JPH07500106A - 移植受容者における感染の治療のためのｉｆｎ−ガンマの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 移植受容者における感染の治療のためのＩＦＮ−ガンマ　の使用発明の技術分野 本発明は一般に、移植患者における微生物感染の予防および治療に関する。さら に詳しくは、本発明は、移植拒絶の頻度を増大させることなく、移植受容者にお ける微生物感染を予防および治療するためのリンホカイン、とりわけガンマイン ターフェロン（ＩＦＮ−γ）の使用に関する。

発明の背景 同種移植の後の感染による合併症が同種移植の拒絶となることは臨床経験でよく 確立されている。多くの移植患者は、入院期間中に微生物感染したり、入院した ときにすでに患者内でコロニー形成していた微生物が原因の感染を患う。微生物 感染は、移植の成功を制限する主要な因子であると考えられている。このことは 、移植拒絶を防ぐために必要な免疫抑制が移植患者における感染を克服するため の通常の抗菌治療の成功を大きく制限することからとりわけそうである［ロルア ナポリス州（１９８３）］。

移植受容者における微生物感染を制御する一つの可能な方法は、免疫応答を増大 させるために生物学的応答調節剤（免疫調節剤）を用いることである。この方法 は、ＩＦＮ−γ療法を用い、移植を伴わない外傷／感染の動物モデルにおいて行 って成功している。幾つかの異なる外傷モデルに供した薩歯類を免疫抑制したと ころ、種々の細菌に感染した場合に増大した死亡率を示した。マウスガンマイン ターフェロンで薩歯類を予防または治療すると、該モデルの幾つかにおいて生１ ６５　（１９８８）　；　Ｊ、　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　Ｒｅｓ、８．３６７　 （１９８８）；Ｃ１１ｎ。

Ｅｘｐ、　Ｉ　ｍｍｕｎｏｌ、ヱ旦、４０６　（１９８８）；およびＩｎｆｅｃ 、　Ｉｍｍｏｎ、　５旦、２４１２　（１９８８）；リビングストン（Ｌｉｖｉ ｎｇｓｔｏｎ、　Ｄ、　Ｈ，）　＆７ランゴニ（Ｍａｌａｎｇｏｎｉ、　Ｍ、　 Ａ、）　、Ｊ、　Ｓｕｒｇ、　Ｒｅｓ、４５．３７　（１９８８）］ｏ　しかし ながら、移植患者における感染を制御するためにＩＦＮ−γ療法を使用すること に反対する強い指摘が存在する。

主要組織適合複合体の遺伝子によってコードされる細胞膜分子が免疫系の細胞と 移植臓器との間の相互作用において本質的な役割を果たしていることが知られて いる［ソーズビー（Ｔｈｏｒｓｂｙ、　Ｅ、）　、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ　Ｐｒ ｏｃ、１ヱ、２９（１９８７）］。とりわけ、同種移植した組織の主要組織適合 複合体（ＭＨＣ）分子は、受容者のＴ細胞を活性化することにより強い免疫応答 を引き起こす能力を有する。

ＭＨＣクラス■分子は特に強い移植抗原であるように思われる［クレンプナウア （Ｋ　ｌｅｍｐｎａｕｅｒ）　ら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、　Ｐ　ｒｏｃ、↓ヱ 、１９８７　（１９８５）］。■ＦＮ−γ療法での免疫調節にはＭＨＣクラス■ 抗原の発現の促進が含まれることがわかっているので［Ｉ　ｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒ　ｍｍｕｎｅ　Ｓｙｓｔｅｍ、ビルチｊ−／す（Ｖｉｌ ｃｅｋ、　Ｊ、）　＆ドウマイヤー（Ｄ　ｅＭａｅｙｅｒ）編、エルセビエ・サ イエンティフィック・パブリッンヤーズ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　５ｃｉｅｎｔｉｆ ｉｃ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、　Ｂ、　Ｖ、　）　、アムステルダム（１９８５ ）］、移植患者の治療にＩＦＮ−γを使用することに対して正当な懸念が存在す る。実際、ＩＦＮ−γは（ちょうどインターロイキン−２（ＩＬ−２）のように ）同種移植拒絶の重要な媒体として考えられている。ＩＦＮ−γレセプター抗体 およびＩＬ−２レセプター抗体は、実験動物において同種移植拒絶を防（二とが 示されており［ランドルフォ（Ｌａｎｄｏｌｆａ）ら、５ｃｉｅｎｃｅ　２２旦 、１７６　（１９８５）；ｏ−ゼンバーグ（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）ら、Ｊ、　ｒ ｍｍｕｎｏｌ、ＩＩＬ−２およびＩＦＮ−γの産生が腎移植受容者における拒絶 エピソードと相関関係を有し得ることを示唆している［ヨンムラ（Ｙｏｓｈｉｍ ｕｒａ、　Ｎ、　）およびカハンＨ，）ら、Ｋｉｄｎｅｙ　Ｉｎｔ、λ旦、５５ ３　（１９８５）；すＬ／　ッ７　：／　（Ｃａｌｅｓｓｏｎ。

Ｋ、）ら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　３旦、３２　（１９８４）　］ｏ ウォロスッズク（Ｗｏｌｏｓｚｃｚｕｋ）ら（Ｊ、Ｃ１１ｎ、Ｃｈｅｍ、Ｃ１１ ｎ、Ｂｉｏｃｈｅｅ、　２４．７２９〜３４（１９８６））は、感染に直接関連 してまたは関連せずに、拒絶エピソードの前にＩＦＮ−γの血清レベルの増大を 観察しており、この観察が移植受容者の免疫状態のモニターのための容易で信頼 性のある方法を提供することを示唆している。腎移植受容者におけるインターフ ェロンの全身投与は臓器拒絶の頻度の増大を伴っている［コバリフ（Ｋｏｖａｒ ｉｋ、　Ｊ、）ら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　４５．４０２　（１９８ ８）］ｏこの重篤な副作用は、腎移植患者の治療にインターフェロンを使用する ことを禁忌移植拒絶におけるリンホカインの関与の程度、とりわけリンホカイン が関与する機構についてはほとんどわかっていないが、またＩＦＮ−γ療法に続 く拒絶現象に関する幾つかの研究は矛盾した結果を報告しているが［マッケンナ （ＭｃＫｅが促進される潜在的危険のため、移植患者における感染の治療のため にＩＦＮ−γを医者が使用することがこれまで制限されてきている。

移植受容者にリンホカイン、とりわけＩＦＮ−γを投与することに反対する指摘 は、移植において最も一般的に用いられる免疫抑制剤であるシクロスポリンおよ びコルチコステロイドの作用機構に関する本発明者らの知見から一層明らかであ る。

移植におけるシクロスポリンの免疫抑制作用については広く研究されており、主 として、Ｔ細胞によるリンホカイン産生をシクロスポリンが強力に阻害すること によると考えられている。シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）はＩＦＮ−γおよび■Ｌ −２ｍＲＮＡの転写をインビトロで阻害することが示されている［クロック（Ｋ 　ｒｏｎｋｅ、　Ｍ、　）ら、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、 ８１．５２４１　（１９８４）；エリオツド（Ｅｌｌｉｏｔ）ら、Ｓ　ｃｉｅｎ ｃｅλ２６．１４３９　（１９８４）；グラネリービペルノ　（Ｇｒａｎｅｌｌ ｉ　−Ｐ　１ｐｅｒｎｏ）ら、Ｊ　、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、１６３．９２２　（ １９８６）］。幾つかの研究は、ツクロスボリンＡ（ＣｓＡ）治療を行うと腎移 植受容者のインターロイキン−２（１−２）およびＩＦＮ−γ産生が減少するこ とを示している。たとえば、ヨシムラら（Ｊ、Ｃ１１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、（ ＵＳＡ）　９．３２２〜３２８　（１９８９））は、ステロイドとともに投与し たＣｓＡが、腎移植受容者からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）がサイトカインを 生成する能力およびｍＲＮＡレベルでのその遺伝子発現に対してインビボで及ぼ す影響を調べた。彼らは、ＣｓＡとステロイドとの併用療法がＩＦＮ−γおよび ＩＬ−２の両方の遺伝子発現を抑制することを発見した。

