JPH01199995A

JPH01199995A - ホスホリパーゼａ↓２阻害ペプチド

Info

Publication number: JPH01199995A
Application number: JP63024572A
Authority: JP
Inventors: Takashi Okazaki; 敬岡崎; Akiko Saito; 斎藤　暁子; Moriyuki Sato; 盛幸佐藤
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd
Current assignee: KH Neochem Co Ltd
Priority date: 1988-02-04
Filing date: 1988-02-04
Publication date: 1989-08-11
Also published as: DE68904315T2; DE68904315D1; EP0327334B1; US4895931A; EP0327334A2; EP0327334A3

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明はホスホリパーゼＡ２　（以下、ＰＬＡ２という
）活性を阻害する新規ペプチド類に関する。

従来の技術リポコルチンはアミノ酸数３４６で分子量が約３７、０
００の抗炎症作用を有する蛋白質であり、炎症起因物質
生成の引金となる酵素ＰＬＡ２に対し阻害活性を示すこ
とが知られている〔Ｎａｔｕｒｅ、　３２０　、７７（
１９８６）　：］。しかし、リボコルチンは巨大な蛋白
質であって、その安定性、投与方法の制限等に問題があ
り、抗炎症医薬品として用いる上には必ずしも適切なも
のではない。

また、リポコルチンのアミノ端側あるいはカルボキシ端
側を除去していってもＰＬＡ２阻害活性は残存するが、
その活性は次第に減少し、最も小分子として分子量約１
５．０００の蛋白質にリポコルチンの約４％の阻害活性
が認められたことが開示されているＣＪ、　Ｒｉｏｔ、
Ｃｈｅｍ、、　２６２　、７６３９（１９８７））。

発明が解決しようとする課題抗炎症医薬品として供するためには、より安定な低分子
で阻害活性の高い化合物が望まれている。

本発明は、低分子で優れたたＰＬＡ２阻害活性を有する
リポコルチンのアミノ酸配列の７ラグメントである新規
ペプチドを提供することにある。

課題を解決するための手段本発明は、ホスホリパーゼＡ２阻害活性を有するアミノ
酸数１５〜２６からなるペプチド類に関する。

さらに詳しくは下記の式（１）〜（ＸＩＩ）で示される
アミノ酸配列を有するペプチドから選ばれる化合物〔以
下、化合物（Ｉ）〜（ＸＩ［）という〕に関する。

）１−Ｖａｔ−＾５ｐ−Ｇ　ｌ　ｕ−＾１ａ−Ｔｈｒ−
ｔｌｅ−１１ｅ−Ａｓｐ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌ
ｙＳ−＾ｒｇ−＾５ｎ−Ａｓｎ−ＯＨ（Ｉ　）Ｈ−Ｔｈ
ｒ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｇｌｎ
−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−１１ｅ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−
Ａｌａ−Ｔｙｒ−ＯＨ（ＩＩ　））１−１１ｅ−Ｌｙｓ
−Ａｌａ−＾１ａ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−
Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−＾５ｐ−Ｇ
ｌｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｅ
ｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−ｆｌｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−ＯＨ
（ＤＩ　）Ｈ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｇｌ
ｕ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−しｅｕ
−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−ＤＨ（Ｉ
Ｖ））１−１１ｅ−Ｇｌｕ−１１ｅ−Ｌｅｕ−＾１ａ−
３ｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−１
１ｅ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−１１ｅ−ＯＨ（Ｖ））１−Ｔｈ
ｒ−Ｔｈｒ−＾ｒｇ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ
−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−シａｌ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−
Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−ＯＨ（■）１１ｅ−Ｖａｌ−
Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−＾１ａ−Ｏｆｆ　　　　　　　　（■
）Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−＾１ａ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−ＯＨ（Ｉ
Ｘ）Ｈ−Ｖａｌ−３ｅｒ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−１
１ｅ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−八５ｎ−Ａｓｐ−）１−１１　
ｅ−Ｌｙｓ−Ａ　Ｉａ−Ｐｈｅ−Ｔ　ｙ　ｒ−Ｇ　Ｉｎ
−Ｌｙｓ−１，１ｅｔ−Ｔｙｒ−Ｇ　ｌ　ｙ−上記の化
合物（１）〜（ＸＩＩ）は、ペプチド自動合成機を用い
た固１目合成法により合成される。

固相法により得られるペプチドの結合した固相担体はフ
ッ化水素で処理し、ペプチドを固相担体より遊離させる
と同時にアミノ酸側鎖の保護基を除去する。この様にし
て得られるペプチドの粗生成物はゲルー過カラムクロマ
トグラフィーで粗精製した後、逆相系カラムを用いた高
速液体クロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣという）で
精製し純品を得る。

