JPH07500814A

JPH07500814A - Ｐｌａ２阻害性化合物

Info

Publication number: JPH07500814A
Application number: JP5501845A
Authority: JP
Inventors: ツェン，アルバート　ペン　シェン; イングリス，アダム; スコット、キエラン　フランシス
Original assignee: ガーヴァンインスティチュートオブメディカルリサーチ
Priority date: 1991-07-04
Filing date: 1992-07-06
Publication date: 1995-01-26
Also published as: EP0592553A1; EP0592553B1; DE69229173T2; EP0592553A4; WO1993001215A1; DE69229173D1; US5656602A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ±１省並□ 解□ 本発明はホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）の酵素活性の阻害とタイプＩＩのＰＬＡ２、殊にｉｌｌ液のＰＬＡ２とへビＰＬＡ２（ひ蛙１刑鎖自田多とｑ東１邦尋「部）の活性を阻害するペプチドとして示されたペプチドに関する。加えて、本発明はこれらペプチドを活性成分として含んだ製菓の組成物と、この組成物の投与を含んだ治療の方法とに関する。

東唯食茸車ホスホリパーゼＡ２は２つのサブクラス（タイブエとタイプＩＴ）　（第１図）とともに酵素の諸科を構成し、ハチＩ’１ＰＬＡ２であると分子中のンスルフイド結合の位置に基づいて本質的に異る第３のＰＬＡ２のクラスを構成する。Ｘ線結晶解析てはクラス中で同様な酵素の機能的な副構成を備えたセグメントとして示されている。この類似性は構造状関係したタイプＩ　／Ｉ＋酵素とノ＼チ毒とを比較したときに殊に目立つ（２）。ＰＬＡ２のホスホグリセリドのｓ　ｎ−２アシルエステル結合を加水分解すると炎症性イコサノイドの脂肪酸前駆体の解放が現われる。ヒト滑５ｐＬＡ２（タイプＩＩの分子）は最近になって分離され同定されてし）る（３）。同様のＰＬＡ、２は慢性関節リウマチとグラム陰性菌敗血症性シヨ・ｙりのようなヒトにおける幾つかの炎症性疾患の病因の中に包含されてＬする（７ｉ８）。

ネズミの、滑浦ＰＬＡ２に対して起こるモノクローナル抗体阻害番よ前臨床的な効力が示されている。従って、これらはＰＬＡ２の酵素的な活性を阻害する組成物の発展において興味深い。

ヒトの滑ｍＰＬＡ２をトリプシン消化し、続ｔ１て分離し、更にＨＰ　Ｌ　Ｃによって分析したフラグメントは、２つのペプチド、一方（よヘプタペプチド（Ｎ −末端ペプチド）であり、他方はＦＬＳＹＫ　（他のＰＬＡ２分子にお番する残基７０−７４に相当し、補乳動物のＰＬＡ２アミノ酸配列の三次元的１１！造の ”ホモロジ−２に基づ＜　（Ｌ　４））を含んだその内の１つのピーク（こより非常に興味深く意外な結果をもたらした。そのペンタペプチドは最早の溶離液力）ら見ＩＢされ、完全な隔絶ピーク（期待された通り）である。そのＨＰ　Ｌ　Ｃシステム以来遅Ｖ＼ビーク１コのこれら２つのペプチドの完全な分離はできず、これらのデータ（よ２つのペプチドが相互に強い親和性があり、これとの構造的連座についての疑問が生じる。Ｘ線回折の研究（５，６）はその２つのペプチド中のアミノ酸残基が酵素の活性基に対し閉じており、それは１．２−ジアシル −３−ｓｎ−ホスホグリセリド基質が２−エステル結合の加水分解によりプレサイズリ−位Ｎ　（ｐｒｅｃｉｓｅｌｙ　ｐｏｓｉｔｉｏｎｅｄ）となることにおけるチャンネルの改質又は安定化に重要であることが示されている。

Ｎ−末端へワックス（ｌから１２残基）の最初のターンはＮ−末端と４残基、残基６９かも７１の要素と触媒的残基に結合した介在された水とを備えた水素結合ネットワークによって安定化され；残基２と５はチャンネルのゝ床”を形成し、残基９は、右壁と、予期された移動の後の基質が入れられて基質の５ｎ−３リン酸と水素結合を形成している残基６９（通常はチロシン又はリジンのいずれか）によって形成された左デを形成する。ヘプタペプチドとペンタペプチドとの間の強い相互作用の化学的な証拠となるＰＬＡ２活性はこれらへブチドのいずれか一方の存在を阻害するであろう。