第二の重要な免疫抑制剤のグループは、コルチコステロイド（グルココルチコイ ド、ＧＣＣ）のグループである。コルチコステロイドが免疫抑制作用を発揮する 最も重要な一般的細胞機構は、サイトカインなどの可溶性因子の産生および作用 に対するコルチコステロイドの効果であるように思われる［ギュイヤー（Ｇｕｙ ｒｅ）ら、「グルココルチコイドおよび免疫系：胸腺細胞におけるグルココルチ コイド−レセプター複合体の活性化：食細胞のＦｃレセプターの調節Ｊ　、ｐｒ ｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ａｐｐｌ ｉｃａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄｓ、　リー（k ｅｅ、Ｈ，Ｊ、）およびウォーカー（Ｗａｌｋｅｒ、　Ｃ，Ａ、　）編、ヘイデ ン＆サン（Ｈｅｙｄｅｎ＆５Ｏｎ）、フィラデルフィア、１４〜２７　（１９８ １）コ。ＩＦＮ−γの産生がグルココルチコイドによって阻止されるが［ギュイ ヤーら、Ｊ、５ｔｅｒｏｉｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍ、１４．３５〜３９　（１９８１ ）：ケルソ（Ｋｅｌｓｏ、　Ａ、　）およびムンク（Ｍｕｎｃｋ、　Ａ、　）　 、　Ｊ　、ｒ　ｍａ＋ｏｎ、二１３３、７８４〜７９１　（１９８４）　コ　、 　ＩＦＮ　−γによる単球活性化の幾つかのパラメーターは影響を受けないかま たは促進されることも報告されている［ジシール（Ｇｉｒａｒｄ）ら、Ｊ、Ｉｍ ｍｕｎ、１３８．３２３５〜３２４１　（１９８７）］。免免疫サすトカイの産 生および作用に対するゲルココ箪ｍ、３旦、８９〜９３　（１９８８）に記載さ れている。

要約すると、移植拒絶におけるリンホカインとりわけＩＦＮ−γの関与の正確な 機構については完全には理解されていないが、刊行された結果は、移植受容者に おける微生物感染を予防および治療するためにリンホカイン、たとえばＩＦＮ− γ療法を適用することに対して深刻な懸念を抱かせており、外来リンホカイン投 与の否定的効果の可能性は微生物感染の治療から得られる利益をはるかに凌駕し ていることを示唆しているように思われる。

発明の要約 本発明は、拒絶エピソードの頻度を有意に増加させることなく、適当な条件下で 移植受容者における微生物感染の予防および治療のためにリンホカイン、とりわ けＩＦＮ−γを首尾よく用いることができるという予期しない発見に基づいてい る。本発明者らは、臨床条件下、移植後に移植受容者を低い［維持（ｍａｉｎｔ ｅｎａｎｃｅ）　Ｊ投与量のシクロスポリンを用いた長期処置に日常的に供した 場合に、移植組織の生存に対するＩＦＮ−γの潜在的な有害な効果を経験するこ とな（、■ＦＮ−γ投与によって微生物感染を首尾よく制御（予防または治療） することができることを見いだした。

一つの態様において、本発明は、移植拒絶の増大を引き起こすリンホカインの作 用は抑制されるがその抗菌活性は保持されるような条件下、移植後の移植受容者 に治療学的有効量の抗菌リンホカインを投与することを特徴とする、移植受容者 における微生物感染の予防または治療方法に関する。抗菌リンホカインは、たと えば、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２またはその組み合わせであってよい。抗菌リンホカ インは、移植後の維持免疫抑制療法に供されている移植受容者に投与するのが好 ましい。維持免疫抑制療法には、シクロスポリンおよび／またはステロイドなど の１または２以上の免疫抑制剤の投与が含まれるのが好ましい。

他の態様において、本発明は、移植後の維持免疫抑制療法に供されている移植受 容者に治療学的有効量のＩＦＮ−γを投与することを特徴とする、移植受容者に おける感染に伴う移植拒絶を防ぐ方法に関する。

「リンホカイン」なる語は、抗原またはレクチンによる活性化後にＴ細胞によっ て分泌されるタンパク質を含む、リンパ球細胞の可溶性生成物を記載するのに用 いる。リンホカインの例としては、インターフェロン−α、−βおよび一層（■ ＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ）、インターロイキン−２（Ｉ　Ｌ−２）　 、インターロイキン−３（ＩＬ−３）　、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、コ ロニー刺激因子（Ｃ３Ｆ−１、Ｃ３Ｆ−Ｇ、またはＣ３Ｆ−ＧＭ）などが挙げら れるが、これらに限られるものではない。「抗菌」活性なる語には、抗ウィルス 活性、抗細菌活性、抗寄生虫活性および抗真菌活性が含まれる。抗菌活性を有す るリンホカインの典型的な代表例は、Ｈ’Ｎ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、Ｉ Ｌ−２およびＴＮＦ−αである。抗菌活性は、確立されたインビトロおよびイン ビボモデルで試験することができる。典型的なインビトロモデルは単球または好 中球の活性化の試験に基づくものであり、実施例１に記載された酸化的バースト モデル（Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｂｕｒｓｔ　ｍｏｄｅｌ）を含む［クリフォード （Ｃ１ｉｆｆｏｒｄ、　Ｄ、　Ｐ、）　、レビン（Ｒｅｐｉｎｅ、　Ｊ、　Ｅ、 ）　、Ｍｅｔｈｏｄｓ、　ＥｎｚｙＩＩｌｏｌ、１５０．３９３　（１９８４） をも参照］。

リンホカイン、たとえばＩＦＮ−γなどのインターフェロンの抗ウィルス活性、 抗細菌活性、抗寄生虫活性および抗真菌活性を評価するのに適したインビボ動物 （たとえば、薩歯類および非ヒト霊長類）モデルもまた当該技術分野でよ（知ら れており、以下に記載するであろう。

本明細書において使用する「ガンマインターフェロン」、「インターフェロン− γ」またはｒｌＦＮ−γ」は、種々、感染に対する免疫応答を活性化し得るすべ ての形態の（ヒトおよび非ヒト動物）ガンマインターフェロンをいう。上記語は とりわけ、天然採取源から得たか、化学的に合成したか、または組換えＤＮＡ法 により製造したかにかかわらず、成熟、ｐｒｏＳｍｅｔまたはｄｅｓ　（１−３ ）（ｄｅｓＣｙｓＴｙｒＣｙｓ　ＩＦＮ−７とも呼ばれる）形態のＩＦＮ−７を 含む。

天然においては、ＴＦＮ−γの産生は、Ｔ細胞が感作された外来抗原によってＴ リンパ球において誘発される。ある種の条件下では、ナチュラルキラー（ＮＫ） リンパ球もまたＩＦＮ−γを産生する。ＩＦＮ−γの組換え製造はグレイ（にｒ ａｙ）、ゲラデル（Ｇｏｅｄｄｅｌ）および同僚によって報告されており［グレ イら、Ｎａ胆些λ旦旦、５０３〜５０８　（１９８２）］　、米国特許第４，７ ６２，７９１号、同第４．９２９．５４４号、同第４，７２７，１３８号および 同第４．９２５，７９３号の主題である。グレイおよびゲラデルの組換えＩＦＮ −γは、大腸菌中で産生されたものとして、１４６のアミノ酸からなり、該分子 のＮ末端部分は配列ｃｙｓＴｙｒＣｙｓで始まる。天然のＩＦＮ−γ（すなわち 、ヒト末梢血リンパ球のマイトジェン誘発およびその後の精製によって得られる もの）は、グレイら（上記）によって指定されたＣｙｓＴｙｒＣｙｓ　Ｎ末端を 欠いたポリペプチドであることが後にわかった。

ＩＦＮ−γを含む非ヒト動物インターフェロンは、たとえばＥＰ８８，６２２号 （１９８３年９月１４日公開）に記載されている。

「ガンマインターフェロン」、「インターフェロン−γ」またはｒｌＦＮ−γ」 なる語は、当該技術分野で知られているかまたは将来利用できるようになるであ ろうかにかかわらず、種々に糖付加された形態およびそのようなインターフェロ ンの他の変種および誘導体を包含する。そのような変種の例は、対立遺伝子、お よび残基が欠失、挿入および／または置換された部位特異的突然変異誘発の産物 である（たとえば、特許出願ＥＰ１４６．３５４号（１９８５年６月２６日公開 ）を参照）。

