結合リガンドを使用し、該リガンドには該レセプタと該アナライト とが添加される。

これら２つのフォーマットの何れも該アナライトとの競合反応に基いているか、 第三のフナ−マットは該アナライトと結合レセプタとの直接的結合反応を含む。

このフォーマットでは、結合レセプター特定の担体または基質を使用する。この アナライトを先ず添加し、その後該レセプタを添加し、該基質を洗浄し、該基質 に結合したレセプタの量を測定する。

更に詳細には、本発明はその範囲内に以下のプロトコールを含む。

免疫系の機能を決定する方法であって、Ａ、　本発明のレセプタおよび非−レセ プタタンパクをもつ細胞のサンプルを準備する工程と、 Ｂ、　該サンプルを、該レセプタに対する公知のりガントと共にインキュベート する工程と、 Ｃ９該レセプタに結合したリガンドの量を計数する工程と、を含む上記方法。

結合相手としての抗体の使用に関連して、上記記載からＡｂ２の特徴かＡｂ、と の反応性であることが理解されよう。これは、哺乳動物の１種中に生成したＡｂ 、が該抗体Ａｂ、を生成するための抗原としてのもう一つの種において使用され ているからである。例えば、抗原としてウサギの抗体を使用して、山羊中にＡｂ ｔを生成することかできる。従って、Ａｂｚは山羊中に生成する抗−ウサギ抗体 である。この説明の目的で使用する場合、Ａｂｌは一次抗体と呼ばれ、かつＡｂ 、は二次または抗−Ａｂ、抗体と呼ばれる。

ここに記載する種々の方法で最も一般的に使用されるラベルは放射性元素、酵素 、紫外光に暴露された際に蛍光を発する化学物質、および他のこのようなラベル である。

適当な放射性元素は３Ｈ，１４ｃ　、　２″ｐ　、　２Ｂ３　、３ｇ（１、”Ｃ ｒ、”Ｃｏ、各・Ｃ０１Ｉｌｐｅ、ｅＯＹ、　１１１６１．１２１１および１１ ＄１１７ｅからなる群から選ぶことができる。上記同位元素の１種を使用して調 製された放射性標識を使用する例においては、公知の一般的に入手可能な計数法 を利用することができる。

該標識か酵素である例においては、現在利用されている、当分野で公知の比色法 、分光光度法、蛍光分光光度法、温度測定法、電流測定法またはガス定量法の何 れかを利用して実施できる。該酵素は対象とするタンパク、結合相手または担体 分子に、カルボジイミド、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド等の架橋分子 との反応により結合し得る。

これらの方法において使用可能な多くの指示酵素が公知であり、かつ利用するこ とかできる。好ましい例はベルオキソダーゼ、β−グルクロニダーゼ、β−Ｄ− グルコシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、ウレアーゼ、グルコース、オキシ ダーゼ＋ペルオキシダーゼ、ヘキソキナーゼ＋ＧＰＤアーゼ、ＲＮＡアーゼ、グ ルコースオキシダーゼ＋アルカリホスファターゼ、ＮＡＤオキシドリダクターゼ ＋ルシフェラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ＋ホスホエノールビルベートカルボ キシレート、アスパルテートアミノトランスフェラーゼ＋ホスホエノールビルベ ートデ力ルポキンラーゼ、およびアルカリホスファターゼを包含する。米国特許 第３、６５４．０９０号、同第３．８５０．７５２号および同第４．０１６．０ ４３号は、その開示の例として、他の標識物質および方法に言及している。

また、多くの蛍光物質が公知であり、かつラベルとして使用されている。これら は、例えばフルオレセイン、ローダミンおよびオーラミンを含む。特定の検出物 質は山羊中で調製される抗−ウサギ抗体であり、これはイソチオシアネートを介 してフルオレセインと結合される。

上記のアッセイはテストキットとして調製もしくは使用できる。該システムまた はテストキットは本明細書で議論した放射性および／または酵素技術の一つによ り調製された標識成分（ラベルを結合相手、例えば本明細書に記載した１ｇＭタ ンパク、レセプタまたはリガンドとカップリングする）、および１種以上の付随 的な免疫化学的試薬（その少なくとも１種は遊離または固定化リガンドであり該 標識された成分、その結合相手、測定すべき該成分の一つまたはその結合相手と 結合できる）を含むことかできる。

医療専門家が使用するのに適した市販のテストキットを調製することも可能であ る。上記のテスト技術によれば、このようなキットの１種は、少なくとも上記の ような標識された結合相手および勿論選択された方法、例えば「競合」、「サン ドイッチ」、　ｒＤＡｓＰ」等に応じた指針を含む。このキットは、また周辺試 薬、例えばバッファー、安定剤等をも含むことかできる。

対応する診断テストキットは以下の成分を含む。

（ａ）既知量の上記の如き結合相手、またはそのリガンドであって、これらは一 般には固相に結合して、免疫吸着剤を形成し、あるいはまた適当な標識または複 数のかかる最終生成物等に結合しており、あるいはその各々の（結合相手）、（ ｂ）必要に応じて、他の試薬、および（Ｃ）このテストキットの使用のための指 針。

該テストキットの一変形は以下のものを含む。

（ａ）上記の結合相手を検出可能なラベルとカップリングすることにより得られ た標識成分、 （ｂ）　１種以上の付随的な免疫化学的試薬であって、該試薬の少なくとも１？ １はりガントまたは固定化リガンドであり、該リガントは（１）該標識成分（ａ ）と結合し得るリガンド、（１１）該標識成分（ａ）の結合相手と結合し得るリ ガンド、（ｉｉＤ　Ｉｆｆ’４定すべき該成分の少なくともＩｆｉｌと結合し得 るリガンド、および（ｉｖ）測定すべき該成分の少なくとも１種の結合相手の少 なくとも１種と結合し得るリガンドからなる群から選ばれ、および（Ｃ）評価中 の化合物と該結合相手との間の免疫化学的反応の１種以上の成分の検出および／ または測定のためのプロトコールを実施するための指針。

ＭＨＣの存在および活性に対するＴ−細胞の依存性を解消する方法の発見は、例 え１よ■Ｃか存在しないかあるいは不活性であるような疾患のための新規な治療 法の確立を可能とする。患者から採取したＴ−リンパ細胞を本明細書に記載の如 く変性し、該患者に再注入して、免疫障害患者におけるＴ−細胞の機能を回復す ることができる。Ｂ−細胞由来のＩｇＭおよびその関連タンパクに対する遺伝子 で該トリンバ細胞をトランスフェクションすることにより、このような治療が必 要とされる患者におけるＴ−細胞の機能を改善する治療法が工夫できる。

Ｔ−リンパ細胞は多数の細胞性免疫応答、例えば腫瘍拒絶および感染（ウィルス 、寄生体およびミコバクテリアによる）からの防禦（これらに限定されない）に 対するエフェクタであり、このような疾患は本明細書に記載の教示に従って治療 できる。これらの細胞によって通常認識される抗原の性質は、特定の個体に合う ものとなる。というのは、Ｔ−リンパ細胞か抗原＋細胞表面ＭＢＣ分子の組み合 わせを認識するからである。ＭＨＣはヒトにおいて著しく多形性であるから、上 記のような攻撃体の何れかを認識する天然産のＴ−細胞は、個体間で移された場 合には使用できず、ある個体由来のＴ−細胞は池の個体中の抗原を認識できない 。というのは、該内在性のＭ］（Ｃは注入されたＴ−リンパ細胞によって認識さ れないからである。例えば、個体Ｙ由来のＴ−細胞は個体Ｙ中の腫瘍細胞のみを 認識する。これが個体Ｘに移された場合、該個体ＹとＸとの間のＭＨＣにおける 差異のために、該ト細胞は腫瘍細胞を認識しない。これは、同様な腫瘍型間にお いてさえ正しい。

本明細書に記載された本発明は、Ｔ−細胞による抗原認識特性を、該細胞力’Ｗ （Ｃの存在なしに抗原を「識別」するように変更する方法を包含する。本発明に よるＴ−細胞は、所定の抗原を認識するモノクローナル抗体でトランスフェクシ ョンすることかできる。このように、同一の腫瘍または腫瘍型をもつ２つの個体 を、該特定の腫瘍または腫瘍型を認識する上記Ｔ−細胞の有効量を、各々に投与 することにより治療できる。これは、個体間の＆（ｌ（Ｃにおける差異を克服ま たは回避する。

