KR20150035588A - 이종이식 연조직 이식물 및 제조 및 사용 방법 - Google Patents
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Abstract
[00164] 본 출원은 인간에서의 이식에 사용하기 위한 연조직을 포함하는 이식물 분야에 관한 것이다. 본 출원의 연조직 이식물은 바람직하게는 이종이식 공급원으로부터 수득된다. 본 출원은 이종이식 이식물로부터의 항원을 중화하거나, 제거하거나 또는 실질적으로 감소시키고, 그것을 멸균 및/또는 강화하는 화학적 처리를 제공한다. 본 기술은 탁월한 구조적, 기계적 및/또는 생화학적 통합성을 가지는 연조직 이식물을 산출한다. 본 출원은 또한 힘줄 및 인대와 같은 연조직을 포함하는 이종이식 이식물의 처리 방법, 및 그와 같은 방법에 의해 제조되는 이식물에 관한 것이다.
Description
[관련 출원]
본 출원은 발명의 명칭 "Xenograft Soft Tissue Implants And Methods Of Making And Using"의 2012년 5월 11일자 U.S. 특허 가출원 제61/646,229호와 관련된 것으로써, 그의 우선권 혜택을 주장하는 바이다. 상기 '229 가출원은 그 전체가 의거 참조로써 개재된다.
[연방 후원 연구 또는 개발]
[해당 없음]
[기술 분야]
본 출원은 조직 이식물, 및 바람직하게는 인간에의 이식을 위한 조직 이식물 처리 분야에 관한 것이다. 상기 조직 이식물은 바람직하게는 이종이식 연조직 이식물이지만, 본 출원의 어떤 측면은 골 조직 또는 경조직에, 그리고 더욱 복잡한 구조 예컨대 조합된 골 조직 또는 경조직 이식물, 심지어는 동종이식 또는 이종이식 공급원 유래의 기관에 적용될 수도 있다. 본 출원은 이종이식 이식물로부터의 항원을 중화하거나, 제거하거나 또는 실질적으로 감소시키고, 그것을 멸균 및/또는 강화하는 화학적 처리를 제공한다. 본 기술은 탁월한 구조적, 기계적 및/또는 생화학적 통합성을 가지는 연조직 이식물을 산출한다. 본 출원은 또한 힘줄 및 인대와 같은 연조직을 포함하는 이종이식 이식물의 처리 방법, 및 그와 같은 방법에 의해 제조되는 이식물에 관한 것이다.
환자가 전방 십자 인대(Anterior Cruciate Ligament) (ACL)의 손상과 같은 정형외과적 손상에 직면하였을 때, 이와 같은 병에 대한 이상적인 해결책은 손상 전에 존재하던 것과 같은 형태구조를 재건하게 되는 방식으로 해당 구조를 복구하거나 자연 치유 과정을 증대시키는 것일 것이다. 불행히도, 일차적으로 자연 조직의 자연적인 치유/재성장의 부재로 인하여, ACL 복구 및 재생은 현재까지 성공적이지 않은 것으로 밝혀져 있으며, 그에 따라 전체적인 대체가 관리 표준이 되어 있다. 기증된 인간 사체 (즉 동종이식) 힘줄을 통한 ACL의 대체는 환자가 그의 손상-전 삶의 질로 복귀하는 것을 가능케 하는 효과적인 선택사항인 것으로 입증되어 있다. 그러나, 동종이식 선택사항은 커다란 가변성 및 제한된 가용성을 가지는 원재료에 의존한다는 문제를 부담으로 가지고 있다. 외과의들이 공여자 기준을 제한하는 것에 의해 (예컨대 < 연령 45세 공여자의 이식편만을 허용함), 이식 가변성을 경감하기 위하여 노력하였지만; 그와 같은 제한 역시 가용성 문제를 악화시켰다.
따라서, 목표는 상기한 문제점들을 경감 또는 제거할 수 있는, 유사한 유전적, 물리적 및 생리학적 속성을 가지는 충분한 공여자 조직 풀(pool)을 찾아내는 것이다. 이는 이종이식 조직을 이용하는 것에 의해 이루어질 수 있다. 이종이식 조직 공급원을 사용하게 되면, 번식 및 군집 관리를 통하여 공여자의 유전적 구성이 선택 및 조절될 수 있으며, 제조가 모니터링 및 조절됨으로써 최상의 건강 및 근육 상태가 확보될 수 있고, 공여자 연령이 계획 및 선택될 수 있다. 따라서, 해당 공여자는 그의 최상 연령에 그로부터 회수될 수 있는 고품질 이식편을 생성시키는 데에 가용한 뛰어난 생체역학적 구조를 가지게 된다.
연조직을 포함하는 이식물은 기존의 연조직을 대체 및/또는 복구하기 위하여 수용자에게 이식될 수 있다. 예를 들면, 유전적인 결함, 질환 및/또는 외상이 연조직을 손상시키고, 그에 따라 대체 및/또는 복구가 요구될 수 있다. 이러한 이식물은 동종이식편, 자가이식편 또는 이종이식편일 수 있으며, 수용자는 인간, 포유동물 또는 동물 수용자일 수 있다. 이식물은 종종 수용자가 인간 환자인 경우에 사용된다. 인간 환자에서의 것을 포함하여, 연조직을 포함하는 이식물은 여러 조직들 중에서도 심장 판막, 인대, 힘줄 및 피부를 대체하는 데에 사용되고 있다.
이식물, 특히 자가이식편, 동종이식편 및 이종이식편을 처리하기 위해서는, 하나 이상의 바람직하지 않은 성분을 중화하거나, 제거하거나 또는 실질적으로 감소시키는 것, 및/또는 하나 이상의 바람직한 성분을 주입하는 것이 바람직하다. 예를 들어, 이식물은 부동태화되거나(passivated), 또는 세균, 바이러스, 진균 및 기타 병원성 및 항원성 구성성분을 제거하거나 불활성화시키도록 처리될 수 있다.
연조직을 포함하는 이식물은 세정제 및/또는 감마 방사선을 사용하여 처리될 수 있다. 그러나, 기존 기술들은 하나 이상의 단점을 겪고 있다. 방사선으로부터의 바람직하지 않은 결과에는 라디칼, 수소 및 저-분자량 탄화수소의 형성; 불포화 증가; 변색 및 산화가 포함될 수 있다. 일부 화학 멸균제 (예를 들면 글루타르알데히드)의 사용은 독성 반응이 유발될 위험성을 증가시킨다. 또한, 일부 화학 멸균제 (예를 들면 퍼옥시드)는 이식물, 특히 골 조직 및 경조직에 비해 다소 더 취약한 경향이 있는 연조직을 손상시킬 수 있다. 연조직을 포함하는 이식물의 부동태화와 관련한 구체적인 우려는 처리되는 연조직이 이완의 증가, 경성의 감소, 강도의 감소 또는 생체적합성의 감소를 겪을 수 있으며, 이는 이식물의 가변적인 성능으로 이어질 수 있다는 것이다. 연조직의 과도한 이완, 또는 경성 또는 강도 또는 생체적합성의 감소를 야기하지 않는, 부동태화 방법을 포함한 처리 방법을 확보하는 것이 바람직하다.
인간 면역결핍 바이러스 (HIV)와 같은 병원체의 파괴를 확보하기 위하여, 조직 파괴를 초래하는 선량으로 감마 조사가 사용되어 왔다 (예컨대 3.5 Mrad; 예를 들면 문헌 [Rasmussen, et al., J. Arthroscopic and Related Surgery, 10(2):188-197, (1994)]; [Goertzen, et al., British Soc. of Bone and Joint Surg., 77:204-211 (805)]; [Loty, et al., International Orthopaedics, 14:237-242, (1990)] 참조). 에틸렌 옥시드의 사용은 염증 반응을 생성시키는 이식물을 초래하는 것으로 밝혀졌다 (문헌 [Kudryk, et al., J. Biomedical Materials, 26:1477-1488, (1992)]; [Thoren, et al., Clin. Orthopaedics, 318:259-263, (1995)]; [Simonian, et al., Clin. Orthopaedics, 302:290-296, (1994)]; [Jackson, et al., Am. J. Sports Medicine, 18:1-9, (1990)]). 표준적인 화학 용액 처리는 용액이 접촉하게 되는 표면을 멸균하는 데에는 효과적이지만, 잠재적으로 병원성 생물체가 존재할 수 있는 조직의 간극에 도달하기에는 불충분하게 침투하는 경향이 있다. 연조직의 멸균과 관련하여, 조사, 에틸렌 옥시드 또는 화학 용액 처리에 의한 연조직의 손상 가능성은 특히 중요한데, 연조직이 골 조직에 비해 손상에 더 민감하기 때문이다. 퍼옥시드와 같은 더 약한 멸균제조차도 조직의 팽창 및 잔류 반응 부산물의 존재로 인하여 손상을 야기할 수 있다.
바람직한 처리 방법은 하기 특징들 중 하나 이상을 포함한다: 광범위한 세균, 바이러스 및 진균 병원체의 효과적인 제거 또는 불활성화; 이식 독성의 부재; 생체역학적 강도 또는 성장-유도 특성과 같은 바람직한 조직 특성의 유지 또는 향상; 광범위한 수술적 변형 및/또는 광범위한 조직 유형에 대한 효과성; 이식을 위한 멸균 포장 및 전달을 확보하기 위한, 최종 이식 조직 용기에서 과정을 종결짓는 능력; 자동화된 조절 및 모니터링 시스템을 적용하고 자동화되고 확인된 과정을 개발하는 능력.
이종이식 이식물을 개발하는 것과 연관된 문제는 외래 이종-항원의 충분한 제거이다. 그와 같은 항원결정인자, 특히 Galα1-3Gal_1-4GlcNAc-R (종종 알파-gal로 지칭됨)의 존재는 인간 신체가 이와 같은 글리코접합체를 특이적으로 표적으로 하는 항체를 가지고 있기 때문에, 중화하거나, 제거하거나 또는 실질적으로 감소시키는 것이 중요하다. 이와 같은 이종-항원을 포함하는 이종이식 공급원으로부터 유래하는 이식편은 이식되고 나면 인간 신체에 의해 급성으로 거부된다.
[발명의 개요]
일 측면에서, 본 출원은 인간 환자에서 사용하기 위한 이종이식 조직 이식물에 관한 것이다.
본 출원은 또한 바람직하게는 ACL 대체용이며, 바람직하게는 이종이식 조직으로부터 설계되는 연조직 이식물에 관한 것이다. 이종이식 공급 재료는 인간 수용자에게 위협을 가할 수 있는 소 해면 뇌병증 (BSE) 또는 기타 이종이식 특이적 또는 비-특이적 질환이 억제되어, 없다. 처리 후 수득되는 이식편은 인간 수용자에서 생체적합성이며, 이종이식 항원으로 인한 실질적으로 유해한 면역 반응 또는 거부가 없다. 일부 실시양태에서, 처리 후 수득되는 이식편은 생체활성이어서, 치유, 재형성 및 통합을 향상시킨다.
본 출원은 또한 수용자에의 이식에 더욱 적합한 연조직을 포함하는 이식물의 제조 방법에 관한 것이다. 본 기술에 따라 처리되는 연조직 (예컨대 힘줄 및 인대)은 산화성 멸균제 (예를 들면 수소 퍼옥시드), 하나 이상의 세척제, 식염수, 탄수화물, 알콜, 산성 또는 알칼리성 성분 및/또는 이들의 조합 중 어느 것을 함유하는 용액과 같은 세정제와의 접촉에 의해 완전히 또는 부분적으로 부동태화된다. 조직은 바람직하게는 인간에의 이식을 위한 이종이식 공급원으로부터 수득된다. 일부 실시양태에서는, 하나 이상 탄수화물 (예컨대 당) 처리 단계의 사용이 바람직하다.
바람직한 방법은 임의의 초음파처리 사용을 동반한 다양한 세정 용액 존재하에서의 이식 재료를 포함하는 챔버에서의 압력 변동을 포함한다. 이종-항원을 중화하거나, 제거하거나 또는 실질적으로 감소시키면서도 기계적 특성을 강화하고, 바람직하게는 이식물의 치유 속도를 향상시키기 위한 구체적인 방법 단계들이 실행된다. 생성되는 이식물은 자연 조직에 비해 더욱 더 강할 수 있으며, 감소된 미생물존재량(bioburden) 수준을 가지고, 다른 가용한 조직 이식편들에 비해 더 빠른 이식 후 통합을 이룰 수 있다.
소정 실시양태에서, 처리는 개방되거나 폐쇄된 용기 내에서 이루어질 수 있다. 예를 들어, 본 출원의 소정 측면은 조직을 취급하고 화학물질을 용기에 그리고 용기로부터 붓는 것의 용이성을 위하여 매끄러운 테두리가 구비된 금속, 유리 또는 중합체성 비커 또는 수반 내에서 전제척으로 또는 부분적으로 수행될 수 있다. 출원의 소정 측면은 조직의 처리, 취급, 수송 또는 저장 동안 유출 또는 오염을 방지하기 위한 폐쇄를 제공하기 위하여 돌려 잠그거나 끼워 잠그는 실로 고정되거나 압축 고정되는 뚜껑이 구비된 용기를 사용하여 실시될 수도 있다. 일부 또는 모든 처리 요소는 압력 순환이 있거나 없이, 그리고 초음파처리가 있거나 없이 수행될 수 있다.
조직은 제자리에 유지되면서, 다양한 화학물질 또는 화학 용액이 용기 또는 조직 상으로 부어지거나 그것을 통과하는 것에 의해, 또는 개방되거나 폐쇄된 용기, 챔버 또는 통 중 어느 하나에서의 용액 또는 처리 화학물질의 첨가 및 제거에 의해 접촉될 수 있을 것으로 생각된다. 하나 이상의 처리 단계 전, 동안 또는 후에 용기가 개방으로부터 폐쇄로 전환될 수 있을 것으로, 그리고 어느 하나 이상의 가압 단계 전, 동안 또는 후에 압력 순환, 장력 및 초음파처리가 공정에 적용되거나 그로부터 제거될 수 있을 것으로 생각된다. 또한, 조직이 용액으로 통과되거나 거기에 위치된 다음, 그 용액으로부터 제거되거나 그로부터 빼내어 다음 공정 단계를 위한 또 다른 용액으로 도입될 수 있을 것으로 생각된다.
추가적으로, 본 출원의 소정 실시양태는 어떠한 특정 저장 또는 처리 용기도 필요로 하지 않거나 그 주변에 설계되지 않는 처리 시나리오, 골 조직 또는 경조직 및 힘줄 또는 기타 연조직을 포함한 조직을 통한 처리 화학의 흐름에 의존하는 공정, 개방되거나 폐쇄된 초음파처리 조 내에서 이루어지는 공정, 조직의 데브리망(debridement) 공정, 그리고 예를 들면 모두 본원에 개재되는 US 특허 6,837,907호; 6,024,735호; 5,977,432호; 5,977,034호; 5,976,104호; 5,820,581호; 5,797,871호; 및 5,556,379호에 교시되어 있는 것들과 같은 전기의 다양한 조합에 적용될 수 있거나 그것과 통합될 수 있을 것으로 생각된다.
특히, 조절되는 이종항원 제거 또는 감소와 관련된 본 출원의 처리 방법은 힘줄, 인대, 피부, 경막, 근막 및 기타 결합 조직과 같은 연조직 이식편을 포함하며, 또한 골 및 골 유래 구성요소와 같은 경조직 이식편 예컨대 피질 골, 해면 골, 탈무기질화된 골 매트릭스, 조립된 골 이식편 및 자연 발생이거나 조립된 것 중 어느 하나인 경조직과 연조직 조합의 이식편 예컨대 골-힘줄 또는 골-힘줄-골 이식물을 포함한 다중 조직 유형 이종이식편의 제조시 실시될 수 있으며, 거기에 유용할 수 있을 것으로 여겨진다.
본 출원의 방법은 골수, 혈액, 단백질 및 미립자 물질이 효율적으로 중화, 제거 또는 실질적으로 감소됨으로써 남는 것은 본질적으로 조직 매트릭스, 부동태화된 조직 매트릭스, 생체불활성 조직 매트릭스 또는 생체활성 조직 매트릭스이며, 모든 형태의 내인성 물질 및/또는 생존가능 생물체의 급격한 감소가 달성되는 이식물 처리를 제공한다. 하기에 매우 상세하게 기술되어 있는 바와 같이, 이는 바람직하게는 매트릭스를 효율적으로 침투하도록 되어 있는 다양한 세정 및 멸균 용액들을 사용한 압력 순환 또는 변동 과정에 의해 달성된다. 세정 용액의 반복되는 순환 및 전환에 의해, 본질적으로 모든 다공성 매트릭스의 채널들이 막힘없이 세정된다. 이식물의 침투 멸균을 달성하기 위하여, 바람직하게는 동시적인 초음파처리 (초음파 충격으로도 알려져 있음)를 동반한 정해진 프로그램의 (임의로 사전-결정되어 사전-프로그래밍됨) 세척 주기가 사용된다. 변동하는 유압과 초음파 에너지의 조합이 용액 침투 및 내인성 물질 제거를 촉진하는 것으로 여겨진다.
또한, 과정 동안 삼투 구배가 사용되는데, 이는 조직 내외부로의 유동을 생성시킨다. 이는 삼투 순환 (저장성 용액으로부터의 고장성 용액으로의 전이)으로도 지칭된다. 이것은 골수, 혈액, 단백질, 이종항원 및 미립자 물질이 효율적으로 중화, 제거 또는 실질적으로 감소될 수 있는 또 다른 방법이다.
바람직한 방법은 세정 과정 동안의 운동학적 제약(kinematic restraint)의 사용을 포함한다. 이식물이 세정제 (예를 들자면 세제, 알콜 또는 퍼옥시드 등)와 접촉되는 동안의 이식물에 대한 운동학적 제약 (바람직하게는 장력)의 적용은 더욱 효과적인 세정을 산출함으로써 세정제에 기인하는 소정의 손상을 감소시킬 수 있다.