インターフェロン、とりわけＩＦＮ−γの抗ウィルス活性は、多くのインビトロ およびインビボモデルにおいて多数のウィルスに対して示されている。

がアフリカミドリザルの単純ヘルペス（Ｈ３）角膜炎を防ぐことを発見した。

ファン・デア・マイデ（Ｖａｎ　ｄｅｒ　Ｍｅｉｄｅ）らは（Ａｎｔｉｖｉｒａ ｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、補遺１．１９９　（１９８５））　、アカゲザルにおい てワクシニアウィルス感染に対するヒトＩＦＮ−α、−βおよび−７のインビボ 抗ウィルス作用を比較した。皮膚病変（丘疹およびブステルの出現および直径） の観察により感染をモニターした。その結果は、天然または組換えＨｕｌＦＮ− γで筋肉的処置したグループで病変重篤度の有意の減少を示した。

９８５））によって編心筋炎（ＥＭＣ）ウィルス感染のマウスモデルで評価され た。その結果は、ｒＭｕＩＦＮ−γがＥＭＣウィルス感染に対してマウスを保護 する能力を示した。同様の結果は、ジム（Ｓｉ間、１．Ｓ、）およびセルチ（Ｃ ｅｒｒｕｔｉ、Ｒ，Ｌ、）　（Ａｎｔｉｖｉｒａｌ　Ｒｅｓ、　ｆｌ、２０９　 （１９８７））によって報告された。

サイトメガロウィルス（ＭＣＭＶ）に感染する前にｒＭｕｌＦＮ−γで処置する とマウスモデルにおいて死亡率が有意に減少することが報告されている［フェニ −（Ｆｅｎｎｉｅ）ら、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ　Ｒ，ｅｓ、ｌ　Ｑ、２７　（１９ ８８）］。

別の研究では、単純ヘルペス２型（Ｈ３Ｖ−２）ウィルス、バンジ（Ｂａｎｚｉ ）フラビウイルス、ベネズエラウマ脳炎（ＶＥＲ）ウィルス、およびカラバルブ ンヤ（Ｃａｒａｐａｒｕ　ｂｕｎｙａ）ウィルスによる実験感染のマウスモデル におけるｒＭｕ免疫学的に障害を受けたラットおよび免疫抑制されたラットにお ける偽狂犬病ウィルス（ＰＲＶ）感染に対する組換えラットＩＦＮ−７（ｒＲａ 　ｔ　ＩＦＮ−γ）の有効性がンジンズ（Ｓ　ｃｈｉ　ｊ　１ｎｓ）ら（Ｊ　、 　Ｇ６ｎ、　Ｖｉｒｏｌ、旦旦、１９７９　（１９８８））によって示されてい る。

インターフェロンが抗ウィルス作用を発揮する機構は完全には理解されていない が、ウィルスを直接不活化するのではなく、ウィルス感受性細胞を介して間接的 に作用することがわかっている。インターフェロン（ＩＦＮ−γを含む）の広範 な抗ウイルス活性範囲は、複数の生化学経路を調節する能力によると考えられて おり、異なる抗ウィルス作用を有しウィルス複製サイクルの異なる部分に作用す る［ペスト力（Ｐｅ５ｔｋａ）ら、Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ、旦 旦、７２７　（１９８７）；サミュエル（Ｓａｍｕｅｌ、　Ｃ，Ｅ、　）　、Ｐ ｒｏｇ、　Ｎｕｃｌ、　Ａｃ１ｄ　Ｒｅｓ、　Ｍｏ１．　Ｂｉｏｌ、３５゜２７ 　（１９８８）；ヤコブセン（Ｊ　ａｃｏｂｓｅｎ、　Ｈ，）　、Ａｒｚｎｅｉ ｍ、　Ｆｏｒｓｃｈ、　Ｄｒｕｇ　Ｒ多くの研究はインターフェロンが細菌感染 を制御、とりわけ予防する能力を示している。

ｒＭｕｌＦＮ−γおよびｒＲａｔ　ＩＦＮ−γは、外科的に刺激された創傷感染 モデルおよび火傷創傷感染モデルを含む種々の模擬創傷細菌感染モデルにおいて 有効であることがわかった［バーシュマンら、Ｃ１１ｎ、　Ｅｘｐ、　Ｉ　ｍｍ ｕｎｏｌ、７２．４０６（１９８８）；バーシュマンら、Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　 Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　４．１６５（１９８８）：バーシュマンら、Ｊ、　 Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　Ｒｅ５８．３６７　（１９８８）］。

外傷に付随する敗血症の治療にＩＦＮ−γを使用することがバーシュマン（Ｈｅ ｒｓｈｍａｎ、　Ｍ、　Ｊ　、　）らによって報告されている（　Ｉｎｆｅｃｔ ｉｏｎ　ａｎｄ　Ｔ　＋ｎ＋ｎｕｎｉｔｙ　５６゜２４１２　（１９８８））。

ＩＦＮ−γは、感染の種々のインビトロおよびインビボモデルにおいて、たとウ レウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）　、クラミゾイア・ト ラコマチス（Ｃｌａｍｙｄｉあることが示された。

完全には理解されていないが、インターフェロン、たとえばＩＦＮ−γの作用機 構にはインターフェロン処理細胞に細菌が侵入する能力が減少することが含まれ ると思われる。

ＩＦＮ−γによって首尾よく制御（防御および／または治療）される寄生虫感染 には、レシュマニア・ドノバ＝　（Ｌｅｓｈｍａｎｉａ　ｄｏｎｏｖａｎｉ）感 染［たとえば、マレイ（Ｍｕｒｒａｙ）ら、Ｊ、Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、８ 旦、１２５３　（１９８９）を参照］ラム（Ｐ　１ａｓａ＋ｏｄｉｕｍ）感染モ デルにおけるマラリアが含まれる。

インビトロのデータは、免疫細胞（マクロファージ、好中球など）がＩＦＮ−γ とともにインキュベートすることによって他のクラスの微生物病原体と同じ位Ｃ Ｐ）の予防および治療におけるＩＦＮ−γの有効性を報告している。

ＩＦＮ−γを含むインターフェロンの作用機構および臨床的応用に関する最近の 知見はバロン（Ｂａｒｏｎ）らによって要約されている（ＪＡＭＡ　２６６．１ ３７５　（１９９１））。

ＩＦＮ−γは宿主範囲が狭いことが知られているので、治療しようとする動物と 同種のＩＦＮ−γを用いるべきである。ヒト治療においては、たとえば米国特許 第４，７１７．１３８号およびその対応ＥＰ７７．６７０号（１９８３年４月２ ７日公開）に示されているｄｅｓＣｙｓＴｙｒＣｙｓ変種配列を用いるのが好ま しく、また翻訳後プロセシングで最後の４残基が欠失したＣ末端が欠けた変種を 任意に用いることができる。

「インターロイキン−２」またはｒｌＬ−２Ｊ　（最初はＴ細胞増殖因子と呼ば れた）は、モーガン（Ｍｏｒｇａｎ、　Ｄ、　Ａ、　）らによって最初に記載さ れた（　Ｓ　ｃｉｅｎｃｅ１９３．１００７　（１９７６）　）。ヒト末梢血リ ンパ球（ＰＢＬ）を培養することによるＩＬ−２の産生は、たとえば米国特許第 ４．４０１．７５６号に記載されている。ＩＬ−２の組換え産生は、たとえばタ ニグチ（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ）らＱＪａｔ竺主旦７．３０５　（１９８３））お よびデボス（Ｄｅｖｏｓ）ら（Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄイキノー２」またはｒ ｕｔ−２Ｊは、たとえば米国特許第４．５１８．５８４号に記載されているよう に、対立遺伝子および天然アミノ酸配列中の１または２以上のアミノ酸の置換、 挿入または欠失によって得られる変種を含む、一般に容認されたＩＬ−２アツセ イで生物学的に活性であることが知られているものとしてすべての形態の！Ｌ− ２に種々言及する。ＩＬ−２の抗菌活性は、たとえば、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ３ ５１０５１２４号（１９８５年１１月２１日公開）およびＷＯ３５１０３９４８ 号（１９８５年９月１２日公開）　、ＥＰ１４７，８１９号（１９８５年７月１ ０日公開）、ＥＰ１１８，６１７号（１９８４年９月１９日公開）、ＥＰ１１８ ．９７７号（１９８４年９月１９日公開）　、ＥＰ１３２，７５４号（１９８５ 年２月１３日公開）、ＥＰ９４．３１７号（１９８３年１１月１６日公開）およ び米国特許第４．４０７，９４５号および同第４，４７３，６４２号に記載され ている。

