JPH07502020A

JPH07502020A - 歯石処理用ホスホペプチド

Info

Publication number: JPH07502020A
Application number: JP5503970A
Authority: JP
Inventors: チャールズレイノルズ，エリック
Original assignee: ザ　ユニヴァーシティ　オブ　メルボルン; ザ　ビクトリアン　デァリー　インダストリー　オーソリティ
Priority date: 1991-08-22
Filing date: 1992-08-21
Publication date: 1995-03-02
Also published as: AU658794B2; CA2115249A1; EP0651633A4; NZ244043A; EP0651633A1; AU2472192A; US5227154A; KR100225820B1; JP2004231665A; CA2115249C; WO1993003707A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、特殊なカゼインのホスホペプチドを念む経口組成物と歯を接触させることによって歯石を制御し防止する方法に関するものである。

背景および関連技術歯石は歯の表面にに形成する石化した沈着物である。この石化した沈着物は、はとんどが様々な形態のリン酸カルシウム、特にヒドロキシアパタイトの結晶である。ヒドロキシアパタイトの結晶生長を阻害または遅延させることによっであるいはより酸性の形態のリン酸カルシウム（例えば、ブラッシャイト）若しくは非晶質のリン酸カルシウムをヒドロキシアパタイトに変換することを阻害することによって歯石の形成を防止することが望ましい。

バラン　ジュニアｔＰａｒｒａｎ　Ｊｒ、）らは、経口組成物中に歯石防止剤として可溶な無機のピロリン酸のアルカリ金属塩を使用することを記載した［米国特許４，５１５，７７２号：米国特許４，５９０．０７７号および米国特許４，６８４．５１８号］。

米国特許４，５３４．８８１号において、シケス（Ｓｉｋｅｓ）らは、合成ポリマーがリン酸化されたアミノ酸をＳ有するものである無機物のスケーリングを阻害または遅延させるための合成の誘導アミノ酸ポリマーを開示している。さらに、シケス（Ｓｉｋｓｔ）　ら［米国特許４，８６６．１６１号および４，８６８．２８７号］は、陰イオンのアミノ酸がポリペプチドの一端にクラスターを形成し、無極性残基が他端にクラスターを形成する歯石制御への合成ポリアミノ酸の使用を開示した。この陰イオンのアミノ酸は、それぞれホスホセリン、ホスホホモセリン、ホスホチロシン、ホスホトレオニン、グルタミン酸塩およびアスパラギン酸塩から選ばれる。さらに詳しくは、シケス（Ｓｉｋｅｓ）　［ヨーロッパ特許出願０．３９１．６２９号］は、式ポリ（Ｘ）１（Ｙ）　［但し、Ｘはアスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、グルタミン、アスパラギンまたはホスホセリンのいずれかであり、Ｙはホスホセリン、ホスホホモセリン、ホスホチロシンおよびホスホトレオニン等のリン酸化アミノ酸のいずれかであり−ｍは２から１５０であり、ｎは１から３であり、ｎ＋ｍは５以上である］を有する合成ポリペプチドを開示した。

発明の要約すべてのシケス（Ｓｉｋｃｓｌ　らの明細書に示唆されたポリペプチドは合成されなければならず、特殊な配列の少数の様々なアミノ酸から構成される。本発明において、シケス（Ｓｉｋｅｓ）の合成ポリペプチドとはアミノ酸の組成および配列が異なる、特殊なカゼインのホスホペプチドは、歯石防止力を有することが示される。これらのホスホペプチドは、米国特許５６３．７９８号でむしば防止剤および歯肉炎防止剤として記載されており、これらを便宜上本明細書においてはカゼインのホスホペプチド（ＣＰ　Ｐ）と称する。

本発明は、特殊なカゼインのホスホペプチドおよび／またはそれらの塩からなる経口組成物で歯を処理することによる歯石の制御方法を含むものである。この特殊なカゼインのホスホペプチドは、５から４０個のアミノアシル基をンであり、Ｇｌｕはグルタミン酸塩である）を含有する。

−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−（ただし、ｌｉｅはイソロイシンであり、Ｌｅｕはロイシンである）を有する。このカゼインのホスホペプチド（ＣＰ　Ｐ）は、歯石の形成に影響を及ぼすような量で経口組成物中に存在する。

本発明はまた、液状歯みがき、口内洗剤、ねり歯みがき、ロゼンジ、錠剤、食品若しくは飲料または歯石を制御するのに使用するのに適した他の製薬上使用できる賦形剤の形態をＨする経口組成物を包含するものである。これらの組成物は、また、６効な量のホスファターゼインヒビター（例えば、弗化物またはビニルエーテルマレイン酸ポリマー（ｖｉｎｙｌ　Ｎｈｅｒ　ｍａｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　ｐｏｌｙｍｅｒ）　）若しくは金属イオンの活性剤（例えば、Ｚｎ（ＩＩ）またはＡＩ（ＩＩＩ））をもＳんでいてもよい。

発明の詳細な説明特殊なカゼインのホスホペプチドおよび／またはそれらの塩を使用することが、本発明による歯石の制御方法に必須である。この特殊なカゼインのホスホペプチドは、配列Ｇｌｕはグルタミン酸塩である）を含む５から４０個のア−Ｇｌｕ− （ただし、Ｉｌｅはイソロイシンであり、ＬｅＵはロイシンである）のアミノアシル基の配列を有するものが、好ましいカゼインのホスホペプチドである。