従って、ことなる個体中の特定の抗原に対する該Ｔ−細胞を攻撃目標とする特定 の抗体遺伝子を導入することにより、同一の組成物を所定の疾患をもつ全ての患 者に使用できる。従って、本明細書に記載するようなＴ−ＩＪンパ細胞を、Ｂ− 細胞由来のＩ［：ＭおよびＢ２９、並びに特定の抗原を認識し、カリ結合するモ ノクローナル抗体で処理することにより、ＭＨＣの存在または活性を必要とする ことなく、Ｔ−細胞に該抗原の認識脳を付与できる。

腫瘍に対する放射性標識した化合物または毒素を標的として使用される特異的モ ノクローナル抗体を、Ｔ−細胞に転写すべき該抗体特異性のドナーとして含める ことができる。

上記のＴ−細胞のトランスフェクションのだめの方法、および該細胞を患者に注 入するための技術を、選択されたリンホカインを分泌し、該リンホカインを哺乳 動物の特定の活性サイトに放出する目的で、所定の非−ＭＨＣ特異性をもっＴ− 細胞系を生成するのに利用できる。次いで、このような特異性を存する該Ｔ−細 胞を使用して、関連する特定の領域に正常なＴ−細胞リンホカイン、例えばＩＬ −２およびＩＬ−４並びにインターフェロンを放出することができる。潜在的に 薬理作用をもっことか知られているこれら試薬は、局所的に高い濃度で作用する が、これに対して全身的放出ては問題となる副作用を伴う。かくして、特定のモ ノクローナル抗体が選択され、該抗体は処理すべき腫瘍または腫瘍型を認識する 。更に、加−細胞自体は細胞毒性であり、カリ腫瘍を直接毅す。

多数のウィルス感染において、Ｔ−細胞は該感染を撃退する役割を演する。一つ の強力なターゲットはＨ［Ｖである。この場合、Ｔ−細胞は、ＣＤ４に結合する ＧＰ１２０の一部に対して特異的な抗体を移すことにより、該ウィルスに対して 特異的となるように操作できる。これらのレシピエンドＴ−細胞は、変性された 細胞自体か感染に対して感受性となるように遺伝子ノックアラ１〜技術（ｇｅｎ ｅ　ｋｎｏｃｋｏｕｔｔｅｃｈ口１ｑｕｅ）等により欠落させたＣＤ４タンパク 成分をもっことが好ましい。

同様に、多数のミコバクテリア生物か存在し、これらは少なくとも部分的には化 学療法剤に対して耐性である。その例は結核症および癩病ミコバクテリアを含む 。これらのミコバクテリアに対して特異的なモノクローナル抗体をＴ−細胞内に トランスフェクションすることかでき、これらは該疾患における首尾よい免疫応 答に対するキーメディエータである。次いで、該ト細胞を該患者に導入し、結果 として該感染したサイトに必要なリンホカインおよび該Ｔ−細胞細胞毒性を放出 するであろう。

本発明の好ましい態様を、以下の実施例において更に例示する。しかし、本発明 の請求の範囲はこれにより何等制限されない。

ｐＦＮｅｏ由来のスブリーンフォーカスフォーミングウィルス、ロングタームリ ピー　ト（ＳＦＦＶ　ＬＴＲ）　（サイト−（Ｓａｉｔｏ）等、　１９８７）を ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）の−ｌ乃至ＥｃｏＲ１フラグメントと結合して、５ ＦＦＶ　ｃＤＮＡ発現ベクター（ｐ４６３）を生成した。このｈＧＨ配列および ポリアデニル化シグナルを添加して、ｃＤＮＡの発現に対するｍＲＮＡ安定性を 高めた。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により得たＭａｌおよびＢ２９を配列 決定し、ｐ４６３のポリリンカーにクローニングして、ｐ４６６−Ｂ２９および ｐ４６７−ＭＢＩ発現ベクターを得た。次いて、該ＭＢＩ発現クローンのεｃｏ Ｒ１フラグメントをｐＳＶ２Ｈｉｓ（バー）？＆７リガン（Ｈａｒｔｍａｎ　ａ ｎｄ　Ｍｕｌｌｉｇａｎ）、　１９８８）のεＣ０ＲＩサイトに移して、ＭＢ＋ 発現ベクターおよびＨｉｓ耐性の両者をもつプラスミドｐ４７４−Ｍａｌを生成 した。

ＩｇＭ重鎮ミニジーンはＳ＋０７　＜クルーズ（Ｃｒｅｗｓ）　、　１９８１） のＶ領域を含み、該領域はヒｌ−１ｇ１Ｊ定常部遺伝子のＨｉｎｄ３乃至Ｂａｍ Ｈ＋フラグメントに結合され、該遺伝子は変性されて、［ｇＭタンパクの膜結合 型のみを生成する（ダナー＆レダー（Ｄａｎｎｅｒ　ａｎｄ　Ｌｅｄｅｒ）、　 １９８５）　ｏこのＩｇｌＪミニジーンはＳａｌ＋乃至ＢａｍＨ１サイトにおけ るｐＦｎｅｏ中の５ＦＦＶ　ＬＴＲの丁度３′にクローニングされた。このにミ ニジーンは該５１０７軽鎖Ｖ領域（カン（Ｋｗａｎ）等、　＋９８１）を含み、 該領域はヒトに軽鎮定常部のＥｃｏＲｌ乃至ＢａｍＨ１フラグメントに結合され （ヒーター（Ｈｉｅｔｅｒ）等、　１９８２）　、またそのプロモータは該５Ｆ ＦＶ　ＬＴＲ（７）ＥｃｏＲｌ乃至ＢａｍＨ１フラグメントであった。その重鎮 および軽鎖を、該軽鎖ミニジーンをｐ４５９の固有のＢａｍＨ１サイトにクロー ニングすることにより、単一のプラスミド中に結合して、ＰＣ特異的重鎮および 軽鎖をもつｐ４６８プラスミドおよびネオマイシン耐性遺伝子を生成した。

但堅至 ジャーカット細胞を１０％のウシ血清、５０　Ｕ／ｍｌのベニシリス５０　ｍｇ ／ｍｌのストレブトマイシンおよび論のし一グルタミン（ＲＩＯ）を補充したＲ Ｐ！ｉｌｌ　１６４０中で育成した。細胞をエレクトロポレーションにより線状 ＤＮＡでトランスフェクション（ボッター（Ｐｏｔｔｅｒ）等、　１９８４）　 Ｌ、０．７　ｍｇ／ｍｌのＧ４１８　（ギブ：＋（Ｇｉｂｃｏ））および／また は５ｍＭのし一ヒスチジノール（シグマ（Ｓｉｇｍａ））を含むＲＩＯ中で選別 を実施した。耐性細胞系を、１０　ｍｇ／ｍｌのフルオレセインで標識した山羊 抗−ヒトＩｇＭ（サザーンバイオテクノロジー（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　Ｂｉｏｔｅ ｃｈｎｏｌｏｇｙ））で染色し、正の細胞をファクスターブラス（Ｆａｃｓｔａ ｒ　Ｐｌｕｓ）　（ベクトンーディッキンソン（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓ ｏｎ））上で選別した。表面染色の分析をファクスカン（Ｆａｃｓｃａｎ）　（ ベクトンーディッキンソン（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ））を使用して 、同一の抗体について実施した。

仄倦 モノクローナル抗−ヒト［ｇＭ　、　ＤＡ４．４（マルヤマ（ｌＪａｒｕｙａｍ ａ）等用９７９）および抗−ヒトＣＤ−３、ＯＫＴ　３（クン（Ｋｕｎｇ）等、 　１９７９）を、硫酸アンモニウムによる沈殿およびプロティン−Ａセファロー ス上でのクロマトグラフィーにより、腹水または組織培養培地から精製した。フ ルオレセインで標識したまたは標識してない山羊抗−ヒトＩｇＭ、ＩｇＧ＋モノ クローナルイソタイプコントロール抗体および山羊抗−マウスＩｇＧをサザーン バイオテクノロジーから入手した。

ノーザン分析 ＲＮＡを、以下の文献に記載の如く調製した（チャーゲイン（Ｃｈｉ　ｒｇｗｉ ｎ）等、　＋９７９）。

電気泳動および転写後、プロットをＢ２９　ｃＤＮＡまた＋１ｌｔｌＢ＋アンチ センスＲＮＡにより、以下の文献に記載の如くハイブリッド化した（サムプルツ ク（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）、　１９８９）。