本発明により得られる化合物（Ｉ）〜（ＸＩＩ）はアミ
ノ酸数１５〜２６で、分子量約１５００〜２３００の小
分子で安定なペプチド類であり、ＰＬＡ、に対し優れた
阻害活性を示す。

次に、試験例により本発明化合物のＰＬＡ、阻害活性に
ついて説明する。

試験例ＰＬ＾２阻害活性：試験化合物は１０ｍＭの塩化カルシウムを含む０゜１！
４トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８，８）　２８０薦に溶解
し、これにブタ膵臓ＰＬＡａ　（シグマ社、カタログ番
号　Ｐ６５３４）　２０ｎｇを同上組成の緩衝液１０ｍ
に溶かした溶液を加え、３７℃、１０分間加温した。こ
れにα−バルミトイル−β〔１−目Ｃ〕アラキトニルホ
スファチジルコリン（５４／ＪＣｉ／、ｕｍｏｌ、　Ｎ
［ｉＮ　Ｒｅ５ｅａｃｈＰｒｏｄｕｃｔｓ社）０．１μ
ｃｉを同上緩衝液１０頭にミセル化した液を加え３７℃
、１０分間加温した。次いで、Ｄａｌｅ試液〔２−プロ
パツール：ｎ−へブタン：１゜Ｍ硫酸＝４０：１０：１
混合液；１Ｊｅｔｈｏｄｓ　ｉｎεｎｚｙｍｏｌｏｇｙ
１４、１６７（１９６９）　〕３ｎ＋１を加え反応を停
止し、ｎ−へブタン１．５ｍｌおよび水１ｍｌを加え振
とうした。

ヘプタン層を分液して抽出された遊離の（１−”Ｃ）ア
ラキドン酸の放射能活性を測定した。この比放射能の値
をａとする。試験化合物溶液のかわりに同量の緩衝液を
加えた場合のへブタン層の比放射能をｂとする。試験化
合物とＰＬＡ、のかわりに同量の緩衝液を加えた場合の
へブタン層の比放射能をＣとして、次式より阻害率（χ
）を求めた。

結果を第１表に示すが、中程度のＰＬＡ２阻害活性を示
した化合物（ＩＶ）を基準とした相対活性比で表示した
。

第　　　１　　　表０　サンプル量　１００ｍｇ＊９〔試験化合物の阻害率〕／〔化合物（ＩＶ）の阻害
率〕また、第２表にはＰＬＡ２活性を５０％阻害するの
に必要な濃度（ＩＣｓｏ）を測定した結果を示す。

なお、表中のｒＬＣは大腸菌でＷａｌｌｎｅｒらの方法
［：Ｎａｔｕｒｅ、　３２０　、７７（１９８６））に
従って製造したりポコルチンを意味する。

第　　　２　　　表第２表に見られるように本発明化合物は強いＰＬＡ２阻
害活性を示す。特に化合物（ＸＩ）はアミノ酸数１６、
分子１１８６４でリポコルチンの分子量の約ｌ／２０の
小分子であるが、リポコルチンとほぼ同等のＩＣ５ｏを
示した。

以下に本発明の実施例を示す。

使用したアミノ酸およびその保護基に関する略号は、生
化学命名に関するＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ委員会（ＩＵＰＡ
Ｃ−１０８Ｃｏｍｍ１ｓｓｉｏｎ　ｏｎ　Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｃａｌ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ）の勧告［Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、旦、　１７２６　（１９７２）
　）に従った。

アミノ酸および保護基は以下の意味を有する。

Ｇ＋ｙ　　ニゲリシンＡｌａ：Ｌ−アラニンＶａｌ：Ｌ−バリンＬｅｕ：Ｌ−ロイシン１１ｅ：Ｌ−インロイシンＳｅｒ：Ｌ−セリンＴｈｒ：Ｌ−スレオニンＡｓｐ：Ｌ−アスパラギン酸Ａｓｎ：Ｌ−アスパラギンＧｌｕ：Ｌ−グルタミン酸Ｇｉｎ：Ｌ−グルタミンＬｙｓ：Ｌ−リジンＭｅｔ：Ｌ−メチオニンＨｉｓ：Ｌ−ヒスチジンＡｒｇ：Ｌ−アルギニンＰｈｅ：Ｌ−フェニルアラニンＴｙｒ：Ｌ−チロシンＣｙｓ：Ｌ−システィンＰｒｏ：Ｌ−プロリンＡＳＸ　　：アスパラギン酸またはアスパラギンＧｌｘ
　　：グルタミン酸またはグルタミンｔ−Ｂｏｃ　　：
　ｔ−ブチルオキシカルボニルＢｚｌ　　：ベンジル（：ｔｌ、−Ｂｚｌ　　：　４−メチルヘンシルＢｒ−
Ｚ　：　２−ブロモベンジルオキシカルボニルＣｌ−２
：　２−クロロベンジルオキシカルボニルＴｏｓ：ｔ−
シルなお、以下の実施例は、アプライドバイオシステムズ社
（Ａｐｐｌｉｅｄ　　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、　　Ｉｎ
ｃ、、　ＦｏｓｔｅｒＣｉｔｙ、　（：ａｌｉｆｏｒｎ
ｉａ、　１１．Ｓ、八、；以下ＡＢ１社という）のペプ
チド自動合成機４３０Ａ型機を用い、ＡＢＩ社の試薬お
よび溶媒を用いてＡＢ１社の合成プログラムにより自動
合成機を運転してペプチドを合成した。