「腫瘍壊死因子−α」またはｒＴＮＦ−α」は、カーズウエル（Ｃａｒｓｖｅｌ ｌ）らによって最初に記載された（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃ ｉ、　ＵＳＡ　７２．３６６６（１９７５））、組換えＤＮＡ法によるＴＮＦ− ａの製造はペニカ（Ｐ　ｅｎｎｉｃａ）らによって報告されており（Ｎａｔｕｒ ｅ　３１２，７２４　（１９８４））　、たとえば、ＥＰ１６８，２１４号（１ ９８６年１月１５日公開）に開示されている。

リンホカインを用いた、とりわけＴＮＦ−α単独でまたはＩＬ−２もしくは■Ｆ Ｎ−γと組み合わせて用いた哺乳動物宿主での細菌感染の治療は、米国特許第４ ．８７９，１１１号に記載されている。

「免疫抑制」患者なる語は、日和見感染の危険にある宿主防御の損なわれた患者 を表示するのに用いる。移植患者においては、免疫抑制は、移植を成功させるの に避けることのできない免疫抑制療法の結果である。

「移植」および「移植組織」なる語は本明細書において最も広い意味で用い、肝 臓、心臓、腎臓、および異種および自己の骨髄移植／移植組織などの固体および 非固体の臓器および組織の移植および移植組織を包含する。

「免疫抑制療法」なる語は最も広い意味で用い、シクロスポリン、コルチコス　 −テロイド、細胞毒性免疫抑制剤、抗リンパ球グロブリンなどの免疫抑制性の薬 剤（「免疫抑制剤」とも呼ばれる）の投与を包含するが、放射線照射および関連 する化学療法をも包含する。特定の免疫抑制療法は移植組織の性質に依存する。

固体臓器移植組織の受容者における移植拒絶を防ぐのに用いる典型的な免疫抑制 療法は、シクロスポリン、コルチコステロイドの使用、およびアザチオプリン、 シクロホスファミド、およびメトトレキセートなどの他の免疫抑制剤の使用であ る。骨髄移植受容者は、通常、移植前に広範な放射線照射および化学療法に供さ れる。

プレドニゾロンおよびデキサメタシンなどのコルチコステロイドは、最も全体的 な免疫抑制効果を有し、宿主防御系の殆どすべての側面を変え得ることが知られ ている。コルチコステロイドは、好中球、単球およびマクロファージの可動性、 吸着、食作用、および殺細菌作用を損ない、Ｔ−およびＢ−リンパ球の活性を抑 制し、インターフェロンおよび他のサイトカインの産生を減少させ、胃腸フロー ラを変化させる。コルチコステロイドの最大の効果は、白血球応答に対するもの である。ステロイド処置は、種々の細菌、ウィルス、真菌または寄生虫感染に対 する患者の感受性を大きく増大させ、潜在性の内因感染を活性化する。臨床実務 によれば、高投与量のステロイドは通常、約３週間までは充分に耐えられるが、 その期間を過ぎると種々のしばしば生命の危険を脅かす感染の発生率が実質的に 増加する。

シクロホスファミド、アザチオプリンおよびメトトレキセートを含むコルチコス テロイドと併用してしばしば用いられる免疫抑制剤はまた、宿主防御に欠陥をも たらし、感染性合併症の危険を増大させることが知られている。

「シクロスポリン」は、トリボフラジラム・インフラツム・グラムズ（工蛙ルｏ ｃｌａｄｉｕ謹ｉｎｆｌａｔｕｍ　Ｇｒａｍｓ）および他の不完全菌によって産 生される一層の生物学的に活性な代謝産物である。主要な成員であるシクロスポ リンＡおよびＣは、免疫抑制能を有する非極性の環状オリゴペプチドである。と りわけ、シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）は免疫抑制剤として臨床実務に広く用いら れている。合成シクロスポリン類似体、たとえばシクロスポリンＧ（ＣｓＧ）［ サントス（Ｓ　ａｎｄｏｚ。

Ｉｎｃ、）　；マッケンナ（ＭｃＫｅｎｎａ）ら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉ ｏｎ　（ＵＳＡ）　４ヱ、３４３〜３４８　（１９８９）参照］、（Ｎｖａｓｕ ｐ２）　−Ｃ８および（Ｖａｌｓｕｐ２）ＤＨ−Ｃ５［ヒースタンド（Ｈｉｅｓ ｔａｎｄ）ら、Ｔ　ｗｕｎｏｌｏｇｙ　５５．２４９〜２５５　（１９８５）］ もまた知られている。本明細書および請求の範囲で使用する「シクロスポリン」 なる語は、すべての天然に存在するシクロスポリン、および当該技術分野で知ら れているか今後製造されるかにかかわらずその合成類似体および誘導体を包含す るが、ただし本質的にシクロスポリンＡの免疫抑制能と同様の免疫抑制能を有す ることを条件とする。シクロスポリンは、その作用がコルチコステロイドに比べ て一層特異的であるという点で有利である。シクロスポリンの作用は、機能性の Ｂ細胞、単球、マクロファージ、好中球およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞に 直接作用することなく、Ｔ−リンパ球ヘルパー／インデューサーリンパ球亜集団 に特異的に向けられるように思われる。

放射線療法は（細胞毒性薬剤のように）、新たな免疫応答の発達を抑制するうえ で最大の効果を有する。処置を注意深（施せば放射線療法に直接帰することので きる感染は比較的稀ではあるが、全身放射線照射はしばしば顆粒球減少症を引き 起こす。

臨床経験によれば、種々の免疫抑制療法／剤の累積効果は、各処置単独の効果を はるかに上回る。

腎臓（心臓では幾つかの修飾を加えて）移植患者に用いる典型的な予防（手術前 および維持）免疫抑制プロトコールには、シクロスポリンＡ１アザチオブＩＪン およびコルチコステロイドの投与が含まれる。代表的なプロトコールに従えば、 シクロスポリンＡは１２ｍｇ／ｋｇの手術前投与量で経口投与されるが、最初の 手術後投与量は８ｍｇ／ｋｇであり、血液レベルで調節する。同じプロトコール に従い、アザチオプリンを３ｍｇ／ｋｇの手術前静脈内投与量で投与し、１．５ ｍｇ／ｋｇ／日の手術後投与量で投与するが、この投与量は白血球数（ＷＢＣ） が３，０００未満に下がったときには減少させる。ステロイドの１日当たりの投 与量は、０日目、１日目および２日目には２ｍｇ／ｋｇ／日であり、徐々１こ約 ０゜１５ｍｇ／ｋｇ／日に減らしていくが、この投与量は一般に１２０日目ハモ の前後で達成される。

ある状況においては、抗リンパ球製剤（たとえば、抗ＣＤ３　［０ＫＴ３］　、 抗ＣＤ４　［０に７４］　、抗ＣＤ８、抗ＣＤ１１ａ、ｆｌｂまたは１１ｃ、抗 ＣＤＩ訳抗リンパ球グロブリン、抗ＩＬ−２レセプター）を移植直後に患者に投 与する。このことによってシクロスポリン投与の中止が可能となり、また何人か の専門家は移植組織の部分的な寛容が引き起こされると信じている。この状況で は、感染、とりわけサイトメガロウィルス（ＣＭＶ）およびエプスタイン−バー ウィルス（Ｅ−Ｂ）に付随するリンパ増殖症候群の危険が非常に高い。

移植組織の拒絶が生検、臨床診断（ｃｉｉｎｉｃａｌ　ｉｍｐｒｅｓｓｉｏｎ） または当該技術分野で知られた他の診断法によって診断されたら、抗拒絶療法を 開始する。これには、高投与量のステロイドの投与、抗リンパ球療法またはそれ らの併用が含まれる。たとえば、腎移植受容者は一般に、穏やかな拒絶が診断さ れたときは、４日間、５００ｍｇ／ｋｇ／日の静脈内投与量のソルメドロール（ Ｓ　ｏｌｕｍｅｄｒｏｌ）　（メチルプレドニゾロン２１−スクシネートナトリ ウム塩、アップジョン）で処置される。拒絶が中位または重篤である場合は、抗 ＣＤ３　［０ＫＴ３］マウスモノクローナル抗体（オルトクローン（Ｏｒｔｈｏ ｃｌｏｎｅ）　）を、たとえば５ｍｇ／日静脈内投与量にて約１０〜１４日間投 与することができる。