沃素化、免疫アフィニティー精製およびタンパク電気泳動３−６刈０７個の生細 胞を３−４　ｍｉのＮａ［１２％１］およびラクトペルオキシダーゼ／グルコー スオキシダーゼで、以下の文献に記載のように標識しくフバード＆コーン（Ｈｕ ｂａｒｄ　ａｎｄ　Ｃｏｈｎ）、＋９７２）、１％のジギトニン、１００　副の ＮａＣｌ、　５０−のトリス（Ｔｒｉｓ）　ＨＣＩ（ｐＨ６，８）および１菖（ のフッ化フェニルメチルスルボニル中に４°Ｃにて３０分間可溶化した。遠心分 離により不溶性物質を除去し、得られた上澄をホスホリルコリンビーズと共に４ 〜５時間インキュベートした。該ビーズを、０．１％のジギトニン、１００　ｍ ＭのＮａＣｌおよび５０酬のトリス（Ｔｒｉｓ）　ＭＣＩ（ｐＨ６，８）で３回 、５分間洗浄した。ＩｇＭの溶出を、該ビーズを１時間２０面のホスホリルコリ ンを補充した洗浄バッファーとともに・インキュベートすることにより実施した 。タンパク試料を還元条件下で８−１２％　５ＤＳ−ＰＡＧＥの勾配ゲル上で分 析した。タンパクバンドを銀染色により可視化した。ホスホールイメージヤ−（ Ｐｈｏｓｐｈｏｒ　［ｍａｇｅｒＸモレキュラーダイナミックス（Ｍｏｌｅｃｕ ｌａｒ　Ｄｙｎａｍｉｃｓ））を使用して、＋！＄１標識タンパクを可視化した 。

カルシウムフラックス測定 細胞を、５．６−のグルコース、０．０２５％のＢＳＡ　、　２０ｍＭのＨＥＰ ＥＳ（ｐ）ｌ　７．０）、ｌ議のＣａＣＩｔ、■−のＭｇＣＩｔ（ローディング バッファー）および３１ＴＩｇ／ｍｌのフラースＷ（Ｆｕｒａ−２ＡＭ）　（シ グマ社（Ｓｉｇｍａ））を補充したリン酸緩衝塩水（ＰＢＳ）中に５Ｘ１０”／ ｍｌの密度で再懸濁し、３７℃にて３０分間インキュベートし、引き続きローデ ィングバッファーで３回洗浄した。次いで、このフラー２を加えた細胞をｌＸｌ ０＠／ｍｌの濃度でローディングバッファーに再懸濁し、その２ｍｌを５ＰＦ− ５００ＣスペクトロフルオロメータＣ３Ｌ＆！アミンコインスツルメンツ社（Ｓ ＬＩＪ　ＡＭ［ＮＣＯＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ　Ｉｎｃ、））のキュベツトに投 入した。励起波長は３３５　ｎｍであり、波長５１０　ｎｍにおける発光を測定 した。カルシウム濃度は以下の文献に記載の如く算出した（グリンキービッツ（ Ｇｒｙｎｋｉｅ＊１ｃｚ）等、　１９８５）。

ＰＣ−アルブミンおよびＰＣ−セファロースの合成ｐ−ジアゾニウムフェニルホ スホリルコリン（ＤＰＰＣ）を合成しくチェセブロ＆メツツガ−（Ｃｈｅｓｅｂ ｒｏ　ａｎｄ　ＭｅｔＨｅｒ）、　１９７２）およびＰＢＳに溶解したＢＳＡを 添加し、−夜インキユベートした。改良ＢＳＡ（ＰＣ−アルブミン）を、ＰＢＳ 中のセファデックスＧ２５上でのカラムクロマトグラフィーによって未反応のＤ ＰＰＣから分離した。

ＰＣ−ビーズの合成のために、ジペプチドアラニルチロシンをＣＮＢｒ−活性化 セファロース（ファルマーシア（Ｐｈａｒｍａｃｉａ））に結合した。このビー ズをＰＢＳ中で洗浄し、新たに合成したＤＰＰＣを添加し、−夜インキユベート し、水洗し、かつ４°Ｃにて保存した。

ＩＬ−２バイオアツセイ ＩＬ−２産生についてテストすべき細胞を濃度１．２ＸＩＯ’／ｍｌで組織培養 培地中に再懸濁し、直接または１０℃ｇ／ｍｌの抗−ＣＤ３．２０℃ｇ／ｍｌの ＤＡ４．４モノクローナル抗−ヒトＩｇＭ、または１０℃ｇ／ｍｌのＩｇＧＩモ ノクローナルイソタイプコントロール抗体で３０分間４°Ｃにて予備処理した後 使用した。未結合抗体をＰＢＳで十分に洗浄することにより除去した。次いで、 ハエ０４個の細胞を、１０　ｍｇ／ｍｌの山羊抗−マウスＩｇＭ（サザーンバイ オテクノロジー（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ））　、１０ 　ｍｇ／ｍｌのＰＣ−アルブミン、１０　ｍｇ／ｍｌのウソ血清アルブミンで予 備コートしたまたは予備コートなしの９６ウエルをもつ組織培養プレートのウェ ルに塗布した。フォボール（Ｐｈｏｂｏｒ）　ミリステート（ＰＭＡ）を最終濃 度１０　ｎｇ／ｍｌとなるように添加した。上澄を２４時間後に収穫し、以下の 文献に記載の如＜ＣＴＬＬ−２，２０１Ｌ−２依存性細胞系を使用して実施した （ギリス（Ｇｉ　１ｌｉｓ）等、　＋９７８）。

イノシトールホスフェートの測定 細胞に、′）（−ミオイノシトールを、１５μＣｉ／ｍｌおよび３−４ＸＩＯ＠ 細舵ｕｍｌの濃度にて、１０％の透析したウシ血清を補充したイノシトールを含 まないＲＰＭＩ　１６４０中で４時間付加させた。ＰＢＳ中て洗浄することによ り過剰の２ＨＥオイノシトールを除去した。次いで、該付加細胞を２Ｘ１０’／ ｍｌの濃度にて、１０閘のＬｉＣ１を補充したＨＥＰＥＳ−緩衝塩水に再懸濁し 、３７°Ｃにて１５分間平衡化させた。これら細胞を、周期的にＩμｇ／ｍｌの 抗−ＣＤ３、ＤＡ４．４モノクローナル抗−ヒトＩｇＭまたはＩｇＧ１イソタイ プコントロールで刺激し、次いで１０秒後に１０℃ｇ／ｍｌの山羊抗−マウスＩ ｇＧ架橋試薬て刺激した。３分後に、このインキュベーションを、８ｍｌの２： ｌメタノール・クロロホルムの添加により停止させ、抽出された物質をダウエッ クス（Ｄｏｗｅｘ）　ＡＧ−１−８（バイオラド（Ｂｉｏ　Ｒａｄ））の１ｍｌ カラム上でのクロマトグラフィーにかけた。イノシトールホスフェート（ＩＰ） を０．１Ｍ蟻酸および増大する濃度の蟻酸アンモニウムで溶出した（イノシトー ルホスフェートに対して０．３１、ＩＰ２に対して０．４Ｍ、　ＩＰ３に対して ０．８１ＪおよびＩＰ４に対してＩＩＪ）。溶出した放射能を液体シンチレーシ ョン計数法により定量した。

本明細書において使用し、かつ言及した手順および方法に関連して、本明細書全 体を通して引用した多数の特許および定期刊行物。これらの刊行物を本発明の参 考文献とする。

バニャッシュ（Ｂａｎｉｙａｓｈ）、　Ｍ、、ガルシア（Ｇａｒｃｉａ）、　Ｍ 、Ｐ、、　ルオング（Ｌｕｏｎｇ）、　Ｅ、。

サメルソ：ｚ（Ｓａｍｅｌｓｏｎ）、　Ｌ、Ｅ、＆クラウスナー（Ｋｌａｕｓｎ ｅｒ）、　Ｒ，Ｄ、　（１９８８）：Ｔ−ｍ胞抗原しセプタζ鎖は活性化の際に チロシンホスホリル化される。（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、。

