JPH07502442A

JPH07502442A - 移植のための骨の調製

Info

Publication number: JPH07502442A
Application number: JP5511813A
Authority: JP
Inventors: モース，ブレンダ; シャンブロム，エドワード
Original assignee: オステオテック，インコーポレイティド
Priority date: 1991-12-31
Filing date: 1992-12-22
Publication date: 1995-03-16
Also published as: NO942449L; EP0619722A4; WO1993012731A1; KR940703635A; NO942449D0; CA2126866A1; BR9207002A; AU3330693A; ES2162811T3; ATE203419T1; MX9207627A; CA2126866C; EP0619722B1; EP0619722A1; HK1011605A1; DE69231967T2; DE69231967D1; US5333626A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】移植のための骨の調製生班α分団本発明は、万一の移植のために骨の処理方法に関する。本発明の方法は、移植のためのきれいな汚染されていない骨を製造するための単純で安全且つ効果的な手段を提供する。それは広範囲の感染性物質、たとえば細菌、ウィルス、菌類及び寄生虫を不活性化するのに有効的な包括的汚染除去剤と骨とを接触し；その骨を清浄し；そして最後に、広範囲の感染性物質、たとえば細菌、ウィルス、菌類及び寄生虫を不活性化するのに効果的な包括的汚染除去剤により骨を汚染除去するを含んで成る。本発明はまた、高圧洗浄条件及び高温下で骨と洗浄剤とを接触することを含んで成る骨を清浄するための効果的方法も提供する。

発尻■丘景移植のためのヒト骨の獲得及び加工は１９５０年代以来、実質的に変化していない。それは、ドナーの家族、病院のスタッフ、地方の獲得グループ、血液検体処理実験室、骨の加工実験室、移植患者及び移植チームを包含するいくつかのグループの整合した努力を要する複雑な作業を残している。

潜在的に有害な病気の組織受容者への移行の危険性の最少化が主に考慮される。

ウィルス及び細菌は、骨及び骨髄により伝達され得る。　Ｋａｋａｉｙａなど、、’　Ｔｉ５ｓｕｅ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ−ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ　１ｎｆｅｃｔｉｏｎｓ＋’　Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ　３１　（３）　１２７７−２８４＋　１９９１　；　５ｈｕｔｋｉｎ、’　）Ｉｏｍｏｌｏｇｏｕｓ−ｓｅｒｕＴａｂｅｐａｔｉｔｉｓ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　ｕｓｅ　ｏｆ　ｒｅｆｒｉｇｅｒａｔｅｄ　ｂｏｎｅ−ｂａｎｋ　ｂｏｎｅｓ＋ｒｅｐｏｒｔ　ｏｆ　ａ　ｃａｓｅ、　’　Ｊ、　Ｂｏｎｅ　Ｊｏｉｎｔ　Ｓｕｒｇ、　３６−Ａ１６０＋　１９５４を参照のこと。骨及び骨髄を通してのヒト免疫欠損ウィルス（ＨＩＶ）の伝達がまた報告されている。　’　Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＨＩＶ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｂｏｎｅｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　ｃａｓｅ　ｒｅｐｏｒｔ　ａｎｄ　ｐｕｂｌｉｃ　ｂｅａｌｔｈ　ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ　’Ｎｏｖｂｉｄ、　Ｍｏｒｔａｌ　Ｗｅｅｋｌｙ　Ｒｅｐ、＋　３７　：　５９７〜５９９．１９８８　；　Ｆｕｒｌｉｎｉなど、、’　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｈｕ＋ｗａｎ　ｉａｉｍｕｎｏｄｅｆｔｃｉｅｎｃｙ　ｖｉｒｕｓ　ａｆｔｅｒｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｉｙ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、’　Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、旧ｃｒｏｂｉｏｌ　。

Ｉｎｆｅｃｔ　Ｄｉｓ、　７　（５）　５５４〜６６５．１９８８を参照のこと、さらに、旧Ｖは新鮮且つ冷蔵された骨及び連結乾燥された骨から培養される。

Ｂｕｃｋなど、’　Ｈｕｍａｎ　ｉ＋ｕ＋ｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｖｉｒｕｓ　ｃａｌｔｕｒｅｄ　ｆｒｏｍ　ｂｏｎｅ。

Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、　”　Ｃｌ１ｎ、　ｏｒｔｈｏ、＋　２５１　：　２４９〜２５３．１９９０を参照のこと、前加工実験技士の保護は、旧Ｖ及びＢ型肝炎の伝達の可能性のために最近、よりさし迫った問題になっているもう１つの問題である。