바람직한 방법은 또한 염기성 (7을 초과하는 pH, 바람직하게는 8 부근)인 수준까지 이식편의 최종 pH를 증가시키는 단계를 포함할 수 있다. 이론에 얽매이고자 하는 것은 아니나, 염기성 pH를 가지는 연조직 이식편은 이식편 치유의 강화에 기여할 수 있다. 이는 적어도 부분적으로 염기성 환경이 골형성 활성을 증가시킨다는 사실에 기인하는 것으로 여겨진다. 일부 실시양태에서는, pH를 증가시키는 단계가 생략될 것으로도 생각된다. 추가 단계가 없는 이식편 pH는 5 내지 7 사이, 바람직하게는 약 6이다.
바람직한 이식물은 하나 이상 이종항원의 약 60 %의 조절되는 감소, 약 10 % 미만의 트립신 분해, 및 약 1800 N 이상의 분류 데이터(sorting data) 기준 예상 최대 인장력 (UTF)을 나타낸다.
다른 실시양태에서, 이식물은 하나 이상 이종항원의 약 55 % 이상의 조절되는 감소, 약 10 % 미만의 트립신 분해, 및 약 2020 N 이상의 분류 데이터 기준 예상 UTF를 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본 출원은 효율적이고 경제적인 방식의 안전하고 효과적인 연조직 (바람직하게는 이종이식) 이식물 제조 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 출원은 개시 이식 재료의 바람직한 생물학적 특성을 동시에 훼손하지 않는, 이식 재료의 세정, 관류 또는 부동태화 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 출원은 감소된 항원성을 가지는 이식 재료, 바람직하게는 강화된 생체활성을 가지는 이식물을 산출한다.
본 출원의 일 실시양태는 유사한 동종이식 또는 자가이식 이식물 중 어느 하나에 비해 강화된 수술-후 치유 및/또는 강도를 나타내는, 당 용액을 사용하여 처리된 이종이식 힘줄을 포함하는 이종이식 힘줄 이식물이다.
상기 이종이식 이식물은 수많은 허용되는 이종이식 공급원으로부터 수득될 수 있다. 예를 들어, 이식물은 소 기원의 것일 수 있다. 이식물은 산타 거트루디스(santa gertrudis) 소로부터 채취될 수 있다.
이종이식 힘줄은 신체에 존재하는 다양한 상이한 힘줄들에서 선택될 수 있다. 예를 들어, 이식물은 전방 신전근 힘줄(anterior extensor tendon)을 포함할 수 있다. 예를 들어, 이식물은 내측 손가락 신전근(Extensor Digitorum Medialis)을 포함할 수 있다.
이종이식 힘줄은 이식 전에 허용되는 pH를 나타낼 수 있다. 예를 들어, 이식물은 이식 전에 약 8의 pH를 나타낼 수 있다. 다르게는, 이식물은 이식 전에 약 8의 pH를 나타낼 수 있다.
당은 임의의 허용되는 당일 수 있다. 그와 같은 당의 예에는 글루코스, 덱스트로스, 세렐로스, 알도스, 케토스, 헤미아세탈, 피라노스, 퓨라노스, 에리트로스, 트레오스, 리보스, 아라비노스, 만노스, 알로스, 알트로스, 크실로스, 릭소스, 굴로스, 이도스, 갈락토스, 탈로스, 수크로스 및 프럭토스가 포함된다.
일 실시양태에서, 이식물은 하나 이상 이종항원의 약 60 %의 조절되는 감소, 약 10 % 미만의 트립신 분해, 및 약 1800 N 이상의 분류 데이터 기준 예상 UTF를 나타낸다. 감소되는 이종항원은 α-Gal일 수 있다. 대안적인 실시양태에서, 이식물은 하나 이상 이종항원의 약 55 % 이상의 조절되는 감소, 약 10 % 미만의 트립신 분해, 및 약 2020 N 이상의 분류 데이터 기준 예상 UTF를 나타낸다.
본 출원의 일 실시양태는 하기를 포함하는 이종이식 힘줄의 처리 방법이다: 힘줄로부터 이종항원을 제거하고, 힘줄의 강도를 강화하고, 힘줄을 멸균하고, 힘줄을 화학적으로 세정하고, 임의로 힘줄로부터 잔류 퍼옥시드를 분해하고, 임의로 힘줄의 알칼리성을 촉진하는 단계. 이들 단계는 상기 순서로 또는 또 다른 순서로 수행될 수 있다.
상기 방법은 특정 처리 화학물질 용액을 힘줄과 접촉시키는 하나 이상의 단계를 추가적으로 포함할 수 있다.
이종항원 제거 단계 또는 단계들은 약 1 이상의 물 대 화학물질 비 (WCR)를 가질 수 있다. 분자 강도 강화 단계 또는 단계들은 약 1 미만의 물 대 화학물질 비 (WCR)를 가질 수 있다. 멸균 단계 또는 단계들은 약 1 이하의 물 대 화학물질 비 (WCR)를 가질 수 있다. 전체 방법은 실질적으로 약 0.90인 물 대 화학물질 비 (WCR)를 가질 수 있다.
본 출원의 일 실시양태는 (1) 순종 산타 거트루디스, 브라만(Brahman), 앙구스(Angus) (즉 이들 중 오직 하나 100 %); (2) 25 % 내지 100 % 산타 거트루디스, 브라만 또는 앙구스 혈통 또는 이들의 조합과의 교잡종; (3) 50 % 내지 100 % 산타 거트루디스, 브라만 또는 앙구스 혈통 또는 이들의 조합과의 교잡종; 또는 (4) 산타 거트루디스, 브라만 또는 앙구스에서 선택되는 하나 이상의 혈통을 포함하는 임의의 교잡종으로부터 회수된 처리된 전방 신전근 힘줄을 포함하며, 약 18개월 내지 약 36개월 사이의 연령을 가지고 회수 전에 약 200 kg 이상의 고온 표준 도체중(hot standard carcass weight) (HSCW)을 가지는 동물로부터 회수되는 소 힘줄 대체 이식편이다.
상기 이식편은 인간에서의 전방 십자 인대(ACL) 대체에 사용될 수 있다. 상기 이식편은 평균적인 자연 인간 ACL을 초과하는 파괴 강도(failure strength)를 가지는 이식편일 수 있다.
일 실시양태에서, 전방 신전근 힘줄은 내측 손가락 신전근 (EDM)일 수 있다. 일 실시양태에서, 동물은 연령이 약 18개월 내지 약 24개월 사이이다. 일 실시양태에서, 동물은 회수 전에 약 295 kg 이상의 HSCW를 가지는 것이다.
도 1은 힘줄을 분류하기 위한 단일 가닥 상관관계의 계산법을 나타낸다.
도 2는 루프화된 이식물 인장력 데이터를 나타낸다. 본 출원의 방법에 의해 생성된 힘줄 대 무균 처리된 소 힘줄 대 비교용 인간 힘줄을 나타낸다.
도 3a-3c는 3개월 검시의 다양한 조직들을 나타낸다 (40×). 도 3a는 비비원숭이에서의 이식 후의, 본 출원의 방법에 의해 생성된 소 힘줄을 나타낸다. 도 3b는 비처리 소 힘줄 (대조)을 나타낸다. 도 3c는 비교를 위한 자연 ACL을 나타낸다.
도 4a-4c는 다양한 조직들의 비교를 나타낸다. 도 4a는 비비원숭이에서의 이식 후의, 본 출원의 방법에 의해 생성된 소 힘줄을 나타낸다 (3-개월, 40×). 도 4b는 참조를 위한 인간 햄스트링 자가이식편을 나타낸다 (5-개월, 200× (선행 기술: 문헌 [Marumo 2005])). 도 4c는 비비원숭이 자연 ACL을 나타낸다 (40×).
도 5a-5f는 비교를 위한 대퇴골 터널의 다양한 조직들을 나타낸다. 도 5a는 비비원숭이에서의 이식 후의, 본 출원의 방법에 의해 생성된 소 힘줄을 나타낸다 (4×). 도 5b는 표시된 영역의 확대 버젼을 나타낸다 (20×). 도 3c는 비교를 위한 3개월 400× (문헌 [Scranton 1998])의 인간 자가이식편을 나타낸다. 도 5d는 비비원숭이에서의 이식 후의, 본 출원의 방법에 의해 생성된 소 힘줄을 나타낸다 (10×). 도 5e는 표시된 영역의 확대 버젼을 나타낸다 (40×). 도 5f는 비교를 위한 6주 400× (문헌 [Scranton 1998])의 인간 자가이식편을 나타낸다.
도 6a-6f는 비교를 위한 경골 터널의 다양한 조직들을 나타낸다. 도 6a는 비비원숭이에서의 이식 후의, 본 출원의 방법에 의해 생성된 소 힘줄을 나타낸다 (4×). 도 6b는 표시된 영역의 확대 버젼을 나타낸다 (20×). 도 6c는 비교를 위한 3개월 400× (문헌 [Scranton 1998])의 인간 자가이식편을 나타낸다. 도 6d는 비비원숭이에서의 이식 후의, 본 출원의 방법에 의해 생성된 소 힘줄을 나타낸다 (4×). 도 6e는 표시된 영역의 확대 버젼을 나타낸다 (40×). 도 6f는 비교를 위한 6주 400× (문헌 [Scranton 1998])의 인간 자가이식편을 나타낸다.
도 2는 루프화된 이식물 인장력 데이터를 나타낸다. 본 출원의 방법에 의해 생성된 힘줄 대 무균 처리된 소 힘줄 대 비교용 인간 힘줄을 나타낸다.
도 3a-3c는 3개월 검시의 다양한 조직들을 나타낸다 (40×). 도 3a는 비비원숭이에서의 이식 후의, 본 출원의 방법에 의해 생성된 소 힘줄을 나타낸다. 도 3b는 비처리 소 힘줄 (대조)을 나타낸다. 도 3c는 비교를 위한 자연 ACL을 나타낸다.
도 4a-4c는 다양한 조직들의 비교를 나타낸다. 도 4a는 비비원숭이에서의 이식 후의, 본 출원의 방법에 의해 생성된 소 힘줄을 나타낸다 (3-개월, 40×). 도 4b는 참조를 위한 인간 햄스트링 자가이식편을 나타낸다 (5-개월, 200× (선행 기술: 문헌 [Marumo 2005])). 도 4c는 비비원숭이 자연 ACL을 나타낸다 (40×).
도 5a-5f는 비교를 위한 대퇴골 터널의 다양한 조직들을 나타낸다. 도 5a는 비비원숭이에서의 이식 후의, 본 출원의 방법에 의해 생성된 소 힘줄을 나타낸다 (4×). 도 5b는 표시된 영역의 확대 버젼을 나타낸다 (20×). 도 3c는 비교를 위한 3개월 400× (문헌 [Scranton 1998])의 인간 자가이식편을 나타낸다. 도 5d는 비비원숭이에서의 이식 후의, 본 출원의 방법에 의해 생성된 소 힘줄을 나타낸다 (10×). 도 5e는 표시된 영역의 확대 버젼을 나타낸다 (40×). 도 5f는 비교를 위한 6주 400× (문헌 [Scranton 1998])의 인간 자가이식편을 나타낸다.
도 6a-6f는 비교를 위한 경골 터널의 다양한 조직들을 나타낸다. 도 6a는 비비원숭이에서의 이식 후의, 본 출원의 방법에 의해 생성된 소 힘줄을 나타낸다 (4×). 도 6b는 표시된 영역의 확대 버젼을 나타낸다 (20×). 도 6c는 비교를 위한 3개월 400× (문헌 [Scranton 1998])의 인간 자가이식편을 나타낸다. 도 6d는 비비원숭이에서의 이식 후의, 본 출원의 방법에 의해 생성된 소 힘줄을 나타낸다 (4×). 도 6e는 표시된 영역의 확대 버젼을 나타낸다 (40×). 도 6f는 비교를 위한 6주 400× (문헌 [Scranton 1998])의 인간 자가이식편을 나타낸다.
일 측면에서, 본 출원은 인간에서의 이식에 사용하기 위한 연조직을 포함하는 이식물 분야에 관한 것이다. 본 출원의 연조직 이식물은 바람직하게는 이종이식 공급원으로부터 수득된다. 본 출원은 비제한적으로 자가이식, 동종이식 또는 이종이식 재료를 포함하며, 골 조직 및 연조직, 바람직하게는 인대 또는 힘줄과 같은 연조직을 포함한 이식 재료의 신규한 처리 방법을 제공한다. 구체적으로, 본 출원의 방법에 따라 처리되는 이종이식 연조직 재료는 지금까지는 가능하지 않던 규모의 경제로 이식편이 철저하게 세정되고, 규격화/성형/마감되며, 멸균되고, 포장된 다음 이식되는 것을 가능케 한다. 외래이종-항원의 충분한 제거가 수행됨으로써, 이식되고 나면, 본 출원의 이식물은 인간 신체에 의해 급성으로 거부되지 않는다. 본 출원의 이종이식 연조직 이식물은 예를 들면 ACL 대체물로서 사용하기에 충분한 구조적, 기계적 및/또는 생화학적 통합성을 제공한다. 이러한 이식물은 (현재의 ACL 이식편 선택사항에 비해) 강화된 기계적 특성 및 강화된 치유 특성의 가능성을 가진다. "이식편" 및 "이식물"이라는 용어는 본원에서 호환가능하게 사용된다.
본원에서 사용될 때, "부동태화하다"라는 용어는 이식물로부터의 잠재적으로 병원성인 생물체 및 면역원성인 물질의 제거를 지칭하고자 하는 것이다. 따라서, 이 용어가 멸균성 및 감소된 항원성 모두를 의미하기는 하지만, 이식물의 유익한 생물학적 특성, 예컨대 이식물의 골형성 특성 (골전도 또는 골유도; 골 융합), 자연 조직 기능성, 및 바람직한 구조적 강도의 제거는 이 용어에 의해 의미되지 않는다. "부동태화"라는 용어는 "멸균하다"라는 용어보다 선호되는데, 멸균이 목표이기는 하지만, 그 용어는 확실하게 시험하는 능력이 해당 측정의 현행 실행 기술에 의해, 및/또는 부수적인 조직 파괴의 필요성에 의해 제한된다는 절대적인 함축적 의미를 가지고 있기 때문이다. 또한, 본 출원의 방법에 따라 제조되는 이식물에 모든 항원성 또는 발열원성이 완전히 없을 수는 없지만, 이러한 바람직하지 않은 측면이 크게 감소되는데, 본원에서 사용될 때에는 이것 역시 "부동태화"라는 용어에 의해 의미된다.
본원에서 사용될 때, "생체불활성"이라는 용어는 숙주 신체에 의해 거부되거나 강하게 공격받지 않는 부동태화된 이식물을 지칭하고자 하는 것이다.
본원에서 사용될 때, "생체활성"이라는 용어는 비-생체활성 이식물 또는 조직에 비해 더 높은 비율로, 더 일찍, 더 높은 품질 또는 더 큰 강력성으로 적어도 하나 이상의 치유 또는 성장 현상을 나타내는, 향상된 치유, 재형성 및/또는 통합을 가지는 이식물 또는 조직을 지칭하고자 하는 것이다.
본원에서 사용될 때의 "관류되는" 또는 "관류"라는 용어는 수용자에의 이식용으로 예정된 재료의 채널 및 틈으로의, 그리고 그를 통한 세정 용액의 효율적인 침투를 의미하고자 하는 것이다.
본원에서 사용될 때, 본 출원에 따른 압력 순환 공정에 적용될 때의 "빠른" 또는 "빠르게"라는 용어는 시간 또는 일이 아닌 초 내지 분 수준의 시간 체제를 의미한다.
본원에서 사용될 때의 "초음파처리하다" 또는 "초음파처리"라는 용어는 이식물에 대한 음파 에너지의 효율적인 전달을 가능케 하는 조건하에서의 본 출원의 방법에 따른 처리를 받고 있는 이식물 용기를 통한 음파 또는 초음파 에너지의 적용을 의미한다. 초음파 충격으로도 지칭된다. 제품의 총체적인 초미세구조 손상을 초래하지 않고 효율적인 세정 및 세균 또는 세포 파괴가 달성되도록, 음파 에너지는 유체를 통하여 제품에 전달될 수도 있다.
본원에서 사용될 때의 "연조직"은 비제한적으로 힘줄, 인대, 근막, 전관절, 경막, 피부, 심막, 심장 판막, 정맥, 신경 조직, 점막하 조직 (예컨대 장 조직) 및 연골을 포함한, 골이 아닌 다른 소정의 생물학적 조직을 지칭한다.
본원에서 기술되는 "연조직"은 통상적으로 자가이식편, 동종이식편 또는 이종이식편, 바람직하게는 이종이식편인 콜라겐성 재료이다. 연조직은 예정된 길이의 힘줄, 동일하거나 상이한 길이의 힘줄 다발, 예정된 길이의 인대, 동일한 길이 또는 상이한 길이의 인대 다발, 심막, 진피, 근막, 경막, 피부, 점막하 조직 (예컨대 장 조직), 연골의 분절 또는 분절들, 또는 이들의 조합일 수 있다. 바람직하게는, 연조직의 공급원은 이종이식 힘줄이다.
본원에서 사용될 때의 "이식물" (또는 "이식편")은 인간 또는 동물에의 그의 이식이 유익할 것으로 생각되는 소정의 재료를 지칭한다. 따라서, 이식물은 골, 피부 등과 같은 조직-유래의 재료일 수 있거나, 또는 세정, 멸균 또는 부동태화를 필요로 할 수 있는 외부 표면 또는 내부 구조를 가지는 금속성 또는 합성 재료일 수 있다. 이식물은 자가이식 조직, 동종이식 조직, 이종이식 조직 또는 이들의 조합을 포함할 수 있으며, 골과 같은 무기질화된 조직의 경우, 이식물은 무기질화된 조직, 부분적으로 탈무기질화된 조직, 완전히 탈무기질화된 조직 및 이들의 조합을 포함할 수 있다. 이식물에는 단일체형 또는 일체형 이식 재료, 조립된 골 재료 예컨대 U.S. 특허 출원 제09/782,594호 및 09/941,154호에 기술되어 있는 것들, 성형된 이식물 예컨대 U.S. 특허 제6,440,444호 및 6,696,073호에 기술되어 있는 것들, 그리고 동종이형 생체적합성 매트릭스 예컨대 U.S. 특허 출원 제10/754,310호 및 10/793,976호에 기술되어 있는 것들이 포함될 수 있다. 본 방법 및 장치는 U.S. 특허 제D461,248호; 6,290,718호; 6,497,726호; 6,652,592호; 6,685,626호; 및 6,699,252호에 기술되어 있는 것들과 같은 이식물의 처리에 사용될 수도 있다. 전기한 특허 및 특허 출원들 모두는 본원에 참조로써 개재된다.