カゼインのホスホペプチド（ＣＰ　Ｐ）および／またはそれらの塩の混合物を本発明の方法に使用してもよい。この−Ｇｌｕ−を６するものが大部分を占めることが好ましい。

このカゼインのホスホペプチドまたはＣＰＰの混合物は、少なくとも口に不愉快な不純物を含まない程度に実質的に精製されていることが好ましい。以下の「配列リスト」に配列番号＝１、配列番号＝２、配列番号二３、配列番号＝４、配列番号：５、配列番号二６、配列層１１．　、７、配列番号：８、配列番号：９として記載されたカゼインのホスホペプチドは、本発明の組成物において特に有用であることが知られている。

この好ましいカゼインのホスホペプチドはカゼインの消化物から抽出すればよく、消化も化学的なものであってもまたはタンパク質分解酵素による酵素的なものであってもよい。例えば、トリプシン、キモトリプシン、ペプシン、パパイン、サーモリシン若しくはプロナーゼ等のタン／″８り質分解酵素によってカゼインを消化することが好ましい。

トリプシンが好ましい酵素である。さらに、消化されたカゼインを、配列−３ｅｔ　（Ｐ）−３ｅｔ　（Ｐ）−８ｅｒＣＰ）　−Ｇ　１　ｕ−Ｇ　１　ｕ−を含むホスホペプチドおよび他のリン酸化されたペプチドおよびリン酸化されなかったペプチドに分画する。カゼインのホスホペプチドは、好ましくはカルシウム塩として米国特許５７３．７９８号に記載される選択沈降ｆｓｅｌｅｃｌｉｖｅ　ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ）方法を用いて精製される。または、好ましいホスホペプチドを凝集するのにＣａ　Ｃ１２を用いる代わりに、他の二価若しくは三価の金属イオン（例えば、Ｚｎ５Ｏ４）を用いてＣＰＰ／金属イオン錯体または凝集体（例えば、ＺｎＣＰＰ）を形成し、さらにこれをエタノールによって選択的に沈殿させてもよい。カルシウム塩若しくは亜鉛塩のイオン交換によっであるいは米国特許５６３．７９８号に記載されているような陰イオン交換クロマトグラフィーによって、ペプチドのナトリウム塩を形成する。限外濾過を用いて、以下に記載するように非活性カゼインペプチドの残りがらＣａＣＰＰまたはＺｎＣＰＰ錯体を分離する。このＣＰＰ塩を以下に記載するようにして限外濾過によってナトリウム塩に再度変換する。

０．１ＭのＨＣＩでｐＨ４，７にまでミルクを酸性にし、ＮａＯＨを用いてｐＨ７，Ｏまで沈殿物を中和することによって、カゼインのナトリウム塩（ｇｏｄｉｕｍ　ｃｉｓｅｉｎａｌｅ）を調製した。１０％ｗ／ｖのカゼインのナトリウム塩溶液を調製し、ｐＨを８．０に調節し、トリプシン（ノボ（Ｎｏｖｏ）製）を０．２％ｗ　／　ｖになるまで加え、ＮａＯＨを常時加えることによってｐＨを８．０に調節しながら３７℃で加水分解を完了した。さらに、５ＭのＨＣＩを用いて、溶液のｐＨをｐＨ４，７に調節し、遠心分離によって沈殿物を室温で除去した。ＮａＯＨおよびＣａ　Ｃ１２を１．　０％ｗ／ｖの量になるまで加えて、上清のｐＨを７．０に調節した。

次に、この溶液を、５容の１．０％ｗ　／　ｙのＣａ　Ｃ１２を用いてアミコン　ヤイエム１０　（Ａｍｉｃｏｎ　ＹＭＩＯ）　（分子量の排除限界が１０，０００）を通してダイアフィルトレージョンを行った。さらに、アミコン　ヤイエｔ、１フイルター（Ａｍｉｃｏｎ　ＹＭＩ）　（分子量の排除限界が１，０００）を通して１容の蒸留水／脱イオン水を用いて、保持物質を洗浄した。

このようにして寿られた調製物のそれぞれのペプチドを、本発明者らのオーストラリア特許５９３．３６５号において記載されているようにイオン交換ＦＰＬＣおよび逆相ＨＰＬＣによって分離し、５ｅｒ（Ｐ）残基をＳ−エチルシスティンに変換した後これらをアミノ酸組成及び配列分析によって同定した。

ｃｐｐ調製物のそれぞれのペプチドを、上記したように陰イオン交換ＦＰＬＣおよび逆相ＨＰＬＣによって分離した後分伍した。ペプチドの同定として、ホスホセリン残基（ｐｈｏｓｐｈｏｓｅｒｙｌ　ｒｅｓｉｄｕｅ）をｓ−エチルシスティン残基（Ｓ−ｅＩｈｙｌ　ｃｙｓｔｅｉｎｙｌ　ｒｅｓｉｄｕｅｌ　に変換した後にアミノ酸組成及び配列分析を行うことが挙げられる。市販のカゼイネ−１・（ｃｉｓｅｉｎａｌｅ）のトリプシン消化物からの代表的なＺｎＣＰＰ限外瀘過調製濾過は、配列番号＝１が２２．３％ｗ　／　ｗ　；配列番号：２が２１．４％ｗ　／　ｗ　；配列番号＝３が１７゜９％ｗ　／　ｗ　；配列番号：４が６．８％ｗ　／　ｗ　；配列番号＝５が６．３％ｗ　／　ｗ　；配列番号二６が６．４％ｗ　／　ｗ　；配列番号ニアが５．７％ｗ　／　ｗ　；配列番号：８が０．８％Ｗ／Ｗ；配列番号二９が３．３％ｗ　／　ｗおよび非活性ペプチドが９．１％ｗ　／　ｗ含まれている。より厳しい加水分解の条件（例えば、高温、極端なｐＨおよび「非−トリプシン一様」プロテアーゼ）によって、脱アミド化された（ｄｅａｍｉｄａｔｃｄ）および／または脱リン酸化されたおよび／または「配列リスト」に記載されたものより短いペプチドが得られることは注目すべき点である。これらのより短いおよび／または脱アミド化された（ｄｅａｍｉｄａｌｅｄ）ペプチドは、配列−Ｇ　１　ｕ−３ｅ　ｒ　（Ｐ）　−１１ｅ／Ｌｅｕ− ５ｅ　ｒ　（Ｐ）−８ｅｒ　（Ｐ）−３ｅｔ　（Ｐ）　−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−またはより小さい範囲では−５ｅｔ（旦）−５ｅｒ　りり−Ｓｅｒ　（Ｐ）−Ｇｌｕ −Ｇｌｕ−を白゛する場合には、依然として歯石防止活性がある。しがしながら、ｃＰＰの分解を最小限にし、これにより歯石防止活性を最大限にするために加水分解を制御することが好ましい。