現在の骨獲得及び加工方法は、それらの危険性を最少にするように企画されている。典型的には病院及び地方の獲得エージエンシーはまず、ドナーが許容できる医学基準内にあるかどうかを決定するために、潜在的なドナーの血清学及び病気の状態に関する病院の記録を再調査する。すべてが順当であり、そして必要とされる同意が得られれば、地方の獲得エージエンシーからの技士が骨サンプルを収集し、そして特定の器官、組織及び骨をドナーの死から数時間以内に除去し始める獲得工程の間、骨は抗生物質カクテル（通常、バシトラシン／ポリミキシン溶液）に含浸される。典型的には、次に骨は氷上で急冷され又は凍結され、そして加工実験室に送られる。

処理実験室で、血液サンプルは種々の既知の感染性物質、たとえばヒト免疫欠損ウィルス（）ＩＩＶ−１）、ヒト免疫欠損ウィルス（ＩＩＩＶ−２）、ヒ）Ｔ細胞リンパ栄養ウィルス（ＨＴＬＶ−１）　、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）、梅毒トレポネーマ（ｓｙｐｈｉｌｉｓ）について分析される。典型的には、技士は骨を融解し、そしてその断片を抗生物質カクテルに置く０次に、彼らは、殺菌水により骨を清浄する。殺菌水による外部の脂肪及び組織の除去の後、骨は特定の大きさに切断される。技士は、脱脂防化し及び骨を白くするためにさらに過酸化水素が添加されている無菌水を用いて骨髄を除去する。

最後に、所望により、骨は少なくとも１時間、エタノール中でインキュベートされ得る。選択された骨断片は、滅菌性及び生物学的潜在性を保持するのうな手段で包装される。加工実験に関する通常且つ実際的な方法は、骨を凍結乾燥し、大きさ別に分類し、そして選択された骨断片を包装することである。他の方法は、寒冷保存及び新鮮な凍結を包含する。その工程の最後で滅菌性を確保するために、前記包装からのサンプルは微生物について培養される。

処理の間で現在使用されるドナースクリーニング及び抗生物質処理の組合せは、既知のウィルス汚染及び種々の細菌の伝達の危険性を減じる。しかしながら、現在の方法は、ヒト及び病院の環境において通常のフローラである、ウィルス、選択された細菌、及び菌類からの予防的保護を提供しない。第１に、スクリーニング試験はひじょうに簡単ではない、スクリーニング試験の感度及び特異性は高いけれども、誤った陰性結果が、たとえば低抵抗又は抗原レベル（たとえば最近の感染又は免疫欠損）又は技士の誤りに起因する。

さらに、スクリーニング試験は、既知の感染性物質を同定するためにのみ有用である。第２に、最近使用される抗生物質カクテルは、すべてのタイプの細菌を容易に殺害しない。たとえば、通常使用されるポリミキシン／バシトラシン溶液は、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）種を不活性化しない。さらに、抗生物質カクテルはウィルス又は菌類に対して有意な効果ををさない。

骨の清浄性は移植関連の感染及び抗原性の回避において重要な要因であると思われるが、骨断片を従来の方法により効果的に清浄することは困難である。細胞及び残骸は感染性物質を有し、そして抗原性応答を誘発することができる。

本発明は、現在の方法により容易に不活性化又はスクリーンされない広範囲の感染性物質からの予防性保護を有する移植のための骨の処理方法を提供する。特に、本発明は、広範囲の感染性物質から骨を脱汚染化するのみならず、また、そのような感染性物質を有するいづれかの細胞又は残骸を排除するために骨を効果的に清浄するための単純な方法を提供する。

本発明はまた、実験技士のために安全である、移植のためのヒト骨を清浄し、そして脱汚染化するための方法も提供する。

本発明のそれらの及び他の目的、特徴及び利点が、次の特定の記載及び請求の範囲の復習の後に明らかになるであろう。

光ユ皇！ね本発明によれば、骨を処理し、そしてそれを移植のために適切なものにするための単純、安全且つ効果的な方法が提供され、ここで前記方法とは：ａ）前記骨と、細菌、菌類、ウィルス及び寄生虫を非活性化するのに効果的な包括的な汚染除去剤とを接触し；ｂ）前記骨を清浄し；そしてＣ）最終的に、前記清浄された骨と細菌、菌類、ウィルス及び寄生虫を非活性化するのに効果的な包括的な汚染除去剤とを接触することによってその清浄された骨を汚染除去することを含んで成る。

本発明はまた、上記方法の段階（ｂ）に使用され得、そして骨と洗浄剤とを高温での高圧洗浄条件下で接触せしめることを含んで成る骨を清浄するための方法も提供する。

園血豊翌對本発明の例示においては、例５に記載されるようにして清浄された大腿骨ヘッドを比較する写真である第１図が示される。左側の大腿骨ヘッドを標準方法により清浄し、そして右側の大腿骨へ・ンド【ま高圧／高温洗浄剤清浄方法に従って清浄された。大腿骨へ・ンドを、本発明の清浄方法の安全性を示すために分離した。

