JPH07324098A - インターロイキン６吸着材、及びペプチド類または生理学的に許容されるその塩類 - Google Patents
インターロイキン６吸着材、及びペプチド類または生理学的に許容されるその塩類Info
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- JPH07324098A JPH07324098A JP6117260A JP11726094A JPH07324098A JP H07324098 A JPH07324098 A JP H07324098A JP 6117260 A JP6117260 A JP 6117260A JP 11726094 A JP11726094 A JP 11726094A JP H07324098 A JPH07324098 A JP H07324098A
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
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- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 インターロイキン６に対して強い吸着能を有
するインターロイキン６吸着材を提供する。 【構成】 一般式（１）：Ｈ−Ａ−Ｘ （式中、Ａは２〜２１個のアミノ酸が結合したペプチド
のＮ末端から水素原子を１個除き、且つ該ペプチドのＣ
末端から水酸基を１個除いた２価の基を表し、Ｘは水酸
基またはカルボキシ保護基を表す。但し、Ａにおいて該
アミノ酸中の遊離のメルカプト基は、メルカプト保護基
で保護されていてもよい。）で示されるペプチド類また
は生理学的に許容されるその塩類、及び担体からなるイ
ンターロイキン６吸着材である。
するインターロイキン６吸着材を提供する。 【構成】 一般式（１）：Ｈ−Ａ−Ｘ （式中、Ａは２〜２１個のアミノ酸が結合したペプチド
のＮ末端から水素原子を１個除き、且つ該ペプチドのＣ
末端から水酸基を１個除いた２価の基を表し、Ｘは水酸
基またはカルボキシ保護基を表す。但し、Ａにおいて該
アミノ酸中の遊離のメルカプト基は、メルカプト保護基
で保護されていてもよい。）で示されるペプチド類また
は生理学的に許容されるその塩類、及び担体からなるイ
ンターロイキン６吸着材である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、インターロイキン６と
結合する能力を有するインターロイキン６吸着材、及び
新規なペプチド類または生理学的に許容されるその塩類
に関するものである。本発明のインターロイキン６吸着
材はインターロイキン６を強く吸着することができるの
で、インターロイキン６に由来する種々の疾患（例えば
自己免疫疾患等）の治療に有用である。
結合する能力を有するインターロイキン６吸着材、及び
新規なペプチド類または生理学的に許容されるその塩類
に関するものである。本発明のインターロイキン６吸着
材はインターロイキン６を強く吸着することができるの
で、インターロイキン６に由来する種々の疾患（例えば
自己免疫疾患等）の治療に有用である。
【０００２】
【従来の技術】Ｂ細胞の抗体産生を誘導するＢ細胞分化
因子（ＢＣＤＦ／ＢＳＦ2 ）に関するｃＤＮＡのクロー
ニングやアミノ酸配列の決定等がなされたことにより、
該Ｂ細胞分化因子は、これまで互いに異なる物質として
独立して研究されてきたインターフェロンβ2 （ＩＦＮ
β2 ）、ハイブリドーマ／プラズマサイトーマ増殖因子
（ＨＰＧＦ）、肝細胞刺激因子（ＨＳＦ）等と同一物質
であることが判明し、これらの物質を総称してインター
ロイキン６（以下、ＩＬ−６と略記する）と呼ぶ様にな
った。
因子（ＢＣＤＦ／ＢＳＦ2 ）に関するｃＤＮＡのクロー
ニングやアミノ酸配列の決定等がなされたことにより、
該Ｂ細胞分化因子は、これまで互いに異なる物質として
独立して研究されてきたインターフェロンβ2 （ＩＦＮ
β2 ）、ハイブリドーマ／プラズマサイトーマ増殖因子
（ＨＰＧＦ）、肝細胞刺激因子（ＨＳＦ）等と同一物質
であることが判明し、これらの物質を総称してインター
ロイキン６（以下、ＩＬ−６と略記する）と呼ぶ様にな
った。
【０００３】このＩＬ−６は、上述した様にＢ細胞分化
因子として抗体産生を増強させたり、また肝細胞刺激因
子として急性期タンパク質の合成を誘導する等、炎症や
感染に対する生体防御機構において極めて重要な機能を
担う重要なタンパク質であるが、その一方では、該ＩＬ
−６の過剰産生が原因と考えられる疾患も問題になって
いる。例えば、Medical Immunology、第１５巻、１９５
〜２０１頁（１９８８年）には、ＩＬ−６と自己免疫疾
患との関係が報告されている。また、現代化学増刊１８
「サイトカイン」免疫応答及び細胞の増殖・分化因子、
大沢利昭編、７１〜８５頁（１９９０年、出版：東京化
学同人）にはＩＬ−６が原因物質となって関与する疾患
として、慢性関節リュウマチ、心房内粘液腫、キャッス
ルマン病、ミエローマ、レンネルＴリンパ腫、メサンギ
ウム増殖性腎炎等の種々の自己免疫疾患が挙げられてい
る。これらの疾患では、体内に異常に産生されたＩＬ−
６が悪循環的にこれらの疾患を悪化させているので、何
らかの方法によってこのＩＬ−６を除去する必要があ
る。そのためにＩＬ−６を効率よく吸着する物質（ＩＬ
−６吸着ペプチド）の開発が進められており、例えば特
許国際公開ＷＯ ９０／０９３９６には、ＩＬ−６受容
体のペプチドフラグメントを用いたＩＬ−６吸着材が開
示されている。
因子として抗体産生を増強させたり、また肝細胞刺激因
子として急性期タンパク質の合成を誘導する等、炎症や
感染に対する生体防御機構において極めて重要な機能を
担う重要なタンパク質であるが、その一方では、該ＩＬ
−６の過剰産生が原因と考えられる疾患も問題になって
いる。例えば、Medical Immunology、第１５巻、１９５
〜２０１頁（１９８８年）には、ＩＬ−６と自己免疫疾
患との関係が報告されている。また、現代化学増刊１８
「サイトカイン」免疫応答及び細胞の増殖・分化因子、
大沢利昭編、７１〜８５頁（１９９０年、出版：東京化
学同人）にはＩＬ−６が原因物質となって関与する疾患
として、慢性関節リュウマチ、心房内粘液腫、キャッス
ルマン病、ミエローマ、レンネルＴリンパ腫、メサンギ
ウム増殖性腎炎等の種々の自己免疫疾患が挙げられてい
る。これらの疾患では、体内に異常に産生されたＩＬ−
６が悪循環的にこれらの疾患を悪化させているので、何
らかの方法によってこのＩＬ−６を除去する必要があ
る。そのためにＩＬ−６を効率よく吸着する物質（ＩＬ
−６吸着ペプチド）の開発が進められており、例えば特
許国際公開ＷＯ ９０／０９３９６には、ＩＬ−６受容
体のペプチドフラグメントを用いたＩＬ−６吸着材が開
示されている。
【０００４】しかしながら、上記公開公報で開示されて
いるペプチドは、全アミノ酸数が最低でも１４個を必要
とし、そのうち実施例で強い吸着能を有するペプチドと
して例示されているのは、いずれも全アミノ酸数が２０
個以上からなるペプチドである。この様にアミノ酸の数
が多いペプチドの合成は困難であり、実用的には、アミ
ノ酸の数がより少ないペプチドからなるＩＬ−６吸着材
が求められているが、未だその様な吸着材は得られてい
ない。
いるペプチドは、全アミノ酸数が最低でも１４個を必要
とし、そのうち実施例で強い吸着能を有するペプチドと
して例示されているのは、いずれも全アミノ酸数が２０
個以上からなるペプチドである。この様にアミノ酸の数
が多いペプチドの合成は困難であり、実用的には、アミ
ノ酸の数がより少ないペプチドからなるＩＬ−６吸着材
が求められているが、未だその様な吸着材は得られてい
ない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は上記の様な事
情に鑑みてなされたものであり、その第１の目的は、Ｉ
Ｌ−６に対して強い吸着能を有するＩＬ−６吸着材を提
供することにあり、その第２の目的は、アミノ酸数が比
較的少ないペプチドであっても同様の作用効果を有する
ＩＬ−６吸着材を提供することにある。
情に鑑みてなされたものであり、その第１の目的は、Ｉ
Ｌ−６に対して強い吸着能を有するＩＬ−６吸着材を提
供することにあり、その第２の目的は、アミノ酸数が比
較的少ないペプチドであっても同様の作用効果を有する
ＩＬ−６吸着材を提供することにある。
【０００６】更に、本発明の第３の目的は、新規なペプ
チド類または生理学的に許容されるその塩類を提供する
ことにある。
チド類または生理学的に許容されるその塩類を提供する
ことにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明のＩＬ−６吸着材
は、一般式（１）：Ｈ−Ａ−Ｘ （式中、Ａは２〜２１個のアミノ酸が結合したペプチド
のＮ末端から水素原子を１個除き、且つ該ペプチドのＣ
末端から水酸基を１個除いた２価の基を表し、Ｘは水酸
基またはカルボキシ保護基を表す。但し、Ａにおいて該
アミノ酸中の遊離のメルカプト基は、メルカプト保護基
で保護されていてもよい。）で示されるペプチド類また
は生理学的に許容されるその塩類、及び担体からなるこ
とに要旨を有するものである。
は、一般式（１）：Ｈ−Ａ−Ｘ （式中、Ａは２〜２１個のアミノ酸が結合したペプチド
のＮ末端から水素原子を１個除き、且つ該ペプチドのＣ
末端から水酸基を１個除いた２価の基を表し、Ｘは水酸
基またはカルボキシ保護基を表す。但し、Ａにおいて該
アミノ酸中の遊離のメルカプト基は、メルカプト保護基
で保護されていてもよい。）で示されるペプチド類また
は生理学的に許容されるその塩類、及び担体からなるこ
とに要旨を有するものである。
【０００８】好適な実施態様では、Ａは （i ）式（２）：-Lys-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-L
eu-Gln-Asp-Met-Thr-Thr-His-Leu-Ile-Leu-Arg- の全部、またはその一部を連続して含むものであるか、 （ii）式（７）：-Gly-Ile-Ser-Ala-Leu-Arg-Lys-Glu-T
hr-Cys-Asn-Lys-Ser-Asn-Met-Cys- を含むものであるか、 （iii ）式（８）：-Ala-Arg-Ala-Val-Gln-Met-Ser-Thr
-Lys-Val-Leu-Ile-Gln-Phe-Leu-Gln-Lys-Lys-Ala-Lys-A
sn- を含むものであるか、もしくは （iv）式（９）：-Pro-Thr-Thr-Asn-Ala-Ser-Leu-Leu-T
hr-Lys-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp- を含むものである。
eu-Gln-Asp-Met-Thr-Thr-His-Leu-Ile-Leu-Arg- の全部、またはその一部を連続して含むものであるか、 （ii）式（７）：-Gly-Ile-Ser-Ala-Leu-Arg-Lys-Glu-T
hr-Cys-Asn-Lys-Ser-Asn-Met-Cys- を含むものであるか、 （iii ）式（８）：-Ala-Arg-Ala-Val-Gln-Met-Ser-Thr
-Lys-Val-Leu-Ile-Gln-Phe-Leu-Gln-Lys-Lys-Ala-Lys-A
