JPH0725760B2 - 抗ウイルス性化合物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 抗ウイルス性化合物としてプリン誘導体の使用は知られ
ている。例えば米国特許第4,027,025号は抗ウイルス性
化合物として９−（２−ヒドロキシエトキシメチル）−
８−アザグアニンおよび９−（２−ベンゾイルオキシエ
トキシメチル）−８−アザグアニンのような８−アザプ
リン誘導体を開示している。

米国特許第4,146,715号は２−アミド−９−（２−アシ
ロキシエトキシメチル）ヒポキサンチンを開示してい
る。

米国特許第4,199,574号は特定の６−および2,6−置換プ
リンの９−（２−ヒドロキシエトキシメチル）および関
連誘導体が抗ウイルス作用を有することを開示してい
る。

米国特許第4,347,360号及び第4,355,032号は９−〔〔２
−ヒドロキシ−１−（ヒドロキシメチル）エトキシ〕メ
チル〕グアニンが抗ウイルス活性を有することを開示し
ている。

コーラら、ジエイ・メド・ケム、第26巻、602−604頁、
1983年〔Colla et al.，J.Med.Chem.，26,602−604（19
83）〕はアサイクロビア（acyclovir）のエステル類を
開示している。

ヨーロッパ特許出願公告第0 095 813号はアサイクロビ
アのエステル類及びエーテル類を開示している。

ヨーロッパ特許出願公告第0 085 424号は９−（1,3−ジ
ヒドロキシ−２−プロポキシメチル）グアニンのアシル
誘導体を開示している。

新規な抗ウイルス性化合物を提供することが本発明の目
的である。本発明のもう一つの目的は、公知の抗ウイル
ス性化合物よりも高い抗ウイルス活性を有する新規化合
物を提供することにある。更にもう一つの目的は、大半
のヘルペスウイルスに対して強い抗ウイルス活性を有す
る化合物を提供し、同時に口部もしくは局部的なヘルペ
スＩ型及びヘルペスII型のようなヘルペスウイルス群の
特定のものの治療において有効性と安全性を有する化合
物、又は生命に脅威を及ぼすヘルペス類（例えば、サイ
トメガロウイルス及び水痘・帯状疱疹ウイルス）につい
ての局所的及び全身的や薬剤を提供することにある。更
に他の目的は、抗マイコプラズマ活性を有する化合物を
提供することである。本発明の更なる目的は、本発明の
新規化合物を効果的に投与できる医薬組成物を提供する
ことである。更に別の目的は、本発明の新規化合物の製
造方法を提供することにある。本発明のこれらの、更に
他の目的は以下の記載から明らかにされるであろう。

本発明によれば、式 〔上記式中、R¹及びR²は であり、R^U3はアリール、置換アリール、ヘテロ環基、
アラルキル、アルコキシアルキル又はアリールオキシア
ルキルであるか、あるいは化合物が式Ｉの化合物である
場合は、一以上のヒドロキシ、アミノ又はカルボキシル
基で置換されているアルキル基であってもよい、R⁸はＨ
である〕の化合物及び薬学上許容されるその塩を提供す
ることができる。

更に、本発明の他の見解によれば、前記式Ｉ又は式IIの
化合物（R¹、R²及びR⁸はそれぞれＨである）を式R³Ｃ
（＝Ｏ）Ｘ（Ｘはカルボキシル活性基である）のアシル
化化合物と反応せしめ、２当量のアシル化化合物が式Ｉ
又はIIの化合物と反応せしめられるまで反応が続けた場
合はジアシル化誘導体が得られることからなる前記式Ｉ
又は式IIの化合物の製造方法を提供するものである。

９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル）グ
アニン、９−（2,3−ジヒドロキシ−１−プロポキシメ
チル）グアニン並びにそれらのアシル及びリン酸エステ
ル誘導体は強力な抗ウイルス活性を有することが見出さ
れた。最初の二つの化合物及びそれらの誘導体はヘルペ
ス型ウイルスに対して特に有効である。９−（1,3−ジ
ヒドロキシ−２−プロポキシメチル）グアニン・環状−
リン酸エステル化合物は、他のDNAウイルス類、例えば
乳頭腫ウイルスに対しても有効である。これらの化合
物、それらのアシル及びリン酸エステル誘導体、それら
の薬学上許容される塩、これらの化合物を含有する医薬
組成物、これらの化合物によるウイルス感染症の治療、
これらの化合物の製造方法、並びにそれらの製造に有用
な新規中間体はすべて開示されている。なお、アシル誘
導体は抗マイコプラズン活性を有している。

本発明の化合物は適当なアセトキシメチルエーテルをジ
アセチルグアニンと反応させ、次に脱保護することによ
つて製造することができる。アセトキシメチルエーテル
は触媒の存在下グリセロールホルマールを酢酸無水物と
反応させることによつて得ることができる。

本発明は抗ウイルス性化合物に関し、更に詳しくは、式
Ｉの９−（2,3−ジヒドロキシ−１−プロポキシメチ
ル）グアニン及び式IIの９−（1,3−ジヒドロキシ−２
−プロポキシメチル）グアニン、並びにそれらのアシル
又はリン酸エステル誘導体に関する。

式Ｉ及びIIの化合物において、いずれかのヒドロキシル
基の水素原子はアシル基で置換されていてもよい。例え
ば、式 の基で置換されてよいが、ここでR³は飽和又はモノ−も
しくは多不飽和であつてもよい炭素原子数１〜20の直鎖
もしくは分岐状アルキル基、アリール、置換アリール、
ヘテロ環基、アラルキル、アルコキシアルキル又はアリ
ールオキシアルキルである。また、いずれかのヒドロキ
シル基の水素原子は式 のホスフエート基で置換されていてもよく、あるいはい
ずれの水素原子も で置換されていてもよく、ここでR⁴及びR⁵はそれぞれ独
立してＨ、薬学上許容される陽イオン、炭素原子数１〜
８の直鎖もしくは分岐状アルキル、アリール、アラルキ
ル、ホスフエート基又はピロホスフエート基である。式
Ｉの化合物において、R³がアルキルである場合、R³基は
一以上のヒドロキシ、アミノ又はカルボキシル基を含有
していてもよい。好ましいR³基の具体例としては−CH(C
H₃)NH₂、−CH₂NH₂、 −CH(CH₂OH)NH₂、−(CH₂)₂COOH、 −CH₂OH、−CH(NH₂)CH₂COOHがある。

好ましくは、アルキル基は炭素原子数１〜10であり、ア
リール基は場合によりハロゲン又は炭素原子数１〜４の
アルキルで置換されているフエニルであり、ヘテロ環基
はピリジル、ピペリジル、フリル、イミダゾリル、テト
ラヒドロフリル又はチエニルであり、アラルキル基はア
ルキル部分が１〜４の炭素原子を有するフエニルアルキ
ルであり、アルコキシアルキル基においていずれのアル
コキシ及びアルキル基を１〜４の炭素原子を有し、アリ
ールオキシアルキル基はアルキル部分が１〜４の炭素原
子を有するフエノキシアルキルであり、薬学上許容され
る陽イオンはナトリウム、カリウム、アンモニウム、ア
ルキル基が１〜４の炭素原子を有するアルキルで置換さ
れたアンモニウム、マグネシウム/2、カルシウム/2又は
アルミニウム/3である。

ここに開示した化合物は、ヘルペス属ウイルスに関連す
る各種疾病及び病気の治療において利点を生じる生物学
的及び化学的特性を有している。特に、式IIの化合物及
び相当するその環状ホスフエート（ヒドロキシル基の水
素が で置換されている）はそれぞれ、効力上大きな利点を有
しており、別個の生物学的メカニズムによつて作用する
ことが判明した。また、使用上の優れた安全性により、
即ち若年者のヘルペス感染症の治療に使用され得る程度
に遺伝子毒性が欠如しているため、式Ｉの化合物が好ま
しい。更に、式Ｉ及びIIの化合物の相当するアシル誘導
体が好ましいが、その理由はそれらが処方上及び薬力学
上の利点を有するからであり、即ちアシル基が経口用又
は局所用の処方上望まれる水溶性又は油溶性を付与する
ことができ、更に腸管吸収又は皮膚角質層の通過を促進
でき、しかも血漿内半減期を伸ばすように作用すること
ができるからである。

式ＩおよびIIの化合物はグリセロールホルマール、式II
Iの化合物が通常優勢な化合物である式 （式中ＲはＨである。）を有する1,8−ジオキサン−５
−オールおよび式 （式中ＲはＨである。）を有する1,3−ジオキソラン−
４−メタノールの混合物から出発して製造することがで
きる。グリセロールホルマール中式IIIおよびIVの比は
Ｈ、チベルト、フレセニウズ（H.Tibert,Fresenius）Z.
Anal.Chem第265巻、第328頁（1973年）によつて57:43で
あることが定量されている。しかしながらこの比はグリ
セロールホルマールの異なる製造法に対して変わること
ができる。種々の比の式IIIおよびIVの化合物を含有す
る混合物が本発明に従つて使用することができることは
理解されるべきである。

グリセロールホルマール（式IIIおよびIVの化合物の混
合物）は好適には式IIIおよびIVの個々の化合物を分離
せずに、ピリジンの存在下酢酸無水物のようなアシル化
剤と反応させることによつてアシル化してＲがアシルで
ある対応するアシルオキシ誘導体を生成する。この混合
物は例えば高性能液体クロマトグラフイ（HPLC）によつ
て分離される。

触媒例えばZnCl₂の存在下ＲがAc（アセチル）である式I
IIを有する化合物を酢酸無水物で処理して式 を有するアセトキシメチル2,3−ジアセトキシ−１−プ
ロピルエーテルを生成する。この反応は発熱であり、好
適には不活性雰囲気例えば窒素中で室温で起る。

次に式Ｖの化合物を精製しそして無溶媒でまたはトリグ
リムのような不活性溶媒中で、イシド等、日本化学会誌
第37巻、第1389頁（1964年）に記載されるように酸性触
媒例えばエタンスルホン酸の存在下、真空下高温で調製
した式 を有するジアセチルグアニンと反応させて粘性油として
式 を有する２−アセタアミド−９−（2,3−ジアセトキシ
−１−プロポキシメチル）ヒポキサンチンVIIIを生成す
る。

次に式VIIIの化合物を例えば還流下好適には不活性雰囲
気例えばN₂中、水性メチルアミンで加熱することによつ
て脱アセチル化し、次いで冷却して式Ｉの化合物を含有
する溶液を生成し、必要に応じて木炭で処理して過す
る。液を濃縮して固体を生成し、水で再結晶して結晶
性生成物を生成する。

式IIの化合物はＲがAcである式IVを有する化合物を触媒
例えばZnCl₂の存在下酢酸無水物と反応させることによ
つて同様の方法で得ることができ、式 を有するアセトキシメチル1,3−ジアセトキシ−２−プ
ロピルエーテルを生成することができる。この反応はＲ
がAcである化合物IIIから化合物Ｖを生成するために用
いた同様の条件下で起る。

次に式VIの化合物を精製しそして式Ｖの化合物をジアセ
チルグアニンと反応させるために用いたのと同様の条件
下で式VIIのジアセチルグアニンと反応させて式IXの２
−アセタミド−９−（1,3−ジアセトキシ−２−プロポ
キシメチル）ヒポキサンチンを粘性油として生成し、式
VIIIの化合物に使用したのと同様の操作によつて結晶化
する。

次に式VIIIの化合物を式Ｉに転化するために使用したの
と同様の処理によつてIXの化合物を式IIの結晶性生成物
に転化する。

また所望によりグリセロールホルマールを式IIIおよびI
V（式中各場合のＲはＨである）を有する成分化合物に
分離し、次に上記で記載したように各分離化合物を処理
することが可能である。

同様に式ＶおよびVIの化合物の混合物をグリセロールホ
ルマールから触媒例えばZnCl₂の存在下酢酸無水物で直
接後者を処理することによつて生成することが可能であ
る。生成混合物はHPLCによつてクロマトグラフイー処理
することができる。分析HPLCによつて式Ｖの化合物だけ
を示している留分を高真空下で濃縮し、次に上記で記載
したように式VIIのジアセチルグアニンと反応させて式V
IIIの化合物を生成し、順次上記で記載したように式Ｉ
の化合物を生成する。

他方、式ＶおよびVIのアセチル中間体を各別々にまたは
混合物として、非極性溶媒中ハロゲン化水素で（ジクロ
ロメタン中塩化水素が好ましい）処理してさらに反応性
のハロゲン誘導体に転化することができ、末端AcOCH₂O
−作用性をXCH₂O−〔式中Ｘはハロゲン（塩素、臭素ま
たはヨウ素）である〕に転換することができる。これら
のハロゲン化合物は、ベンゼン、トルエン、アセトニト
リルまたはジメチルホルムアミドのような非極性または
二極性溶媒中例えば米国特許第4,199,574号の文献に記
載されているようなトリエチルアミンまた粉末炭酸カル
シウムのような酸アクセプターの存在下または不存在下
で、保護されたグアニン〔パー（トリメチルシリル）グ
アニンまたはジアセチルグアニンが二つの好ましい誘導
体である〕とともにアルキル化反応で用いることができ
る。

主として式VIの化合物を含有するクロマトグラフイ画分
をHPLCで再クロマトグラフイ処理し、十分な純度の画分
を混合し、高真空下で濃縮し、次に上記で記載したよう
に式VIIのジアセチルグアニンと反応させて式IXの化合
物を生成し、順次上記で記載したように式IIの化合物に
転化する。

前述の方法の説明はアシル基がアセチルである化合物に
ついて述べたものであるが、一方アシル基が同様に飽和
またはモノ−またはポリ不飽和および所望によりアリー
ル、置換アリール、ヘテロシクリル、アラルキル、アル
コキシアルキルまたはアリールオキシアルキル基で置換
することができる約20個以下の炭素原子を有する直鎖ま
たは分岐鎖アルカノイル基であることができることは理
解されるべきである。