化学的に合成されたペプチドを用いる本発明ではペンタペプチドＦＬＳＹＫが調製され、またヒトの滑液ＰＬＡ２の酵素活性を減じる検定媒質への添加が示されている（第２ａ図）。更に加えて、それはヘビ毒ＰＬＡ２の７０−７４残基（ｗＤＩＹＲ）を占めるペンタペプチドがへビＰＬＡ２の活性を阻害することが示されている（第３ｂ図参照）。それは、この阻害が酵素のアミノ末端の終わりに結合するペプチドにより仲介され、疎水性のチャンネルに接近する基質の遮断により或いは基質の正しい配向を妨害するのに十分な構造の歪化によるいずれかの作用による遮断（ブロッキング）によるものと確信される。

魚町五ｌ力従って、本発明の第１の態様は、ヒトの滑液ＰＬＡ２の酵素的な活性を阻害する少なくとも５残基の直鎖状または環状ペプチドから構成され、そのペプチド番よ以下の＃４構造を有しているＡ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ａ６−ＡＶここでＡ１はＨ叉は２つの自然出現アミノ酸（ｎａｔｕｒａｌｌｙ　ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ）の１つＡ２はＦ叉はＹ叉はＷ又は不在Ａ３はＬ又はＶ又は工又はＭＡ４はＳ又はＴＡ５はＹ又はＦ又はＷＡ６はＫ又はＲ又はＨ又は不在Ａ７はＯＨ又は２つの自然出現アミノ酸の１つである。

好適な実施態様においてはペプチドがペンタペプチドである。

本発明の別な好適な実施態様においてはＡ１がＨでありＡ７がＯＨである。

本発明の更なる好適な実施態様において、ペプチドはＦＬＳＹＫ又はＫＦＬＳＹであり、最も好ましくはＦＬＳＹＫである。

本発明の第２の態様は、クロタルス　トリサス（Ｃｒｏｔａｌｕｓ　ｄｕｒｉｓｓｕｓ）　Ｐ　Ｌ　Ａ２の酵素的活性を阻害する少なくとも５残基のｉｌＩ頗状又は環状ペプチドから構成され、そのペプチドは以下の構造式を有している：Ｂｌ−Ｂ２−Ｂ３−Ｂａ−Ｂ５−Ｂ５−Ｂ７ここでＢ１はＨ又は２つの自然出現アミノ酸の１つＢ２はＷ又はＦ又はＹ又は不在Ｂ３はＤ又はＥＢ４はｌ又はＶ又はＬ又はＭＢ５はＹ又はＦ又はＷＢ６はＲ又はＫ又はＨヌは不在Ｂ７はＯＨ又は２つの自然出現アミノ酸の１つである。

好適な実施態様において、そのペプチドはペンタペプチドである。

本発明の別な好適な実施態様においてはＢ１がＨでありＢ７がＯＨである。

本発明の更に好適な実施態様において、そのペプチド番よＷＤＩ　ＹＲである。

本発明の第３の態様は、クロタルスアトロクス（Ｃｒｏｔａｌｕｓ　ａｔｒｏｘ）　ＰＬＡ２の酵素的活性を阻害する少なくとも５残基の直鎖状又は環状ペプチドから構成され、そのペプチドは以下の構造式を有し。

Ｃ１−Ｃ２−Ｃ３−Ｃａ−Ｃ３−ｃｓ　Ｃ７ここでＣ】はＨ又は２つの自然出現アミノ酸の１つＣ２はＴ又はＳ又は不在Ｃ３はＶ又は工又はＬ又はＭＣ４はＳ又はＴＣ５はＹ又はＦ又はＷＣ６はＴ又はＳ又は不在Ｃ７はＯＨ又は２つの自然出現アミノ酸の１つである。

本発明のこの態様の別な好適な実施態様においてはＣ１がＨでありＣ７がＯＨである。

本発明のこの態様の更に好適な実施態様において、そのペプチドはＴＶＳＹＴである。

ここで規定された開示から当業者であれば明らかであろうが、本発明の第１及び第２の態様のペプチドは、他のＰＬＡ２の酵素的活性がどのように阻害されるのかを示す。この阻害は、触媒的切断の以前に拡散するリン脂質を不安定とするチャンネルのような手法においてＰＬＡ２分子のＮ−末端アミノ酸配列と相互に作用する化合物によって達成されるであろう。