sn- を含むものであるか、もしくは （iv）式（９）：-Pro-Thr-Thr-Asn-Ala-Ser-Leu-Leu-T
hr-Lys-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp- を含むものである。
【０００９】Ａが上式（２）の一部を連続して含む２価
の基である場合における、より好適な実施態様として
は、下記式（３）〜式（６）で示されるペプチドが挙げ
られる。 式（３）：-Lys-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln
-Asp-Met-Thr-Thr-His- 式（４）：-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp
-Met-Thr-Thr-His- 式（５）：-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp
-Met-Thr-Thr-His-Leu-Ile-Leu-Arg- 式（６）：-Leu-Arg- 更に、上記の各インターロイキン６吸着材をカラムに充
填したものも本発明のインターロイキン６吸着材として
好適に用いられる。
の基である場合における、より好適な実施態様として
は、下記式（３）〜式（６）で示されるペプチドが挙げ
られる。 式（３）：-Lys-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln
-Asp-Met-Thr-Thr-His- 式（４）：-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp
-Met-Thr-Thr-His- 式（５）：-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp
-Met-Thr-Thr-His-Leu-Ile-Leu-Arg- 式（６）：-Leu-Arg- 更に、上記の各インターロイキン６吸着材をカラムに充
填したものも本発明のインターロイキン６吸着材として
好適に用いられる。
【００１０】更に、本発明のペプチド類または生理学的
に許容されるその塩類は、一般式（１）：Ｈ−Ａ−Ｘ （式中、Ａは以下の式（３）〜（５）及び式（７）〜
（９）のいずれかで示されるアミノ酸配列を含むペプチ
ドのＮ末端から水素原子を１個除き、且つ該ペプチドの
Ｃ末端から水酸基を１個除いた２価の基を表し、Ｘは水
酸基またはカルボキシ保護基を表す。但し、Ａにおいて
該アミノ酸中の遊離のメルカプト基は、メルカプト保護
基で保護されていてもよい。）で示されることに要旨を
有するものである。 式（３）：-Lys-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln
-Asp-Met-Thr-Thr-His- 式（４）：-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp
-Met-Thr-Thr-His- 式（５）：-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp
-Met-Thr-Thr-His-Leu-Ile-Leu-Arg- 式（７）：-Gly-Ile-Ser-Ala-Leu-Arg-Lys-Glu-Thr-Cys
-Asn-Lys-Ser-Asn-Met-Cys- 式（８）：-Ala-Arg-Ala-Val-Gln-Met-Ser-Thr-Lys-Val
-Leu-Ile-Gln-Phe-Leu-Gln-Lys-Lys-Ala-Lys-Asn- 式（９）：-Pro-Thr-Thr-Asn-Ala-Ser-Leu-Leu-Thr-Lys
-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp-
に許容されるその塩類は、一般式（１）：Ｈ−Ａ−Ｘ （式中、Ａは以下の式（３）〜（５）及び式（７）〜
（９）のいずれかで示されるアミノ酸配列を含むペプチ
ドのＮ末端から水素原子を１個除き、且つ該ペプチドの
Ｃ末端から水酸基を１個除いた２価の基を表し、Ｘは水
酸基またはカルボキシ保護基を表す。但し、Ａにおいて
該アミノ酸中の遊離のメルカプト基は、メルカプト保護
基で保護されていてもよい。）で示されることに要旨を
有するものである。 式（３）：-Lys-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln
-Asp-Met-Thr-Thr-His- 式（４）：-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp
-Met-Thr-Thr-His- 式（５）：-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp
-Met-Thr-Thr-His-Leu-Ile-Leu-Arg- 式（７）：-Gly-Ile-Ser-Ala-Leu-Arg-Lys-Glu-Thr-Cys
-Asn-Lys-Ser-Asn-Met-Cys- 式（８）：-Ala-Arg-Ala-Val-Gln-Met-Ser-Thr-Lys-Val
-Leu-Ile-Gln-Phe-Leu-Gln-Lys-Lys-Ala-Lys-Asn- 式（９）：-Pro-Thr-Thr-Asn-Ala-Ser-Leu-Leu-Thr-Lys
-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp-
【００１１】
【作用】本発明者等は、ＩＬ−６分子が４本のヘリック
スの束からなる特徴的な構造をとり得ることに着目し
て、ＩＬ−６と強く吸着することのできる、アミノ酸数
の少ないペプチド類を探索した。ＩＬ−６の立体構造に
ついては、ジャーナル・オブ・モレキュラー・リコグニ
ション（J. Mol. Rec.）第４巻、６３〜７５頁（１９９
１年）及びプロシーディング・ナショナル・アカデミー
・サイエンス Ｕ．Ｓ．Ａ．（Proc. Natl. Acad.Sci.US
A)第８８巻、８６４１〜４５頁（１９９１年）等にその
予測構造が記載されている。これらの報告によれば、Ｉ
Ｌ−６分子自身が分子内でお互いに強い相互関係を保持
していることが推測される。このことはＩＬ−６分子内
のある特定部位のペプチドフラグメントはＩＬ−６の他
の部位と強く結合することを示唆するものである。そこ
で、本発明者等はこのＩＬ−６分子に対して強い吸着作
用を有すると考えられるペプチド類を合成し、これらペ
プチド類のＩＬ−６に対する吸着能を評価することによ
って本発明を完成させたのである。
スの束からなる特徴的な構造をとり得ることに着目し
て、ＩＬ−６と強く吸着することのできる、アミノ酸数
の少ないペプチド類を探索した。ＩＬ−６の立体構造に
ついては、ジャーナル・オブ・モレキュラー・リコグニ
ション（J. Mol. Rec.）第４巻、６３〜７５頁（１９９
１年）及びプロシーディング・ナショナル・アカデミー
・サイエンス Ｕ．Ｓ．Ａ．（Proc. Natl. Acad.Sci.US
A)第８８巻、８６４１〜４５頁（１９９１年）等にその
予測構造が記載されている。これらの報告によれば、Ｉ
Ｌ−６分子自身が分子内でお互いに強い相互関係を保持
していることが推測される。このことはＩＬ−６分子内
のある特定部位のペプチドフラグメントはＩＬ−６の他
の部位と強く結合することを示唆するものである。そこ
で、本発明者等はこのＩＬ−６分子に対して強い吸着作
用を有すると考えられるペプチド類を合成し、これらペ
プチド類のＩＬ−６に対する吸着能を評価することによ
って本発明を完成させたのである。
【００１２】なお、本明細書においてアミノ酸残基、保
護基、溶媒等を略号で表示する場合には、ＩＵＰＡＣ及
びＩＣＢの規定、もしくは当該分野における慣用の記号
に従うものとする。以下にそれらの例を挙げる。アミノ酸残基 ： Ａｌａ ：Ｌ−アラニン残基 Ａｒｇ ：Ｌ−アルギニン残基 Ａｓｎ ：Ｌ−アスパラギン残基 Ａｓｐ ：Ｌ−アスパラギン酸残基 Ｃｙｓ ：Ｌ−システイン残基 Ｇｌｎ ：Ｌ−グルタミン残基 Ｇｌｕ ：Ｌ−グルタミン酸残基 Ｇｌｙ ：グリシン残基 Ｈｉｓ ：Ｌ−ヒスチジン残基 Ｉｌｅ ：Ｌ−イソロイシン残基 Ｌｅｕ ：Ｌ−ロイシン残基 Ｌｙｓ ：Ｌ−リジン残基 Ｍｅｔ ：Ｌ−メチオニン残基 Ｐｈｅ ：Ｌ−フェニルアラニン残基 Ｐｒｏ ：Ｌ−プロリン残基 Ｓｅｒ ：Ｌ−セリン残基 Ｔｈｒ ：Ｌ−トレオニン残基 Ｔｒｐ ：Ｌ−トリプトファン残基 Ｔｙｒ ：Ｌ−チロシン残基 Ｖａｌ ：Ｌ−バリン残基
護基、溶媒等を略号で表示する場合には、ＩＵＰＡＣ及
びＩＣＢの規定、もしくは当該分野における慣用の記号
に従うものとする。以下にそれらの例を挙げる。アミノ酸残基 ： Ａｌａ ：Ｌ−アラニン残基 Ａｒｇ ：Ｌ−アルギニン残基 Ａｓｎ ：Ｌ−アスパラギン残基 Ａｓｐ ：Ｌ−アスパラギン酸残基 Ｃｙｓ ：Ｌ−システイン残基 Ｇｌｎ ：Ｌ−グルタミン残基 Ｇｌｕ ：Ｌ−グルタミン酸残基 Ｇｌｙ ：グリシン残基 Ｈｉｓ ：Ｌ−ヒスチジン残基 Ｉｌｅ ：Ｌ−イソロイシン残基 Ｌｅｕ ：Ｌ−ロイシン残基 Ｌｙｓ ：Ｌ−リジン残基 Ｍｅｔ ：Ｌ−メチオニン残基 Ｐｈｅ ：Ｌ−フェニルアラニン残基 Ｐｒｏ ：Ｌ−プロリン残基 Ｓｅｒ ：Ｌ−セリン残基 Ｔｈｒ ：Ｌ−トレオニン残基 Ｔｒｐ ：Ｌ−トリプトファン残基 Ｔｙｒ ：Ｌ−チロシン残基 Ｖａｌ ：Ｌ−バリン残基
【００１３】アミノ保護基： Ｂｏｃ ：ｔ−ブトキシカルボニル Ｃｌ−Ｚ：２−クロロベンジルオキシカルボニル Ｂｒ−Ｚ：２−ブロモベンジルオキシカルボニル Ｂｚｌ ：ベンジル Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメチルオキシカルボニル Ｍｂｈ ：４’−ジメトキシベンズヒドリル Ｍｔｒ ：４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベン
ゼンスルホニル Ｐｍｃ ：２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン
−６−スルホニル Ｔｒｔ ：トリチル Ｔｏｓ ：トシル Ｚ ：ベンジルオキシカルボニルメルカプト保護基 ： ｔＢｕ ：第三級ブチル Ａｃｍ ：アセトアミドメチル溶媒 ： ＤＣＭ ：塩化メチレン ＤＭＦ ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド ＮＭＰ ：Ｎ−メチルピロリドンその他 ： ＤＣＣ ：ジクロロヘキシルカルボジイミド ＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−Ｎ−エチルアミン ＨＯＢｔ：Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール ＴＢＴＵ：２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イ
ル）テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェー
ト ＴＦＡ ：トリフルオロ酢酸 また本明細書では、慣用の記載方法に従って、ペプチド
