JPH07222793A - 生検創傷の治療方法及び治療組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 生検創傷治癒率の改善。 【構成】 生検患者の生検創傷の治療方法及び治療組成
物を提供する。創傷をエラスチンでコーチングしたコラ
ーゲン質材料の円板で充填する。円板の大きさは創傷と
ほぼ同じである。好ましくは、コラーゲン質材料は有蹄
動物、例えば、牛、羊や豚の皮膚から採取する。好まし
くは、ポリエーテルウレタンからなる微孔質最外側層を
併用する。こうすると、止血が簡単で、創傷治癒率が改
善し、創傷収縮がなくなり、瘢痕形成もなくなる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の技術分野】本発明は生検創傷の治療方法及び治
療組成物に関する。

【０００２】

【従来技術及びその課題】各種の医療検査のさいに医者
は通常パンチ生検（生体組織検査）を行う。これは特に
数多くの皮膚状態を診断するために通常パンチ生検を行
う皮膚科医の場合にそうである。通常、パンチ生検後
に、生検創傷をガーゼで５〜１０分間押え、創傷を縫合
してから、接着テープを用い、ゼラチンスポンジで固定
する。この方法は極めて不満足なものである。例えば、
５分でも、あるいは１０分でも、創傷を持続的にガーゼ
で押えておくことは、患者はいうまでもなく、皮膚科医
や看護婦にとっても時間の浪費である。さらに、創傷の
縫合には、殺菌器具や高価な使い捨て用品が必要であ
る。また、縫合の結果、瘢痕が残ることがある。加え
て、接着テープによってゼラチンスポンジを固定して
も、止血効果は小さい。すなわち、スポンジが血で飽和
すると、血が漏れ始める。

【０００３】このように、現状でも、生検創傷の有効な
止血方法が強く望まれている。また、出血を抑えるだけ
でなく、瘢痕を残さずに創傷の治癒を改善する生検創傷
の治療方法も依然として求められている。

【０００４】本発明の第１の目的は、生検創傷の治療に
有効な方法及び組成物を提供することにある。

【０００５】本発明の第２の目的は、出血を抑えるだけ
でなく、瘢痕を残さずに創傷の治癒を改善する生検創傷
の治療方法及び治療組成物を提供することにある。

【０００６】本発明の第３の目的は、縫合の必要がな
い、生検創傷の治療方法を提供することにある。

【０００７】他の目的を含む本発明の上記目的を達成す
る方法等はいずれも以下の発明の詳細な説明から明らか
になるはずである。

【０００８】

【課題を解決する手段】本発明によれば、生検創傷と大
きさがほぼ同じなコラーゲン円板で生検創傷を治療す
る。好ましくは、ポリエーテルウレタンなどからなる微
孔質上層とこの円板を併用する。この円板はコラーゲン
質で構成し、コラーゲン質に対して１〜２０重量％の、
最適には１〜５重量％のエラスチンでコーチングするの
が好ましい。微孔質上層の好ましい孔径は０．３〜１．
０ミクロンである。この上層はコラーゲン円板に重なる
円板状であればよく、接着剤と併用して、創傷床に固定
することができる。

【０００９】

【発明の具体的構成】創傷の治癒過程にはいくつかの相
がある。すなわち、炎症、血小板凝集、細胞再成長、肉
芽組織形成、血管新生、及び細胞外基質沈着という相で
ある。コラーゲンを始めとする細胞外基質の成分は創傷
治癒のあらゆる段階に関与する。創傷を受けた直後の第
１段階は血管破壊であり、これに続いて血液成分の管外
遊出がおき、血小板凝集及び血液凝固にいたる。コラー
ゲンはこれら過程で重要な働きを示す。損傷内部に露出
したコラーゲンは血管損傷後の血小板凝集を促進する。
凝集血小板は血小板誘導成長因子（ＰＤＧＦ）、効力の
あるミトゲン、及び形質転換成長因子−β（ＴＧＦ−
β）、即ち、細胞外基質合成の効力のある刺激物質を始
めとする非常に多くのシトキニンを放出する。