ＣＰＰは、そのまま、またはアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩若しくは遷移金属塩の形態で使用される。具体的には、ナトリウム塩、カルシウム塩、亜鉛塩、銅塩、アルミニウム塩、カリウム塩、ストロンチウム塩、マグネシウム塩およびニッケル塩が挙げられる。ナトリウム塩および亜鉛塩が最も好ましい。したがって、本発明が本明細書に列挙された特殊な塩に限定されるものではなく、ｃＰＰの他の陽イオンの金属塩、特に陽イオンの遷移金属塩を本明細書に記載された目的のために形成し使用することができると考えられる。歯石を防止することが知られている従来の化合物（例えば、ピロリン酸塩）と少なくとも１つのＣＰＰとの物理的な組み合わせも可能であり、本発明の概念に含まれる。このような組成物は、歯石の防止という観点で相乗効果または付加効果を発揮する。

本発明の方法は、特殊なＣＰＰからなる組成物を歯に塗布することをも含む。このような組成物は、通常、約０゜０１から約３０重量％のＣＰＰ、好ましくは約０．１がら１０重量％、最も好ましくは１．０から５．　０重量％をＡむ。上記組成物は、口内洗剤、南みがき、ねり歯みがき、歯みがき粉、ゲル、ロゼンジ、錠剤、チューイングガム、食品若しくは飲料の形態、または経口組成物の他の適当な形態のＣＰＰの水溶液、水−アルコール溶液またはアルコール溶液若しくは懸ｒ：Ｊｉ（ｌである。これらの調製物のｐＨは２から１０の間でなければならない。ｐＨが極端になると脱リン酸化が起こり、これによりＣＰＰが不活性化される。

好ましくは、ｐＨは５から９の間である。

ＣＰＰの歯石防止活性は、口内の歯苔の細菌のホスファターゼ活性の作用を経たホスホセリンの脱リン酸化によって破壊される。したがって、ホスファターゼやペプチダーゼ活性に対してＣＰＰが安定であることが望ましい。脱リン酸化を防止または阻害するためにＣＰＰと共に使用されるホスファターゼインヒビターの例としては、弗化物イオン、ビニルエーテルマレイン酸ポリマー（ｖｉｎｙｌ　Ｎｈｅｔ　ｍ１ｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　ｐｏｌｙｍｅｒ）　）　（ガンツレツツ（ｇａｎｔｒｅｘ）　）および凝集した二価及び三価の金属イオン（例えば、Ｚｎ　（Ｉ　Ｉ））が挙げられる。亜鉛イオンはＣＰＰを凝集し、１モルのＣＰＰ当たり約６モルの亜鉛イオンを有する亜鉛ＣＰＰ錯体を生成する。この亜鉛とＣＰＰの凝集体または錯体はＺｎＣＰＰと称される。ＺｎＣＰＰは、口腔内のホスファターゼやペプチダーゼ活性に対して安定性を示し、さらに、ＮａＣＰＰと比較した場合口での保持の向上が、また、歯答中−１の取り込みの向、」−及び強力な歯石防止活性の増加が示された。

ＣＰＰはリン酸カルシウムを安定化し、詳しくは、これらは自発的に結合し非晶Ｈのリン酸カルシウムのクラスターを形成し、結晶形態、特にヒドロキシアパタイトに相転移するのを遅延または防止する。さらに、ｃＰＰはリン酸カルシウムの結晶相に結合し、結晶生長を遅延または防止する。ＣＰＰはまた、リン酸カルシウムのより酸性の形態、例えば、ブラッシャイト（Ｃａ　ＨＰ　Ｏ４・２Ｈ２ｏ）を安定化し、より塩基性の形態、特にヒドロキシアパタイトに転移するのを遅延または防止する。合成ペプチドを用いることによって、ＣＰＰの活性中心が、配列−Ｇｌｕ−８ｅｒ　（Ｔ’）−１］　ｅ／Ｌｅｕ−８ｅ　ｒ　ＣＰ）　− ３ｅ　ｒ　（Ｐ）ら、上記の合成オクタマーの特殊な活性はモルを基本とした場合ＣＰＰの配列番号：１および配列番５シ：２の半分しかないことは特記すべきである。これがらｃＰＰの他のアミノアシル基が（分な活性を得るために重要であることが明らかに示される。