また縮合反応は、アスパラギン、グルタミンおよびアル
ギニンについては１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを
用い活性エステル体として、他のアミノ酸類は対称酸無
水物として標準の条件で行った。

実施例１．化合物（ＩＶ）の合成ｔ　−Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）　　０．５ミリモル
が結合した担体樹脂０．８１ｇを自動合成機の反応容器
に入れた。ＡＢＩ社の合成プログラムに従い、次の処理
、洗浄を行った。

（１）　　３３％トリフルオロ酢酸を含む塩化メチレン
溶液処理（８０秒）（２）　　５０％トリフルオロ酢酸を含む塩化メチレン
溶液処理（１８，５分）（３）塩化メチレン洗浄（３回）（４）　　１０％ジイソプロピルエチルアミンを含む塩
化メチレン溶液処理（１分、２回）（５）　　ジメチルホルムアミド洗浄（５回）こうして
得られたＧｌｕ（口Ｂｚｌ）の結合した担体樹脂に、（６）　　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｌｅｕの対称酸無水物１．０
ミリモルを含むジメチルホルムアミド溶液４ｍｌを加え
、反応容器を１８分間攪拌した。

（７）塩化メチレン洗浄（５回〉こうして、ｔ　−Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）
が担体樹脂上に合成された。次に上記の（１）〜（５）
の脱保護工程を行った後、〔６）の工程でｔ　−Ｂｏｃ
−Ｈｉｓ（Ｔｏｓ）の対称酸無水物を加え縮合反応を行
い、次いで（７）の洗浄工程を経てｔ　−Ｂｏｃ−Ｈｉ
ｓ（Ｔｏｓ）　−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）を担体樹
脂上に合成した。以下、工程（１）〜（７）を順次くり
返して保護ペプチドの結合した担体樹脂１．９０　ｇを
得た。

なお、工程（６）には順次ｔ　−Ｂｏｃ−Ｇｌｙ、　ｔ
−Ｂｏｃ　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｌｅ
ｕ、　ｔ−Ｂｏｃ−＾１ａ、ｔ−Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩ
−Ｚ）、ｔ　−Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）、　ｔ−Ｂ
ｏｃ−Ｌｅｕ。

ｔ−Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、　ｔ−Ｂｏｃ−Ｇｌｕ
（ＯＢｚｌ）、　ｔ−Ｂｏｃ−八５ｐ（ＯＢｚｌ）、　
ｔ−Ｂｏｃ−Ｌｅｕ、　ｔ−Ｂｏｃ−Ｐｒｏおよびｔ−
Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）を用いた。

合成反応終了後、得られた担体樹脂のうち０．４ｇを用
い、これにアニソール９．５ｍｌを加え３時間放置した
後、フッ化水素５ｍｌを加えて１時間水冷上攪拌した。

次いでフッ化水素を減圧除去し、担体樹脂に酢酸エチル
３０ｍ１．２Ｍ酢酸２５１＋１１を加えて１時間攪拌し
た。分液して得られた水層を酢酸エチル３０ｍ１で洗浄
後、セファデックスＧ−２５（ファルマシア社）のカラ
ム（２ａｍ　ｘ８０ｃＩｌｌ）に通塔し、１Ｍ酢酸水溶
液で溶出した。２７４ｒ＋ｍの吸光度で溶出画分を分析
し、化合物（ＩＶ）を含む両分を得た。

この両分を凍結乾燥して１３６ｍｇの粗精製した固体を
得た。この固体のうち２５ｍｇを０．１％トリフルオロ
酢酸水溶液２．３ｍｌに溶解し、逆相カラム（Ｎ［ＩＣ
Ｌε０３ＩＬ　５Ｃ１８；φ２０Ｘ２５０ｍｍ　）を用
いたＨＰＬＣで精製した。０．１％トリフルオロ酢酸と
０．１％トリフルオロ酢酸のア七ト二トリル溶液を用い
た直線濃度勾配法で溶出し、２２０ｎｍで分析し化合物
（ＴＶ）を含む両分を得た。この画分を凍結乾燥して化
合物（ＴＶ）の純品１０．７ｍｇを得た。

