JPH07316190A - ペプチド化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 血液脳関門のＡｂｓｏｒｐｔｉｖｅ Ｍｅｄ
ｉａｔｅｄ Ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ（ＡＭＥ）への認
識性を高めることにより、脳移行性が改善されたペプチ
ド化合物を提供すること。 【構成】 式 Ｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ａ_n−ＮＨ（Ｃ
Ｈ₂）_mＮＨ₂、Ｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−ＭｅＡｒｇ−Ａ_n−
ＮＨ（ＣＨ₂）_mＮＨ₂およびＲ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａ_n−
ＮＨ（ＣＨ₂）_mＮＨ₂ （式中、Ｒはアルキル基を示し、
Ａはα−アミノ酸残基若しくはそのα−Ｎ−アルキル誘
導体または同一若しくは異なった２〜１０個のα−アミ
ノ酸残基若しくはそのα−Ｎ−アルキル誘導体で形成さ
れたペプチドを示し、ｍは２〜１０の整数を示し、ｎは
０または１を示す。）で表されるペプチド化合物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、血液脳関門を介しての
Ａｂｓｏｒｐｔｉｖｅ ＭｅｄｉａｔｅｄＥｎｄｏｃｙ
ｔｏｓｉｓ（ＡＭＥ）を利用することにより、脳移行性
が改善されたペプチド化合物に関する。

【０００２】

【従来の技術】脊椎動物の脳の血液脳関門の存在によっ
て、血液から体内の各組織へ容易に到達可能なペプチド
化合物であっても、そのほとんどは血液から脳への移行
に制限を受けている。

【０００３】現在、ペプチド化合物の中には強い血圧低
下、鎮痛、抗精神等をはじめとして様々な薬理作用を有
するものが数多く知られており、これらを薬物として有
用せしめるため、脳への移行させる方法が種々試みられ
ている。

【０００４】最も汎用されているものはカテーテルを脳
室内に設置し、ペプチド化合物を血液脳関門を介するこ
となく脳内へ投与するものである。しかしながら、この
方法ではカテーテルを設置した脳室部位の表面の一部分
にしかペプチド化合物を送達することはできず、脳組織
の深層部および脳内全体に送達することはできない。ま
た、カテーテルの設置は患者にとって非常に危険性の高
いものである。

【０００５】血液脳関門を迂回し脳内へペプチド化合物
を送達せしめる他の方法の一つは、ペプチド化合物を高
浸透圧液とともにペプチド化合物を動脈注入し、高浸透
圧液により血液脳関門すなわち毛細血管内皮細胞の密着
結合を開き、開かれた細胞間間隙を通して脳内へ送達さ
せるというものである。しかしながらこの方法は毛細血
管に損傷を与える可能性を有するという問題がある。

【０００６】これらのことから、血液脳関門を介して脳
内に均一にペプチド化合物を送達できる安全な方法の開
発が望まれ、種々の方法が検討されている。この代表的
なものとしては、特公平３−５００６４４号に記載され
る、蛋白をカチオン化することにより血液脳関門の透過
性を向上させ、脳内へ送達するという方法がある。しか
しながら、この方法では血液脳関門透過性の向上に有利
な蛋白の等電点についてはほぼ特定できたものの、構造
的な特徴についてまでは言及することができず、特に医
薬品としての期待が大きい低分子の合成ペプチド化合物
の血液脳関門透過性の向上に関して充分な情報を与える
には至っていない。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、血液脳関門
のＡＭＥへの認識性を高めることにより、脳移行性が改
善されたペプチド化合物を提供することを目的とする。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明は、分子内にある
特定のアミノ酸、就中Ｎ末端をＲ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−
（Ｒ＝アルキル基）とし、かつカチオン性のペプチド化
合物のＣ末端に−ＮＨ（ＣＨ₂）_mＮＨ₂（ｍは２〜１０
の整数）構造を導入することにより、飛躍的にＡＭＥへ
の認識性を高め、脳移行性の改善が図れることに成功
し、完成されたものである。

【０００９】本発明は、式 Ｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ａ_n−
ＮＨ（ＣＨ₂）_mＮＨ₂ 、Ｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−ＭｅＡｒ
ｇ−Ａ_n−ＮＨ（ＣＨ₂）_mＮＨ₂およびＲ−Ｔｙｒ−Ｌｅ
ｕ−Ａ_n−ＮＨ（ＣＨ₂）_mＮＨ₂（式中、Ｒはアルキル基
を示し、Ａはα−アミノ酸残基若しくはそのα−Ｎ−ア
ルキル誘導体またはα−アミノ酸残基若しくはそのα−
Ｎ−アルキル誘導体で形成されたアミノ酸数２〜１０の
ペプチドを示し、ｍは２〜１０の整数を示し、ｎは０ま
たは１を示す。）で表されるペプチド化合物である。

【００１０】本発明において、アルキル基とは炭素原子
数１〜５のアルキル基である。これらは、たとえばメチ
ル基、エチル基、イソプロピル基、ブチル基などであ
り、好ましくはメチル基である。Ａの定義におけるα−
アミノ酸残基とは、そのＣ末端およびＮ末端においてペ
プチド結合したα−アミノ酸の残基を意味する。これら
のα−アミノ酸としては、たとえばＡｒｇ、Ｌｅｕ、
（Ｄ）−Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｌｙｓ、Ｇ
ｌｙなどが挙げられる。また、そのα−Ｎ−アルキル誘
導体としては、α−Ｎ位に炭素原子数１〜３のアルキル
基が置換したアミノ酸、たとえばＭｅＡｒｇ、ＭｅＴｙ
ｒなどの残基が挙げられる。Ａの定義におけるペプチド
は、前記α−アミノ酸残基またはそのα−Ｎ−アルキル
誘導体が任意の順序でペプチド結合したものを意味す
る。