アシル誘導体は、例えばピリジンジメチルホルムアミド
のような適切な共存溶媒の存在下、式Ｉ又はIIの化合物
を適切なアシルハロゲン化物、酸無水物又はその他の活
性化アシル種と反応せしめて製造することが好ましい。
アシルハロゲン化物又は酸無水物との反応において、反
応速度及び収率は、トリエチルアミンのような三級アミ
ンを加えて増大させることができる。４−ジメチルアミ
ノピリジンが効果的な触媒である。他の活性化アシル種
は、例えば1,1′−カルボニルジイミダゾール、Ｎ、
Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミドのような適切な
活性化剤と酸の反応により、あるいはＮ−ヒドロキシス
クシンイミド又は１−ヒドロキシベンゾトリアゾールの
アシル化により、公知の方法によつて製造することがで
きる。アシル基がアミノ、ヒドロキシル又はカルボキシ
ル基を有する場合は、この基はアシル化反応に際し保護
されていなければならない。アミノ基についての好まし
い保護基はベンジルオキシカルボニルであり、ヒドロキ
シル又はカルボキシル基の場合はベンジルである。保護
基は、アシル化後、水素添加分野により離脱させること
が好都合である。

アシクログアノシン、９−（２−ヒドロキシエトキシメ
チル）グアニンに比べて本発明の化合物はさらに溶解性
であり、ウイルス性酵素によつてさらに容易にホスフオ
リル化し、そしてアシクログアノシンより生体内で実質
的に活性が高い。本発明の化合物は抗ヘルペスウイルス
作用を与えるのに有効な用量レベルで、個々にまたは組
合わせて哺乳類または鳥類に抗ウイルス性化合物として
使用することができる。典型的にはかかるレベルは約0.
01〜200mg/Kg/日である。本発明の化合物は経口的に、
局所的にまたは注射による投与に対して受け入れられた
医薬実施に従つて処方することができる。適当な経口用
量形態は錠剤、カプセル剤、エリキシル剤または散剤で
あり、一方例えばリン酸緩衝食塩水または水中の液剤ま
たは懸濁液剤が注射に適当である。適当は局方処方の具
体例はゲル、軟膏、液剤または懸濁液剤である。

本発明の化合物のアシル誘導体（C_1-20）は抗マイコプ
ラズマ作用を有し、豚および鶏のこの疾病の治療または
予防に有用である。

次の実施例は本発明を具体的に説明するものであるが、
それらに限定されるものではない。温度はすべて℃で表
わす。

実施例１ ９−（2,3−ジヒドロキシ−１−プロポキシメチル）グ
アニン A.アセトキシメチル2,3−ジアセトキシ−１−プロピル
エーテル 式IIIおよび式IVの化合物の混合物を含有するグリセロ
ールホルマール17.1ml（20.8g、200ミリモル）の攪拌混
合液に酢酸無水物60ml、氷酢酸6.7mlおよび無水ZnCl₂2.
0gを添加した。混合液をN₂雰囲気下包囲温度で攪拌し
た。すぐにZnCl₂が溶解し、2.3分で溶液の色が薄黄色に
変化しながら強い発熱反応があつた。１時間後発熱反応
が軽減し、薄層クロマトグラフイ（TLC）（1:1および2:
1ヘキサン−エチルアセテート）が明白に完全なそして
きれいな反応を示した。4.5時間後、溶液を高真空で濃
縮した。残留油をジエチルエーテル700mlに取り飽和NaH
CO₃溶液２×100ml次にH₂O100mlで洗浄した。エーテル溶
液をMgSO₄で乾燥し、木炭で脱色し過する。液を高
真空で濃縮して無色の残留物45.8g（92％）を生成す
る。分析HPLC（7:3ヘキサン−エチルアセテート）は式
ＶおよびVIの二つの生成物異性体だけを示した。この生
成物異性体の塊（44.5g）を各11〜11.5gの４つのバツチ
でHPLCに委ねた。作業はすべてシリカゲル（二つのWate
rs Prep−500パツク）、再循環（３サイクル）させなが
ら7:3ヘキサン−酢酸エチル（１分当り250ml流動速度）
および再留分指数検出を用いる同一条件下で行なつた。
留分を各作業に対して同一場所でカツトし、種々の作業
からの留分を収集しながら混合した。ピークの澄明な分
離は再留分指数痕跡量に観察されなかつた。

式Ｖの純粋な化合物として分析HPLCによつて同定された
留分（さらに短い保持時間）を集め高真空で濃縮してNM
R（CDCl₃）がアセトキシメチル2,3−ジアセトキシ−１
−プロピルエーテルに一致する無色の残留脂17.0gを生
成した。

B.2−アセタミド−９−（2,3−ジアセトキシ−１−プロ
ポキシメチル）ヒポキサンチン ジアセチルグアニン（VII）2.61g（11.1ミリモル）、上
記段階Ａからのアセトキシ−１−プロピル−エーテル5.
50g（22.2ミリモル）およびエタンスルホン酸55mgを低
真空下油浴中155〜160°で蒸留アダプターを備えたフラ
スコ中で加熱した。混合液を漸次磁気攪拌させるのに十
分に希釈して蒸留物を収集した。混合液は約45分後均質
になり75分後冷却した。粘性油を酢酸エチル約100mlに
取り、ほとんど白色の結晶の収量1.23g（29％）、m.p.1
62.5〜165°で結晶化するために誘導した。薄層クロマ
トグラフイ（TLC）（9:1CHCl₃−CH₃OH）はシングルスポ
ツトを示した。

C.9−（2,3−ジヒドロキシ−１−プロポキシメチル）グ
アニン 上記段階Ｂからの２−アセタミド−９−（2,3−ジアセ
トキシ−１−プロポキシメチル）ヒポキサンチン（VII
I）1.14g（3.0ミリモル）の溶液をN₂下攪拌しながら40
％水性メチルアミン中還流で１時間加熱し次いで冷却し
た。TLC（80:20:2CHCl₃−CH₃OH−H₂O）はタイトルの化
合物（Ｉ）へ完全な転化を示した。薄橙色溶液を木炭で
処理しスーパーセルで過した。液を濃縮して固体を
生成し、H₂O（２〜３滴のCH₃COOHで約pH6に調節した）
で再結晶してクリーム色の結晶、mp246〜247°分解、68
7mgを生成した。

実施例２ ９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル）グ
アニン A.アセトキシメチル1,3−ジアセトキシ−２−プロピル
エーテル 高真空下で乾燥した後、式VI（さらに長い保持時間）の
含有量の高い実施例の１の段階Ａからの留分を混合して
残留油9.71gを生成し上記で記載したのと同一条件下でH
PLCに委ねた。分析HPLCで定量された十分な純度の式VI
の化合物を含有する留分を混合し高真空下で濃縮してほ
とんど無色の残留油5.10gを生成した。分析HPLCは式Ｖ
の化合物に対する式VIの化合物の比ピークの高さに基づ
いて約15:1を示した。NMR（CDCl₃）はこの異性体比と一
致し、アセトキシメチル1,3−ジアセトキシ−２−プロ
ピルエーテルとしてこの化合物の固定と一致した。

B.A−アセタミド−９−（1,3−ジアセトキシ−２−プロ
ポキシメチル）ヒポキサチン 蒸留アダプターを備えたフラスコ中ジアセチルグアニン
（VIII）3.76g（16ミリモル）、アセトキシメチル1,3−
ジアセトキシ−２−プロピルエーテル（VI）4.96g（20
ミリモル）、エタンスルホン酸40mgおよびトリグリム15
mlの混合液を油浴中低真空下155〜150°で加熱した。混
合液を漸次攪拌するのに十分希釈し、澄明な蒸留液を徐
々に収集した。反応混合液は約75分後澄明な溶液になつ
た。３時間後溶液を冷却し、生成物を結晶化に誘導し
た。放置した後、濃厚な混合液を少量の1,2−ジメトキ
シエタンで希釈した。固体を過で集めた少量の1,2−
ジメトキシエタンで次に酢酸エチルで洗浄してTLC（9:1
CHCl₂−MeOH）で定量された９および７−アルキル化異
性体の混合物からなるクリーム色の結晶3.27gを生成し
た。（９−異性体はこの系で７−異性体よりさらに緩慢
に作業する。）母液はさらに0.65gの物質を生成した。
混合した生成物（3.92gをシリカゲルカラムで２回クロ
マトグラフイ処理（97:3および次に96:4CH₂Cl₂−MeOHで
溶離）した。ほとんど純粋な９−アルキル化異性体を含
有する留分を混合し、濃縮した。最少量の1,2−ジメト
キシエタンで残渣を結晶化して第一生成物665mg（白色
結晶、mp171.5〜172.5°）および第二生成物189mg（mp1
73〜173.5°）を生成した。初期のバツチと比較してTLC
で定量される純粋な９−アルキル化生成物からなる生成
物は両方ともNMRおよび元素分析で十分に特徴付けられ
た。

C.9−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル）グ
アニン 40％メチルアミン（水性）8.5ml中２−アセタミド−９
−（1,3−ジアセトキシ−２−プロポキシメチル）ヒポ
キサンチン838mg（2.2ミリモル）溶液をN₂下緩かな還流
で１時間攪拌した。次いで溶液を冷却し、濃縮乾固し
た。残渣の白色固体を酢酸２滴を含有する最少量H₂Oで
再結晶した。冷蔵庫に放置した後、生成物を過器を集
めた少量のH₂O、次にアセトンで洗浄した。材料を高真
空下75°で３時間乾燥して白色結晶529mg（0.75H₂Oとの
水和に基づいて90％）mp249〜250°分解を生成した。物
質はTLC（80:20:2（CHCl₃−MeOH−H₂O）により均質であ
り、構造はNMRによつて確認された。

実施例３ アセトキシメチル1,3−ジアセトキシ−２−プロピルエ
ーテル A.1,3−ジオキサン−５−イルアセテートおよび1,3−ジ
オキソラン−４−メチルアセテート グリセロルホルマル10.0g（96ミリモル）、ピリジン8.3
5g（105ミリモル）および酢酸無水物20mlを湿気から保
護した周囲温度で攪拌した。2,3分から５日の後、溶液
を真空下で分別蒸留した。最初の留分は主としてピリジ
ン、酢酸および酢酸無水物からなる。生成物塊を56〜57
°（1.1mm）で蒸留した。生成物留分（10.8g）を再循環
させながら3:1ヘキサン−酢酸エチル中シリカゲルで分
取用HPLCによつて５−および６−員環異性体に分離し
た。留分を同定し、分析HPLCによつて純度をチエツクし
た。全体で1,3−ジオキソラン−４−酢酸メチル（より
短い保持時間）3.19g（23％）および1,3−ジオキサン−
５−イルアセテート（より長い保持時間）5.23g（37
％）を得た。構造はNMRで確認した。

B.アセトキシメチル1,3−ジアセトキシ−２−プロピル
エーテル 酢酸無水物12mlおよび氷酢酸1.4mlの混合液中1,3−ジオ
キソラン−４−メチルアセテート6.0g（41ミリモル）お
よび塩化亜鉛0.4gの溶液をN₂下周囲温度で攪拌した。発
熱が起り、１期間後TLC（2:1ヘキサン−酢酸エチル）は
完全な反応を示した。溶液を高真空下濃縮した。生成し
た液体をエーテルに溶解し、NaHCO₃飽和溶液で次にH₂O
で十分に洗浄した。エーテル層をMgSO₄で乾燥し、過
しそして濃縮して式VIの化合物（多量の）および式Ｖの
化合物（少量の）の混合物からなる残留油8.68gを生成
した。この物質を同一バツチからの3.50gと混和した。
粗生成物12.18gの全部を再循環しながらヘキサン−酢酸
エチル7:3中シリカゲルで分取用HPLCによつて精製し
た。留分を分析HPLCで純度をチエツクした。良好な留分
を混和し濃縮して構造VIを有する化合物5.84g（≧90％
純度）を生成した。構造および純度をNMRで確認した。

実施例４ ブロモメチル1,3−ジアセトキシ−２−プロピルエーテ
ル アセトキシメチル1,3−ジアセトキシ−２−プロピルエ
ーテル（250mg、１ミリモル）を臭化水素ガスで前飽和
させたジクロロメタンに０°で溶解させた。混合液を湿
気から防ぎ、０℃で２時間攪拌し次いで過剰の臭化水素
を減らしながら周囲温度に暖めておいた。３時間後溶媒
をアスピレーター真空下除去した。蒸留残渣をジクロロ
メタンの２×10ml定分部で連続して処理し、アスピレー
ター真空下蒸発させた。最後に残留油を臭化水素の強い
臭気がもはや明白でなくなるまで高真空下で乾燥した。
生成した物質を直接アルキル化反応に用いることができ
た。CDCl₃溶液のプロトン磁気共鳴スペクトルはAcOCH₂
からBrCH₂Oまでの変化を表わす適当な低磁場（downfiel
d）シフトを示した。

実施例５ クロロメチル1,3−ジアセトキシ−２−プロピルエーテ
ル 塩化メチレン45ml中アセトキシメチル1,3−ジアセトキ
シ−２−プロピルエーテル4.34g（17.5ミリモル）溶液
を室温でHClの緩やかな流れが通過するように攪拌し
た。２時間後HCl流れを除去した。フラスコに栓をし、
室温で一晩攪拌しておいた。次にフラスコを25〜30°で
水浴中に置き、溶液をN₂の流れでパージし、過剰のHCl
のほとんどを除去した。残存する溶液を回転蒸発によつ
て濃縮した。HClの痕跡量を除去するために残留油をト
ルエンに取り、高真空下室温で濃縮した。この方法を３
回以上繰り返した。室温で真空乾燥後無色の残留油の収
量は3.83g（97％）であつた。NMRスペクトルは生成物に
完全に転化したことを示した。

