JPH07206895A - 炎症親和性ペプチド及び該ペプチドを含有してなる放射性診断剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 下記のアミノ酸配列群から選択されるアミノ
酸配列を少なくとも１含有する炎症親和性ペプチド及び
その放射性金属標識診断剤。但し、Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、
Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ及びＹは一文
字表示のアミノ酸を示す。ＬＬＧＧＰＳ、ＬＬＧＧＰＳ
Ｖ、ＫＥＹＫＡＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫ、
ＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫ、ＫＴ
ＫＰＲＥＱＱＹＮＳＴＹＲ、ＫＴＫＰＲＥＱＱＹＮＳＴ
ＹＲＶＶ 【効果】 調製時のハンドリングが容易で、投与直後か
ら速やかに炎症部位に集積し、投与後数十分でイメージ
ングが可能で、尿へのクリアランスも良好である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、炎症性細胞に親和性を
有するペプチド及びその誘導体、又は化学修飾体、該ペ
プチドの放射性金属標識体及び該ペプチドを含有してな
るヒトを含む哺乳動物の生体内の炎症部位の診断に有用
な放射性診断剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】炎症とは、感染症及び腫瘍周辺部に惹起
される炎症をも包含する、いわゆる炎症様反応全般にお
よぶものである。炎症は、熱、放射エネルギー、化学物
質及び機械的外傷など物理的、化学的反応により誘起さ
れるほか、ウィルス、細菌等の外来異物の生体内への浸
入による感染症及びＤＮＡの突然変異等により生じる腫
瘍周辺部位にも認められ、炎症刺激を受けた組織細胞反
応、それに続く微小循環系における反応、特に蛋白質の
血管透過をもって開始され、白血球の遊出、浸潤に続き
肉芽形成を経て、治癒にいたる一連の反応であり、生体
内に浸入した外来異物を排除する、もしくは炎症を起こ
している部位を正常化させるための、宿主の生体防御反
応の一つということができる。

【０００３】この感染症及び腫瘍周辺部を含む生体内の
炎症のイメージング検査を目的とした放射性診断剤とし
ては、クエン酸ガリウム−６７（大西隆, 核医学, 26,
1371〜9, 1989)、放射性金属標識ポリクローナル抗体
（特表昭 63-502280号公報，Rabin. R. H et al 及
び、Frans. H. M, Seminars in Nuclear Medicine, Vol
13, No.2, April, pp 148-164, 1993) 及び放射性物質
標識白血球（伊藤和夫, 核医学, 24, 341 〜51, 1987)
等が知られている。

【０００４】クエン酸ガリウム−６７は、ガリウム−６
７自身の半減期が３．２６日と長く、放射性金属標識ポ
リクローナル抗体は、抗体自身の血中半減期が長いこと
から、いずれの製剤も放射性金属が長時間体内に滞留す
るため、患者に無用な被曝を与えていた。更に、両製剤
ともイメージ撮像に２０時間以上を必要とするなど、迅
速な対処が必要と考えられる患者において、早期に診断
情報を得ることが不可能であった。

【０００５】放射性物質標識白血球診断剤は、高度先進
医療として既に臨床の場において実施されている。しか
しながら当該薬剤は、調製時に施術者が患者血液を採取
し、白血球のみを分離精製後、インジウム−１１１等の
放射性金属で標識し、精製後投与するといった大変煩雑
で、かつ熟練を要するものであり、調製する際、無菌室
等の設備を必要とするため、限られた施設でのみ有効な
薬剤であり、汎用性に乏しかった。その上、患者がウィ
ルス性肝炎、ＡＩＤＳ等に感染していた場合には、施術
者に感染する危険性を伴っていた。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、かかる従来
の化合物及びその放射性金属標識物の患者への無用な被
曝、薬剤使用施設の限定、イメージ情報の早期入手の困
難さ、薬剤調製時のハンドリングの煩雑さ及び施術者へ
の感染の危険性等の状況に鑑み、調製時のハンドリング
が容易で、投与後速やかに炎症部位に集積し、イメージ
撮像に適当な時間保持され、尿中へのクリアランスも良
好であるヒトを含む哺乳動物の炎症部位をイメージング
するのに有用なペプチド又はその化学修飾体、該ペプチ
ドから誘導される放射性金属標識ペプチド、及び該ペプ
チドを含有してなる放射性診断剤を提供することを目的
とする。