従って、本発明の第４の態様は、ホスホリパーゼＡ２の酵素的活性を阻害する化合物よりなり、その化合物は触媒的切断より以前のリン脂質拡散を阻止し又は不安定化するかのいずれか一方のチャンネルのようなホスホリパーゼＡ２のＮ−末端アミノ酸配列と相互に作用するものであることを特徴としている。

本発明の好適な実施態様では、そのＰＬＡ２がヒトＰＬＡ２であり、そしてその化合物がペプチドである。

本発明の好適な実施態様では、そのペプチドはＦＬＳＹＫ又はＫＦＬＳＹのアミノ酸配列を有する。

当業者であれば明らかとなるであろうが、本発明では、ホスホリパーゼＡ２の残基６９−７５の領域から選択された配列に相当する配列を有するペプチドによってホスホリパーゼＡ２の酵素的活性を阻害できることを見出している。

従って、本発明の第５の態様は、ホスホリパーゼＡ２の酵素的活性を阻害する５又は６残基のペプチドよりなり、そのペプチドはホスホリパーゼＡ２の残基６９ −７５の領域から選択された配列に相当するアミノ酸配列を有している。

本発明のこの態様の好適な実施態様では、そのペプチドがペンタペプチドであり、それはホスホリパーゼＡ２の６９−７３又は７０−７４残基からの配列に相当するアミノ酸配列を有する。

本発明の更に好適な実施態様では、そのホスホリパーゼＡ２がヒトのホスホリパーゼＡ２である。

本発明の第６の態様は、敗血症性ショック　慢性関節リウマチ及び／又は他の炎症性疾患に罹った生体の治療に用いるための組成物よりなり、その組成物は、治療上受容可能な量のペプチド又は、本発明の第１、第４又は第５の態様の化合物と、調剤上受容可能な無菌の媒体とを備えている。

本発明の第７の態様は、本発明の第６の態様の組成物を生体に投与することを具備した敗血症性ショック及び／又は炎症性疾患の生体の治療の方法よりなる。

当業者によって＆！識されるであろうが、ペプチドの生物学的活性の影響が有害であるものを除き、本発明のペプチドにより幾つかの変形例を作製しても良い。

これは、ペプチドの生物学的活性を本質的に減じることなく変更するような場合でありペプチド配列中の保存の又は非保存のいずれかで、加入、削除及び置換のような多積の変更により達成して良い。保存的な置換によって企画される組み合わせは・Ｇ、Ａ、　Ｖ、ｒ、Ｌ、Ｍ；　Ｄ、Ｅｉ　Ｎ、Ｑｉ　ｓ、Ｔ；　Ｋ、Ｒ，Ｈｌ及びＦ、Ｙ、Ｗである。

本発明のペプチドに多積の基を加えてペプチドの生物学的活性を本質的に減じることなく、潜在能力の増強又はインビボでの半減期の延長のような有利性を付与することを可能としても良い。

生物学的活性を減じる結果とならなければ本発明のペプチドの変形として企画されたことは本発明の範囲内である。

本発明の詳細な説明本発明の本質がより明確に理解できるように、それについて好適な形態を以下の実施例と図面とを参照してここに記述する。ここで：第１図は哺乳動物のＰＬＡ２アミノ酸配列を示す。

第２図：ペプチドＦＬＳＹＫを用いたヒトＰＬＡ２の阻害。

第２ａｆｆｉは酵素のトリプシン消化物からのペプチドを用いて得られた（ｎ＝７　ロコントロール　◆阻１ｇＡｌ＋）、第２ｂ図と第２Ｃ図はともに合成ペプチドで　それぞれｎ−１１ロコントロール　◆阻害剤　ロコントロール　◆阻害剤、その合成ペプチドはまた敗血症性ショック血清中の酵素阻害剤である［第２　ｃ図コ　。

第３図・ＦＬＳＹＫとヒトの再結合タイプＩＭＰ　Ｌ　Ａ２　（第３ａ図　口阻害剤◆コントロール）と敗血症性ショック血清中のＰＬＡ２（第３ｂ図　口阻害剤　◆コントロール）との増量に伴う阻害の増強を示す投薬作用曲線。

