JPH07236895A - トリクレンの分解方法 - Google Patents
トリクレンの分解方法Info
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- JPH07236895A JPH07236895A JP3061494A JP3061494A JPH07236895A JP H07236895 A JPH07236895 A JP H07236895A JP 3061494 A JP3061494 A JP 3061494A JP 3061494 A JP3061494 A JP 3061494A JP H07236895 A JPH07236895 A JP H07236895A
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- Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 効率的で経済的なトリクレンの分解方法を提
供することを目的とする。 【構成】 トリクレンを含有する培地で、トリクレン分
解能力を有するシュードモナス、アエルギノサＪＩ１０
４を好気的に培養して、培地中のトリクレンを分解す
る。トリクレンを分解する酵素群を合成するためにトル
エン等の芳香族炭化水素を培地に添加する。シュードモ
ナス、アエルギノサＪＩ１０４は、トリクレン分解速度
が速い。
供することを目的とする。 【構成】 トリクレンを含有する培地で、トリクレン分
解能力を有するシュードモナス、アエルギノサＪＩ１０
４を好気的に培養して、培地中のトリクレンを分解す
る。トリクレンを分解する酵素群を合成するためにトル
エン等の芳香族炭化水素を培地に添加する。シュードモ
ナス、アエルギノサＪＩ１０４は、トリクレン分解速度
が速い。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、微生物によるトリク
レンの分解方法に関するものである。
レンの分解方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】トリクレン（トリクロロエチレン）は揮
発性の塩素化化合物であり、溶媒や脱脂剤として使用で
きるため、広く工業的に用いられている。しかしなが
ら、トリクレンは発癌性を有すると考えられているた
め、廃水等によるトリクレンの土壌や地下水への汚染が
問題となっている。廃水中のトリクレンもしくは低沸点
有機塩素系溶剤を処理するための技術はこれまであまり
検討されたことがなく、僅かに高沸点の炭化水素を用い
てトリクレンを抽出して除去する方法がある程度であ
る。
発性の塩素化化合物であり、溶媒や脱脂剤として使用で
きるため、広く工業的に用いられている。しかしなが
ら、トリクレンは発癌性を有すると考えられているた
め、廃水等によるトリクレンの土壌や地下水への汚染が
問題となっている。廃水中のトリクレンもしくは低沸点
有機塩素系溶剤を処理するための技術はこれまであまり
検討されたことがなく、僅かに高沸点の炭化水素を用い
てトリクレンを抽出して除去する方法がある程度であ
る。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】トリクレンを除去する
方法はあまり検討されてなく、かつ従来のトリクレンを
除去する方法はコストが高く経済的でないなどの問題点
があった。この発明は上記のような問題点を解消するた
めになされたもので、効率的で経済的なトリクレンの分
解方法を提供することを目的とする。
方法はあまり検討されてなく、かつ従来のトリクレンを
除去する方法はコストが高く経済的でないなどの問題点
があった。この発明は上記のような問題点を解消するた
めになされたもので、効率的で経済的なトリクレンの分
解方法を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】請求項１の発明に係るト
リクレンの分解方法は、トリクレンに作用してトリクレ
ンを分解する能力（トリクレン分解能力）を有する微生
物を、トリクレンを含有する培地で、好気的に培養する
ようにしたものである。
リクレンの分解方法は、トリクレンに作用してトリクレ
ンを分解する能力（トリクレン分解能力）を有する微生
物を、トリクレンを含有する培地で、好気的に培養する
ようにしたものである。
【０００５】請求項２の発明に係るトリクレンの分解方
法は、請求項１記載の方法で用いる微生物としてシュー
ドモナス、アエルギノサＪＩ１０４（生命工学工業技術
研究所寄託第１２１８０号）を用いたものである。
法は、請求項１記載の方法で用いる微生物としてシュー
ドモナス、アエルギノサＪＩ１０４（生命工学工業技術
研究所寄託第１２１８０号）を用いたものである。
【０００６】本発明で用いる微生物は、土壌からスクリ
ーニングして得られたものであり、トリクレン分解能力
を有する微生物であれば特に限定されないが、例えば好
適な微生物としてシュードモナス、アエルギノサＪＩ１
０４が挙げられる。本発明で使用する培地は、炭素源と
してはぶどう糖等が、窒素源としてはアンモニウム塩，
硝酸塩等が用いられる。無機塩類としては、例えば、食