【０００７】

【課題を解決しようとする手段】かかる課題を解決する
ために、本発明者らは、鋭意検討を行い、特定のアミノ
酸配列を一部に含有するペプチドが有用であることを見
いだし、本発明を完成した。即ち、本発明は、ＬＬＧＧ
ＰＳ、ＬＬＧＧＰＳＶ、ＫＥＹＫＡＫＶＳＮＫＡＬＰＡ
ＰＩＥＫＴＩＳＫ、ＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩ
ＥＫＴＩＳＫ、ＫＴＫＰＲＥＱＱＹＮＳＴＹＲ及びＫＴ
ＫＰＲＥＱＱＹＮＳＴＹＲＶＶのアミノ酸配列群から選
択されるアミノ酸配列（以下基本アミノ酸配列という）
の少なくとも１を含有する炎症親和性ペプチド又はその
誘導体、これらの放射性金属標識体及び該ペプチドを含
有してなる放射性診断剤である。但し、Ａ、Ｃ、Ｅ、
Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ及びＹ
は、一文字表示のアミノ酸残基を示す。尚、本明細書で
は、アミノ酸残基は一文字表示又は三文字表示で記載す
る。

【０００８】本発明のペプチドは、アプライドバイオシ
ステムズ社製ペプチド合成機を用い、Ｆｍｏｃ法による
固相合成法により調製される。即ち、固層用樹脂担体に
結合した状態から脱保護基と樹脂担体切り放しを同時に
行い、その後、逆相系カラムを用いた高速液体クロマト
グラフ法（以下ＨＰＬＣ法という）にて精製して、目的
ペプチドを得ることができる。その他ペプチド液相合成
法により調製してもよく、又、動物等から採取してもよ
い。

【０００９】該炎症親和性ペプチドの誘導体とは、炎症
性細胞への集積性向上を目的として下記のごとき変性又
は化学修飾が行われたものである。例えば、Ｆｍｏｃ−
Ｋ（Ｆｍｏｃ）を利用して基本アミノ酸配列を含むペプ
チドを並列に結合させたもの、基本アミノ酸配列を含む
ペプチドを数回繰り返し結合させたもの、基本アミノ酸
配列を含むペプチドに二官能性架橋剤を結合させたも
の、基本アミノ酸配列を含むペプチドに二官能性架橋剤
を結合させ、更にポリリジン、キトサン等のキャリヤー
に結合させたもの、これらのペプチドのＮ末端、Ｃ末端
にアセチル化、アミド化等の化学修飾を施したもの、ア
ミノ酸の一部もしくは全部をＤ体に変えたもの等が挙げ
られる。

【００１０】前述の二官能性架橋剤は、本発明の炎症親
和性ペプチドを複数個結合させて、ペプチド濃度を高め
たり、キャリアーと結合してキャリアーが保有するペプ
チド量を増大せしめ薬効を高めるのに有用である。この
ような二官能性架橋剤として、スルホサクシンイミジル
４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１
−カルボキシレート（Sulfosuccinimidyl 4-(N-maleimi
demethyl)cyclohexane-1-carboxylate、以下Ｓｕｌｆｏ
−ＳＭＣＣと略す）、３ーマレイミドベンゾイックアシ
ッド Ｎ−ヒドロキシサクシンイミドエステル（3-Male
imidebenzoic acid N-hydroxysuccinimide ester、以下
ＭＢＳと略す）、Ｎ−（ε−マレイミドカプロイルオキ
シ）サクシンイミド（N- (ε-maleimidecaproyloxy) su
ccinimide 、以下ＥＭＣＳと略す) 、サクシンイミジル
４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（Succin
imydyl 4-(p-maleimidephenyl)butylate、以下ＳＭＰＢ
と略す) 等アミノ酸残基と選択的結合性を有するものが
好ましく、特に好ましくはＳｕｌｆｏ−ＳＭＣＣであ
る。