上記予防および抗拒絶プロトコールは多くの移植センターで典型的なものである が、プログラム原理、移植した臓器の種類および患者の状態によって大きく変わ ってよい。たとえば、シクロスポリンの維持投与量は約１〜約２０ｍｇ／ｋｇ／ 日の範囲であってよい。肝臓および心臓移植に必要とされる投与量は、通常、腎 臓および骨髄移植に必要とされるものよりも高い。移植患者における微生物感染 の予防および治療のためのリンホカイン、とりわけＩＦＮ−γの使用は、臨床実 務において用いられるいかなる予防および抗拒絶プロトコールとも併用できるこ とが考えられる。抗リンパ球予防処置を受けずシクロスポリンおよび高投与量の ステロイドを投与されている移植患者においては、リンホカイン（ＩＦＮ−γ） の投与は一般に移植時に開始すべきであり、その後一般に約４０日まで持続すべ きである。予防抗リンパ球療法を受けている患者においては、リンホカイン（た とえば、ＩＦＮ−γ）の投与は一般に移植の時点で開始することができ、抗リン パ球療法を終了してから約７〜２１日間続けることができる。患者のモニタリン グが拒絶が起こっていることを示唆している場合には、リンホカイン（ＩＦＮ− γ）の投与は通常の免疫抑制療法（たとえば、高投与量のステロイド）と平行し て開始することができ、損なわれた免疫応答に伴う感染を防ぐために少なくとも 約２週間持続すべきである。

ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２などのリンホカイン並びにシクロスポリンなどの免疫抑制 剤は、通常、適当な薬理学的に許容し得るビヒクルおよび任意に他の薬理学的に 許容し得る添加物とともに有効量の活性成分を含む医薬組成物の形態で投与する 。

「医薬組成物」なる語は、活性成分の生物学的活性が明確に有効となるような形 態にあり、かつ該組成物を投与した患者に対して毒性の添加成分を含有しない調 製物をいう。そのような医薬組成物は、当該技術分野で公知の方法により剤型に 調製および調合することができる：たとえば、レミングトンのファーマシューテ イカルサイエンス（Ｒｅｓｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　 ５ｃｉｅｎｃｅｓ）　、マッグ・パブリッシング・カンパニー、イーストン、ペ ンシルベニア、１５版、１９７５を参照。

「薬理学的に許容し得る」賦形剤（ビヒクル、添加物）は、使用した有効量の活 性成分を提供するために目的哺乳動物に妥当に投与することのできるものである 。典型的なビヒクルとしては、食塩水、デキストロース溶液、リンガ−液などが 挙げられるが、非水性ビヒクルを用いることもできる。

リンホカインは、ヒトなどの目的哺乳動物に、皮下および非経口投与を含む、そ のような薬剤を投与するための容認されたあらゆる投与様式により投与すること ができる。非経口投与の例としては、静脈内、肺内、動脈内、筋肉内、および膣 腔的投与が挙げられる。実際の投与経路は、感染開始後に投与を開始する場合に は治療すべき感染の性質を含む、多数の考慮すべき事柄に依存するであろう。

通常は皮下または静脈内投与が好ましいが、肺にニューモシスチス・カリニ）感 染の治療のためには肺内投与が最も適している。

非経口投与のためには、リンホカインを一般に単位投与量の注射可能な（たとえ ば、溶液、懸濁液、乳濁液）形態に調合する。

ＩＦＮ−γの調合物は液体であるのが好ましく、通常は生理食塩水またはデキス トロース溶液であり、通常の安定化剤および／または賦形剤を一緒に用いる。

ＩＦＮ−γ組成物はまた、凍結乾燥した粉末として提供される。典型的な調合物 には１．０または０．２ｍｇ／ｍｌの■ＦＮ−ｙ　（２０Ｘ１０＠単位）　、０ ．２７ｍｇ／ｍｌコハク酸、およびコハク酸二ナトリウム６水和物０．７３がｐ Ｈ５．０で含有されていてよい。非凍結乾燥ＩＦＮ−γを含む好ましい液体調合 物はＰＣＴ　ＷＯ３９／４１７７　（１９８９年５月１８日公開）に開示されて いる。そのような液体調合物は約４．０〜６．０のｐＨを有し、安定化剤および 非イオン界面活性剤を含む。肺内送達のためには、ｒＦＮ−γを一般に治療学的 有効量で含有する分散剤として投与する。分散剤は、好ましくはアエロゾル調合 の形態であり、粒子の約１５％以上が約０．５μｍ〜約４μｍの粒子サイズを有 する（ＥＰ２５７，９５６号（１９８８年２月３日公開）を参照）。

ＩＦＮ−γは、感染を治療するのに必要な限りにおいて、約０．０１〜約０．１ ｍｇ／ｍ”／日の投与量にて本発明に従って皮下投与するのが好ましい。投与回 数は感染の性質、および患者の状態に依存して変わり、毎日から一週間に１回の 間が好ましい。

薬理学的に許容し得る水性ビヒクル中に再構成するのに適したＩＬ−２含有医薬 組成物は、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ３５１０４３２８号に開示されている。

薬理学的な意味において、本発明の文脈において、ＩＦＮ−γおよび／またはＩ Ｌ−２などのリンホカインの「有効量」とは、微生物感染を制御するのに有効な 量をいう。この文脈において、「制御」なる語は、そのような感染の予防および 治療の両方を包含するものとして用いる。従って、ＩＦＮ−γは予防的に（すな わち、感染が出現する前に）、または治療的に（すなわち、感染の出現後に）投 与することができ、予防適用するのが好ましい。

患者の状態を考慮した正確な投与量および所望の回数の決定は、当業者には充分 に自明のことである。免疫学的に有効な投与量は、一般にマルイッシュ（Ｍａｌ て特定の適用に対して決定される。

「微生物感染」なる語およびその文法的言い換えは、リンホカイン、たとえばＩ ＦＮ−γまたはＩＬ−２によって制御し得る移植患者に生じるあらゆる感染を言 及するものとして用いる。そのような微生物感染は、免疫抑制剤を用いた治療に よる移植受容者の抑圧された免疫に由来し、またＡＩＤＳ患者などの他の免疫欠 損宿主に一般的な日和見感染である［ゴツトリープ（Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）ら、Δ ｎｎ．　１ｎｔｅｒｎ．　Ｍｅｄ，　９　９、２０８　（１９８３）；ペリチお よびマッグエイ、Ｃ　Ｌｉｎ１ｃａｌＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ　Ｆ３、１００ 　（１９８５）］　。免疫欠損患者において感染性合併症を頻繁に引き起こす日 和見病原体は、スタフィロコッカス・アウレウス（旦胆辿ｙ１．ｏｃａｃｃｕｓ 　ａｕｒｅｕｓ）　、ストレプトコッカス（　Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）　 、シュードモナス・アエルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎ ｏｓａ）　、エシェリキア・コリ（　Ｅ　５ｃｈｅｒｉｃーモフイラ（Ｌｅｇｉ ｏｎｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）　、サルモネラ（　Ｓ　ａｌｍｏｎｅ ｌｌａ）種、アエム・チューバーキュローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　 ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）などの細菌：力ｕｓ　ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）　、 ヒストプラズマ・カブスラツム（ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ　ｃａｐｓｕｌａｔｕ ｍ）などの真菌：単純ヘルペス、帯状ヘルペス、サイトメガロウィルス（ＣＭＶ ）、エプスタイン−バー（Ｅ−Ｂ）ウィルス、Ｂ型肝炎ウィルスなどのウィルス ；トキソプラズマ９ゴンジ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ　ｇｏｎｄ其）　、ストロン ジロイデス・ステルコチおよびマッグエイ、「免疫欠損患者における感染Ｊ　、 Ｃｌ１ｎ．Ｔｈｅｒ．　８、１００〜１１７（１９８５）およびホー（Ｈａ，Ｍ ．）、ｒ免疫抑制患者におけるヒトサイトメガロウィルス感染」、サイトメガロ ウィルス：生物学および感染、１７１〜２０４、プレナムプレス、ニューヨーク 、（１９８２）］。そのような感染の一般的な臨床的表示は、ニューモシスチス ・カリニまたはレジオネラ種によって引き起こされた肺炎の出現である；しかし ながら、上記に掲げたまたは別に知本発明に従ってＩＦＮ−γで予防または治療 することができる。