発肌皇各定夏藍監この開示のためには、用語′骨“とは、最とも一般的な意味で使用され、そしてすべてのタイプのヒト又は動物の骨組織、たとえ番ヨ完全な骨、骨断片、結合された結合された組織、たとえ番ヨ靭帯及び楔を有する骨のブロック、及び粉砕された骨調製物並びに粉砕された脱イオン化骨洲製物を包含する。

初期又は主な脱汚染化は、骨と、細菌、ウィルス、菌類及び寄生虫を不活性化するのに効果的な包括的な汚染除去剤とを接触することによって達成される。

接触時間は、感染性物質を効果的に不活性化するのに十分であるべきである。好ましくは、骨は包括的汚染除去溶液に、少なくとも２分又はそれ以上、好ましくは１０分又はそれ以上、及び最とも好ましくは少なくとも１時間又はそれ以上の間ソークされる。この−次汚染除去ソーキングの間、骨が全体の外部組織及び脂肪の残骸除去のための溶液から除去され、そして次に、追加のソーキングのための溶液に戻される。

包括的汚染除去剤は、細菌、ウィルス、菌類及び寄生虫を不活性化するのに効果的であるべきである。好ましし１汚染除去剤（よヨードフォア（１ｏｄｏｐｈｏｒｓ）である、有用なヨードフォアは、Ｐｕｒｄｕｅ−Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ　Ｃｏｍｐａｎｙ、　ＩＳＰ、以前のＧＡＦ及びＢＡＳＦから市販されているポリビニルピロリドン−沃素（ＰＶＰ−１又はポビドン沃素）である。

好ましいＰＶＰ−Ｉ調製物は、２０，０００以下の分子量のもの、たとえばＢＡＳＦのＰｖＰ−沃素１７／１２である。それらのうち、最とも好ましいものは、約１０，０００以下の分子量を有するＰＶＰ−１調製物である。適切なヨードフォア溶液は、所望する分子量を有する複合体化剤（ＰＶＰ−１の場合、ポリビニルピロリドン）の溶液及び所望する沃素濃度を付与され得る。たとえば、約１重量％の利用できる沃素濃度は、ＰＶＰｌｏｏｇを水に溶解し、次に撹拌しながら、沃素１０ｇを添加し、そして最後に、合計体積を１！にするのに十分な水を添加することによって得られる。沃素に対するｐｖｐの他の割合が、所望する沃素を有するＰＶＰ−１溶液を得るために使用され得る。適切な沃素濃度は、溶液に対する沃素０．０３〜１重量％、好ましくは０．１〜０．５重量％である。

広範囲の感染性物質、たとえば細菌、菌類、寄生虫及びウィルスを不活性化することが見出されている他の汚染除去剤は、過酸化水素、エタノール、オゾン、酸化エチレン、照射及びそれらの混合物並びにＰＶＰ−１との混合物である。

包括的汚染除去剤溶液は、細菌、ウィルス、菌類及び寄生虫を不活性化するのに効果的な濃度のものであるべきである。ヨードフォア、すなわち主要汚染除去溶液の濃度は好ましくは０．５〜１０重量％及び最とも好ましくは１〜５重量％の範囲であり、そして利用できる沃素濃度は０．０５〜１重量％、好ましくは０．１〜０．５重量％である。

ＰＶＰ−Ｉ濃度は好ましくは、０．５〜１０重量％、及び最とも好ましくは１〜５重量％であり、そして利用できる沃素濃度は０．０５〜１重量％、好ましくは０．１〜０．５重量％である。

主要汚染除去溶液は、洗浄剤を、好ましくは０．１〜５重量又は体積％及び最とも好ましくは１〜３重量又は体積％の濃度で含むことができる。アニオン性、カチオン性、両性及び非イオン性洗浄剤が適切である。好ましい洗浄剤は非イオン性洗浄剤、たとえばボリエトキソエチレンエーテル（Ｕｎｉｏｎ　Ｃａｒｂｉｄｅによる登録商標Ｔｒｉｔｏｎｏｆ　Ｒｈｏｓ　＆　Ｈａａｓとして市販されているもの）又はポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（中でもＩＣＩ及びＳｉｇｍａにより市販されているＴｗｅｅｎシリーズ）である、最とも好ましくは、洗浄剤は、オクチルフェノキシポリエトキシエタノール（Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００（ＴＭ）Ｒｈｏｓ　＆　Ｈａａｓ）である。ポリオキシエチレンソルビタンのうち、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン千ノオレエート（Ｔｗｅｅｎ　８０）が最とも好ましい。

最とも好都合には、主要汚染除去は、０．１〜５％のＰＶＰ−１，１％（体積による）のＴｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００（ＴＭ）溶液に骨を少なくとも２分又はそれ以上、好ましくは１０分又はそれ以上、及び最とも好ましくは少なくとも１時間又はそれ以上の間ソーキングすることによってもたらされる。