質量分析（ＳＩＭＳ　；以下同様である）　　：１８５
３　（Ｍ”＋　ｌ）アミノ酸分析：Ａｓｘ　０．７（１）、　Ｇｌｘ　Ｌ、９（２）、　Ｇ
ｌｙ　Ｌ、　１（１）、　Ｈｉｓ　１．１（１）、　Ｔ
ｈｒ　２．０（２）、　Ａｌａ　１．０（１）、　Ｐｒ
ｏ　１．０（１）、　Ｌｅｕ３、９　（４）、　Ｌｙｓ
　３．２　（３）実施例２、化合物（Ｉ）の合成ｔ　−Ｂｏｃ−ＡＳｎが結合した担体樹脂および保護ア
ミノ酸として順次、ｔ　　−Ｂｏｃ−Ａｓｎ、　　ｔ−Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔ
ｏｓ）、　　ｔ−Ｂｏｃ　−しｙｓ（ＣＩ−Ｚ）、　　
ｔ　　−Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、　　　ｔ　　−Ｂ
ｏｃ　−Ｌｅｕ。

ｔ　−Ｂｏａ−１１ｅ、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢ
ｚｌ）、　ｔ　−Ｂｏｃ−１１ｅ。

ｔ−Ｂｏｃ−１１ｅ、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ
）、　　ｔ　−Ｂｏｃ　−＾１ａ、　ｔ　−Ｂｏｃ　−
Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）、　　ｔ　−Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢ
ｚｌ）およびｔ　−Ｂｏｃ−Ｖａｔを用い、実施例１と同様の方法により、保護ペプチドの
結合した担体樹脂１．３６　ｇを得た。このうち０．４
０　ｇを実施例１と同様にフッ化水素処理、ゲル濾過カ
ラムクロマトグラフィーによる精製を行って１００ｍｇ
の粗精製品を得た。このうち２５ｍｇをＨＰＬＣで精製
して８．６　ｍｇの化合物（１）の純品を得た。

質量分析：１７１４　　（Ｍ＋＋１）アミノ酸分析：ＡＳＸ　４．１（４）、　ＧＩＸ　１．４（］、）、　
Ａｒ８０．７（１）、　Ｔｈｒ　１．５（２）、　　Ａ
ｌａ　　１．５（１）、　　Ｌｅｕ　　Ｏ，９（１）、
　　Ｉｌｅ　　２．２（３）、　　ＶａｌＯ，９（１）
、　Ｌ！／Ｓ　１．１　（１）実施例３．化合物（ＩＩ
）の合成ｔ　−Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｏｒ−Ｚ）が結合した担体樹脂
および保護アミノ酸として順次、ｔ　−Ｂｏｃ−Ａｌａ、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ａｌａ、　ｔ
　−Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）、　　ｔ　−Ｂｏｃ−
１１ｅ、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｇｉｎ、　ｔ　−Ｂｏｃ　−
Ｇｌｎ、　　ｔ　　−Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）、　　
　ｔ　　−Ｂｏｃ−Ｇｉｎ、　　ｔ　　−日ｏｃ　−Ａ
ｌａ、　ｔ　−Ｂｏｃ−＾ｓｎ、　ｔ　−Ｂｏｃ　−Ａ
ｓｎ、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）、　ｔ　−３
ａｃ−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）およびｔ　−Ｂｏｃ−Ｔｈｒ
（Ｂｚｌ）を用い、実施例１と同様の方法により、保護
ペプチドの結合した担体樹脂１．２９　ｇを得た。この
うち０．４０　ｇを実施例１と同様にフッ化水素処理ゲ
ルｐ過カラムクロマトグラフィーによる精製を行って１
３６ｍｇの粗精製品を得た。このうち２５ｍｇを１（Ｐ
ＬＣで精製して４．−２　ｍｇの化合物（ＩＩ）の純品
を得た。