塩，燐酸塩，カルシウム塩，鉄，マグネシウム塩などの
金属塩類が適宜用いられる。培地に含まれるトリクレン
の濃度は約１０ｍｇ／ｌ程度が好ましい。本発明におい
てシュードモナス属の微生物を用いてトリクレンを分解
する際には、これらの微生物の前培養でベンゼン，トル
エンもしくはキシレンをトリクレン分解酵素群の誘導の
ため加える。培養は、通常約３０℃前後の温度で震とう
又はエアレーション等の好気的条件下で約１０時間〜１
週間行う。
ーニングして得られたものであり、トリクレン分解能力
を有する微生物であれば特に限定されないが、例えば好
適な微生物としてシュードモナス、アエルギノサＪＩ１
０４が挙げられる。本発明で使用する培地は、炭素源と
してはぶどう糖等が、窒素源としてはアンモニウム塩，
硝酸塩等が用いられる。無機塩類としては、例えば、食
塩，燐酸塩，カルシウム塩，鉄，マグネシウム塩などの
金属塩類が適宜用いられる。培地に含まれるトリクレン
の濃度は約１０ｍｇ／ｌ程度が好ましい。本発明におい
てシュードモナス属の微生物を用いてトリクレンを分解
する際には、これらの微生物の前培養でベンゼン，トル
エンもしくはキシレンをトリクレン分解酵素群の誘導の
ため加える。培養は、通常約３０℃前後の温度で震とう
又はエアレーション等の好気的条件下で約１０時間〜１
週間行う。
【０００７】
【作用】請求項１の発明におけるトリクレンの分解方法
は、トリクレン分解能力を有する微生物をトリクレンを
含有する培地で好気的に培養するので、微生物がトリク
レンを分解することが可能になる。
は、トリクレン分解能力を有する微生物をトリクレンを
含有する培地で好気的に培養するので、微生物がトリク
レンを分解することが可能になる。
【０００８】請求項２の発明におけるトリクレンの分解
方法は、トリクレン分解能力を有するシュードモナス、
アエルギノサＪＩ１０４をトリクレンを含有する培地で
好気的に培養するので、シュードモナス、アエルギノサ
ＪＩ１０４がトリクレンを分解することが可能になる。
方法は、トリクレン分解能力を有するシュードモナス、
アエルギノサＪＩ１０４をトリクレンを含有する培地で
好気的に培養するので、シュードモナス、アエルギノサ
ＪＩ１０４がトリクレンを分解することが可能になる。
【０００９】
（シュードモナス、アエルギノサＪＩ１０４の同定）本
発明で用いる微生物のＪＩ１０４株は本発明者らが日本
各地より採取した多種類の土壌からのスクリーニングに
より見出だした。その菌学的性質を表１〜表３に示す。
発明で用いる微生物のＪＩ１０４株は本発明者らが日本
各地より採取した多種類の土壌からのスクリーニングに
より見出だした。その菌学的性質を表１〜表３に示す。
【００１０】
【表１】
【表２】
【表３】
【００１１】表１〜表３に示される菌学的性質からこの
ＪＩ１０４株はシュードモナス属アエルギノサ種に属す
るものと同定された。このＪＩ１０４株は生命工学工業
技術研究所に第１２１８０号として寄託されている。な
お、この微生物はトリクレンの他、ベンセン，トルエ
ン，キシレン，エチルベンゼンなどに作用してそれらを
分解できる。
ＪＩ１０４株はシュードモナス属アエルギノサ種に属す
るものと同定された。このＪＩ１０４株は生命工学工業
技術研究所に第１２１８０号として寄託されている。な
お、この微生物はトリクレンの他、ベンセン，トルエ
ン，キシレン，エチルベンゼンなどに作用してそれらを
分解できる。
【００１２】実施例１．以下、この発明の一実施例を図
について説明する。シュードモナス、アエルギノサＪＩ
１０４を、ぶどう糖を炭素源とした１００ｍｌのＭＳＢ
培地で、一夜前培養した後、増殖した菌体を遠心分離機
で集菌して、再びＭＳＢ培地に懸濁して濁度を１．０に
合わせた。この菌体懸濁液２ｍｌを、ふっ素樹脂でコー
トしたゴム栓付きの内容積１３．４ｍｌの血液バイアル
に、分取し密閉して、これにトリクレンを２０μｇ加え
て２５℃で約２４時間培養した。この培養期間におい
て、経時的に気相を採取して気相中のトリクレンの濃度
を測定した。ここで、トルエンの培地への添加の有無に
よるＪＩ１０４のトリクレン分解能力への影響を調べる
ため、前培養と本培養の両方の培地にトルエンを最終濃
度２ｍＭになるように加えた場合、前培養の培地にのみ
トルエンを最終濃度２ｍＭになるように加えた場合、又
は前培養及び本培養の培地のいずれにもトルエンを加え
ない場合についてトリクレン分解能力を測定した。それ
ぞれの場合において、本培養でトリクレンを加えてい
る。
について説明する。シュードモナス、アエルギノサＪＩ
１０４を、ぶどう糖を炭素源とした１００ｍｌのＭＳＢ
培地で、一夜前培養した後、増殖した菌体を遠心分離機
で集菌して、再びＭＳＢ培地に懸濁して濁度を１．０に
合わせた。この菌体懸濁液２ｍｌを、ふっ素樹脂でコー
トしたゴム栓付きの内容積１３．４ｍｌの血液バイアル
に、分取し密閉して、これにトリクレンを２０μｇ加え
て２５℃で約２４時間培養した。この培養期間におい
て、経時的に気相を採取して気相中のトリクレンの濃度
を測定した。ここで、トルエンの培地への添加の有無に
よるＪＩ１０４のトリクレン分解能力への影響を調べる
ため、前培養と本培養の両方の培地にトルエンを最終濃
度２ｍＭになるように加えた場合、前培養の培地にのみ