【００１１】本発明においては、ペプチドを構成するア
ミノ酸はＤ体およびＬ体を含有するが、特に提示しない
かぎりはＬ体を意味するものとする。

【００１２】本発明の好ましい化合物は、前記式におい
てｍが５〜８の整数である化合物である。また、等電点
は１０〜１３に調節された化合物が好ましく、分子量は
１２００以下が好ましい。

【００１３】本発明に含まれる代表的な化合物を下記に
示すが、本発明はこれらに限定されるものではない。 ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＮＨ（ＣＨ₂）₈ＮＨ₂ ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−（Ｄ）−Ｌｅｕ−ＮＨ（ＣＨ₂）₄
ＮＨ₂ ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−（Ｄ）−Ｌｅｕ−ＮＨ（ＣＨ₂）₈
ＮＨ₂ ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＭｅＡｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ（ＣＨ
₂）₈ＮＨ₂ ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＭｅＡｒｇ−（Ｄ）−Ｌｅｕ−Ｎ
Ｈ（ＣＨ₂）₂ＮＨ₂ ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＭｅＡｒｇ−（Ｄ）−Ｌｅｕ−Ｎ
Ｈ（ＣＨ₂）₄ＮＨ₂ ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＭｅＡｒｇ−（Ｄ）−Ｌｅｕ−Ｎ
Ｈ（ＣＨ₂）₇ＮＨ₂ ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＭｅＡｒｇ−（Ｄ）−Ｌｅｕ−Ｎ
Ｈ（ＣＨ₂）₈ＮＨ₂ ＭｅＴｙｒ−Ｌｅｕ−ＭｅＡｒｇ−（Ｄ）−Ｌｅｕ−Ｎ
Ｈ（ＣＨ₂）₆ＮＨ₂ ＭｅＴｙｒ−Ｌｅｕ−ＭｅＡｒｇ−（Ｄ）−Ｌｅｕ−Ｎ
Ｈ（ＣＨ₂）₈ＮＨ₂ ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＭｅＡｒｇ−（Ｄ）−Ａｒｇ−Ｎ
Ｈ（ＣＨ₂）₈ＮＨ₂ ＭｅＴｙｒ−Ｌｅｕ−（Ｄ）−Ｌｅｕ−（Ｄ）−Ｌｅｕ
−ＮＨ（ＣＨ₂）₈ＮＨ₂

【００１４】本発明のペプチド化合物は、通常用いられ
るペプチド合成法（液相法、固相法など）によって製造
することができる。合成過程においては、一般にアミノ
酸の側鎖官能基はペプチド化学の分野で通常用いられる
保護基で保護されていることが好ましく、該保護基は適
宜の工程で除去される。

【００１５】

【発明の効果】本発明のペプチド化合物は、中枢作用を
有するペプチド化合物の脳移行性の改善のための具体的
な構造修飾，ドラッグデザインに有用な知見を与えるも
のであり、安全かつ確実な脳への送達を可能とするもの
である。

【００１６】

【実施例】次に、実施例および試験例を示し、本発明を
さらに詳細に説明する。なお、以下用いられる略号は下
記を意味する。 Ｚ：ベンジルオキシカルボニル，Ｂｏｃ：ｔ−ブトキシ
カルボニル，ＺＯＳｕ：ベンジルオキシカルボニルオキ
シコハク酸イミド，ＴＥＡ：トリエチルアミンＴＨＦ：
テトラヒドロフラン，ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルボ
ジイミド，ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾー
ル，ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸，ＴＥＳ：トリエチルシ
ラン，ＥＤＣ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミ
ノ）プロピルカルボジイミド，ＮＭＭ：Ｎ−メチルモル
ホリン，ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン，Ｐｙ
ＢｒｏＰ：ブロモトリピロリジノホスホニウムヘキサフ
ルオロホスフェイト，ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルム
アミド，Ｂｚｌ：ベンジル，ＴｓＯＨ：ｐ−トルエンス
ルホン酸，Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメチルオキシカ
ルボニル。

【００１７】実施例１ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＭｅＡｒｇ−（Ｄ）−Ｌｅｕ−Ｎ
Ｈ（ＣＨ 2） 8ＮＨ 2の合成 （１）Ｎ¹−ベンジルオキシカルボニル−１，８−ジア
ミノオクタン・塩酸塩＜１＞の合成 １，８−ジアミノオクタン（２８８ｍｇ，２．００ｍｍ
ｏｌ）をエーテル（２５ｍｌ）に溶かし、氷冷下ＴＥＡ
（１４０μｌ，１．００ｍｍｏｌ）とＺＯＳｕ（２４９
ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）のエーテル溶液（３５ｍｌ）
を１．５時間かけて滴下し、その後１時間攪拌を続け
た。反応終了後エーテルを減圧下に留去し、残渣を少量
のメタノール（５ｍｌ）と１規定塩酸（１００ｍｌ）に
溶かした後、水（２ｍｌ）を加え不溶物をろ別し、ろ液
をダイヤイオンＨＰ２０のカラムに通した。カラムを水
洗した後、５０％メタノールで＜１＞を溶出した。減圧
下溶媒を留去し、得られた結晶性残渣をメタノール−エ
ーテルから再結晶した。収量１２５ｍｇ（７９．８
％）；プリズム晶；ｍｐ １７３．５−１７５℃。