【００１１】又、該炎症親和性ペプチドを複数個結合す
ることのできるキャリアーとしては、ポリリジン及びキ
トサンが好ましく、特に好ましくは、キトサンをあげる
ことができる。

【００１２】本発明の炎症親和性ペプチド又はその誘導
体に、テクネチウム−９９ｍ（⁹⁹mＴｃ）、インジウム
−１１１（¹¹¹ Ｉｎ）等の放射性金属イオンで標識する
ことにより、炎症の画像診断剤として有用となる。この
ような放射性金属イオンの標識方法として、ジエチレン
トリアミン５酢酸（Diethylenetriamine pentaaceticAc
id 、以下ＤＴＰＡと略す）、エチレンジアミン４酢酸
（Ethylenediaminetetraacetic Acid 、以下ＥＤＴＡと
略す）及び１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカ
ン−１−アミノエチルカルバモイルメチル−４，７，１
０−トリス［（Ｒ，Ｓ）メチル酢酸］（1,4,7,10-Tetra
azacyclododecane-1-aminoethylcarbamoylmethyl-4,7,1
0-tris[(R,S)-methylacetic Acid、以下ＤＯ３ＭＡと略
す）等の二官能性配位子が好適に用いられる。特に好ま
しくはＤＴＰＡが用いられる。

【００１３】又、生理食塩水及び水性緩衝液等に溶解
し、放射性金属と反応させペプチドを標識することが可
能である。テクネチウム−９９ｍの場合、該ペプチドに
適当なレドックス電位を有する塩化第一スズのごとき還
元剤を加え、過テクネチウム酸ナトリウム溶液と混合す
る常套の方法により標識ペプチドの調製ができる。イン
ジウム−１１１の場合、該ペプチドとインジウム−１１
１イオンを含む弱酸性水性溶液を混合することで調製で
きる。必要によりＨＰＬＣ法等で未反応の過テクネチウ
ム酸イオン及びインジウム−１１１イオンを除いてもよ
い。

【００１４】更に、薬学的に受容されるアスコルビン
酸、ｐ−アミノ安息香酸等の安定化剤、水性緩衝液等の
ｐＨ調整剤、Ｄ−マンニトール等の賦形剤及び放射化学
的純度を改良するのに役立つクエン酸、酒石酸、マロン
酸等と共に用時調製用キットの形態でも提供が可能であ
る。

【００１５】上記の本発明のペプチドの放射性金属を含
有してなる薬学的に受容しうるペプチド化合物は、ボー
ラス投与による静脈注射等の一般的に用いられる非経口
投与直後から効率的に炎症部位に集積し、放射性物質の
迅速な分布を達成し、投与後１時間で、イメージングす
るのに充分な、標的部位／バックグランド比を提供しう
るものであり、更にイメージング撮像に適当な時間、標
的部位に集積し、その後、速やかに腎臓から尿中に排泄
されるという診断剤として好ましい特性を有しており、
汎用的に利用しうる放射線イメージング装置を用いて診
断が可能である等、従来の問題点を解決する優れた特性
を有するものである。

【００１６】尚、本発明の炎症親和性ペプチドを含有し
てなる放射性診断剤は、ボーラス投与による静脈注射等
の一般的に用いられる非経口手段により投与でき、その
投与量は患者の体重、年令及び適当な放射線イメージン
グ装置等の諸条件を考慮し、イメージングが可能と考え
られる放射能量が得られるように決定される。ヒトを対
象とする場合、通常は１８５〜１１１０ＭＢｑの範囲が
好ましい。以下に、前述の本発明の炎症親和性ペプチド
及びその誘導体の例を示す。

【００１７】

【化１】

【００１８】

【化２】

【００１９】

【化３】

【００２０】

【化４】

【００２１】

【化５】

【００２２】以下に実施例により、本発明を更に具体的
に説明する。実施例のテクネチウム−９９ｍ標識は、Ｗ
Ｏ９２／１３５７２−Ａ号公報記載の方法を用いて実施
したが、これは本発明ペプチドが、核種及び標識方法に
より、その性能を変化させることなく炎症部位のイメー
ジングが可能であることを立証することを目的とし行っ
たものである。