【００１０】また、血小板は血液凝固を促進し、炎症性
細胞に対しては走化性を示すフィブリン、フィブロネク
チンやトロンボスポンジンを含む他の分子を多数放出す
る。創傷部位に再成長する第１の細胞である好中球は多
数のたんぱく分解性酵素を放出することによって該部位
を除菌する。また、これら酵素の多くは細胞外基質の成
分を分解できる。

【００１１】コラーゲンはしばしば細胞外基質の安定か
つ比較的不活性な成分と説明されている。この説明は、
細胞を支持する細胞外骨格を与えることを主要な役割と
する細胞外基質に沈着し、架橋したコラーゲンについて
は正しいと思われるが、その他のコラーゲンについて
は、多くの細胞過程や発育過程に関与する動的たんぱく
質であるという考えがますます強くなってきている。コ
ラーゲンは形態発生、血小板癒着及び凝集、細胞結合、
細胞移動、脈管形成、及び基底膜濾過などの過程に大き
く関与しているが、これらについては既に解明されてい
る。

【００１２】現在確立されている、コラーゲンターンオ
ーバ評価方法もまたコラーゲン代謝速度は従来考えられ
ていた以上にはるかに高いことを示している。

【００１３】コラーゲンは従来皮膚移植に、また皮膚創
傷や軟組織損傷の恒久的治療に使用されてきたが、コラ
ーゲン、好ましくはエラスチンでコーチングされた、自
然の状態で存在する非再構成コラーゲンはまだ円板や栓
子の形で、あるいは本明細書に記載する方法に生検栓子
としては使用されていない。

【００１４】本発明で使用するコラーゲン円板は子牛の
新鮮な皮膚から採取したコラーゲンで構成する。子牛の
皮膚が好ましいが、他の動物、例えば子豚の皮膚も使用
可能である。好ましくは、コラーゲンはエラスチンでコ
ーチングするが、コーチング量はコーチング質について
重量％で１〜２０％、好適には１〜５％、さらに好適に
は１〜３％である。好ましくは、コラーゲン質として
は、非線維質蛋白質や糖蛋白質だけでなく脂質や残留脂
質を除去し、コラーゲンを化学的に架橋したコラーゲン
質を使用する。また、アレルギー反応の原因であるテロ
ペプチドを除去しておくことも好ましい。

【００１５】上記のようにして得たコラーゲンは止血作
用を維持し、４分以下止血は症例の８６％である。また
生体適合性があり、生体に徐々に吸収される。

【００１６】コラーゲン線維構造を維持した状態で、細
胞増殖及び移動を刺激するエラスチンでコラーゲン子柱
をコーチングする。これが発達した皮膚構築の特徴であ
る。

【００１７】コラーゲンは、エラスチンでコーチングし
た形でも、自然な状態で存在するコラーゲンの止血作用
を保持している。直接出血している生検創傷に適用して
も、血が外皮に広がるおそれはない。また、血小板の凝
集支持体としても作用し、安定なフィブロン凝塊を形成
する。

【００１８】コラーゲン質をエラスチンでコーチング
し、最外層を微孔質ポリエーテルウレタンとした場合に
は、創傷治癒に改善があり、瘢痕形成が少ない。これは
大きな利点である。というのは、通常、ポリエーテルウ
レタンスポンジ／シートは異常な生体反応を起こし、創
傷治療のテンプレートとして使用した場合に、瘢痕を形
成するからである。

【００１９】

【効果及び作用】創傷治癒を改善するために、従来も、
コラーゲンは単独で使用されていたが、結果として炎
症、拒絶反応、創傷の乾燥、瘢痕形成がしばしば認めら
れた。しかし、本発明のように、エラスチンでコーチン
グしたコラーゲンを微孔質ポリエーテルウレタン最外層
と併用すると、瘢痕形成が著しく抑制され、創傷治癒も
かなり改善した。すなわち、コラーゲンやポリエーテル
ウレタンスポンジを単独で使用した場合には得られない
特徴が得られる。