例１に示されるように、本発明の予備汚染除去段階は、従来技術の抗生物質カクテルよりも一層効果的である。　ＰＶＰ−１は、その急速な作用、それが不活性化する広範囲の感染性物質（ウィルス、細菌、菌類及び寄生虫）及びヒｌ−＆ｌｌ織へのその比較的近い毒性のために好ましい汚染除去剤である。さらに、ＰＶＰ−１はＨＩＶを不活性化することが見出された。その予備汚染除去段階は、骨がらの感染の危険性を有意に凍じることによって青畳容体を保護するのみならず、また実験技士も保護する。ＰＶＰ−１又はＰＶＰ−Ｔ及び洗浄剤のいづれがを含む主要汚染除去溶液は、初めに柔組織、脂質及び血液生成物を離し、又は軟化することによって骨の容易な清浄を可能にする。

主要汚染除去の後の清浄は、従来の方法によりもたらされ得るが、しかし好ましくは、脂肪、骨髄及び他の残骸を除去するような手段で骨と洗浄剤とを接触することによってもたらされる。洗浄剤は細胞（たとえば血液細胞）を分解し、脂肪を溶解し、そして骨髄を包含するタンパク質を溶解する。洗浄方法は、撹拌及び／又は高温を包含する。撹拌は回転振盪機によりもたらされるが、激しい撹拌が最とも好ましい。そのような洗浄は、無視できる骨髄、細胞、脂肪及び残骸を有する骨を生成し、そして従って、感染性物質を有する細胞を除去することによって移植受容体のための追加の安全性を高める。

適切で、好ましく且つ最とも好ましい洗浄剤は、主要汚染除去段階についての上記のものと同じである。洗浄剤濃度は、約０．１〜５、好ましくは１〜３重量又は体積％である。好ましくは、ヨードフォアは、０．１〜１０％の濃度で洗浄剤溶液に添加される。最とも好ましくは、ヨードフォアはポリビニルピロリドン沃素である。

最とも好都合には、骨は、高温で高圧洗浄条件下で洗浄剤溶液により清浄される。高圧洗浄条件は、骨の内部マトリックス中に洗浄溶液を送るのに十分な力を提供すべきである。そのような高圧洗浄条件はたとえば、ペイントカン振盪機又は高圧洗浄、たとえば高圧液体ジェット流による激しい撹拌を包含する。適切なペイントカン振盪機は、Ｒｅｄ　Ｄｅｖｉｌにより製造しているもの、好ましくはモデル＃ｏ−５４００−ｏＭ　（６１５ｒｐｍ及び０．２５馬力）である。液体ジェット流の圧力は好ましくは、１００〜３，０００　ｐｓｉ及び最とも好ましくは５００〜１．５００　ｐｓｉである。最とも好ましくは、液体ジェット流は無菌状態であり、そして洗浄剤を含む、洗浄は十分に促進され、そして０゜〜８０°Ｃ１好ましくは３７°〜８０”Ｃ５最とも好ましくは３７°〜６０”Ｃの範囲内の温度でもたらされる場合により完全である。高圧洗浄は骨髄を効果的にゆるめ、そして癌性骨マトリックス内の残骸を漸進的に除去する。この高圧洗浄工程の後、骨は、標準方法により処理される骨よりも著しくきれいで且つ白色である（第１図を参照のこと）。

洗浄を促進するために、溶液は、たとえば洗浄操作の間、新鮮な溶液に骨を移すことによって交換され得る。好ましくは、溶液は少なくとも２度変えられる。洗浄の後、洗浄剤は最終的に、無菌水による反復洗浄により除去される。生物学的に許容できるアルコール、たとえばエタノールがたま、洗浄剤を除去するために使用され得る。

アルコールが使用される場合、それは無菌水によりすすぐことによって除去されるべきである。

結合組織を有する骨ブロックが洗浄される場合、その結合組織（Ｎ、靭帯、半月）が、無菌カバー、たとえばプラスチックラップ又は無菌ドレープにより、清浄工程の間、被覆されるべきである。

骨は、殺細菌性質を有する過酸化水素にそれをさらに暴露することによって清浄され、そして汚染除去され得る。洗浄剤による洗浄の後、骨は、０．５〜１０％、好ましくは３％の過酸化水素溶液に、追加の白色化及び微量の脂肪の除去を可能にするのに十分な時間、移される。撹拌が適用され得る。インキュベージジン時間は適切には５〜１２０分、好ましくは５〜６０分間及び最とも好ましくは１５〜３０分間である。処理の後、残留過酸化物は無菌水による集中的な洗浄により除去される。