免疫欠損移植受容者における微生物感染の治療の場合のＩＦＮ−γの潜在能は、 免疫応答に対する強い作用に加えて、ｒＦＮ−γがＡＩＤＳ患者からの単球およ びマクロファージの食作用、酸化能、化学走性および微生物能（ｓｉｃｒｏｂｉ ａｌ　ｃａｐａｃｉｔｙ）をインビトロで高めるという報告によって支持されて いる［マレイら、Ｎ２Ｅｎｇ１．Ｊ．Ｍｅｄ．　３上旦、８８３　（１９８４） ］。

上記で掲げたおよび別の微生物感染の幾つかはまた、移植の外科的外傷に直接付 随している。そのような外傷に付随する感染としては、一般に、スタフィロコツ 菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ）などのグラム陽性菌；およびエシェリキア・コリ （　Ｅ　５ｃｈｅｒｉｃｈｉａ　５迎■）〜シュードモナス（　Ｐ　ｓｅｏｄｏ ｍｏｎａｓ）種、クレブシェラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種、プロテウス（　Ｐ 　ｒｏｔｅｕｓ）種、エンテロバクタ−・クロアカニ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅ よって引き起こされる細菌感染が挙げられる［アルゴワ−（Ａｌｌｇｏｖｅｒ） ら、Ｓｕｒｇ，　Ｃｌ１ｎ．　Ｎ．　Ａｍ．　乱立、１３３　〜１４４　（１９ ８０）］。

リンホカイン、およびとりわけＩＦＮ−γは、互いにおよび移植患者に用いる他 の抗菌剤または治療剤とともに投与することができる。いっしょに投与すること には、同時投与または連続投与が含まれる。好気性細菌７０ーラの抑制にもかか わらずコロニー形成耐性を保持する経口抗菌剤としては、たとえば、コトリモキ サゾール（ｃｏ−ｔｒｉｗｏｘａｚｏｌｅ）　、ナリジキシン酸、オキソリン酸 、ピペミド酸、フラマイセチン、ポリミキシンＢ、コリスチン、ナイスクチン、 アムホテリシンＢ、クロトリマゾール、ミコナゾール、ケトコナゾールが挙げら れる。コトリモキサゾールを用いた予防は、たとえば、ニューモシスチス・カリ ニ肺炎を患う高い危険性を有する患者における標準手順となっている［ラッス（ Ｒｕｓｓｅ）ら、ＪユＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂ、　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、８．８７ 　（１９８１）］、コロニー形形成性を減少させる経口抗菌剤としては、たとえ ばアミノグリコシダーゼ抗生物質、たとえばネオマイシン、バシトラシン、カナ マイシン、ベカナマイシン、リボスタマイシン、ジベカシン、トブラマイシン、 アミカシン、ゲンタミシン、シソマイシン、ネオマイシン、バシトラシン、バン コマイシンが挙げられる。アミノグリコシダーゼ抗生物質は、通常、ベーターラ クタム（ペニシリンおよび／またはセファロスポリン）抗生物質とともに投与さ れる。ペニシリン抗生物質としては、ペニシリン、カルベニシリン、アンピシリ ン、アンピシリン、メチシリン、オキサシリン、クロキサシリン、ジクロキサシ リン、ナフタジン、チェナマイシン、ピペラジリン、アンピシリン、メズロシリ ンなどが挙げられる。セファロスポリン抗生物質としては、たとえば、セファレ キシン、セフラジン、セファクロール、セファドロキシル、セファトリジン、セ フアバロール、セファロジン、セファロチン、セファロリジン、セファロジン、 セフオニシト、セファメタゾールなどが挙げられる。本発明における抗菌療法は 、そのような公知の抗菌剤のいずれかと、さらに移植患者の治療に通常用いられ る治療と組み合わせて行うことができる。それらの詳細については、ペリチおよ びマッツェイ、上記、およびクッシング（Ｃｕｓｈｉｎｇ）　Ｎ　Ｓｕｒｇ、Ｃ Ｈｎ、Ｎ、Ａｍ、５ヱ、１６５　（１９７７）を参照。

本発明を以下の実施例でさらに詳しく詳細するが、本発明はこれらに限られるも のではない。

ズ・リバー・ラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏ ｒｉｅｓ）　（ポーテイッジ、ミシガン州）より入手した。

移植手順　すべてのラットを１０％フェノパルビタールナトリウム溶液で麻酔し た。ルイス株ラットに筋肉内経路でそれぞれ１ｍｇのゲンタマイシンを与えた。

ＡＣラットに静脈内でヘパリン１００単位を与えた。心臓をＡＣラットから取り 出し、４℃にて食塩水を大動脈に流し、水冷食塩溶液中に置いた。ルイスラット の腹部へのＡＣラット心臓の置所的移植をオン（Ｏｎｏ）およびリンゼイ（Ｌ　 １ｎｄｓｅｙ）の技術［Ｊ　、Ｔ　ｈｏｒａｃ、　Ｃａｒｄｉｏ、　Ｓ　ｕｒｇ 、５ヱ、１５　（１９６９）］に従って行った。標準的な回復手順を用い、動物 の触知可能な鼓動を毎日調べた。拒絶は、鼓動が触知可能な最後の日に完全であ ると考えられた。拒絶の次の日、または拒絶が起こらなかった場合は移植を行っ た日から２０日後または４５日後に動物を屠殺した。右心室および左心室の中央 部の横断切片をヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。心臓移植拒絶の等緩 行けの経験豊富で実験プロトコールに対して完全にブラインドした病理学者によ り、スライドを調べ、テキサスハートインスチチュート（Ｔｅｘａｓ　Ｈｅａｒ ｔ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ）拒絶スケール［マツカリスター（ＭｃＡｌｌｉｓｔｅ ｒ）ら、Ｔｅｘａｓ　Ｈｅａｒｔ　Ｉ　ｎｓｔ、　Ｊ　、　１３．１　（１９８ ６）］を用いて組織拒絶スコアを０〜１０に割り当てた。

シクロスポリン処置　すべての移植ラットに２０ｍｇ／ｋｇ／日の投与量を移植 の日並びに移植後１日目および２日目に与えた。この投与量は、心臓移植組織が 移植後４５日目に拒絶されるように拒絶を制御する［バーシュマン（Ｈｅｒｓｈ ｍａｎ）ら、Ｉ　ｎｆｅｃ、　Ｉ　ｍｍｕｎ、５６．２４１２　（１９８８）； およびクリフォード（Ｃ１ｉｆｆｏｒｄ、　Ｄ、　Ｐ、　）　＆レビン（Ｒｅｐ ｉｎｅ、　Ｊ、　Ｅ、）　、Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｓｏｌ、１０５゜３９３ 　（１９８４）］。何匹かの移植ラットには、移植後３日目に開始し実験の間続 けるガバーシュ食事補給によって８ｍｇ／ｋｇ／日の「維持」シクロスポリン処 置をさらに与えた。

ＩＦＮ−γ処置　組換えラットＩＦＮ−γをアムゲン・バイオロジカルズ（Ａ＋ ａｇｅｎ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）　（サウザンドオークス、カリフォルニア 州）から購入し、４Ｘ１０”単位／ｍｇタンパク質の比活性を有していた。ＩＦ Ｎ−γのラットへの投与は、それぞれ個々の実験に記載したようにして行った。

酸化的バースト（ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｂｕｒｓｔ）の測定　１１１９単離手段 （シグマ・ケミカル・カンパニー　（Ｓｉｇｓａ　Ｃｈｅ＋５ｉｃａｌ　Ｃｏｍ ｐａｎｙ）　、セントルイス、ミズーリ州）を用いた密度遠心分離により、ラッ トの全血がら好中球を分離した。Ｆ−ＭｅｔＬｅｕ−Ｐｈｅ　（ＦＭＬＰ）を用 いて呼吸バースト（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｂｕｒｓｔ）を引き起こさせ、ス ーパーオキサイドの産生を蛍光測定法により測定した［クリフォードら、Ｍｅｔ ｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ、１０５．３９３　（１９８４）］。

統計的分析　各グループの試料サイズが同じである場合は、スチューデントを検 定を用いてデータの分析を行った。試料サイズが異なる場合は、ベーレンスーフ イッシ＋　−（Ｂｅｈｒｅｎｓ−Ｆｉｓｈｅｒ）　を統計学およびウェルシュ（ Ｗｅｌｓｈ）　ｄ　ｆ相関を用いてデータの分析を行った。