本発明の好ましい経口組成物は、ねり歯みがきのクリーム若しくはケル、または口内洗剤の形態を白゛する。ねり歯みがきおよびゲルに一般的に含まれる構成成分が本発明によるねり歯みがきおよびゲル組成物中に使用される。好ましい構成成分としては、研磨磨き材（ａｂｒａｓｉｖｅ　ｐｏｌｉｓｈｉｎｇｍａｔｅｒｉａｌ）　、石鹸泡剤（ｓｕｄｓｉｎｇ　ａｇｅｎｔ）　、フレーバー剤、保湿剤、結合剤、甘味料、および水が挙げられる。本発明の組成物中に使用される研磨材としては、α−アルミナ三水和物等の、アルミナ及びその水和物、三珪酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、焼成珪酸アルミニウムや珪酸アルミニウム等の、アルミノ珪酸塩、炭酸カルシウム、珪酸ジルコニウム、ポリメタクリル酸メチル、粉末化ポリエチレン、シリカキセロゲル、ヒドロゲルおよびエーロゲル等が挙げられる。また、ビロリン酸カルシウム、不溶なメタリン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、オルトリン酸二石灰（ｄｉｃａｌｃｉｕｍ　ｏＮｈｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、粒状ヒドロキシアパタイト等が研磨剤として好ましい。経口組成物を摂取する形態によっては、研磨剤は、特にねり歯みがきでは、０がら７０重量％、好ましくは１から７０重量％、より好ましくは１゜から７０重量％の量で存在する。

本発明において使用される保湿剤としては、グリセロール、ポリオール、ソルビトール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、水素化部分加水分解多糖等が挙げられる。保湿剤は、特にねり歯みがきでは、通常、０がら８０重量％、好ましくは５がら７ｅ重量％の量で存在する。

本発明において好ましく使用される増粘剤としては、シリカが挙げられる。増粘剤は、０．　１がら２ｅ重量％でねり南みがきのクリームやゲル中に存在する。

本発明の組成物中に好ましく使用される結合剤としては、ヒドロキシエチルセルロース（ナトロゾル（Ｎａｌｒｏｓｏｉ１社製）およびヒドロキシプロピルセルロース（クルセル（Ｘｌｕｃｅｌ１社製）、さらにはキサンタンゴム（ｘａｎｌｈａｎ　ｇｕｍ）　、アイルランドコケおよびトラガヵントゴムが挙げられる。

結合剤は、０．０１から１０％の範囲で本発明のねり歯みがき中に存在する。本発明の歯みがき中に好ましく使用される目“味料は、約０．１％から５９６の量が好ましいが、これらとしてはサッカリンが挙げられる。

弗化ナトリウム、弗化第一錫（ｓｊａｎｎｏｕｓ　ｌ１ｕｏ＋１ｄｅ）　、フルオロトリオクツリン酸ナトリウム、弗化アンモニウム亜鉛（ｘｉｎｃ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｆｌｕｏｒｉｄｅ）、弗化アンモニウム錫（ｔｉｎ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　１ｌｕｏｒｉｄｅｌ　、弗化カルシウムおよび弗化アンモニウムコバルト（ｃｏｂａＨａｍｍｏｎｉｕｍ　１ｌｕｏｒｉｄｅ）等のねり歯みがき中に使用される弗化物源は、むしば防止の長所を発揮するために含まれてもよく、また、含まれることが好ましい。

本発明の組成物は、好ましくは、弗化物源を含む。弗化物・イオンは、約３０００ｐｐｍまでのより高い量も用いられるが、通常、０から１５００ｐｐｍ、好ましくは５ｏがら１５００ｐｐｍの量で使用される。

陰イオン、非イオン、陽イオン、両性および／または双性・イオンの石鹸等の、界面活性剤は、０がら１５重量％、好ましくは０．１から１５重量％、より好ましくは０．　２５から１０重量％の範囲内で存在する。陰イオン界面活性剤が最も好ましく、これらとしてはドデシル硫酸ナトリウム、ラルリルサルコシンナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ　１ａｕｒｙｌ　５ａｒｃ。

５ｉｎａｔｅ）およびドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムが挙げられる。フレーバーは、通常、ねり歯みがき中に低い量で、例えば、０．０１から約５重量％、特に０．１重量％から５重量％で含まれる。

ねり歯みがきに適した１−記した構成成分は、ねり歯みがきやゲルの配合の分野における当業者には明らかなように、通常、ゲルにも適している。したがって、特記しない限り、ねり歯みがきに関するものはゲルにも同様に適用できるものと解釈される。具体的には、口内洗剤は、水／アルコール溶液、フレーバー、保湿剤、甘味料、石鹸泡剤（ｓｕｄｓｉｎｇａｇｅｎｔ）および着色剤からなる。ねり歯みがき中に使用される上記に相当する化合物は、通常、口内洗剤でも上記と同様の割合で使用できる。口内洗剤は、０から６０重量％、好ましくは５から３０重量％の倣でエタノールを含むこきができる。