質量分析：１７８９（Ｍ＋＋１〉アミノ酸分析：＾Ｓ％　２．１　（２）、　ＧＩＸ　３゜２　（３）、
　Ａｒｇ　１．８　（２）、　Ｔｈｒ　Ｏ，９（１）、
　Ａｌａ　２．８（３）、　Ｔｙｒ　ｔ、　２（１）、
　ｌｉｅ　１．　ｌ　（１）、　Ｌ’／Ｓ２、０　（２
）実施例４．化合物（ＩＩＩ）の合成実施例１で得た保護ペプチドの結合した担体樹脂０．４
０ｇにさらに保護アミノ酸として順次、ｔ　−Ｂｏｃ−
Ｇｌｙ、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、　　ｔ　
−Ｂｏｃ　−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｇ
ｉｎおよびｔ　−Ｂｏｃ−Ｌｅｕを用い、実施例１と同
様の方法により、担体樹脂０、５０　ｇを得た。このう
ち０．２５　ｇを用い、さらに保護アミノ酸として順次
、ｔ　−Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｒ−２）、　ｔ　−Ｂｏｃ−
Ａｌａ、　ｔ　−Ｂｏｃ　−Ａｌａ、　ｔ　−Ｂｏｃ−
Ｌｙｓ（ＣＩ−２）およびｔ　−Ｂｏｃ−１１ｅを用い
、実施例１と同様の方法により、保護ペプチドの結合し
た担体樹脂０．３３　ｇを得た。

担体樹脂は実施例１と同様の方法でフッ化水素処理、ゲ
ル濾過カラムクロマトグラフィーによる精製を行って９
５１１１ｇの粗精製品を得た。このうち２５ｍｇをＨＰ
ＬＣで精製して２９．６ｍｇの化合物（ＩＩＩ）の純品
を得た。

質量分析：２３２０（Ｍ“＋１）アミノ酸分析：ＡＳＸ　１．１（１）、　ＧＩＸ　４．１（４）、　Ｇ
ｌｙ　２．３（２）、　１ｌｉｓ　Ｏ，９（１）、　　
Ｔｈｒ　　２．７　（３）、　　八ｌａ　　１．１　（
１）、　　Ｐｒｏ　　１．１　（１）、　　Ｌｅｕ４、
７　（５）、　　Ｌｙｓ　　３．　Ｏ（３）実施例５．
化合物（Ｖ）の合成ｔ−Ｂｏｃ”ｌｌｅが結合した担体樹脂および保護アミ
ノ酸として順次ｔ　−Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）、　ｔ　−Ｂｏａ−
Ａｒｇ（Ｔｏｓ）、　　ｔ　−Ｂｏｃ−１ｉｅ、　ｔ　
−Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｌｙ
ｓ（ＣＩ−Ｚ）。

ｔ　−Ｂｏｃ　−Ａｓｎ、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂ
ｚｌ）、　　ｔ　−Ｂｏｃ　−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）、　　
ｔ　−３ｏｃ−３ｅｒ（Ｂｚｌ）、　　ｔ−Ｂｏｃ−Ａ
ｌａ。

ｔ　−Ｂｏｃ−Ｌｅｕ、　ｔ　−Ｂｏｃ−１ｉｅ、　　
ｔ−Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）およびｔ　−Ｂｏｃ−
１ｉｅを用い実施例１と同様の方法により保護ペプチド
の結合した担体樹脂１．４９　ｇを得た。このうち０、
４０　ｇを実施例１と同様にフッ化水素処理ゲルｐ過カ
ラムクロマトグラフィーによる精製を行って１３７ｍｇ
の粗精製品を得た。このうち３９ｍｇをＨＰＬＣで精製
して４．０　ｍｇの化合物（Ｖ）の純品を得た。

質量分析：１７６９（Ｍ“＋１）アミノ酸分析：八Ｓｏｌ　　２．１（２）、　　ＧＩＸ　　１．７（２
）、　　Ｓｅｔ　　１．１４１）、　　Ａｒｇ　　１．
７（２）、　　Ｔｈｒ　　１．０　（１）、　　八ｌａ
　　１．０　（１）、　　ｌｌｅ　　４．４　（４）、
　　Ｌｅｕ０、　９　（１）、　　Ｌｙｓ　　１．　　
Ｏ（１）実施例６．　化合物（ＶＴ）の合成ｔ　−Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）が結合した担体樹脂オ
ヨヒ保護アミノ酸として順次ｔ　−Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ）、　ｔ　−Ｂｏｃ−
Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）。

ｔ　−Ｂｏｃ−Ｇｉｎ、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｐｈｅ、　ｔ
　−Ｂｏｃ−Ｖａｌ。

ｔ　−Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）、　　ｔ　−Ｂｏｃ−
Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）　。

ｔ　−Ｂｏｃ−Ｌｅｕ、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｇｉｎ、　ｔ
　−Ｂｏｃ−Ｐｒｏ。

ｔ　−Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ）、　ｔ　−Ｂｏｃ−
Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）。

ｔ　−Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）、　　ｔ　−Ｂｏｃ−
Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）およびｔ　−Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ
）を用い実施例１と同様の方法により保護ペプチドの結合
した担体樹脂１．８５ｇを得た。このうち０、４０　ｇ
を実施例１と同様にフッ化水素処理ゲル濾過カラムクロ
マトグラフィーにより精製を行って１１３ｍｇの粗精製
品を得た。このうち２５ｍｇを）ＩＰＬＣで精製して７
．５　ｍｇの化合物（Ｖ［）の純品を得た。