実施例６ ２−アセタミド−９−（1,3−ジアセトキシ−２−プロ
ポキシメチル）ヒポキサンチン グアニン2.57g（18ミリモル）、硫酸アンモニウム1.8g
およびヘキサメチルジシラザン126mlの混合液をN₂下還
流で攪拌した。固体を徐々に溶解した。２日後溶液を冷
却し、高真空下で濃縮した。粘性の残留油を乾燥トルエ
ン約28mlに溶解し、N₂下で維持して乾燥トルエン12ml中
クロロメチル−1,3−ジアセトキシ−２−プロピルエー
テル5g（22.3ミリモル）溶液を添加した。生成溶液をN₂
下還流で1.5時間加熱した。次いで冷却し、濃縮し、真
空下で乾燥した。粘性の橙色残留油を水30mlおよび重炭
酸ナトリウム飽和溶液30mlで処理した。混合液を蒸気浴
上で５分間暖めながら振盪し、その間に残渣が凝固し
た。冷却後固体をフイルターで収集し、少量の水で洗浄
した。このクリーム色の固体（4.6g）はTLC（80:20:2 C
HCl₃−MeOH−H₂O）でシングルスポツトを示したが、NMR
は７−アルキル化異性体10〜15％さらに所望の９−異性
体を含有することを示した。物質を他の作業からの同様
の物質0.6gと混和し、酢酸無水物184mlに懸濁させた。
混合液を97°で18時間加熱し、その時間によつて固体の
ほとんどすべてが溶解し、そしてTLCが完全なアセチル
化を示した。反応を冷却し、真空下で濃縮した。塩化メ
チレン200mlで残渣を処理して固体を生成し、過によ
つて分離し、塩化メチレンで１回洗浄した。塩化メチレ
ンで再結晶して純粋な９−異性体0.55gを生成した。
液をシリカゲル40gを含有するカラムを通過させた。CH₂
Cl₂−MeOHで溶離して部分精製した生成物4.5gを生成し
た。塩化メチレン（約45ml）で再結晶させて純粋な９−
異性体3.0gを得た。

実施例７ ９−（1,3−ジアセトキシ−２−プロポキシメチル）グ
アニン グアニン50.0g（0.33モル）、硫酸アンモニウム33gおよ
びヘキサメチルジシラザン2.2lの混合液をN₂下還流で３
日間攪拌し、その間に固体の全部が溶解した。次いで溶
媒を減圧下蒸留で除去した。極めて粘性の橙色の残留油
をN₂下アセトキシメチル1,3−ジアセトキシ−２−プロ
ピルエーテル84g（0.34モル）を添加し、フラスコの底
に第二液相を生成した。フラスコは蒸留アダプターを備
えており、混合液を低真空下油浴中で約135°に加熱し
た。数分続く誘導期間の後沸騰が始まり、まもなくかな
り激しくなる。トリメチルシリルアセテート（あらゆる
残渣のヘキサメチルジシラザンとともに）の蒸留は最初
急速に進行するが30分後におそくなつた。２時間後混合
液を90％EtOH1.3lに添加した。混合液を沸騰するまで加
熱し、分離したゴム様物質が扱いやすい固体に変形する
まで維持した。固体（ほとんど独占的にグアニンからな
る8.2g）を熱しながら過によつて除去した。液を一
晩放置し、橙褐色ゴムを分離した。上澄をゴムから傾瀉
し、過し次に少量に濃縮した。濃縮時に分離した固体
をフイルターに集め、H₂Oで次にEtOHで洗浄してクリー
ム色の結晶15.4gを生成した。TLCは部分側鎖脱アセチル
化を示したがNMRによつてこの物質は単独で９−アルキ
ル化異性体であつた。物質はさらに精製せずに脱保護に
適当であつた。

母液および傾瀉によつて除去したゴムをさらに処理して
さらに９−および７−アルキル化異性体（部分的に脱ア
セチル化された）の変化比からなる生成物を生成した。
これらの純度の低い生成物はクロマトグラフイ精製（シ
リカゲル、CH₂Cl₂−MeOHで溶離）に先立つて十分にアセ
チル誘導体（０、０′、N₂−トリアセチル）に転化する
ことが好ましい。典型的なアセチル化条件は粗グアニン
誘導体10gおよび酢酸無水物400mlの混合液を95〜100°
で一晩攪拌することからなり、次に濃縮およびクロマト
グラフイ処理した。

実施例８ ９−（1,3−ジアセトキシ−２−プロポキシメチル）グ
アニン ９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル）グ
アニン１水和物205mg（0.75ミリモル）酢酸無水物1.5m
l、乾燥ジメチルホルムアミド6mlおよび乾燥ピリジン1.
5mlの混合液を室温下乾燥管で４日間攪拌した。次に混
合液をEt₂O15mlで希釈した。固体をフイルターで集め、
Et₂Oで洗浄した。２−メトキシエタノールで再結晶した
後、無色の結晶＝149mg（59％）m.p. 239〜240°を生成
した。物質はTLC（9:1CHCl₃−MeOH）で均質であり、NMR
は指定した構造を確認した。

分析（C₁₃ H₁₇ N₅ O₆） 計算値:C46.01, H5.05, N20.64 測定値:C45.71, H5.04, N20.36 実施例９ ９−（1,3−ジプロピオニルオキシ−２−プロポキシメ
チル）グアニン ９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル）グ
アニン１水和物205mg（0.75ミリモル）、プロピオン酸
無水物1.5ml、乾燥ジメチルホルムアミド6mlおよび乾燥
ピリジン1.5mlの混合液を室温において乾燥管で攪拌し
た。４日後混合液をエーテル25mlで希釈した。固体をフ
イルターで集め、エーテルで洗浄した。イソプロパノー
ルで再結晶して白色結晶、m.p.196〜197.5° 136mg（50％）を生成した。物質はTLC（9:1CHCl₃−MeO
H）でシングルスポツトとして進行し構造をNMRによつて
確認した。

分析（C₁₅ H₂₁ N₅ O₆） 計算値:C49.04,H5.76,N19.07 測定値:C48.96,H5.83,N19.26 実施例10 ９−（１−ヒドロキシ−３−オクタノイルオキシ−２−
プロポキシメチル）グアニン 乾燥ジメチルホルムアミド6mlおよび乾燥ピリジン1.5ml
中９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル）
グアニン１水和物410mg（1.5ミリモル）の懸濁液を氷浴
中で冷却しながら乾燥管で攪拌し、ジメチルホルムアミ
ド1.5ml中オクタノイルクロライド489mg（3.0ミリモ
ル）溶液を約５分にわたつて注射器で滴加した。混合液
を室温に徐々に暖めておき、24時間後高真空下で濃縮し
た。残留油を９枚の1000−μシリカゲルプレート（CHCl
₃−MeOH5:1で展開）で分取用TLCによつて精製した。生
成物バンドを分離し、混合し、ジメチルホルムアミドで
抽出した。高真空下で抽出液を濃縮し、ゴム様残渣を生
成した。イソプロパノールで結晶化して物質を生成し、
再びフイルターでゴム様にした。しかしながらエーテル
で十分研和して微薄黄色結晶105mg（18％）、m.p. 201.
5〜203.5°を生成した。

実施例11 ９−（1,3−ジオクタノイルオキシ−２−プロポキシメ
チル）グアニン ９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル）グ
アニン水和物2.73g（10mmol）、乾燥ジメチルホルムア
ミド40ml及びピリジン14mlの混合物を氷浴上で冷却しな
がら窒素雰囲気下で攪拌し、その際ジメチルホルムアミ
ド14ml中の塩化オクタノイル6.80ml（6.51g、40mmol）
の溶液を滴下した。室温で一夜攪拌した後、混合物を真
空濃縮した。残つた油状物を酢酸エチル及び水に分配し
た。酢酸エチル層（若干の懸濁固体を含む）を蒸発乾固
させた。残留物のシリカゲルカラムによるクロマトグラ
フイー（３−７％のメタノールを含む塩化メチレンによ
る勾配溶離）により、m.p. 161〜162℃の白色結晶2.38g
（47％）を得た。NMRスペクトル及び重量スペクトルは
所定の構造と一致した。物質は12:1 CHCl₃−MeOHのTLC
によると均質であつた。

計算値（C₂₅H₄₁N₅O₆）:C59.15;H8.14;N13.80 実測値:C59.15; H8.09; N13.60 この化合物は、875μg/羽の用量で全身投与した場合、
鶏体内のマイコプラズマの増殖を75％阻害した。

実施例12 ナトリウム９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシ
メチル）グアニン環状モノホスフエート 無水トリエチルホスフエート60ml中オキシ塩化リン3.6g
（2.2ml、23.6ミリモル）溶液中無水９−（1,3−ジヒド
ロキシ−２−プロポキシメチル）グアニン5.91g（23.2
ミリモル）懸濁液を室温で５時間攪拌した。非常に清澄
化した混合液を過し、液を攪拌ヘキサン600mlに注
入した。約５分後上澄ヘキサンを沈殿生成物から傾瀉
し、残渣をヘキサンの別の600mlと加熱した。上澄ヘキ
サンを傾瀉し、残渣を真空内で乾燥した後、固体生成物
15.9gを得た。固体を脱イオン水800mlに十分に溶解し、
濁つた混合液を5N水酸化カリウム、次に1N水酸化カリウ
ムでpH7に滴定した。中和した混合液を過し、液を
凍結乾燥して生成物9.25gを生成した。

凍結乾燥残渣の試料を0.05M pH6.6リン酸塩緩衝液溶離
によるホワツトマンパーテイシル（商標）PXS 10/25 SA
Xイオン交換カラムを用いる高性能液体クロマトグラフ
イによつて分析した。生成物は約４分、７分および９分
の保持時間で３個のピークを示した。ナトリウムおよび
カリウム９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシメ
チル）グアニン環式および非環式モノホスフエートの基
準試料を本特許出願のこのおよび他の実施例で開示した
ように分離し上記の系の高性能液体クロマトグラフイに
かけたところ、環式モノホスフエートは約４分の保持時
間でそして非環式ホスフエートは約７分の保持時間で溶
出した。

カリウム塩の凍結乾燥混合液を脱イオン水１に溶解
し、ひだ付の紙で過した。液を重炭酸塩循環で20
0〜400メツシユバイオタイドAG1−X8アニオン交換樹脂4
60mlの４〜5cm直径カラムに徐々に通過させた。次に0.0
5Mおよび0.5M重炭酸カリウム2lを含有する勾配溶離容器
から0.05〜0.5M重炭酸カリウムの勾配にカラムを通して
注入し、留分約20mlを８分間で収集した。留分19lで溶
離剤を0.5M重炭酸カリウムに変え、試料20〜25mlを6.8
分間隔で収集した。溶離パターンを252nmにおける紫外
線吸収によつて監視し、種々の溶離ピークの特定の成分
留分をさらに0.05M pH6.6リン酸塩溶離によるホワツト
マンパーテイシル（商標）PXS 10/25 SAXイオン交換カ
ラムの高性能液体クロマトグラフイによつて特徴付け
た。これらのデータに基づいて特定の留分を混和し、次
の通り生成した。

上記の高性能液体クロマトグラフイ系において保持時間
約５分でシングルピークによつて特徴付けられる留分45
0〜540（1680ml）を混和し、酸循環で200〜400メツシユ
バイオラドAG50W−X8カチオン交換樹脂600ml（1020ミリ
当量）で処理した。攪拌混合液を適度の真空下保持して
過する前に二酸化炭素を除去した。混合液を過し樹
脂を少量の脱イオン水で洗浄した。混和した液を真空
内で約35°で15mlに濃縮し、沈殿生成物を遊離の酸の形
で過によつて分離し、真空内で乾燥して９−（1,3−
ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル）グアニン環状モ
ノホスフエート445mgを生成した。生成物は偏光の顕微
鏡により結晶性であり、252nm（ε10600、0.1M pH7リン
酸塩中）で最大紫外線吸収を示し、放出された構造に従
つて十分に核磁気共鳴スペクトルを示した。母液を濃縮
して遊離酸形態の生成物をさらに46mgを生成した。母液
をpH7に滴定し次に凍結乾燥してナトリウム９−（1,3−
ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル）グアニン環状モ
ノホスフエート196mgを生成した。後者の化合物は時々
少量の水溶性無機塩で汚染され、排除クロマトグラフイ
によつてまたはギ酸塩サイクルでバイオラドAG1−X8ア
ニオン交換樹脂のイオン交換クロマトグラフイによつて
精製することができる。

純粋なナトリウム塩もまた次の通り結晶性遊離酸の滴定
によつて得ることができる。

結晶性９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチ
ル）グアニン環式モノホスフエート213mgの懸濁液を1N
水酸化ナトリウムでpH7に滴定し、凍結乾燥してナトリ
ウム９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチ
ル）グアニン環式モノホスフエート227mgを生成した。
この生成物の乾燥した試料は252nmで（0.1M pH7ホスフ
エート中11800）紫外線吸収最大を有した。

D₂O中環状生成物の200MHz NMRスペクトルはモノホスフ
オリル化で低磁場へシフトした２当量メチレンからのシ
グナルによつて特徴付けられる。スペクトルを次のケミ
カルシフトによつて特徴付けられる。

さらに構造の確認はシフトの予測したパターンが の照射でＰ−Ｏ−CH₂基に実現する時得られる。

非緩衝KH₂PO₄の10〜1000mMの勾配を用いるヴアリアンAX
−10高性能液体クロマトグラフイアニオン交換カラムに
おいて環状生成物は保持時間4.3分を有するが、酸素的
に誘導された非環式モノホスフエートは保持時間4.8分
を有する。この二つの物質の混合物が上記の系のHPLCに
かけられると、非環式酵系性誘導モノホスフエートから
合成環式モノホスフエートをはつきりと分離することが
できる。

他方、環式モノホスフエートのナトリウムまたはカリウ
ム塩を結晶性遊離酸の分離をせずにバイオライドAG1−X
8重炭酸塩溶出留分から分離することができる。0.5M KH
CO₃約800mlに達する画分の組合わせを酸循環の200〜400
メツシユAG50W−X8カチオン交換樹脂325ml（552ミリモ
ル）で処理した。攪拌混合液を適度の真空下15分間維持
して二酸化炭素を除去しそして過した。液を約100m
l容量に濃縮し、次に1N水酸化ナトリウムでpH7に滴定し
た。生成溶液を凍結乾燥して少量の水溶性無機塩で汚染
された環状リン酸塩のナトリウム塩529mgを生成した。