中のアミノ酸配列を、そのＮ末端のアミノ酸残基が左側
に位置し、Ｃ末端のアミノ酸残基が右側に位置するよう
に記述する。
ゼンスルホニル Ｐｍｃ ：２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン
−６−スルホニル Ｔｒｔ ：トリチル Ｔｏｓ ：トシル Ｚ ：ベンジルオキシカルボニルメルカプト保護基 ： ｔＢｕ ：第三級ブチル Ａｃｍ ：アセトアミドメチル溶媒 ： ＤＣＭ ：塩化メチレン ＤＭＦ ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド ＮＭＰ ：Ｎ−メチルピロリドンその他 ： ＤＣＣ ：ジクロロヘキシルカルボジイミド ＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−Ｎ−エチルアミン ＨＯＢｔ：Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール ＴＢＴＵ：２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イ
ル）テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェー
ト ＴＦＡ ：トリフルオロ酢酸 また本明細書では、慣用の記載方法に従って、ペプチド
中のアミノ酸配列を、そのＮ末端のアミノ酸残基が左側
に位置し、Ｃ末端のアミノ酸残基が右側に位置するよう
に記述する。
【００１４】本発明のＩＬ−６吸着材は、上記一般式
（１）：Ｈ−Ａ−Ｘで示されるペプチド類または生理学
的に許容されるその塩類（以下、これらを単にペプチド
類で代表する場合がある）、及び担体を含有するもので
ある。
（１）：Ｈ−Ａ−Ｘで示されるペプチド類または生理学
的に許容されるその塩類（以下、これらを単にペプチド
類で代表する場合がある）、及び担体を含有するもので
ある。
【００１５】上記一般式（１）において、Ｘは水酸基ま
たはカルボキシ保護基を意味する。上記カルボキシ保護
基としては、例えばアミノ基；メチルアミノ基またはエ
チルアミノ基等の、モノまたはジ（低級）アルキルアミ
ノ基；メトキシ基、エトキシ基等の低級アルコキシ基；
フェニルオキシ基、ナフチルオキシ基等のアリールオキ
シ基；ベンジルオキシ基等のアリール（低級）アルコキ
シ基；複素環（低級）アルコキシ基等が挙げられる。
たはカルボキシ保護基を意味する。上記カルボキシ保護
基としては、例えばアミノ基；メチルアミノ基またはエ
チルアミノ基等の、モノまたはジ（低級）アルキルアミ
ノ基；メトキシ基、エトキシ基等の低級アルコキシ基；
フェニルオキシ基、ナフチルオキシ基等のアリールオキ
シ基；ベンジルオキシ基等のアリール（低級）アルコキ
シ基；複素環（低級）アルコキシ基等が挙げられる。
【００１６】また、上記Ａ中に含まれるシステイン中の
メルカプト保護基としては、ベンジル基、ｐ−メトキシ
ベンジル基、トリチル基等の置換基を有してもよいアラ
ルキル基；アセトアミドメチル基、トリメチルアセトア
ミドメチル基などのアミドメチル基；３−ニトロ−２−
ピリジンスルフェニル基、ｔ−Ｂｕ基等が挙げられる。
メルカプト保護基としては、ベンジル基、ｐ−メトキシ
ベンジル基、トリチル基等の置換基を有してもよいアラ
ルキル基；アセトアミドメチル基、トリメチルアセトア
ミドメチル基などのアミドメチル基；３−ニトロ−２−
ピリジンスルフェニル基、ｔ−Ｂｕ基等が挙げられる。
【００１７】また、本発明の定義において用いられる
「その一部」とは、上記Ａで示されるアミノ酸配列の少
なくとも２個以上を連続して含むものであることが好ま
しい。
「その一部」とは、上記Ａで示されるアミノ酸配列の少
なくとも２個以上を連続して含むものであることが好ま
しい。
【００１８】上記一般式（１）で示されるペプチド類の
うち、Ａが上記式（３）〜（５）及び式（７）〜（９）
のいずれかで示される２価の基（但し、Ａにおいて該ア
ミノ酸中の遊離のメルカプト基は、メルカプト保護基で
保護されていてもよい。）で示されるペプチド類または
生理学的に許容されるその塩類は、本発明によって初め
て開示された新規なものである。
うち、Ａが上記式（３）〜（５）及び式（７）〜（９）
のいずれかで示される２価の基（但し、Ａにおいて該ア
ミノ酸中の遊離のメルカプト基は、メルカプト保護基で
保護されていてもよい。）で示されるペプチド類または
生理学的に許容されるその塩類は、本発明によって初め
て開示された新規なものである。
【００１９】上記一般式（１）：Ｈ−Ａ−Ｘで示される
ペプチドの最も好ましい例を以下に示す。 （ａ）Ａ＝上式（３）で示されるペプチド及びＸ＝ＮＨ
2 として H-Lys-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp-Met-
Thr-Thr-His-NH2 （ｂ）Ａ＝上式（４）で示されるペプチド及びＸ＝ＮＨ
2 として H-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp-Met-Thr-
Thr-His-NH2 （ｃ）Ａ＝上式（５）で示されるペプチド及びＸ＝ＮＨ
2 として H-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp-Met-Thr-
Thr-His-Leu-Ile-Leu-Arg-NH2 （ｄ）Ａ＝上式（６）で示されるペプチド及びＸ＝ＮＨ
2 として H-Leu-Arg-NH2 （ｅ）Ａ＝上式（７）で示されるペプチド及びＸ＝ＮＨ
2 として H-Gly-Ile-Ser-Ala-Leu-Arg-Lys-Glu-Thr-Cys(Acm)-Asn
-Lys-Ser-Asn-Met-Cys(Acm)-NH2 （ｆ）Ａ＝上式（８）で示されるペプチド及びＸ＝ＮＨ
2 として H-Ala-Arg-Ala-Val-Gln-Met-Ser-Thr-Lys-Val-Leu-Ile-
Gln-Phe-Leu-Gln-Lys-Lys-Ala-Lys-Asn-NH2 （ｇ）Ａ＝上式（９）で示されるペプチド及びＸ＝ＮＨ
2 として H-Pro-Thr-Thr-Asn-Ala-Ser-Leu-Leu-Thr-Lys-Leu-Gln-
Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp-NH2 なお、各ペプチド中のアミノ酸残基は、酸性アミノ酸、
塩基性アミノ酸等、アミノ酸の性状もしくは機能が同じ
アミノ酸（相同的なアミノ酸）に置換され得る。
ペプチドの最も好ましい例を以下に示す。 （ａ）Ａ＝上式（３）で示されるペプチド及びＸ＝ＮＨ
2 として H-Lys-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp-Met-
Thr-Thr-His-NH2 （ｂ）Ａ＝上式（４）で示されるペプチド及びＸ＝ＮＨ
2 として H-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp-Met-Thr-
Thr-His-NH2 （ｃ）Ａ＝上式（５）で示されるペプチド及びＸ＝ＮＨ
2 として H-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp-Met-Thr-
Thr-His-Leu-Ile-Leu-Arg-NH2 （ｄ）Ａ＝上式（６）で示されるペプチド及びＸ＝ＮＨ
2 として H-Leu-Arg-NH2 （ｅ）Ａ＝上式（７）で示されるペプチド及びＸ＝ＮＨ
2 として H-Gly-Ile-Ser-Ala-Leu-Arg-Lys-Glu-Thr-Cys(Acm)-Asn
-Lys-Ser-Asn-Met-Cys(Acm)-NH2 （ｆ）Ａ＝上式（８）で示されるペプチド及びＸ＝ＮＨ
2 として H-Ala-Arg-Ala-Val-Gln-Met-Ser-Thr-Lys-Val-Leu-Ile-
Gln-Phe-Leu-Gln-Lys-Lys-Ala-Lys-Asn-NH2 （ｇ）Ａ＝上式（９）で示されるペプチド及びＸ＝ＮＨ
2 として H-Pro-Thr-Thr-Asn-Ala-Ser-Leu-Leu-Thr-Lys-Leu-Gln-
Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp-NH2 なお、各ペプチド中のアミノ酸残基は、酸性アミノ酸、
塩基性アミノ酸等、アミノ酸の性状もしくは機能が同じ
アミノ酸（相同的なアミノ酸）に置換され得る。
【００２０】上記本発明において用いられるペプチド類
を合成するに当たっては、ペプチド合成において通常用
いられる方法、例えば固相合成法または液相合成法を用
いて調製することができる。具体的には例えば、「続医
薬品の開発 第１４巻ペプチド合成」監修 矢島治明（廣
川書店発行、１９９１年）に記載の方法に準じて行えば
よいが、液相合成法よりも固相合成法の方が操作の簡便
性という点で有利である。固相合成法としては例えば、
有機溶媒に不溶性である支持体に、合成しようとするペ
プチドのＣ末端に対応するアミノ酸を結合させ、α−カ
ルボキシル基以外のα−アミノ基等の官能基をｔ−ブト
キシカルボニル基等の保護基で保護した後、これら保護
された対応するアミノ酸をＮ末端方向に順次縮合反応に
より結合させ、該保護基を脱離させる反応を交互に繰り
返すことによりペプチド鎖を延長させる方法が用いられ
る。固相ペプチド合成法は、用いられる保護基の種類に
よりｔ−Ｂｏｃ法とＦｍｏｃ法とに大別される。
を合成するに当たっては、ペプチド合成において通常用
いられる方法、例えば固相合成法または液相合成法を用
いて調製することができる。具体的には例えば、「続医
薬品の開発 第１４巻ペプチド合成」監修 矢島治明（廣
川書店発行、１９９１年）に記載の方法に準じて行えば
よいが、液相合成法よりも固相合成法の方が操作の簡便
性という点で有利である。固相合成法としては例えば、
有機溶媒に不溶性である支持体に、合成しようとするペ
プチドのＣ末端に対応するアミノ酸を結合させ、α−カ
ルボキシル基以外のα−アミノ基等の官能基をｔ−ブト
キシカルボニル基等の保護基で保護した後、これら保護
された対応するアミノ酸をＮ末端方向に順次縮合反応に
より結合させ、該保護基を脱離させる反応を交互に繰り
返すことによりペプチド鎖を延長させる方法が用いられ
る。固相ペプチド合成法は、用いられる保護基の種類に
よりｔ−Ｂｏｃ法とＦｍｏｃ法とに大別される。
【００２１】この様にして目的するペプチド類を合成し
た後、脱保護基反応及びペプチド鎖の支持体からの切断
を行う。脱保護基反応には、ｔ−Ｂｏｃ法ではフッ化水
素やトリフルオロメタンスルホン酸（以下ＴＦＭＳＡと
言う）を、またＦｍｏｃ法ではＴＦＡを用いるのが適当
である。例えばｔ−Ｂｏｃ法では、フッ化水素中で上記
ペプチド類をアニソール存在下にて処理し、保護基の脱
離と支持体からの切断を行ってペプチドを回収する。こ
れを凍結乾燥させることにより、粗ペプチドが得られ
る。一方、Ｆｍｏｃ法ではＴＦＡ中において上記と同様
の操作で脱保護基反応及びペプチド鎖の支持体からの切
断反応を行うことが可能である。
た後、脱保護基反応及びペプチド鎖の支持体からの切断
を行う。脱保護基反応には、ｔ−Ｂｏｃ法ではフッ化水
素やトリフルオロメタンスルホン酸（以下ＴＦＭＳＡと
言う）を、またＦｍｏｃ法ではＴＦＡを用いるのが適当