すべての実験をナショナル・ソサイエティ・フォア・メディカル・リサーチ（Ｎ ａｔｉｏｎａｌ　５ｏｃｉｅｔｙ　ｆｏｒ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ ）によって定式化された「ブリンシブルズ・オン・ラボラトリ−・アニマル・ケ ア（ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌ　Ｃａｒ ｅ）　Ｊに従って行った。すべての動物を獣医の直接監督下、ＮＩＨガイドライ ン下でＡＡＡＬＡＣ施設に収容した。

■、心臓移植の拒絶に対するＩＦＮ−γの効果ルイス株被植ラットに移植の日お よび移植後２日間、２０ｍｇ／ｋｇ／日のシクロスポリンを与えた。ＡＣＣクラ ット心臓を各被植ラットの腹部に移植した。

コントロール群のラットにはさらに処置を施さなかった。上記のようにして投与 した２０ｍｇ／ｋｇ／日投与量のシクロスポリンは、移植後４５日目に心臓が拒 絶されるように拒絶を制御することが知られている（バーシュマンら、上記）。

実験ラットにそれぞれ７５０単位のＩＦＮ−γを筋肉内経路で移植の日およびさ らに３日間与えた。表１に示す結果は、ＩＦＮ−γで処置したラットがコントロ ールに比べてはるかに拒絶が促進されることを示している。

表１ ラットによる心臓移植に対するＩＦＮ−γ処置の効果処置　Ｎ　拒絶までの平均 口　Ｐ コントロール　１０　４４．７　− ７５０Ｕ　ＩＦＮ−γ　５　１１．０　＜０．０５（第三のグループにおいて、 ツクロスポリンを与えないルイス株被植ラットで移植を行い、上記のようにして ＩＦＮ−γを投与した。このグループは、早期の拒絶のため評価することができ なかった。）Ａ、移植した心臓の拒絶に対する維持投与量のシクロスポリンの効 果ルイス株被植ラットのそれぞれに、２０ｍｇ／ｋｇ／日のシクロスポリンを移 植の日並びに移植後２日間与えた。これらラットにさらに、移植後３日目に開始 し実験の間継続する８ｍｇ／ｋｇ／日の「維持」投与量のシクロスポリンを与え た。ラット群を移植後２０日目および４５日目に屠殺した。表２に示すように、 移植後２０日目および４５日目において組織平均拒絶スコアに差異は認められな 移植した心臓の拒絶に対する「維持」シクロスポリンの効果屠殺の時期　Ｎ　平 均拒絶スコア　Ｐ 移植後２０日月　１０　１．０　− 移移植後４口 ＮＳ＝有意でない Ｂ、ＩＦＮ−γによって促進された心臓移植の拒絶に対する維持シクロスポリン の効果 すべてのラットに、移植の日に開始しさらに２日間継続する２０ｍｇ／ｋｇ／日 シクロスポリンを与えた。これらラットにはまた、移植後３日目に開始し屠殺ま で継続する８ｍｇ／ｋｇ／日のシクロスポリンの「維持」投与量を与えた。実験 ラットを、移植の日に開始しさらに３日間継続する７５０単位７日かまたは７５ ００単位／日のいずれかのＩＦＮ−γで筋肉内経路で処置した。移植した心臓は 実験の間を通じて完全な拒絶（鼓動の停止）を示さなかった、すなわち、心臓は 移植後４５日目まで拒絶されなかった。平均拒絶スコアは７５０単位投与量のＩ ＦＮ一γの場合にのみ２０日目に有意に増加したが、移植後４５日目では有意の 差異は認められなかった（表３）。

青旦 ＩＦＮ一ガンマによって促進された心臓移植の拒絶に対する「維持」シクロスポ リン処置の効果 １１１ｆ　ＭＲＳ（２０日目）　Ｎ　旦　ＮＲＳ（５日目）　Ｎ　旦なし　１． ０　１０　−　１．２　１０　−７５０ｔｌ　ＩＦＮ−７　３．０　１０　＜０ ．０５　１．５　５　ＮＳ７，５０００　ＩＦＮゴ　２、９　５ＮＳ　２．２　 ４ＮＳＭＲＳ＝心筋内生検についてのテキサス・ハート・インスティチュートス コア法を用いた平均拒絶スコア。グレード１〜３：穏やか：４〜６：中位：およ び７〜１０：重篤［マツ力リスターら、：　Ａ　ｓｙｓｔｅｍ　ｆｏｒ　ｇｒａ ｄｉｎｇ　ｃａｒｄｉａｃ　ａｌｌｏｇｒａｆｔｒｅｊｅｃｔｉｏｎ，　Ｔｅｘ ａｓ　Ｈｅａｒｔ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　Ｊ．　１３，　１　（１９　８　６） 　コ　。

ＮＳ＝有意でない。

ｒＶ，ＩＦＮ一γによって媒介されたＦＭＬＰによる好中球の酸化的バーストの 誘発に対する「維持」シクロスボリン処置の効果上記「維持」シクロスポリン管 理にあるルイスラットにＡＣラットからの心臓移植片を与えた。すべてのラット に、移植の日に開始しさらに２日間継続する２０ｍｇ／ｋｇ／日のンクロスボリ ンを与えた。ラットにはまた、移植後３日目に開始し動物を屠殺するまで継続す る８ｍｇ／ｋｇ／日シクロスポリンの「維持」投与量を与え、移植後４日後に屠 殺した。これらラットに、移植の日に開始しさらに３日間継続する７５．０００ 単位の高投与量のＩＦＮ−γを筋肉内経路で与えた。４日後にラットを屠殺し、 採血し、その好中球をＴＦＮ−γによって媒介されたＦＭＬＰ誘発酸化的バース トについて試験した。それぞれ２匹のラットを用いて２つの実験を行った。表４ に示すデータは、「維持」シクロスポリンが、ＩＦＮ−γによって媒介された好 中球によるスーパーオキサイドの産生を阻害しないことを示唆している。

青Ａ ＩＦＮ−γを与えた動物からの好中球のＦＭＬＰによって誘発された酸化的バー ストに対する「維持」シクロスボリン処置の効果ｉｌｌ　Ｎ　生成したスーパー オキサイド（ｎｍ／１０’細胞）コントロール　２（２つずつ）　０．６８７５ ．０００Ｕ　ＩＦＮ−７　２　（２つずつ）　３．７０■．検討 ＩＦＮ−γを用いてラットを異種心臓移植組織で処置すると、本研究においては 心臓の移植の度合いが増加することが示された。拒絶に要する期間は４４．７日 から１１日に減少した。このことは、移植の間に感染のためにＩＦＮ−γで処置 すると移植の結果に対して劇的に影響を及ぼすことを示唆している。促進された 拒絶は、ＩＦＮ−γ処厘によって組織適合抗原、とりわけクラス■組織適合抗原 の誘発が増加することによると思われる。しかしながら、ＩＦＮ一γは複数の免 疫制御活性を有するので、ＩＦＮ−γが他の未だ定められていない機構により拒 絶に影響を及ぼすことも可能である。ＩＦＮ−γが拒絶を促進する機構は、将来 の研究での確立が待たれる。

いずれにしても、本研究の結果は、移植患者においてＩＦＮ−７を使用すること に伴う潜在的な有害効果を回避することができることを示唆している。ほとんど の移植患者において長期間行われるように、研究の期間を通じて継続した低い「 維持」投与量のシクロスポリンを使用することにより、移植Ｃた心臓に対するＴ ＦＮ−γ処置の有害効果が廃棄される。それゆえ、移植した組織の拒絶を誘発す ることなく、移植した個体にＩＦＮ−γを全身経路で投与することが可能である 。このことは、移植した個体にＩＦＮ−γを局所経路（アエロゾル投与など）で 投与することをさらに一層魅力的にする。

シクロスボリンは全身的な免疫抑制薬であるので、ここで疑問が出てくる：もし も「維持」シクロスポリン処置がＩＦＮ−γによって誘発された促進された心臓 移植拒絶を廃棄するならば、それはまたＩＦＮ−γの有利な抗菌効果をも廃棄す るのであろうか？本研究の結果は、そうではないことを示唆している。「維持」 シクロスポリン療法は、ＩＦＮ−γを与えられた動物からの好中球の促進された ＦＭＬＰ誘発酸化的バーストを変化させなかった。好中球は感染と闘う主要な細 胞であるので、これら結果は、移植した個体の潜在的なＩＦＮ−γ処置の肯定的 な抗菌利益の少なくともある部分は「維持」シクロスポリン療法を用いても保持 されることを示唆している。