【００１８】（２）Ｎ¹−ベンジルオキシカルボニル−
Ｎ⁸−（Ｎ（α）−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−ロイ
シル）−１，８−ジアミノオクタン＜２＞の合成 Ｂｏｃ−Ｄ−Ｌｅｕ−ＯＨ・Ｈ₂０（１．００ｇ，４．
０１ｍｍｏｌ）をベンゼンに溶かし凍結乾燥した。この
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｌｅｕ−ＯＨと＜１＞（１．１３ｇ，３．
５８ｍｍｏｌ）とＨＯＢｔ（５９６ｍｇ，４．４１ｍｍ
ｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍｌ）に溶かし、氷冷下ＤＣＣ
（９１０ｍｇ，４．４１ｍｍｏｌ）とＴＥＡ（５５８μ
ｌ，４．０１ｍｍｏｌ）を順次加えた。反応混合物を０
℃で１０分間、室温で３．５時間攪拌後、過剰のＤＣＣ
を分解するために酢酸（６９μｌ，１．２ｍｍｏｌ）を
加えさらに１時間攪拌した。反応後生じた沈澱物をろ去
し、ろ液を減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶かし、
１０％クエン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶
液、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥
した。乾燥剤をろ去し、減圧濃縮後得られた油状物にヘ
キサンを加え結晶化させた。この粗結晶をエーテル−ヘ
キサンから再結晶した。収量１．４１ｇ（８０．０
％）；プリズム晶；ｍｐ ５２−５６℃。

【００１９】（３）Ｎ¹−ベンジルオキシカルボニル−
Ｎ⁸−Ｄ−ロイシル）−１，８−ジアミノオクタン＜３
＞の合成 化合物＜２＞（６７０ｍｇ，１．３６ｍｍｏｌ）にジク
ロロメタン−ＴＦＡ（１．５７ｍｌ×２）を加え室温で
１５分間攪拌後、減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶
かし、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で３回、飽和食塩
水で３回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥
剤をろ去し、減圧濃縮した後得られた結晶性残渣を酢酸
エチル−ヘキサンから再結晶した。収量５３４ｍｇ（９
４．２％）；プリズム晶；ｍｐ ７６−７７℃。

【００２０】（４）Ｎ¹−ベンジルオキシカルボニル−
Ｎ⁸−（Ｎ（α）−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ^g−ニト
ロアルギニル−Ｄ−ロイシル）−１，８−ジアミノオク
タン＜４＞の合成 遊離のアミン＜３＞（３．８２ｇ，９．７６ｍｍｏ
ｌ）、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（ＮＯ₂）−０Ｈ・１／２ＡｃＯ
Ｅｔ・１／４Ｈ₂Ｏ（３．９５ｇ，１０．７ｍｍｏ
ｌ）、ＨＯＢｔ（１．５８ｇ，１１．７ｍｍｏｌ）をＤ
ＭＦ（２５ｍｌ）に溶かし、氷冷下ＥＤＣ・ＨＣｌ
（２．２５ｇ，１１．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合
物を０℃で１時間、室温で６時間攪拌した。反応終了後
ＤＭＦを減圧留去した。残渣を酢酸エチルに溶かし、１
０％クエン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、
飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。
乾燥剤をろ去し、ろ液を減圧濃縮後、中圧シリカゲルカ
ラムクロマトグラフィー［シリカゲル２００ｇ，４０×
５５０ｍｍ，クロロホルム−クロロホルム：メタノール
＝２５：１（ｖ／ｖ）］で精製し、油状物を得た。収量
６．８２ｇ（定量的）。

【００２１】（５）Ｎ¹−ベンジルオキシカルボニル−
Ｎ⁸−（Ｎ^g−ニトロアルギニル−Ｄ−ロイシル）−１，
８−ジアミノオクタン塩酸塩＜５＞の合成 化合物＜４＞を１．４規定塩化水素−酢酸（８．４ｍ
ｌ）に溶かし、室温で７０分間攪拌した。反応終了後、
減圧濃縮し、残渣にエーテルを加え結晶化させ、ろ取し
た。収量１．６２ｇ（９７．０％）。

【００２２】（６）Ｎ¹−ベンジルオキシカルボニル−
Ｎ⁸−（２−（２−アザノルボルネニル）−５−（Ｎ−
ニトロ）グアニジノバレリル−Ｄ−ロイシル）−１，８
−ジアミノオクタン＜６＞の合成 ジペプチドアミド塩酸塩＜５＞（２２５ｍｇ，０．３５
８ｍｍｏｌ）を水（２ｍｌ）に溶かし、ＴＬＣで反応を
追跡しながら３時間かけてホルムアルデヒド（２４８μ
ｌ，２．４９ｍｍｏｌ）を４回に分けて加えた。この溶
液に、新たに蒸留したシクロペンタジエン（１４６μ
ｌ，１．７９ｍｍｏｌ）を４０分間に２回に分けて加
え、１００分間攪拌した。反応終了後ヘキサンで過剰の
シクロペンタジエンを除き、飽和炭酸ナトリウム水溶液
で塩基性にした後クロロホルムで抽出、無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥した。乾燥剤をろ去し、減圧濃縮し油状物を
得た。収量２４９ｍｇ（定量的）。