２６３、１８２２５−３０゜ ベラカー（Ｂｅｃｋｅｒ）、’　Ｍ、　Ｌ、　Ｂ、　、ニア−（Ｎｅａｒ）、　 Ｒ，、マゲットーハンター（Ｍｕｄｇｅｔｔ−Ｈｕｎｔｅｒ）、　Ｍ、、　？ル ゴリーズＱｌａｒｇｏｌ　１ｅｓ）、　Ｍ、　Ｎ、　、クボ（Ｋｕｂｏ）、　Ｒ ，、カイｚ（Ｋａｙｅ）B Ｊ、＆ヘトリック（Ｈｅｄｒｉｃｋ）、　Ｓ、Ｍ、　（１９８９）：　トランス ジェニックマウスにおける免疫グロブリン−Ｔ−細胞レセプタハイブリッドタン パクの発ＩＬ　Ｃｅ１１．５８．９１１−９２１゜バークハウト（Ｂｅｒｋｈｏ ｕｔ）、　Ｂ、、アラルコン（Ａｌａｒｃｏｎ）、　Ｂ、、＆ターホルスト（Ｔ ｅｒｈｏｒｓｔ）、　Ｃ，（＋９８８）：Ｔ−細胞レセプター結合ＣＤ３複合体 をコードする遺伝子のＣＯ３細胞へのトランスフェクションは巨大分子構造のア センブリを与える。Ｊ。

Ｂｏｉｌ、　Ｃｈｅｍ、、　２６３．８５２８−３６゜バークバー）（Ｂｕｒｋ ｈａｒｄｔ）、　Ａ、Ｌ、、プランスビック（Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ）、　Ｍ、、 ボーレン（Ｂｏｌ、ｅｎ）、　Ｊ、Ｂ、＆モント（Ｍｏｎｄ）、　Ｊ、Ｊ、　（ ＋９９１）：Ｂ−リンパ細胞の抗−免疫グロブリン刺激は５ｒＣ−関連タンパク −チロシンキナーゼを活性化する。Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、、　８８．７４１０−４゜キャンベル（Ｃａｍｐｂｅｌ ｌ）、　Ｋ、Ｓ、、　ハガー（ｌｌａｇｅｒ）、　Ｅ、　Ｊ、　、フリードリッ ヒ（Ｆｒｉｅｄｒｉｃｈ）。

Ｒ，Ｊ、　＆キャンビニール（Ｃａｍｂｉｅｒ）、　Ｊ、Ｃ，（＋９９１）：Ｉ ｇＭ抗原レセプタ複合体は、８２９およびｍｂ−１遺伝子のホスホプロティン生 成物を含む。Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ。

ｔＪ、　Ｓ、　Ａ、、８８．３９８２−６゜キャンベル（Ｃａｍｐｂｅｌｌ）、 　Ｍ、Ａ、＆セフトン（Ｓｅｆｔｏｎ）、　Ｂ、Ｍ、　（１９９０）：タンパク チロシンホスホリル化は、抗−免疫グロブリンによる刺激に応答して、二十日ネ ズミのＢ−リンパ細胞中で誘発される。ＥＭＢＯＪ、、　９．２１２５−３１゜ チャ：ｚ（Ｃｈａｎ）、　Ａ、　Ｒ，、イルピング（Ｉｒｖｉｎｇ）、　Ｂ、Ａ 、、　フレーザー（Ｆｒａｓｅｒ）、　Ｊ、Ｄ、＆バイス（Ｗｅｉｓｓ）、　Ａ 、　（１９９１）：　ｚ鎖はチロシンキナーゼと結合し、かつＴ−細胞抗原レセ プタ刺激の際にはＺＡＰ−７０ａ（７０ｋＤａ）チロシンホスホプロティンと結 合する。

Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、、　８８．９１６ ６−９１７０゜チェセブロ（Ｃｈｅｓｅｂｒｏ）、　Ｂ、　＆メツツガー（Ｍｅ ｔｚｇｅｒ）、　Ｈ，（１９７２）：ホスホリルコリン結合マウスミエローマタ ンパクのアフィニティー標識。Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　比７６６−７７１ ゜ チャーゲイン（Ｃｈｉｒｇｗｉｎ）、　Ｊ、Ｍ、、　プルライビラ（Ｐｒｚｙｂ ｙｌａ）、　Ａ、Ｅ、、　ｖクドナルド（！ｊａｃＤｏｎａｌｄ）、　Ｒ，Ｊ、 ＆ラッター（Ｒｕｔｔｅｒ）、　Ｗ、Ｊ、　（１９７９）：リボ核酸に富む源か らの生物学的に活性なリボ核酸の単離。Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　１８．５ ２９４−９゜クルーズ（Ｃｒｅｗｓ）、　Ｂ９．グリフイン（Ｇｒｊｆｆｉｎ） 、　Ｊ、、ハング（Ｈｕａｎｇ）、　Ｈ，、カラン（Ｃａｌａｍｅ）、　Ｋ、、 ＆フード（Ｈｏｏｄ）、　Ｌ、　（１９８１）：単一の■遺伝子セグメントはホ スホリルコリンに対する免疫応答をコードする二体細胞突然変異は抗体の組と相 関する。

Ｃｅ１１．２５．５９−６６゜ ダナー（Ｄａｎｎｅｒ）、　Ｄ、＆レダー（Ｌｅｄｅｒ）、　Ｐ、　（１９８５ ）：膜結合しかつ分泌されたＩｇＭ　ｍＲＮＡの生産における、ＲＮＡ開裂／ポ リ（Ａ）付加サイトの役割。Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｌｌ、Ｓ、Ａ、、８２．８６５８−６２゜フランク（Ｆ ｒａ、ｎｋ）、　Ｓ、Ｊ、、ニクリンス力（Ｎｉｋｌｉｎｓｋａ）、　Ｂ、Ｂ、 、オルロフ（Ｏｒｌｏｆｆ）、　Ｄ。

Ｑ、、−ｙ−セップ（Ｍｅｒｃｅｐ）、　Ｍ、、アシュウエル（Ａｓｈｗｅｌｌ ）、　Ｊ、Ｄ、＆クラウスナー（Ｋｌａｕｓｎｅｒ）、　Ｒ，Ｄ、　（１９９０ ）：Ｔ−細胞レセプタζ鎖の構造変異およびそ（７）Ｔ−細胞活性化における役 割。５ｃｉｅｎｃｅ、　２４９．１７４−７゜ギリス（Ｇｉｌｌｉｓ）、　Ｓ、 、ファーム（Ｆｅｒｍ）、　Ｍ、！１．オウ（Ｏｕ）、　Ｗ、＆スミス（Ｓｍｉ ｔｈ）、　Ｋ。

Ａ、（１９７８）：　Ｔ−細胞成長因子：製造のためのパラメータおよび活性の 定量的マイクロアッセイ、　Ｊ、［ｍｍｕｎｏｌ、、　１２０．２０２７−２０ ３２゜ゴールド（Ｇｏｌｄ）、　Ｍ、Ｒ，、口（Ｌａｗ）、　Ｄ、Ａ、＆デフラ ンコ（ＤｅＦｒａｎｃｏ）、　Ａ、Ｌ、　（１９９０）＋Ｂ−リンパ細胞抗原レ セプタによるタンパクチロシンホスホリル化の刺激。Ｎａｔｕｒｅ。

３４５、８１０−３゜ ゴールド（Ｇｏｌｄ）、　Ｍ、Ｒ，、７ツウチ（Ｍａｔｓｕｕｃｈｉ）、　Ｌ、 　、ケリー（Ｋｅｌｌｙ）、　Ｒ，Ｂ、　＆デフランコ（ＤｅＦｒａｎｃｏ）、 　Ａ、Ｌ、　（１９９１）。レセプタ架橋に伴う、Ｂ−細胞抗原レセプタの成分 のチロシンホスホリルイｔ、０Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　 Ｕ、Ｓ、Ａ、、　８８．３４３６−４０゜ゴバーマン（Ｇｏｖｅｒｍａｎ）、　 Ｊ、　、ゴメツ（Ｇｏｍｅｚ）、　Ｓ、Ｍ、、セゲスマン（Ｓｅｇｅｓｍａｎ） 、に、Ｄ、。

バンカピラー（Ｈｕｎｋａｐｉｌｅｒ）、　Ｔ、、ローブ（Ｌａｕｇ）、　Ｗ、 Ｅ、＆フード（Ｈｏｏｄ）、　Ｌ、（１９９０）：キメラ免疫グロブリンーＴ− 細胞しセブタタンパクは機能性レセプタを形成する；Ｔ−細胞レセプタ複合体形 成と活性化の密接な関係。Ｃｅ１１．６０．９２９−９３９゜クロス（Ｇｒｏｓ ｓ）、　Ｇ、、ワックス（Ｗａｋｓ）、　Ｔ、　＆−ｒ−シ＋　−（Ｅｓｈｈａ ｒ）、　Ｚ、　（１９８９）：抗体−型の特異性をもつ機能性レセプタとしての 、免疫グロブリン−Ｔ−細胞レセプタキメラ分子の発ＴＬＰｒｏｃ、　Ｎａｔ、 　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＩＪ、Ｓ、Ａ、、　８６．１００２４−１０（１２８ ゜グリンキビッツ（Ｇｒｙｎｋｉｅｗｉｃｚ）、　Ｇ、、ボア＝工（Ｐｏｅｎｉ ｅ）、　Ｍ、＆ライエン（Ｔｓｉｅｎ）、　Ｒ。