生成物を脱塩するためナトリウム塩200mgを脱イオン水
1.5mlに溶解し、ギ酸塩循環でバイオラド200〜400メツ
シユAG1−X8アニオン交換樹脂6mlを入れた1.5cm直径の
カラムに加えた。脱イオン水約35mlをカラムに通過させ
た後2Nギ酸アンモニウム溶液で溶離を開始した。3.5ml
容量の画分を３分間隔で集め、各画分の250mmにおける
紫外線吸収を測定して管番号に対してプロツトした。上
記のプロツトで得られた曲線の形に基づいて留分13〜28
を混和し、200〜400メツシユバイオライドAG50W−X8カ
チオン交換樹脂120ml（204ミリ当量）の２〜3cm直径カ
ラムに装填した。カラムを水で溶離し、画分13.5mlを4.
5分間隔で収集した。溶離パターンを紫外線吸収によつ
て252nmで観察し、プロツトに基づいて画分22〜40を混
和し、濃縮乾固した。残渣を脱イオン水10mlに取り、0.
1N NaOHでpH7に滴定した。中和した溶液を凍結乾燥して
ナトリウム９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシ
メチル）グアニン環式モノホスフエート106mgを生成し
た。

実施例13 ジナトリウム９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキ
シメチル）グアニン非環式モノホスフエート 製造１ 対応する環式モノホスフエートを生成するためにオキシ
塩化リンでの９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキ
シメチル）グアニンのホスフオリル化において粗縮合生
成物をバイオライドAG1−X8（CO₃ ⁼）のイオン交換クロ
マトグラフイによつて精製した。環状モノホスフエート
の製造の実施例で記載したように0.5M重炭酸カリウムで
溶離する過程で留分245〜248からなる別のピークを分離
し、対応する非環式化合物二カリウム９−（1,3−ジヒ
ドロキシ−２−プロポキシメチル）グアニン非環式モノ
ホスフエートを含有することを見出した。パーテイシル
（商標）PXS10/25SAX高性能液体クロマトグラフイカラ
ムおよび0.05M pH6.6リン酸塩緩衝液での溶離を用いて
このピークは保持時間約５および８分を有する物質を含
有した。基準となる非環式モノホスフエートは同一系で
保持時間７〜８分を示した。10〜400mM非緩衝KH₂PO₄で
勾配溶離を用いるヴアリアンAx−10高性能液体クロマト
グラフイアニオン交換カラムでのこの混和画分の分析は
物質の約40％が二カリウム９−（1,3−ジヒドロキシ−
２−プロポキシメチル）グアニン非環式モノホスフエー
トであることを示した。

製造２ 5N水酸化ナトリウム4ml中ナトリウム９−（1,3−ジヒド
ロキシ−２−プロポキシメチル）グアニン環式モノホス
フエート44.5mg溶液を55〜60℃で窒素下で８時間加熱し
た。反応混合液を脱イオン水で12ml容量に希釈し、スル
ホン酸循環のバイオライドAG50W−X8カチオン交換樹脂
の30ml（直径2cm×長さ12cm）カラムにゆつくりと通過
させた。カラムを脱イオン水で溶離し、画分5mlを４分
間隔で収集した。画分60を収集した後、留分12mlを４秒
毎に集めた。種々の画分を252nmにおける紫外線吸収に
よつておよび0.05M pH6.6リン酸塩緩衝溶離を用いるパ
ーテイシル（商標）PXS10/25SAXアニオン交換カラムの
高性能液体クロマトグラフジによつても評価した。約7.
5分の保持時間を有する物質のみからなる画分45〜64を
混和し、0.1N水酸化ナトリウムでpH7に滴定し、次に凍
結乾燥して二ナトリウム９−（1,3−ジヒドロキシ−２
−プロポキシメチル）グアニン非環式モノホスフエート
30mgを生成した。酸化デユーテリウム中生成物の200MHz
核磁気スペクトルは非環式モノホスフエート構造と完全
に一致する。分析C₉H₁₂N₅O₇PNa₂（379.19）に対する計
算値、N18.47、C28.51、H3.19、P8.17、Na12.13。

測定値、N18.07、C28.67、H3.36、P8.51、Na11.90（原
子吸収による）。λmax252nm、ε9600（0.1M pH7リン酸
塩） 実施例14 ９−〔1,3−ビス（フエノキシアセトキシ）−２−プロ
ポキシメチル〕グアニン 乾燥ジメチルホルムミド4mlおよび乾燥ピリジン1.4ml中
９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル）グ
アニン１水和物273mg（1.0ミリモル）の懸濁液を氷浴で
冷却しながら窒素下で攪拌し、ジメチルホルムアミド1.
6ml中フエノキシアセチルクロライド552μｌ（682mg、
４ミリモル）溶液を10分間にわたつて隔膜を通して注射
器で滴加した。氷が融解した後混合液を室温に徐々に温
ためておいた。薄黄色溶液を得た。

15時間後溶液を高真空下暖めながら濃縮した。金色の残
留油をシリカゲルカラム（勾配溶離CH₂Cl₂−MeOH98:2〜
CH₂Cl₂−MeOH92:8）でクロマトグラフイ処理した。ほと
んど純粋な生成物を含有する画分を混和し、濃縮して油
を生成し、エーテル−アセトンで研和した際凝固した。
少量のアセトニトリルで再結晶して白色結晶114mg、m.
p.114〜116°を生成した。構造および純度をNMRおよびT
LC（CHCl₃−MeOH）によつて確認した。第二生成物66mg
を母液から得た。

分析（C₂₅H₂₅N₅O₈）C₂₅H₂₅N₅O₈・H₂O 93.5％＋無機6.5％に対する 計算値:C51.84、 H4.70、 N12.09 測定値:C51.94、 H4.74、 N11.99 実施例15 ９−（2,3−ジベンゾイルオキシ−１−プロポキシメチ
ル）グアニン 乾燥ジメチルホルムアミド4ml及び乾燥ピリジン1.4ml中
の９−（2,3−ジヒドロキシ−１−プロポキシメチル）
グアニン水和物（1mmol）の懸濁液を氷浴上窒素雰囲気
下で攪拌し、その際ジメチルホルムアミド1.6ml中の塩
化ベンゾイル（4mmol）の溶液を滴下した。混合液を室
温まで徐々に加温させた。一夜攪拌した後、溶液を高真
空下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフイー
に付し（CH₂Cl₂−MeOHで溶出）、光沢のある残渣を得
た。エーテル、続いてクロロホルムで摩砕すると、70℃
で軟化する非晶質の白色固体が得られた。構造及び純度
をNMR、TLC（9:1CHCl₃−MeOH）及び質量スペクトルで確
認した。

計算値（90％C₂₃H₂₁N₅O₆・2H₂O＋10％無機シリカゲ
ル）： C49.77; H4.54; N12.62 実測値:C49.76; H4.58; N12.55 実施例16 ９−（1,3−ジイソバレリルオキシ−２−プロポキシメ
チル）グアニン 乾燥ジメチルホルムアミド4ml及び乾燥ピリジン1.4ml中
の９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル）
グアニン水和物（1mmol）の懸濁液を氷浴上窒素雰囲気
下で攪拌し、その際ジメチルホルムアミド1.6ml中の塩
化イソバレリル（4mmol）の溶液を滴下した。室温まで
徐々に加温した後、混合液を一夜攪拌した。得られた溶
液を高真空下、温和に加温しながら蒸発させた。残渣を
酢酸エチル及び水に分配し、酢酸エチル相を濃縮した。
残渣のシリカゲルによるクロマトグラフイーによつて
（CH₂Cl₂−MeOHで溶出）、m.p. 215〜217°（イソプロ
パノールから再結晶させると216〜218°に上昇）の白色
固体192mg（52％）を得た。構造及び純度をNMR及びTLC
（9:1CHCl₃−MeOH）で確認した。

計算値（C₁₇H₂₉N₅O₄）： C、53.89;H、6.91;N、16.53 実測値:C、54.22;H、6.92;N、16.42 実施例17 ９−〔1,3−ビス（フエニルアセトキシ）−２−プロポ
キシメチル〕グアニン 乾燥ジメチルホルムアミド4ml及び乾燥ピリジン1.4ml中
の９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル）
グアニン水和物273mg（1mmol）の懸濁液を氷浴上窒素雰
囲気下で攪拌し、その際ジメチルホルムアミド1.6ml中
の塩化フエニルアセチル529μｌ（618mg、4mmol）の溶
液を滴下した。混合物を室温まで徐々に加温した。一夜
攪拌後、溶液を真空濃縮した。残留油状物をシリカゲル
のクロマトグラフイーに付し（CH₂Cl₂−MeOHで溶出）、
こすりつけて固化させた。この物質をエーテルで摩砕
し、真空乾燥し非晶質白色固体を得たが、この固体は65
℃以上で軟化した。構造及び純度をNMR及びTLC（9:1CHC
l₃−MeOH）で確認した。

計算値（95.8％C₂₅H₂₅N₅O₆・2H₂O＋4.2％ 無機シリカゲル）： C、53.62; Ｈ、5.22; Ｎ、12.50 実測値:C、53.93; Ｈ、5.13; Ｎ、12.29 実施例18 ９−〔1,3−ビス（10−ウンデセノイルオキシ）−２−
プロポキシメチル〕グアニン 乾燥ジメチルホルムアミド4ml及び乾燥ピリジン1.4ml中
の９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル）
グアニン−水和物273mg（1mmol）の攪拌氷冷懸濁液に、
湿気を防ぎながら、ジメチルホルムアミド1.6ml中の塩
化10−ウンデセノイル860μｌ（812mg、4mmol）の溶液
を滴下した。室温に加温し、一夜攪拌した後、溶液を真
空濃縮した。残渣を酢酸エチルで抽出した。過された
抽出液を濃縮すると油状物が得られ、これをシリカゲル
カラムのクロマトグラフイー（99:1〜99:5CH₂Cl₂−MeOH
で勾配溶出）により精製した。ほぼ純粋な生成物を含む
画分を合わせ、濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶解し、
木炭で処理し、過した。過ケークに付着残留した大
半の生成物をジメチルホルムアミドで洗浄し取出した。
蒸発させてロウ状の残渣を得、塩化エチレンに溶解し、
過した。液の濃縮により、乳白色でロウ状の半固体
251mgを得、その構造を200MHz NMRで確認した。

計算値（97％C₃₁H₄₉N₅O₆＋３％無機シリ カゲル）： Ｃ 61.45; Ｈ 8.15; Ｎ 11.56 実測値（２回の平均）： Ｃ 61.58; Ｈ 8.30; Ｎ 11.42 実施例19 ９−〔1,3−ビス（メトキシアセトキシ）−２−プロポ
キシメチル〕グアニン ９−〔1,3−ビス（フエノキシアセトキシ）−２−プロ
ポキシメチル〕グアニン（実施例14）に用いた方法に従
つて水和９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシメ
チル）グアニン（１ミリモル）をメトキシアセチルクロ
ライド（４ミリモル）と反応させて、クロマトグラフイ
処理後所望の生成物を生成した。構造および純度の確認
をNMRおよびTLC（CHCl₃−MeOH 9:1）によつて得た。

実施例20 ９−〔1,3−ビス（イミダゾール−１−イルカルボニル
オキシ）−２−プロポキシメチル〕−グアニン ９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル）グ
アニン１水和物55mg（0.2ミリモル）、1,1′−カルボニ
ルジイミダゾール130mg（0.8ミリモル）および乾燥ジメ
チルホルムアミド2mlを窒素下95〜100°で1.5時間攪拌
し、その時に澄明溶液を得次に生成物を沈殿させた。冷
却後沈殿をフイルターで集め、ジメチルホルムアミドで
次にアセトンで洗浄して白色結晶、m.p. 252〜253°分
解、37mgを生成した。NMRスペクトルは指定された構造
と一致した。

分析（C₁₇H₁₇N₉O₆） 計算値:C46.05, H3.87, N28.43 測定値:C45.68, H3.90, N28.18 実施例21 ９−（2,3−ジアセトキシ−１−プロポキシメチル）グ
アニン ９−（2,3−ジヒドロキシ−１−プロポキシメチル）グ
アニン水和物5.34g（20mmol）、無水酢酸40ml（数日後1
00mlに増量）、ピリジン40ml（数日後80mlに増量）及び
ジメチルホルムアミド160mlを合計20日間、乾燥管をつ
けて室温にて攪拌し、次いで真空濃縮した。残渣を塩化
メチレン30mlで摩砕し、エーテル100mlで希釈した。固
体を取し、エーテルで洗浄し、ジオキサン−酢酸から
再結晶させると、（アセトン洗浄及び乾燥後）m.p. 22
2.5〜224℃のやや灰色を帯びた白色粉末4.18g（62％）
が得られた。構造及び純度をNMR及びTLC（9:1CHCl₃−Me
OH）で確認した。

計算値（C₁₃H₁₇N₅O₆）： C46.01; H5.05; Ｎ 20.64 実測値:C45.64; H4.97; Ｎ 20.37 実施例22 ９−（2,3−ジオクタノイルオキシ−１−プロポキシメ
チル）グアニン 乾燥ジメチルホルムアミド4ml及び乾燥ピリジン1.4ml中
の９−（2,3−ジヒドロキシ−１−プロポキシメチル）
グアニン水和物267mg（1mmol）の懸濁液を窒素雰囲気下
０℃で攪拌し、その際ジメチルホルムアミド1.6ml中の
塩化オクタノイル0.68ml（650mg、4mmol）を滴下した。
混合液を室温まで徐々に加温した。一夜攪拌後、真空濃
縮した。残渣をシリカゲルカラムによるクロマトグラフ
イーに付し（０〜５％メタノール含有塩化メチレンで勾
配溶出）、固体197mg（39％）を得、これを摩砕し、ク
ロロホルム及びエーテルで洗浄した。白色固体は145℃
以上で軟化し、NMR及びTLC（9:1CHCl₃−MeOH）により高
純度であることが判明した。