정의상, "힘줄"은 근육을 그의 기원 지점, 통상적으로는 골에 결합시키는 콜라겐성 삭(cord)이다. 정의상, "인대"는 골을 연결하거나 내장을 지지하는 콜라겐성 조직의 띠(band)이다. 그러나, 이와 같은 용어들은 이식물 업계에서는 다소 호환가능하게 사용되는데, 힘줄의 언급에 의해 인대의 사용 역시 포괄하고자 한다.
연조직만을 포함하는 이식편이 바람직하기는 하지만, 골-힘줄-골 이식편과 같이 연조직 및 골 모두를 포함하는 이식물 역시 포함된다. 골-힘줄-골 이식편은 하나 이상의 골 블록, 및 상기 하나 이상 골 블록에 결합된 힘줄 (또는 인대)을 포함한다. 역시 포함되는 것은 골 조직 또는 경조직 이식편에 대한 본 출원 소정 측면의 적용이다. 본 출원의 소정 측면은 또한 복합 조직, 전관절 및 기관을 포함한 더욱 복잡한 구조에 적용가능할 수 있다.
비제한적으로 골 조직 및 연조직, 무기질화 또는 탈무기질화 조직 및 전기 조직 유형들의 조합을 포함한 연조직을 포함하는 이식물을 처리하기 위한 신규한 방법이 제공된다. 구체적으로, 본 방법에 따라 처리되는 연조직은 연조직의 과도한 구조적 또는 화학적 손상 없이 연조직이 철저하게 세정, 멸균 및/또는 부동태화되는 것을 가능케 한다. 그의 높은 가용성 및 낮은 비용으로 인하여 이종이식 연조직이 바람직하기는 하지만, 동종이식 또는 자가이식 연조직이 본 방법에 의한 처리에서 유익할 수도 있다.
본 출원은 인간에서 안전하고 효과적인 이와 같은 신규한 이종이식 이식물의 제조 방법에서 외래 이종-항원의 제거를 실행하기 위한 구체적인 단계들을 제공한다. 특히 비제한적으로 Galα1-3Gal_1-4GlcNAc-R (종종 알파-gal로 지칭됨)을 포함한 외래 항원결정인자를 포함하는 이종이식 공급원으로부터 유래하는 이식편은 이식되고 나면 인간 신체에 의해 급성으로 거부된다. 본 발명자들은 이종이식 연조직 이식물로부터의 알파-gal (및 기타 외래 항원결정인자)의 조절되는 제거에서 중요한 요소들 중 하나가 처리에서의 삼투 구배의 조절되는 집중적인 사용이라는 것을 확인하였다.
본 발명자들은 생존가능한 이종이식 연조직 이식물의 제조에서 중요한 단계들 중 하나가 하나 이상의 탄수화물 처리 단계, 바람직하게는 글루코스 용액을 사용한 처리의 사용이라는 것을 확인하였다. 이종이식 연조직의 글루코스 처리는 비-효소적 당화를 가능케 한다. 이론에 얽매이고자 하는 것은 아니나, 이와 같은 당화는 조직이 세정 과정 내내 그의 기계적 강도 및 구조를 유지하는 것을 가능케 하는 데에 유익한 조직의 "경질화" 또는 "강화"를 산출하는 것으로 여겨진다. 본 발명자들은 글루코스 처리가 수행되지 않는 경우 콜라겐이 상대적으로 짧은 시간 기간 (~ < 6 분)의 화학적 공격에 민감하다는 것을 확인하였다. 글루코스 및 당화 현상이 없는 일부 경우에서는, 힘줄이 세정/부동태화 과정 전체를 생존할 수 없다 (즉 구조적 통합성을 상실함). 이와 같은 최초 글루코스 단계의 노출 기간의 경우, 사용 농도에서 약 70분 이상 내지 90분 이하, 또는 그 이상의 노출 시간을 조직에 제공하는 것이 효과적이다.
또한, 삼투 구배가 과정 동안 사용되는데, 이는 조직 내외로의 유동을 생성시킨다. 이는 삼투 순환 (저장성 용액으로부터 고장성 용액으로의 전이)으로도 지칭된다. 비-제한적인 예로써, 세정 용액은 DI수로부터 식염수로, 그리고 다시 DI수로 순환될 수 있다. 이는 물 대 화학물질 비 (WCR)로 표현될 수도 있다. WCR은 전체 과정 내에서의 DI수에 대한 전체적인 노출 대 화학물질 또는 화학물질 혼합물 (식염수 포함)에 대한 노출을 나타낸다. 이와 같은 파라미터는 이종항원 제거는 물론 미생물존재량 제거와 관련된 전체적인 공정 구배를 제공한다. WCR 값은 전체적인 과정 내에서의 주어진 단계 군에 대한 원하는 작용에 따라 다양한 수준으로 설정된다. 이식물로부터 원치 않는 물질을 제거하는 데에는, 1.5 내지 2 수준의 값이 가장 많이 이용된다. 그러나, 너무 높게 설정될 경우, 이와 같은 파라미터는 이식물 구조에 대하여 유해한 효과를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 주어진 처리 단계 내에서 경쟁적인 설계 세부사항을 조율하기 위한 바람직한 환경은 0.60 내지 1.05 사이이다.
진공 압력 대 양압(positive pressure)에 대한 전체적인 노출은 진공 대 압력 비 (VPR)의 용어로 규정될 수 있는데, 이것 역시 이식물 내의 원치 않는 물질을 제거하는 데에 있어서 중요한 인자인 것으로 밝혀졌다. VPR 역시 이식물의 기계적 특성에 대하여 효과를 가진다. 4 수준의 값은 이식물 변형(strain) 및 최종적인 신장 (증가)의 개선에 유익한 효과를 가지지면서도, 이식 후 효소적 분해에 대하여 이식물을 더욱 민감성이 되게 하는 콜라겐 구성의 분자 손상으로부터 보호한다. 그러나, 너무 높게 설정될 경우, 이와 같은 파라미터는 원치 않는 물질 (즉 이종항원)이 이식물로부터 제거될 수 있는 상대적인 효율에 영향을 줄 수 있다. 일부 실시양태에서, 경쟁적인 설계 세부사항들을 조율하는 데에 바람직한 환경은 1.90 내지 2.40 사이이다.
일반적으로, WCR은 하기와 같이 계산된다:
조직이 DI수에만 노출되는 공정 내에서의 전체 시간 = 물 노출 (분)
조직이 물이 아닌 소정의 다른 화학물질 또는 화학물질 조합에 노출되는 공정 내에서의 전체 시간 (이와 같은 계산에서 식염수는 화학물질로 간주됨) = 화학물질 노출 (분)
"물 노출" / "화학물질 노출" = WCR.
이와 같은 비는 전체 과정에 대하여 계산될 수 있으며, 또한 공정 단계 당으로 계산될 수도 있다. 본원에서 사용될 때, 공정 단계는 최종 생성물에서 특정 설계 특성을 창출하게 되는 처방 영역을 나타낸다. 각 공정 단계는 다수의 공정 단계들로 구성되거나 그것을 포함할 수 있다. 각 단계는 접촉 시간, 온도, 압력, 진공, 압력 순환 및 초음파처리와 같은 특정 조건하에서 조직에 노출되는 특정 화학물질 용액으로 구성된다.
높은 WCR은 전체적인 과정 또는 특정 공정 단계 내에서의 화학물질 노출 대비 더 많은 물 노출을 나타낸다. 예를 들어, 2의 값은 주어진 단계 또는 전체 과정 동안 화학물질 노출에 비해 2배 더 많은 물 노출이 존재함을 나타내게 된다. WCR은 모든 중요한 인자 (예컨대 알파-gal 제거, 강도 등)에 커다란 영향을 주며, 또한 변화에 대하여 매우 민감한 것으로 확인되었다. 일부 경우에서는, 약 0.01 단위만큼 적게 이 파라미터를 변화시키는 것에 의해 세부사항, 수율 등의 상당한 차이가 달성될 수 있었다. 이는 바람직한 이식물 속성을 달성하기 위한 과정에서 유체 이동 (즉 삼투 순환)이 매우 중요하였다는 것을 나타낸다.
WCR의 최대한의 효과는 알파-gal 제거와 관련하여 관찰되었다. 높은 비 (예컨대 1.5 내지 2.0 또는 그 이상)에서는 그것이 알파-gal 제거는 향상시키나, 더 높은 값은 힘줄을 "약화시키는" 경향이 있을 수 있다. 낮은 값 (예컨대 1.0 미만)에서는 독성의 잔류 화학물질 농도를 가질 가능성이 증가한다. 따라서, 본 출원의 소정 실시양태의 경우, 전체적인 공정 WCR은 바람직하게는 대략 1.0으로 설정되었다.
일반적으로, VPR은 하기와 같이 계산된다:
조직이 진공에 노출되는 공정 내에서의 전체 시간 = 진공 노출 (분)
조직이 압력에 노출되는 공정 내에서의 전체 시간 = 압력 노출 (분)
"진공 노출" / "압력 노출" = VPR.
이와 같은 비는 공정 단계 당으로도 계산된다. 높은 VPR 값은 (전체 진행 또는 특정 단계에 있어서) 압력 노출 대비 더 많은 진공 노출이 존재한다는 것을 의미한다. 이와 같은 파라미터는 기계적 특성은 물론, 알파-gal 제거에도 역시 영향을 주는 것으로 밝혀졌다.
전기한 과정들은 연조직을 포함하는 이식물의 세정, 멸균 및/또는 부동태화에 사용될 수 있다. 전기한 과정들은 통상적으로 임의의 초음파처리를 동반한 이식물과의 세정제의 접촉 동안 순환성으로 압력을 증가 및/또는 감소시키는 것에 의해, 세정제로 이식물을 관류하는 것을 포함하게 된다. 또한, 과정 동안 삼투 구배가 사용되는데, 이는 조직 내외로의 유동을 생성시킨다. 바람직한 실시양태에서, 처리될 이식물을 포함하는 처리 챔버는 세정제 (통상적으로 소정 농도의 세정제를 함유하는 용액으로 제공됨)로 충전된다. 이식물이 세정제 용액에 침지되는 동안, 처리 챔버 내의 압력은 임의의 동시적인 초음파처리를 동반한 이식물과의 세정제의 접촉 동안 순환성으로 증가 및 감소된다. 순환성으로 압력을 증가시키고 감소시키는 것에 의해, 세정제는 이식물 내로 관류된다. 이식물 또는 그의 일부의 깊고 침투성인 세정, 멸균 및/또는 부동태화는 압력 순환의 속도, 순환한다는 사실, 및 압력 순환의 진폭에 의해, 그리고 추가적으로 WCR 및 PVR 비의 크기, 이러한 비들의 변화, 그리고 단계 내 또는 사이, 공정단계들 내 또는 사이 및 전체로서의 과정 전체에 걸친 이러한 비들의 순서에 의해 달성된다. 따라서, 전체적인 과정은 1 기압 초과 또는 미만의 압력에서 성공적으로 수행될 수 있다. 바람직하게는, 전체 과정은 과정 전체에 걸쳐, 또는 그의 특정 단계에서 내용물의 초음파처리를 가능케 하는 챔버에서 수행된다. 또한 바람직하게는, 전체 과정은 컴퓨터 또는 프로그램가능한 논리 회로 제어하의 프로그램가능한 시스템에서 수행됨으로써, 수동 처리는 최소화되고, 처리의 재현성이 최대화된다. 처리되는 조직이 동종이식 또는 이종이식 조직 중 어느 형태인 경우, 적절한 용매의 선택은 그와 같은 처리가 포함되지 않았을 경우에 비해 한층 더 낮은 항원성을 가지는 처리된 조직을 생성시킨다는 추가적인 장점을 가지며, 일부 경우에서는, 강화된 강도, 경성 또는 기타 기계적 특성은 물론, 강화된 치유, 재형성 또는 기타 생물학적 또는 생화학적 특성이라는 추가적인 혜택을 가질 수 있다.
순환성 압력이 사용되는 경우, 승압은 주변 압력을 제곱 인치 당 약 200 파운드 (PSI) 상회할 만큼, 다르게는 주변 압력을 약 150 PSI 상회할 만큼, 다르게는 주변 압력을 약 100 PSI 상회할 만큼 높을 수 있으며, 주변 압력을 약 75 PSI 상회할 만큼, 다르게는 주변 압력을 약 50 PSI 상회할 만큼, 다르게는 주변 압력을 약 25 PSI 상회할 만큼, 다르게는 주변 압력을 약 15 PSI 상회할 만큼, 다르게는 주변 압력을 약 5 PSI 상회할 만큼 낮을 수 있다. 공정상 더 높은 압력이 고려될 수도 있지만, 그와 같은 압력으로 인한 장비 고장 또는 조직 손상으로 이어지게 되는 압력은 피하는 것이 바람직하다. 감압 또는 진공은 대략 주변 압력만큼, 다르게는 주변 압력을 약 4 PSI 하회할 만큼 높을 수 있거나, 또는 주변 압력을 약 8 PSI 하회할 만큼, 다르게는 주변 압력을 약 12 PSI 하회할 만큼, 다르게는 주변 압력을 약 14 PSI 하회할 만큼, 다르게는 주변 압력을 약 14.7 PSI 하회할 만큼 낮을 수 있다. 선택되는 최소치가 선택되는 최대치 이하라는 전제하에, 상기에 열거된 바와 같은 어떠한 고압 및 저압도 조합되어 압력 범위를 한정할 수 있다. 주변 압력이라는 용어는 방법이 실시되는 위치에서의 공칭 주변 압력, 또는 주어진 공정의 경우에서의 반응 챔버 내에서의 압력의 측정을 위한 참조로서 사용될 수 있는 소정의 적합한 참조 압력 중 어느 하나에 적용된다. 빠르게 순환하는 승압 및 감압이 사용되는 경우, 압력 순환의 속도는 약 1초 이상, 다르게는 약 2초 이상, 다르게는 약 5초 이상, 다르게는 약 10초 이상, 다르게는 약 20초 이상, 다르게는 약 30초 이상, 다르게는 약 50초 이상, 다르게는 약 60초 이상, 다르게는 약 120초 이상, 다르게는 약 180초 이상, 다르게는 약 240초 이상일 수 있다. 빠르게 순환하는 압력이 사용되는 경우, 압력 순환의 속도는 약 5분 이하, 다르게는 약 4분 이하, 다르게는 약 3분 이하, 다르게는 약 2분 이하, 다르게는 약 110초 이하, 다르게는 약 100초 이하, 다르게는 약 90초 이하, 다르게는 약 60초 이하, 다르게는 약 45초 이하, 다르게는 약 30초 이하, 다르게는 약 20초 이하, 다르게는 약 10초 이하일 수 있다. 선택되는 최소치가 선택되는 최대치 이하라는 전제하에, 상기에 열거된 바와 같은 어떠한 최대 및 최소 속도도 조합되어 속도 범위를 한정할 수 있다.
처리 과정은 1 기압 초과 또는 미만의 압력에서 성공적으로 수행될 수 있다. 수은 25 인치 (약 85 kPa 또는 약 12.5 PSI) 내지 챔버 내에서의 용액의 증기압 사이의 배기 압력이 적정하다. 약 40 내지 100 PSI 사이 (약 276 kPa 내지 690 kPa 사이 또는 수은 약 80 내지 200 인치 사이)의 재충진 압력(backfill pressure) 역시 적정하다. 빠르게 순환하는 압력의 사용에 대해서는 각각 본 양수인에 대하여 허여되어 있으며 각각 의거 참조로써 개재되는 U.S. 특허 제6,482,584호; 6,613,278호; 및 6,652,818호에 기술되어 있다.
일 실시양태에서, 전체 과정은 과정 전체에 걸쳐, 또는 그의 특정 단계에서 내용물의 초음파처리를 가능케 하는 처리 챔버에서 수행된다. 또한 바람직하게는, 전체 과정은 컴퓨터 또는 프로그램가능한 논리 회로 제어하의 프로그램가능한 시스템에서 수행됨으로써, 수동 처리는 최소화되고, 과정의 재현성이 최대화된다. 이식물이 처리 챔버 내에 위치된 후, 챔버는 이식물을 용액에 침지하기에 충분한 수준까지 세정 용액으로 충전된다 (그러나 빠른 압력 순환을 용이하게 하기 위하여 약간의 헤드 공간이 챔버 내에 남아있을 수 있음).
본 방법은 이종이식 연조직의 처리를 위한 신규한 세정제 순서를 포함한다. 본 방법의 바람직한 실시양태에서는, 혈액, 지방, 세포, 단백질, 항원, 세균, 바이러스, 진균 또는 기타 물질을 중화하거나, 제거하거나 또는 실질적으로 감소시키기 위하여, 하나 이상의 세정제가 연조직을 포함하는 이식물과 접촉된다. 소정의 세정제들 (및 그와 같은 세정제들의 사용 방법)이 모두 본원에 참조로써 개재되는 U.S. 특허 제6,482,584호; 6,613,278호; 및 6,652,818호에 기술되어 있다. 세정제는 세척제, 소독제 (때로는 소독 작용제로 지칭됨), 오염방지제 (때로는 오염방지 작용제로 지칭됨), 항생제, 살바이러스 화합물 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 조직 특성을 강화하거나, 및/또는 조직 보호를 위하여 특수한 작용제 (예컨대 탄수화물)가 사용될 수도 있다. 또한, 삼투 구배를 설정하기 위하여, 고장성이거나 저장성인 용액이 사용될 수 있다.
세정제는 용액 또는 기타 혼합물의 형태로 제공될 수 있다. 바람직하게는, 세정제는 수용액 (바람직하게는 DI수 사용)으로 제공된다. 예를 들면, 하기의 세정제들 중 하나 이상이 연조직을 포함하는 이식물과 접촉될 수 있다: 산화성 멸균제 (예를 들면 수소 퍼옥시드), 하나 이상의 세척제, 식염수, 탄수화물, 수-혼화성 알콜, 예컨대 에탄올 또는 이소프로판올, 나트륨 비카르보네이트 및/또는 이들의 조합 중 어느 것을 함유하는 용액.