トルエンを最終濃度２ｍＭになるように加えた場合、又
は前培養及び本培養の培地のいずれにもトルエンを加え
ない場合についてトリクレン分解能力を測定した。それ
ぞれの場合において、本培養でトリクレンを加えてい
る。
【００１３】結果を図１に示す。図において、縦軸は分
解されずに残っていた残存トリクレンの割合を％で表
し、横軸は培養時間を分単位で表している。実線は前培
養と本培養の両方の培地にトルエンを加えた場合、点線
は前培養の培地のみにトルエンを加えた場合、○は前培
養及び本培養のいずれの培地にもトルエンを加えない場
合の結果を示す。前培養，本培養のいずれにもトルエン
を加えなかったものではトリクレンの分解は極めて遅
く、トルエンを加えて前培養し、本培養でトリクレンの
みを加えたものでは最初の分解速度は高いが、分解速度
は時間と共に低下した。前培養、本培養の両方にトルエ
ンを加え、本培養でトリクレンを加えたものでは、最初
４時間（２４０分）程度の無駄時間を経た後に急速な分
解が起こり、約１０時間（６００分）後には検出できな
くなった。このことよりＪＩ１０４のトリクレン分解に
は、トルエンなどの芳香族炭化水素の添加が必要である
ことがわかる。また、前培養にトルエンを加えるだけで
なく、本培養でもトルエンを加えた方がトリクレンの分
解は良好であった。トリクレンの減少量は気液でトリク
レンが平衡状態であるとして計算した。
解されずに残っていた残存トリクレンの割合を％で表
し、横軸は培養時間を分単位で表している。実線は前培
養と本培養の両方の培地にトルエンを加えた場合、点線
は前培養の培地のみにトルエンを加えた場合、○は前培
養及び本培養のいずれの培地にもトルエンを加えない場
合の結果を示す。前培養，本培養のいずれにもトルエン
を加えなかったものではトリクレンの分解は極めて遅
く、トルエンを加えて前培養し、本培養でトリクレンの
みを加えたものでは最初の分解速度は高いが、分解速度
は時間と共に低下した。前培養、本培養の両方にトルエ
ンを加え、本培養でトリクレンを加えたものでは、最初
４時間（２４０分）程度の無駄時間を経た後に急速な分
解が起こり、約１０時間（６００分）後には検出できな
くなった。このことよりＪＩ１０４のトリクレン分解に
は、トルエンなどの芳香族炭化水素の添加が必要である
ことがわかる。また、前培養にトルエンを加えるだけで
なく、本培養でもトルエンを加えた方がトリクレンの分
解は良好であった。トリクレンの減少量は気液でトリク
レンが平衡状態であるとして計算した。
【００１４】実施例２．トリクレンの分解能力それ自体
は既に他のシュードモナス属の菌株で幾つか報告されて
いる。ＪＩ１０４に加えて、そのうちの３株，シュード
モナス、メンドシナＫＲ１，シュードモナス、セパシア
Ｇ４およびシュードモナス、プチダＦ１を用いてトリク
レンの分解実験を行った。実験条件は実施例１と同様
で、前培養、本培養共にトルエンを加えた。測定結果を
図２に示す。図において、縦軸は分解されずに残ってい
た残存トリクレンの割合を％で表し、横軸は培養時間を
分単位で表している。実線はＪＩ１０４、○はシュード
モナス、セパシアＧ４、ｘはシュードモナス、メンドシ
ナＫＲ１、点線はシュードモナス、プチダＦ１の結果を
示す。
は既に他のシュードモナス属の菌株で幾つか報告されて
いる。ＪＩ１０４に加えて、そのうちの３株，シュード
モナス、メンドシナＫＲ１，シュードモナス、セパシア
Ｇ４およびシュードモナス、プチダＦ１を用いてトリク
レンの分解実験を行った。実験条件は実施例１と同様
で、前培養、本培養共にトルエンを加えた。測定結果を
図２に示す。図において、縦軸は分解されずに残ってい
た残存トリクレンの割合を％で表し、横軸は培養時間を
分単位で表している。実線はＪＩ１０４、○はシュード
モナス、セパシアＧ４、ｘはシュードモナス、メンドシ
ナＫＲ１、点線はシュードモナス、プチダＦ１の結果を
示す。
【００１５】図２から明らかなように、４種の微生物は
全てトリクレンを分解する。ＪＩ１０４では、トリクレ
ンは培養開始後４時間（２４０分）程の遅れの後急激に
減少し１０時間（６００分）後には検出できなくなって
いる。ＪＩ１０４が他の３株より分解速度が速く優れた
トリクレン分解能力があるのがわかる。これらのデータ
は培養の最適化を行っていない段階のことであるが、Ｊ
Ｉ１０４が最も優れた菌株であることがわかる。
全てトリクレンを分解する。ＪＩ１０４では、トリクレ
ンは培養開始後４時間（２４０分）程の遅れの後急激に
減少し１０時間（６００分）後には検出できなくなって
いる。ＪＩ１０４が他の３株より分解速度が速く優れた
トリクレン分解能力があるのがわかる。これらのデータ
は培養の最適化を行っていない段階のことであるが、Ｊ
Ｉ１０４が最も優れた菌株であることがわかる。
【００１６】また、シュードモナス、メンドシナＫＲ
１，シュードモナス、セパシアＧ４およびシュードモナ
ス、プチダＦ１でも、トリクレン分解速度はいずれの株
においてもトルエンの同時添加の有無に大きく依存して
おり、トルエンが無いとトリクレンの分解は著しく遅く
なることがわかった。すなわち、これらの菌株でも、ト
リクレンの分解はトルエン，ベンゼン，キシレンなどの