質量分析：　２０４３　（Ｍ”＋１）アミノ酸分析：ＧＩＸ　　２．０　（２）、　Ｓｅｔ　　１．０（１）
、　Ａｒｇ　３．０　（３）、　Ｔｈｒ　　３．１（３
）、　Ｐｒｏ　　１．０（１）、　Ｔｙｒ　　２．０（
２）、　　Ｌｅｕ　　１．１　（１）、　Ｖａｌｌ、１
（１）、　Ｐｈｅ　　１．０　（１）、　ｌｙｓ　　１
．１　（１）実施例７．化合物（■）の合成ｔ　−Ｂｏｃ−Ａｌａが結合した担体樹脂および保護ア
ミノ酸として順次ｔ　−Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（Ｃ）Ｉｓ−Ｂｚｌ）、　　ｔ　
−Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）。

ｔ　−Ｂｏｃ−Ｖａｌ、　ｔ　−Ｂｏｃ−１ｉｅ、　ｔ
　−Ｂｏｃ−Ａｌａ。

ｔ　−Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、　　ｔ　−Ｂｏｃ−
Ｌｅｕ、ｔ　−Ｂｏｃ　−Ｃｙｓ（ＣＨ，−Ｂｚｌ）、
　　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）、　ｔ　−Ｂｏ
ｃ　−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）、　　ｔ　　−３ａｃ−［１
ｅ、　　ｔ　　−Ｂｏｃ−Ａｓｐ（口Ｂｚｌ）。

ｔ　−ｅｏ、ｃ−Ｇｔｙおよびｔ　−Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（
ＣＩ−Ｚ）を用い、実施例１と同様の方法により保護ペ
プチドの結合した担体樹脂１．４４ｇを得た。このうち
０、４０　ｇを実施例１と同様にフッ化水素処理ゲルｐ
過カラムクロマトグラフィーにより精製を行って１１７
■の粗精製品を得た。このうち２５ｍｇを）ＩＰＬｃで
精製して７．４　ｍｇの化合物（■）の純品を得た。

質量分析：　１５９１　　（Ｍ９＋１）アミノ酸分析：Ａｓｘ　１．２（１）、　ＧＩＸ　１．０（１）、　Ｇ
ｌｙ　ｔ、　１（１）、　Ｔｈｒ　１．０（１）、　　
八Ｉａ　　２．１　　（２）、　　Ｖａｌ　　Ｏ，６（
１）、　　Ｃｙｓ　　２．２（２）、　　１ｉｅ１．６
（２）、　　Ｌｅｕ　　１．Ｏ（１）、　　Ｌｙｓ　　
３．４　（３）実施例８．化合物（■）の合成ｔ−Ｂｏｃ−Ａｌａが結合した担体樹脂および保護アミ
ノ酸として順次ｔ　−Ｂｏｃ−Ｐｒｏ、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩ
−Ｚ）、　ｔ　−Ｂｏｃ　−５ｅｒ（Ｂｚｌ）、　　ｔ
　−Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、　　ｔ−Ｂｏｃ−Ａｌ
ａ。

ｔ　−Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（ＣＨ，−Ｂｚｌ）、　　ｔ−Ｂ
ｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）。

ｔ　−Ｂｏｃ−Ｖａｌ、　ｔ　−Ｂｏｃ−ｌｉｅ、　ｔ
−Ｂｏｃ−Ａｈａ。

ｔ　−Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、　　ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ
ｅｕ、　ｔ−Ｂｏｃ　−Ｃｙｓ　（ＣＨ，−Ｂｚｌ）お
よびｔ　−Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩ−２）を用い、実施例
１と同様の方法により保護ペプチドの結合した担体樹脂
１．４８ｇを得た。このうち０、３７　ｇを実施例１と
同様にフッ化水素処理ゲル濾過カラムクロマトグラフィ
ーにより精製を行って１４９ｍｇの粗精製品を得た。こ
のうち２６ｍｇをＨＰＬＣで精製して２．５　ｍｇのノ
ヒ合物（■）の純品を得た。