본 방법에 사용하기에 적합한 알콜에는 메탄올, 에탄올, 프로판올 (이소프로판올 포함) 및 부탄올 (이소부탄올 및 tert-부틸 알콜 포함)이 포함된다. 현재는 이소프로판올이 바람직하다. 알콜은 용액 또는 혼합물로써 제공될 수 있는데, 바람직한 농도는 중량 기준 약 0.1 % 내지 약 100 % (중량%), 다르게는 약 5 % 내지 약 95 %, 다르게는 약 20 % 내지 약 90 %의 범위이다. 바람직한 알콜은 낮은 분자량 (예를 들면 약 32 g/몰 내지 약 360 g/몰 범위, 다르게는 약 61 g/몰, 다르게는 약 90 g/몰, 다르게는 약 120 g/몰, 다르게는 약 240 g/몰, 다르게는 약 360 g/몰 이하의 분자량을 가지는 알콜) 및/또는 본 방법에서 사용되는 실시양태의 운용 조건 미만인 융점을 가지는 것들이다. 알콜 대신 다른 보호제, 예를 들면 폴리올이 사용될 수 있을 것으로 생각된다. 바람직한 폴리올은 상대적으로 낮은 분자량 (예를 들면 약 32 g/몰 내지 약 360 g/몰 범위)을 가지는 것들이다.
본 방법에 사용될 수 있는 산화성 멸균제에는 퍼옥시드, 옥시드, 히포클로라이트, 퍼카르복실산 및 오존이 포함된다. 본 방법에 사용하기에 바람직한 퍼옥시드는 수소 퍼옥시드이다. 산화성 멸균제는 용액 또는 혼합물로써 제공될 수 있는데, 바람직한 농도는 중량 기준 약 1 % 내지 약 15 % (중량%) 범위이다.
탄수화물 (또는 일반적으로 "당")은 이당류 또는 단당류 또는 더 복잡한 당일 수 있다. 예를 들어, 상기 방법에 사용될 수 있었던 것들에는 글루코스 또는 덱스트로스 또는 세렐로스 또는 알도스 또는 케토스 또는 헤미아세탈 또는 피라노스 또는 퓨라노스 또는 에리트로스 또는 트레오스 또는 리보스 또는 아라비노스 또는 만노스 또는 알로스 또는 알트로스 또는 크실로스 또는 릭소스 또는 굴로스 또는 이도스 또는 갈락토스 또는 탈로스가 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이당류 (예컨대 수크로스 또는 프럭토스) 역시 고려된다. 글루코스가 바람직하다. "D" 당 (자연 발생)은 물론, "L"도 고려되는데, "D" 배열구조가 바람직하다.
탄수화물은 용액 또는 혼합물로써 제공될 수 있는데, 바람직한 농도는 용매로서 DI수를 사용하여 중량 기준 약 40 내지 50 % (중량%) 사이, 바람직하게는 45 중량% 용액의 범위이다. 20 % 또는 30 %와 같은 더 낮은 농도, 및 55 %, 57 %, 60 % 또는 70 %와 같은 더 높은 농도를 포함하여, 대안적인 탄수화물 농도가 고려된다. 소정의 바람직한 실시양태에서는, 약 40 내지 50 중량% 사이의 초포화 글루코스 용액이 바람직하다. 초포화 용액은 포화 용액의 일부 조건이 변화되는 경우, 예를 들면 온도를 증가시키거나, 포화된 액체의 부피를 감소시키거나 (예컨대 증발에 의함) 또는 압력을 증가시키는 경우에 제조 또는 생성된다.
공정에 사용되는 식염수 용액에는 유기 및 무기 염 용액이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 무기 염의 예는 잘 알려져 있는데, NaCl, NaF, NaBr, KCl, KF 및 KBr이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 유기 염의 예에는 나트륨 아세테이트 (CH3COONa), 칼륨 시트레이트 (C6H5K3O7), 암모늄 아세테이트 (NH4 + CH3COO-), 나트륨 락테이트 (NaC3H5O3), 또는 유기 산과 무기 염기의 반응 생성물로부터 유래하는 기타 염들이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 출원에서 사용 고려되는 염분의 농도는 약 0.6 % 내지 35 %의 범위이다. 특정 실시양태는 27 % 식염수를 이용할 수 있으며, 다른 실시양태는 5.9 % 식염수를 사용할 수 있고, 다른 실시양태는 0.7 % 식염수를 사용할 수 있으며, 다른 실시양태는 0.9 % 식염수를 사용할 수 있고, 다른 실시양태는 1 % 식염수를 사용할 수 있으며, 다른 실시양태는 약 6 % 식염수를 사용할 수 있고, 다른 실시양태는 10 % 식염수를 사용할 수 있으며, 다른 실시양태는 20 % 식염수를 사용할 수 있다.
본 출원 방법의 일부 실시양태에서는, 나트륨 비카르보네이트 또는 나트륨 수소 카르보네이트 (보통 베이킹 소다; 화학식 NaHCO3)가 사용되기도 한다. 나트륨 비카르보네이트는 결정질인 백색의 고체이나, 종종 미세 분말로 보이기도 하며, 물에 가용성이다. 그것은 통상적으로 제빵 소다, 쿠킹 소다 및 소다의 비카르보네이트로 지칭되기도 한다. 구어체로 사용시, 그의 명칭은 나트륨 비카르브, 비카르브 소다 또는 간단히 비카르브로 축약된다.
비이온계 세척제, 음이온계 세척제 또는 양자를 포함하는 세척제 용액이 제조될 수 있다. 본 출원의 방법에서 사용 고려되는 비이온계 세척제에는 알콜 에톡실레이트, 알킬페놀 에톡실레이트, 알킬 폴리글리코시드, 폴리옥시에틸렌 에테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄, 또는 트리톤(Triton)®, 트윈(Tween)® 또는 브리즈(Brij)® 계열 세척제들 중 어느 것 (예컨대 트리톤® X-100)이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 출원의 방법에서 사용 고려되는 음이온계 세척제에는 알킬 벤젠술포네이트, 알킬 술포네이트, 알킬 포스페이트 또는 알킬 술페이트, 예컨대 도데실 술페이트, 미리스틸 술페이트, 세틸 술페이트, 스테아릴 술페이트 및 올레일 술페이트의 나트륨염 (예컨대 나트륨 도데실 술페이트(예컨대 SDS; SLS로도 지칭됨))이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 트리톤® X-100 및 SDS (SLS)가 바람직하다. 트리톤® X-100 및 SDS는 여러 해 동안 골 조직 및 연조직을 처리하는 데에 사용되어 왔다 (예를 들면 U.S. 특허 제4,801,299호 참조). 사용되는 농도는 중량 기준 약 0.5 또는 1 % (중량%) 중 어느 하나이지만, 다른 농도, 예를 들면 약 0.1 내지 10 중량% 사이가 사용될 수도 있다. 세척제는 더욱 효과적인 세정을 위하여 퍼옥시드와 혼합될 수도 있다.
나트륨 라우릴술페이트 또는 나트륨 라우릴 술페이트 (SLS)로도 알려져 있는 나트륨 도데실 술페이트 (SDS 또는 NaDS)는 화학식 CH3(CH2)11OSO3Na를 가지는 유기 화합물이다. 그것은 많은 세정 및 위생 제품에서 사용되는 음이온계 계면활성제이다. 상기 염은 술페이트 기에 결합된 12-탄소 테일(tail)로 구성됨으로써 세척제에 요구되는 양친매성 특성을 물질에 제공하는 유기술페이트의 것이다. 트리톤 X-100 (C14H22O(C2H4O)n)은 친수성 폴리에틸렌 옥시드 사슬 (이것은 평균 9.5개의 에틸렌 옥시드 단위를 가짐) 및 방향족 탄화수소 친지질성 또는 소수성 기를 가지는 비이온계 계면활성제이다. 상기 탄화수소 기는 4-(1,1,3,3-테트라메틸부틸)-페닐 기이다. 그것은 플루로닉(Pluronic) 계열의 세척제와 관련된다. 플루로닉은 에틸렌 옥시드 및 프로필렌 옥시드의 삼블록 공중합체이다. 에틸렌 옥시드로부터 형성되는 부분이 프로필렌 옥시드 유래의 부분에 비해 더 친수성이다. 트리톤® X-100 역시 통상적으로 사용되는 세척제이다.
바람직하게는, 구체적인 세정제는 수소 퍼옥시드, 이소프로판올, 칼리물스(Calimulse)® SLS, 트리톤® X-100 (TNBP), 나트륨 클로라이드 용액, 글루코스 및 NaHCO3이다.
특정 이론에 얽매이고자 하는 것은 아니나, 일부 실시양태에서, 탄수화물, 바람직하게는 글루코스 처리는 이식편에 분자 강도를 제공하는 것으로 여겨진다. 비-효소적 당화를 통하여, 콜라겐은 약간 반응된다. 이와 같은 단계는 조직을 "노화"시킴으로써, 이후 단계에서의 화학적 분해로부터 그것을 보호하면서도 그것이 생화학적으로 더 성숙하게 되도록 한다. 퍼옥시드 및 세척제는 물론, 식염수 처리가 이종-항원 제거에 사용된다. 공동화(cavitation), 화학적 분해 및 삼투 구배를 통하여, 원치 않는 항원 및 세포는 조직으로부터 제거된다. 산화제 및 세척제에의 노출을 통한 멸균은 공동화와 함께 모든 외래 미생물존재량을 변성시키며, 그것은 이후 조직으로부터 세정 제거된다. 알콜 처리는 기계적 강도를 향상시킨다 (주로 경성을 증가시킴). 화학적 세정 (예컨대 물)은 이전 단계로부터 잔존하는 잔류 화학물질을 제거 및 희석하기 위하여 조직을 팽창시키는 데에 사용된다. 임의로, 잔류 퍼옥시드를 분해하는 단계가 수행된다. 퍼옥시드의 수퍼 옥시드 결합을 능동적으로 분해하기 위하여, 이와 같은 단계에서는 베이킹 소다 (NaHCO3)가 첨가될 수 있다. 베이킹 소다는 이식편의 최종 pH를 산성에서 염기성으로 증가시키기도 한다. 일부 실시양태에서, 최종 pH는 약 8, 다르게는 약 7.0 이상, 다르게는 7 초과 이상, 다르게는 약 7.5 이상, 다르게는 약 8.5 이상, 다르게는 약 9 이상이다. 이론에 얽매이고자 하는 것은 아니나, 이식편의 염기성 pH는 이식편의 치유를 강화하는 데에 기여할 수도 있다. 이는 염기성 환경이 골형성 활성을 증가시킨다는 사실에 기인하는 것으로 여겨진다.
그러나, 일부 실시양태에서는, pH를 증가시키는 (및/또는 퍼옥시드의 수퍼 옥시드 결합을 분해하는) 상기 단계가 생략되는 것 역시 고려된다. 추가적인 단계가 없는 이식편 pH는 5 내지 7 사이, 바람직하게는 약 6이다.
본 방법은 처리를 위하여 조직의 표면적을 증가시킬 수 있는 (예컨대 조직을 팽창시키는 것에 의함) 작용제를 사용하여 이식물이 처리되는 단계 또는 단계들을 포함할 수 있다. 예를 들면, 원하는 pH에서 용액을 사용하여 조직이 처리될 수 있고/있거나, 원하는 pH가 하나 이상의 처리 기간 내내 유지될 수 있다.
또한, 본 기술에 따르면, 세정제가 연조직에 적용되기 전, 동안 및/또는 후 중 어느 하나에, 텐셔닝(tensioning) (하기하는 바와 같음)에 의해 연조직이 운동학적으로 제약된다. 운동학적 제약은 단일 제약 또는 다중 제약으로 적용될 수 있다. 운동학적 제약은 일정 방식 또는 가변 방식으로, 정상 상태 또는 시간 가변 방식에 대해 적용될 수 있다.
더 구체적으로, 가압가능 처리 챔버에는 연조직, 임의로 장력이 적용되어 있는 연조직을 포함하는 이식물이 적재된다. 또한, 이식물이 연조직만을, 또는 연조직과 골 및/또는 합성 재료의 조합을 포함할 수 있다는 것은 이해될 것이다.
세정제는 처리 챔버에 도입된다. 이식물을 침지하도록 (다른 말로 하면, 세정제 내에 이식물이 잠기도록), 보통 충분한 향의 세정제가 도입되게 된다. 임의로 초음파처리를 동반한 세정제의 존재하에서, 세정제는 승압 및 감압의 "n"회 일련 주기를 사용하여 이식물의 매트릭스로 가압된다. 변동 압력의 결과로써, 이식물의 매트릭스 채널 (연조직의 내부 포함)은 세정제 및 제거될 성분이 반복적으로 충진되고 비워진다. 이와 같은 단계가 순환되는 회수는 1 내지 약 150 회 (이 경우 n=1-150), 다르게는 약 10 내지 약 50 회, 다르게는 약 2 내지 약 30 회일 수 있다.
세정제가 접촉되는 적합한 온도는 부분적으로 세정제 및 그의 농도에 따라 달라진다. 일부 실시양태에서, 전달 온도는 20 C로 설정되며, 능동적인 유체 가열은 수행되지 않는다. 화학물질 유동/초음파처리의 작용은 작용제를 39 C 만큼 높게 "가열"할 수 있다. 통상적으로, 처리 챔버 온도는 약 27 내지 35 C 사이이다. 일부 실시양태에서, 더 높은 온도 (40 C 이상)는 조직의 화학적 특성을 저하시키기 시작할 수 있다. 힘줄의 경우, 50 C 이상이면 조직의 구조를 저하시키기 시작하게 된다.
세정제는 다양한 단계에서 적합한 시간 기간 동안, 예를 들면 약 1분 내지 약 150분, 다르게는 약 4분 내지 약 60분, 다르게는 약 60분 내지 약 130분 동안 이식물과 접촉될 수 있다. 전기한 시간 기간은 연속되는 시간일 수 있거나, 또는 이식물이 다른 세정제, 세정액 또는 기타 용액과 접촉되는 경우, 시간 기간들로 분배 또는 분리될 수 있다. 압력 처리가 바람직하고 압력 순환이 특히 바람직하기는 하지만, 본 방법은 주변 압력, 승압 또는 감압 또는 진공과 같은 일정 압력에서 조직을 처리하는 데에 적용될 수 있을 것으로도 생각된다.
본 출원의 추가적인 측면으로서, 이식물, 특히 힘줄과 같은 연조직을 포함하는 이식물에 운동학적 제약 (장력, 압축 또는 고정 포함)을 적용하기 위한 방법 및 장치가 제공된다. 힘줄, 골-힘줄-골 이식편 및 기타 연조직과 같은 연조직을 포함하는 이식물이 처리 공정 (예를 들면 하나 이상 세정제와의 접촉을 포함하는 세정, 부동태화 및/또는 멸균)에 적용되는 경우, 처리 공정의 적어도 일부 부분(들) 동안 이식물 (특히 연조직)에 장력을 적용하는 것에 의해 이식물의 손상 (특히 연조직의 손상)이 감소될 수 있다는 것이 발견되었다. 연조직에 장력과 같은 운동학적 제약을 적용하는 것에 의해, 처리 공정 (또는 그의 개별 단계들 중 하나 이상)에 의해 야기되는 손상이 감소, 최소화 또는 제거될 수 있다. 또한, 연조직에 장력을 적용하는 것은 처리 공정의 효과성 및/또는 일관성을 향상시킬 수 있다.
골 조직 및 연조직 이식물을 위한 통상적인 처리 방법에는 예를 들면 모두 본원에 참조로써 개재되는 U.S. 특허 제5,333,626호; 5,512,662호; 5,556,428호; 5,769,893호; 5,797,871호; 5,976,104호; 6,024,735호; 6,293,970호는 물론, 기타 특허 및 공개들에 기술되어 있는 것들이 포함된다. 통상적인 방법에서, 연조직을 포함하는 이식물은 이식물의 텐셔닝 또는 이식물의 운동학적 제약 없이 처리 챔버에 적용되었었다. 그와 같은 통상적인 방법에서, 과정 중 연조직의 위치지정 및 배향은 과정에서 사용되는 세정제, 기구 또는 방법에 의해 변경될 수 있다. 이와 같이 변경되는 위치지정 또는 배향은 서로 다른 이식물 표본들 사이의 비일관성으로 이어질 수 있는데, 서로 다른 이식물 표본은 (예를 들면 중첩 조직 또는 자신을 둘러싸고 있는 조직의 결과로서) 세정제에 대하여 서로 다른 노출을 가질 수 있기 때문이다. 또한, 비일관성인 세정 및 단일 조직에 대한 세정제의 접근이 초래될 수 있는데, 조직의 일 영역은 그것이 외부에 존재하기 때문에 과다노출될 수 있으며, 내부에서 둥글게 뭉치거나 내부에 갇히거나 부적절하게 내부에 제약되는 조직의 또 다른 영역은 약한 세정제 노출을 받게 되기 때문이다. 통상적인 연조직 멸균 방법의 사용에서 발생할 수 있는 또 다른 문제점은 연조직이 위축됨으로써, 나중에 과도한 수술-후 이완을 야기할 수 있는 바람직하지 않은 외관 및 구조적 변화로 이어질 수 있다는 것이다. 연조직 처리에 있어서의 또 다른 우려는 과도한 수술-후 염증이다. 조직 염증은 혈액, 지방 또는 연조직 내부의 기타 물질들과의 다양한 세정제들의 상호작용에 의해 야기될 수 있다. 예를 들어, 내인성 물질들과의 퍼옥시드의 반응은 조직의 팽창을 야기하여 조직 손상으로 이어질 수 있다. 표면 상처에 대한 퍼옥시드의 국소 적용시 관찰되는 바와 같이, 이러한 반응은 보통 발포 반응으로 지칭된다. 퍼옥시드 반응의 잔존성 부산물은 결국 치유 과정에 해로운 수준의 수술-후 염증 반응으로 이어질 수 있다. 조직이 신장 확대(stretched out)되지 않는 경우 (처리 동안 그것이 제약되지 않는 경우), 발포 반응은 더 큰 손상을 야기할 수 있는데, 발포 및 부산물이 조직 내부에 포획될 가능성이 더 크기 때문이다.