芳香炭化水素の分解に係わる酵素群により行われている
ので、そのトルエン分解酵素発現のために、トリクレン
を分解する前にトルエン等を微量含んだ培地で培養して
誘導する必要がある。
１，シュードモナス、セパシアＧ４およびシュードモナ
ス、プチダＦ１でも、トリクレン分解速度はいずれの株
においてもトルエンの同時添加の有無に大きく依存して
おり、トルエンが無いとトリクレンの分解は著しく遅く
なることがわかった。すなわち、これらの菌株でも、ト
リクレンの分解はトルエン，ベンゼン，キシレンなどの
芳香炭化水素の分解に係わる酵素群により行われている
ので、そのトルエン分解酵素発現のために、トリクレン
を分解する前にトルエン等を微量含んだ培地で培養して
誘導する必要がある。
【００１７】
【発明の効果】以上のように、請求項１の発明によれ
ば、トリクレン分解能力を有する微生物をトリクレンを
含有する培地で好気的に培養するので、経済的に微生物
がトリクレンを分解できる。
ば、トリクレン分解能力を有する微生物をトリクレンを
含有する培地で好気的に培養するので、経済的に微生物
がトリクレンを分解できる。
【００１８】請求項２の発明によれば、トリクレン分解
能力を有するシュードモナス、アエルギノサＪＩ１０４
をトリクレンを含有する培地で好気的に培養するので、
シュードモナス、アエルギノサＪＩ１０４がトリクレン
を分解できる。さらに、シュードモナス、アエルギノサ
ＪＩ１０４は分解速度が速いため効率的にトリクレンを
分解できる。
能力を有するシュードモナス、アエルギノサＪＩ１０４
をトリクレンを含有する培地で好気的に培養するので、
シュードモナス、アエルギノサＪＩ１０４がトリクレン
を分解できる。さらに、シュードモナス、アエルギノサ
ＪＩ１０４は分解速度が速いため効率的にトリクレンを
分解できる。
【図１】請求項２の発明に用いられるシュードモナス、
アエルギノサＪＩ１０４によるトリクレン分解測定結果
を示すグラフ図である。
アエルギノサＪＩ１０４によるトリクレン分解測定結果
を示すグラフ図である。
【図２】請求項１の発明に用いられるトリクレン分解能
力を有する微生物によるトリクレン分解測定結果を示す
グラフ図である。
力を有する微生物によるトリクレン分解測定結果を示す
グラフ図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:385） (72)発明者 森田 晴彦 東京都新宿区戸山１−20−１
Claims (2)
- 【請求項１】 トリクレンを含有する培地で、トリクレ
ン分解能力を有する微生物を好気的に培養することを特
徴とするトリクレンの分解方法。 - 【請求項２】 前記微生物がシュードモナス、アエルギ
ノサＪＩ１０４であることを特徴とする請求項１記載の
トリクレンの分解方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3061494A JPH07236895A (ja) | 1994-02-28 | 1994-02-28 | トリクレンの分解方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3061494A JPH07236895A (ja) | 1994-02-28 | 1994-02-28 | トリクレンの分解方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07236895A true JPH07236895A (ja) | 1995-09-12 |
Family
ID=12308757
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3061494A Pending JPH07236895A (ja) | 1994-02-28 | 1994-02-28 | トリクレンの分解方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07236895A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5945331A (en) * | 1996-08-01 | 1999-08-31 | Canon Kabushiki Kaisha | Microorganisms, and method for biodegradation of organic compounds and method for environmental remediation |
| US5962305A (en) * | 1996-08-01 | 1999-10-05 | Canon Kabushiki Kaisha | Microbial strain, method for biodegrading organic compounds and method for environmental remediation |