である。例えばｔ−Ｂｏｃ法では、フッ化水素中で上記
ペプチド類をアニソール存在下にて処理し、保護基の脱
離と支持体からの切断を行ってペプチドを回収する。こ
れを凍結乾燥させることにより、粗ペプチドが得られ
る。一方、Ｆｍｏｃ法ではＴＦＡ中において上記と同様
の操作で脱保護基反応及びペプチド鎖の支持体からの切
断反応を行うことが可能である。
【００２２】この様にして得られた粗ペプチドを高速液
体クロマトグラフィー（以下ＨＰＬＣと略記する）に供
することにより、分離・精製を行う。その溶出に当たっ
ては、タンパク質の精製に通常用いられる水ー アセトニ
トリル系溶媒を用いて最適条件下で行うのがよい。得ら
れたクロマトピークに相当する画分を分取し、これを凍
結乾燥する。この様にして精製した精製ペプチド画分に
ついて、マススペクトル分析による分子量解析、アミノ
酸組成分析、あるいはアミノ酸配列解析等により同定を
行う。
体クロマトグラフィー（以下ＨＰＬＣと略記する）に供
することにより、分離・精製を行う。その溶出に当たっ
ては、タンパク質の精製に通常用いられる水ー アセトニ
トリル系溶媒を用いて最適条件下で行うのがよい。得ら
れたクロマトピークに相当する画分を分取し、これを凍
結乾燥する。この様にして精製した精製ペプチド画分に
ついて、マススペクトル分析による分子量解析、アミノ
酸組成分析、あるいはアミノ酸配列解析等により同定を
行う。
【００２３】本発明において用いられる、生理学的に許
容される上記ペプチド類の塩類とは医薬として許容され
る塩類であり、その様な例としては例えば、塩酸、硫
酸、燐酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、酒石
酸、マレイン酸、フマル酸、シュウ酸、リンゴ酸、クエ
ン酸、オレイン酸、パルミチン酸等の無機酸または有機
酸との塩；ナトリウム、カリウム、カルシウムなどのア
ルカリ金属またはアルカリ土類金属との塩；トリエチル
アミン、ジエタノールアミン、ｔ−ブチルアミン、ベン
ジルアミン、ジシクロヘキシルアミン、アルギニン等の
有機塩基との塩等が挙げられる。これらペプチド類の塩
類は、通常の塩生成反応を用いて調製することができ
る。
容される上記ペプチド類の塩類とは医薬として許容され
る塩類であり、その様な例としては例えば、塩酸、硫
酸、燐酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、酒石
酸、マレイン酸、フマル酸、シュウ酸、リンゴ酸、クエ
ン酸、オレイン酸、パルミチン酸等の無機酸または有機
酸との塩；ナトリウム、カリウム、カルシウムなどのア
ルカリ金属またはアルカリ土類金属との塩；トリエチル
アミン、ジエタノールアミン、ｔ−ブチルアミン、ベン
ジルアミン、ジシクロヘキシルアミン、アルギニン等の
有機塩基との塩等が挙げられる。これらペプチド類の塩
類は、通常の塩生成反応を用いて調製することができ
る。
【００２４】上記ペプチド類の固定化に用いられる担体
としては、表面が親水性であり、且つ上記ペプチド類と
共有結合をすることができるアミノ基、カルボキシル
基、水酸基等、反応性の官能基を有する担体が好まし
い。この様な担体としては、例えばＣＭ−セルロファイ
ンＣＨ（生化学工業株式会社製）等のセルロース系担
体；ＴＳＫｇｅｌ ＣＭ−トヨパール６５０Ｃ（東ソー
株式会社製）等のポリビニルアルコール系担体；ＣＭ−
トリスアクリルＭ（Pharmacia-LKB 社製）等のポリアク
リルアミド系担体；セファロースＣＬ−４Ｂ（Pharmaci
a-LKB 社製）等のアガロース系担体等の有機質担体；Ｃ
ＰＧ−１０−１０００等の多孔性ガラス等の無機質担体
が挙げられる。
としては、表面が親水性であり、且つ上記ペプチド類と
共有結合をすることができるアミノ基、カルボキシル
基、水酸基等、反応性の官能基を有する担体が好まし
い。この様な担体としては、例えばＣＭ−セルロファイ
ンＣＨ（生化学工業株式会社製）等のセルロース系担
体；ＴＳＫｇｅｌ ＣＭ−トヨパール６５０Ｃ（東ソー
株式会社製）等のポリビニルアルコール系担体；ＣＭ−
トリスアクリルＭ（Pharmacia-LKB 社製）等のポリアク
リルアミド系担体；セファロースＣＬ−４Ｂ（Pharmaci
a-LKB 社製）等のアガロース系担体等の有機質担体；Ｃ
ＰＧ−１０−１０００等の多孔性ガラス等の無機質担体
が挙げられる。
【００２５】また、上記ペプチド類を担体に固定化する
方法は、一般にペプチドまたはタンパク質を担体に固定
化する場合と同様である。この様な固定化方法として
は、例えば担体が有するカルボキシル基をＮ−ヒドロキ
シコハク酸イミドと反応させることによってスクシンイ
ミドオキシカルボニル基に変換し、これに一般式（１）
で示されるペプチド類のアミノ基部分を反応させる方法
（活性エステル法）や、ジシクロヘキシルカルボジイミ
ド（ＤＣＣ）等の縮合試薬の存在下で担体が有するアミ
ノ基やカルボキシル基に一般式（１）で示されるペプチ
ド類のカルボキシル基やアミノ基部分を縮合反応させる
方法（縮合法）、担体と上記一般式（１）で示されるペ
プチド類とを、グルタルアルデヒド等の２個以上の官能
基を有する化合物を用いて架橋する方法（担体架橋法）
等が挙げられる。
方法は、一般にペプチドまたはタンパク質を担体に固定
化する場合と同様である。この様な固定化方法として
は、例えば担体が有するカルボキシル基をＮ−ヒドロキ
シコハク酸イミドと反応させることによってスクシンイ
ミドオキシカルボニル基に変換し、これに一般式（１）
で示されるペプチド類のアミノ基部分を反応させる方法
（活性エステル法）や、ジシクロヘキシルカルボジイミ
ド（ＤＣＣ）等の縮合試薬の存在下で担体が有するアミ
ノ基やカルボキシル基に一般式（１）で示されるペプチ
ド類のカルボキシル基やアミノ基部分を縮合反応させる
方法（縮合法）、担体と上記一般式（１）で示されるペ
プチド類とを、グルタルアルデヒド等の２個以上の官能
基を有する化合物を用いて架橋する方法（担体架橋法）
等が挙げられる。
【００２６】上記担体上へ固定化するペプチドの量は、
ＩＬ−６の吸着能を実用レベルで有効に発揮させるため
にも、担体１グラム当たり１×１０-7モル以上が導入さ
れることが好ましい。また、その上限は特に限定されな
いが、実用性及び経済性の観点からすれば、１×１０-4
モル以下であることが好ましい。
ＩＬ−６の吸着能を実用レベルで有効に発揮させるため
にも、担体１グラム当たり１×１０-7モル以上が導入さ
れることが好ましい。また、その上限は特に限定されな
いが、実用性及び経済性の観点からすれば、１×１０-4
モル以下であることが好ましい。
【００２７】本発明のＩＬ−６吸着材を用いてＩＬ−６
を除去するに当たっては、該吸着材を、ＩＬ−６を多量
に含有する患者の血液、血漿、血清等の体液と接触させ
て、該吸着材にＩＬ−６を吸着させる方法が用いられる
が、特に本発明のＩＬ−６吸着材をカラムに充填して使
用する方法が推奨される。
を除去するに当たっては、該吸着材を、ＩＬ−６を多量
に含有する患者の血液、血漿、血清等の体液と接触させ
て、該吸着材にＩＬ−６を吸着させる方法が用いられる
が、特に本発明のＩＬ−６吸着材をカラムに充填して使
用する方法が推奨される。
【００２８】本発明の吸着材を充填したカラムを用い
て、患者の体液からＩＬ−６を除去する方法としては、
例えば体外血液循環方法による血液浄化療法が挙げられ
る。この体外血液循環方法としては、（i ）患者の血液
を、本発明の吸着材を充填したカラムに送り、血液中の
ＩＬ−６をカラムに吸着させて除去する。この様にして
ＩＬ−６が除去された血液を患者の血管に循環させる、
（ii）患者の血液をまず血球成分と血漿成分に分離し、
このうち血漿成分のみを上記カラムに送り、血漿成分中
のＩＬ−６をカラムに吸着させて除去する。この様にし
てＩＬ−６が除去された血漿成分を、上記分離された血
球成分と混合し、この混合物を患者の血管に循環させ
る。
て、患者の体液からＩＬ−６を除去する方法としては、
例えば体外血液循環方法による血液浄化療法が挙げられ
る。この体外血液循環方法としては、（i ）患者の血液
を、本発明の吸着材を充填したカラムに送り、血液中の
ＩＬ−６をカラムに吸着させて除去する。この様にして
ＩＬ−６が除去された血液を患者の血管に循環させる、
（ii）患者の血液をまず血球成分と血漿成分に分離し、
このうち血漿成分のみを上記カラムに送り、血漿成分中
のＩＬ−６をカラムに吸着させて除去する。この様にし
てＩＬ−６が除去された血漿成分を、上記分離された血
球成分と混合し、この混合物を患者の血管に循環させ
る。
【００２９】以下実施例を挙げて本発明をさらに詳細に
説明するが、下記実施例は本発明を制限するものではな
く、前・後記の趣旨を逸脱しない範囲で変更実施するこ
とは全て本発明の技術的範囲に包含される。
説明するが、下記実施例は本発明を制限するものではな
く、前・後記の趣旨を逸脱しない範囲で変更実施するこ
とは全て本発明の技術的範囲に包含される。
【００３０】
実施例１ペプチドの合成 上記一般式（１）において、Ａ＝式（３）、及びＸ＝Ｎ
Ｈ2 である化合物：H-Lys-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Tr
p-Leu-Gln-Asp-Met-Thr-Thr-His-NH2 （以下、化合物１
と略記する）をペプチド自動合成装置｛米国アプライド
・バイオシステムズ(Applied Biosystems)社製のモデル
４３０Ａ｝を用いた固相合成法で合成した。本実施例で
用いた樹脂は、通常のＢｏｃ法による固相合成法におい
てＣ端がアミド基であるペプチドを合成する際に用いら
れるｐ−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（ＭＢＨＡ樹
脂、NH2 基含量：0.57meq/g 、（株）ペプチド研究所よ
り購入）であり、用いた量は877mg(0.5mmol 相当量）で
ある。上記化合物１の合成は、以下に示す手順に従って
行い、上記樹脂に、目的とするペプチドのＣ末端からＮ
末端方向へ順次対応するアミノ酸を縮合反応させた。
Ｈ2 である化合物：H-Lys-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Tr
p-Leu-Gln-Asp-Met-Thr-Thr-His-NH2 （以下、化合物１
と略記する）をペプチド自動合成装置｛米国アプライド
・バイオシステムズ(Applied Biosystems)社製のモデル
４３０Ａ｝を用いた固相合成法で合成した。本実施例で
用いた樹脂は、通常のＢｏｃ法による固相合成法におい
てＣ端がアミド基であるペプチドを合成する際に用いら
れるｐ−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（ＭＢＨＡ樹
脂、NH2 基含量：0.57meq/g 、（株）ペプチド研究所よ
り購入）であり、用いた量は877mg(0.5mmol 相当量）で
ある。上記化合物１の合成は、以下に示す手順に従って
行い、上記樹脂に、目的とするペプチドのＣ末端からＮ
末端方向へ順次対応するアミノ酸を縮合反応させた。
【００３１】本実施例で用いたアミノ酸は、Ｂｏｃ基で
アミノ基を保護したＬ−アミノ酸であり、ＭＢＨＡ樹脂
に対して当量関係で４倍に相当する量（今回は樹脂が0.