본 방법은 전기한 문제점들 중 하나 이상을 감소시키거나, 최소화하거나, 또는 제거할 수 있다. 세정제를 사용한 처리 과정 동안 연조직을 포함하는 이식물에 장력을 적용함으로써, 챔버에서의 연조직의 위치지정이 원하는 방식으로 유지될 수 있으며, 위치지정을 변화시키기에 충분한 힘이 세정제에 적용될 가능성이 없어진다. 세정제가 이식물 (특히 연조직)과 더 균일하고 예상가능하게 접촉되기 때문에, 서로 다른 이식물 사이 및 단일 이식물 내에서 더 큰 일관성이 존재하게 된다. 연조직은 더 적은 위축의 경향을 가지게 되며, 그 결과 바람직하지 않은 외관을 가지는 이식물을 생성시킬 가능성이 덜 존재하게 된다. 처리 과정 동안 연조직에 장력을 적용함으로써, 내부 발포 반응으로부터의 염증 및 손상이 감소될 수 있는데, 발포 작용이 조직 내부에 유지되어 더 큰 손상을 야기하기 보다는 신장된 조직에서 유출될 기회가 더 많이 존재하기 때문이다. 또한, 처리 동안 적용되는 장력은 통상적인 처리 동안 이식편의 수축 및 위축에 의해 야기될 수 있는 수술-후 이완으로부터 이식편을 보호하게 된다.
운동학적 제약을 적용하기 위한 것으로써, 적은 수의 부품을 가지며, 사용하기가 용이하고, 그것이 직면하게 되는 화학물질 및 조건을 견딜 수 있는 장치를 제공하는 것이 바람직하다. 장치가 과도한 수의 제약 또는 작동해야 할 부품을 가지는 것은 바람직하지 않다. 또한, 장치는 사용 및 세정 환경을 견딜 수 있는 재료로 제조되어야 한다. 예를 들어, 장치는 약 120 C (약 250 F.) 영역의 온도를 가지는 오토클레이브내 온도를 견딜 수 있는 것이 바람직하다. 오토클레이브에서는, 스팀이 장치의 다양한 부품과 접촉하여 그것을 멸균해야 한다. 따라서, 장치가 많은 조각, 나사, 깊은 구석 또는 작은 형상부를 가지는 경우, 오토클레이브가 장치의 그러한 모든 부품들을 적절하게 멸균함으로써 그것이 다시 사용될 수 있게 될 가능성이 더 적어지게 된다.
운동학적 제약을 적용하기 위한 장치는 대부분 또는 실질적으로 모든 조직이 처리 과정에 사용되는 세정제에 노출되도록 설계되어야 한다. 장치가 상당량의 조직을 덮거나 처리 과정 동안 세척 또는 세정 용액의 유동을 제한하는 것은 일반적으로 바람직하지 않다. 장치는 이식물을 세정하거나, 부동태화하거나 및/또는 멸균하기 위한 과정 동안에만 유용한 것이 아니라, 회수, 처리, 포장, 출하, 저장, 이식물의 수술전 준비, 이식물의 수술간 준비 및 이식물의 수술간 취급 중 하나 이상의 단계 내내 운동학적 제약을 이식물에 제공하는 데에도 유용하며, 그를 위해 개조될 수 있다.
따라서, 조직 텐셔너(tensioner)는 하기 범위 중 하나 이상에서 일정량의 장력을 적용하도록 설계되어야 한다. 조직 텐셔너에 사용되는 재료는 강하고, 생물학적으로 불활성이며 (다른 말로 하면, 생물학적 조직과 상호작용하지 않음), 그의 사용 및 세정에 고려되는 화학물질 및 온도 환경을 견딜 수 있어야 한다. 조직 텐셔너를 위한 적합한 재료에는 중합체, 세라믹 및 비-부식성 금속이 포함된다 (이에 제한되는 것은 아님). 바람직한 금속에는 스테인리스강, 티타늄, 및 합금 예컨대 니켈-기재 합금, 또는 니켈 또는 크롬을 사용하여 강철을 도금함으로써 수득되는 재료가 포함된다. 바람직한 일 실시양태에서, 텐셔너의 모든 부분은 적합하며 저렴한 멸균가능 재료, 예컨대 스테인리스강, 또는 기타 일반적인 시트 금속 또는 플라스틱으로 제조되며, 그에 따라 텐셔너는 처리, 포장, 출하, 저장 및 수술전 준비 단계들 중 하나 이상 내내 이식편을 동반할 수 있다.
소 이종이식 힘줄 연조직 이식물에 장력이 적용되는 경우, 힘줄에 적용되는 장력의 양은 바람직하게는 약 60-75 파운드 사이의 힘 (약 267 내지 약 334 뉴턴 사이)이다.
힘줄은 보통 근육을 골에 연결하며 장력을 견딜 수 있는 섬유질 결합 조직의 질긴 띠이다. 힘줄은 인대 및 근막과 유사한데, 인대는 하나의 골을 또 다른 골에 연결하고 근막은 근육을 또 다른 근육에 연결한다는 것 이외에는, 이들이 모두 콜라겐으로 이루어져 있기 때문이다. 힘줄은 점탄성 구조로써, 근육으로부터 골로의 힘 전달을 위한 중간물로 작용한다. 신장될 경우, 힘줄은 연조직의 기계적 거동을 가진다. 몇 가지 연구는 힘줄이 골과 대단히 유사하게 성장 및 재형성 과정을 동반한 기계적 하중의 변화에 반응한다는 것을 입증하였다. 이론에 얽매이고자 하는 것은 아니나, 처리 동안의 힘줄의 장력이 좀 더 그의 "자연 상태"에서의 조직의 처리를 가능케 함으로써, 더욱 효과적인 세정은 물론, 그의 기계적 구조를 보존하는 것을 가능케 하는 것으로 여겨진다. 사용되는 장력의 양은 시간 경과에 따른 (텐셔너 상에 있는 동안) 이완이 최소화되도록 설정된다. 바람직한 이완의 양은 약 100 N 미만이며, 90 N 미만이 더욱 바람직하고, 50 N 미만이 바람직하다. 상기 이완 범위 내에서의 유지는 더욱 효과적인 연조직 처리를 가능케 한다.
본 출원은 바람직하게는 소 조직으로부터 설계된 ACL 대체에 사용될 연조직 이식물에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 그와 같은 이식물은 소 힘줄, 바람직하게는 동물 하지 (신전근) 유래 힘줄로부터의 유래하게 된다. 다르게는, 다른 해부학적 위치 및 다른 동물로부터의 힘줄, 인대 또는 기타 연조직이 사용될 수도 있다. 예를 들면, 소 또는 기타 이종이식 공급원으로부터의 두부, 경부, 등 또는 꼬리의 힘줄이다. 본 출원의 처리 과정으로부터 생성되는 이종이식 연조직 이식물은 자연 조직에 비해 더 강하며, 미생물존재량이 없고, 또한 현재의 ACL 선택사항에 비해 이식 후 더 빠른 통합을 가질 수 있다.
소정 실시양태에서, 본 출원의 이종이식 연조직 이식물은 하기의 특징들을 가진다:
1. 탁월한 강도: 전방 경골(anterior tibialis) 유래 인간 이식물에 비해 더 강한 것으로 밝혀짐
2. 생체적합성: 이식 후 외래 항원으로 인한 눈에 띄는 유해한 면역학적 반응 또는 거부가 없는 것으로 밝혀짐
3. 멸균: 수용자에서 부정적인 반응을 방지하기에 충분한 미생물존재량 감소가 존재하는 것으로 밝혀짐.
본 방법이 "생존가능" 미생물존재량을 제거한다는 것을 보증하기 위해서는, 14일 파괴 멸균 배양이 수행될 수 있다. 이와 같은 시험은 멸균성과 관련한 보증 수준을 제공한다.
처리-후에는, "생체적합성"을 측정하기 위하여 트립신 분해 검정이 수행될 수 있다. 이와 같은 측정기준은 이식편이 이식되고 나서 그것이 "즉시" (1개월 이내) 흡수 및/또는 분해됨으로써 부적절한 강도를 초래하지 않게 된다는 것을 보증한다. 이와 같은 값은 가변적인 트립신 및 콜라게나제 분해 값을 사용하여 이식물의 흡수를 조사한 래트 연구에서 유래하였다. 30 %의 값이면 생체내 기작을 통한 허용불가능한 이식물 분해와 고도로 상관되는 것으로 밝혀졌다. 3-5 %의 값이 생체내 기작을 통한 허용가능한 이식물 분해와 상관되는 것으로 밝혀졌다.
처리-후, 수소 퍼옥시드 잔류 화학물질 분석이 수행될 수도 있다. 이와 같은 측정기준은 이식편이 이식되고 나서 세포독성 수준의 수소 퍼옥시드를 가지지 않게 된다는 것을 보증하게 된다. 이전의 연구들은 이와 같은 화학물질이 > 3 ppm의 값이면 ISO 10993-5 MEM 용리 시험을 통과하지 못함으로써 조직에 독성이라는 것을 나타내었었다. 그러나, 조직 유래 이식편에 적용하였을 때 잘못된 양성의 결과를 산출하는 이와 같은 시험의 이력상 특성으로 인하여, 일부 경우에는 약 100 ppm 이상의 결과가 허용가능한 것으로 간주될 수도 있다.
이종이식 이식물의 한 가지 특성화는 외래 이종-항원 제거의 측정이다. Galα1-3Gal_1-4GlcNAc-R (종종 알파-gal로 지칭됨) 등과 같은 외래 항원결정인자는 인간 신체가 이러한 글리코접합체를 특이적으로 표적으로 하는 항체를 가지고 있기 때문에, 제거하거나, 중화하거나 또는 실질적으로 감소시키는 것이 중요하다. 이와 같은 이종-항원을 포함하는 이종이식 공급원으로부터 유래하는 이식편은 이식되고 나서 인간 신체에 의해 급성으로 거부된다. 이에 따라, 알파-gal의 제거가 측정된다. 예비 비비원숭이 연구는 60 % 만큼 낮게 제거된 이식물이 거부되지 않았음을 입증하였다. 거센 면역 반응을 도출하지 않았던 이와 같은 연구시 이용된 양성 대조는 40 %의 제거를 가졌었다. 이와 같은 제거를 측정하기 위하여, 동일하게 처리된 이식물로부터 평균 2개의 샘플이 채취된다. 일 예에서, 55 % 이상의 평균 알파-gal 제거이면 허용가능한 이식편 성능과 상관되는 것으로 밝혀졌다. 제거 %는 절대적이 아닌 상대적인 알파-gal 측정치를 나타낸다는 것에 유의하라.
이론에 얽매이고자 하는 것은 아니나, 일부 잔류 수준의 알파-gal은 실제로는 유익할 수도 있는 것으로 알려졌다. 그것이 충분히 감소되거나 및/또는 변성될 경우, 인간 숙주에 재통합되는 이종이식편 내의 알파-gal (또는 기타 외래 항원결정인자)의 잔류 "단편"이 실제로는 치유를 강화할 수 있는 것으로 여겨진다. 강화되는 치유의 일부 증거 (조직학에 의해 지지됨)가 본 출원의 소 힘줄 이식편에서 나타났다. 이종이식 이식물의 이와 같은 강화/촉진되는 치유에 대한 가능한 설명은 백신 (가장 구체적으로는 서브유닛 백신)의 작용 양식과 유사하다. 이와 같은 백신은 감염성 세균 또는 바이러스의 일부에 수용자를 노출시키는 것에 의해 작용한다. 이러한 일부는 통상적으로 부정적인 질환 반응을 야기하지 않으면서 면역 반응을 도출하는 관련 감염성 생물체의 비-감염성 항원이다. 본 출원의 소 힘줄 이식물에 의해 유사한 반응이 촉발되는 것으로 여겨진다. ACL 대체 후 치유 단계반응의 제1 단계는 "염증성" 단계이다 (문헌 [Woo 2000] 및 [Scheffler 1998]). 이와 같은 단계는 "촉진성(encouraging)" 항원 또는 항원들의 조합의 존재로 인하여 촉진되는 것으로 여겨지는데, 그의 유해한 효과는 더 양성이 되었으나; 이러한 항원들은 여전히 수용자 반응을 가능케 하는 것으로 보인다. 따라서, 본 출원의 소정의 바람직한 실시양태에서, 약간 감소된 수준으로 부분적으로 또는 불완전하게 제거된 알파-gal을 가지는 이종이식 힘줄 이식물은 단순히 생체-불활성인 대신 생체활성인 것으로 여겨진다.
ACL 대체에 있어서, 바람직한 이식편 배열구조는 루프화된(looped) 2 가닥 이식편이다. 이와 같은 배열구조에서, 이종이식 이식물은 루프화된 직경 (LD) 크기에 관계없이 98.6 %의 평균 자연 ACL (문헌 [Woo 1991]에 따르면, 자연 ACL 강도 = 2160 N)에 비해 더 큰 파괴 강도를 가질 가능성을 가지게 된다. 출원인에 의해 수집된 데이터는 본 출원의 대표적인 이종이식 힘줄 이식물의 평균 t=0 인장 강도(pull strength)가 6061 N임을 나타내었다. 이와 같은 값은 4 가닥 자연 햄스트링에 대하여 문헌에서 발견된 가장 큰 평균 값 (문헌 [Hamner 1999]에 따르면, 4590 N)에 비해 통계적으로 1200 N 더 강한 것이다. 도 2 및 실시예 1을 참조하라.
힘줄 (또는 인대)은 잡기가 어려울 수 있는 섬유질 이식 재료이다. 따라서, 힘줄 이식편을 이용함에 있어서의 문제들 중 한 가지는 이식시 어떻게 힘줄을 고정하느냐 하는 것이다. 사용되는 한 가지 해결책은 편평한 표면에 대하여 향상된 악력을 제공하는 소정 종류의 톱니(teeth) 또는 실(thread)을 가지는 구성요소를 사용하여 힘줄을 "무는" 것이다. 그렇게 하기 위한 방법은 그것이 이식되는 골 터널의 벽에 대하여 이식 인대를 압축하는 간섭 스크류(interference screw)를 사용하는 것이다.
스크류는 비-흡수성의 생체-적합성인 재료 예컨대 스테인리스강, 티타늄, 코발트 크롬-몰리브덴 합금 또는 기타 합금으로 제조될 수 있다. 다른 비-흡수성의 생체-적합성인 재료로는 폴리아미드, 폴리에틸렌, 폴리비닐 알콜, 폴리아크릴로니트릴, 폴리테트라플루오르에틸렌, 폴리에스테르 및 이들의 조합과 같은 것이 사용될 수 있다. 이러한 스크류는 봉합사를 결합시키기 위하여 일 단부에 구멍을 가질 수도 있다.
생체흡수성 스크류가 사용될 수도 있다. 생체흡수성 재료의 예에는 폴리락티드, 폴리(L-락티드) (PLLA), 폴리(D,L-락티드) (PLA), 폴리(글리콜리드) (PGA), 폴리(L-락티드-co-D,L-락티드) (PLLA/PLA), 폴리(L-락티드-co-글리콜리드) (PLA/PGA), 폴리(글로콜리드-co-트리메틸렌 카르보네이트) (PGA/PTMC), 폴리디옥산온 (PDS), 폴리카프로락톤 (PCL), 폴리히드록시부티레이트 (PHBT), 폴리(포스파젠), 폴리(D,L-락티드-co-카프로락톤) (PLA/PCL), 폴리(글리콜리드-co-카프로락톤) (PGA/PCL), 폴리(포스페이스 에스테르), 폴리무수물, 폴리비닐 알콜, 친수성 폴리우레탄 및 이들의 조합이 포함된다. 흡수성 스크류는 생체복합체(biocomposite)로 제조될 수도 있다. 생체복합체 재료는 생물학적 세라믹을 생체흡수성 중합체와 합쳐, 스크류용으로 흡수 및 치유 프로필을 변화시킨다. 생물학적 세라믹에는 트리칼슘 포스페이트 및 히드록시아파타이트가 포함된다.
또 다른 고정 방법은 단추 및 봉합사를 사용하여 골 터널에 이식편을 고정하는 것이다. 추가적인 방법은 십자-핀(cross-pin)을 수직 방식으로 터널로 통과시키고, 일부 실시양태에서는 이후 이식편을 십자-핀에 고정시키거나 그 주변에 루프화시키는 십자핀고정(crosspinning)을 사용하는 것이다. 또 다른 방법은 이식편을 골 터널로 통과시켜 후면 단부로 유출시킨 다음, 이식 인대를 터널 외부에 부착시키는 (예를 들면 스크류 및/또는 와셔 및/또는 스테이플을 사용) 것이다.
조직 공급원/세부사항
일부 실시양태에서, 본 출원은 바람직하게는 ACL 대체용이며, 이종이식 조직으로부터 설계되고, 공급원 조직 재료를 조절할 수 있다는 현행 순화 전략의 장점을 취하게 되는 연조직 이식물을 포함한다. 제품에는 일관성 있는 원재료를 보증하는 상세한 소 명세서가 포함된다. 이종이식편은 돼지, 양, 주조류, 말, 카이만, 소 또는 임의의 다른 적합한 동물 공급원일 수 있다. 소정 실시양태에서, 이종이식편은 바람직하게는 소이다.
이식물은 소 힘줄, 바람직하게는 조직의 전체 길이에 걸쳐 조밀한 구조를 가지는 동물 하지 (신전근)로부터의 힘줄에서 유래할 수 있다. BSE가 없는 소 조직의 일관되고 신뢰성 있는 공급원이 바람직하다. 바람직하게는, 이식편 이식물은 호주 또는 뉴질랜드의 소로부터 회수된다. 세계 동물 건강 기구 (World Organisation for Animal Health) (OIE)에 따르면, 호주의 시골에는 BSE가 없다 (호주 정부 농업, 어업 및 임업국 DAFF06/4D). 따라서, 미국에서 태어나 사육된 소에서의 BSE의 위험성으로 볼 때, 호주 공급원이 바람직하다. 일부 실시양태에서는, OIE 또는 기타 적절한 기관에 의해 BSE가 없으며 구조적으로 동등하거나 적합하다고 해당 재료가 확인되었다는 전제하에, 대안적인 장소가 사용될 수 있다. 힘줄은 소 수족으로부터 회수된다. 일부 실시양태에서, ACL 대체의 경우, 인간에서 사용하기에 바람직한 소 힘줄은 하기와 같다:
외측 손가락 신전근 (Extensor Digitorum Lateralis) (EDL)
총 손가락 신전근 (Extensor Digitorum Communis) (EDC)
내측 손가락 신전근 (EDM).