第４ｊ２１：ヒトＰＬＡ２及びヘビ（Ｃｒｏｔａｌｕｓ　ｄｕｒｉｓｓｕｓ）　Ｐ　Ｌ　Ａ２の各々のに関するＦＬＳＹＫ　（第４ａ図　口ＰＬＡ２　◆コントロール）と、ＷＤＩＹＲ（第４ｂ図　ロへと（ＩＩ）　φコントロール）との投薬作用曲線。双方のペプチドがそれらの親タンパクにおける類似のサイトを占め、そして酵素的活性を有する阻害を示す。

第５図はＦＬＳＹＫによるＰＬＡ２の阻害を表すラインウイーノ〜−−７〜スブプロット（Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｓｐｅ　ｐｌｏｔ）を示す（ＰＬＡ２　 ◆　１０ａｇ　■ＦＬＳＹＫ、口１μｇ　ＦＬＳＹＫ）。

［以下、余白コ旦↓ツし）け１Δ朋−宣直角１コ２５ＡＬＬ１、滑液ＰＬＡ２、ヘビＰ　Ｌ　Ａ２（Ｃｒｏｔａｌｕｓ　ＤｕｒｉｓｓｕｓとＣｒｏｔａｌｕｓ　ＡＴＲ？）２、Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ　（ＦＬＳＹＫ）３、アセチル−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｓｃｒ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−メチルエステル（Ａｃ−ＦＬＳＹＫ−ＯＭｅ）４、Ｔｒｐ−Ａｓｐ−１１ｅ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ　（ＷＤＩＹＲ）５、Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｔｙｒ　（ＫＦＬＳＹ）６、Ｔｈｒ−Ｖａｌ−３ｅｒ− Ｔｙｒ−Ｔｈｒ　（ＴＶＳＴＴ）７、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−３ｅｒ　（ＦＫＴＹＳ）８、Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−３ｅｒ　（ＴＥＳＹＳ）９、Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ａｓｎ　（ＧＴＫＦＬＳＹＫＦＳＮ）１０、Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ　（ＫＦＬＳＹＹ）１１、Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ｔｙｒ　（ＦＬＳＹ）１２、Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（ＦＬＳＹＫ−ＮＨ２）ＰＬＡ　のトリＡＺン貞進約１００μｇのＰＬＡ、２を３００μｌのＩＭ）リス　ｐＨ８，０に溶解し、１５μｍのトリプシン溶液（１０μ／ＩＭトリス　ｐＨ８，０）を加え、そのペプチド／トリブレン溶液を３７℃で２時間インキュベートした。５μｌのＴＦＡを用いてｐＨを下げ、消化を終了した。その全溶浦をミクロボアＨＰＬＣフラクション分画にかけた。

えり］しぢ７ＨＰＬＣフラタタゴ！＞分貫ＡＢＩミクロボアシリンンボンプンステムモデル１４０を用いた。検出波長は０．５ａｕｆｓで２２０ｎｍにセットした。ＲＰ−３００１ｘｌｏＯｍｍを用いた。

フラクション分画は、０１％ＴＦＡの水溶液から０．１％ＴＦＡ、７０％アセトニトリルの加水浦への直線的な緩衝液勾配を６０分以上かけて行うことによって実行した。フラクションから同定されたアミノ酸配列は：フラクション＃２　（Ｋ）ＹＱＹＹＳＮＫフラクション＃４　ＦＬＳＹＫフラクション＃５　ＦＬＳＹＫＮＬＶＮＦＨＲ７ラクシヨン＃７傘　ＥＡＬＬＳＹＧＦＹＧ　（Ｃ）Ｈ（Ｃ）ＧＶＧＧＲ（Ｃ）（Ｃ）ＶＴＨＤ　（Ｃ）（Ｃ）ＹＫＳＱＬ　（Ｃ）Ｅ　（Ｃ）ＤＫＩＴ　（Ｃ）ＡＫＡＡＡＴ　（Ｃ）ＦＡＲフラクション＃９　ＥＡＡＬＳＹＧＦＹＧ本ペプチドがシステイニル結合によって一緒に保持された。０は仮の指定を示す。

へ７ｆ凡負城ペプチド合成をＡＢＩペプチドシンセサイザーモデル４３０Ａで実行した。

Ｔ−Ｂｏｃ化学を使用した。ＨＦ切断は、固体支持体からのペプチド解放を用いた。

一νＡλ−の】Ｉ（（μ コントロール　１２０ｎｇ／１０μｍの２０ｍＭ　）リス　ｐＨ８の濃度の標Ｉ ′！Ｉ！ＰＬＡ２溶渣を用いた。連続希釈は２０ｍＭ　トリス　ｐＨ８＆ｌ衝清の添加により最終ン夜１２０μｍで行った。