5mmol 相当なので、保護アミノ酸は2mmol ）を用いた。
具体的に用いた保護アミノ酸及びそれらの量は以下の通
りである。 (1) Boc-His(Tos)-OH 819mg (2mmol) (2) Boc-Thr(Bzl)-OH 619mg (2mmol) (3) Boc-Thr(Bzl)-OH 619mg (2mmol) (4) Boc-Met-OH 499mg (2mmol) (5) Boc-Asp(OBzl)-OH 647mg (2mmol) (6) Boc-Gln-OH 493mg (2mmol) (7) Boc-Leu-OH/H2O 499mg (2mmol) (8) Boc-Trp(CHO)-OH 665mg (2mmol) (9) Boc-Gln-OH 493mg (2mmol) (10)Boc-Asn-OH 465mg (2mmol) (11)Boc-Gln-OH 493mg (2mmol) (12)Boc-Ala-OH 378mg (2mmol) (13)Boc-Gln-OH 493mg (2mmol) (14)Boc-Leu-OH/H2O 499mg (2mmol) (15)Boc-Lys(Cl-Z)-OH 830mg (2mmol)
アミノ基を保護したＬ−アミノ酸であり、ＭＢＨＡ樹脂
に対して当量関係で４倍に相当する量（今回は樹脂が0.
5mmol 相当なので、保護アミノ酸は2mmol ）を用いた。
具体的に用いた保護アミノ酸及びそれらの量は以下の通
りである。 (1) Boc-His(Tos)-OH 819mg (2mmol) (2) Boc-Thr(Bzl)-OH 619mg (2mmol) (3) Boc-Thr(Bzl)-OH 619mg (2mmol) (4) Boc-Met-OH 499mg (2mmol) (5) Boc-Asp(OBzl)-OH 647mg (2mmol) (6) Boc-Gln-OH 493mg (2mmol) (7) Boc-Leu-OH/H2O 499mg (2mmol) (8) Boc-Trp(CHO)-OH 665mg (2mmol) (9) Boc-Gln-OH 493mg (2mmol) (10)Boc-Asn-OH 465mg (2mmol) (11)Boc-Gln-OH 493mg (2mmol) (12)Boc-Ala-OH 378mg (2mmol) (13)Boc-Gln-OH 493mg (2mmol) (14)Boc-Leu-OH/H2O 499mg (2mmol) (15)Boc-Lys(Cl-Z)-OH 830mg (2mmol)
【００３２】これらの保護アミノ酸の樹脂への結合は、
縮合させるアミノ酸がＡｓｎ、Ｇｌｎ及びＡｒｇの場合
には、以下の（Ｂ）ダブルカップリング法を用い、それ
以外の保護アミノ酸の場合には、以下の（Ａ）シングル
カップリング法を用いた。
縮合させるアミノ酸がＡｓｎ、Ｇｌｎ及びＡｒｇの場合
には、以下の（Ｂ）ダブルカップリング法を用い、それ
以外の保護アミノ酸の場合には、以下の（Ａ）シングル
カップリング法を用いた。
【００３３】固相合成手順 （Ａ）シングルカップリング法で行う場合 ａ）３３％ＴＦＡのＤＣＭ溶液中で８０秒間攪拌した。 ｂ）更に、５０％ＴＦＡのＤＣＭ溶液中で１８．５分間
攪拌した。 ｃ）更に、ＤＣＭで３回洗浄した。 ｄ）更に、１０％ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で１分間攪拌し
た。 ｅ）更に、１０％ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で１分間攪拌し
た。 ｆ）更に、ＤＭＦで５回洗浄した。 ｇ）縮合試薬としてＤＣＣを用い、保護アミノ酸の縮合
反応を行った。 ｈ）ＤＣＭで５回洗浄した。
攪拌した。 ｃ）更に、ＤＣＭで３回洗浄した。 ｄ）更に、１０％ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で１分間攪拌し
た。 ｅ）更に、１０％ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で１分間攪拌し
た。 ｆ）更に、ＤＭＦで５回洗浄した。 ｇ）縮合試薬としてＤＣＣを用い、保護アミノ酸の縮合
反応を行った。 ｈ）ＤＣＭで５回洗浄した。
【００３４】（Ｂ）ダブルカップリング法で行う場合 ａ）３３％ＴＦＡのＤＣＭ溶液中で８０秒間攪拌した。 ｂ）次に、５０％ＴＦＡのＤＣＭ溶液中で１８．５分間
攪拌した。 ｃ）更に、ＤＣＭで３回洗浄した。 ｄ）更に、１０％ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で１分間攪拌し
た。 ｅ）更に、１０％ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で１分間攪拌し
た。 ｆ）更に、ＤＭＦで５回洗浄した。 ｇ）縮合試薬としてＤＣＣ−ＨＯＢｔを用い、保護アミ
ノ酸の第１回目の縮合反応を行った。 ｈ）ＤＣＭで３回洗浄した。 ｉ）次に、１０％ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で１分間攪拌し
た。 ｊ）更に、ＤＭＦで１回洗浄した。 ｋ）更に、ＤＣＭで３回洗浄した。 ｌ）縮合試薬としてＤＣＣ−ＨＯＢｔを用い、保護アミ
ノ酸の第２回目の縮合反応を行った。 ｍ）ＤＭＦで１回洗浄した。 ｎ）次に、ＤＣＭで５回洗浄した。
攪拌した。 ｃ）更に、ＤＣＭで３回洗浄した。 ｄ）更に、１０％ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で１分間攪拌し
た。 ｅ）更に、１０％ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で１分間攪拌し
た。 ｆ）更に、ＤＭＦで５回洗浄した。 ｇ）縮合試薬としてＤＣＣ−ＨＯＢｔを用い、保護アミ
ノ酸の第１回目の縮合反応を行った。 ｈ）ＤＣＭで３回洗浄した。 ｉ）次に、１０％ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で１分間攪拌し
た。 ｊ）更に、ＤＭＦで１回洗浄した。 ｋ）更に、ＤＣＭで３回洗浄した。 ｌ）縮合試薬としてＤＣＣ−ＨＯＢｔを用い、保護アミ
ノ酸の第２回目の縮合反応を行った。 ｍ）ＤＭＦで１回洗浄した。 ｎ）次に、ＤＣＭで５回洗浄した。
【００３５】この様にして全ての保護アミノ酸を樹脂に
縮合させた後、ＴＦＡを用いて目的ペプチドのＮ末端保
護基であるＢｏｃ基を除去した。得られたペプチド樹脂
をグラスフィルター上にとり、ＤＣＭで洗浄後真空乾燥
することにより、1.79g の保護ペプチド樹脂を得た。こ
の保護ペプチド樹脂850mg を、フッ化水素反応装置
｛（株）ペプチド研究所製｝を用い、フッ化水素9ml 、
アニソール1.0ml 、エチルメチルスルフィド0.1ml の混
液中で０℃で１時間処理した。混液中のフッ化水素と添
加試薬を減圧留去した後、残査をグラスフィルター上で
ジエチルエーテルにより充分に洗浄し、減圧下で乾燥さ
せた。この様にして得られた残査を0.1M酢酸水溶液で抽
出し、その抽出液を凍結乾燥することにより化合物１を
含む粗生成物270mg を得た。そのうち、140mg の粗生成
物を分取用高速液体クロマトグラフィー（カラム：東ソ
ー社製「ＴＳＫｇｅｌ ＯＤＳ１２０−Ｔ」、2.54cmφ
×30cmL）を用い、アセトニトリルと0.1%(W/W) ＴＦＡ
水溶液の混合溶媒による直線グラディエント法で溶出さ
せ、化合物１を含む画分を分取し、精製物25mgを得た。
得られた精製物を50%(W/W)の酢酸溶液に溶解し、陽イオ
ン交換樹脂Amberlite IRA-410 （オルガノ株式会社製）
に通すことにより、化合物１の酢酸塩22mgを得た。
縮合させた後、ＴＦＡを用いて目的ペプチドのＮ末端保
護基であるＢｏｃ基を除去した。得られたペプチド樹脂
をグラスフィルター上にとり、ＤＣＭで洗浄後真空乾燥
することにより、1.79g の保護ペプチド樹脂を得た。こ
の保護ペプチド樹脂850mg を、フッ化水素反応装置
｛（株）ペプチド研究所製｝を用い、フッ化水素9ml 、
アニソール1.0ml 、エチルメチルスルフィド0.1ml の混
液中で０℃で１時間処理した。混液中のフッ化水素と添
加試薬を減圧留去した後、残査をグラスフィルター上で
ジエチルエーテルにより充分に洗浄し、減圧下で乾燥さ
せた。この様にして得られた残査を0.1M酢酸水溶液で抽
出し、その抽出液を凍結乾燥することにより化合物１を
含む粗生成物270mg を得た。そのうち、140mg の粗生成
物を分取用高速液体クロマトグラフィー（カラム：東ソ
ー社製「ＴＳＫｇｅｌ ＯＤＳ１２０−Ｔ」、2.54cmφ
×30cmL）を用い、アセトニトリルと0.1%(W/W) ＴＦＡ
水溶液の混合溶媒による直線グラディエント法で溶出さ
せ、化合物１を含む画分を分取し、精製物25mgを得た。
得られた精製物を50%(W/W)の酢酸溶液に溶解し、陽イオ
ン交換樹脂Amberlite IRA-410 （オルガノ株式会社製）
に通すことにより、化合物１の酢酸塩22mgを得た。
【００３６】この様にして得られた化合物１について、
ＨＰＬＣによる純度検定とアミノ酸分析による確認を行
った。ＨＰＬＣによる分析 カラム ：TSKgel ODS-120T （0.46cmφ x 25cm L ）
（東ソー社製） 溶出液 ：アセトニトリルと0.1%(W/W) ＴＦＡ水溶液の
混合溶液 溶出方法：アセトニトリルと0.1%(W/W) ＴＦＡ水溶液
を、溶出開始時には、前者と後者の混合比率を20：80と
し、溶出開始後３０分には、その混合比率を40：60と変
化させる直線グラディエント法 検 出：ＵＶ検出器、波長214nm 流 速：1.0ml/min 保持時間：17.8分アミノ酸分析 ６Ｎ塩酸による酸分解（110 ℃で２４時間） Asp 2.02(2), Thr 1.74(2), Glu 3.92(4), Ala 1.00
(1), Met 0.99(1),Leu 2.08(2), Lys 0.98(1), His 0.9
8(1), Trpピークの存在を確認(1)（括弧内の数字は理論
値を示す）
ＨＰＬＣによる純度検定とアミノ酸分析による確認を行
った。ＨＰＬＣによる分析 カラム ：TSKgel ODS-120T （0.46cmφ x 25cm L ）