【００２０】上記のように併用すると、線維芽細胞の移
動と増殖とのバランスが取れ、筋線維芽細胞の発現が大
幅に減少し、正常な線維に認められるように、コラーゲ
ン線維がすぐれてランダムに組織化される。これによっ
て、収縮が抑えられ、瘢痕形成がへり、機序的にも、ま
た審美的にもすぐれた結果が得られる。

【００２１】正常な皮膚では、エラスチンは線維の形で
存在するが、本発明で使用するコラーゲンシートの場合
には、線維はエラスチン、好ましくはエラスチンのα−
加水分解物（ＣｆＮ−Ｈｅｒｓｔｅｌｌｕｎｇ ｖｏｎ
Ｎａｔｕｒｅｘｔｒａｃｃｔｅｎ ＣｍｂＩＩ、Ｍｉ
ｃｈｅｌｂａｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）でコーチングす
る。このためには、例えば、コラーゲンシートをエラス
チンの水溶液に浸漬すればよい。濃度は少なくとも１％
で、周囲温度で好ましくは少なくとも５分間保持する。
線維のエラスチンコーチングは抗−エラスチン単クロー
ン（例えば、マウスｌｇＧ１抗−ウシα−エラスチン、
クローンＢＡ−４、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍ
Ｏ、ＵＳＡ）を使用する免疫組織化学によってチェック
することがきる。別な方法として、噴霧法や印刷法を使
用して、線維をエラスチンでコーチングしてもよい。

【００２２】コラーゲンはシート状でもよいが、本発明
の方法では、好ましくは、生検創傷とほぼ同サイズの円
板状に打ち抜く。これら円板を個別に剥離ストリップで
包装し、使用時には剥離ストリップのフィルムカバーを
剥離し、１回に１個の栓子を剥き出して使用する。こう
すると、残りの円板を殺菌状態に保持できる。あるい
は、任意の殺菌包装も使用できる。

【００２３】個別に包装したコラーゲン円板の次には、
ポリエステルウレタン円板を接着剤と一体で用意する。
接着剤は、創傷床にコラーゲン／ポリエステルウレタン
を固定にするのに必要である。

【００２４】以下、実施例によって、コラーゲン円板を
微孔質ポリエステルウレタン最外層と併用して、ある医
療センターで実施した臨床試験の結果を証明する。

【００２５】皮膚を完全に貫通する皮膚損傷は、治癒し
ても創傷収縮や瘢痕が残る傾向がある。このような皮膚
損傷が、やけどの場合にしばしば認めらように、範囲が
広いと、損傷収縮が強く、回復不能な拘縮が生じる。瘢
痕は不快なものであり、精神的な負担である。これは、
皮膚再生に欠陥があるからである。コラーゲン束がラン
ダムに組織化され、かつ微細なエラスチン線維網が広く
広がっている通常の皮膚構造の場合には、皮膚の特徴、
即ち強度、弾性、可撓性が得られる。ところが、瘢痕組
織の場合、迷走構造、すなわちコラーゲン束が大きく平
行に組織化され、かつエラスチン線維網が散在する構造
である。これが瘢痕の硬直化している理由である。これ
らの望ましくないプロセスは皮膚再生を刺激することに
よって制御できる。最近開発された、レーザー光の散乱
に基づく方法では、瘢痕形成を定量化できない。本実施
例では、レーザー法を使用して、異なる細胞外基質蛋白
質をもつ代用コラーゲン質が皮膚再生にどのように関与
しているかを調べた。結果は後述するが、本発明のコラ
ーゲン／ポリエーテルウレタン併用のほうが優れている
ことを示している。

【００２６】不溶性のコラーゲン線維から得た、自然な
状態にあるコラーゲン（以下自然コラーゲンと呼ぶ）は
その状態を長期間（２週間かそれ以下）維持していた。
エラスチン等の細胞外基質蛋白質を配合すると、自然コ
ラーゲン基質の耐生分解性が大きく向上した。これら代
用皮膚は４週間も上記特性を維持し、その間異常な生体
反応は認められなかった。エラスチンでコーチングした
自然コラーゲン基質の筋原線維構造は細胞移動及び細胞
増殖の支持体として作用し、また成熟したコラーゲン線
維の形成に刺激を与えた。