実施例２ マウス自己骨髄移植モデルにおけるＩＦＮ−γの効果このモデルでは、成体雄Ｃ ＢＡ／Ｊマウス（各２０〜２５ｇ）（ジャクソン・ラボラトリーズ（Ｊａｃｋｓ ｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）　、バーハーバー、メイン州）に９００ラド のＸ線照射を致死的に行う。ついで、これらマウスを同じ日に正常ＣＢＡ／ｊド ナーマウスの大腿骨および脛骨から得た約１×１０７骨髄細胞で再構築した。こ れらマウスを清浄な環境下、酸性水上で保持し、幾匹かは移植後少なくとも２〜 ３週間生存する。これらマウスに、骨髄移植の日に開始しさらに２日間継続する ２Ｑｍｇ／ｋｇ／日シクロスポリンを与える。これらマウスにはまた、移植の３ 日目に開始し屠殺まで継続する８ｍｇ／ｋｇ／日の「維持」投与量のシクロスポ リンも与える。実験マウスを、組換えＩＦＮ一γ（ジエネンテツク、サウスサン フランシスコ、カリフォルニア州より寄贈）の７５０単位／日かまたは７５００ 単位／日のいずれかで処置する。このＩＦＮ−γの比活性は約２．３Ｘ１０７単 位／ｍｇタンパク質であり、ＲＰＭＩ−１６４０培地（ギブコ・ラボラトリーズ ，グランドアイランド、ニューヨーク州）で希釈し、骨髄移植の日に開始しさら に３日間筋肉内経路で投与する。実験の一方のセットにおいて、マウスの生存は ３週間以上であると決定される。末梢全血球計算を規則的に行って植え付けの成 功を決定する。加えて、ＩＦＮ一γ処置群およびコントロール群の成員を週に１ 〜２回屠殺し、植え付けの成功について骨髄を調べる。動物が死亡した場合には 、感染の形跡を調べる。末梢血リンパ球におけるＩａ抗原発現を、移植の１日前 および移植後１、７および１４日目に特異的抗体染色およびフローサイトメトリ ーにより決定する。コントロール群と処置群との間の全血球計算および生存率の 比較は、自己骨髄移植の経過に対するＩＦＮ−γ処置の効果を示している。

故意に感染させた移植鰯歯類の生存率に影響を及ぼすＩＦＮ−７処置の能力を、 実施例１および２に記載した心臓同種移植および自己骨髄移植モデルにおいて調 べる。所定の長さの３一〇捩り綿縫合糸（３−Ｏ　ｔｗｉｓｔｅｄ　ｃｏｔｔｏ ｎ　ｓｕｔｕｒｅ）をトリプチケースダイズブロース（ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ　 ｓｏｙ　ｂｒｏｔｈ）　（Ｂ　Ｂ　Ｌ　・ミクロバイオロジカル・システムズ（ ＢＢＬ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｙｓｔｅｍｓ）　、：＋ッキーズ ビル、メリーランド州）中で一夜インキユベートし、クレブシエラ・ニューモニ アエ（莢膜２型）を接種する。移植ｉ＆３日目にフレンチアイ針（Ｆｒｅｎｃｈ 　ｅｙｅ　ｎｅｅｄｌｅ）に付けた所定の長さの縫合糸を無菌的に各薩歯類の右 太もも中に挿入し、皮下に埋もれたいずれかの端で皮膚と同じ高さで縫合糸を切 断する。各モデルにける一群の移植薩歯類を上記実施例１および２に記載したの と本質的に同様にしてＩＦＮ一γで処置する。他の群を希釈液で偽処置する。諺 歯類を２〜３週間モニターする。細菌血液培養を別の日に行う。非感染の移植醤 歯類は、移植手順の合併症が動物死亡の原因ではないことを保証するコントロー ルとして働く。ＩＦＮ−γ処置の効果を、増加した生存率によっておよび血液培 養液の分析によって決定する。

死亡したときに、すべての動物を肺炎、腹膜炎および心内膜炎の兆候について注 意深く観察しなから剖検を行う。

上記記載は、本発明の代表的な方法および組成物の詳細を明らかにするものであ る。本発明の一般的概念から離れることなく修飾および変更を施すことが可能で あり、そのような修飾も本発明の範囲に包含されることを理解すべきである。

、　ＰＣＴＡＩＳ　９２１０８４７９ フロントページの続き （７２）発明者　フレイン、ジョン・ビーアメリカ合衆国ケンタラキー４０２０ ７、ルイスビル、サイカモア・ウッズ・ドライブ６７１９番 （７２）発明者　スレイター、エイ、・デーピッドアメリカ合衆国ケンタラキー ４０２０７、ルイスビル、リバー・ヒル・ロード１４番 （７２）発明者　ソネンフェルド、ジェラルドアメリカ合衆国ケンタッキー４０ ２０５、ルイスビル、ブールバード・ナポレオン２１１０番

Claims (26)

【特許請求の範囲】
1. １．移植受容者における徴生物感染の予防または治療のための薬剤の製造におけ る抗菌リンホカインの使用。
2. ２．該微生物感染の少なくとも一つの原因生物が細菌、真菌、ウイルスまたは寄 生虫である請求項７に記載の使用。
3. ３．該受容者を移植後に維持免疫抑制療法に供する請求項１または２に記載の使 用。
4. ４．該抗菌リンホカインがインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）またはインター ロイキン−１（ＩＬ−２）またはその組み合わせであり、該維持免疫抑制療法が 手術後に１またはそれ以上の免疫抑制剤を投与することからなる請求項３に記載 の使用。
5. ５．該抗菌リンホカインがＩＦＮ−γである請求項４に記載の使用。
6. ６．該免疫抑制剤がシクロスポリンからなる請求項５に記載の使用。
7. ７．該シクロスポリンがシクロスポリンＡである請求項６に記載の使用。
8. ８．シクロスポリンＡを約１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重／日の手術後投与量で投与す る請求項７に記載の使用。
9. ９．ＩＦＮ−γが予防的投与のためのものである請求項５〜８のいずれかに記載 の使用。
10. １０．該ＩＦＮ−γが液体医薬組成物の形態で投与するためのものである請求項 ５〜８のいずれかに記載の使用。
11. １１．該液体医薬組成物が約４．０〜６．０のｐＨを有し、安定化剤および非イ オン界面活性剤を含有する請求項１０に記載の使用。
12. １２．該ＩＦＮ−γが、その治療学的有効量の分散液の肺内送達のためのもので ある請求項５〜８のいずれかに記載の使用。
13. １３．該ＩＦＮ−γがｄｅｓＣｙｓＴｙｒＣｙｓヒトＩＦＮ−γである請求項５ 、１０および１２のいずれかに記載の使用。
14. １４．該ＩＦＮ−γが最後の４つのＣ末端アミノ酸残基を欠失している請求項１ ３に記載の使用。
15. １５．移植後に維持免疫抑制療法に供された移植受容者における感染に伴う移植 拒絶を回避するための薬剤の製造におけるＩＦＮ−γの使用。
16. １６．移植受容者における徴生物感染の予防または治療方法であって、移植拒絶 の増加を引き起こす抗菌リンホカインの作用は抑制されるがその抗菌活性は保持 されるような条件下で該移植受容者に該リンホカインの治療学的有効量を移植後 に投与することを特徴とする方法。
17. １７．免疫系の細胞媒体成員を制動する該リンホカインの能力が抑制される請求 項１６に記載の方法。
18. １８．該リンホカインがインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）である請求項１６ に記載の方法。
19. １９．移植受容者が移植後に維持シクロスポリン免疫抑制療法に供される請求項 １８に記載の方法。
20. ２０．ＩＦＮ−γ投与を徴生物感染の開始前に開始する請求項１９に記載の方法 。
21. ２１．ＩＦＮ−γ投与を移植後約４０日以内に開始する請求項２０に記載の方法 。
22. ２２．生物学的応答修飾レベルのシクロスポリンを少なくともＩＦＮ−γ投与の 期間の間維持させる請求項２１に記載の方法。
23. ２３．ＩＦＮ−γ投与を徴生物感染の開始後に開始する請求項１９に記載の方法 。
24. ２４．ＩＦＮ−γの投与を約２週間維持する請求項２０または２３に記載の方法 。
25. ２５．移植受容者を拒絶エピソードの開始を示すパラメータまたは兆候について モニターする請求項１９に記載の方法。
26. ２６．該モニターが拒絶の開始を示したときにステロイドの投与を開始する請求 項２５に記載の方法。