Ｙ、　（１，９８５）：大幅に改善された蛍光特性をもつＣａ’“指標の新たな 世代。Ｊ、　Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、、　２６０．３４４０−５０゜ハートマン（Ｈａｒｔｍａｎ）、　Ｓ 、Ｃ，＆７リガン（Ｍｕｌｌｉｇａｎ）、　Ｒ，Ｃ，（１９８８）哺乳類細胞に おける遺伝子転移研究用の２種の優先的に作用する選別可能なマーカー。Ｐｒｏ ｃ。

Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、、　８５．８０４１−５１゜バ ーマンソン（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ）、　Ｇ、　Ｇ、　、アイゼンバーブ（Ｅｉｓ ｅｎｂｅｒｇ）、　Ｄ、、キンケート（Ｋｉｎｃａｄｅ）、Ｐ、　Ｗ、　＆ウオ ール（Ｗａｌｌ）、Ｒ，（１９８８）：　Ｂ２９　：　Ｂ−リネージ（Ｂ−１ｉ ｎｅａｇｅ）細胞上に排他的に発現される免疫グロブリン遺伝子スーパーファミ リーの一員。

Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｊ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、、　８５．６８９ ０−４゜ヒーター（Ｈｉｅｔｅｒ）、　Ｐ、Ａ、、メイラエルＱｌｅｉｚｅｌ） 、　Ｊ、Ｊ、＆レダー（Ｌｅｄｅｒ）、　Ｐ、（＋９８２）、ヒト免疫グロブリ ンにＪ領域遺伝子。Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、　２５７．　Ｉ！５ｔ６− ２２゜ホンバラｚ’（１−１ｏｍｂａｃｈ）、　Ｊ、、レクラーク（Ｌｅｃｌｅ ｒｃｑ）、　Ｌ、、ラドブラッハ（Ｒａｄｂｒｕｃｈ）。

Ａ、、ラジュスキ−（Ｒａｊｅｗｓｋｙ）、　Ｋ、＆レス（Ｒｅｔｈ）、　Ｍ、 　（１９８８）：表面［ｇＭ−発現細胞中での、新規な３４−ｋｄタンパクの該 １ｇＭ分子との同時の単離。ＥＩＪＢＯ，Ｊ、、　７．３４５１−６゜ ホンバッハ（Ｈｏｍｂａｃｈ）、　Ｊ、、ロットスバイヒ（Ｌｏｔｔｓｐｅｉｃ ｈ）、　Ｆ、＆レス（Ｒｅｔｈ）、　Ｍ。

（＋９９０）二アミノ末端配列決定による、［ｇＭ抗原レセプタ複合体のＩｇＭ −αおよび［ｇ−β成分をコードする遺伝子の同定。εｕｒ、　Ｊ、　１ｍｍｕ ｎｏ１．、２０．２７９５−９゜ポンバッハ（Ｈｏｍｂａｃｈ）、　Ｊ、、ツバ タ（Ｔｓｕｂａｔａ）、　Ｔ、、レクラーク（Ｌｅｃｌｅｒｃｑ）、　Ｌ、、ス タッパート（Ｓｔａｐｐｅｒｔ）、　Ｈ，＆レス（Ｒｅｔｈ）、　Ｍ、　（１９ ９０）：ＩｇｔＪクラスのＢ−細胞抗原レセプタ複合体の分子成分。Ｎａｔｕｒ ｅ、　３４３．７６０−２゜フバード（ｌｌｕｂａｒｄ）、　Ａ、　Ｌ、　＆コ ーン（Ｃｏｈｎ）、　Ｚ、Ａ、　（１９７２）：赤血球膜の酵素による沃素（Ｌ 　Ｊ、　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ、、　５５．３９０−４０８゜イルピング（Ｉｒｖ ｉｎｇ）、　Ｂ、Ａ、＆バイス（Ｗｅｉｓｓ）、　Ａ、　（＋９９１）：　Ｔ− 細胞レセプタＺ鎖の細胞質ドメインは、レセプタ関連シグナル形質導入経路と結 合するのに十分である。Ｃｅ１１．　６４．８９１−９０１゜クラウスナ−（Ｋ ｌａｕｓｎｅｒ）、　Ｒ，Ｄ、＆サメルソン（Ｓａｍｅｌｓｏｎ）、　Ｌ、Ｅ、 　（１９９１）：Ｔ−細胞抗原レセブタ活性化経路：チロシンキナーゼ接続。Ｃ ｅ１１．６４．８７５−８゜り：ｚ（Ｋｕｎｇ）、　ｐ、ｃ、、　ゴールドンユ タイン（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ）、　Ｇ、、ラインハーツ（Ｒｅｉｎｈｅｒｔｚ） 、　Ｅ、Ｌ、＆シュロスマン（Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ）、　Ｓ、Ｆ、　（＋９７ ９）：弁別性のあるヒトＴ−細胞表面抗原を規定するモノクローナル抗体。５ｃ ｉｅｎｃｅ、　２０６．３４７−３４９゜クワナ（Ｋｕｗａｎａ）、　Ｙ、、ア サクラ（Ａｓａｋｕｒａ）、　Ｙ、、ウツノミャ（Ｕｔｓｕｎｏｍｉｙａ）、　 Ｎ、、ナカ＝ノ（Ｎａｋａｎｉｓｈｉ）、　Ｍ、、アラタ（Ａｒａｔａ）、　Ｙ 、、イトウ（Ｉｔｏｈ）、　Ｓ−、ナガセ（Ｎａｇａｓｅ）。

Ｆ、＆クロサワ（Ｋｕｒｏｓａｗａ）、Ｙ、　（１９８７）：免疫グロブリン由 来のＶ領域およびＴ−細胞レセプタ由来のＣ領域を含むキメラレセプタの発現。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ。

Ｃｏｎｍｕｎｌ、　１４９．９６０−８゜カン（Ｋｗａｎ）、　Ｓ、Ｐ、、　ル ディコフ（Ｒｕｄｉｋｏｆｆ）、　Ｓ、、シードマン（Ｓｅｉｄｍａｎ）、　Ｊ 、Ｄ、、レダー（Ｌｅｄｅｒ）、　Ｐ、＆シャルフ（Ｓｃｈａｒｆｆ）、　Ｍ、 Ｄ、　（１９８１）　ホスホコリン−結合軽鎖の核酸およびタンパク配列、　Ｊ 、　ＥＸＰ、　Ｍｅｄ、、　１５３．１３６６−７０゜ルトゥフヌ化ｅｊｏｕｒ ｎｅｕｒ）、　Ｐ、＆クラウスナー（Ｋｌａｕｓｎｅｒ）、　Ｒ，Ｄ、　（１９ ９２）：　ＣＤ３ｅの細胞質テイル中における、チロシンキナーゼ活性化ドメイ ンによるＴ−細胞の活性Ｌ　５ｃｉｅｎｃｅ、　２５５．７９−８２゜マルヤｖ （Ｍａｒｕｙａｍａ）、　Ｓ、　、クバガワ（Ｋｕｂａｇａｗａ）、　Ｈ，＆ク ーパー（Ｃｏｏｐｅｒ）、　Ｍ。

（＋９８５）　：モノクローナル抗−ｍ抗体によるヒ１−Ｂ−細胞の活性化およ びその末端分化の阻害。Ｊ、　［ｍｍｕｎｏｌ、、　１３５．１９２−１９９゜ オーハシ（Ｏｈａｓｈｉ）、　Ｐ、Ｓ、、　７ツクＱｌａｋ）、　Ｔ、Ｗ、、フ ァンデンエルセン（Ｖａｎ、　ｄｅｎ。