阻ＦＦ　Ｉ！ｌ　ｍ　機　ぺ／タベブヂドを１μｍの０．１％ＴＦＡ中に通常通り溶解した溶液に、更に９μｍの２０ｍＭ　）リス　ｐＨ８を加えた。この溶液は常時ｐＨ７−８の範囲に維持した。この阻害剤溶液１０μｍはＰＬＡ２溶液１０μｌに添加した。

インキュベーション　全てのサンプルは３７℃で１時間インキュベートした。

ＰＬＡ２溶液　欅準ＰＬＡ　２溶液を、１０μｍが５０％（概略）の加水分解物となるように２０ｍＭ　トリス　ｐＨ８て調製した。

ペンタペプチド溶浦櫻準ペンタペプチド溶液は０．１％ＴＨＡ中で１０ｍｇ　／　ｍ　ｌに作製した。１００ｕｌを採取し９００μｌの２０ｍＭ）リス　ｐＨ８で中和化した。１０μｍ（１０μｇをＰＬＡ２溶浦１０μｌと一緒に投薬作用のため採取した）。その連続希釈はｌＯμｌのアリクウォントと２０ｍＭ）リスｐＨ８とで実行した。

１鉦促性之旦ｊ汐Ｊ潰− 敗血症性ショック血清は投薬作用実験のためにＩ／ｌｏｏに希釈し、連続希釈のために適切に用いた。最終反応容量は常にその比が１０μｍ血涜／１０μｌ　トリス又はペンタペプチド溶液とした。

活性の検定ＰＬＡ、；２活性は、セイルハマーら（Ｓｅｉｌｈａｓｅｒ　ｅｔ　ａｌ（１））により開示された方法からの変形である、ミセルを混合したホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）／デオキシコール酸ナトリウム検定を用いて測定した。

そのＰＥ基質は、２％ＤＯＣ中に溶解した新鮮な乾燥したＰ　Ｅ　（Ａｍｅｒｓｈａａ、　Ｂｕｃｋｓ、　Ｅｎｇｌａｎｄ）によって調製し、そしてこれをサンプル毎に０．２２ナノモルのＰＥと０．０４％ＤＯＣとなるように検定緩？ｆＪ液４５０ｍＭ　）リス塩酸、ｐＨ８，５，２ｍＭ塩化カルシウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、０．０４％ＤＯＣ）希釈した。このサンプルは１０μｍの１０ｍＭ）リス塩酸ｐＨ７，４と試験材料の１０μｍとの混合によって調製し、１０分間で３７°Ｃとした。その反応は２５μｌの予備加熱した基質を添加することによって開始され、そして１０μｌの１００ｍＭ　ＥＤＴＡの４加によって終了させた。その反応混合物（３０μｍ）をシリカＴＬＣプレート（メルク、　Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、　Ｗｅｓｔ　Ｇｅｒ＋ｎａｎｙ）にスポットして乾燥し、そのプレートを、クロロホルム　メタノール　酢酸（９０：１０：１）を溶媒として用い、クロマトグラフィーを行った。その乾燥したプレートをコダック　Ｘ　ＯＭＡＴ　ＡＲフィルムに一夜露出した。起点と解放されたアラキドン酸の放射性活性を計測し、検出されたＰ　Ｌ　Ａ、　２によって加水分解パーセントとした。

その結果の概要は、第１表において示す通り、タイプ■とタイプＩ＋の酵素のそれぞれの残基７０−７４に相当するペプチドが得られた。これらの結果は、ＰＬＡ２の１つの積に対するペプチド活性が試験した他の１に対して活性でないという点で相当な種の特異性があることを示す。加えて、試験したペプチドにはＰＬＡ２のタイプ１に対して活性なものはない。この結果は、タイプＩＩ酵素に関してのみ見出されるＰＬＡ２のこの領域（７０−７４）からのペプチドによる阻害であることを示している。

ペプチド５は、ヒトのタイプｏｐｒ、Ａ２の阻害活性があることが示され、しかしながらペプチド７．８，９，１０．１１及び１２は全て陰性となった。これはそのペプチドが阻害を示すには適宜な大きさであることが必要であり、また阻害が試験された特有なタイプＩＩ酵素から要求された特有の配列とのみ起こるであろうことを示唆する。