| US6472191B1 (en) | 1998-12-03 | 2002-10-29 | Canon Kabushiki Kaisha | Dna fragment carrying toluene monooxygenase gene, recombinant plasmid, transformed microorganism, method for degrading chlorinated aliphatic hydrocarbon compounds and aromatic compounds, and method for environmental remediation |
| US6660516B1 (en) | 1997-02-18 | 2003-12-09 | Canon Kabushiki Kaisha | Method for culturing a microorganism and promoting microbial growth and metabolism |
| KR100447506B1 (ko) * | 2001-12-21 | 2004-09-08 | 동아엔바이로 주식회사 | 휘발성 유기염소 화합물 제거용 생물여과장치 |
| US6864074B2 (en) | 1998-10-30 | 2005-03-08 | Canon Kabushiki Kaisha | Dna fragment carrying toluene monooxygenase gene, recombinant plasmid, transformed microorganism, method for degrading chlorinated aliphatic hydrocarbon compounds and aromatic compounds, and method for environmental remediation |
-
1994
- 1994-02-28 JP JP3061494A patent/JPH07236895A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5945331A (en) * | 1996-08-01 | 1999-08-31 | Canon Kabushiki Kaisha | Microorganisms, and method for biodegradation of organic compounds and method for environmental remediation |
| US5962305A (en) * | 1996-08-01 | 1999-10-05 | Canon Kabushiki Kaisha | Microbial strain, method for biodegrading organic compounds and method for environmental remediation |
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| US6864074B2 (en) | 1998-10-30 | 2005-03-08 | Canon Kabushiki Kaisha | Dna fragment carrying toluene monooxygenase gene, recombinant plasmid, transformed microorganism, method for degrading chlorinated aliphatic hydrocarbon compounds and aromatic compounds, and method for environmental remediation |
| US6472191B1 (en) | 1998-12-03 | 2002-10-29 | Canon Kabushiki Kaisha | Dna fragment carrying toluene monooxygenase gene, recombinant plasmid, transformed microorganism, method for degrading chlorinated aliphatic hydrocarbon compounds and aromatic compounds, and method for environmental remediation |
| US6858417B2 (en) | 1998-12-03 | 2005-02-22 | Canon Kabushiki Kaisha | Dna fragment carrying toluene monooxygenase, gene, recombinant plasmid, transformed microorganism, method for degrading chlorinated aliphatic hydrocarbon compounds and aromatic compounds, and method for environmental remediation |
| KR100447506B1 (ko) * | 2001-12-21 | 2004-09-08 | 동아엔바이로 주식회사 | 휘발성 유기염소 화합물 제거용 생물여과장치 |
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