【００２３】（７）Ｎ¹−ベンジルオキシカルボニル−
Ｎ⁸−（Ｎ−メチル−Ｎ^g−ニトロアルギニル−Ｄ−ロイ
シル）−１，８−ジアミノオクタン 塩酸塩＜７＞の合
成 ２−アザノルボルネン誘導体＜６＞をアルゴン雰囲気下
無水ジクロロメタン（２．５ｍｌ）に溶かし、ＴＦＡ
（２．４ｍｌ）、ＴＥＳ（２２７μｌ，１．４３ｍｍｏ
ｌ）を加え７時間攪拌した。反応終了後、減圧濃縮し、
クロロホルム：メタノール：酢酸＝６：１：０．１（ｖ
／ｖ／ｖ）によって失活させた中圧シリカゲルカラムク
ロマトグラフィー（シリカゲル１０ｇ，１３×１２０ｍ
ｍ，クロロホルム：メタノール：酢酸＝６：１：０．１
（ｖ／ｖ／ｖ））で精製した。このＴＦＡ塩を酢酸エチ
ルに溶かし飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で洗浄
後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤をろ去し、
減圧濃縮後、少量のメタノールに溶かし、１２．５規定
塩化水素−メタノールを加えた。減圧濃縮後、エーテル
を加えて結晶化させ、ろ取した。収量２２５ｍｇ（７
３．３％）。

【００２４】（８）Ｎ¹−ベンジルオキシカルボニル−
Ｎ⁸−（Ｎ（α）−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ（α）
−メチル−Ｎ^g−ニトロアルギニル−Ｄ−ロイシル）−
１，８−ジアミノオクタン＜８＞の合成 ２−アザノルボルネン誘導体＜７＞（８９９ｍｇ，１．
３４ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（６．７ｍｌ）に
溶かし、ＴＦＡ（６．７ｍｌ）、ＴＥＳ（６３６μｌ，
４．０２ｍｍｏｌ）を加えアルゴン雰囲気下４時間攪拌
した。反応終了後クロロホルムで希釈し、飽和炭酸水素
ナトリウム水溶液を加え塩基性にした後、クロロホルム
層を分離し、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウム
で乾燥した。乾燥剤をろ去し、減圧濃縮した。この粗生
成物（８１３ｍｇ，１．３４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ−水
（５０ｍｌ（１：１ｖ／ｖ））に溶かし、氷冷下炭酸水
素ナトリウム（２４８ｍｇ，２．９５ｍｍｏｌ）、Ｂｏ
ｃ₂Ｏ（３３７μｌ，１．４７ｍｍｏｌ）を加え攪拌し
た。反応混合物を０℃で５分間、室温で６時間放置し
た。反応終了後減圧下ＴＨＦを留去し、酢酸エチルで抽
出した。この酢酸エチル層を、１０％クエン酸水溶液、
飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で洗浄後、無水硫
酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤をろ去し減圧濃縮後、
中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル
５０ｇ，２５×３００ｍｍ，クロロホルム：メタノール
＝３０：１（ｖ／ｖ））によって、２回精製した。収量
５１７ｍｇ（５４．６％（２段階））。

【００２５】（９）Ｎ¹−ベンジルオキシカルボニル−
Ｎ⁸−（Ｎ（α）−メチル−Ｎ^g−ニトロアルギニル−Ｄ
−ロイシル）−１，８−ジアミノオクタン 塩酸塩＜９
＞の合成 化合物＜８＞（５０９ｍｇ，０．７２０ｍｍｏｌ）を
１．４規定塩化水素−酢酸（７．７ｍｌ）に溶かし、室
温で１時間攪拌した後、減圧濃縮し、得られた残渣にエ
ーテルを加え結晶化させ、これをろ取した。収量３９８
ｍｇ（８６．０％）。

【００２６】（１０）Ｎ¹−ベンジルオキシカルボニル
−Ｎ⁸−（Ｎ（α）−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ^g−ニ
トロアルギニル−Ｎ（α）−メチル−Ｎ^g−ニトロアル
ギニル−Ｄ−ロイシル）−１，８−ジアミノオクタン＜
１０＞の合成 Ｂｏｃ−Ａｒｇ（ＮＯ₂）−ＯＨ・１／２ＡｃＯＥｔ・
１／４Ｈ₂Ｏ（７６．２ｍｇ，０．２０７ｍｍｏｌ）を
ＤＭＦ（０．５ｍｌ）に溶かし、氷−食塩で冷却下ＥＤ
Ｃ・ＨＣｌ（３９．７ｍｇ，０．２０７ｍｍｏｌ）を加
え１時間攪拌した。一方、化合物＜９＞を酢酸エチルに
溶かし、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で
洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤をろ去
し減圧濃縮後、得られた残渣（４１．９ｍｇ，６９．１
μｍｏｌ）をＤＭＦ（０．５ｍｌ）に溶かした。この溶
液を上記のＤＭＦ溶液に加え、終夜攪拌した。反応終了
後、減圧濃縮し、酢酸エチルに溶かし、飽和炭酸水素ナ
トリウム水溶液、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水で
洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤をろ去
し、減圧濃縮後、中圧シリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー（シリカゲル１０ｇ，１０×２００ｍｍ，クロロホ
ルム→クロロホルム：メタノール＝２０：１（ｖ／
ｖ））によって精製し、ジオキサンを加え凍結乾燥し
た。収量５４．３ｍｇ（８８．１％）。