洗浄の後、骨は最終的に、包装の前、汚染除去される。この最終的な汚染除去は、骨と包括的汚染除去剤とを、少なくとも約２分又はそれ以上、好ましくは少なくとも約１０分又はそれ以上及び最とも好ましくは３０〜６０分又はそれ以上の間、接触することによってもたらされる。適切で、好ましく且つ最とも好ましい包括的汚染除去剤及び濃度は、初期汚染除について記載される通りである。

軟骨又は結合組織が存在する場合、汚染除去及び清浄溶液は好ましくは、塩化ナトリウム又は他の生物学的に許容できる塩を、軟骨又は結合組織におけるｐｖｐ −ｒの濃縮を防ぐのに十分な量で含む、好ましくは０．０１〜０．７５ＭのＮａＣ１及び最とも好ましくは０．１５ＭのＮａＣ＋が使用される。

最終汚染除去のために使用される包括的汚染除去剤は、無菌水による洗浄により骨から除去され、又は感染性物質に対する骨の追加の保護のために薄被膜として骨上に残される。このように被覆された骨は凍結乾燥され得る。

最とも好ましくは、ｐｖｐ−ｒ被膜の形成が可能にされる。骨に付着するＰＶＰ −１溶液は、骨が処理されたことを示す指示薬として作用する濃い全色の琥珀色を付与する。所望には、その琥珀色の骨は直接的に凍結乾燥され、包装され、そして室温で、好ましくは琥珀色のジャーに貯蔵され得る０組織を凍結乾燥する種々の方法が当業界において知られているが、骨を凍結乾燥するために適切であることが見出されている方法は、約１０〜１６８時間、好ましくは約２０〜２８時間の凍結乾燥である。凍結乾燥された骨上の残留ｐｖｐ−ｔは、移植の後、洗浄又は体液により除去されるまで、保護を提供し続ける。同様に、骨は、他の適切な包括的汚染除去剤、ｐｖｐ又はそれらの混合物により被覆され得る。

他方、残留する包括的汚染除去剤は、無菌水によりすすぐことによって除去され、又は化学反応により非活性化され得る。このようにして、元のオフホワイトの骨の色は保持され得る。ヨードフォアは、必要とされるソーキング時間が経過した後、ソーキング溶液に還元剤、たとえばアスコルビン酸ナトリウム又はチオ硫酸ナトリウムを添加することによって化学的に非活性化され得る。還元溶液は、残る分子沃素を非活性化するのに十分なモル濃度及び量のものであるべきである、たとえば、ＩＭのアスコルビン酸ナトリウム５０〜１００μｌが、１０ｍ１の１％ＰＶＰ−１を非活性化するのに十分である。この処理は、溶液を暗カッ色から透明色に変え、そして骨をその天然の色に戻す。

最終汚染除去段階の後、骨は凍結乾燥され、又は急冷保存され又は貯蔵のために凍結され得る。

本明細書に開示される態様で処理された骨は、骨の移植、顎顔面の手術及び歯の手術のために必要とされる骨のために使用され得ることが当業者により理解されるべきである。

次の例は例示的であって、本発明の範囲を制限するものではない。

■−上段階１：祈肌汚染徐去ヒト骨を収穫し、培養し、そして次のような種々の細菌及び菌類により汚染されていることが見出された：スタフィロコーカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）種（負の凝集酵素）エンテロコーカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）種カンジダ　アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）アシネトバクタ−アニトラタス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ａｎｉｔｒａｔｕｓ）タレビエラ　ブネウモニアエ（Ｋｌｅｂｉｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）　ｅ腸骨を、５％ＰＶＰ−１（ポリビニルピロリドン−沃素、ＧＡＰからのＣ１５１１合体）の溶液にソータした。全体の外部組織及び脂肪を除去し、骨を５％ＰＶＰ−１に合計１時間、戻し、そして骨を残留汚染について試験した（５回の反復試験）６次の表は、本発明と塩溶液におけるインキュベーション、正の対照及びパンドラシン／ポリミキシンカクテルとの比較を示す。

絡鬼　人ｉの予備処理　８．７００後−処理塩溶液　１１　、０００抗生物質カクテル　４　、３００５％ＰＶＰ−１３３０結果は、５％ＰＶＰ−１が感染性生物の数を減じることにおいて抗生物質処理よりも卓越していることを示す。

段階１．Ｌｌ骨を、１％（体積）のオクチルフェノキシポリエトキシエタノール（３７°ＣでのＴｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００（ＴＭ）　）を含むスクリュートップジャーに移し、そしてペイントキャン振盪機（Ｒｅｄ　Ｄｅｖｉｌにより製造されるＭｏｄｅｌ　Ｎｏ、０−０−５４００−Ｏにおいて１０分間、激しく振盪した。暖かな１％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００（ＴＭ）の透明溶液に骨を移した後、骨を一晩（３７〜４２°Ｃで約１５〜１８時間）インキュベートし、そして１０分間、激しく振盪した。骨を新鮮な１％Ｔｒｉ　ｔｏｎχ−１００（ＴＭ）に移し、そして再び１０分間、激しく振盪した。残存する骨髄を無菌水による洗浄により除去した。