Ｅｌｓｅｎ）、　Ｐ、、ヤナギ（Ｙａｎａｇｉ）、　Ｙ、、　ヨシカイ（Ｙｏｓ ｈｉｋａｉ）、　Ｙ、、カルマン（Ｃａｌｍａｎ）。

Ａ、　Ｐ、、ターホルスト（Ｔｅｒｈｏｒｓｔ）、　Ｃ，、ストボ（Ｓｔｏｂｏ ）、　Ｊ、Ｄ、　＆バイス（Ｗｅｉｓｓ）、　Ａ。

（＋９８５）：　ＤＮＡ転写による活性表面Ｔ３／Ｔ−細胞抗原レセブタの復元 。Ｎａｔｕｒｅ、　３１６゜６０６−９゜ ボッター（Ｐｏｔｔｅｒ）、　Ｈ，、バイア（Ｗｅｉｒ）、　Ｌ、＆レダー（Ｌ ｅｄｅｒ）、　Ｐ、　（１９８４）：エレクトロボレーションによる、マウスブ レーＢリンパ細胞に導入されたヒトに免疫グロブリン遺伝子のエンハンサ−依存 性発現、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、、　 ８１゜７１６１−５゜ レス（Ｒｅｔｈ）、　Ｍ、　（１９８９）：抗原レセブタテイルクル−（レター ）　ｏ　Ｎａｔｕｒｅ、　３３８゜３８３−４゜ ロメオ（Ｒｏｍｅｏ）、　Ｃ，＆シード（Ｓｅｅｄ）、　Ｂ、　（１９９１）： Ｔ−細胞またはＦｃレセプタポリペプチドに融合されたＣＤ４により活性化され た、ＨＩＶに対する細胞性免疫。Ｃｅ１ｌ、　６４゜１０３７−１０４６゜ サイト（Ｓａｉｔｏ）、　Ｔ、、バイス（Ｗｅｉｓｓ）、　Ａ、、ミラー（Ｍｉ ｌｌｅｒ）、　Ｊ、、ノルクロス（Ｎｏｒｃｒｏｓｓ）、　Ｍ、Ａ、＆ジャーマ イン（Ｇｅｒｍａｉｎ）、　Ｒ，Ｎ、　（１９８７）：二十日ネズミＴｉα　β −ヒトＴ３レセプタ複合体を発現するトランスフェクションされたヒトＴ−細胞 の特異的抗原−１ａの活性（？　Ｎａｔｕｒｅ、　３２５．１２５−３０゜サカ グチ（Ｓａｋａｇｕｃｈｉ）、　Ｎ、　、カンワムラ（Ｋａｓｈｉｗａｍｕｒａ ）、　Ｓ、　、キモト（Ｋｉｍｏｔｏ）、　Ｍ、。

タルマン（Ｔｈａｌｍａｎｎ）、　Ｐ、＆メルチャーズ（Ｍｅｌｃｈｅｒｓ）、 　Ｆ、　（１９８８）：ｍｂ−１、即ちＣＤ３−状の構造特性をもつ遺伝子のＢ −ＩＪンバ細胞リネージ−制限発現。ＥＭＢＯ，Ｊ、、　７゜３４５７−６４゜ サムプルツク（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）、　Ｊ、、フリッチェ（Ｆｒｉ　ｊｓｃｈ） 、ε、＆マニアティス（Ｍａｎｉａｔｉｓ）、　Ｔ、　（１９８９）・モレキュ ラークローニングアラポラトリーマニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉ ｎｇ　ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ）、コールドスプリングハーバ −、コールドスプリングハーバ−プレス。

サメルソン（Ｓａｍｅｌｓｏｎ）、　Ｌ、ε、、フィリップス（Ｐｈｉｌｌｉｐ ｓ）、　Ａ、Ｆ、、ルオング（Ｌｕｏｎｇ）。

Ｅ、Ｔ、＆クラウスナー（Ｋｌａｕｓｎｅｒ）、　Ｒ，Ｄ、　（１９９０）：　 ｆｙｎタンパク−チロシンキナーゼとＴ−細胞抗原レセプタとの結合。Ｐｒｏｃ 、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ１．８７．４３５８−６２ ゜サスマン（Ｓｕｓｓｍａｎ）、　Ｊ、　Ｊ、　、ボニファチノ（Ｂｏｎｉｆａ ｃｉｎｏ）、　Ｊ、Ｓ、、リッピンコット（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ）、　Ｓ、Ｊ 、、バイスマン（Ｗｅｉｓｓｍａｎ）、　Ａ、Ｍ、、サイト（Ｓａｉｔｏ）、　 Ｔ、、クラウスナ−（Ｋｌａｕｓｎｅｒ）、　Ｒ，Ｄ、＆アシュウエル（Ａｓｈ ｗｅｌｌ）、　Ｊ、Ｄ、　（１９８８）：　Ｔ−細胞ＣＤ３−ζ鎖合成の失敗二 部分子−細胞レセプタ複合体の構造および機能。Ｃｅ１ｌ、　５２．８５−９５ ゜フェンキタラマン（Ｖｅｎｋｉｔａｒａｎｍｎ）、　Ａ、Ｒ，、ウィリアムス （Ｗｉｌｌｉａｍｓ）、　Ｇ、Ｔ、、ダリアバッハ（Ｄａｒｉａｖａｃｈ）、　 Ｐ、＆−ユーベルガー（Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ）、　Ｍ、Ｓ、　（１９９１）：　 ５種の免疫グロブリン群の８−細胞抗原レセプタ。Ｎａｔｕｒｅ、　３５２．７ ７７−８１゜バイス（Ｗｅｔｓｓ）、　Ａ、＆ストポ（Ｓｔｏｂｏ）、　Ｊ、Ｄ 、　（１９８４）二悪性ヒトＴ−細胞系上での、Ｔ３およびＴ−細胞抗原レセプ タの同時発現に関する要件。Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、、　１６０．１２８４− ９９゜ バイスマン（Ｗｅｉｓｓｍａｎ）、　Ａ、Ｍ、、　フランク（Ｆｒａｎｋ）、　 Ｓ、Ｊ、、オルロフ（Ｏｒｌｏｆｆ）、　Ｄ、Ｇ、。

マーセップ（Ｍｅｒｃｅｐ）、　Ｍ、、アシュウエル（Ａｓｈｗｅｌｌ）、　Ｊ 、Ｄ、　＆クラウスナー（Ｋｌａｕｓｎｅｒ）、　Ｒ，Ｄ、　（１９９０）：Ｔ −細胞抗原レセプタの発現におけるζ鎖の役割：遺伝的回復の研究。ＥＭＢＯ， Ｊ、、　８．３６５１−６゜ヤマナシ（Ｙａｍａｎａｓｈｉ）、　Ｙ、、カキウ チ（Ｋａｋｉｕｃｈｉ）、　Ｔ、、ミズグチ（Ｍｉｚｕｇｕｃｈｉ）、　Ｊ、。

ヤマモト（Ｙａｍａｍｏｔｏ）、　Ｔ、＆　トヨシマ（Ｔｏｙｏｓｈｉｍａ）、 　Ｋ、　（１９９１）：　Ｂ−細胞抗原レセプタとタンパクチロシンキナーゼＬ ｙｎとの結合。５ｃｉｅｎｃｅ、　２５１．１９２−４゜本発明は、その精神並 びに本質的な特徴から逸脱することなく、他の形態で具体化でき、また他の方法 で実施できる。従って、本明細書の開示は全てに関して例示的なものであり、本 発明の範囲を制限するものと理解すべきてはなく、本発明の範囲は添付した請求 の範囲によって示され、この請求の範囲は等価な範囲および意味のあらゆる変更 を含むことを意図する。

蛍光強度 Ｃ μ−−−− Ｋ　−１−− ＦＩＧ、２Ａ ２ｏＫｂ　１４”、　−、。

ＦＩＧ、２Ｂ シャーカット　ＩｇＭ＋日２９　１ｇＭ＋８２９＋ＭＢ１ＦＩＧ、６ ンヤーカツト　１ｇＭ＋８２９　１ｇＭ＋８２９＋ＭＢ１］ マ　マ　！ フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、Ｃ１，６識別記号　、庁内整理番号Ａ６１Ｋ　３９／３９５ 　Ａ　９２８４−４ＣＨ９２８４−４Ｃ Ｖ　９２８４−４Ｃ ＣＯ７Ｋ　１６／２８　８３１８−４ＨＣ１２Ｎ　５／１０ ７１００　９２８１−４Ｂ Ｃ１２Ｐ　２１１０２　Ｃ９２８２−４Ｂ２１１０８　９１６１−４Ｂ Ｃ１２Ｑ　１／６８　Ａ　９４５３−４Ｂ／／　Ｃ０７Ｈ２１１０４Ｚ　８６１ ５−４ＣＣＯＩＮ　３３１５３　Ｎ　７０５５−２Ｊ（Ｃ１２Ｐ　２１１０２ ＣＩ２Ｒ１：９１） （７２）発明者　コスタ　タイス　イーアメリカ合衆国　ニューヨーク州　１０ ０２１ニユーヨーク　イースト　シックスティサード　ストリート　５００　ア パートメント　１２イー Ｉ （７２）発明者　フランク　ローランド　エルアメリカ合衆国　ニューヨーク州 　１００２１ニユーヨーク　イースト　シックスティサード　ストリート４３０ 　アパートメント　６ケイ フロントページの続き （７２）発明者　サンチェス　メルセデスアメリカ合衆国　ニューヨーク州　１ ００１１ニユーヨーク　イースト　シックスティーンス　ストリート　１１４ （７２）発明者　ミスロヴイン　ジーヴアアメリカ合衆国　ニューヨーク州　１ ０７０６ハステイング　オン　ハドソン　ガーランド　ドライヴ　１５