【００２３】

【実施例】

（実施例１） ＫＧＧＰＥＬＬＧＧＰＳＶ（ペプチド−１）の合成 アプライドバイオシステムズ社製ペプチド合成機（モデ
ル４３１Ａ）を用い、Ｆｍｏｃ法によりＨＭＰ樹脂を用
いてＯ．２５ｍＭスケールの条件で合成を行った。ペプ
チドの切出しは、２．５％エタンジチオール（以下ＥＤ
Ｔと略す）を含む９５％トリフルオロ酢酸（以下ＴＦＡ
と略す）水中で２．５時間反応させて行った。精製は、
カラム：ＹＭＣ−ＰａｃｋＲ＆Ｄ−ＯＤＳ−５−ＳＴ
（４．６×１５０ｍｍ）、溶出速度：６ｍｌ／分、溶出
液Ａ：０．１％ＴＦＡ／精製水、溶出液Ｂ：０．１％Ｔ
ＦＡ／アセトニトリル、濃度勾配：０分（１０％Ｂ）→
１５分（２０％Ｂ）→４０分（５０％Ｂ）の条件の下、
ＨＰＬＣ法を用いて行った。

【００２４】更に、ウォーターズ社製ＰＩＣＯ・ＴＡＧ
−ＴＭ−ワークステーションを用い、得られた主ピーク
に対するアミノ酸組成を求め、目的ペプチドであること
を確認した後、アミノ酸組成の一致したピークを凍結乾
燥し、凍結乾燥品５９．６ｍｇを得た。以下に得られた
ペプチドのアミノ酸組成の分析値（分子当たりの個数）
を示す。丸かっこ内は、目的ペプチドのアミノ酸組成の
理論値（分子当たりの個数）。 〔Ｇｌｕ：１．０（１）、Ｓｅｒ：１．３（１）、Ｇｌ
ｙ：４．４（４）、Ｐｒｏ：２．０（２）、Ｖａｌ：
１．１（１）、Ｌｅｕ：２．１（２）、Ｌｙｓ：１．２
（１）〕

【００２５】ペプチド合成機の信頼性を確認するため、
アプライド社製ペプチド自動分析装置（モデル４７７
Ａ）を用い、上記で得られたペプチドのアミノ酸配列を
求めた。更に、Ｃ末端を確認するためにＣ末端分析も併
せて実施した。分析の結果、Ｎ末端１１番目のＳまでの
配列が目的配列と一致した。さらにＣ末端分析の結果、
Ｃ末端は、Ｖである事が確認された。以上の事から本ペ
プチドがＫＧＧＰＥＬＬＧＧＰＳＶのアミノ酸配列を有
するペプチドであることが確認された。

【００２６】（実施例２） ＣＧＣＧＧＬＬＧＧＰＳＶ（ペプチド−２）の合成 実施例１記載の方法により合成を行った。精製は、カラ
ム：ＹＭＣ−ＰａｃｋＲ＆Ｄ−ＯＤＳ−５−ＳＴ（４．
６×１５０ｍｍ）、溶出速度：１ｍｌ／分、溶出液Ａ：
０．１％ＴＦＡ／精製水、溶出液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／
アセトニトリル、濃度勾配：０分（５％Ｂ）→４０分
（３０％Ｂ）→１２０分（６０％Ｂ）の条件の下、ＨＰ
ＬＣ法を用いて行った。

【００２７】更に、実施例１記載の方法により主ピーク
に対するアミノ酸組成を求め、目的ペプチドであること
を確認した後、得られたピークを凍結乾燥し、凍結乾燥
品２０ｍｇを得た。以下に得られたペプチドのアミノ酸
組成の分析値（分子当たりの個数）を示す。丸かっこ内
は、目的ペプチドのアミノ酸組成の理論値（分子当たり
の個数）を示す。 〔Ｓｅｒ：１．０（１）、Ｇｌｙ：４．９（５）、Ｐｒ
ｏ：１．０（１）、Ｖａｌ：１．０（１）、Ｃｙｓ：
０．９（２）、Ｌｅｕ：２．０（２）〕