【００２７】（１１）Ｎ¹−ベンジルオキシカルボニル
−Ｎ⁸−（Ｎ^g−ニトロアルギニル−Ｎ（α）−メチル−
Ｎ^g−ニトロアルギニル−Ｄ−ロイシル）−１，８−ジ
アミノオクタン＜１１＞の合成 化合物＜１０＞（２０２ｍｇ，０．２２２ｍｍｏｌ）を
ＴＦＡ（３２０μｌ）に溶かし、室温で１５分間攪拌
後、減圧濃縮した。得られた油状物を酢酸エチルに溶か
し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄
し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤をろ去し、
減圧濃縮した。収率１３５ｍｇ（７５．０％）。

【００２８】（１２）Ｎ（α）−ベンジルオキシカルボ
ニル−Ｎ（α）−メチル−Ｏ−ベンジル−チロシン＜１
２＞の合成 Ｚ−ＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ（２０８ｍｇ，０．５
００ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１．５ｍｌ）に溶かし、
氷冷下ヨウ化メチル（１１６ｍｇ，４．００ｍｍｏｌ）
および水素化ナトリウム（６０％ｏｉｌ ｓｕｓｐｅｎ
ｓｉｏｎ）（３６ｍｇ，０．９０ｍｍｏｌ）を加えた。
０℃で１５分間攪拌後、室温に戻し、さらに終夜攪拌し
た。反応終了後、１規定塩酸（３ｍｌ）を加え、減圧下
ＴＨＦを留去した。油状残渣を酢酸エチルに溶かし、飽
和食塩水で３回洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し
た。乾燥剤をろ去し、減圧下酢酸エチルを留去後、得ら
れた残渣に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、析出
した結晶をろ取した。この結晶に、１規定塩酸と酢酸エ
チルを加えよく振り混ぜた後、酢酸エチル層を分離し、
飽和食塩水で３回洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥
した。乾燥剤をろ去し、ろ液を減圧濃縮した。得られた
油状残渣にヘキサンを加え結晶化させ、これを酢酸エチ
ル−ヘキサンから再結晶した。収量１５２ｍｇ（７２．
５％），ｍｐ９３−９４℃（６６℃で半融）。

【００２９】（１３）Ｎ¹−ベンジルオキシカルボニル
−Ｎ⁸−（Ｎ（α）−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ
（α）−メチル−Ｏ−ベンジル−チロシル−Ｎ^g−ニト
ロアルギニル−Ｎ（α）−メチル−Ｎ^g−ニトロアルギ
ニル−Ｄ−ロイシル）−１，８−ジアミノオクタン＜１
３＞の合成 化合物＜１１＞（１３．０ｍｇ，１６．１μｍｏｌ）と
酸成分＜１２＞（７．４ｍｇ，１７．７μｍｏｌ）、Ｈ
ＯＢｔ（２．４ｍｇ，１７．７μｍｏｌ）をＤＭＦに溶
かし、氷冷下ＥＤＣ・ＨＣｌ（３．４ｍｇ，１７．７ｍ
ｍｏｌ）を加え１時間攪拌した。反応終了後、減圧下Ｄ
ＭＦを留去した。残渣を酢酸エチルに溶かし、１Ｍ塩酸
水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で洗浄
後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤をろ去し、
減圧濃縮後、中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー
（シリカゲル１０ｇ，１０×２００ｍｍ，クロロホル
ム：メタノール＝１２：１（ｖ／ｖ））によって精製
し、ジオキサンを加え凍結乾燥した。収量１９．０ｍｇ
（９５．０％）。

【００３０】（１４）Ｎ¹−（Ｎ（α）−メチルチロシ
ルアルギニル−Ｎ（α）−メチルアルギニル−Ｄ−ロイ
シル）−１，８−ジアミノオクタン・４塩酸塩（ＭｅＴ
ｙｒ−Ａｒｇ−ＭｅＡｒｇ−（Ｄ）−Ｌｅｕ−ＮＨ（Ｃ
Ｈ₂）₈ＮＨ₂・４ＨＣｌ）の合成 完全保護体＜１３＞（５３９ｍｇ，１．４４６ｍｇ）を
メタノール（４８ｍｌ）と１規定塩酸水溶液（２．２３
ｍｌ，２．２３ｍｍｏｌ）に溶かし、パラジウム黒（１
００ｍｇ）を加え、２５℃で水素を通じた。３日後、パ
ラジウム黒をろ去し、減圧濃縮した。得られた粗生成物
をＨＰＬＣ（ＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ１８ＡＲ；２０ｍ
ｍ×２５０ｍｍ，ＭｅＣＮ−０．１％ＴＦＡ，１５％−
２５％（０．５％／ｍｉｎ））によって精製後、塩化水
素−酢酸を加え凍結乾燥した。収量２１７ｍｇ（５３．
７％）。

【００３１】［α］_D ²⁵：−１８．３°（ｃ＝１．０
２，ＭｅＯＨ） ＦＡＢ−ＭＳ：７６１．６［Ｍ＋Ｈ］^{+ 1} Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ（ｐｐｍ）：０．９４
（６Ｈ，ｄ×２），１．３５（８Ｈ，ｍ），１．５６−
１．６４（４Ｈ，ｍ），１．５６−１．６４（４Ｈ，
ｍ，），１．６４（１Ｈ，ｍ，），１．８７−１．９０
（４Ｈ，ｍ，），２．６４（３Ｈ，ｓ），２．９８（３
Ｈ，ｍ），２．９３，３．１１（４Ｈ，ｔ×２），４．
１１（１Ｈ，ｍ），４．３８（１Ｈ，ｍ），４．８０
（１Ｈ，ｍ），４．９５（１Ｈ，ｍ），６．７５，７．
０８（４Ｈ，ｄ×２）。