抗菌剤、例えば、イルガサン（Ｉｒｇａｓａｎ）　Ｄ　Ｐ　３００　（例えば、チバーガイギ−（Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ））等のフェノール類やサリチルアミド類（サリチルアニリドを含む）および亜鉛、銅、銀や第−錫等のある種の金属イオン源（例えば、塩化亜鉛、塩化銅や塩化第一錫、及び硝酸銀）が、含まれてもよく、また、含まれることが好ましい。エフディ＆シーブルー（ＦＤ＆ＣＢｌｕｅ）　＃　１、エフディルシー　イエｏ　−（ＦＤ＆ＣＹｅｌｌｏｗ）　＃　１０、エフディルシー　レッド（ＦＤ＆ＣＲｅｄ）　８４０等の、歯みがきに適した染料／着色剤を、本発明の歯みがきに使用し７てもよい。様々な他の構成成分を本発明の組成物中にさらに加えてもよく、これらとしては、防腐剤、ビタミンＣ及びＥ等のビタミン、第一錫塩、銅塩、ストロンチウム塩及びマグネシウム塩等の他の歯苔防止剤が挙げられる。また、ｐＨ７Ａ節剤、尿素等のむしば防止剤、グリセロリン酸カルシウム、三メタリン酸ナトリウム、シリコーンポリマー等の非汚染化合物、植物の抽出物、感受性の高い歯に対しては硝酸カリウムやクエン酸カリウム等の減感剤（ｄｅｓｅｎｓｉｌｉｘｉｎｇ　ａｇｅｎｔ）　、およびこれらの混合物を含有していてもよい。さらに、ポリマー、特にポリカルボン酸塩若しくはポリスルホネート等の陰イオンポリマー、またはカルボキシレートやスルホネート部分の両方を含むポリマーを含有していてもよい。

実施例１歯石防止の確立されたモデルである、種として播かれた結晶生長阻害アッセイ（Ｓｅｅｄｅｄ　Ｃｒｙｓｔａｌ　Ｇｒｏｗｔｈ　１ｎｈｉｂｉｌｉ。

ｎ　Ａｓ５ａｙ）を用いて、イン　ビトｏ　（ｉｎ　ｖｉＨｏ）の比較実験を行った。代表的な実験によって、ＣＰＰおよび合成ペプチドによるヒドロキシアパタイト（ＨＡ）を種とした結晶生長の阻害を以下の表に示す。実験に使用した溶液の組成は、Ｃａ　Ｃｌ　２中で１．０６ミリモル／リットルおよび無機リン酸塩（Ｐ　ｉ）中で０．６３ミリモル／リットルであった。

ｐＨは、ＨＰＯ−とＨＰＯ２−を適当に組み合わせて７．４０に凋節し７、イオン力は、ＮａＣ１を加えて制御した。種として使用されたＨＡは、１６．３ｍ２／ｇの比表面積および１．６６のＣａ　／　Ｐのモル比を有し、ペプチド溶液またはコントロール溶液と」（にそれぞれ予めインキュベートされた。コントロール溶液は、ペプチドを含まない以外は同じｐ　１４およびイオン力であった。０時間で、ＨＡの種（２５ｍ　ｇ　）をザーモスタットで調温された溶液（３７９Ｃ±０．５℃）に添加し、ｐＨによって、さらには懸濁液の少量のサンプルを取ることによって、時間に対する（結晶生長による）溶液組成の変化を観察した。

サンプルを濾過し、ＨＡの結晶を除去し、濾液のＰｉを分析した。

種として播かれた結晶生長の阻害は、［Δ（、ｉ）コントロール−Δ　ペプチド］／Δ（Ｐｉ）コントロール×１００で表（Ｐｌ）わした。

ヒドロキシアパタイトを種とした結晶生長の阻害被覆濃度　阻害Ｉペプチド　（７４７０モルｌリットル）（％）ＮａＣＰＰ　５０　６１ＺｎＣＰＰ　５０　８２配列番号：１／Ｎａ　５０　６２配列番号：２／Ｎａ　５０　６１ＥΣ■ΣΣΣＥＥＩ　５０　３１ＥΣＬΣΣΣＥＥ５０　３０ ΣΣΣＥＥ　５０　２２ｒＶＰＮＸＶＥＱ　５０　５ＱＭＥＡＥ　５０　０ｎ　％阻害＝［Δ３１６．コントロール−Ａ＋ｐ＋＋ペプチド］／？ｐ。コントロール×１００５　Σはホスホセリンであり、Ｅはグルタミン酸塩であり、■はイソロイシンであり、Ｌはロイシンであり、■はバリンであり、Ｐはプロリンであり、Ｎはアスパラギンであり、Ｑはグルタミンであり、Ｍはメチオニンであり、Ａはアラニンである、合成ペプチド実施例２ペプチドが結合したリン酸カルシウムを限外濾過法を用いて測定した。１００ｍＭ）リス／　ＣＨＥ　Ｓ　（ｐ　Ｈ７、０，８，０，９，０）、０若しくは１２ｍＭ　ＣａＣ１，）、および０〜８．０ｍＭのリン酸ナトリウム（ＮａＣ１をイオン力を０．１５に一定に保つために加えた）における０゜１〜２．０ｍＭのペプチドを放置し、３７°Ｃ１１８時間で平衡させた。沈殿物を倉む溶液は廃棄した。さらに、１０９に　■／ｙ未満の溶液を、１０００分子量（Ｍ　’）の排除限界を有するフィルターを備えたアミコン（Ａｍｉｃｏｎ）のミクロパーティッションセル（ｍｉｃｒｏｐａｒｔＮｉｏｎ　ｃｅｌｌ）に通過させた。もとの溶液（沈殿のないことを確認した）および限外濾過液におけるカルシウムおよびリン酸塩の濃度を、ＡＡＳおよび比色法を用いてそれぞれ測定した。全体のカルシウム及びリン酸塩と遊離したカルシウム及びリン酸塩の差によって、ペプチドが結合したリン酸カルシウムを測定した。リン酸カルシウムの結合は、様々なリン酸カルシウムのイオン活性生成物の機能として表わされるため、ｐＨに依存しない機能を測定した。拡張されたデバイーヒュツケＨＰＯ４、ＣａＨ２ＰＯ４＋、ＣａＰＯ−１Ｃａ０Ｈ“、及びＨ３ＰＯ４とＨ２Ｏの解離及びイオン力を考慮した改良されたコンピュータープログラムを用いて、遊離したカルシウム及びリン酸塩の濃度およびｐＨから様々な相のリン酸カルシウムに対するイオン活性生成物を測定した。