質量分析：１７７４（Ｍ゛＋１）アミノ酸分析：Ｇｌｘ　１．０（１）、　Ｓｅｔ　１．２（１）、　Ｔ
ｈｒ　２．０（２）、　Ａｌａ　３．１（３）、　Ｐｒ
ｏ　１．１　（１）、　Ｖａｌ　Ｏ，６（１）、　［：
ｙｓ　２．２（２）、　ｌ１ｅ１、　５　（２）、　　
Ｌｅｕ　　１．　１　（１）、　　Ｌｙｓ　　３．　０
　（３）実施例９．化合物（ＩＸ）の合成ｔ　−Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）が結合した担体樹脂
および保護アミノ酸として順次、ｔ　−Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）、　ｔ−Ｂｏｃ−Ａ
ｌａ、　ｔ−Ｂｏｃ　−Ｐｈｅ、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｐｈ
ｅ、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ａｌａ、　　ｔ　−Ｂｏｃ　−Ｐ
ｒｏ、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）、　ｔ−Ｂ
ｏｃ−３ｅｒ（Ｂｚｌ）。

ｔ　−Ｂｏｃ　−Ｔｈｒ　（Ｂｚｌ）、　ｔ−Ｂｏａ−
＾１ａ、ｔ−Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（ＣＨ，−Ｂｚｌ）、　　
ｔ−Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（’ＣＩ−Ｚ）、　ｔ−Ｂｏｃ　−
Ｖａｌおよびｔ−Ｂｏｃ−１１ｅを用い、実施例１と同様の方法により保護ペプチドの結
合した担体樹脂１．７１ｇを得た。このうち０、３９　
ｇを実施例１と同様にフッ化水素処理ゲル濾過カラムク
ロマトグラフィーにより精製を行って７７Ｉｏｇの粗精
製品を得た。このうち２５ｍｇをＨＰＬＣで精製して６
．７　ｍｇの化合物（ＩＸ）の純品を得た。

質量分析：１６３９　（Ｍ゛＋１）アミノ酸分析：ＧＩＸ　１．２（１）、　Ｓｅｔ　１．３（１）、　Ｔ
ｈｒ　　１．１ｆｌ）、　Ａｌａ　３．１（３）、　Ｐ
ｒｏ　１．４（１）、　Ｖａｌ　　Ｏ，５（１）、　Ｃ
ｙｓ　Ｏ，８（１）、　ｌ１ｅＯ，５（１）、　　Ｐｈ
ｅ　　２．　１　（２）、　　Ｌｙｓ　　２．９　（３
）実施例１０．化合物（Ｘ）の合成ｔ　−３ｏｃ−Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）が結合した担体樹脂
および保護アミノ酸として順次、ｔ　−Ｂｏｃ−５ｅｒ（Ｂｚｌ）、　　ｔ−Ｂｏｃ−Ｖ
ａｌ、　　ｔ　−Ｂｏｃ　−Ｍｅｔ、　ｔ　−Ｂｏｃ−
１１ｅ、　　ｔ　−Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）、　　ｔ
　−Ｂｏｃ−１ｉｅ、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ａｈａ、　ｔ−
Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）。

ｔ−Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｏｓ）、　　ｔ−Ｂｏｃ−Ａｒ
ｇ（Ｔｏｓ）、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、　
　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｇｌｙ、　ｔ−Ｂｏｃ−Ｖａｔおよび
ｔ−Ｂｏａ−Ｇｌｙを用い、実施例１と同様の方法により保護ペプチドの結
合した担体樹脂１．３７　ｇを得た。このうち０、４０
　ｇを実施例１と同様にフッ化水素処理ゲルｐ過カラム
クロマトグラフィーにより精製を行って１４４ｍｇの粗
精製品を得た。このうち２５ｍｇをＨＰＬＣで精製して
４．０　ｍｇの化合物（Ｘ）の純品を得た。

質量分析＋１８５３（Ｍ”＋１）アミノ酸分析：ＧＩＸ０．８（１）、　Ｓｅｔ　１．９（２）、　Ｇｌ
ｙ　１．　［１）、　Ｈｉｓ　Ｏ，９（１）、　Ａｒ８
２．６（３）、　Ｔｈｒ　Ｏ，８（１）、　Ａｌａ　１
．０（１）、Ｖａｌ１、３（１）、　Ｍｅｔ　１．３（
１）、　ｌｉｅ　２．１　（２）、　Ｌｅｕ　１．０　
（１）。

しＹＳ　　１．　１（１）一実施例１１．　　化合物（ＸＩ）合成ｔ　−Ｂｏｃ−
Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ）が結合した担体樹脂および保護アミ
ノ酸として順次、ｔ　　−Ｂｏａ−Ｐｈｅ、　　　ｔ　　−Ｂｏｃ−＾１
ａ、　　ｔ−ＢＯＣ−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）、　　ｔ　−
Ｂｏａ−１ｉｅ、　　ｔ　−Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ
）。

ｔ　−Ｂｏｃ　−Ａｓｎ、　ｔ　−Ｂｏｃ　−Ｍｅｔ、
　ｔ−Ｂｏｃ　−Ａｓｐ（口Ｂｚｌ）、　　　ｔ　　−
Ｂｏｃ−１ｉｅ、　　ｔ　　−Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚ
ｌ）。