【００２８】（実施例３） ＬＬＧＧＰＳＶＣ（ペプチド−３）の合成 実施例１記載の方法により、ＬＬＧＧＰＳＶＣのアミノ
酸配列を有するペプチド２５ｍｇを合成し、このペプチ
ドのアミノ酸分析を行った。以下に得られたペプチドの
アミノ酸組成の分析値（分子当たりの個数）を示す。丸
かっこ内は、目的ペプチドのアミノ酸組成の理論値（分
子当たりの個数）を示す。 〔Ｓｅｒ：０．９（１）、Ｇｌｙ：２．０（２）、Ｖａ
ｌ：１．０（１）、Ｌｅｕ：１．８（２）、Ｐｒｏ：
１．０（１）、Ｃｙｓ：１．２（１）〕

【００２９】（実施例４） Ｃ（Ａｃｍ）ＧＣ（Ａｃｍ）ＧＧＧＫＥＹＫＡＫＶＳＮ
ＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫ（ペプチド−４）の合成 実施例１記載の方法により合成を行った。Ａｃｍ（アセ
トアミドメチル基）はシステインの−ＳＨ基の保護基で
ある。ペプチドの切出しは、得られた化合物の１００ｍ
ｇをＥＤＴ０．２５ｍｌ、結晶フェノール０．７５ｇ、
チオアニソール０．５ｍｌ、精製水０．５ｍｌ及びＴＦ
Ａ９．５ｍｌを混合した溶液の１０ｍｌ水中で２．５時
間反応させて行った。精製は、カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃ
ｋＲ＆Ｄ−ＯＤＳ−５−ＳＴ（２０×１５０ｍｍ）、溶
出速度：８ｍｌ／分、溶出液Ａ：０．１％ＴＦＡ／精製
水、溶出液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル、濃度
勾配：０分（１０％Ｂ）→１５分（１５％Ｂ）→４０分
（５０％Ｂ）の条件の下、ＨＰＬＣ法を用いて行った。

【００３０】更に、実施例１記載の方法により主ピーク
に対するアミノ酸組成を求め、目的ペプチドであること
を確認した後、アミノ酸組成の一致したピークを凍結乾
燥し、純度９５％以上の凍結乾燥品４５ｍｇを得た。Ｃ
（Ａｃｍ）は、ＰＩＣＯ−ＴＡＧ法では確認不可能であ
るため、テクネチウム−９９ｍで標識することでＣ（Ａ
ｃｍ）ＧＣ（Ａｃｍ）の配列の存在を確認した。以下に
得られたペプチドのアミノ酸組成の分析値（分子当たり
の個数）を示す。丸かっこ内は、目的ペプチドのアミノ
酸組成の理論値（分子当たりの個数）。 〔Ａｓｎ：１．１（１）、Ｇｌｕ：２．０（２）、Ｓｅ
ｒ：２．３（２）、Ｇｌｙ：４．４（４）、Ｔｈｒ：
１．０（１）、Ａｌａ：３．２（３）、Ｐｒｏ：２．１
（２）、Ｔｙｒ：０．６（１）、Ｖａｌ：０．９
（１）、Ｉｌｅ：２．８（２）、Ｌｅｕ：１．３
（１）、Ｌｙｓ：５．７（６）、Ｃｙｓ：−（２）〕

【００３１】又、実施例１記載の自動分析装置を用い、
上記で得られたペプチドのアミノ酸配列を求め、Ｎ末端
側から２６残基までの配列が目的配列と一致することを
確認した。以上から本ペプチドがＣ（Ａｃｍ）ＧＣ（Ａ
ｃｍ）ＧＧＧＫＥＹＫＡＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴ
ＩＳＫのアミノ酸配列を有するペプチドであることが確
認された。