【００２７】通常方法による臨床試験では、持続性の静
脈性脚潰瘍に自己由来のパンチ生検材料を移植した。上
大腿部から生検材料を採取し、潰瘍に移植した。生成し
たドナー側損傷はヒト創傷モデルの皮膚修復を調べるの
に好適な創傷であった。患者にこれ以外の苦痛を与えず
に、異なる種類の治療を受けた同じ創傷を調べることが
でき、また調べた。多発性創傷は制御された深さの貫通
皮膚損傷に分類できる。本試験では、異なる細胞外基質
蛋白質をもつ、移植された非架橋自然コラーゲンテンプ
レートをパンチ生検孔に挿入した。創傷はいずれも大き
さ及び深さが同じなので、患者内評価が可能である。

【００２８】持続性の、１０ｃｍ×１０ｃｍ以上の静脈
性脚潰瘍で入院している患者７人を対象とした。動脈性
不全を原因とする脚潰瘍については、これを対象としな
かった。患者の年令範囲は６５〜９５才であった（トー
タル・ナンバー＝１３、平均＝７７．８、標準偏差＝
９．１）。対象患者は創傷治癒に悪影響を与える全身性
疾患、例えば、真性糖尿病、自己免疫障害、免疫欠乏な
どに罹患していなかった。また、患者は免疫抑制薬を服
用していなかった。

【００２９】上大腿部をドナー側にした。対象皮膚を脱
毛してから、消毒した。２０ｍｇ／ｍｌのアドレナリン
と０．５％のリドカインでドナー側を局部麻酔した。６
ｍｍのパンチ生検孔５０個形成し、創傷１０個づつ５群
にわけた。１群は対照群で、未治療群である。残りの４
群を皮膚基質で治療した。

【００３０】厚さ２ｍｍで直径６ｍｍのコラーゲン円板
を牛の大線維である、不溶性自然コラーゲンタイプＩ線
維から作成した。前処理として代用コラーゲンに（１）
濃度３ｗ／ｗ％のα−エラスチン加水分解物、（２）濃
度０．１ｗ／ｗ％のフィブロネクチン、（３）濃度０．
１ｗ／ｗ％のヒアルロン酸を結合した。（４）として何
も結合しなかった。使用した成分の特性化を表１に、ま
た結果を表２及び表３に示す。創傷はいずれも（０．３
ミクロンの）ポリエーテルウレタンで覆った。この膜は
細菌感染防止処理したものであった。

【００３１】対象患者はいずれも７日後に上皮形成が認
められた。コラーゲン基質は上皮下の創傷組織に適用し
た。２週間目に、ポリウレタン膜は痂とともに自然に剥
がれた。ある一人の患者に創傷感染が、恐らくは包帯処
置を原因として発生したので、この患者は以降の試験か
ら外した。

【００３２】創傷収縮については、患者間に大きな違い
が認められたが、同一患者では結果は変わらなかった。
すなわち、対別ｔ−テストを利用して、統計的有意差を
求めた。６週間後、代用皮膚のない対象創傷は最も大き
な創傷収縮を示した。これら損傷の直径は創傷の初期径
よりも２０±４％小さかった。細胞外基質蛋白質を使用
しないで、自然コラーゲンで処置した創傷は収縮が小さ
かった（直径が１５±５％小さくなった）。コラーゲン
スポンジに細胞外基質蛋白質を加えても６週間では創傷
収縮への効果はそれ程でもなかった（ヒアルロン酸で１
４±６％、フィブロネクチンで１４±５％、エラスチン
で１６±４％直径が小さくなった）。対照創傷群とフィ
ブロネクチン処置群との間には有意差（ｐ＜０．０２、
平均有意差２．８ｍｍ±有意差の標準偏差０．８）が、
そして対照創傷群とエラスチン処置群との間には有意差
（ｐ＜０．０２、平均有意差２．４ｍｍ±有意差の標準
偏差０．８）が認められた。