ｔ−Ｂｏｃ−Ｓｅｔ（Ｂｚｌ）、　　ｔ　−Ｂｏｃ−Ａ
ｒｇ（Ｔｏｓ）、　　ｔ　−３ｏｃ−５ｅｒ（Ｂｚｌ）
　ｉｓよびｔ　−Ｂｏｃ−Ｖａｌを用い、実施例１と同
様の方法により保護ペプチドの結合した担体樹脂１．７
９　ｇを得た。このうち０、４０　ｇを実施例１と同様
にフッ化水素処理ゲルー過カラムクロマトグラフィーに
より精製を行って５４＋ｎｇの粗精製品を得た。このう
ち２５ｍｇを）ＩＰＬｃで精製して１０．２ｍｇの化合
物（ＸＩ）の純品を得た。

質量分析：１７８７（Ｍ”＋１）アミノ酸分析：Ａｓｘ　３．０（３）、　ｃｒｙ　１．１（１）、　Ｓ
ｅｒ　２．０（２）、　Ａｒｇ　１．１（１）、　Ａｌ
ａ　１．０（１）、　Ｔｈｒ　１．　［１）、（１）、
　Ｖａｌ　　１．０（１）。

Ｍｅｔ　Ｏ，９（１）、　ｌｌｅ　１．９（２）、　Ｐ
ｈｅ　Ｌ、　０（１）、　Ｌｙｓ　ｏ、　９（１）実施
例１２．化合物（ＸＩ［）の合成ｔ　−Ｂｏｃ−Ａｌａが結合した担体樹脂および保護ア
ミノ酸として順次、ｔ　−Ｂｏｃ−Ｇｉｎ、　　ｔ−Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（ＣＨ
ａ−Ｂｚｌ）、　　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｌｅｕ、　ｔ　−Ｂ
ｏｃ−５ｅｒ（Ｂｚｌ）、　ｔ−Ｂｏｃ−１１ｅ。

ｔ　−Ｂｏｃ−Ｇｌｙ、　ｔ　−３ａｃ−Ｔｙｒ（Ｂｒ
−Ｚ）、　ｔ　−ＢｏｃＭｅｔ、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｌｙ
ｓ（ＣＩ−Ｚ）、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｇｉｎ、　ｔ　−Ｂ
ｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｒ−Ｚ）、　ｔ　−Ｂｏｃ−Ｐｈｅ、
　ｔ　−Ｂｏｃ−Ａｌａ。

ｔ　−Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）およびｔ　−Ｂｏｃ
−１ｉｅを用い、実施例１と同様の方法により保護ペプ
チドの結合した担体樹脂１．３９　ｇを得た。このうち
０、３９　ｇを実施例１と同様にフッ化水素処理ゲル濾
過カラムクロマトグラフィーにより精製を行って１２０
　ｍｇの粗精製品を得た。このうち３ＱｍｇをＨＰＬＣ
で精製して５．７　ｍｇの化合物（ＸＩＩ）の純品を得
た。

質量分析：１８６３（Ｍ＝＋１）アミノ酸分析：ＧＩＸ　２．２（２）、　Ｓｅｔ　１．１０）、　Ｇｒ
ｙ　１．２（１）、　Ａｌａ　２．２（２）、　　丁ｙ
ｒ　　２．０　（２）、　　Ｎｅｔ　　１．０　（１）
、　　Ｃｙｓ　　１゜０（１）。

［１ｅ　２．０（２）、　Ｌｅｕ　１．２（１）、　Ｐ
ｈｅ　１．１０）、　ｔ、ｙｓ　２．０（２）発明の効
果本発明によれば、化合物（Ｉ）〜（ＸＩ）はホスホリパ
ーゼＡ２阻害活性を有しており、抗炎症剤の活性成分と
して有用であると期待される。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ホスホリパーゼＡ＿２阻害活性を有するアミノ酸
数１５〜２６からなるペプチド類。
（２）下記の式（ I ）〜（ＸII）で示されるアミノ酸
配列を有するペプチドから選ばれる特許請求の範囲第１
項記載のペプチド。【遺伝子配列があります】（ I ）【遺伝子配列があります】（II）【遺伝子配列があります】（III）【遺伝子配列があります】（IV）【遺伝子配列があります】（Ｖ）【遺伝子配列があります】（VI）【遺伝子配列があります】（VII）【遺伝子配列があります】（VIII）【遺伝子配列があります】（IX）【遺伝子配列があります】（Ｘ）【遺伝子配列があります】（Ｘ I ）【遺伝子配列があります】（ＸII）