［以下余白］第１表タイ７ｅＩＩ　ＩＩ　Ｉｆ　Ｉ　Ｉ酵ｐ　滑液（１０ＬＤｕｒ、　ＣｒｏＬＡｔｒ、　Ｎ、Ｎ、ＡｉｒａＰｏｒ、ＰａｎＰＬＡ２〜囮（ＷＤＩＹＲ）Ｎ、Ｎ、ＡＩ（ＦＫＴＹＳ） σＥＳＹＳ）ＳＰＬＡ２−　ヒト　タイプ■■ＰＬＡ２ＣｒｏｔＤｕｒ−’　Ｐψ Ｃｒ０Ｌ　Ａｊｒ　−ｍ　Ｐψ Ｎ、Ｎ人−歯輝邸Ｕ囮些チＦｏｒ、Ｐａｎ、　−フ９　Ｒ臓ＰＬＡ２上δ己の結果から本発明によれば、７０−７４番の領域からの短いペプチドが活性サイトに接近するために基質と最も適切に競合して阻害の効果を与えるであろうと確信する。それはこれら領域中にあるペプチドの長さの変化が１１７１害の最適化をもたらすであろうと確信される。

そのペンタペプチドは明らかにヘリカル構造を有している（大体１と１／２ターン）、ヘリカル分子造の後は１つの残基のＣ＝０とその結合鎖に沿う第４番の残基のＮＨとの間の水素結合によって安定化され、そのペンタペプチドの構造はやや不安定となり、長いヘリカル分子よりも環境に対しより敏感となるであろう。

他方、それはサイズの範囲、つまりＰＬＡ２の活性サイトに接近するのが制限されるために効力が制限されるであろうことを示唆する。

疎水性の残基の通例の交換、例えばＬｅｕからＩｌｅ、ＳｅｒからＴｈｒは阻害効果を維持することができる。つまり、同様なアミノ酸残基における電荷又は疎水化は、２つのＭ域の特異的な相互作用を壊すことがない変更においてはそれらの交換が可能である。ヘリックス−へリックス相互作用の接は阻害作用の原因である可能性があり、ペプチドの長さの少しの増加はこの構造を安定化できる。

これらの知見において得られた結果は、モノクローナル抗体が、ＰＬＡ、２活性に関して類似した結果となる有効な１つ又は両方のペプチドを含んだエピトープに対して高めることができることを示唆する。このようなモノクａ−ナル抗体は当該技術分野における周知の標準技法を用いて生産することができる。

当業汗においては明白であろうように、本発明の原理はまた、ＰＬＡ２以外のＭ票、例えばインフルエンザウィルスのノイラミニダーゼ酵素又はニューロペプチドＹのような活性の阻害のための適用性を有しているだろう。それは一般的な生物学的に活性な蛋白質、そのペプチドに近接したアミノ酸の周囲の鎖との相互作用によって安定化される活性構造を所有し、そして活性サイトの内部にある残基との相互作用を受け易いものが、酵素の活性を咀書するであろうことが想到される。それを別の同様なペプチドで企画することは本発明の範囲内に含まれる。

明白に開示されたような発明の精神又は範囲から逸脱することなく、特有な実施態様において示したような本発明により各種の変更及び／又は変形が形成されるであろうことは当業者においては明らかとなるであろう。本発明の実施態様は、それ故、開示としての全ての関係におし＼て考慮されるものであり、それζこ限定されるものではない。

［以下余白］引用文献１　、Ｊｏｈｎｓｏｎ　Ｌ、に、ら、　Ａｄｖａｎｃｅ　ｉｎ　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ　＆　Ｂｉｏｌ；ＰＬ＾２　Ｒｏｌｅ及びＦｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｉｎｆｌａｗｕｓａｔｉｏｎ、　Ｐ、Ｙ−にＷＯｎｇｅｄ、　ＰＬｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ　１７−３４　（１９９１）。

２　、　５ｃｏｔｔ　Ｄ、Ｌ　ら、　５ｃｉｅｎｃｅ　２５０．１５６３　（１９９０１゜３　、５ｅｉｌｈａ＋ｓｅｒ　Ｊ、Ｊ、ら；、Ｊ、Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｗ　２６４．　５３３５　（１９８９１゜４　、Ｒｅｎｅｔｓｅｄｅｒ　Ｒ，ら、　Ｊ、　Ｒｉａｌ　Ｃｈｅｗ　２５０．１１６２７　（１９８５）５　、　５ｃｏｔｔ　Ｄ、Ｌ、ら、　５ｃｉｅｎｃｅ　２５０．１５４１　（１９９０）。