ＣＰＰおよび合成ペプチドによるリン酸カルシウムの結合を以下の表に示す。

配列番号：２　９．０　２４　１７ＥＸＩＸＸＸＥＥ　Ｓ　９．０　１２　７ＥΣＬΣΣΣＥＥ　９．０　１２　７ ΣΣΣＥＥ　９．０　９　５ＡΣＡΣＡΣＡＥ　９．０　２　１ｒＶＰＮΣＶＥＱ　、９．ＯＯＯＱＭＥＡＥ　９．０　０　０ＡΣＡＥ　９．０　０　０ペプチドによって結合し安定化されたリン酸カルシウムは、非晶質のリン酸カルシウム［Ｃａ　１．５　（Ｐ　０４　）　］であることが分かった。

実施例３結晶相としてブラッシャイト（リン酸二石灰三水和物（ｄｉｃａｌｃｉｕｍ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｄｉｈｙｄｒａｔｅ）　、ＤＣＰＤ）を用いた種として播かれた結晶生長阻害アッセイ（Ｓｅｅｄｅｄ　Ｃｒｙｓｔａｌ　Ｇｒｏｗｌｈ　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　Ａｓ５ａｙ）にｃｐｐおよび合成ペプチドを用いて、比較実験を行った。ＤＣＰＤによる結晶生長実験に使用された過飽和溶液は、以下の組成、Ｃａ及びＰｉが５゜３ミリモル／リットル、ｐＨが６．１０．５０ミリモル／リットルのＮａＣ１を有するものであった。それぞれのペプチドを１．０マイクロモル／リットルの濃度で過飽和溶液に添加した。種として使用されたＤＣＰＤは、ｏ７９９のモル比および１．１２ｍ２／ｇの比表面積を有していた。

０時間で、ＤＣＰＤを溶液に加え、様々な時間で結晶相を除去した後Ｐｉを測定した。ＣＰＰおよび合成ペプチドの効果を以下の表に示す。

ＮａＣＰＰ　８５ＺｎＣＰＰ　９７ＥΣじΣΣＥＥ！　５３ＥΣＬΣΣΣＥＥ　５２ ΣΣΣＥＥ　３１ｒ’ｖ’ＰＮΣＥＱ　５畳　Σはホスホセリンであり、Ｅはグルタミン酸塩であり、■はイソロイシンであり、Ｌはロイシンであり、■はバリンであり、Ｐはプロリンであり、Ｎはアスパラギンであり、Ｑはグルタミンであり、Ｍはメチオニンであり、Ａはアラニンである、合成ペプチドｎ％阻害＝［〜Ｐｉ＋コントロールーΔ（ＰＤペプチド］／Δ伊、Ｐントロール×１００実施例４ＣＰＰへの亜鉛イオンの結合を、リン酸カルシウムの結合に関して実施例２において記載したのと同様の実験技術を用いて測定した。ｐＨ６，７で２０ミリモル／リットルのＺ　ｎ　Ｓ　Ｏ４を含有する１０ｍｇ／ｍｌのＮａＣＰＰ溶液を１，０００分子ｆｆｌ　（ＭＷ）の排除限界を有するフィルターで限外濾過し、限外濾過液を原子吸光分光分析によって分析した。限外濾過液が１ミリモル／リットルの遊離した亜鉛イオンを含むことから、１９ミリモル／リットルが結合し、これはＩＣＰＰＣＰＰｆｆ１個のＺｎ２＋の凝集体を表していることが示された。ＺｎＣＰＰ凝集体の大きさによって１錯体当たり少なくとも６個のＣＰＰ分子が示唆さ３ミリモル／リットル濃度のペプチドを口内洗剤中で用いて、歯答中へのＮａＣＰＰおよびＺｎＣＰＰの取り込みを測定した。３０間口腔衛生を慎んだ人に一口に２回、口内洗剤を使用してもらった。４日口に、下の前歯から歯肉上部分の歯苔を収集し、定量競合Ｅ　Ｌ　Ｉ　Ｓ　Ａ　（ｑｕ＋＋ｎｆｉｌａｌｉｖｅ　ｃｏｍｐｅｔｉｖｅ　ＥＬＩＳＡ）に特殊な抗体を用いてｃｐｐに関して分析した。ＮａＣＰＰを含む口内洗剤を用いた後の歯答中のＣＰＰｆｆ１は１０７±５１μｇ／ｇ歯苔であった。しかしながら、ＺｎＣＰＰを含む口内洗剤を用いた後の歯答中のｃｐｐ量は、上記に比べてかなり高い（Ｐ＜０．０５）２６６ ±６５μｇ／ｇであった。