次に、骨を３％過酸化水素に置き、１０分間振盪し、そして合計６０分間インキュベートした。

清浄された骨を無菌水による洗浄により十分に洗浄し、そして洗浄剤の泡がなくなるまで、（り返してすすいだ。

段階３：柊肌生五束除去清浄された骨を室温で１％ＰＶＰ−１に置き、１０分間、激しく振盪し、合計３０分間インキュベートし、そして溶液から除去した。

段階４：丘−庖所望により、ＰＶＰ−１を骨上で乾燥せしめ、骨を濃い金色にし、そして怒染性物質に対する追加の保護を付与した０次に、被覆された骨を凍結乾燥した。同様に、所望により、骨を骨上でのｐｖｐの乾燥を可能にすることによってＰＶＰにより被覆することができる。

■＝１段階１．靭馴古染盈去ヒトのヒザｏｎ　ｂｌｏｃを、地方の獲得エージエンシーにより収穫し、包装し、そして骨処理実験室に湿潤氷上で輸送した。

その処理実験室で、前記ヒザを、１〜５％ＰＶＰ−１，０，１５Ｍの塩化ナトリウム溶液中に１０〜６０分間、配置した。

段階２：■廠皿製反グ盪企隣接する骨ブロックを有する次のヒザ組織を除去した：ひざの契後十字靭帯前十字靭帯半月板前記断片を、過剰の組織及び脂肪を除去するためにトリムした。

靭帯又は紹を無菌カバー（たとえばプラスチック　ラ・７プ又は無菌ドレープ）によりランプし、そして骨ブロックを、暖かな（４０〜６５”ｃ　＞の１％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００（ＴＭ）による洗浄により清浄し、続いて無菌水により十分にすすいだ。

段階３．終■Ｒ■ 組織を１％ＰＶＰ−１，０，１５Ｍの塩化ナトリウム溶液に置き、室温で１時間、軽く振盪し、そして無菌水により十分にすすいだ。個々の断片を急冷保存し、包装し、そして液体窒素に貯蔵した。

五−主段階１．初見汚染徐去ヒト骨幹部の骨を地方の獲得エージエンシーにより収穫し、包装し、そして骨処理実験室に湿潤氷上で輸送した。

その処理実験室で、前記骨を、５％ＰＶＰ−１，１％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００（ＴＭ）中に１０〜６０時間、配置した。

段階２゜ｋ檄皿袈反込盪企骨をトリムし、過剰の組織及び脂肪を除去し、１％ＰＶＰ−１，１％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００（ＴＭ）溶液に配置した。次に、骨を暖かな（４０〜６５°Ｃ）の１％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００（ＴＭ）による洗浄及びインキュベーションによりさらに清浄し、次に無菌水により十分にすすいだ。

骨を骨用ミルにおいてチップに粉砕し、無菌水によりすすぎ、そして凍結乾燥した。チップをＴｅｋｓ＋ａｒミルにおいてより細かなサイズに粉砕した。

段階３．股不土ｌ化骨粉末を冷たい０．６Ｎの塩酸により脱イオン化し、そして無菌水によりすすいだ。

段階４．鼓肌双■ 脱イオン化された粉末を、１％ＰＶＰ−１に１時間、配置し、無菌水により十分にすすいだ。粉末をバイアルに移し、凍結乾燥し、包装し、そして室温で貯蔵した。

例１の骨に類似するようにして処理された骨を、２０ｍ１の１％ＰＶＰ−１に配置し、そして１時間インキュベートした。インキュベーションの後、０．１３２　ｍｌの０．９１Ｎアスコルビン酸ナトリウムを添加した。その溶液はすぐに透明になり、そして１０分後、骨はその天然のオフホワイト色に戻った。

班−１この例は、高圧／高温洗浄剤清浄方法により得られた結果と標準の方法により得られた結果上を比較する。清浄の後、大腿骨ヘッドを分け、清浄の程度をより良好に示した。

右側に示される大腿骨ヘッドを、６０°Ｃで１％（体積）　Ｔｗｅｅｎ　８０において２日間、ペイントカン振盪＄９　（Ｒｅｄ　Ｄｅｖｉｌにより製造されるＭｏｄｅｌ　Ｎｏ、Ｏ−０−５４００−Ｏを用いて１０分間隔での撹拌を伴ってインキュベートした０次に、大腿骨ヘッドを温水により洗浄し、３％過酸化水素中で２０分間インキュベートし、そして次に、温水により再び洗浄し、過酸化水素を除去した。