이들 힘줄 각각은 ACL 대체 이식편으로 사용되기에 충분한 길이를 가지는 전방 신전근이다. 소로부터의 사지 각각은 이러한 3종의 힘줄을 포함한다 (전지(front limb)로부터의 힘줄은 통상적인 도살 기술로 인하여 약간 짧게 절단됨). 조직에는 바람직하게는 흠, 절단 또는 인열이 없다. 바람직하게는, 힘줄에 결합되어 있는 외부 결합 조직의 상당한 제거가 수행된다. 일부 실시양태에서는, 260 mm의 바람직한 최소 길이가 원재료에 요구된다. 이와 같은 바람직한 최소 길이는 처리 동안의 텐셔닝, 및 이후의 80 mm 이상의 루프화된 이식물 제조에 필요한 길이를 고려한 것이다. 길이 요건이 충족되는 한, 다른 힘줄이 사용 고려될 수 있다.
바람직하게는, 해당 길이 전체에 걸쳐 일관된 강도 및 품질을 가지는 힘줄, 바람직하게는 소 내측 손가락 신전근 (EDM)이 사용된다. 처리 전에, 힘줄은 감소된 온도에서 저장될 수 있다. 어떤 소 혈통은 바람직하게도 길며 강한 힘줄을 가지고 있는 것으로 밝혀졌다. 여기에는 바람직하게는 (1) 순수혈통 산타 거트루디스, 브라만, 앙구스 (즉 이들 중 오로지 하나의 100 %), (2) 25 % 내지 100 % 산타 거트루디스, 브라만 또는 앙구스 혈통 또는 이들의 조합과의 교잡종; (3) 50 % 내지 100 % 산타 거트루디스, 브라만 또는 앙구스 혈통 또는 이들의 조합과의 교잡종; 또는 (4) 산타 거트루디스, 브라만 또는 앙구스에서 선택되는 하나 이상의 혈통을 포함하는 임의의 교잡종이 포함된다. 최상의 상대적인 강도 및 힘줄 성숙도를 달성하기 위하여, 동물 체중 (고온 표준 도체중, HSCW)은 바람직하게는 약 295 kg 이상이다. 그러나, 소의 HSCW는 약 266 kg 이하일 수 있으며, 소정 실시양태에서는 약 200 kg 만큼 낮을 수 있다.
더 높은 처리 후 수율을 보증하고 이식물간 기계적 강도의 가변성이 덜하다는 것을 보증하기 위하여, 미가공 조직 이식물 파라미터와 최종 인장력 (UTF) 사이의 상관관계가 개발되었다. 일부 실시양태에서는, 2020 N의 예상 UTF이면 바람직한 것으로 밝혀졌다. 다른 실시양태에서는, 1800 N을 초과하는 임의의 값이 바람직할 수 있으며, 1725 N를 초과하는 임의의 값이 허용가능할 수도 있다. 격렬한 활동시의 자연 인간 ACL의 추정 부하로 볼 때 1000 N을 초과하는 어떠한 값도 임상적으로 허용가능할 수 있으며, 일상 생활의 정상적인 활동하에서의 추정 부하로 볼 때 445 N을 초과하는 어떠한 값도 임상적으로 허용가능할 수 있는 것으로 보고되어 있다 (문헌 [Noyes 1976]).
구체적으로 소에 있어서는, 더 고연령의 소 (예컨대 약 18개월 초과 연령의 것들)로부터의 힘줄이 바람직한데, 통상적으로 그것이 더 크기 때문이다 (더 큰 단면적 (CSA) 및 더 성숙함 (더 우수한 구조적 통합성)). 그러나, 더 "고연령" 소에서는 BSE의 발생이 더 흔한 것으로 밝혀져 있으므로, 이에 관해서는 조율되어야 한다. 일부 실시양태에서는, 약 12개월 이상의 연령, 바람직하게는 약 18개월 이상의 연령, 다르게는 약 18 내지 24개월 사이, 다르게는 약 18 내지 36개월 사이, 다르게는 약 24 내지 30개월 사이, 다르게는 약 30 내지 36개월 사이, 다르게는 36개월 초과의 동물이 허용가능할 수 있다. 동물 축산학에서, 동물의 연령은 다른 인자들과 함께 동물 치아의 발달 분석에 의해 측정될 수 있는 것으로 알려져 있다. 예를 들어, 18개월 미만 연령의 소는 영구 앞니를 가지고 있지 않은 것을 볼 수 있는 반면, 30개월 연령까지의 소는 2개 이하의 영구 앞니를 가지고 있는 것을 볼 수 있다. 36개월 이하의 소는 4개만큼 많은 영구 앞니를 가지고 있는 것을 볼 수 있다. 따라서, 소의 허용성은 치아 존재에 의해 측정될 수 있다. 일부 실시양태에서는, 2 내지 4개 사이의 영구 앞니를 가지는 소가 허용가능하다.
동물 체중과 관련하여, 세부사항은 이력상의 수율을 기준으로 결정된다. 바람직한 분류시 힘줄 수율은 약 80 %이다. 이는 입수되는 미가공 힘줄의 80 %가 2020 N 이상의 단일 가닥 UTF를 가지는 힘줄을 제조하기에 허용가능한 치수를 가진다는 것을 의미한다. 약 295 kg 미만의 소 체중은 수율을 상당히 감소시킬 수 있다. 분류를 위한 단일 가닥 상관관계 수학식을 도 1에 나타내었다. 생물학적 재료를 사용한 작업에서의 많은 문제들 중, 예를 들면 유체 내용물, 및 섬유 구조의 비균질성과 같은 인자들로 인한 재료 특성의 가변 가능성이 있다. 이러한 가변성을 고려하여, 도 1에 도시한 바와 같이, 소정의 상관관계 실시양태는 조직 형태구조의 단순 총괄 측정치를 넘어서는 루프화 직경, 너비 및 두께와 같은 인자들을 포함할 수 있다. 힘줄의 길이를 따라 6개 지점에서 주 (너비) 및 부 (두께) 치수들을 측정하였다. 표준 힘줄 크기측정 블록을 사용하여 루프 직경 (LD)도 측정하였다. 힘줄 형상의 정의에는 주축(major axis)에서의 6개 측정치의 주 평균, 및 부축(minor axis)에서의 6개 측정치의 부 평균이 포함된다. 주축 측정은 바람직하게는 캘리퍼스를 사용하여 이루어졌으며, 부축 측정은 바람직하게는 드롭 게이지(drop gage) (약 200-215 그램의 중량 적용)를 사용하여 이루어졌다.
[
실시예
]
실시예
1
일 실시양태에서, 이식편은 호주 소로부터 회수된 것으로써 이식물의 전체 길이에 걸쳐 조밀한 구조를 가지는 소 힘줄 공급원을 이용한다. 바람직하게는 8.0 내지 11.5 mm 사이의 루프화 직경 (LD) 크기이며, 약 270 mm의 평균 길이를 가지는 이종이식 이식물을 제조한다. 하기 표 (표 1)에 이러한 이식편의 기타 관련 치수 특성들을 요약하였다.
실시예
2:
루프화된
이식물
- 인장력 데이터
도 2에 나타낸 바와 같이, 본 출원의 소 이식물은 "고" 평균 자가이식편에 비해 약 1200 N 더 큰 인장력(pull force)을 나타낸다 (p-값 < 0.01). 이종이식편이 자연 ACL에 비해 더 강할 계산된 가능성은 98.6 %이다 (인간 경우의 참고문헌: 문헌 [Hamner (1999)], [Conner (2008): 4-Strand Hamstring]; 또한 [Woo 1991] 및 [Noyes 1976]). 이와 같은 데이터는 본 출원 소 힘줄 ACL 이식물의 강화된 특징을 예시한다. 플롯은 뉴턴으로 측정된 이식물 강도를 자연 소 힘줄 (비처리), 처리된 동종이식 인간 힘줄 및 문헌에서 찾은 값들과 비교한다. 4 가닥 (4S) 햄스트링 데이터는 문헌 [Hamner] (더 큰 값) 및 문헌 [Connor] (더 작은 값)에서 찾은 그와 같은 이식편의 평균 값이다. 자연 ACL 데이터는 문헌 [Woo] (더 큰 값) 및 문헌 [Noyes] (더 작은 값)에서 찾았다. 처리된 소 데이터를 문헌 [Hamner]에서 찾은 더 큰 평균 4S 햄스트링 데이터와 비교하기 위하여, 통계 분석을 수행하였다. 통계적으로, 소 이식물은 평균 4S 햄스트링에 비해 1200 N 더 강하다. 주의: 소 이식물, 비처리 소 힘줄 (무균 소) 및 BC 인간 AT (전방 경골)는 모두 동일한 시험 방법을 사용하여 2 가닥 (루프화) 이식편으로 시험하였다. 햄너(Hamner)에 의해 측정된 4S 햄스트링은 다른 힘줄이 시험되었던 방법과 유사한 시험 방법을 사용하여 이중 다발 (2개의 루프화된 힘줄)로 시험하였다. 문헌 [Woo 1991] 및 [Noyes 1976]에 의해 측정된 ACL 힘줄을 시험한 것이 어떤 구체적인 시험 방법이었는지는 분명하지 않다. 우(Woo)의 방법이 골 결합을 포함하였으며 무릎 내에서 자연적으로 발견될 때의 ACL을 시험하였다는 것은 분명하다.
주어진 가능성 설명은 웨이불(Weibull) 분석 방법론을 사용하여 수행된 신뢰성 분석이다. 그와 같은 분석 체계는 보통 자동차 부품, 비행기 부품 및 기타 의료 장비 예컨대 관상 스텐트, 혈관확장 풍선 및 신경혈관 색전 코일의 신뢰성을 측정하기 위하여 사용된다. 98.6 %의 가능성은 강도 데이터로부터 측정되는 통계적 값으로써, 95 %의 통계적 신뢰도 수준을 가진다. 비전문가의 용어로 하자면, 그것은 임의의 주어진 소 이식물 (현 방법을 사용하여 처리 및 제조)이 자연 ACL (문헌 [Woo 1991]에 따름)에 비해 기계적으로 탁월하게 될 상대적 "가능성"를 제시한다. 이러한 이식물을 생성시키는 데에 현 처리 및 스크리닝 방법을 이용하게 되면, 이와 같은 값은 강도가 2160 N이 된다는 것을 확인해준다. 임의의 주어진 이식물이 이와 같은 값 미만의 강도를 가질 가능성은 1.4 %이다. 주의: 가능성이 발생율(occurrence)과 혼동되어서는 아니 된다. 이와 같은 값이 제조되는 모든 힘줄 중 1.4 %가 자연 ACL 이식물에 비해 더 약하게 된다는 것을 의미하지는 않는다. 이와 같은 값은 종류상 기상 예보자에 의해 매일 예상되는 비의 가능성과 유사하다. 비의 가능성이 1.4 %일 경우, 비가 오지 않을 것이라는 것이 거의 확실하다. 비의 가능성이 1.4 %이었을 때 실제 비가 오는 횟수는 발생율이 될 것이며, 상이하게 계산되는 상이한 통계이다. 장치 제조 부문에서, 이와 같은 발생율은 제품의 수율과 연관된다.
실시예
3 - 동물 연구
본 출원의 이종이식 ACL 이식물을 이식할 경우 초급성 거부가 방지된다는 것을 보증하기 위하여, 영장류 (구체적으로 비비원숭이)에서의 3개월 동물 연구를 수행하였다. 이와 같은 동물 모델의 선택은 인간에 대한 그의 면역학적 유사성 때문이었다. 구세계 원숭이(old world monkey) (즉 비비원숭이, 마카크 및 리서스 원숭이) 및 유인원 (즉 침팬지 및 고릴라)만이 인간이 보유하는 것과 동일한 항-알파-gal 항체를 가지고 있다. 대체적으로, 이와 같은 연구는 본 출원 이종이식 이식물의 탁월한 특성을 입증하였다. 처리된 이식편의 급성 거부는 발견되지 않았으며, 대부분의 면역학적 혈액 화학이 3개월차에 정상으로 복귀하였고, 이식물 치유가 유의성이 있었으며 (크기 및 신속성에서) 예상밖이었다.
본 연구에서는, 5 마리의 비비원숭이에 본 출원의 방법에 의해 처리된 소 유래 ACL 이식물을 이식하였다. 1 마리의 비비원숭이에는 항생제로만 처리된 (초-급성 반응을 도출할 것으로 생각되는 양성 대조) 비처리 소 유래 이식물을 이식하였다. 그와 같은 처리는 힘줄 회복 동안 도입되었을 수 있는 미생물에 기인할 수 있는 어떠한 면역학적 반응도 방지하기 위하여 양성 대조에 대하여 수행된 것이다. 이식에 대하여 "청산되기(cleared)" 위하여, 비처리 양성 대조를 포함한 모든 이식물로부터의 샘플을 14일 멸균 배양에 적용해야 하였다. 비비원숭이에서 수행된 ACL 대체는 "무릎 개방(open knee)" 기술을 사용하는 것을 포함하였다. 비비원숭이 무릎은 대략 30 내지 40 mm 너비 (경골 플라토의 내측에서 외측으로의 측정)임을 주지하라. 비교하자면, 인간 무릎은 80 내지 100 mm 너비이다.
본 출원의 방법을 통하여 힘줄을 처리한 다음, 하기 파라미터들 (상기한 바와 같음)의 가장 가능성 있는 조합을 가지는 이식물을 선택하였다. 최종 이식물: 최고 α-Gal 제거 (> 60 %), 10 % 미만의 트립신 분해, 및 분류 데이터 기준 최고 예상 UTF (> 1800 N).
비비원숭이들은 AAALAC-공인 시설에서 관리하였으며, 모든 절차는 시설의 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (Institutional Animal Care and Use Committee) (IACUC)에 의해 승인되었다. 6 마리의 비비원숭이를 연구 기간 동안 알루미늄 케이지 내에 단일-수용하였다. 연구 개시 전에, 각 비비원숭이에 대하여 완전한 신체 검사를 수행하였다. 모든 비비원숭이에서의 미미한 치과 질환이 여기에서의 유일한 유의성 있는 발견이었으며, 그외에는 정상적인 암컷이었다. 체중은 신체 검사시 및 연구 전체에 걸친 다양한 시점에 입수하였다.
3개월차에, 모든 동물을 희생시켰다. 일차 연구 결과는 반대측 수족의 ACL (음성 대조) 및 양성 대조에 비교한 각 이식물의 조직병리학적 평가였다. 연구 내내, 이식물이 연구 기간 동안 어떻게 수용자에게 전신적으로 영향을 줄 수 있는지에 대한 의의를 찾기 위하여, 2, 4, 8 및 12주에 면역학적 혈액 혈청학도 평가하였다.
각 동물의 전신성 면역 반응은 4종의 면역학적 검정 (표 2)을 사용하여 평가하였다. 이들 검정 각각은 수술-전, 수술 2주 후, 4주, 8주 및 12주에 각 비비원숭이에 대하여 입수된 혈액/혈청 샘플을 사용하여 수행하였다. 이들 검정 각각에서, 증가되거나 상승된 농도는 이식물에 대한 면역 반응을 나타내므로; 가능한 한 빠른 기준선으로의 복귀가 이상적이다.
혈청 항-α-
Gal
ELISA
항-α-Gal은 이종이식 이식물의 급성 거부의 일차적인 원인인 것으로 생각되는, α-Gal 항원결정인자에의 노출에 반응하여 생성되는 이뮤노글로불린이다. 표준 ELISA 기술을 사용하여 항-α-Gal IgG의 혈청 농도를 평가하였다. 검정은 BSA-α-Gal을 항-α-Gal IgG의 고정을 위한 고정상으로 사용하였다. 항-α-Gal 일차 항체의 검출에는 양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP) 접합 토끼 이차 항-인간 IgG를 사용하였다. 발색원성 기질을 사용하여 HRP를 분해함으로써, 색상을 발현시켰다. 발색원을 사용한 인큐베이션 후, 중지 용액을 첨가하고, 492 nm에서의 흡광도 값을 측정하였다. 이러한 결과로부터, 항-α-Gal 역가를 계산하였다. 항-α-Gal의 역가 농도는 최대 OD (최대 결합)의 50 %를 산출하는 혈청 희석의 역수로 정의하였다. 결과를 수술-전 농도에 대비한 각 시점에서의 항-Gal 항체 농도의 배수-증가 형태로 계산하였다.
총
IgG
및
IgM
항체 농도
ELISA법을 사용하여 총 IgG 및 IgM의 혈청 농도를 측정함으로써, 항-α-Gal 및 비-Gal 항원 반응을 포함하여 모든 소 항원에 대한 면역 반응의 정도를 나타내었다. 간단하게 말하자면, 이러한 검정은 고정상 (미세역가 웰) 고정에 염소 항-원숭이 IgG 또는 IgM 항체를 사용하였으며, 검출에 양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP) 접합된 염소 항-원숭이 IgG 항체를 사용하였다. 포획 및 검출 항체 모두를 원숭이 IgM (또는 IgG) 및 IgA 아가로스 컬럼에서 교차-흡수시킴으로써, IgG (또는 IgM)에 대한 특이성을 보증하였다. 발색원 기질에 대한 노출 및 이후의 중지 용액 후, 450 nm에서의 흡광도 값을 측정하였다. 항체의 농도는 흡광도에 비례하므로, 표준 곡선으로부터 계산하였다. 결과를 미가공 값 (mg/mL)으로 기록하였다.
항체-매개
보체
-의존성 세포독성
본 검정은 생성된 항체가 어느 정도까지 소 세포를 사멸시키는지를 나타내기 위하여 사용하였다. 간단하게 말하자면, 소 말초 혈액 단핵 세포 (PMBC)를 단리하여, 알려져 있는 농도로 조정하였다. 비비원숭이 혈청의 연속 희석 샘플을 소 PBMC에 노출시키고, 인큐베이팅한 후, 토끼 보체를 첨가하였다. 인큐베이션 후에는, 플루오레세인 디아세테이트 및 프로피듐 요오다이드를 사용하여 세포를 염색하였다. 유동 세포측정법을 사용하여 살아있는 세포 (녹색으로 염색) 및 사멸 세포 (적색으로 염색)를 계수하였다. 이러한 데이터로부터, 표적 세포 (소 PMBC)의 50 %를 사멸시키는 혈청 희석으로 정의되는 SLU50을 측정하였다. 이러한 결과를 이식-전 농도에 대비한 SLU50의 배수-증가로 나타낸다. 더 높은 수준의 세포독성은 소 항원에 대한 더 강한 반응 (즉 더 큰 활성의 보체 반응)을 나타낸다.