（東ソー社製） 溶出液 ：アセトニトリルと0.1%(W/W) ＴＦＡ水溶液の
混合溶液 溶出方法：アセトニトリルと0.1%(W/W) ＴＦＡ水溶液
を、溶出開始時には、前者と後者の混合比率を20：80と
し、溶出開始後３０分には、その混合比率を40：60と変
化させる直線グラディエント法 検 出：ＵＶ検出器、波長214nm 流 速：1.0ml/min 保持時間：17.8分アミノ酸分析 ６Ｎ塩酸による酸分解（110 ℃で２４時間） Asp 2.02(2), Thr 1.74(2), Glu 3.92(4), Ala 1.00
(1), Met 0.99(1),Leu 2.08(2), Lys 0.98(1), His 0.9
8(1), Trpピークの存在を確認(1)（括弧内の数字は理論
値を示す）
【００３７】ペプチドの担体への固定化 ジオキサン５０ｍｌ中に、担体としてＣＭ−セルロファ
イン５ｇを懸濁させ、これにＮ−ヒドロキシコハク酸イ
ミド0.4gとジイソプロピルカルボジイミド0.5gを加え、
室温で２４時間攪拌した。得られた混合物をジオキサン
で充分に洗浄後、再度ＤＭＦに懸濁した。この様に処理
した担体に、上記化合物１（10mg）を加え、４℃で２４
時間攪拌した。得られた混合物を吸引濾過し、純水で洗
浄した後、減圧下で乾燥させることにより、上記化合物
が担体に固定化された本発明の吸着材５ｇを得た。
イン５ｇを懸濁させ、これにＮ−ヒドロキシコハク酸イ
ミド0.4gとジイソプロピルカルボジイミド0.5gを加え、
室温で２４時間攪拌した。得られた混合物をジオキサン
で充分に洗浄後、再度ＤＭＦに懸濁した。この様に処理
した担体に、上記化合物１（10mg）を加え、４℃で２４
時間攪拌した。得られた混合物を吸引濾過し、純水で洗
浄した後、減圧下で乾燥させることにより、上記化合物
が担体に固定化された本発明の吸着材５ｇを得た。
【００３８】ペプチドのＩＬ−６吸着能 ヒトリコンビナントＩＬ−６をビオチン化キット（アメ
リカンコーレックス社製）を用いて、ビオチン化した
（ビオチン化ＩＬ−６）。上記化合物１（１ｍｇ／ｍ
ｌ）を５０μｌ／ウエルの割合で平底９６穴プレートに
添加し、３７℃で１時間静置して固定化した。各ウエル
を０．１％ＢＳＡ含有洗浄用緩衝液（ここで洗浄用緩衝
液とは、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝液
を意味する）で洗浄後、ビオチン化ＩＬ−６を適当量添
加し、室温で一晩静置した。これを洗浄用緩衝液で洗浄
した後、各ウエルにペルオキシダーゼ標識ストレプトア
ビジンを添加し、室温で３０分間静置した。これを洗浄
用緩衝液で洗浄した後、各ウエルにＯ−フェニレンジア
ミン（過酸化水素を０．００３％含有）を添加し、遮光
下、室温で１時間反応させて発色させた。硫酸を各ウエ
ルに添加することによりこの反応を停止させた後、４９
０ｎｍにおける吸光度を測定した。化合物１の代わりに
既知の種々の濃度の抗ヒトＩＬ−６抗体（Ｒ＆Ｄシステ
ムズ社製）を添加して上記と同様に処理して得られた吸
光度に基づいて検量線を作製した。化合物１のＩＬ−６
吸着能は、抗ヒトＩＬ−６抗体（１００ｎｇ／ｍｌ）を
５０μｌ／ウエル添加した時のＩＬ−６吸着能を１００
として換算した。その結果を表１に示す。なお、表１に
は、後記する実施例２〜７で得られた各化合物のＩＬ−
６吸着能の結果も併記している。
リカンコーレックス社製）を用いて、ビオチン化した
（ビオチン化ＩＬ−６）。上記化合物１（１ｍｇ／ｍ
ｌ）を５０μｌ／ウエルの割合で平底９６穴プレートに
添加し、３７℃で１時間静置して固定化した。各ウエル
を０．１％ＢＳＡ含有洗浄用緩衝液（ここで洗浄用緩衝
液とは、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝液
を意味する）で洗浄後、ビオチン化ＩＬ−６を適当量添
加し、室温で一晩静置した。これを洗浄用緩衝液で洗浄
した後、各ウエルにペルオキシダーゼ標識ストレプトア
ビジンを添加し、室温で３０分間静置した。これを洗浄
用緩衝液で洗浄した後、各ウエルにＯ−フェニレンジア
ミン（過酸化水素を０．００３％含有）を添加し、遮光
下、室温で１時間反応させて発色させた。硫酸を各ウエ
ルに添加することによりこの反応を停止させた後、４９
０ｎｍにおける吸光度を測定した。化合物１の代わりに
既知の種々の濃度の抗ヒトＩＬ−６抗体（Ｒ＆Ｄシステ
ムズ社製）を添加して上記と同様に処理して得られた吸
光度に基づいて検量線を作製した。化合物１のＩＬ−６
吸着能は、抗ヒトＩＬ−６抗体（１００ｎｇ／ｍｌ）を
５０μｌ／ウエル添加した時のＩＬ−６吸着能を１００
として換算した。その結果を表１に示す。なお、表１に
は、後記する実施例２〜７で得られた各化合物のＩＬ−
６吸着能の結果も併記している。
【００３９】
【表１】
【００４０】実施例２ 上記実施例１と同様にして、Ａ＝式（４）、Ｘ＝ＮＨ2
である化合物：H-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gl
n-Asp-Met-Thr-Thr-His-NH2 （化合物２）を合成した。
ただし、用いた保護アミノ酸については、(15)の保護ア
ミノ酸を用いなかったことが異なっている。この様にし
て得られた生成物120mg を精製し、目的のペプチド酢酸
塩22mgを得た。
である化合物：H-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gl
n-Asp-Met-Thr-Thr-His-NH2 （化合物２）を合成した。
ただし、用いた保護アミノ酸については、(15)の保護ア
ミノ酸を用いなかったことが異なっている。この様にし
て得られた生成物120mg を精製し、目的のペプチド酢酸
塩22mgを得た。
【００４１】ＨＰＬＣによる分析 実施例１と同様にして分析したところ、保持時間は17.6
分であった。アミノ酸分析（６Ｎ塩酸による酸分解、110 ℃で２４時
間） 実施例１と同様にして分析したところ、以下に示す結果
が得られた。 Asp 2.06(2), Thr 1.99(2), Glu 3.84(4), Ala 0.99
(1), Met 1.02(1),Leu 2.07(2),His 1.02(1), Trpピー
クの存在を確認(1)（括弧内の数字は理論値を示す）
分であった。アミノ酸分析（６Ｎ塩酸による酸分解、110 ℃で２４時
間） 実施例１と同様にして分析したところ、以下に示す結果
が得られた。 Asp 2.06(2), Thr 1.99(2), Glu 3.84(4), Ala 0.99
(1), Met 1.02(1),Leu 2.07(2),His 1.02(1), Trpピー
クの存在を確認(1)（括弧内の数字は理論値を示す）
【００４２】実施例３ 上記実施例１と同様にして、Ａ＝式（５）、Ｘ＝ＮＨ2
である化合物： H-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-G
ln-Asp-Met-Thr-Thr-His-Leu-Ile-Leu-Arg-NH2（化合物
３）を合成した。ただし、用いた保護アミノ酸について
は、(15)の保護アミノ酸を用いなかったこと、及び(1)
の保護アミノ酸を用いる前に、以下の組成の保護アミノ
酸をこの順序で樹脂に結合させたことが異なっている。 Boc-Arg(Tos)-0H 957mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H20 499mg（2mmol ） Boc-Ile-OH/0.5H2O 481mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H2O 499mg（2mmol ） この様にして得られた粗生成物110mg を精製し、目的の
ペプチド酢酸塩25mgを得た。
である化合物： H-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-G
ln-Asp-Met-Thr-Thr-His-Leu-Ile-Leu-Arg-NH2（化合物
３）を合成した。ただし、用いた保護アミノ酸について
は、(15)の保護アミノ酸を用いなかったこと、及び(1)
の保護アミノ酸を用いる前に、以下の組成の保護アミノ
酸をこの順序で樹脂に結合させたことが異なっている。 Boc-Arg(Tos)-0H 957mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H20 499mg（2mmol ） Boc-Ile-OH/0.5H2O 481mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H2O 499mg（2mmol ） この様にして得られた粗生成物110mg を精製し、目的の
ペプチド酢酸塩25mgを得た。
【００４３】ＨＰＬＣによる分析 実施例１の溶出方法において、アセトニトリルと0.1%(W
/W) ＴＦＡ水溶液の混合比率を30：70→50：50(30 min)
にしたこと以外は、実施例１と同様にして分析を行った
ところ、保持時間は16.4分であった。アミノ酸分析（６Ｎ塩酸による酸分解、110 ℃で２４時
間） Asp 2.04(2), Thr 1.83(2), Glu 4.03(4), Ala 1.00
(1), Met 0.98(1),Ile 1.01(1),Leu 4.12(4), His 0.99
(1), Trp ピークの存在を確認(1),Arg 0.99(1)（括弧内
の数字は理論値を示す）
/W) ＴＦＡ水溶液の混合比率を30：70→50：50(30 min)
にしたこと以外は、実施例１と同様にして分析を行った
ところ、保持時間は16.4分であった。アミノ酸分析（６Ｎ塩酸による酸分解、110 ℃で２４時
間） Asp 2.04(2), Thr 1.83(2), Glu 4.03(4), Ala 1.00
(1), Met 0.98(1),Ile 1.01(1),Leu 4.12(4), His 0.99
(1), Trp ピークの存在を確認(1),Arg 0.99(1)（括弧内
の数字は理論値を示す）
【００４４】実施例４ 上記実施例１と同様にして、Ａ＝式（６）、Ｘ＝ＮＨ2
である化合物：H-Leu-Arg-NH2 （化合物４）を合成し
た。ただし、用いた保護アミノ酸及びそれらの量は以下