６　、Ｗｈｉｔｅ　Ｓ、Ｐ、ら、　５ｃｉｅｎｃｅ　２５０．　＋５６０　（１９９０１゜７、Ｐｒｏｚａｎｓｋｉ　Ｗ、ら、　Ｊ、　Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ、、　１５：ｌ３５１−１３５５　（１９ｇ８１゜８、Ｖａｄａｓ　Ｐ、、　Ｊ、　Ｌａｂ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｍｅｄ、、　１０４：８７３−８８１　（１９８４）。

ＦＩＧ−１エキシン２；　タイプ　１　１０　２０　３０　４０エキソン３：　４４５０　６０　７０　８０　８５ヒト　Ｉ工λ　ＣＣ’”ｎ３　ＤαＪ幻山以ス−ＣＬ　 −−−−−ＧＸＹＸＩ−５Ｘ）ＳＸＳＮ　ＳＧ　Ｓ　ＲＩＭ−ラット　エエＡ　匡ＶＴ１１ＥＣＬ［５−ＧＣ−−−−−ＧｆｆＸＥＬＴＹＸＥ５％ＧＱＩＳＣＳブタ　エエλ　二琺Ｈウサギ　τ工Ａ　没ＬＳＤ紺工■ エキソン４＋　８６９０　１００　１１０　１２０　１３０ウサギ　エエ入　没込へルエ　ＱＦヱＰ朋Ｒ仁ＳＧ肝ｐ５ＦＩＧ−２ａ− ＦＩＧ−２ｂ− 敗血症性ショック血清希釈χＥ−５Ｆ工（、３ｂ− ＦＴＧ−４ａＷＤＩＹＲｎｇ１１基質ｎＭ国際調査報告　１□Ｌ＋＋ｙｍｌａｐｐ−Ｎ。

にゴＩＡＵｎｌＤＯ３３３ｐ′＋ｙ　ＰＣＴｔ′５ｙ１０１７６０１　ｍ　ｌ１ｍ　＋２１１　Ｄｕｌｙ　１９９２＋　ｅ＄ｋａ国際調査報告　ｌｌ１ｌｅＩ７７・ｐｐｌｉａ□Ｎ。

ｐｃＴＩＡｔ％ｌｌａ１３３国際調査報告　！−璽ｉ」１□ＮａＰＣＴＩＡｔＷｕｏａ３３３Ｔｈｉｓ　Ａｎｎｅｘ　Ｉｊｔｃｓ　ｔｈｅ　ｋｎｏｗｎ　’Ａ”　ｐｕｂｌｉｅａむｏｎ　１ｅｖｅｌｐｘＩｅｌＩばａｍｉｌｙ　ｍｅｍａ{ゴｓ　ｒｅｌａむｎｇ　１０１ｈｅ、ｐａｍｔｄｏｃｕｍｅｍｓｃｉｍｉｎｔｈｅ！ｂｏｖｅ− ｍｃ＋＋ｔ＋ｏｎａｌｉｎｌｅｎｕｔｉｏｒｕｌｓｅａｒｃｈｒｅｐｏｒｔ、ＴｈｅＡｖｎｔｒｍｉａｎＰａ狽■獅狽nｍｃｅ＋ｓ＋ｎｎｏｗａｙｌｉａｂｌｅｒｏｔｔｈｅｓｔｐａｎｉｃｕｌａｒｓｗｈｊｃｈｌＬ＋？！ｍｅｒｅｌｙｇｉｖｅｒ＋ｆｏｒｒｅｐｕｒｐｏｓｅｏｒｉｎｆｏｒｍａｔ＋盾■ Ｆｏｒｍ　ＰｃＴｎＳｋｒｌＩＣＸ「１−優−ｙ紡ＭｔＭＩｕｌｙ１９９２１ｃａｐｂｋａフロントページの続き（５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，リ　識別記号　庁内整理番号Ａ６１Ｋ　３８１５５　ＡＢＮＣＯ７Ｋ　７／６４ＩＡ６１Ｋ　３７／６４　ＡＢＥ