左側に示される大腿骨ヘッドを標準方法に従って清浄した。それを６０°Ｃの水により１５分間洗浄し；３％過酸化水素中で１５〜２０分間インキュベートし；６０°Ｃの水により再び洗浄し、過酸化水素を除去し；７０％エタノール中で１時間インキュヘートし；そして６０″Ｃの水により再び洗浄し、エタノールを除去した。第２図はそのようにして清浄された骨の写真である。

補正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の７第１項）平成６年６月３ｏ日

Claims

【特許請求の範囲】

１．骨を処理し、そしてそれを移植のために適切なものにするための方法であって：ａ）前記骨と、細菌、菌類、ウィルス及び寄生虫を非活性化するのに効果的な包括的な汚染除去剤とを接触し；ｂ）前記骨を清浄し；そしてｃ）最終的に、前記清浄された骨と細菌、歯類、ウィルス及び寄生虫を非活性化するのに効果的な包括的な汚染除去剤とを接触することによってその清浄された骨を汚染除去することを含んで成る方法。
２．前記包括的汚染除去剤がヨードフォアである請求項１記載の方法。
３．前記包括的汚染除去剤がポリビニルピロリドン沃素である請求項２記載の方法。
４．前記ポリビニルピロリドン沃素が約２０，０００以下の分子量を有する請求項３記載の方法。
５．前記ポリビニルピロリドン沃素溶液が０．５〜１０％である請求項１記載の方法。
６．前記初期汚染除去のための接触時間が少なくとも約２分又はそれ以上である請求項１記載の方法。
７．前記初期汚染除去のための接触時間が少なくとも約１０分又はそれ以上である請求項１記載の方法。
８．前記初期汚染除去のための接触時間が少なくとも約１時間又はそれ以上である請求項１記載の方法。
９．前記終期汚染除去のための接触時間が少なくとも２分又はそれ以上である請求項１記載の方法。
１０．前記終期汚染除去のための接触時間が少なくとも約１０分又はそれ以上である請求項１記載の方法。
１１．前記終期汚染除去のための接触時間が少なくとも約３０〜６０分又はそれ以上である請求項１記載の方法。
１２．洗浄剤が前記段階ａ）の包括的汚染除去剤に添加される請求項１記載の方法。
１３．前記洗浄剤が非イオン性洗浄剤である請求項１２記載の方法。
１４．前記非イオン性洗浄剤がオクチルフェノキシポリエトキシエタノールである請求項１３記載の方法。
１５．前記骨が結合組織を有する骨ブロックである請求項１記載の方法。
１６．前記骨が、終期汚染除去の前、粉砕される請求項１記載の方法。
１７．前記清浄段階が前記骨を洗浄剤により洗浄することを含んで成る請求項１記載の方法。
１８．前記洗浄剤が非イオン性洗浄剤である請求項１７記載の方法。
１９．前記非イオン性洗浄剤がオクチルフェノキシポリエトキシエタノールである請求項１８記載の方法。
２０．包括的汚染除去剤が前記洗浄剤に添加される請求項１７記載の方法。
２１．前記包括的汚染除去剤がヨードフォアである請求項２０記載の方法。
２２．前記ヨードフォアがポリビニルピロリドン沃素である請求項２１記載の方法。
２３．前記段階ｂ）の清浄段階が前記骨と過酸化水素とを接触することを包含する請求項１記載の方法。
２４．骨を処理し、そしてそれを移植のために適切なものにするための方法であって：ａ）前記骨と、細菌、菌類、ウィルス及び寄生虫を非活性化するのに効果的な包括的な汚染除去剤とを接触し；ｂ）前記骨を清浄し；ｃ）最終的に、前記清浄された骨と細菌、菌類、ウィルス及び寄生虫を非活性化するのに効果的な包括的な汚染除去剤とを接触することによってその清浄された骨を汚染除去し；そしてｄ）前記終期包括的汚染除去剤を非活性化することを含んで成る方法。
２５．前記終期包括的汚染除去剤がヨードフォアである請求項２４記載の方法。
２６．前記ヨードフォアがポリビニルピロリドン沃素である請求項２５記載の方法。
２７．前記ヨードフォアが還元剤との反応により非活性化される請求項２５記載の方法。
２８．前記還元剤がアスコルビン酸又はその塩である請求項２７記載の方法。
２９．前記アスコルビン酸の塩がアスコルビン酸ナトリウムである請求項２８記載の方法。
３０．移植のために適切な、包括的汚染除去剤被覆の骨の製造方法であって：ａ）前記骨と、細菌、菌類、ウィルス及び寄生虫を非活性化するのに効果的な包括的な汚染除去剤とを接触し；ｂ）前記骨を清浄し；ｃ）最終的に、前記清浄された骨と細菌、菌類、ウィルス及び寄生虫を非活性化するのに効果的な包括的な汚染除去剤とを接触することによってその清浄された骨を汚染除去し；そしてｄ）細菌、菌類、ウィルス及び寄生虫を非活性化するのに効果的な包括的汚染除去剤により前記清浄され、汚染除去された骨を被覆することを含んで成る方法。