【００３２】実施例２ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＮＨ（ＣＨ 2） 8ＮＨ 2の合成 （１）Ｎ¹−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ⁸−（Ｎ
（α）−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ^g−ニトロアルギ
ニル）−１，８−ジアミノオクタン＜１４＞の合成 化合物＜１＞（３５５ｍｇ，１．１３ｍｍｏｌ），Ｂｏ
ｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ＯＨ（５３１ｍｇ，１．２４ｍ
ｍｏｌ），ＨＯＢｔ（１６８ｍｇ，１．２４ｍｍｏｌ）
をＤＭＦ（７ｍｌ）に溶かし、氷冷下ＥＤＣ・ＨＣｌ
（２３８ｍｇ，１．２４ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１９６
ｍｌ，１．１３ｍｍｏｌ）を加え、０℃で２０分、室温
で１００分間攪拌した。反応終了後、減圧下ＤＭＦを留
去した。残渣を酢酸エチルに溶かし、１０％クエン酸水
溶液、飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水で洗浄後、
無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤をろ去し、減圧
濃縮後、中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シ
リカゲル４０ｇ，クロロホルム：メタノール＝１９：１
（ｖ／ｖ））で精製した。得られた油状物にヘキサンを
加え結晶化させ、ろ取した。収量６８６ｍｇ（８８．３
％）。

【００３３】（２）Ｎ¹−ベンジルオキシカルボニル−
Ｎ⁸−（Ｎ^g−トシルアルギニル）−１，８−ジアミノオ
クタン＜１５＞の合成 化合物＜１４＞（４７２ｍｇ，０．６８５ｍｍｏｌ）を
ＴＦＡ（７９２μｌ）に溶かし１５分間攪拌後、減圧濃
縮した。得られた油状物を酢酸エチルに溶かし、飽和炭
酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、無水硫
酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤をろ去し、減圧濃縮し
た。収量３９９ｍｇ（９９．０％）。 （３）Ｎ¹−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ⁸−（Ｎ
（α）−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ（α）−メチル
−Ｏ−ベンジルチロシル−Ｎ^g−トシルアルギニル）−
１，８−ジアミノオクタン＜１６＞の合成 化合物＜１５＞（３９９ｍｇ，０．６７８ｍｍｏｌ），
Ｚ−ＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ（３１２ｍｇ，０．０
７４５ｍｍｏｌ），ＨＯＢｔ（１０１ｍｇ，０．７４５
ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍｌ）に溶かし、氷冷下ＥＤＣ
・ＨＣｌ（１４３ｍｇ，０．７４５ｍｍｏｌ）を加え、
０℃で１０分、室温で３０分間攪拌した。反応終了後、
減圧下ＤＭＦを留去した。残渣を酢酸エチルに溶かし、
１Ｍ塩酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム、飽和食塩水
で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤をろ
去し、減圧濃縮後、中圧シリカゲルカラムクロマトグラ
フィー（シリカゲル３０ｇ，クロロホルム：メタノール
＝１９：１（ｖ／ｖ））で精製した。収量６０９ｍｇ
（９０．８％）。

【００３４】（４）Ｎ¹−（Ｎ（α）−メチルチロシル
アルギニル）−１，８−ジアミノオクタン・３塩酸塩
（ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＮＨ（ＣＨ 2） 8ＮＨ 2・３ＨＣ
ｌ）の合成 化合物＜１６＞（３１６ｍｇ，０．３１９ｍｍｏｌ）に
アニソール（２．８ｍｌ）を加え、−７０℃でＨＦ（２
０ｍｌ）を導入した。０℃で６０分攪拌した後、０℃で
ＨＦを留去した。残渣に４％酢酸水溶液とエーテルを加
え、水層を分離後、Ｄｏｗｅｘ １×８（ＡｃＯ ｆｏ
ｒｍ）に通し、これを凍結乾燥した。得られた粗生成物
をＨＰＬＣ（ＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ１８ＡＲ ２０×
２５０ｍｍ，１０−４０％（２％／ｍｉｎ）−６０％
（４％／ｍｉｎ）ＭｅＣＮ−０．１％ＴＦＡ，８．０ｍ
ｌ／ｍｉｎ）で精製した。収量１３８ｍｇ（７４．０
％）。

【００３５】［α］_D ²⁰：＋４．０°（ｃ＝０．９３，
ＭｅＯＨ） ＦＡＢ−ＭＳ：４７８．５［Ｍ＋Ｈ］^{+ 1} Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ（ｐｐｍ）：１．３６
（８Ｈ，ｍ），１．４９（２Ｈ，ｍ），１．６４（４
Ｈ，ｍ），１．６４−１．８７（２Ｈ，ｍ），２．６３
（３Ｈ，ｓ），２．９０，３．１７（４Ｈ，ｍ），３．
０８−３．２１（２Ｈ，ｍ），３．０８−３．２１（２
Ｈ，ｍ），４．０７（１Ｈ，ｍ），４．３４（１Ｈ，
ｍ），６．７６，７．０７（４Ｈ，ｄ×２），４．０７
（１Ｈ，ｍ），４．３４（１Ｈ，ｍ），６．７６，７．
０７（４Ｈ，ｄ×２）。