実施例６本発明によるＣＰＰを含む、口内洗剤の具体的な配合を以下に示す：構成成分　最終組成物の割合　（重量％）Ａ　Ｂエタノール　１２．５　１２．５７０％ソルビトール　７７ＮａＣＰＰ　５ツイーン　２０　０．５５　０．５５防腐剤”　０．２　０．２フレーバー　０．１　０．１ＺｎＣＰＰ　５染料　＜０．０１　＜０．０１１７′に’）ｌ、Ｊｌｙｈ””　’　０．０６５　０．０６５（Ｓｏｄｉｕｍ　５ａｃｅｈａｒｉｎａｔｅ）塩化ナトリウム　０．０５　０．０５酢酸ナトリウム　０．０１５　０．０１５酢酸　０．０１５　０．０１５水　１００まで　１００までｐＨ６，５６，５実施例７本発明によるＣＰＰを含む、ねり歯みがきの具体的な配合を以下に示す：最終組成物の割合　（％ｗ／ｗ）Ａ　Ｂ　ＣＤ７０％ソルビトール　６４　３９　６４　３９研磨材シリカ　１０　１０　１０　１０増粘剤シリカ　９　１０　９　１ＯＮａＣＰＰ　５　５ポリエチレングリコール　５　５　５　５（ＰＥＧ３２”）ＺｎＣＰＰ　５　５ラウリル硫酸ナトリウム　１．５　１．５　１．５　１．５フレーバー　１　１　１　１ソデイウムサノカリネート　０．３　０．２　０．３　０．２（Ｓｏｄｉｕｍ　８ａｅｅｈａｒｉｎａｔｅ）弗化ナトリウム　０．２４　０．２４　０．２４　０．２４防腐剤（安息香酸ナトリウム）０．０８　０．０Ｂ　０．０８　０．０８染料　＜０．０１　＜０．０１酸化チタン　１１キサンタン　ゴム　０．１５　０．６　０．１５　０．６（Ｘａｎｔｈａｎ　Ｇｕｍ）水　１００まで　１００まで　１００まで　１００まで配列リスト（１）　一般的な情報：（ｉ）　出願人：　レイノルズ、エリツク　チャールズ（ｉｉ）　発明の名称：　歯石処理用ホスホペプチド（ｉｉｉ）　配列の数：　９（２）　配列番号＝１に関する情報：（ｉ）　配列の特性：（ｉｆ）　分子のタイプ：　タンパク質（１り　特徴：（ｉｔ）　特徴：（Ｘｉ）　配列の記載：　配列番号＝１：８ｅｒ　８ｅｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　８ｅｒ　ｎｅ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ（２）配列番号＝２に関する情報：（ｉ）　配列の特性；（Ａ）　長さ：２１（Ｂ）　タイプ：　アミノ酸（Ｃ）　鎖の数：　１本鎖（Ｄ）トポロジｍ：　直線状（ｉｆ）　分子のタイプ：　タンパク質（ｉｘ）　特ｒ１ｉ：（Ａ）　名前ｌキー：　ピログルタミン酸塩（Ｂ）　位置：　１（Ｄ）　他の情報二　一定置がこの形態で存在する（ｉｘ）　特徴：（Ａ）　名前ｌキー：　ホスホセリン（Ｂ）　位置＝　６（Ｄ）　他の情報：　翻訳後にリン酸化されたセリン（ｉｘ）　特＠：（Ａ）　名前！キー：　ホスホセリン（Ｂ）　位置二　８（Ｄ）　他の情報：　翻訳後にリン酸化されたセリン（ｉり特ｙｉ：（Ａ）　名前ｌキー：　ホスホセリン（Ｂ）　位置＝　９（Ｄ）　他の情報：　翻訳後にリン酸化されたセリン（ｆｘ）　特徴：（Ａ）　名前ｌキー：　ホスホセリン（Ｂ）　位置：１０（Ｄ）　他の情報：　翻訳後にリン酸化されたセリン（ｉｘ）　特徴：（Ａ）　名前ｌキー：　ホスホセリン（Ｂ）　位置：１７（Ｄ）　池の情報：　翻訳後にリン酸化されたセリン（ｘｉ）　配列の記載：　配列番号：２：Ｇｉｎ　Ｍｅｔ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　ｎｅ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　ｎｅ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　ＡｓｎＳｅｒ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　Ｌｙｓ（２）配列番号：３に関する情報：（ｍ）　配列の記！＝　配列番号＝３＝Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　ｎｅ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ（２）配列番号：４に関する情報：（ｉ）　配列の特性：（ｉｆ）　分子のタイプ：　タンパク質（ｘｘ）　特徴：（Ａ）　名前ｌキー：　ホスホセリン（ｉｘ）　特徴：（Ｘｉ）配列の記載；　配列番号：４：ＡＪＩｎ　Ａｌａ　Ａｓｎ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　８ｅｒ　ｎｅ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　８ｅｒ　８ｅｒ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　８ｅｒＡｌａ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ（２）　配列番号＝５に関する情報：（ｉ）　配列の特性：（Ａ）　長さ：２１（ｉｆ）　分子のタイプ：　タンパク質（ｉｘ）　特＠：（ｉｘ）　特ｙｆｔ：（ｉｔ）　特徴：（Ｄ）　他の情報：　翻訳後にリン酸化されたセリン（ｉｘ）　特徴：（Ｄ）　他の情報；　翻訳後にリン酸化されたセリン（ｘｉ）配列の記載：　配列番号：５：（２）　配列番号＝６に間する情報：（ｉ）　配列の特性：（Ａ）　長さ：２１（ｉｉ）　分子のタイプ：　タンパク質（ｔｘ）　特徴：（Ｄ）　他の情報：　翻訳後にリン酸化されたセリン（ｘｉ）配列の記載：　配列番号二６：（２）　配列番号ニアに関する情報：（ｉ）配列の特性：（ｉｆ）　分子のタイプ：　タンパク質（ｉり特徴：（ｉｘ）　特徴：（ｉり特徴：（Ｘｉ）配列の記載：　配列番号＝７＝Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｍｅｔ　Ｇｌｕ　Ｈｉｓ　Ｖ＠Ｉ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　８ｅｒ　ｎｅ　Ｉｌｅ　８ｅｒ　Ｇ１ｎＧｌｕ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｌｙｓ（２）　配列番号二８に関する情報：（ｉ）　配列の特性：（ｉｉ）　分子のタイプ：　タンパク質（ｉｘ）　特徴；（Ｄ）　他の情報：　翻訳後にリン酸化された七リン（ｉｘ）　特徴：（ｉｘ）　特徴：（Ｄ）　他の情報：　翻訳後にリン酸化されたセリン（ｉｘ）　特＠：（Ａ）　名前ｌキー：　ホスホセリン（−）　８列の記載：　配列番号二８：Ｌｙ＠Ａｍ　Ｔｈｒ　Ｍｅｔ　Ｇｌｕ　Ｈｉｓ　Ｖａｌ　８ｅｒ　８ｅｒ　８ｅｒ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　８ｅｒ　ｎｅ　ｎａ　８ｅｒＧｌｎ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｌｙｓ（２）　配列番号りに関する情報：（ｉ）　配列の特性：（ｉｉ）　分子のタイプ：　タンパク質（ｉり　特徴：（ｉｘ）　特徴：（ｉり特徴：（Ｄ）　他の情報：　翻訳後にリン酸化されたセリン（ｒｊ）　配列の記載：　配列番号：９：８ｅｒ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　Ｌｙｓ国際調査報告　−１□ Ｎ。