【００３３】移植後６週間で、皮膚基質からコラーゲン
線維が検出できなくなった。ヒアルロン酸及びフィブロ
ネクチン処置創傷の再生組織には、いくつかのリンパ球
が存在していた。いずれの創傷においても、新生皮膚組
織は典型的な側面を、例えば多量の細胞を示し、密な毛
細管床及び未発達のコラーゲン束が存在していた。シリ
ウスレッド（ｓｉｒｉｕｓ ｒｅｄ）で染色した部位に
は、発達した小さなコラーゲン束が認められた。対照創
傷群の再生コラーゲン束は表皮に対して平行に組織化さ
れていたが、エラスチン処置群では、組織化はよりラン
ダムであった。

【００３４】３月後、抗−エラスチン単クローンではエ
ラスチン再生は検出できなかった。いずれの創傷におい
ても、エラスチンを含む古い組織とエラスチンを含まな
い新組織との間に鋭い分界が認められた。即ち、エラス
チンでコーチングしたコラーゲンは優れた皮膚修復を示
し、いずれの場合にも、瘢痕組織は認められなかった。
また、リンパ球侵潤はいずれも場合にも認められなかっ
た。エラスチン及びフィブロネクチン処置創傷群では、
再生表皮は乳頭間隆起を示した。ヒアルロン酸などを使
用せずに、即ち自然コラーゲン単独で処置した創傷は薄
く平らな表皮で覆われていた。創傷治癒促進において、
エラスチン含有コラーゲンはあらゆる点で優れ、また瘢
痕組織を形成しない。フィブロネクチンは、薄い上皮組
織ではなく、曩胞を形成する傾向がある。

【００３５】

【表１】 表１ 皮膚基質の特性 基質組成物 試験回数 孔径 崩壊速度 ＮＢＣ＊ ６ ７５ｕｍ ２週間 ＮＢＣ＋３ｗ／ｗ％α−エラスチン 加水分解物＊＊ ６ ７５ｕｍ ４週間 ＮＢＣ＋０．１ｗ／ｗ％フィブロ ネクチン＊＊＊ ６ ５０ｕｍ ４週間 ＮＢＣ＋０．１ｗ／ｗ％ヒアルロン 酸＊＊＊＊ ６ ５０ｕｍ ４週間 ＊牛の腱から採取した自然ウシコラーゲンタイプＩ。 ＊＊牛の項靱帯から採取したもので、４／５がＭＷ±６
０Ｋｄ、１／５がＭＷ±２００Ｋｄである。 ＊＊＊牛の血漿から採取した。 ＊＊＊＊細菌から採取したもので、ＭＷが７００Ｋｄ〜
１，５００Ｋｄである。 崩壊速度は“Ｗｏｕｎｄ Ｒ
ｅｐａｉｒ ＆ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ”、第１巻
（１９９４年）記載のブタ皮膚創傷モデルを使用して評
価した。

【００３６】

【表２】 表２ 創傷収縮 組成 収縮率±平均値の 平均有意差±有意差 対別ｔ−テスト 標準誤差（％） の標準誤差（対象に （対象に対して） 対してｍｍ） 対照 ２０±４ ｎ．ａ． ｎ．ａ． 自然コラーゲン単独 １５±５ ２．２±１．２ ０．１２ 自然コラーゲン＋ ヒアルロン酸 １４±６ ３．２±１．３ ０．０６ 自然コラーゲン＋ フィブロネクチン １４±５ ２．８±０．８ ０．０２ 自然コラーゲン＋ エラスチン １６±４ ２．４±０．８ ０．０２

【００３７】

【表３】 表３ オリエンテーション率（新生皮膚の質） 組成 オリエンテーション率±平均値 不対ｔ−試験結果 の標準誤差（％） （対照に対して） 正常皮膚 １．３６±０．０９ ＜０．００００１ 対照 ２．２３±０．０６ ｎ．ａ． 自然コラーゲン単独 ２．１２±０．２８ ０．７３ 自然コラーゲン＋ ヒアルロン酸 １．８１±０．２５ ０．１８ 自然コラーゲン＋ フィブロネクチン １．７８±０．２１ ０．１０ 自然コラーゲン＋ エラスチン １．３３±０．０９ ０．０００２