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ＩｇＭ免疫グロブリンおよびそのタンパクＢ２９両者をコードする発現配列 、フラグメントまたはその誘導体を含むことを特徴とするＤＮＡ構築物。 ２．該免疫グロブリンがＢ−リンパ細胞レセプタのポリペプチドを含む請求の範 囲第１項に記載の構築物。 ３．該免疫グロブリンがＩｇＭのフラグメントである請求の範囲第１項に記載の 構築物。 ４．該フラグメントがＩｇＭの軽鎖フラグメントである請求の範囲第３項に記載 の構築物。 ５．該フラグメントが、重鎖フラグメントである請求の範囲第３項に記載の構築 物。 ６．発現の際にタンパクＭＢＩをコードする配列、フラグメントまたはその誘導 体を実質的に含まない請求の範囲第１項に記載の構築物。 ７．発現に際して、ＩｇＭ免疫グロブリンおよびそのタンパクＢ２９両者をコー ドするＲＮＡ分子。 ８．該免疫グロブリンがＢ−リンパ細胞レセプタのポリペプチドを含む請求の範 囲第７項に記載のＲＮＡ分子。 ９．該免疫グロブリンがＩｇＭポリペブチドレセプタまたはシグナル発生分子の フラグメントである請求の範囲第７項に記載のＲＮＡ分子。 １０．該フラグメントがＩｇＭレセプタの軽鎖フラグメントである請求の範囲第 ９項に記載のＲＮＡ分子。 １１．該フラグメントが、重鎖フラグメントである請求の範囲第９項に記載のＲ ＮＡ分子。 １２．Ｔ−リンパ細胞上に存在または該細胞由来のＩｇＭレセプタ分子に対して 生成された抗体。 １３．Ｔ−リンパ細胞上に存在する該ＩｇＭレセプタ分子がポリペプチドＢ２９ との組み合わせである請求の範囲第１２項に記載の抗体。 １４．Ｔ−リンパ細胞上に存在する該１ｇＭレセプタ分子がポリペプチドＢ２９ とＭＢ１との組み合わせである請求の範囲第１２項に記載の抗体。 １５．ポリクローナルである請求の範囲第１２、１３または１４項に記載の抗体 。 １６．モノクローナルである請求の範囲第１２、１３または１４項に記載の抗体 。 １７．免疫グロブリンタンパクまたはそのフラグメントと、ポリペプチドＢ２９ またはそのフラグメントを含むキメラ分子。 １８．免疫グロブリンタンパクまたはそのフラグメントと、ａ）マスト細胞から 誘導できるＩｇＥ型レセプタタンパク（ＦＣＩＲ１−βおよびｒ）ｂ）Ｔ−細胞 から誘導できるＣＤ３−ｒ、−δおよび−ζ成分タンパクｃ）ｈＣＤ３−ｒ、ｍ ＣＤ３−ｒ、ｈＣＤ３−δ、ｍＣＤ３−δ、ｍＣＤ３−ζ、ＢＬＶｇｐ３０、ｈ ＭＢ１、ｍＭＢ１、ｍＢ２９、ｐＦｃ１ＲＩ−ｒおよびｒＦＣｌＲＩ−βから誘 導できる他の分子または分子フラグメント、および ｄ）初めの２個のアミノ酸がアスパラギン酸またはグルタミン酸基であり、第三 および第五のアミノ酸がチロシンであり、かつ第四および第六のアミノ酸がロイ シンまたはイソロイシン基である、他のポリペプチドまたはそのフラグメントか らなる群から選ばれるポリペプチドまたはそのフラグメントを含むキメラ分子。 １９．（ａ）ヒト膜−固定ＩｇＭ定常部とホスホリルコリン特異的重鎖可変部と を含む重鎖と、 （ｂ）ヒトκ定常部とκ可変部とを含む軽鎖、を含むことを特徴とするキメラ抗 体。 ２０．請求の範囲第１２、１３、１４、１７または１８の何れか１項に記載の抗 体を、製薬上許容される担体との組み合わせで含むことを特徴とする抗血清。 ２１．請求の範囲第２０項に記載の抗血清を製造する方法であって、実質的に免 疫担当哺乳動物に、Ｔ−リンパ細胞レセプタ由来の免疫グロブリンタンパクの抗 体発生に有効な量を投与し、該哺乳動物から該抗血清を収穫する、 ことを特徴とする上記方法。 ２２．該免疫グロブリンタンパクを、ポリペプチドＢ２９またはそのフラグメン トとの組み合わせで該哺乳動物に投与する請求の範囲第２１項に記載の方法。 ２３．請求の範囲第１〜６項の何れか１項に記載のＤＮＡ構築物を含むことを特 徴とする発現ベクター。 ２４．請求の範囲第７〜１１項の何れか１項に記載のＲＮＡ分子を含むことを特 徴とする発現ベクター。 ２５．発現に際して、ヒト膜固定ＩｇＭ定常部を含むＩｇＭ重鎖またはそのフラ グメントをコードする遺伝子を含むことを特徴とする発現ベクター。 ２６．更に、発現に際して、ＩｇＭ重鎖ホスホリルコリン−特異的可変部をコー ドする遺伝子をも含有する、請求の範囲第２５項に記載の発現ペクター。 ２７．更に、発現に際して、ヒトκ定常部を含むＩｇＭ軽鎖をコードする遺伝子 を含有する、請求の範囲第２５項に記載の発現ベクター。 ２８．更に、発現に際して、ＩｇＭ軽鎖κ可変部をコードする遺伝子を含有する 、請求の範囲第２５項に記載の発現ベクター。 ２９．発現に際して、請求の範囲第１９項に記載のキメラ抗体をコードする遺伝 子を含有する発現ベクター。 ３０．請求の範囲第１〜６項の何れか１項に記載のＤＮＡ構築物により形質転換 された単細胞宿主。 ３１．請求の範囲第７〜１１項の何れか１項に記載のＲＮＡ分子で形質転換され た単細胞宿主。 ３２．更に抗体で形質転換された請求の範囲第３０項に記載の単細胞宿主。 ３３．更に抗体で形質転換された請求の範囲第３１項に記載の単細胞宿主。 ３４．該抗体がモノクローナル抗体である請求の範囲第３２項記載の単細胞宿主 。 ３５．該モノクローナル抗体が腫瘍細胞またはその成分を認識する請求の範囲第 ３４項記載の単細胞宿主。 ３６．該モノクローナル抗体がウイルスまたはその一部を認識する請求の範囲第 ３４項記載の単細胞宿主。 ３７．該モノクローナル抗体が、少なくともｇｐ１２０サイトのＣＤ４レセプタ に結合する部分を認識する請求の範囲第３６項記載の単細胞宿主。 ３８．請求の範囲第１〜６項の何れか１項に記載のＤＮＡ構築物を含有する組み 換えウイルス。 ３９．請求の範囲第７〜１１項の何れか１項に記載のＲＮＡ分子含有する組み換 えウイルス。 ４０発現に際して、ヒト膜固定ＩｇＭ定常部を含むＩｇＭ重鎖またはそのフラグ メントをコードする遺伝子またはその誘導体を含むことを特徴とする組み換えウ イルス。 ４１．発現に際して、ヒト膜固定ＩｇＭ定常部を含むＩｇＭ重鎖またはそのフラ グメントをコードする遺伝子の誘導体を、ＲＮＡ配列の形として含有する組み換 えウイルス。 ４２．請求の範囲第１〜６項の何れか１項に記載のＤＮＡ構築物または請求の範 囲第７〜１１項の何れか１項に記載のＲＮＡ分子で形質転換されたＴ−リンパ細 胞、マスト細胞またはマクロファージ。 ４３．含まれるゲノムから、発現に際してＣＤ４レセプタをコードする遺伝子を 欠落させることにより更に変性された請求の範囲第４２項に記載のＴ−リンパ細 胞、マスト細胞またはマクロファージ。 ４４．更に、抗体で形質転換された請求の範囲第４２項に記載のＴ−リンパ細胞 、マスト細胞またはマクロファージ。 ４５．ＨＩＶウイルスまたはその成分に結合する抗体で更に形質転換された請求 の範囲第４３項に記載のＴ−リンパ細胞、マスト細胞またはマクロファージ。 ４６．該抗体が、腫瘍、ミコバクテリア生物またはウイルス、もしくは該腫瘍、 ミコバクテリア生物またはウイルスの成分に結合するモノクローナル抗体である 請求の範囲第４４項に記載のＴ−リンパ細胞、マスト細胞またはマクロファージ 。 ４７Ｔ−リンパ細胞を、発現に際してＢ−リンパ細胞由来の免疫グロブリンおよ びタンパクＢ２９両者をコードする遺伝子でトランスフエクシヨンすることを含 む、Ｔ−リンパ細胞の免疫性を改善する方法。 ４８．更に、該Ｔ−リンパ細胞を、発現に際してタンパクＭＢＩをコードする遺 伝子でトランスフエクシヨンする工程をも含む請求の範囲第４７項に記載の方法 。 ４９更に、該Ｔ−リンパ細胞を抗体でトランスフエクシヨンする工程をも含む請 求の範囲第４７項に記載の方法。 ５０．該抗体が、腫瘍、ウイルス、寄生体またはミコバクテリア、もしくは該腫 瘍、ウイルス、寄生体またはミコバクテリアの成分に対して生成されたモノクロ ーナル抗体である請求の範囲第４９項に記載の方法。 ５１．