ＰＣ丁Ｉ＾υｎル昏−璽 −に丁ｒａｙｓ　＋　ｏ　を曽甑ｌ１ｍ　ａｔ　ｒｖ＊　５−−ｎｕ　Ｃ１ｕｌｙ　＋ｖｎ　＋　−一国際調査報告　−一・□Ｎ６ＰｅｒＺＡＩｊ１Ｍ１１１４４１Ｆｅｍ　ＰＣＴ／ＩＳＡ／２１１１ｘ％ｉｅ＋ｔ　ＩＩＩＩＩＩＩＦ　ｍ＋＋ｍｘＷＩｕ１７１９９２１　ｅｏｔｗｙｄ

Claims

【特許請求の範囲】

１．５から４０個のアミノアシル基を有し、配列【配列があります】（ただし、Ｓｅｒ（Ｐ）はホスホセリンであり、Ｇｌｕはグルタミン酸塩である）を有する、歯石を防止する量の少なくとも１つのホスホペプチドまたはそれらの塩を含む経口組成物を歯に塗布することからなる歯石の防止方法。
２．該ホスホペプチドが配列【配列があります】／【配列があります】（ただし、Ｉｌｅはイソロイシンであり、Ｌｅｕはロイシンである）を有する、請求の範囲第１項に記載の方法。
３．該ホスホペプチドが明細書に記載の配列番号：１から配列番号：９から選ばれたものである、請求の範囲第１項または第２項に記載の方法。
４．該ホスホペプチドがナトリウム塩、カルシウム塩、亜鉛塩、銅塩、アルミニウム塩、カリウム塩、ストロンチウム塩、マグネシウム塩およびニッケル塩等のアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩若しくは遷移金属塩から選ばれた塩の形態を有する、請求の範囲第１項、第２項または第３項に記載の方法。
５．該ホスホペプチドが二価若しくは三価の金属イオン錯体または凝集体の形態を有する、請求の範囲第１項、第２項または第３項に記載の方法。
６．該経口組成物が弗化物イオン、ビニルエーテルマレイン酸ポリマー（ｖｉｎｙｌ　ｅｔｈｅｒ　ｍａｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　ｐｏｌｙｍｅｒ））（ガンツレッツ（ｇａｎｔｒｅｚ））および凝集した二価及び三価の金属イオンから選ばれたホスファターゼインヒビターを含むものである、請求の範囲第１項、第２項または第３項に記載の方法。
７．製薬上使用できる担体において５から４０個のアミノアシル基を有し、配列【配列があります】（ただし、Ｓｅｒ（Ｐ）はホスホセリンであり、Ｇｌｕはグルタミン酸塩である）を有する、歯石を防止する量の少なくとも１つのホスホペプチドまたはそれらの塩からなる経口組成物。
８．該組成物が弗化物イオン、ビニルエーテルマレイン酸ポリマー（ｖｉｎｙｌ　ｅｔｈｅｒ　ｍａｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　ｐｏｌｙｍｅｒ））（ガンツレッツ（ｇａｎｔｒｅｚ））および凝集した二価及び三価の金属イオンから選ばれた有効な量のホスファターゼインヒビターをも含むものである、請求の範囲第７項に記載の組成物。
９．二価若しくは三価の金属イオン錯体または凝集体として存在する、５から４０個のアミノアシル基を有し、配列【配列があります】（ただし、Ｓｅｒ（Ｐ）はホスホセリンであり、Ｇｌｕはグルタミン酸塩である）を有する、歯石を防止する量の少なくとも１つのホスホペプチドまたはそれらの塩からなる経口組成物。
１０．該ホスホペプチドがさらに配列【配列があります】／【配列があります】（ただし、Ｉｌｅはイソロイシンであり、Ｌｅｕはロイシンである）を有するものである、請求の範囲第９項に記載の組成物。
１１．該ホスホペプチドが明細書に記載の配列番号：１から配列番号：９から選ばれたものである、請求の範囲第９項または第１０項に記載の組成物。
１２．該ホスホペプチドが亜鉛／ホスホペプチド錯体または凝集体として存在する、請求の範囲第９項、第１０項または第１１項に記載の経口組成物。