Claims

【特許請求の範囲】

１．タイプＩＩホスホリバーゼＡ２の酵素的活性を阻害する化合物であって、触媒的切断以前のリン脂質の解放か阻止され又は不安定化されるいずれか一方のチャンネルのようなホスホリパーゼＡ２のＮ−末端アミノ酸配列と相互作用することを特徴とする上記化合物。
２．ＰＬＡ２がヒトＰＬＡ２である請求の範囲第１項記載の化合物。
３．化合物がペプチドである請求の範囲第１項又は第５項記載の化合物。
４．ペプチドがペンタペプチドである請求の範囲第３項記載の化合物。
５．ヒト滑液ＰＬＡ２の酵素的活性を阻害する少なくとも５残基の直線状又は環状ペプチドであり、次の構造式：Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ａ６−Ａ７ここでＡ１はＨ又は２つの自然出現アミノ酸の１つＡ２はＦ又はＹ又はＷ又は不在Ａ３はＬ又はＶ又はＩ又はＭＡ４はＳ又はＴＡ５はＹ又はＦ又はＷＡ６はＫ又はＲ又はＨ又は不在Ａ７はＯＨ又は２つの自然出現アミノ酸の１つを有している上記ペプチド。
６．ペプチドがペンタペプチドである請求の範囲第１項記載のペプチド。
７．Ａ１がＨでありＡ７がＯＨである請求の範囲第１項記載のペプチド。
８．ペプチドがＦＬＳＹＫ又はＫＦＬＳＹである請求の範囲第３項から第７項のいずれか１項に記載のペプチド。
９．ホスホリパーゼＡ２の酵素的活性を阻害する５又は６残基のペプチドであり、ホスホリパーゼＡ２の残基６９−７５の領域から選択された配列に相当するアミノ酸配列を有している上記ペプチド。
１０．ペプチドがペンタペプチドであり、かつホスホリパーゼＡ２の残基６９− ７３又は７０−７４からの配列に相当するペプチドである請求の範囲第９項記載のペプチド。
１１．ホスホリパーゼＡ２がヒトのホスホリパーゼＡ２である請求の範囲第９項又は第１０項記載のペプチド。
１２．クロタルスドリサスＰＬＡ２の酵素的活性を阻害する少なくとも５残基の直線状又は環状ペプチドであり、次の構造式：Ｂ１−Ｂ２−Ｂ３−Ｂ４−Ｂ５− Ｂ６−Ｂ７ここでＢ１はＨ又は２つの自然出現アミノ酸の１つＢ２はＷ又はＦ又はＹ又は不在Ｂ３はＤ又はＥＢ４はＩ又はＶ又はＬ又はＭＢ５はＹ又はＦ又はＷＢ６はＲ又はＫ又はＨ又は不在Ｂ７はＯＨ又は２つの自然出現アミノ酸の１つを有している上記ペプチド。
１３．Ｂ１がＨでありＢ７がＯＨである請求の範囲第１２項記載のペプチド。
１４．ペプチドかＷＤＩＹＲである請求の範囲第１２項又は第１３項記載のペプチド。
１５．クロタルスアトロクスＰＬＡ２の酵素的活性を阻害する少なくとも５残基の直線状又は環状ペプチドであり、次の構造式：Ｃ１−Ｃ２−Ｃ３−Ｃ４−Ｃ５ −Ｃ６−Ｃ７ここでＣ１はＨ又は２つの自然出現アミノ酸の１つＣ２はＴ又はＳ又は不在Ｃ３はＶ又はＩ又はＬ又はＭＣ４はＳ又はＴＣ５はＹ又はＦ又はＷＣ６はＴ又はＳ又は不在Ｃ７はＯＨ又は２つの自然出現アミノ酸の１つを有している上記ペプチド。
１６．Ｃ１がＨでありＣ７はＯＨである請求の範囲第１５項記載のペプチド。
１７．ペプチドがＴＶＴＳＹＴである請求の範囲第１５項又は第１６項記載のペプチド。
１８．慢性関節リウマチ、敗血症性ショック及び／又は炎症性疾患に罹った生体の治療に用いる組成物であり、治療上有効な量の請求の範囲第１項から第１１項のいずれか１項記載のペプチドと調剤上受容し得る無菌媒体とを備えた上記組成物。
１９．生体における慢性関節リウマチ、敗血症性ショック及び／又は炎症性疾患の治療の方法であり、請求の範囲第１８項記載の組成物を該生体に投与することを備えた上記方法。