化合物をその免疫調節活性につきスクリーニングする方法であつて、該化 合物と請求の範囲第４７、４８または４９項に記載の変性されたＴ−リンパ細胞 と桔合し、 抗原の攻撃に対する応答における、カルシウムフラツクス、ホスホイノシトール 代謝回転または該Ｔ−リンパ細胞内のリンホカイン発現を測定し、標準値と、該 カルシウムフラツクス、ホスホイノシトール代謝回転または該リンホカイン発現 とを比較する、 端工程を含むことを特徴とする上記方法。 ５２．請求の範囲第１〜６項の何れか１項に記載のＤＮＡ構築物または請求の範 囲第７〜Ｈ項の何れか１項に記載のＲＮＡ分子で形質転換されたＴ−リンパ細胞 、マスト細胞またはやクロファージ細胞の細胞表面上における、Ｂ−リンパ細胞 由来のＩｇＭの免疫反応性を高める方法であつて、該Ｔ−リンパ細胞、マスト細 胞またはマクロファージ細胞をタンパクＭＢＩで処理するか、あるいは該Ｔ−リ ンバ細胞を、発現に際して該タンパクＭＢＩをコードする遺伝子またはその誘導 体でトランスフエクシヨンする工程を含むことを特徴とする上記方法。 ５３．治療を必要とする哺乳動物の患者における、免疫系疾患、腫瘍、またはミ コバクテリア、寄生体もしくはウイルス感染を治療する方法であって、該哺乳動 物に、有効量の請求の範囲第４２項に記載のＴ−リンパ細胞、マスト細胞または マクロファージ細胞を投与することを特徴とする上記方法。 ５４．治療を必要とする哺乳動物の患者における、免疫系疾患、腫瘍、またはミ コバクテリア、寄生体もしくはウイルス感染を治療する方法であつて、該哺乳動 物に、有効量の請求の範囲第４４項に記載のＴ−リンパ細胞、マスト細胞または マクロファージ細胞を投与することを特徴とする上記方法。 ５５．治療を必要とする哺乳動物の患者におけるウイルス感染を治療する方法で あつて、該哺乳動物に、有効量の請求の範囲第４９項に記載の変性されたＴ−リ ンパ細胞、マスト細胞またはマクロファージ細胞を投与することを特徴とする、 上記方法。 ５６．治療を必要とする哺乳動物の患者における、ＨＩＶ感染を治療する方法で あつて、該患者に、有効量の請求の範囲第４３項に記載のＴ−リンパ細胞、マス ト細胞またはマクロファージ細胞を投与することを特徴とする上記方法。 ５７．治療を必要とする哺乳動物の患者における、ＨＩＶ感染を治療する方法で あつて、該患者に、有効量の請求の範囲第４５項に記載のＴ−リンパ細胞、マス ト細胞またはマクロファージ細胞を投与することを特徴とする上記方法。 ５８．治療を必要とする哺乳動物の患者における腫瘍または感染サイトにリンホ カインを投与する方法であって、発現の際にＢ−リンパ細胞由来ＩｇＭタンパク およびタンパクＢ２９両者をコードするＤＮＡ配列でトランスフエクシヨンし、 更に該腫瘍または腫瘍型、感染性の生物または該腫瘍または生物のフラグメント でトランスフエクシヨンしたＴ−リンパ細胞、マスト細胞またはマクロファージ 細胞の有効量を、該患者に投与することを含み、該Ｔ−リンパ細胞が存在するＭ ＨＣまたはＡＰＣ活性に本質的に独立であり、かつ該腫瘍または感染性生物に結 合した際に、該リンホカインを発現するのに適したものであることを特徴とする 上記方法。 ５９．サンプル中における腫瘍組織の存在、その濃度または活性を検出する方法 であって、 該サンプルを、発現の際にＢ−リンパ細胞由来のＩｇＭタンパクおよびタンパク Ｂ２９両者をコードする遺伝子および発現に際して腫瘍組織を諺織し、かつ結合 する抗体をコードする遺伝子によって形質転換されたＴ−リンパ細胞、マスト細 胞またはマクロファージ細胞の一定量と結合し、該Ｔ−リンバ細胞、マスト細胞 またはマクロファージ細胞により発現されたリンホカインの量を測定し、 発現された該リンホカインの量を標準値と比較する、工程を含むことを特徴とす る上記方法。 ６０．サンプル中における感染性生物の存在、その量または活性を検出する方法 であって、 該サンプルを、発現の際にＢ−リンパ細胞由来のＩｇＭレセプタタンパクをコー ドする遺伝子、発現に際してＢ２９タンパクをコードするもう一つの遺伝子およ び感染性生物を認識する抗体によって形質転換されたＴ−リンパ細胞、マスト細 胞またはマクロファージ細胞と結合し、該Ｔ−リンバ細胞、マスト細胞またはマ クロファージ細胞により発現されたリンホカインの量を測定し、 発現された該リンホカインの量を標準値と比較する、工程を含むことを特徴とす る上記方法。 ６１．請求の範囲第５９または６０項記載の方法を実施するためのキットであっ て、一定量の、該請求の範囲に記載の如くトランスフエクシヨンされたＴ−リン パ細胞、マスト細胞またはマクロファージ細胞と、リンホカインを検出する標識 化合物と、該方法を実施するための指針とを含むことを特徴とする上記キット。 ６２．製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第１〜６項の何 れか１項に記載のＤＮＡ構築物または請求の範囲第７〜１１項の何れか１項に記 載のＲＮＡ分子を含む薬理組成物。 ６３．製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第１９項に記載 の抗体を含むことを特徴とする薬理組成物。 ６４．製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第３０項に記載 の単細胞宿主を含むことを特徴とする薬理組成物。 ６５．製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第３１項に記載 の単細胞宿主を含むことを特徴とする薬理組成物。 ６６．製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第３２項に記載 の単細胞宿主を含むことを特徴とする薬理組成物。 ６７．製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第３３項に記載 の単細胞宿主を含むことを特徴とする薬理組成物。 ６８．製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第３８項に記載 の組み換えウイルスを含むことを特徴とする薬理組成物。 ６９．製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第３９項に記載 の組み換えウイルスを含むことを特徴とする薬理組成物。 ７０．製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第４０項に記載 の組み換えウイルスを含むことを特徴とする薬理組成物。 ７１．製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第４１項に記載 の組み換えウイルスを含むことを特徴とする薬理組成物。 ７２．製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第４２項に記載 のＴ−リンパ細胞、マスト細胞またはマクロファージ細胞を含むことを特徴とす る薬理組成物。 ７３．製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第４３項に記載 のＴ−リンパ細胞、マスト細胞またはマクロファージ細胞を含むことを特徴とす る薬理組成物。 ７４．製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第４４項に記載 の組み換えウイルスを含むことを特徴とする薬理組成物。 ７５．製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第４５項に記載 の組み換えウイルスを含むことを特徴とする薬理組成物。 ７６．製薬上許容される担体との組み合わせとして、請求の範囲第４６項に記載 の組み換えウイルスを含むことを特徴とする薬理組成物。