３１．前記段階ｃ）の終期包括的汚染除去剤が前記被膜を形成する請求項３０記載の方法。
３２．前記段階ｄ）の被覆性包括的汚染除去剤がポリビニルピロリドン沃素である請求項３０記載の方法。
３３．請求項３０記載の方法により製造された、包括的汚染除去剤被覆の骨。
３４．前記被覆性包括的汚染除去剤がポリビニルピロリドン沃素である請求項３３記載の骨。
３５．移植のために適切なポリビニルピロリドン被覆された骨。
３６．骨と洗浄剤とを高圧洗浄条件下で接触することを含んで成る骨を清浄するための方法。
３７．前記高圧洗浄条件が、前記洗浄剤を骨の内部マトリックス中に押し進めるのに十分な激しい撹拌を包含する請求項３６記載の方法。
３８．前記高圧洗浄条件が、前記骨と高圧液体ジェット流とを接触することを包含する請求項３６記載の方法。
３９．前記高圧液体ジェット流が約１００〜３０００ｐｓｉで存在する請求項３８記載の方法。
４０．前記高圧液体ジェット流が約５００〜１，５００ｐｓｉで存在する請求項３８記載の方法。
４１．前記液体が洗浄剤である請求項３８記載の方法。
４２．前記洗浄剤が非イオン性洗浄剤である請求項３６記載の方法。
４３．前記非イオン性洗浄剤がオクチルフェノキシポリエトキシエタノールである請求項４２記載の方法。
４４．前記非イオン性洗浄剤がポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートである請求項４２記載の方法。
４５．前記骨が過酸化水素とさらに接触される請求項３６記載の方法。
４６．骨を処理し、そしてそれを移植のために適切なものにするための方法であって：ａ）前記骨と、細菌、菌類、ウィルス及び寄生虫を非活性化するのに効果的な包括的な汚染除去剤とを接触し；ｂ）前記骨と洗浄剤とを高圧洗浄条件下で接触することによって前記骨を清浄し；そしてｃ）最終的に、前記清浄された骨と細菌、菌類、ウィルス及び寄生虫を非活性化するのに効果的な包括的な汚染除去剤とを接触することによってその清浄された骨を汚染除去することを含んで成る方法。
４７．前記高圧洗浄条件が、前記洗浄剤を骨の内部マトリックス中に押し進めるのに十分な激しい撹拌を包含する請求項４６記載の方法。
４８．前記高圧洗浄条件が、前記骨と高圧液体ジェット流とを接触することを包含する請求項４６記載の方法。
４９．前記高圧液体ジェット流が約１００〜３０００ｐｓｉで存在する請求項４８記載の方法。
５０．前記高圧液体ジェット流が約５００〜１，５００ｐｓｉで存在する請求項４８記載の方法。
５１．前記液体が洗浄剤である請求項４８記載の方法。
５２．前記洗浄剤が非イオン性洗浄剤である請求項４６記載の方法。
５３．前記非イオン性洗浄剤がオクチルフェノキシポリエトキシエタノールである請求項５２記載の方法。
５４．前記骨が過酸化水素とさらに接触される請求項４６記載の方法。
５５．請求項１記載の生成物を用いる方法であって、前記生成物をヒトに導入する段階を含んで成る方法。
５６．前記骨を、細菌、菌類、ウィルス及び寄生虫を非活性化するのに効果的な包括的汚染除去剤と前記骨とを接触することによってさらに最終的に汚染除去する請求項３６記載の方法。
５７．骨を処理し、そしてそれを移植のために適切なものにするための方法であって：ａ）前記骨が骨髄、細胞、脂肪及び他の残骸を実費的に有さないように前記骨を清浄し；そしてｂ）最終的に、前記清浄された骨と細菌、菌類、ウィルス及び寄生虫を非活性化するのに効果的な包括的な汚染除去剤とを接触することによってその清浄された骨を汚染除去することを含んで成る方法。
５８．骨を処理し、そしてそれを移植のために適切なものにするための方法であって：ａ）前記骨を清浄し；そしてｂ）最終的に、前記清浄された骨とポリビニルピロリドン沃素とを接触することによって前記清浄された骨を汚染除去することを含んで成る方法。
５９．前記清浄が高温でもたらされる請求項３６記載の方法。
６０．前記清浄が高温でもたらされる請求項４６記載の方法。
６１．前記高温が約３７°〜８０℃の範囲である請求項５９記載の方法。
６２．前記高温が約３７°〜８０℃の範囲である請求項５９記載の方法。
６３．前記高温が約３７°〜８０℃の範囲である請求項６０記載の方法。
６４．前記高温が約３７°〜８０℃の範囲である請求項６０記載の方法。