計算値（94％C₂₅H₄₁N₅O₆・H₂O＋６％無機シリカゲ
ル）： Ｃ 53.69; Ｈ 7.75; Ｎ 12.53 実測値 Ｃ 53.77; Ｈ 7.59; Ｎ 12.52 実施例23 ９−〔2,3−ビス（フエノキシアセトキシ）−１−プロ
ポキシメチル〕グアニン 乾燥ジメチルホルムアミド4ml及び乾燥ピリジン1.4ml中
の９−（2,3−ジヒドロキシ−１−プロポキシメチル）
グアニン水和物267mg（1mmol）の懸濁液を窒素雰囲気下
氷浴上で攪拌し、その際ジメチルホルムアミド1.6ml中
の塩化フエノキシアセチル0.55ml（682mg、4mmol）の溶
液を滴下した。室温まで徐々に加温した後、混合液を一
夜攪拌し、次いで真空蒸発させた。残渣のシリカゲルに
よるクロマトグラフイーにより（塩化メチレン−メタノ
ールで溶出）、白色固体を得、イソプロパノールから再
結晶し、m.p. 95〜100℃の物質30mgを得た。この物質
はNMR及びTLC（9:1CHCl₃−MeOH）によると高純度である
ことが判明した。

計算値（93.6％C₂₅H₂₅N₅O₈・0.75H₂O＋6.4％無機シリ
カゲル）： C 52.31; Ｈ 4.65; Ｎ 12.20 実測値:C 52.53; Ｈ 4.66; Ｎ 12.05 実施例24 ９−（2,3−ジアジドアセトキシ−１−プロポキシメチ
ル）グアニン ジメチルホルムアミド5ml中の塩化アジドアセチル0.84m
l（8.4mmol）の溶液を10分間かけて、乾燥ジメチルホル
ムアミド（40ml）中の９−（2,3−ジヒドロキシ−１−
プロポキシメチル）グアニン0.66g（2.5mmol）及びトリ
エチルアミン0.35ml（2.5mmol）の氷冷攪拌懸濁液に滴
下した。０℃で45分間攪拌した後、反応液を周囲温度ま
で30分間加温し、７％重炭酸ナトリウム溶液（15ml）で
反応を終了させた。混合液を真空下で蒸発乾燥させ、残
渣をジクロロメタン（３×50ml）で抽出した。有機抽出
液を冷水で洗浄し、乾燥し、蒸発して残渣を得、これを
水性メタノールのような適切な溶媒から再結晶させて純
粋な生成物を得た。

実施例25 ９−〔2,3−ビス（Ｎ−カルボベンジルオキシグリシル
オキシ）−１−プロポキシメチル〕グアニン 乾燥ジメチルホルムアミド4ml中のＮ−カルボベンジル
オキシグリシン1.65gの溶液にN,N′−ジシクロヘキシル
カルボジイミド1.48gを加え、室温で１時間攪拌を続け
たが、その間、N,N′−ジシクロヘキシル尿素が沈殿し
た。反応混合液を次いで、乾燥ジメチルホルムアミド4m
l中の９−（2,3−ジヒドロキシ−１−プロポキシメチ
ル）グアニンの懸濁液（弱く加温して大部分が溶液化し
ている）が入つた別のフラスコ内に直接過した。得ら
れた混合液を４−ジメチルアミノピリジンのわずかな結
晶で処理し、次いで窒素雰囲気下、室温で21時間攪拌し
た。混合液を過し、液を真空濃縮した。ゼラチン状
の残渣を、アセトニトリルで摩砕して得た結晶にて接種
した。週末の間放置すると結晶化が起きた。この物質を
単離し、テトラヒドロフラン−水（60:40）に溶解し、
シリカゲル上で蒸発させた。これをシリカゲルカラムの
頂部に層状に加え、次いで80:20:2のクロロホルム−メ
タノール−水で溶出した。TLCによる純粋なジアシル化
生成物を含有する画分を一つにし、総量145mgの標題化
合物を得た。構造は200MHz NMRで確認した。

実施例26 ９−（2,3−ジグリシルオキシ−１−プロポキシメチ
ル）グアニン 方法1:実施例24の生成物（1.23g）を水性エノール中、1
0％Pd/C（1.0g）及び1.0NHCl（4ml）の存在下で水素添
加する（H₂圧＝40psi（2.8Kg/cm²））。TLCにて反応が
終了したことが判明した後（約1.5時間）、触媒を去
し、水で充分に洗浄する。真空下で容量を減少させると
生成物が結晶化する。過及び水性エタノールからの再
結晶により標題化合物が得られる。

方法2:本物質は、９−（2,3−ジアラニルオキシ−１−
プロポキシメチル）グアニンの合成（実施例27）につい
て記載したように、９−〔2,3−ビス（Ｎ−カルボベン
ジルオキシグリシルオキシ）−１−プロポキシメチル〕
グアニンの水素添加により得られる。

実施例27 ９−（2,3−ジアラニルオキシ−１−プロポキシメチ
ル）グアニン 乾燥ピリジン（80ml）中の９−（2,3−ジヒドロキシ−
１−プロポキシメチル）グアニン0.54g（2mmol）、Ｎ−
カルボベンジルオキシ−DL−アラニン1.026g（4.3mmo
l）、無水ｐ−トルエンスルホン酸0.04g及びN,N′−ジ
シクロヘキシルカルボジイミド1.755g（5.6mmol）の混
合物を24時間攪拌した。酢酸（1ml）を加え、混合液を
更に１時間攪拌する。反応混合液を過し、残渣をメタ
ノールで洗浄する。液を真空下で蒸発乾燥し、シリカ
ゲルクロマトグラフイーに供する（CH₂Cl₂/MeOH9:1）。
生成物含有画分の蒸発と水性エタノールからの再結晶に
より保護エステルが得られる。CBZ基の離脱は、50％水
性メタノール中（保護エステル1.0gに対し300ml/保護エ
ステル1.0gに対し10％Pd/C0.5gを用いた0.5N溶液として
１当量のHClを含有）、40psi（2.8Kg/cm²）の水素雰囲
気下、２時間水素添加することにより実施される。触媒
を去し、水で洗浄し、液を真空下で蒸発乾燥する。
水性エタノールからの再結晶により標題化合物が得られ
る。

実施例28 ９−〔2,3−（ジ−３−カルボキシプロピルオキシ）−
１−プロポキシメチル）グアニン 乾燥ジメチルホルムアミド（75ml）中の９−（2,3−ジ
ヒドロキシ−１−プロポキシメチル）グアニン（1.37
g、5mmol）、無水コハク酸2.0g及び無水トリエチルアミ
ン1.4mlの溶液を油浴上60℃に加熱する。反応が終了し
た後（24時間）、混合液を冷却し、真空下で蒸発乾燥す
る。残渣を氷水（50ml）に再懸濁し、pHを2N HClで２に
調整する。白色沈殿物を取し、充分に氷水で洗浄し、
真空乾燥する。再結晶はメタノールから行なつてもよ
い。

実施例29 25℃におけるpH7.2緩衝液の比較溶解度 約0.15モルリン酸塩緩衝液（pH7.2）中に過剰量の化合
物を懸濁させ水浴に25℃で一晩振盪させて飽和溶液を生
成することによつて溶解度を定量した。過した溶液中
の化合物濃度を分光測光測定即ち飽和溶液に対するλ
_maxにおける紫外線吸光度と公知の化合物濃度に対して
観察された吸光度値との比較に基づいて計算した。結果
は次の通り要約された。 化合物 溶解度（mg/ml） アシクログアノシン 1.3 〜 1.5 式Ｉの化合物 3.6 式IIの化合物 .8 実施例30 ヘルペスウイルス誘発チミジンキナーゼによる式Ｉおよ
び式IIの化合物およびアシクログアノシンのホスフオリ
ル化 50％ジメチルスルホキサイド（DMSO）30μｌに溶解した
式Ｉの化合物30μｇを50mMトリス−HCl緩衝液、pH7.5、
2.5mMアデノシントリホスフエート、2.5mM塩化マグネシ
ウム、7.5mMホスフオクレアチン、クレアチンキナーゼ
２単位、2mMジチオスレイトール、2.5mMフツ化ナトリウ
ム、牛の血清アルブミン50μｇおよびチエンおよびオス
トランダーの方法（ジヤーナル・オブ・バイロロジカル
・ケミストリー第251巻第2605頁1976年）によつて、感
染の８時間後に採取された多重度10（細胞あたりウイル
ス粒子10個）のウイルス感染HeLa細胞（HSVIウイルス）
から単離されたチミジンキナーゼ0.0014単位を最終容量
150μｌとして37°で３時間培養した。

二種の同様な50％DMSO中の混合液、その一つは株IIの化
合物30μｇおよび他がアシクログアノシン30μｇを含有
する、を同様に処理した。

50％DMSO30μｌだけを含有し抗ウイルス化合物のないほ
かは上記と類似の４番目の混合液もまたコントロールと
して同様に処理した。

３時間の培養期間の終りに各混合液の10μｌ試料をAx−
10カラムおよびリン酸カリウム（KH₂PO₄）勾配溶離（0.
01〜1.0M）を用いるHPLCによつて分析した。各抗ウイル
ス化合物のモノホスフエート誘導体の量を各クロマトグ
ラフイピークの面積の総和によつて評価した。結果はア
シクログアノシン16％がモノホスフエート誘導体に転化
する一方式Ｉの化合物90％および式IIの化合物95％が同
一条件下で各モノホスフエートに転化することを示し
た。

そこで培養混合液の残りにグアノシンモノホスフエート
キナーゼ0.04単位およびHSV1−感染HeLa細胞の抽出物20
μｌ〔この細胞は多重度10でウイルスに感染し８時間後
に採取した。それらを0.35M KH₂PO₄、pH7.5、0.5mMジチ
オスレイトール、0.2％ポリオキシエチレン（９）オク
チルフエノール（ノニデツトＰ−40）、14％グリセロー
ル50mg/ml溶液に懸濁させ４°で30分後100,000gで遠心
分離した。上澄液は粗生成物であつた。〕を添加した。
培養を30°で４時間以上続け、その後HPLCで分析し、各
化合物のトリホスフエート誘導体量を各々クロマトグラ
フイピークの面積の総和によつて定量した。結果は式Ｉ
の化合物55％および式IIの化合物93％が各々トリホスフ
エート誘導体に転化するのに比較されるようにアシクロ
グアノシン30％がこれらの条件下でトリホスフエートに
転化したことを示した。

ホスフオリル化がこれらの化合物の抗ウイルス作用に対
する前提要件であると推定されることから式Ｉおよび式
IIの化合物のモノホスフエートおよびトリホスフエート
誘導体へのホスフオリル化のより高い割合がアシクログ
アノンにまさるかなりの改良を示す。

実施例31 式IIの化合物の非環式モノホスフエートの酵素による調
製 式IIの化合物（25mg）をpH6.5の50mMリン酸カリウム緩
衝液、牛の血清アルブミン、1mg/ml、アデノシントリホ
スフエート、5mM、塩化マグネシウム、5mM、ジチオスレ
イトール、1mM、ホスフオクレアチン、1mM、クレアチン
キナーゼ、12.5単位/ml、フツ化ナトリウム、2.5mMおよ
び精製HSV1−誘導チミジンキナーゼ500単位を全容量10m
lで含有する混合液で37°で培養した。反応の進行を高
性能液体クロマトグラフイ（HPLC）によつて観察した。
化合物IIの35％がモノホスフエートに転化した時、反応
を停止させた。生成物を分取用アニオン交換カラム（AX
−10、ウアリアン）のHPLCクロマトグラフイで精製し、
溶離溶媒としてトリエチルアンモニウムカーボネツトpH
7.6を有するジエチルアミノエチルセルロース（DEAE）
のクロマトグラフイによつて脱塩した。生成物を含有す
るプールした留分から溶媒を凍結乾燥して式IIモノホス
フエートの化合物8mgを生成し、その純度を分析HPLCに
よつて確認した。

実施例32 式IIの化合物のジホスフエートの酵素による調製 式IIの化合物（20mg）をpH6.5の50mMリン酸塩緩衝液、
牛の血清アルブミン1mg/ml、アデノシンホスフエート5m
M、塩化マグネシウム5mM、ジチオスレイトール1mM、ホ
スフオクレアチン1mM、クレアチンキナーゼ12.5単位/m
l、フツ化ナトリウム2.5mM、精製HSV1誘導チミジンキナ
ーゼ500単位および豚の脳からのグアノシンモノホスフ
エートキナーゼ100μｇを含有する10ml混合液中37°で
培養した。反応の進行を高性能液体クロマトグラフイ
（HPLC）で観察した。培養を37°で４時間および37°で
20時間続けた。ピロホスフエート生成物を分取用アニオ
ン交換カラム（AX−10ヴアリアン）のHPLCクロマトグラ
フイで精製し、溶離剤としてトリエチルアンモニウムカ
ーボネツトpH7.6を有するジエチルアミノエチルセルロ
ース（DEAE）のクロマトグラフイによつて脱塩した。生
成物を含有するプールした画分から凍結乾燥して式IIの
ジオスフエート化合物10mgを生成し、その純度を分析HP
LCによつて確認した。

実施例33 式IIの化合物のジオスフエートの線状トリホスフエート
への酵素による転化 実施例31でのように調製した式IIの化合物のジホスフエ
ート（5mg）をトリス−アセテート緩衝液、pH7.6、50m
M、塩化マグネシウム、3mM、エチレンジアミン四酢酸
（EDTA）1mM、リン酸カリウムpH7.5、30mM、ビルベート
5mM、グリセラルデヒドホスフエート、30mM、乳酸脱水
素酵素150μｇ、グリセラルデヒドホスフエート脱水素
酵素、150μｇ、３−ホスフオグリセレートキナーゼ、1
50μｇおよびニコチンアミドアデニンジスクレオチド
（NAD⁺）15mMを含有する5ml混合液中37°で培養した。
反応の進行を高性能液体クロマトグラフイ（HPLC）によ
つて観察した。培養を37°で４時間および30°で20時間
続けた。生成物をアニオン交換カラム（AX−10、ヴアリ
アン）のHPLCクロマトグラフイで分離し溶離溶媒として
トリエチルアンモニウムカーボネートpH7.6を有するジ
エチルアミノエチルセルロース（DEAE）のクロマトグラ
フイによつて脱塩した。生成物を含有する画分を集めて
凍結乾燥して式IIの化合物のトリホスフエート4mgを生
成し、その純度を分析HPLCによつて確認した。