【００３６】実質的に実施例１または実施例２と同様に
して、相当する原料を用い下記の化合物を得た。

【００３７】ＭｅＴｙｒ−Ｌｅｕ−ＭｅＡｒｇ−（Ｄ）
−Ｌｅｕ−ＮＨ（ＣＨ 2） 8ＮＨ 2 ［α］_D ²⁰：−２３．３°（ｃ＝０．７５０，ＭｅＯ
Ｈ） ＦＡＢ−ＭＳ：７１８．７［Ｍ＋Ｈ］^{+ 1} Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：０．９５（６
Ｈ，ｍ），０．９５（６Ｈ，ｍ），１．３５（８Ｈ，
ｍ），１．５９（４Ｈ，ｍ），１．５９（２Ｈ，ｍ），
１．５９（１Ｈ，ｍ），１．５９（２Ｈ，ｍ），１．５
９−１．９５（２Ｈ，ｍ），２．６２（３Ｈ，ｓ），
２．９０−３．１３（４Ｈ，ｍ），３．０４（３Ｈ，
ｍ），３．１３（２Ｈ，ｍ），３．２３（２Ｈ，ｔ），
４．０７（１Ｈ，ｍ），４．３６（１Ｈ，ｍ），４．９
０（１Ｈ，ｍ），４．９０（１Ｈ，ｍ），６．７６−
７．０９（４Ｈ，ｄ×２）

【００３８】Ｈ−ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＭｅＡｒｇ−
（Ｄ）−Ｌｅｕ−ＮＨ（ＣＨ 2） 8ＮＨ 2 ［α］_D ²⁶：−１５．３°（ｃ＝０．８１，ＭｅＯＨ） ＦＡＢ−ＭＳ：８０４．９［Ｍ＋Ｈ］^{+ 1} Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．３４（８
Ｈ，ｍ），１．６３（４Ｈ，ｍ），１．６３（２Ｈ，
ｍ），１．６３（２Ｈ，ｍ），１．６３（２Ｈ，ｍ），
１．６３−２．０１（２Ｈ，ｍ），１．６３−２．０１
（２Ｈ，ｍ），１．６３−２．０１（２Ｈ，ｍ），２．
６３（３Ｈ，ｓ），２．８９−３．０４（４Ｈ，ｍ），
２．８９−３．０４（４Ｈ，ｍ），２．９９（３Ｈ，
ｓ），３．２０（２Ｈ，ｍ），３．２０（２Ｈ，ｍ），
４．０８（１Ｈ，ｍ），４．８０（１Ｈ，ｍ），４．９
８（１Ｈ，ｍ），６．７６，７．０９（２Ｈ，ｄ×２）

【００３９】Ｈ−ＭｅＴｙｒ−Ｌｅｕ−（Ｄ）−Ｌｅｕ
−（Ｄ）−Ｌｅｕ−ＮＨ（ＣＨ 2） 8ＮＨ 2 ［α］_D ²⁸：＋４１．３°（ｃ＝０．９２，ＭｅＯＨ） ＦＡＢ−ＭＳ：６６１．４［Ｍ＋Ｈ］^{+ 1} Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：０．９７（６
Ｈ，ｍ），０．９７（６Ｈ，ｍ），０．９７（６Ｈ，
ｍ），１．３２（８Ｈ，ｍ），１．４８−１．６５（２
Ｈ，ｍ），１．４８−１．６５（１Ｈ，ｍ），１．４８
−１．６５（１Ｈ，ｍ），１．４８−１．６５（１Ｈ，
ｍ），１．４８−１．６５（１Ｈ，ｍ），１．４８−
１．６５（１Ｈ，ｍ），１．６５（４Ｈ，ｍ），２．６
５（３Ｈ，ｍ），２．９０−３．１２（２Ｈ，ｍ），
２．９０−３．１２（２Ｈ，ｍ），３．８９（１Ｈ，
ｍ），４．３７（１Ｈ，ｓ），４．３７（１Ｈ，ｓ），
４．３７（１Ｈ，ｓ），６．７８，７．１２（４Ｈ，
ｄ）

【００４０】Ｈ−ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＮＨ（ＣＨ 2） 5
ＮＨ 2 ［α］_D ²⁶：＋１２．５°（ｃ＝１．１４，ＭｅＯＨ） ＦＡＢ−ＭＳ：４３６．３［Ｍ＋Ｈ］^{+ 1} Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．１４（８
Ｈ，ｍ），１．５２−１．６６（２Ｈ，ｍ），１．５２
−１．６６（１Ｈ，ｍ），１．６６−１．８３（２Ｈ，
ｍ），２．６７（３Ｈ，ｓ），２．９５，３．１７（４
Ｈ，ｍ），３．１７−３．２０（２Ｈ，ｍ），３．１７
−３．２０（２Ｈ，ｍ），４．１５（１Ｈ，ｍ），４．
３４（１Ｈ，ｍ），６．７７，７．１２（４Ｈ，ｄ×
２）

【００４１】試験例１［血液脳関門透過性］ 評価は、寺崎らによる方法（Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．第９
巻，Ｎｏ．４，第５２９〜５３４頁，１９９２年）に従
い、血液脳関門のｉｎ ｖｉｔｒｏモデル組織となりう
る脳毛細血管内皮細胞（細胞）への内在化量により行っ
た。細胞内内在化量が多いほど高い血液脳関門透過性を
示す。

【００４２】細胞は、寺崎らによる方法（Ｊ．Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．第２５８巻，第９３２
〜９３７頁，１９９１年）に従い、新鮮なウシ脳を酵素
処理、続いて遠心分画し脳毛細血管内皮細胞を単離し、
培養皿上で１１日間培養することにより調製した。