혼합 림프구 반응 (
MLR
)
본 검정은 항체 생성과 관계없는 소 이식물에 대한 세포성 반응이 있었는지 여부를 나타내기 위하여 사용하였다. 신선한 전혈로부터 비비원숭이 및 소 PMBC를 단리하였다. 소 세포 (이종원성 반응을 측정하는 데에 사용) 및 비비원숭이 세포 중 일부 (동종원성 및 자가원성 반응에 사용)를 미토마이신 C를 사용하여 처리함으로써, 그것이 증식할 수 없게 되도록 하였다. 응답자 세포 (비비원숭이 PMBC)를 자극제 세포 (미토마이신 C 처리된 자가원성, 동종원성 또는 이종원성 세포) 또는 양성 대조 (피토헤마글루티닌-M 또는 PHA-M)와 함께 5일 동안 인큐베이팅하였다. ELISA 키트를 사용하여, 자극제 세포에의 노출로부터 초래되는 세포 증식을 정량하였다. 정상적인 비-자극 비비원숭이 PBMC 증식에 의해 자극된 증식을 표준화함으로써, 각 비비원숭이 및 각 자극제 세포 유형에 대한 자극 지수를 계산하였다. 더 큰 자극 지수는 비비원숭이 PBMC의 증가된 증식, 및 그에 따른 응답자 세포와 자극제 세포 공급원의 더 큰 비적합성을 나타낸다.
결과
혈청 항-α-
Gal
ELISA
기준선 농도에 비교한 전신성 항-α-Gal 생성 농도 (역가)를 측정하기 위하여, 항-α-Gal ELISA를 사용하였다. 이와 같은 검정의 결과를 이식-전 농도에 대비한 역가 농도의 배수-증가로 기록한다. 기준선 혈청 샘플 중 2 마리의 동물은 검출불가능한 혈청 항-α-Gal 농도를 가졌으므로; 다른 모든 동물들의 기준선 값 평균을 연구 기간 동안 이러한 2 마리의 동물에 대한 배수-증가 분석에 사용하였다. 이들 동물이 실제로 극히 낮은 순환 혈청 항-α-Gal 농도를 가졌는지, 아니면 해당 시점에 이들 혈청 샘플과 관련하여 문제가 있었는지는 알려지지 않았다.
연구 과정에 걸쳐, 모든 동물들은 이식 2주 후까지 항-α-Gal 생성의 최대치를 경험하였다. 2주 시점 후, 혈청 항-α-Gal 농도는 나머지 연구 동안 모든 처리된 동물에 있어서 매 시점 하강하였다. 수술-후 감염 (DC12)을 겪은 동물이 상승된 이뮤노글로불린 농도를 가질 것은 예상되었으나; 흥미롭게도 다른 동물들과 비교할 때 연구 과정 동안 항-α-Gal 특이적 IgG 역시 상승되는 것으로 보이게 되었다. 역가 농도의 커다란 증가 중 어느 만큼이 감염 (결과적으로 세포 및 항체의 동원을 증가시킬 가능성이 있음)으로 인한 것인지, 및 그것이 어느 만큼 힘줄 자체와 특이적으로 관련되는지는 알려져 있지 않다. 그러나, 연구 후반부에서의 경향으로 볼 때, 이와 같은 동물은 더 이후의 시점에는 기준선 농도로 복귀하게 되는 것으로 보인다.
연구의 모든 시점에서 혈청 항-α-Gal 농도의 정체를 나타내었던 유일한 동물은 4 내지 8주 사이의 양성 대조였다. 이식물이 다른 모든 이식물에 비해 더 많은 잔류 α-Gal을 포함하고 있기 때문에, 이 동물은 틀림없이 상승된 항-α-Gal 농도를 가질 것으로 예상되었지만, 혈청 항-α-Gal 농도는 매 시점에서 다른 동물들과 유사하였다. 연구 종료시, 이 동물에서의 배수 증가의 감소가 다른 모든 비복합 동물들에 비해 느려지는 것으로 보였는데, 이 시점까지 10-배 미만의 역가 배수-증가를 나타내었다. 이 이식물이 약간의 α-Gal 감소를 가지고 있기 때문에, 양성 대조와 처리된 이식물 사이의 예상 혈청 항-α-Gal 결과 차이가 지연됨으로써, 더 이후의 시점에 처리된 동물들이 비교상 더 현저한 항-α-Gal 강하를 계속 나타낼 때 더 현저한 차이를 나타내기 시작할 수 있을 가능성이 있다.
총
IgG
및
IgM
항체
양성 대조 동물을 제외하고, 모든 동물은 수술 2주 후에 항-α-Gal의 최대치와 함께 최대 IgG 농도를 경험하였다. 모든 비복합 처리 동물들은 이와 같은 항체에 대하여 정상 범위를 약간 벗어나는 최대 IgG를 가짐으로써 (6 mg/mL의 상위 한계 이내), 항체 반응이 중증이 아니었음을 나타내었다. 그러나, 양성 대조 동물은 연구 종료 시점에 최대치였으며 다른 모든 비복합 동물들에 비해 더 높은 농도여서, 이식물에 대하여 잠재적으로 계속 증가하는 반응을 나타내었다. 처리된 이식물을 제공받은 모든 동물들은 연구 종료 시점까지 정상 또는 정상-부근 농도로 복귀되었는데, 처음에 수술-후 감염이 있었던 동물은 예외로써, 감염 해결에도 불구하고 그의 IgG 농도가 연구 12주 동안 상승 유지되었다.
총 IgG 농도와 달리, IgM 농도는 전체 12주 연구 기간 동안 상대적으로 일정하게 유지되었으며, 모든 동물에서 정상 범위 이내였다. 농도가 정상 범위 이내에서 유지되기는 하였지만, 모든 처리된 동물에서 연구 2-4주 시점 이내에 최대 IgM 농도가 발생하였으며, 반면 양성 대조 동물은 12주 종료 시점까지 최대 IgM 농도를 경험하지 않았다.
IgM은 신체에서의 외래 항원에 대한 첫 번째 응답자이기 때문에, 그의 농도는 연구의 조기 시점에 평균 농도를 넘어 최대가 될 것으로 예상되었다. 그러나, 상대적으로 일정한 IgM 농도와의 이러한 시점에서의 동시적인 최대 IgG 농도는 연구 동안 IgM이 IgG 동형으로 전환되는 항체 동형 전환의 가능성을 나타낸다. IgG는 통상적으로 이차 면역 반응과 관련되어 있으며, 보체 단계반응 및 항원 제거를 활성화하는 데에 중요한 역할을 한다. IgM으로부터 IgG로의 동형 전환은 일단 이식물이 외래의 것으로 인식되고 나면, 전환에 기인하는 IgG의 증가는 외래 물질의 더 빠른 제거에 있어서 유익하게 된다는 것을 암시한다.
항체-매개
보체
-의존성 세포독성
모든 동물들이 이식 2주 후에 SLU503 (SLU50 = 혈청 용해 단위 50 = 표적 세포 (소 말초 혈액 단핵 세포)의 50 %를 사멸시키는 혈청 희석)의 최대치를 나타냄으로써, 대부분의 세포 사멸이 이 시점에서의 항체 생성의 결과로 발생한다는 것을 나타내었다. 이는 예상치 못한 것은 아니었는데, IgG 및 IgM 모두의 항체 농도 역시 이 시점 부근에서 최대였기 때문이다. 모든 동물들은 이식 8주 후까지 기준선 또는 기준선-부근 농도로 복귀되었으며, 나머지 연구 동안 그 농도를 유지하였다. 그러나 흥미롭게도, 양성 대조 동물의 SLU50은 연구의 전체 시간 과정에 걸쳐 모든 처리된 동물들에 비해 상대적으로 일정하게 유지되었다. 이와 같은 동물의 IgG 농도가 12주 시점에 최대가 되기 시작하였으므로, 검정에서 더 늦은 시점에 더 많은 반응을 나타내기 시작할 수 있을 가능성이 있다.
혼합 림프구 반응
연구 과정 동안의 힘줄 이식물에 대한 세포성 반응의 척도로서, MLR 검정을 사용하였다. 이와 같은 검정은 자극제 세포 (동종이식편 또는 이종이식편과 같은 항원성 세포)에의 노출에 기인하는 비비원숭이 림프구 세포의 증가된 증식을 측정하는데; 비비원숭이 림프구의 증가된 증식은 자극제 세포와의 더 큰 비적합성을 나타낸다. 비비원숭이 림프구 증식은 비-자극 증식에 의해 표준화된 자극된 증식으로 정의되는 자극 지수로 기록되는데; 자극 지수 1은 자극제 세포에 기인하는 자극의 증가가 없음을 나타낸다. 증가된 자극 지수는 증가된 세포성 반응 및 더 큰 비적합성을 나타낸다. 검정을 위한 양성 대조로는, 피토헤마글루티닌 (Phytohemagglutinin) (PHA)을 사용하였는데, 이것이 림프구 자극제로 알려져 있기 때문이다.
자극 지수가 전체 연구 동안 상대적으로 일정하게 유지되었던 1 마리의 동물을 제외하고는, 모든 처리된 동물들이 이식 4주 후에 최대 이종이식 자극 지수를 나타내었다. 비교하자면, 양성 대조 동물은 8주 시점까지 최대 반응을 나타내지 않았다. 12주까지, 동물들 중 50 %의 이종이식 자극 지수가 기준선 수준으로 복귀된 반면, 나머지 50 %는 4주에서의 최대 값만큼 높지는 않았지만, 12주에 약간의 증가를 나타내었다.
모든 동물들이 4주 내내 평균 PHA 양성 대조 자극 지수 미만의 이종이식 자극 지수를 나타내었다. 8주 시점에, 양성 대조 동물 및 1 마리의 처리된 동물이 PHA 대조에 비해 더 높은 이종이식 자극 지수를 나타내었다. 12주까지, 2 마리의 처리된 동물이 PHA 대조 이상의 자극 지수를 가진 반면, 양성 대조 동물은 기준선 부근으로 복귀되었다. 이는 2 마리의 처리된 동물 (PHA 대조 이상의 자극 지수를 가짐)이 이러한 시점에 증가되는 세포 활성을 가진 반면, 양성 대조를 포함한 다른 모든 동물들의 세포 활성은 진정되었음을 나타낼 수 있다.
이종이식 자극과 비교하기 위하여, 동종이식 자극 역시 검정 평가하였다. 일반적으로, 동종이식 자극 지수는 연구 경과 동안 이종이식 자극 지수보다 더 높거나 그와 유사하였는데, 이는 합쳐진 동종원성 비비원숭이 세포 중 주 조직적합성 복합체(major histocompatibility complex) (MHC)에 기인하는 것일 수 있다. 이는 이식물에 대한 세포성 반응이 이종이식 특이적인 것이 아니라, 오히려 응답자 세포에 의해 면역원성으로 판단되는 모든 외래 물질에 대한 반응일 수 있음을 나타낼 수 있다. MLR 검정의 결과는 세포성 반응을 기준으로 하기 때문에, 4-8주 사이의 MLR 자극 지수의 최대치는 치유 반응단계의 염증 및 증식 단계와 관련된 세포성 도입(cellular influx)에 해당할 가능성이 있다.
조직학적 결과를 도 3 내지 6에 나타냄
도 3은 동물 연구로부터의 물질-중간(mid-substance) 조직학 결과의 비교를 나타낸다. 이와 같은 슬라이드의 각 사진은 H&E (헤마토크실린 및 에오신) 염색된 조직 절편이다. 모든 절편은 횡단 (방사상, 이식물의 단면에서 내려다 봄) 방향으로 채취된다. 도 3a 및 도 3c는 동일한 동물의 것이다. 도 3c는 동물 좌측 다리의 자연 ACL 중앙의 것이다. 도 3a는 ACL이 소 이식물로 대체된 동물 우측 다리 중앙의 것이다.
도 3b는 처리되지 않은 소 이식물을 제공받은 다른 동물 (양성 대조)의 것이다. 이와 같은 양성 대조는 초 급성 거부가 어떻게 보이는지에 대한 이해를 얻기 위하여 이식되었다. 도 3b (양성 대조)는 이식편의 거부를 나타낸다. 가시화될 수 있는 세포는 거대 세포, 호산구 및 림프 세포이다. 이들 세포는 이식물 조직을 "공격/파괴하는" 것으로 간주될 수 있다.
그러나, 도 3a 및 도 3c에서 볼 수 있는 바와 같이, 본 출원의 처리된 소 힘줄 이식물은 동일한 동물의 자연 ACL과 강한 조직학적 유사성을 가진다. 이는 놀랍도록 효율적인 치유를 예시한다.
도 4는 또 다른 물질-중간 조직학 비교를 나타낸다. 역시, 도 4a 및 도 4c는 동일한 동물의 것이다. 이들 사진 역시 H&E (헤마토크실린 및 에오신) 염색된 조직들이다. 이러한 절편들은 세로 방향 (이식물/인대의 긴 축을 따름, 개별 피브릴들 (콜라겐의 소규모 다발)이 가시화될 수 있음)으로 채취되었다.
도 4c 슬라이드는 문헌으로부터 가져온 인간 햄스트링 자가이식편의 세로 절편이다. 볼 수 있는 바와 같이, 이와 같은 슬라이드에 나타낸 3개 절편들 각각 사이에는 커다란 유사성이 존재한다. 이 역시 놀랍도록 효율적인 치유, 및 또한 본 출원의 이종이식편과 통상적인 자가이식편의 유사성을 예시한다.
도 5는 대퇴골 내의 제자리에 이식편을 유지시키기 위하여 제작된 대퇴골 터널 내에서 채취된 방사상 절편을 나타낸다. 이와 같은 슬라이드 상의 모든 사진은 매슨 트리크롬(Masson's Trichrome)을 사용하여 염색된 절편이다. 도 5c 및 도 5f의 슬라이드는 문헌에서 입수한 것으로써, 주변 골에의 이식물의 우수한 통합/전이를 나타내는 소정의 바람직한 세포/구조를 도시한다. 볼 수 있는 바와 같이, 처리된 소 이식물을 제공받은 동물의 대퇴골 터널 내에는 연골세포 (도 5a 및 도 5b) 및 샤페이 유사 섬유(Sharpey's like fiber) (도 5d 및 도 5e)의 증거가 존재한다. 이는 주변 골에의 이식물의 우수한 통합/전이를 나타내는 소정의 바람직한 세포/구조를 도시한다.
도 6은 경골 내의 제자리에 이식편을 유지시키기 위하여 제작된 경골 터널 내에서 채취된 방사상 절편을 나타낸다. 이와 같은 슬라이드 상의 모든 사진은 매슨 트리크롬을 사용하여 염색된 절편이다. 도 6c 및 도 6f의 슬라이드는 문헌에서 입수한 것으로써, 주변 골에의 이식물의 우수한 통합/전이를 나타내는 소정의 바람직한 세포/구조를 도시한다. 볼 수 있는 바와 같이, 처리된 소 이식물을 제공받은 동물의 경골 터널 내에는 연골세포 (도 6a 및 도 6b) 및 샤페이 유사 섬유 (도 6d 및 도 6e)의 증거가 존재한다. 이는 주변 골에의 이식물의 우수한 통합/전이를 나타내는 소정의 바람직한 세포/구조를 도시한다.
결론
작은 연구 샘플 크기에도 불구하고, 혈청 항-α-Gal 역가는 힘줄 이식물로부터 달성되는 α-Gal 제거의 수준과 상관되는 것으로 보인다. 나머지 면역학적 검정들이 조직학적 결과 (상기에서 논의된 혈청 항-α-Gal 제외)와 강한 상관관계를 가지지는 않았지만, 연구의 시간 과정에 걸친 동물에 대한 어느 정도의 모니터링을 제공하였다. 또한, 거의 모든 처리된 동물들이 거의 모든 면역학적 시험에서 기준선 또는 그 부근의 수준이었기 때문에, 이러한 결과들은 수술 12주 후까지의 해당 마커들의 기준선 또는 기준선-부근 수준으로의 복귀가 긍정적인 결과라는 것을 암시한다. 또한, 이러한 결과들은 이들 검정에서 경험된 최대 농도가 이와 같은 연구 기간 동안 이식물에 유해하지 않다는 것을 나타내는 것으로써, 이종이식 ACL 이식물에 대한 면역학적 반응의 시간 추이를 확립하였다.
일반적으로, 물질중간 및 경골 터널 위치로부터의 조직학적 발견은 염증 내지 우발적인 약한 염증 반응이 없음을 밝혔다. 대퇴골 터널 위치는 더 많은 염증 반응의 증거를 밝혔지만, 대퇴골 터널에서의 고정을 위한 간섭 스크류의 사용이 압축 손상을 야기하였을 수 있으며, 이러한 영역에서의 증가된 염증의 일부 원인이 되었을 수 있다. 반면, 양성 대조 동물은 모든 터널 위치에서 (이식편의 물질중간에서는 어느 정도 덜한 정도로) 전통적인 급성 거부의 징후를 나타내었다.
예상치 못한 연구 결과는 연구의 12주 종료 시점에 드러난 재형성/치유의 수준이었다. 어느 정도의 재형성이 예상되기는 하였지만, 모든 처리된 이식 동물의 경골 터널에서 커다란 정도로 섬유연골 형성, 이식편/터널 통합, 인대화(ligamentization) 및 샤페이 섬유의 형성이 드러났다. 많은 동물들이 터널/이식물 경계면 주변 360 °에서, 또는 그 부근에서 뛰어난 통합을 나타내었다. 모든 처리된 이식물의 물질중간은 적은 염증 반응으로, 내지는 그것 없이 인대화 및 혈관신생(neovascularization)의 증거를 나타내었다. 대퇴골 터널에서의 결과는 재형성 면에서는 덜 인상적이었는데, 그러나 조직학적 발견이 경골 터널에서보다는 정도가 덜하지만 여전히 섬유연골 형성 및 이식편/터널 통합을 드러냄으로써 유망하였다. 대퇴골 터널에서의 간섭 스크류 고정은 약간 더 느린 재형성에서 일부 역할을 하고, 대퇴골 터널에서의 현행 현수 고정 시스템의 사용을 원조할 수 있다. 비교하자면, 양성 대조 동물은 재형성의 증거를 적게 밝히거나 밝히지 못하였으며, 대신 급성 거부 반응에 의해 파괴되었다.