実施例34 式IIの化合物のトリホスフエートの酵素による調製 式IIの化合物（20mg）をトリス−HCl、pH7.5、50mM、塩
化マグネシウム2.5mM、アデノシン−５′−トリホスフ
エート、2.5mM、牛の血清アルブミン500mg/ml、ジチオ
スレイトール2mM、ホスフオクレアチン7mM、クレアチン
キナーゼ12.5単位/ml、フツ化ナトリウム2.5mM、HSV1−
誘導チミジンキナーゼ400単位およびグアノシンモノホ
スフエートキナーゼ80μｇを含有する10ml混合液中37°
で培養した。培養を37°で４時間および30°で20時間続
けた。反応の進行を分析高性能液体クロマトグラフイに
よつて観察した。生成物を分取用アニオン交換カラム
（AX−10、ヴアリアン）のHPLCクロマトグラフイによつ
て分離し次に分析カラム（ゾルバツクス−NH₂）で再度
クロマトグラフイ処理して汚染ATPを除去した。生成物
を、溶離剤としてトリエチルアンモニムカーボネートpH
7.6を用いてジエチルアミノエチルセルロース（DEAE）
上のクロマトグラフイ処理によつて脱塩した。生成物を
含有する画分を集めて凍結乾燥して式IIの化合物のトリ
ホスフエート誘導体15mgを生成し、その純度を分析HPLC
によつて確認した。

実施例35 ウイルス誘発チミジンキナーゼによるホスフオリル化に
対するチミジンおよびアシクログアノシンまたは式IIの
化合物間の競争 （１）50％DMSO20μｌに溶解したアシクログアノシン20
μｇを80mMトリス−HCl、pH7.5、4mMアデノシントリホ
スフエート、4mM塩化マグネシウム、1.7mMジチオスレイ
トール、12.5mMホスフオクレアチン、5.0mMフツ化ナト
リウム、100μｇ牛の血清アルブミン、クレアチンキナ
ーゼ2.5単位およびHSV1−感染HeLa細胞から分離した
（実施例30のように）チミジンキナーゼ0.006単位を有
する全量120μｌ（0.75mM）で培養した。培養を37°で
２時間実施し、次に30°で18時間続けた。

（２）No.1の混合液と同一の成分のほかに2.5mMチミジ
ンを含有する第２混合液を同様の方法で培養した。

（３）アシクログアノシンを式IIの化合物20μｇで置き
換えたほかはNo.1の混合液と同一の成分を含有する第３
混合液を同様の方法で培養した。

（４）No.3の混合液と同一の成分のほかに2.5mMチミジ
ンを含有する第４混合液を同様の方法で培養した。

培養の終りに対応するモノホスフエート誘導体に転化し
た各抗ウイルス化合物量をHPLC分析後クロマトグラフイ
ピークの面積の総和によつて定量した（実施例30と同じ
カラムおよび溶離条件）。

４種の混合液での培養の終りに存在するモノホスフエー
トの％は次の通りである。混合液No. 存在する化合物 モノホスフエート％ １ アシクログアノシン 27 ２ アシクログアノシン及び 0 チミジン ３ 式IIの化合物 93 ４ 式IIの化合物及び 23 チミジン この結果は式IIの化合物がかなり過剰のチミジンの存在
下でさえウイルスチミジンキナーゼによつてホスフオリ
ル化されるがアシクログアノシンは同一条件下で全くホ
スフオリル化されなかつたことを示した。ホスフオリル
化がこれらの化合物の抗ウイルス作用に前要件であり、
チミジンが細胞の正常な成分であることから式IIの化合
物はアシクログアノシンにまさる有効な改良を表わす。

実施例36 アシクログアノシンおよび式IIの化合物と精製ウイルス
チミジンキナーゼとの比較 pH6.5の22μモルのリン酸カリウム緩衝液、0.3μモルMg
Cl₂、アデノシントリホスフエート0.5μモル、牛の血清
アルブミン100μｇ、HSV1−誘発チミジンキナーゼ20単
位およびグアニン環の８位に放射性炭素（¹⁴C）で標識
付けされた式IIの化合物またはアシクログアノシンの変
化量の全量100μｌに含有する一連の混合液を37°で15
分間培養した。この時間の終りに各管からの80μｌ試料
をジエチルアミノエチルセルロース（ホワツトマンDE8
1）の円形紙（直径2.5cm）に付けた。５分後水の入つ
たビーカーに入れ水で１回、0.5mMグアノシンを含有す
る50％エタノールで２回そして無水エタノールで１回順
次に洗浄した。次にシンチレーシヨンヴアイアルに入
れ、空気の流れで乾燥しシンチレーシヨン混合液（アク
アゾル２、ニユーイングランドヌクレア）を添加した後
シンチレーシヨンカウンターで数えた。この操作によつ
てホスフオリル化されなかつた化合物は洗い流され、DE
81紙にはホスフオリル化誘導体だけが密着した。従つ
てカウントされた放射能は基質、式IIの化合物またはア
シクログアノシンのウイルスチミジンキナーゼの作用に
よるホスフオリル化誘導体への転化の尺度であつた。背
景放射能に対する適当な対照試料も検定に包含され、結
果を補正するために用いた。

培養時間の終りに各検定管に存在するホスフオリル化誘
導体のモル数を、各紙について測定した放射能カウン
ト数および検定混合液の各基質の比活性（１モルにつき
１分当りのカウント数）から計算した。データを基質濃
度に対する反応速度のグラフにプロツトした。第１図は
実際の実験データに最もよく適合するコンピユーターに
よる理論曲線のグラフである。基質としてチミジンを用
いた同様の実験で得た曲線を比較のため第１図に包含す
る。

二つの基質に対する動力学的パラメーターを同一データ
から計算した。上記で記載したように３種の別の実験を
平均することによつて得た値は次の通りであつた。

Vmax/Km比は基質効率を比較するために最も普通に用い
られる規準であるがHSV1−誘発チミジンキナーゼに対す
る基質として式IIの化合物およびアシクログアノシンの
相対効率は4.25対0.14すなわち30対１である。

実施例37 アシクログアノシンおよび式IIの化合物と精製グアノシ
ンモノホスフエートキナーゼとの動力学的パラメーター
の比較 pH7.6のトリス−アセテート緩衝液70μモル、KCl70μモ
ル、MgCl₂７μモル、ATP2.8μモル、ホスフオエノール
ピルベート1.05μモル、牛の血清アルブミン175μｇ、
還元ニコチンアミド−アデニンジヌクレオチド（NADH）
0.15μモル、乳酸脱水素酵素３単位、ピルベートキナー
ゼ1.5単位、およびアシクログアノシンモノホスフエー
トまたは式IIの化合物のモノホスフエートの変化量を全
量で700μｌを含有する一連の混合液を豚の脳（ボーエ
リンガーマンハイム）からのグアノシンモノホスフエー
トキナーゼとともに340nmで吸光度を記録するカリイ分
光光度計のセル中で25°において培養した。この分光測
定と組合わせた検定においてモノホスフエート基質の対
応するジホスフエートのホスフオイル化の連度をNaOHの
340nmにおける吸光度の減少から計算した。アシクログ
アノシンモノホスフエートは式IIのモノホスフエートの
化合物よりキナーゼにたいしてかなり劣る基質であるた
め、式IIモノホスフエートの化合物の場合（0.0056単
位）よりもアシクログアノシンモノホスフエートの場合
（0.28単位）に多くの酵素を使用した。

上記の実験で得た初期速度を次の表で示される二つの基
質の動力学的パラメーターを計算するために用いた。デ
オキシグアノシンモノホスフエートに対して同様の実験
で得たパラメーターを比較のため包含した。

各ジオスフエートへ転化する酵素の基質として式IIのモ
ノホスフエートの化合物およびアシクログアノシンモノ
ホスフエートの相対効率は0.32/0.00065すなわち492対
１であつた。

実施例38 式Ｉの化合物の非環式モノホスフエートの酵素調製 式Ｉの化合物（1mg）をpH6.5の50mMリン酸カリウム緩衝
液、牛の血清アルブミン1mg/ml、アデノシントリホスフ
エート5mM、ジチオスレイトール1mM、ホスフオクレアチ
ン1mM、クレアチンキナーゼ12.5単位/ml、フツ化ナトリ
ウム2.5mMおよび精製HSV1−誘発チミジンキナーゼを含
有する全量0.5mlの混合液中37°で培養した。反応の進
行を高性能液体クロマトグラフイ（HPLC）で観察した。
式Ｉの化合物の65％がモノホスフエートに転化した時、
反応を停止した。生成物を分取用アニオン交換カラム
（AX−10、ヴアリアン）のHPLCクロマトグラフイで精製
し、溶離溶媒としてトリエチルアンモニウムカーボネー
トpH7.6を有するジエチルアミノエチルセルロース（DEA
E）のクロマトグラフイによつて脱塩した。生成物を含
有する画分を集めて溶媒を凍結乾燥で除き化合物Ｉモノ
ホスフエート500μｇを生成し、その純度を分析HPLCで
確認した。

実施例39 試験管内細胞培養におけるウイルス感染の処理 数種の異なるウイルス感染を防御するのに有効な式Ｉ、
式IIの化合物またはアシクログアニジンの最小濃度を定
量するために種々の細胞培養系において検定を行なつ
た。検定法は以下に述べるとおりであり結果を第１表に
示した。

a.単純ヘルペスウイルス１および２型： ウイルスの10組織培養感染服用量（TCID₅₀）に感染した
ウサギの腎臓細胞単層の50％のウイルス細胞変性の展開
を全体に抑制するために必要とされる式Ｉ式IIまたはア
シログアノシンの化合物を添付の表に示す。３種の化合
物すべてが匹敵する活性を示した。

b.水痘−帯状疱疹ウイルス： 式IIの化合物およびアシクログアノシンの両方とも、ヒ
トの胎児の二倍体肺細胞、MRC−５、の単層を用いるプ
ラク減少検定によつて定量したように、このヘルペスウ
イルスに対して同様に活性であつた。

c.エプスタイン−バーウイルス（EBV）： EBV−感染臍帯細胞（Ｂリンパ球）を感染時から式IIの
化合物１〜５μg/mlで連続処理して正常リンパ球の連続
増殖リンパ球細胞への転換阻害を生じた。反対に同様の
活性を示すためにアシクログアノシン10〜100μg/mlを
必要とした。

d.サイトメガロウイルス： 式IIの化合物は0.1〜0.6μg/mlを用いるMRC−５細胞単
層のサイトメガロウイルスプラク生成を抑制するのに有
効であつた。アシクログアノシンを用いて等価プラク抑
制（50％）を得るために2.2〜17.7μg/mlを必要とし
た。アシクログアノシン（95％（Ｉ）に対する式IIの化
合物の計算された平均相対効力は28.6であつた。

実施例40 マウスにおける単純ヘルペスウイルス感染治療 20gのICR/Haマウスに単純ヘルペスウイルスＩ型（HSV−
１）スクーラー菌株の保存製剤10^-5希釈0.5mlを腹腔内
（ip）に注射した。このウイルス攻撃を約100LD₅₀で各
動物に感染させた。ウイルス感染後直ちに開始し毎日２
回４日続け各動物にアシクログアノシン500μｇ、125μ
ｇまたは31μｇ、式Ｉの化合物500μｇ、または31μ
ｇ、式IIの化合物500μｇ、125μg125μｇまたは31μｇ
またはプラセボー（生理食塩水、pH11.5）を15のグルー
プに皮下注射した。プラセボーグループは45匹の動物か
ら構成された。

化合物はすべて生理食塩水pH11.5に溶解した。

マウスを15日間毎日同じ時間に観察し、死亡の日を各動
物に対して記録した。

負の指数転換によつて転換された生存時間について統計
的分析（参照：リデル、F.D.K.1978年、Evalution of S
urvival in Challenge Experiments,Microboil.Rev.第4
2巻、第237〜249頁）を行なつた。

f_(t)＝１−(0.1)^t/T 式中ｔ＝動物が生存した日数 Ｔ＝試験期間（15日） 連続補正の毎日の観察を説明するために用いた。

fc（ｔ）＝1/2〔ｆ（ｔ）＋ｆ（ｔ−１）〕 各グループの中で試験期間を通じて生存するマウスを0.
9および1.0の数値を同様に指定して試験の停止を調節し
た。

１グループ当り平均生存期間を次の通り平均補正転換生
存時間〔fc（ｔ）〕から計算した。

ｔ平均＝〔T/log（0.1）〕．〔log（１−fc（ｔ）〕要
約した結果を第２表に示す。

実施例41 マウスにおける単純ヘルペスウイルス感染の治療 各動物にアシクログアノシン1000μｇ、500μｇまたは1
25μｇ、式Ｉの化合物500μｇ、125μｇまたは31μｇ、
式IIの化合物500μｇ、125μｇ、31μｇ、８μｇまたは
２μｇまたはプラセボーを15のグループに毎日２回皮下
注射した以外は実施例36に記載した実験を繰り返した。

1000μｇ服用量アシクログアノシン治療グループおよび
式IIの化合物の500μｇ服用量治療グループは各10匹の
動物で構成された。要約した結果を第３表に示す。

実施例36および37からの組合わせた結果を用いて式Ｉの
化合物および式IIの化合物のアシクログアノシン（95％
CI）に対する計算平均相対効力は各々9.2および287.0で
あつた。

実施例42 次は単純ヘルペスウイルス１型（HSV1）および２型（HS
V2）に対するカリウム９−（1,3−ジヒドロキシ−２−
プロポキシメチル）グアニン環式モノホスフエートの試
験管内および生体内抗ウイルス作用の概要である。

試験管内検定： 方法：ウサギの腎臓の初代細胞培養の融合単層を試験化
合物の系列希釈を含有する細胞維持培養液で再供給し、
37°で一晩培養した。各希釈において４培養を約10TCID
₅₀のHSV1で攻撃し、４培養を約10TCID₅₀のHSV2で攻撃し
そして２培養を毒性コントロールとして残した。培養を
37°で再培養し５日および７日目にウイルス誘発細胞変
性を観察した。