【００４３】実験にはペプチドのＴｙｒ残基をクロラミ
ンＴ法により¹²⁵Ｉ標識化したものを用いた。

【００４４】¹²⁵Ｉ−標識化を施された本発明の下記化
合物（１〜４）をＨｅｐｅｓ緩衝液（ｐＨ７．４）に溶
解し、細胞と３７℃で６０分間インキュベーションして
化合物を細胞内に取り込ませ、または表面に結合させた
後、細胞表面を４℃の酢酸−バルビタール酸性緩衝液
（ｐＨ３．０）にて１０分間洗浄することで細胞表面に
結合していた化合物を除去し、その後培養皿上の細胞を
１規定水酸化ナトリウム水溶液を加え６０分間放置する
ことにより細胞を溶解し、その¹²⁵Ｉ放射活性を測定す
ることにより細胞内内在化放射活性を測定した。対照と
して¹²⁵Ｉ−標識化を施された下記５および６の化合物
についても同様の操作を行った。 １；ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＭｅＡｒｇ−（Ｄ）−Ｌｅｕ
−ＮＨ（ＣＨ₂）₈ＮＨ₂ ２；ＭｅＴｙｒ−Ｌｅｕ−ＭｅＡｒｇ−（Ｄ）−Ｌｅｕ
−ＮＨ（ＣＨ₂）₈ＮＨ₂ ３；ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＭｅＡｒｇ−（Ｄ）−Ａｒｇ
−ＮＨ（ＣＨ₂）₈ＮＨ₂ ４；ＭｅＴｙｒ−Ｌｅｕ−（Ｄ）−Ｌｅｕ−（Ｄ）−Ｌ
ｅｕ−ＮＨ（ＣＨ₂）₈ＮＨ₂ ５；ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＭｅＡｒｇ−（Ｄ）−Ｌｅｕ
−ＮＨＣ₂Ｈ₅ ６；ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＭｅＡｒｇ−（Ｄ）−Ｌｅｕ
−ＯＨ 結果を表１に示した。

【００４５】

【表１】

【００４６】表１に示すとおり、１の化合物は、ほぼ同
じ等電点，分子量を有する５および６の化合物のそれぞ
れ１５．３倍，４２．３倍と明らかに高い細胞内内在化
量を示した。また、同様に、２の化合物は５および６の
化合物のそれぞれ４．７倍，１２．９倍、３の化合物は
５および６の化合物のそれぞれ９．０倍，２５．０倍、
４の化合物は５および６の化合物のそれぞれ８．８倍，
２４．３倍、と明らかに高い細胞内内在化量を示した。

【００４７】試験例２［血液脳関門透過性］ 試験例１と同様にして、下記化合物について細胞内内在
化量を測定した。 ７；ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＮＨ（ＣＨ₂）₈ＮＨ₂ ８；ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＮＨ（ＣＨ₂）₅ＮＨ₂ ９；ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＮＨＣ₂Ｈ₅ １０；ＭｅＴｙｒ−Ａｒｇ−ＯＨ 結果を表２に示した。

【００４８】

【表２】

【００４９】表２に示すとおり、７の化合物は、ほぼ同
じ等電点，分子量を有する９および１０の化合物のそれ
ぞれ４．８倍，１０．８倍と明らかに高い細胞内内在化
量を示した。また、同様に、８の化合物は９および１０
の化合物のそれぞれ２．６倍，５．８倍、と明らかに高
い細胞内内在化量を示した。

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式 Ｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ａ_n−ＮＨ
   （ＣＨ₂）_mＮＨ₂（式中、Ｒはアルキル基を示し、Ａは
   α−アミノ酸残基若しくはそのα−Ｎ−アルキル誘導体
   または同一若しくは異なった２〜１０個のα−アミノ酸
   残基若しくはそのα−Ｎ−アルキル誘導体で形成された
   ペプチドを示し、ｍは２〜１０の整数を示し、ｎは０ま
   たは１を示す。）で表されるペプチド化合物。
2. 【請求項２】 式 Ｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−ＭｅＡｒｇ−
   Ａ_n−ＮＨ（ＣＨ₂）_mＮＨ₂（式中、Ｒはアルキル基を示
   し、Ａはα−アミノ酸残基若しくはそのα−Ｎ−アルキ
   ル誘導体または同一若しくは異なった２〜１０個のα−
   アミノ酸残基若しくはそのα−Ｎ−アルキル誘導体で形
   成されたペプチドを示し、ｍは２〜１０の整数を示し、
   ｎは０または１を示す。）で表されるペプチド化合物。
3. 【請求項３】 式 Ｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａ_n−ＮＨ
   （ＣＨ₂）_mＮＨ₂（式中、Ｒはアルキル基を示し、Ａは
   α−アミノ酸残基若しくはそのα−Ｎ−アルキル誘導体
   または同一若しくは異なった２〜１０個のα−アミノ酸
   残基若しくはそのα−Ｎ−アルキル誘導体で形成された
   ペプチドを示し、ｍは２〜１０の整数を示し、ｎは０ま
   たは１を示す。）で表されるペプチド化合物。
4. 【請求項４】 Ａが（Ｄ）−Ｌｅｕである請求項１〜３
   記載のペプチド化合物。
5. 【請求項５】 ｍが５〜８の整数である請求項１〜４記
   載のペプチド化合物。
6. 【請求項６】 等電点が１０〜１３に調節された請求項
   １〜５記載のペプチド化合物。
7. 【請求項７】 分子量が１２００以下である請求項１〜
   ５記載のペプチド化合物。