전체적으로, 본 연구의 결과는 본 출원의 방법을 사용하여 처리된 소 힘줄이 이식물의 급성 거부를 방지하기에 충분하게 덜 면역원성이 된다는 매우 긍정적인 지표였다. 이식물 치유 수준은 예상하였던 것에 비해 더 우수하였다. 본 출원의 방법에 기인하는 조직 분해성(tissue digestibility)의 작은 증가, 또는 힘줄에 잔존하는 잔류 이종-항원의 낮은 농도 중 어느 하나는 이식물에 대한 더 빠른 반응을 유도하여 더 빠른 치유를 초래할 가능성이 있다.
우선권 서류를 포함한 본원에서 인용된 모든 특허, 시험 절차 및 기타 문헌들은 해당 개시내용이 본 출원과 모순되지 않는 정도까지, 그리고 해당 개재가 허용되는 모든 법역에 있어서 전체적으로 참조로써 개재된다.
[문헌 목록]
[Conner et al. Tensioning of Anterior Cruciate Ligament Hamstring Grafts: Comparing Equal Tension Versus Equal Stress. Arthroscopy. 2008 Dec;24(12):1323-1329]
[Hamner et al. Hamstring Tendon Grafts for Reconstruction of the Anterior Cruciate Ligament: Biomechanical Evaluation of the Use of Multiple Strands and Tensioning Techniques. The Journal of Bone & Joint Surgery. 1999; 81:549-57]
[Marumo et al. The "ligamentization" process in human anterior cruciate ligament reconstruction with autogenous patellar and hamstring tendons: a biochemical study. Am J Sports Med. 2005 Aug;33(8):1166-73. (Epub 2005 Jul 6)]
[Noyes et al. Biomechanical analysis of human ligament grafts used in knee-ligament repairs and reconstructions. J Bone Joint Surg Am. 1984;66:344-352]
[Noyes et al. The strength of the anterior cruciate ligament in humans and Rhesus monkeys. J Bone Joint Surg Am. 1976;58:1074-1082]
[Scheffler et al. Graft remodeling and ligamentization after cruciate ligament reconstruction. Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc. 2008 Sep;16(9):834-42. (Epub 2008 May 31)]
[Scranton et al. Mechanisms of anterior cruciate ligament neovascularization and ligamentization. Arthroscopy. 1998 Oct;14(7):702-16]
[Woo et al. Healing and repair of ligament injuries in the knee. J Am Acad Orthop Surg. 2000 Nov-Dec;8(6):364-72]
[Woo et al. Tensile properties of the human femur-anterior cruciate ligament-tibia complex: The effects of specimen age and orientation. Am J Sports Med June 1991;19(3):217-225].
Claims (24)
- 유사한 동종이식 또는 자가이식 이식물 중 어느 하나에 비해 강화된 수술-후 치유 및/또는 강도를 나타내는, 당 용액을 사용하여 처리된 이종이식 힘줄을 포함하는 이종이식 힘줄 이식물.
- 제1항에 있어서, 소 기원의 것인 이식물.
- 제2항에 있어서, 산타 거트루디스 소로부터 채취되는 이식물.
- 제1항에 있어서, 전방 신전근 힘줄을 포함하는 이식물.
- 제4항에 있어서, 내측 손가락 신전근을 포함하는 이식물.
- 제1항에 있어서, 이식 전에 약 8의 pH를 나타내는 이식물.
- 제1항에 있어서, 당이 글루코스, 덱스트로스, 세렐로스, 알도스, 케토스, 헤미아세탈, 피라노스, 퓨라노스, 에리트로스, 트레오스, 리보스, 아라비노스, 만노스, 알로스, 알트로스, 크실로스, 릭소스, 굴로스, 이도스, 갈락토스, 탈로스, 수크로스 및 프럭토스에서 선택되는 이식물.
- 제1항에 있어서, 하나 이상 이종항원의 약 60 %의 조절되는 감소, 약 10 % 미만의 트립신 분해, 및 약 1800 N 이상의 분류 데이터 기준 예상 UTF를 나타내는 이식물.
- 제8항에 있어서, 이종항원이 α-Gal인 이식물.
- a. 힘줄로부터 이종항원을 제거하는 단계,
b. 힘줄의 강도를 강화하는 단계,
c. 힘줄을 멸균하는 단계,
d. 힘줄을 화학적으로 세정하는 단계,
e. 임의로 힘줄로부터 잔류 퍼옥시드를 분해하는 단계, 및
f. 임의로 힘줄의 알칼리성을 촉진하는 단계
를 포함하는 이종이식 힘줄의 처리 방법. - 제10항에 있어서, 단계들이 a-f의 순서로 수행되는 방법.
- 제10항에 있어서, 단계들 중 하나 이상이 특정 처리 화학물질 용액을 힘줄과 접촉시키는 하나 이상의 단계를 추가적으로 포함하는 방법.
- 제10항에 있어서, 이종항원 제거 단계 또는 단계들이 약 1 이상의 물 대 화학물질 비 (WCR)를 가지는 방법.
- 제10항에 있어서, 분자 강도 강화 단계 또는 단계들이 약 1 미만의 물 대 화학물질 비 (WCR)를 가지는 방법.
- 제10항에 있어서, 멸균 단계 또는 단계들이 약 1 이하의 물 대 화학물질 비 (WCR)를 가지는 방법.
- 제10항에 있어서, 전체 방법이 실질적으로 약 0.90인 물 대 화학물질 비 (WCR)를 가지는 방법.
- (1) 순종 산타 거트루디스, 브라만, 앙구스 (즉 이들 중 오직 하나 100 %); (2) 25 % 내지 100 % 산타 거트루디스, 브라만 또는 앙구스 혈통 또는 이들의 조합과의 교잡종; (3) 50 % 내지 100 % 산타 거트루디스, 브라만 또는 앙구스 혈통 또는 이들의 조합과의 교잡종; 또는 (4) 산타 거트루디스, 브라만 또는 앙구스에서 선택되는 하나 이상의 혈통을 포함하는 임의의 교잡종으로부터 회수된 처리된 전방 신전근 힘줄을 포함하며; 약 18개월 내지 약 36개월 사이의 연령을 가지고 회수 전에 약 200 kg 이상의 고온 표준 도체중 (HSCW)을 가지는 동물로부터 회수되는 소 힘줄 대체 이식편.
- 제17항에 있어서, 전방 신전근 힘줄이 내측 손가락 신전근 (EDM)인 이식편.
- 제17항에 있어서, 동물이 약 18개월 내지 약 24개월 사이의 연령인 이식편.
- 제17항에 있어서, 동물이 회수 전에 약 295 kg 이상의 HSCW를 가지는 이식편.
- 제17항에 있어서, 인간에서의 전방 십자 인대(ACL) 대체에 사용되는 이식편.
- 제17항에 있어서, 평균적인 자연 인간 ACL을 초과하는 파괴 강도를 가지는 이식편.
- 제1항에 있어서, 하나 이상 이종항원의 약 55 % 이상의 조절되는 감소, 약 10 % 미만의 트립신 분해, 및 약 2020 N 이상의 분류 데이터 기준 예상 UTF를 나타내는 이식물.
- 제1항에 있어서, 이식 전에 약 6의 pH를 나타내는 이식물.
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Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10850008B2 (en) * | 2015-12-11 | 2020-12-01 | Lifecell Corporation | Methods and systems for stiffening of tissue for improved processing |
| US20170273775A1 (en) | 2016-03-25 | 2017-09-28 | Biorez, Inc. | Complex braided scaffolds for improved tissue regeneration |
| CN106841634B (zh) * | 2017-01-04 | 2019-01-22 | 深圳市第二人民医院 | 一种人血清中非Gal异种抗体检测方法 |
Family Cites Families (65)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4801299A (en) | 1983-06-10 | 1989-01-31 | University Patents, Inc. | Body implants of extracellular matrix and means and methods of making and using such implants |
| US5263984A (en) * | 1987-07-20 | 1993-11-23 | Regen Biologics, Inc. | Prosthetic ligaments |
| US8067149B2 (en) * | 1990-09-12 | 2011-11-29 | Lifecell Corporation | Acellular dermal matrix and method of use thereof for grafting |
| US5507810A (en) | 1991-10-07 | 1996-04-16 | Osteotech, Inc. | Processing of fibrous connective tissue |
| US5333626A (en) | 1991-12-31 | 1994-08-02 | Cryolife, Inc. | Preparation of bone for transplantation |
| US5362442A (en) | 1993-07-22 | 1994-11-08 | 2920913 Canada Inc. | Method for sterilizing products with gamma radiation |
| US5769893A (en) | 1993-09-29 | 1998-06-23 | Shah; Mrugesh K. | Apparatus and method for promoting growth and repair of soft tissue |
| US5556428A (en) | 1993-09-29 | 1996-09-17 | Shah; Mrugesh K. | Apparatus and method for promoting growth and repair of soft tissue |
| DE4408113A1 (de) | 1994-03-10 | 1995-09-14 | Wacker Chemie Gmbh | Verfahren zur Herstellung von Methylchlorsilanen |
| US5595571A (en) | 1994-04-18 | 1997-01-21 | Hancock Jaffe Laboratories | Biological material pre-fixation treatment |
| US5797871A (en) | 1994-08-19 | 1998-08-25 | Lifenet Research Foundation | Ultrasonic cleaning of allograft bone |
| US5556379A (en) | 1994-08-19 | 1996-09-17 | Lifenet Research Foundation | Process for cleaning large bone grafts and bone grafts produced thereby |
| US5976104A (en) | 1994-08-19 | 1999-11-02 | Lifenet Research Foundation | Recirculation method for cleaning essentially intact bone grafts using pressure mediated flow of solutions and bone grafts produced thereby |
| US5977034A (en) | 1994-08-19 | 1999-11-02 | Lifenet Research Foundation | Composition for cleaning bones |
| US5984858A (en) | 1995-06-07 | 1999-11-16 | Crosscart, Inc. | Meniscal xenografts |
| US6231608B1 (en) * | 1995-06-07 | 2001-05-15 | Crosscart, Inc. | Aldehyde and glycosidase-treated soft and bone tissue xenografts |
| US5913900A (en) | 1995-06-07 | 1999-06-22 | Corsscart, Inc. | Substantially native meniscal cartilage heterografts |
| US5865849A (en) | 1995-06-07 | 1999-02-02 | Crosscart, Inc. | Meniscal heterografts |
| US5902338A (en) | 1995-09-15 | 1999-05-11 | Crosscart, Inc. | Anterior cruciate ligament heterograft |
| US5782915A (en) | 1995-09-15 | 1998-07-21 | Stone; Kevin R. | Articular cartilage heterografts |
| US6110206A (en) | 1995-09-15 | 2000-08-29 | Crosscart, Inc. | Anterior cruciate ligament xenografts |
| US5944755A (en) | 1995-09-15 | 1999-08-31 | Crosscart, Inc. | Articular cartilage xenografts |
| US6049025A (en) | 1995-09-15 | 2000-04-11 | Stone; Kevin R. | Articular cartilage xenografts |
| US6024735A (en) | 1996-03-20 | 2000-02-15 | Lifenet Research Foundation | Process and composition for cleaning soft tissue grafts optionally attached to bone and soft tissue and bone grafts produced thereby |
| US5718012A (en) * | 1996-05-28 | 1998-02-17 | Organogenesis, Inc. | Method of strength enhancement of collagen constructs |
| US5782914A (en) | 1996-11-29 | 1998-07-21 | Bio-Vascular, Inc. | Method for preparing heterogeneous tissue grafts |
| US5993844A (en) | 1997-05-08 | 1999-11-30 | Organogenesis, Inc. | Chemical treatment, without detergents or enzymes, of tissue to form an acellular, collagenous matrix |
| US5977432A (en) | 1997-06-09 | 1999-11-02 | Life Net Research Foundation | Process for cleaning bone grafts using centrifugal force and bone grafts produced thereby |
| US6482584B1 (en) | 1998-11-13 | 2002-11-19 | Regeneration Technologies, Inc. | Cyclic implant perfusion cleaning and passivation process |
| US6613278B1 (en) | 1998-11-13 | 2003-09-02 | Regeneration Technologies, Inc. | Tissue pooling process |
| USD461248S1 (en) | 2000-02-10 | 2002-08-06 | Regeneration Technologies, Inc. | Assembled bone implants |
| US6652818B1 (en) | 1998-11-13 | 2003-11-25 | Regeneration Technologies, Inc. | Implant sterilization apparatus |
| US6652592B1 (en) | 1997-10-27 | 2003-11-25 | Regeneration Technologies, Inc. | Segmentally demineralized bone implant |
| US6290718B1 (en) | 1998-02-02 | 2001-09-18 | Regeneration Technologies, Inc. | Luminal graft, stent or conduit made of cortical bone |
| JP2002505144A (ja) | 1998-03-06 | 2002-02-19 | クロスカート インコーポレイテッド | 軟組織異種移植片 |
| US6383732B1 (en) | 1999-02-11 | 2002-05-07 | Crosscart, Inc. | Method of preparing xenograft heart valves |
| US6972041B1 (en) | 1998-03-16 | 2005-12-06 | Crosscart, Inc. | Bone xenografts |
| WO1999058082A2 (en) | 1998-05-14 | 1999-11-18 | The Cleveland Clinic Foundation | Processing of implantable animal tissues for dry storage |
| US6270723B1 (en) | 1998-06-15 | 2001-08-07 | Bbi Bioseq, Inc. | Rapid cryobaric sterilization and vaccine preparation |
| US6293970B1 (en) | 1998-06-30 | 2001-09-25 | Lifenet | Plasticized bone and soft tissue grafts and methods of making and using same |
| US20100030340A1 (en) | 1998-06-30 | 2010-02-04 | Wolfinbarger Jr Lloyd | Plasticized Grafts and Methods of Making and Using Same |
| US6214054B1 (en) | 1998-09-21 | 2001-04-10 | Edwards Lifesciences Corporation | Method for fixation of biological tissues having mitigated propensity for post-implantation calcification and thrombosis and bioprosthetic devices prepared thereby |
| US6497726B1 (en) | 2000-01-11 | 2002-12-24 | Regeneration Technologies, Inc. | Materials and methods for improved bone tendon bone transplantation |
| US6267786B1 (en) | 1999-02-11 | 2001-07-31 | Crosscart, Inc. | Proteoglycan-reduced soft tissue xenografts |
| US6696073B2 (en) | 1999-02-23 | 2004-02-24 | Osteotech, Inc. | Shaped load-bearing osteoimplant and methods of making same |
| US6294187B1 (en) | 1999-02-23 | 2001-09-25 | Osteotech, Inc. | Load-bearing osteoimplant, method for its manufacture and method of repairing bone using same |
| US6682760B2 (en) | 2000-04-18 | 2004-01-27 | Colbar R&D Ltd. | Cross-linked collagen matrices and methods for their preparation |
| US6599323B2 (en) | 2000-12-21 | 2003-07-29 | Ethicon, Inc. | Reinforced tissue implants and methods of manufacture and use |
| US6685626B2 (en) | 2001-02-02 | 2004-02-03 | Regeneration Technologies, Inc. | Compositions, devices, methods, and kits for induction of adhesions |
| US6837907B2 (en) | 2001-03-28 | 2005-01-04 | Lifenet | Method for debriding bone, and bone debrided thereby |
| US6699252B2 (en) | 2001-04-17 | 2004-03-02 | Regeneration Technologies, Inc. | Methods and instruments for improved meniscus transplantation |
| WO2003105737A1 (en) | 2002-06-14 | 2003-12-24 | Crosscart, Inc. | Galactosidase-treated prosthetic devices |
| AU2003302387A1 (en) | 2002-11-26 | 2004-06-18 | Crosscart, Inc. | Substantially non-immunogenic injectable collagen |
| US20050260107A1 (en) * | 2003-07-01 | 2005-11-24 | Jackson David P | Method, process, chemistry and apparatus for treating a substrate |
| US7648676B2 (en) * | 2004-04-20 | 2010-01-19 | Rti Biologics, Inc. | Process and apparatus for treating implants comprising soft tissue |
| US7550152B2 (en) | 2005-01-19 | 2009-06-23 | National University Of Ireland, Galway | Tissue graft scaffold made from cholecyst-derived extracellular matrix |
| JP2009502141A (ja) * | 2005-07-26 | 2009-01-29 | コモンウエルス サイエンティフィク アンド インダストリアル リサーチ オーガニゼーション | ウシ科動物における背最長筋ピーク力、筋肉内脂肪、小売牛肉歩留および正味飼料摂取量から選択される形質の査定方法 |
| CN1903144A (zh) | 2005-07-29 | 2007-01-31 | 广东冠昊生物科技有限公司 | 生物型人工韧带及其制备方法 |
| US20090157193A1 (en) * | 2007-12-18 | 2009-06-18 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Tendon and Ligament Repair Sheet and Methods of Use |
| CN101496812B (zh) | 2008-01-28 | 2010-10-13 | 中国水产科学研究院东海水产研究所 | 重伤大型中华鲟快速康复组剂 |
| CN101496912B (zh) * | 2008-01-30 | 2012-08-15 | 北京大清生物技术有限公司 | 一种生物衍生肌腱修复材料及其制备方法 |
| WO2011031637A2 (en) | 2009-09-08 | 2011-03-17 | Musculoskeletal Transplant Foundation Inc. | Tissue engineered meniscus repair composition |
| US20110070204A1 (en) | 2009-09-22 | 2011-03-24 | Ilan Elias | Medium for handling and storing biological tissues of the musculoskeletal system outside an organism |
| AU2011289214B2 (en) | 2010-08-13 | 2015-05-28 | Wake Forest University Health Sciences | Methods for making a tissue engineered muscle repair (TEMR) construct in vitro for implantation in vivo |
| RU2440057C1 (ru) * | 2010-11-01 | 2012-01-20 | Устинья Васильевна Баулина | Способ ксенопластики сухожилий сгибателей пальцев кисти |
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