【００３８】表２から明らかなように、本発明組成物及
び自然コラーゲン＋フィブロネクチンの場合、創傷収縮
は有意で、ほぼ同じであった。また、表３から明らかな
ように、本発明組成物の場合、コラーゲン形成はランダ
ム線維（１．３３）で、正常皮膚に等しく、フィブロネ
クチンの場合、組織化が実質的に平行で、瘢痕が生じ易
い。

【００３９】従って、前記の目的を少なくともすべて達
成できる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ヤコブ フェアショール オランダ，4847 ツェ−ハー テーテリン ゲン （番地なし) (72)発明者 ヴィーテ ヴェステルホフ オランダ，1121 デーペー ランツメー ル，カナールヴェーク 23アー

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 患者の生検創傷を治療するさいに、非線
   維状組織蛋白質及び糖蛋白質だけでなく脂質及び残留脂
   質もなく、かつ化学的に架橋されている線維状コラーゲ
   ン質組織材料からなり、大きさが該創傷にほぼ対応して
   いる円板を該創傷に充填することからなる生検創傷を治
   療する方法。
2. 【請求項２】 該円板が非線維状組織蛋白質及び糖蛋白
   質だけでなく脂質及び残留脂質もなく、かつ化学的に架
   橋されている線維状コラーゲン質組織材料からなる、請
   求項第１項に記載の方法。
3. 【請求項３】 該コラーゲン質材料が、このコラーゲン
   質材料に基づいて約１重量％〜約２０重量％のエラスチ
   ンを含有する、請求項第１項に記載の方法。
4. 【請求項４】 該コラーゲン質材料が、このコラーゲン
   質材料に基づいて約１重量％〜約５重量％のエラスチン
   を含有する、請求項第１項に記載の方法。
5. 【請求項５】 生検損傷を生じるパンチ生検に使用した
   のと同寸法の針を使用して、コラーゲン質材料のシート
   から該円板を打ち抜き成形する、請求項第１項に記載の
   方法。
6. 【請求項６】 創傷接触側の反対側にある円板の外面を
   多孔質膜で被覆して、創傷の微生物感染を未然に防止す
   る、請求項第１項に記載の方法。
7. 【請求項７】 該コラーゲン質円板を６ヶ月未満の子牛
   の皮膚から採取した、請求項第１項に記載の方法。
8. 【請求項８】 コラーゲンの抗原性の原因であるテロペ
   プチドのほぼ全部を温和な化学的処理によって除去す
   る、請求項第１項に記載の方法。
9. 【請求項９】 コラーゲン円板が４分以内で止血する、
   請求項第１項に記載の方法。
10. 【請求項１０】 コラーゲン線維をα−エラスチン加水
    分解物でコーチングしたコラーゲン質材料からなる、生
    検創傷の治療円板。
11. 【請求項１１】 該コラーゲン質材料に基づいて約１重
    量％〜約５重量％のエラスチンを含む、請求項第１０項
    に記載の円板。
12. 【請求項１２】 該コラーゲン質材料に基づいて約１重
    量％〜約３重量％のエラスチンを含む、請求項第１０項
    に記載の円板。
13. 【請求項１３】 それぞれがエラスチンのα−加水分解
    物でコーチングされたコラーゲン質材料からなる、複数
    の生検創傷治療用円板からなり、該円板に微孔質最外側
    層を設けるとともに、殺菌包装した、包装コラーゲン円
    板。
14. 【請求項１４】 円板の微孔質最外側層が０．３〜１．
    ０ミクロンである、請求項第１３項に記載の包装円板。
15. 【請求項１５】 該微孔質最外側層がポリエーテルウレ
    タンの膜からなる、請求項第１４項に記載の包装円板。
16. 【請求項１６】 約１重量％〜約５重量％のエラスチン
    を含有する、請求項第１５項に記載の包装円板。
17. 【請求項１７】 該最外側層を、少なくとも１ｍｍで該
    コラーゲン円板に重なる円板状に形成した、請求項第１
    ６項に記載の包装円板。
18. 【請求項１８】 該円板を接着剤と併用して、これらを
    創傷床に固定する、請求項第１７項に記載の包装円板。