結果： 生体内検定： 方法:20gICR/Haマウスに腹腔内経路でHSV1（スクーラー
菌株）の約100致死量（100LD₅₀）を感染させた。10匹の
感染した動物のグループにカリウム９−（1,3−ジヒド
ロキシ−２−プロポキシメチル）グアニン環状モノホス
フエートの最終日用量50、12.5、3.1、0.8、0.2、0.05
および0.0125mg/Kgで皮下注射することによつて感染後
直ちに始めて４日間毎日２回治療した。マウスを15日間
同じ時間に毎日観察し、死亡の日を各動物に対して記録
した。平均生存時間（日）および15日間における生存％
を第４表に示す。

結論：カリウム９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポ
キシメチル）グアニン環式モノホスフエートは試験管内
および生体内で単純ヘルペスウイルスに対して有意な抗
ウイルス作用を示した。

実施例43 ９−（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル）グ
アニン環状−リン酸カリウム（以下、「環状モノホスフ
エート」と記載する）に関する比較データ A.生体外：細胞培養系における「環状モノホスフエー
ト」の抗ウイルス活性 各種の構胞培養系を用いて分析を実施し、抗ウイルス有
効投与量、即ち、ウイルスプラークの発生数を未処理ウ
イルスコントロールでの発生数の50％まで阻害するのに
要する薬物濃度として定義されるED₅₀（μg/ml）を決定
した。「環状モノホスフエート」に関し決定されたED₅₀
値を、式IIの化合物及びアサイクロビアのそれと重量基
準で比較する。表IIの結果参照。

結論： １）「環状モノホスフエート」は、単純ヘルペスウイル
ス感染に対し、式IIの化合物又はアサイクロビアよりも
低活性であつた。この差異は５〜30培の間で変動した。

２）「環状モノホスフエート」は、ヒトのサイトメガロ
ウイルスのAD₁₆₉株に対し、式IIの化合物と等効力であ
つた。両化合物は、アサイクロビアよりも約10倍効力が
あつた。

３）「環状モノホスフエート」は、水痘・帯状疱疹ウイ
ルスのKMcC株に対し、式IIの化合物又はアサイクロビア
よりも約10倍効力があつた。

４）「環状モノホスフエート」は、試験された二種の動
物ヘルペスウイルス、即ちウマヘルペスウイルス及びネ
コ鼻腔気管炎ウイルスに対し（データ示さず）活性があ
る（ED₅₀約１μg/ml）。

５）「環状モノホスフエート」は、試験された各DNAウ
イルス（ワクシニア（vaccinia）SV₄₀及びアデノウイル
ス）について阻害的であつたが、RNAウイルス複製（イ
ンフルエンザＡ、水痘性口内炎及びポリオウイルス）に
対しては効果がなかつた。

以下の細胞培養系が表Ｖに示した試験で使用された： 単純ヘルペスウイルス、サイトメガロウイルス、水痘・
帯状疱疹ウイルス及びワクシニアは、MRC5（ヒト二倍体
肺）細胞培養系で試験された。

SV₄₀はCV−１（サル）細胞培養系で試験された。

アデノ２型はBSC（サル）細胞培養系で試験された。

B.生体内：単純ヘルペスウイルス動物モデル感染系に対
する「環状モノホスフエート」の抗ウイルス活性 1.評価された動物モデル系 モデルヘルペス感染系が、臨床的ヘルペス感染をシミユ
レートするために確立された。

a.マウスの腹腔内HSV−１感染により、肝臓、脾臓にお
ける併発ウイルス血症、そしてついには中枢神経系まで
及ぶ全身感染となる。動物は脳炎を発生する。経口摂取
による薬物効力は、動物の生存時間の延長をプラセボ処
理動物と比較することにより評価される。動物は、HSV
−１（５−10×10²プラーク形成単位）の50〜100倍の致
死相当量で試験された。

b.直接的脳炎は大脳内HSV−１接種により確立すること
ができる。このモデル的感染は、非経口的に投与された
薬物が血液−脳間の障壁を効率良く通過できるかどうか
を試験するために行なわれる。感染を哺乳したばかりの
マウスで行なうと大脳内接種が容易である。皮下に投与
された薬物の効力は、動物の生存時間の延長により検定
される。

c.無毛マウスのHSV−１口顔（orofacial）感染により、
疱疹の破裂によつて紅斑領域が生じ、痂皮が形成される
典型的な進行経路を伴う局所的急性ヘルペス感染症とな
る。大多数の感染マウスは生存し、潜伏性神経節感染症
を保有しているが、HSV−１感染マウスから三叉神経の
神経節を除去し共培養することにより活性化させること
ができる。薬物の評価は、プラセボ処理感染マウス（感
染後７日目）における最大発病時における局所的な口顔
表面の病変の発生の抑制度合に基づいて行なわれる。こ
のモデルは経口的及び局所的に投与された薬物を評価す
るのに用いられた。

d.マウスのHSV−２膣感染は、性器部位の局所的急性感
染から、四肢麻痺、更に最終的に死に至るまで進行す
る。これは一貫しており、再現可能なモデルであるが、
ヒト性器疾患よりも悪性かつ進行性である。薬物の効力
は動物生存時間の延長により、また急性の局所的なもの
から麻痺、死へと進行する病気の抑制によつて最終的に
検定される。動物はHSV−２の致死相当量の10倍以上を
用いてチヤレンジされる。このモデルは経口摂取で投与
して評価するのに用いられた。

e.HSV−１によるウサギの目の感染によつて、３日以内
に斑点状及び／又は樹枝状の疱疹角膜病変が表われる。
感染は角膜表面の80％にまで広がり、未処理ウサギにあ
つては６〜８日以内により深部の基質に広がる。数匹の
動物は最終的に脳炎で死ぬ。薬物の効力は、角膜及び基
質における病変の進行の抑制度合をプラセボ処理感染動
物と比較して評価される。薬物は一日５回点眼投与し
た。病変の重篤度は、薬物投与に先立ちスリツト・ラン
プ顕微鏡検査を行ない評価した。

表VIに要約したデータは用量応答薬物滴定により決定さ
れた。最小有効量は、プラセボ処理動物と比較して、生
存時間の有意な増加又は局所的病変の重篤度における有
意の減少を生じる用量として決定される。処置は、腹腔
内、大脳内、口顔面及び膣感染による感染から３時間以
内に行なわれた。角膜HSV−１感染ウサギの処置は感染
後３日目に行なわれたが、その際疱疹病変は顕著であつ
た。

表VIの結果参照。

腹腔内及び口顔表の感染では、ICR/Ha及びHRSマウスにH
SV−１が用いられた。角膜感染はウサギで行なわれた。

HSVC−２膣感染はICR/Haマウスであつた。HSV−１大脳
内感染はICR/Ha離乳マウスであつた。

経口的処置は、リン酸緩衝液に溶解された薬物を用い、
10日目まで１日２回経口摂取によつた。局所的処置で
は、ヒドロアルコールベヒクルに溶解された薬物を１日
４回口顔面に投与し、又は点眼として１日５回投与し
た。

腹腔内、大脳内及び膣感染の経口的及び皮下的処置にお
ける最小有効量は、プラセボ処理マウスと比較して生存
時間を有意に増加させるのに充分なmg/Kg/日の値として
測定した。口顔面感染の経口的処置については、最小有
効量は、プラセボ処理マウスと比較し、病変の重篤度
（未検出の病変から全体的な口顔面への広がりまで分類
された等級の病変サイズ）を有意に減少させるのに充分
な薬物のmg/Kg/日の値として測定した。局所的処置にお
いて、最小有効量は病変の重篤度を有意に減少させる投
与薬物の％として表わされる。

2.結論 a.「環状モノホスフエート」は、ヘルペスモデル感染に
おいて経口的又は局所的に用いた場合に有効な抗ヘルペ
ス剤であつた。

b.最小有効量について検定すると、環状−リン酸エステ
ルは、マウスの腹腔内、大脳内、口顔面及び膣感染に対
して、アサイクロビアよりも一貫して効力があつた。
「環状モノホスフエート」及びアサイクロビアは、感染
したウサギの角膜病変の進行を抑制し、かつそれを消失
させる上で同等の効力を有していた。

c.表VIには示していないが、試験されたヘルペス−マウ
ス感染モデルにおける「環状モノホスフエート」の抗ウ
イルス効力は、式IIの化合物を用いて実施したそれと大
体同等であつた。

d.「環状モノホスフエート」は、HSV−２膣感染後72時
間以内に処置が開始された場合に治療上の効果があつた
（表VII参照）。アサイクロビアを用いた比較処置で
は、膣感染の進行が麻痺及び死に至り、効果がなかつ
た。

「環状モノホスフエート」は、最小有効量で測定した場
合、式IIの化合物のそれに匹敵する生体内抗ウイルス活
性を一貫して示し；アサイクロビアによるそれに一貫し
て優れていた。これに対し、「環状モノホスフエート」
は、細胞培養系におけるHSV感染に対して、式IIの化合
物又はアサイクロビアよりも約10倍活性が低い。環状モ
ノホスフエートが生体内で非常に効力がある理由につい
てはまだ説明できないが、式IIの化合物及びアサイクロ
ビアと比較した場合、その理由は吸収性及び組織への分
布性に影響を及ぼす易溶性にある。しかしながら、重要
なのは、「環状モノホスフエート」が、水痘・帯状疱疹
ウイルスに対し生体外においてアサイクロビア又は式II
の化合物よりも意外にも実質上効力があるということで
ある。「環状モノホスフエート」が生体外よりも生体内
において実質的に効果を発揮するらしいという事実から
すると、哺乳動物の治療用途にあつてはその比較上の有
効性はより一層価値があるであろうことが期待される。

c.作用機序 「環状モノホスフエート」及び式IIの化合物の間にみら
れる異なつた抗ウイルス特異性（例えば、水痘・帯状疱
疹ウイルス、ワクシニア、SV₄₀及びアデノウイルスに対
する「環状モノホスフエートの高い活性）から示唆され
るように、「環状モノホスフエート」は式IIの化合物の
プロドラツグとしてまず作用するのではなく、代わりに
独自の抗ウイルス活性メカニズムを有している。

更にこの証拠は以下により説明することができる： 「環状モノホスフエート」の生物学的活性はウイルスチ
ミジンキナーゼに依存していないということである。

生体外データ： 1.HSV−１に対する式IIの化合物の生体外抗ウイルス活
性はチミジンの添加により容易に逆転した。例えば、式
IIの化合物のED₅₀はチミジンの非存在下で0.8〜1.6μg/
ml、チミジン20μg/mlの存在下で25μg/mlであり、15倍
以上の抗ウイルス活性の減少があつた。一方、チミジン
の添加は、「環状モノホスフエート」の場合、２〜４
倍、即ち12.5μg/ml〜25〜50μｇの範囲内でED₅₀を減少
させた。

2.式IIの化合物に耐性のあるHSV−１突然変異体、HSV−
１（383_R1）がHSV−１スクーラー（Schooler）株から分
離されたが、HSV−１（383_R1）は式IIの化合物からの保
護に関し約100分の１の感受性を有するが、「環状モノ
ホスフエート」については野生型よりもわずかに４〜８
倍低い感受性を有するにとどまる。

HSV−１（383_R1）はチミジンをホスホリル化する能力を
HSV−１の約10〜20％有するか、式IIの化合物のホスホ
リル化能はない。

「環状モノホスフエート」及び式IIの化合物は、HSV−
１及びHSV−１（383_R1）に対する抗ウイルス効力につい
て細胞性チミジンキナーゼが不足した細胞培養系（3T3T
K^-）及びヘルペスTKを運搬するように形質転換された細
胞培養系（3T3TK^-／TK⁺ _HSV）で評価した。結果は表VIII
に示されている。前記生化学研究で示したように式IIの
化合物の抗ウイルス活性は、ウイルスチミジンキナーゼ
の現出に依存する。式IIの化合物は、3T3TK^-又は3T3TK^-
／TK⁺ _HSV細胞のHSV−１感染に対し、あるいは3T3TK^-／T
K⁺ _HSV細胞におけるHSV−１（383_R1）に対して同程度に
有効であるが（ED₅₀＝0.06μg/μｌ）、3T3TK^-細胞のHS
V−１（383_R1）に対しては100倍低活性である（ED₅₀＝
5.0μg/ml）。

一方、「環状モノホスフエートの抗ウイルス活性は、3T
3TK^-／TK⁺ _HSV細胞又は3T3TK^-細胞におけるHSV−１38
3_R1）に対して同等である。「環状モノホスフエート」
に対するHSV−１の感受性はHSV−１（383_R1）の約５倍
大きいが、この差異はウイルスTKの存在と無関係であ
る。

生体内データ： 1.「環状モノホスフエート」及び式IIの化合物の比較的
類似した効力が、HSV−１又はHSV−１（383_R1）での腹
腔内感染に対するマウスの保護能について観察された。
HSV−１又はHSV−１（383_R1）の用量を増加させて腹腔
内感染させたマウス群を、「環状モノホスフエート」又
は式IIの化合物で４日間皮下的に１日２回処理した。処
理マウスの平均生存時間を比較した。10⁶倍のウイルス
接種範囲では各薬物の保護効力に有意差はなく、例えば
保護能はウイルス接種量を増加させても低下することが
なかつた。

しかしながら、式IIの化合物の効力は、野生型HSV−１
よりも耐性突然変異体HSV−１（383_R1）に対して有意に
低かつた（表IX参照）。一方、「環状モノホスフエー
ト」はHSV−１又はHSV−１（383_R1）に対し同等の効力
であり、HSV−１に対しては式IIの化合物と同程度の効
力があつた。

III.遺伝学的研究 DNAポリメラーゼ遺伝子の変異により変化した数種のHSV
−１及びHSV−２株の薬物感受性を比較した。更に、こ
れらのHSV−１及びHSV−２株の相互組変え型の選択と、
組変え型における異質のDNAポリメラーゼゲノム導入を
制限させるための詳細な遺伝子地図作成により、HSVのD
NAポリメラーゼゲノム内の薬物耐性部位を詳細に地図化
する上で有用な系が開発された。

式IIの化合物の耐性部位に連坐するウイルスのDNAポリ
メラーゼゲノム部位は、PAA、アサイクロビア及びアデ
ニンアラビノシドに耐性を示す部位から離れて位置して
いることが決定された。