の通りである。 Boc-Arg(Tos)-0H 957mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H20 499mg（2mmol ） この様にして得られた粗生成物50mgを精製し、目的のペ
プチド酢酸塩25mgを得た。
である化合物：H-Leu-Arg-NH2 （化合物４）を合成し
た。ただし、用いた保護アミノ酸及びそれらの量は以下
の通りである。 Boc-Arg(Tos)-0H 957mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H20 499mg（2mmol ） この様にして得られた粗生成物50mgを精製し、目的のペ
プチド酢酸塩25mgを得た。
【００４５】ＨＰＬＣによる分析 実施例１の溶出方法において、アセトニトリルと0.1%(W
/W) ＴＦＡ水溶液の混合比率を0 ：100 →20：80(30 mi
n)にしたこと以外は、実施例１と同様にして分析を行っ
たところ、保持時間は15.6分であった。アミノ酸分析（６Ｎ塩酸による酸分解、110 ℃で２４時
間） Leu 1.01(1), Arg 0.99(1)（括弧内の数字は理論値を示
す）
/W) ＴＦＡ水溶液の混合比率を0 ：100 →20：80(30 mi
n)にしたこと以外は、実施例１と同様にして分析を行っ
たところ、保持時間は15.6分であった。アミノ酸分析（６Ｎ塩酸による酸分解、110 ℃で２４時
間） Leu 1.01(1), Arg 0.99(1)（括弧内の数字は理論値を示
す）
【００４６】実施例５ 上記実施例１と同様にして、Ａ＝式（７）、Ｘ＝ＮＨ2
である化合物：H-Gly-Ile-Ser-Ala-Leu-Arg-Lys-Glu-Th
r-Cys(Acm)-Asn-Lys-Ser-Asn-Met-Cys(Acm)-NH 2 （化合
物５）を合成した。用いた保護アミノ酸及びそれらの量
は以下の通りである。 Boc-Cys(Acm)-OH 585mg（2mmol ） Boc-Met-OH 499mg（2mmol ） Boc-Asn-OH 464mg（2mmol ） Boc-Ser(Bzl)-OH 591mg（2mmol ） Boc-Lys(Cl-Z)-OH 830mg（2mmol ） Boc-Asn-OH 464mg（2mmol ） Boc-Cys(Acm)-OH 585mg（2mmol ） Boc-Thr(Bzl)-OH 348mg（2mmol ） Boc-Glu(O-Bzl)-OH 675mg（2mmol ） Boc-Lys(Cl-Z)-OH 830mg（2mmol ） Boc-Arg(Tos)-OH 957mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H20 499mg（2mmol ） Boc-Ala-OH 378mg（2mmol ） Boc-Ser(Bzl)-OH 591mg（2mmol ） Boc-Ile-OH/0.5H2O 481mg（2mmol ） Boc-Gly-OH 350mg（2mmol ） この様にして得られた得られた粗生成物150mg を精製
し、目的のペプチド酢酸塩28mgを得た。
である化合物：H-Gly-Ile-Ser-Ala-Leu-Arg-Lys-Glu-Th
r-Cys(Acm)-Asn-Lys-Ser-Asn-Met-Cys(Acm)-NH 2 （化合
物５）を合成した。用いた保護アミノ酸及びそれらの量
は以下の通りである。 Boc-Cys(Acm)-OH 585mg（2mmol ） Boc-Met-OH 499mg（2mmol ） Boc-Asn-OH 464mg（2mmol ） Boc-Ser(Bzl)-OH 591mg（2mmol ） Boc-Lys(Cl-Z)-OH 830mg（2mmol ） Boc-Asn-OH 464mg（2mmol ） Boc-Cys(Acm)-OH 585mg（2mmol ） Boc-Thr(Bzl)-OH 348mg（2mmol ） Boc-Glu(O-Bzl)-OH 675mg（2mmol ） Boc-Lys(Cl-Z)-OH 830mg（2mmol ） Boc-Arg(Tos)-OH 957mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H20 499mg（2mmol ） Boc-Ala-OH 378mg（2mmol ） Boc-Ser(Bzl)-OH 591mg（2mmol ） Boc-Ile-OH/0.5H2O 481mg（2mmol ） Boc-Gly-OH 350mg（2mmol ） この様にして得られた得られた粗生成物150mg を精製
し、目的のペプチド酢酸塩28mgを得た。
【００４７】ＨＰＬＣによる分析 実施例１の溶出方法において、アセトニトリルと0.1%(W
/W) ＴＦＡ水溶液の混合比率を10：90→30/70(30 min)
にしたこと以外は、実施例１と同様にして分析を行った
ところ、保持時間は20.7分であった。アミノ酸分析（６Ｎ塩酸による酸分解、110 ℃で２４時
間） Asp 2.05(2), Thr 0.66(1), Ser 1.74(2), Glu 0.94
(1), Gly 1.02(1),Ala 1.00(1), Met 1.00(1), Ile 1.0
1(1), Leu 1.04(1), Lys 1.97(2),Arg 0.97(1) （括弧
内の数字は理論値を示す）
/W) ＴＦＡ水溶液の混合比率を10：90→30/70(30 min)
にしたこと以外は、実施例１と同様にして分析を行った
ところ、保持時間は20.7分であった。アミノ酸分析（６Ｎ塩酸による酸分解、110 ℃で２４時
間） Asp 2.05(2), Thr 0.66(1), Ser 1.74(2), Glu 0.94
(1), Gly 1.02(1),Ala 1.00(1), Met 1.00(1), Ile 1.0
1(1), Leu 1.04(1), Lys 1.97(2),Arg 0.97(1) （括弧
内の数字は理論値を示す）
【００４８】実施例６ 上記実施例１と同様にして、Ａ＝式（８）、Ｘ＝ＮＨ2
である化合物：H-Ala-Arg-Ala-Val-Gln-Met-Ser-Thr-Ly
s-Val-Leu-Ile-Gln-Phe-Leu-Gln-Lys-Lys-Ala-Lys-Asn-
NH2 （化合物６）を合成した。用いた保護アミノ酸及び
それらの量は以下の通りである。 Boc-Asn-OH 464mg（2mmol ） Boc-Lys(Cl-Z)-OH 830mg（2mmol ） Boc-Ala-OH 378mg（2mmol ） Boc-Lys(Cl-Z)-OH 830mg（2mmol ） Boc-Lys(Cl-Z)-OH 830mg（2mmol ） Boc-Gln-OH 493mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H20 499mg（2mmol ） Boc-Phe-OH 531mg（2mmol ） Boc-Gln-OH 493mg（2mmol ） Boc-Ile-OH/0.5H2O 481mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H20 499mg（2mmol ） Boc-Val-OH 435mg（2mmol ） Boc-Lys(Cl-Z)-OH 830mg（2mmol ） Boc-Thr(Bzl)-OH 619mg（2mmol ） Boc-Ser(Bzl)-OH 591mg（2mmol ） Boc-Met-OH 499mg（2mmol ） Boc-Gln-OH 493mg（2mmol ） Boc-Val-OH 435mg（2mmol ） Boc-Ala-OH 378mg（2mmol ） Boc-Arg(Tos)-OH 957mg（2mmol ） Boc-Ala-OH 378mg（2mmol ） この様にして得られた得られた粗生成物98mgを精製し、
目的のペプチド酢酸塩20mgを得た。
である化合物：H-Ala-Arg-Ala-Val-Gln-Met-Ser-Thr-Ly
s-Val-Leu-Ile-Gln-Phe-Leu-Gln-Lys-Lys-Ala-Lys-Asn-
NH2 （化合物６）を合成した。用いた保護アミノ酸及び
それらの量は以下の通りである。 Boc-Asn-OH 464mg（2mmol ） Boc-Lys(Cl-Z)-OH 830mg（2mmol ） Boc-Ala-OH 378mg（2mmol ） Boc-Lys(Cl-Z)-OH 830mg（2mmol ） Boc-Lys(Cl-Z)-OH 830mg（2mmol ） Boc-Gln-OH 493mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H20 499mg（2mmol ） Boc-Phe-OH 531mg（2mmol ） Boc-Gln-OH 493mg（2mmol ） Boc-Ile-OH/0.5H2O 481mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H20 499mg（2mmol ） Boc-Val-OH 435mg（2mmol ） Boc-Lys(Cl-Z)-OH 830mg（2mmol ） Boc-Thr(Bzl)-OH 619mg（2mmol ） Boc-Ser(Bzl)-OH 591mg（2mmol ） Boc-Met-OH 499mg（2mmol ） Boc-Gln-OH 493mg（2mmol ） Boc-Val-OH 435mg（2mmol ） Boc-Ala-OH 378mg（2mmol ） Boc-Arg(Tos)-OH 957mg（2mmol ） Boc-Ala-OH 378mg（2mmol ） この様にして得られた得られた粗生成物98mgを精製し、
目的のペプチド酢酸塩20mgを得た。
【００４９】ＨＰＬＣによる分析 実施例１と同様にして分析したところ、保持時間は22.6
分であった。アミノ酸分析（６Ｎ塩酸による酸分解、110 ℃で２４時
間） Asp 1.02(1), Thr 0.88(1), Ser 0.82(1), Glu 2.99
(3), Ala 3.02(3),Val 2.00(2), Met 1.02(1), Ile 1.1
3(1), Leu 2.17(2), Phe 1.05(1),Lys 3.96(4), Arg 0.