同様の相互組変え型が「環状モノホスフエート」への感
受性について評価され、その結果を表Ｘに示した。DNA
ポリメラーゼの突然変異によりPAA、アサイクロビア及
びアデニンアラビノシドに耐性を示す変換ポリメラーゼ
が生じるが、「環状モノホスフエート」に対しても耐性
を示すようである（例えば、R6−34、R6−19、PA
A^R ₁）。しかしながら、HSV−2Ts 6は式IIの化合物に対
し耐性であるものの、PLAA、アサイクロビア及び「環状
モノホスフエート」には感受性が残つている。

この結果は「環状モノホスフエート」への耐性部位は、
PAA、アサイクロビア及びアデニンアラビノシドに対す
る耐性があるDNAポリメラーゼゲノム部位と近接して結
合しているということを示す。更に、この部位は式IIの
化合物に対し耐性を発現するDNA鎖とは別個に存在す
る。

このことは、式IIの化合物及び生体系で合成されたその
リン酸エステル誘導体とは無関係の作用で、「環状モノ
ホスフエート」がその抗ウイルス活性の一部又は全部を
発揮していることを示唆する。

IV.結論 1.生体外及び生体内効力試験ではいずれも、「環状モノ
ホスフエート」の抗ウイルス活性が式IIの化合物の変換
とは無関係であり、「環状モノホスフエート」が式IIの
化合物にとつて重要なプロドラツクではないことを示し
ている。

2.HSVのDNAポリメラーゼ座の突然変異により、式IIの化
合物又は「環状モノホスフエート」に対しそれぞれ別個
に耐性を付与することができる。「環状モノホスフエー
ト」への耐性は、アサイクロビア、ホスホノ酢酸及びア
デニンアラビノシドに対する耐性と強く関係しているよ
うである。これらの結果は、ウイルスDNAポリメラーゼ
の阻害が式IIの化合物及び「環状モノホスフエート」が
別の活性化生成物に変化するために生じることを示唆し
ている。

実施例44 マウスにおける単純ヘルペスウイルス感染の治療： 単純ヘルペス１型腹腔内感染、経口治療 ICR/Haマウスを実施例36で記載した通り感染させた。10
匹の感染動物のグループをアシクログアノジン100、5
0、12、５、３、１または0.8mg/Kgまたは式IIの化合物5
0、12.5、３、１、0.8または0.2mg/Kgの最終日用量の経
口摂食によつて感染直後から７日間毎日２回治療した。
さらに５匹の非感染動物の２グループを最終日用量50mg
/Kgの経口摂食によつて７日間毎日２回アシクログアノ
シンまたは式IIの化合物で治療した。これらの動物を毒
性コントロールとして扱つた。要約した結果を第11表に
示す。

式IIの化合物での治療は50、12.5、３、１および0.8mg/
Kg日用量でプラセボー処理動物に比較して統計的に有意
な生存時間の延長を生じる。

アシクログアノシン治療によつて100および50mg/Kg日用
量だけでプラセボー処理動物に比較して統計的に有意な
生存時間の延長を生じる。

式IIの化合物50mg/Kgで治療した動物全部が試験に残つ
た。50および12.5mg/Kg治療グループの生存はプラセボ
ー処理グループより統計的に有意に長かつた。反対にア
シクログアノシン治療グループはいずれも生存の延長を
示さなかつた。

アシクログアニジンに対する式IIの化合物の相対効力は
50.3であり統計的に有意であつた。

試験動物の最終重量によつて測定されるようにアシクロ
グアノシンまたは式II化合物治療グループに明白な毒性
は見られなかつた。

実施例45 マウスにおける単純ヘルペスウイルス感染治療：単純ヘ
ルペスウイルス２型膣感染、経口治療 30gICR/Ha雌のマウスに膣内経路によつて10LD₅₀以上の
単純ヘルペスウイルス２型（カーチス菌株）を感染させ
た。10匹の動物のグループを感染後直ちに始めて50、1
2.5、３、１、0.8または0.2mg/Kgの最終日用量のアシク
ログアノシンまたは式IIの化合物を用いて経口摂食で10
日間毎日２回治療した。感染までの平均日数および生存
平均日数を各グループに対して定量し感染したプラセボ
ー治療グループと比較した。要約した結果を第12表に示
す。

50mgまたは12.5mg/Kgの式IIの化合物で治療した全動物
がテストに生き残り、50、12.5および3.1mg/Kg式IIの化
合物の治療グループの生存率がプラセボー治療グループ
に比較して統計的に有意に増加した。反対に50mg/Kgア
シクログアノシン治療グループだけが統計的に有効な増
加した生存を示した。

50、12.5、３、１および0.8mg/Kgの式IIの化合物がプラ
セボー治療感染動物に比較して生存時間に統計的に有効
な増大を生じた。50および12.5mg/Kgのアシクログアノ
シンが同様に有効であつた。

生存によつて測定されるようにアシクログアノシンに対
する式IIの化合物の相対効力は28.1であり、統計的に有
意であつた。

50mg/Kgの式IIの化合物で治療した動物はすべてテスト
期間中ヘルペス感染の徴候を認めなかつた。50mg/Kgお
よび12.5mg/Kg両方の式IIの化合物およびアシクログア
ノシンはプラセボー治療動物に比較して感染（膣病巣お
よび／または麻痺の発病）までの日数に統計的に有意な
増加を生じた。

感染までの時間で測定される式IIの化合物のアシクログ
アノシンに対する相対効力は4.14であり、統計的に有意
であつた。

実施例46 マウスにおける単純ヘルペスウイルスの治療：単純ヘル
ペスウイルス１型口顔面 （Orofacial）感染、経口治療 20gのHRS（無毛）マウスに単純ヘルペスウイルス１型
（Ｓ菌株）をすりむいた口顔面範囲に感染させた。各々
10匹の感染した動物からなるグループをアシクログアノ
シンに対して50、12.5、３、１および0.8mg/Kgおよび式
IIの化合物に対して50、12.5、３、１、0.8および0.2mg
/Kgの最終日用量を用いて感染後３時間から始めて７日
間毎日２回経口摂食によつて治療した。感染開始７日後
に口顔面範囲の病変発生の程度を０（病変なし）から４
（完全な鼻より大きい病変）の度合で測定した。病変の
頻度および平均病変の評点を添付の表および第２図に示
す。

式IIの化合物の治療は病変発生の程度によつて測定され
る場合、プラセボー治療感染動物に比較して使用した全
濃度において統計的に有意な防御を生じた。アシクログ
アノシン治療は50および12.5mg/Kg投与量だけ統計的に
有効な防御を生じた。

式IIの化合物の治療は病変の発生程度によつて測定され
る場合プラセボー治療感染動物の発生程度に比較して50
および12.5mg/Kgにおいて統計的に有意な防御を生じ
た。反対にアシクログアノシン治療は50mg/Kgにおいて
のみ統計的に有意な防御を生じた。

アシクログアノシンに対する式IIの化合物の相対効力は
6.9であり、統計的に有意であつた。

実施例47 マウスにおける単純ヘルペスウイルス感染の治療：単純
ヘルペスウイルス１型口顔面感染経口治療 20gのHRS（無毛）マウスに単純ヘルペスウイルス１型
（Ｓ菌株）をすりむいた口顔面範囲に感染させた。

a.10匹の感染した動物のグループを感染後３、８、12、
24、48、72または96時間に始めて12.5mg/Kg/日の式IIの
化合物で７日までの間に経口摂食で毎日２回治療した。

b.第二の実験ではアシクログアノシンの治療効能を同様
の方法で評価した。10匹の感染した動物のグループを感
染後３、８、12、24、48、72または96時間で開始して1
2.5mg/Kg/日のアシクログアノシンで７日までの間に経
口摂食で毎日２回治療した。

感染開始後７日において口顔面範囲の病変進行の程度を
０（病変なし）から４（鼻づら全面にわたる重い病変）
の度合で測定した。平均病変評点を第14表に示す。

HSV−１で感染後72時間も遅く始めて式IIの化合物を受
けた感染マウスはプラセボーを受けるマウスよりも統計
的に有意な低い病変評点を示した。反対にアシクログア
ノシン治療に対しては、感染３時間後に始めの治療を受
けたマウスだけがプラセボーグループより病変評点が統
計的に異なつた。さらに感染８、12および24時間後に始
める式IIの化合物を受ける感染マウスはプラセボーを受
けるマウスより統計的に有効な低い頻度の病変進行を有
した。アシクログアノシン治療グループはいずれも各プ
ラセボー治療動物より有効な低い頻度の病変を有しなか
つた。

式ＩおよびIIの化合物のホスフエート誘導体の製造方法 式ＩおよびIIの化合物のモノおよびポリホスフエート誘
導体はトリエチルホスフエートのような適当な非プロト
ン性溶媒中式ＩまたはIIの化合物をホスフオリルクロラ
イドのようなホスフオリル化剤と反応させ、生成した中
間体を水または塩基で処理することによつて化学的に製
造することができる。この反応の主な生成物は式Ｉまた
はIIの環式ホスフエートであるが、非環式モノおよびジ
ホスフエートもまた生成する。生成物比は作用物質の量
または治療の長さおよび温度の変化によつて変えること
ができる。

炭化水素非極性溶媒で沈殿し、アルコールで反応停止す
ることによつてホスフオリル化中間体を分離することも
都合がよい。この反応の生成物は塩基性水性処理が使用
されるかされないかに依存してアルキルホスフオトリエ
ステルまたはアルキルホスフオジエステルであることが
できる。

式ＩおよびIIの化合物のホスフオリル化誘導似〔即ちモ
ノ−線状ジ−（ピロホスフエート）または線状トリホス
フエート〕もまた式ＩまたはIIの化合物をHSV1チミジン
キナーゼ（モノホスフエートを製造するために）で、さ
らにグアノシンモノホスフエートキナーゼ（ピロホスフ
エートを製造するために）で、そしてさらに３−ホスフ
オグリセレートキナーゼ（トリホスフエートを製造する
ために）で処理することによつて酵素的に製造すること
ができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は濃度に対するホスフオリル化反応速度曲線を示
すものである。 第２図はHSV−１感染マウスをアシクログアノシンまた
は式IIの化合物で治療した結果を示す棒グラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ジヨン デー．カーカス アメリカ合衆国．10027 ニユーヨーク. ニユーヨーク．ウエスト ワンハツドレツ ドシツクステイーンス ストリート404 (72)発明者 リチヤード エル．トルマン アメリカ合衆国．07060 ニユージヤーシ イ．ウオーレン．アツパー ウオーレン ウエイ 29

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】式： 〔上記式中、R¹及びR²は であり、R^U3はアリール、置換アリール、ヘテロ環基、
   アラルキル、アルコキシアルキル又はアリールオキシア
   ルキルであるか、あるいは化合物が式Ｉの化合物である
   場合は、一以上のヒドロキシ、アミノ又はカルボキシル
   基で置換されているアルキル基であってもよい、R⁸はＨ
   である〕の化合物及び薬学上許容されるその塩。
2. 【請求項２】特許請求の範囲第１項記載の式Ｉの化合
   物。
3. 【請求項３】R³が直鎖もしくは分岐状、飽和もしくはモ
   ノ−ないしポリ不飽和であってもよく、しかも一以上の
   ヒドロキシ、アミノ又はカルボキシル基で置換されてい
   る炭素原子数１〜20のアルキルである特許請求の範囲第
   ２項記載の化合物。
4. 【請求項４】R²がアミノ基を含有している特許請求の範
   囲第１項記載の化合物。
5. 【請求項５】R²がヒドロキシ基を含有している特許請求
   の範囲第１項記載の化合物。
6. 【請求項６】R²がカルボキシル基を含有している特許請
   求の範囲第１項記載の化合物。
7. 【請求項７】R²が-CH(CH₃)NH₂、-CH₂NH₂、-CH(CH₂OH)NH
   ₂、-(CH₂)₂COOH、-CH₂OH又は-CH(NH₂)CH₂COOHである特
   許請求の範囲第１項記載の化合物。
8. 【請求項８】次式： （式中、R₆は で、R⁷は であるか、あるいはR⁶は で、R⁷はＨであって、R⁸は特許請求の範囲第１項と同義
   である）で示される特許請求の範囲第１項記載の化合
   物。
9. 【請求項９】式： の化合物（R¹、R²及びR⁸はそれぞれＨである）を式R³Ｃ
   （＝Ｏ）Ｘ（Ｘはカルボキシル活性基である）のアシル
   化化合物と反応せしめ、２当量のアシル化化合物が式Ｉ
   又はIIの化合物と反応せしめられるまで反応が続けられ
   た場合はジアシル化誘導体が得られることからなる下記
   の式： （式中、R⁶は で、R⁷は であるか、あるいはR⁶は で、R⁷はＨであって、R⁸はＨであり、 R³はアリール、置換アリール、ヘテロ環基、アラルキ
   ル、アルコキシアルキル又はアリールオキシアルキルで
   あり、 R⁶が でR⁷がＨである場合には、、R³は一以上のヒドロキシ、
   アミノ又はカルボキシル基で置換されているアルキル基
   であってもよい）の化合物の製造方法。
10. 【請求項１０】カルボキシル活性化基がハロゲン、アシ
    ルオキシ、１−ベンゾトリアゾリルオキシ、Ｎ−スクシ
    ンイミジルオキシ又は1,3−二置換イソウレイドである
    特許請求の範囲第９項記載の方法。
11. 【請求項１１】抗ウイルス効果の発現に有効な量の式： 〔上記式中、R¹及びR²は であり、R³はアリール、置換アリール、ヘテロ環基、ア
    ラルキル、アルコキシアルキル又はアリールオキシアル
    キルであるか、あるいは化合物が式Ｉの化合物である場
    合は、一以上のヒドロキシ、アミノ又はカルボキシル基
    で置換されているアルキル基であってもよい、R⁸はＨで
    ある〕の化合物及び薬学上許容される担体からなる医薬
    組成物。
12. 【請求項１２】ウイルスがヘルペスウイルスである特許
    請求の範囲第11項記載の医薬組成物。