94(1)（括弧内の数字は理論値を示す）
分であった。アミノ酸分析（６Ｎ塩酸による酸分解、110 ℃で２４時
間） Asp 1.02(1), Thr 0.88(1), Ser 0.82(1), Glu 2.99
(3), Ala 3.02(3),Val 2.00(2), Met 1.02(1), Ile 1.1
3(1), Leu 2.17(2), Phe 1.05(1),Lys 3.96(4), Arg 0.
94(1)（括弧内の数字は理論値を示す）
【００５０】実施例７ 上記実施例１と同様にして、Ａ＝式（９）、Ｘ＝ＮＨ2
である化合物：H-Pro-Thr-Thr-Asn-Ala-Ser-Leu-Leu-Th
r-Lys-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp-NH2
（化合物７）を合成した。用いた保護アミノ酸及びそれ
らの量は以下の通りである。 Boc-Asp(O-Bzl)-OH 647mg（2mmol ） Boc-Gln-OH 493mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H20 499mg（2mmol ） Boc-Trp(CHO)-OH 665mg（2mmol ） Boc-Gln-OH 493mg（2mmol ） Boc-Asn-OH 464mg（2mmol ） Boc-Gln-OH 493mg（2mmol ） Boc-Ala-OH 378mg（2mmol ） Boc-Gln-OH 493mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H20 499mg（2mmol ） Boc-Lys(Cl-Z)-OH 830mg（2mmol ） Boc-Thr(Bzl)-OH 619mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H20 499mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H20 499mg（2mmol ） Boc-Ser(Bzl)-OH 591mg（2mmol ） Boc-Ala-OH 378mg（2mmol ） Boc-Asn-OH 464mg（2mmol ） Boc-Thr(Bzl)-OH 619mg（2mmol ） Boc-Thr(Bzl)-OH 619mg（2mmol ） Boc-Pro-OH 430mg（2mmol ） この様にして得られた得られた粗生成物150mg を精製
し、目的のペプチド酢酸塩18mgを得た。
である化合物：H-Pro-Thr-Thr-Asn-Ala-Ser-Leu-Leu-Th
r-Lys-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp-NH2
（化合物７）を合成した。用いた保護アミノ酸及びそれ
らの量は以下の通りである。 Boc-Asp(O-Bzl)-OH 647mg（2mmol ） Boc-Gln-OH 493mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H20 499mg（2mmol ） Boc-Trp(CHO)-OH 665mg（2mmol ） Boc-Gln-OH 493mg（2mmol ） Boc-Asn-OH 464mg（2mmol ） Boc-Gln-OH 493mg（2mmol ） Boc-Ala-OH 378mg（2mmol ） Boc-Gln-OH 493mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H20 499mg（2mmol ） Boc-Lys(Cl-Z)-OH 830mg（2mmol ） Boc-Thr(Bzl)-OH 619mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H20 499mg（2mmol ） Boc-Leu-OH/H20 499mg（2mmol ） Boc-Ser(Bzl)-OH 591mg（2mmol ） Boc-Ala-OH 378mg（2mmol ） Boc-Asn-OH 464mg（2mmol ） Boc-Thr(Bzl)-OH 619mg（2mmol ） Boc-Thr(Bzl)-OH 619mg（2mmol ） Boc-Pro-OH 430mg（2mmol ） この様にして得られた得られた粗生成物150mg を精製
し、目的のペプチド酢酸塩18mgを得た。
【００５１】ＨＰＬＣによる分析 実施例１の溶出方法において、アセトニトリルと0.1%(W
/W) ＴＦＡ水溶液の混合比率を20：80→50：50(30 min)
にしたこと以外は、実施例１と同様にして分析を行った
ところ、保持時間は22.6分であった。アミノ酸分析（６Ｎ塩酸による酸分解、110 ℃で２４時
間） Asp 3.06(3), Thr 2.81(3), Ser 0.87(1), Glu 4.13
(4), Ala 2.03(2),Leu 4.08(4), Trpピークの存在を確
認(1), Lys 1.04(1), Pro 1.13(1)（括弧内の数字は理
論値を示す） 表１から明らかな様に、本発明に用いられるペプチドは
いずれもＩＬ−６に対して強い吸着力を有することが分
かる。
/W) ＴＦＡ水溶液の混合比率を20：80→50：50(30 min)
にしたこと以外は、実施例１と同様にして分析を行った
ところ、保持時間は22.6分であった。アミノ酸分析（６Ｎ塩酸による酸分解、110 ℃で２４時
間） Asp 3.06(3), Thr 2.81(3), Ser 0.87(1), Glu 4.13
(4), Ala 2.03(2),Leu 4.08(4), Trpピークの存在を確
認(1), Lys 1.04(1), Pro 1.13(1)（括弧内の数字は理
論値を示す） 表１から明らかな様に、本発明に用いられるペプチドは
いずれもＩＬ−６に対して強い吸着力を有することが分
かる。
【００５２】
【発明の効果】本発明によれば、ＩＬ−６と強く吸着す
ることができるＩＬ−６吸着材が提供されるので、ＩＬ
−６に由来する自己免疫疾患等の種々の疾患に治療に適
用することが可能である。また、本発明のＩＬ−６吸着
材をカラムに充填することにより、自己免疫疾患の患者
の体液からＩＬ−６を吸着除去する血液浄化療法等の治
療法にも適用することができる。
ることができるＩＬ−６吸着材が提供されるので、ＩＬ
−６に由来する自己免疫疾患等の種々の疾患に治療に適
用することが可能である。また、本発明のＩＬ−６吸着
材をカラムに充填することにより、自己免疫疾患の患者
の体液からＩＬ−６を吸着除去する血液浄化療法等の治
療法にも適用することができる。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 5/103 ＺＮＡ 7/06 Ｚ 8318−4Ｈ 7/08 17/04 8318−4Ｈ (72)発明者 木村 仁 つくば市千現１−14−14 パークハイツ千 現404号 (72)発明者 妹尾 八郎 門真市千石東町12−１ (72)発明者 関 信男 茨木市橋の内２−12−28−303
Claims (8)
- 【請求項１】 一般式（１）：Ｈ−Ａ−Ｘ （式中、Ａは２〜２１個のアミノ酸が結合したペプチド
のＮ末端から水素原子を１個除き、且つ該ペプチドのＣ
末端から水酸基を１個除いた２価の基を表し、 Ｘは水酸基またはカルボキシ保護基を表す。但し、Ａに
おいて該アミノ酸中の遊離のメルカプト基は、メルカプ
ト保護基で保護されていてもよい。）で示されるペプチ
ド類または生理学的に許容されるその塩類、及び担体か
らなることを特徴とするインターロイキン６吸着材。 - 【請求項２】 Ａが 式（２）：-Lys-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln
-Asp-Met-Thr-Thr-His-Leu-Ile-Leu-Arg- の全部、またはその一部を連続して含むものである請求
項１に記載のインターロイキン６吸着材。 - 【請求項３】 Ａの一部を連続して含むものが下記式
（３）〜式（６）で示される請求項２に記載のインター
ロイキン６吸着材。 式（３）：-Lys-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln
-Asp-Met-Thr-Thr-His- 式（４）：-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp
-Met-Thr-Thr-His- 式（５）：-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp
-Met-Thr-Thr-His-Leu-Ile-Leu-Arg- 式（６）：-Leu-Arg- - 【請求項４】 Ａが 式（７）：-Gly-Ile-Ser-Ala-Leu-Arg-Lys-Glu-Thr-Cys
-Asn-Lys-Ser-Asn-Met-Cys- を含むものである請求項１に記載のインターロイキン６
吸着材。 - 【請求項５】 Ａが 式（８）：-Ala-Arg-Ala-Val-Gln-Met-Ser-Thr-Lys-Val
-Leu-Ile-Gln-Phe-Leu-Gln-Lys-Lys-Ala-Lys-Asn- を含むものである請求項１に記載のインターロイキン６
吸着材。 - 【請求項６】 Ａが 式（９）：-Pro-Thr-Thr-Asn-Ala-Ser-Leu-Leu-Thr-Lys
-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp- を含むものである請求項１に記載のインターロイキン６
吸着材。 - 【請求項７】 請求項１〜６のいずれかに記載のインタ
ーロイキン６吸着材をカラムに充填したものであること
を特徴とするインターロイキン６吸着材。 - 【請求項８】 一般式（１）：Ｈ−Ａ−Ｘ （式中、Ａは以下の式（３）〜（５）及び式（７）〜
（９）のいずれかで示されるアミノ酸配列を含むペプチ
ドのＮ末端から水素原子を１個除き、且つ該ペプチドの
Ｃ末端から水酸基を１個除いた２価の基を表し、 Ｘは水酸基またはカルボキシ保護基を表す。但し、Ａに
おいて該アミノ酸中の遊離のメルカプト基は、メルカプ
ト保護基で保護されていてもよい。）で示されるペプチ
ド類または生理学的に許容されるその塩類。 式（３）：-Lys-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln
-Asp-Met-Thr-Thr-His- 式（４）：-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp
-Met-Thr-Thr-His- 式（５）：-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp
-Met-Thr-Thr-His-Leu-Ile-Leu-Arg- 式（７）：-Gly-Ile-Ser-Ala-Leu-Arg-Lys-Glu-Thr-Cys
-Asn-Lys-Ser-Asn-Met-Cys- 式（８）：-Ala-Arg-Ala-Val-Gln-Met-Ser-Thr-Lys-Val
-Leu-Ile-Gln-Phe-Leu-Gln-Lys-Lys-Ala-Lys-Asn- 式（９）：-Pro-Thr-Thr-Asn-Ala-Ser-Leu-Leu-Thr-Lys
-Leu-Gln-Ala-Gln-Asn-Gln-Trp-Leu-Gln-Asp-
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6117260A JPH07324098A (ja) | 1994-05-30 | 1994-05-30 | インターロイキン６吸着材、及びペプチド類または生理学的に許容されるその塩類 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6117260A JPH07324098A (ja) | 1994-05-30 | 1994-05-30 | インターロイキン６吸着材、及びペプチド類または生理学的に許容されるその塩類 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07324098A true JPH07324098A (ja) | 1995-12-12 |
Family
ID=14707363
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6117260A Withdrawn JPH07324098A (ja) | 1994-05-30 | 1994-05-30 | インターロイキン６吸着材、及びペプチド類または生理学的に許容されるその塩類 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07324098A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997048728A1 (en) * | 1996-06-20 | 1997-12-24 | Koster, Henk, Wilhelmus | Il-6 and il-6-receptor derived peptides having il-6 antagonistic or agonistic activity |
-
1994
- 1994-05-30 JP JP6117260A patent/JPH07324098A/ja not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997048728A1 (en) * | 1996-06-20 | 1997-12-24 | Koster, Henk, Wilhelmus | Il-6 and il-6-receptor derived peptides having il-6 antagonistic or agonistic activity |
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
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