【００３２】（実施例５） Ｃ（Ａｃｍ）ＧＣ（Ａｃｍ）ＧＧＫＴＫＰＲＥＱＱＹＮ
ＳＴＹＲＶＶ（ペプチド−５）の合成 実施例１記載の方法により合成を行った。ペプチドの切
出しは、得られた化合物の１５０ｍｇをＥＤＴ０．２５
ｍｌ、結晶フェノール０．７５ｇ、チオアニソール０．
５ｍｌ、精製水０．５ｍｌ及びＴＦＡ９．５ｍｌを混合
した溶液の１０ｍｌ水中で１．５時間反応させて行っ
た。精製は、カラム：ＹＭＣ−ＰａｃｋＲ＆Ｄ−ＯＤＳ
−５−ＳＴ（２０×１５０ｍｍ）、溶出速度：８ｍｌ／
分、溶出液Ａ：０．１％ＴＦＡ／精製水、溶出液Ｂ：
０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル、濃度勾配：０分（１
０％Ｂ）→１５分（１０％Ｂ）→９０分（４０％Ｂ）の
条件の下、ＨＰＬＣ法を用いて行った。

【００３３】又、実施例１記載の分析装置を用い、得ら
れた主ピークに対するアミノ酸組成を求め、全配列が目
的配列と一致することを確認した後、アミノ酸組成の一
致したピークを凍結乾燥し、純度９５％以上の凍結乾燥
品５１ｍｇを得た。以下に得られたペプチドのアミノ酸
組成の分析値（分子当たりの個数）を示す。丸かっこ内
は、目的ペプチドのアミノ酸組成の理論値（分子当たり
の個数）。 〔Ａｓｐ：１．１（１）、Ｇｌｘ：３．１（３）、Ｓｅ
ｒ：１．０（１）、Ｇｌｙ：３．３（３）、Ａｒｇ：
２．１（２）、Ｔｈｒ：２．２（２）、Ｐｒｏ：１．１
（１）、Ｔｙｒ：１．２（２）、Ｖａｌ：１．７
（２）、Ｃｙｓ：−（２）、Ｌｙｓ：５．９（６）〕

【００３４】（実施例６） （ＰＥＬＬＧＧＰＳＶ）×４並列（Ｋ）×２並列（ＫＧ
ＧＣ（Ａｃｍ）ＧＣ（Ａｃｍ）（ペプチド−６）の合成 実施例１記載の方法により、合成を行った。精製は、カ
ラム：ＹＭＣ−ＰａｃｋＲ＆Ｄ−ＯＤＳ−５−ＳＴ（２
０×１５０ｍｍ）、溶出速度：８ｍｌ／分、溶出液Ａ：
０．１％ＴＦＡ／精製水、溶出液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／
アセトニトリル、濃度勾配：０分（１５％Ｂ）→１５分
（１５％Ｂ）→１００分（６０％Ｂ）の条件の下、ＨＰ
ＬＣ法を用い行った。

【００３５】又、実施例１記載の分析装置を用い、得ら
れた主ピークに対するアミノ酸組成を求め、目的ペプチ
ドであることを確認した後、アミノ酸組成の一致したピ
ークを凍結乾燥し、凍結乾燥品２２．１ｍｇを得た。以
下に得られたペプチドのアミノ酸組成の分析値（分子当
たりの個数）を示す。丸かっこ内は、目的ペプチドのア
ミノ酸組成の理論値（分子当たりの個数）を示す。 〔Ｇｌｕ：３．９（４）、Ｓｅｒ：４．１（４）、Ｇｌ
ｙ：１１．８（１１）、Ｐｒｏ：７．９（８）、Ｖａ
ｌ：２．９（４）、Ｌｅｕ：７．６（８）、Ｌｙｓ：
２．１（３）、Ｃｙｓ：−（２）〕

【００３６】（実施例７） Ｃ（Ａｃｍ）ＧＣ（Ａｃｍ）ＧＧ〔（ＰＥＬＬＧＧＰＳ
Ｖ）×直列３回繰返〕Ａ（ペプチド−７）の合成 実施例１記載の方法により、合成を行った。精製は、カ
ラム：ＹＭＣ−ＰａｃｋＲ＆Ｄ−ＯＤＳ−５−ＳＴ（２
０×１５０ｍｍ）、溶出速度：８ｍｌ／ｍｉｎ、溶出液
Ａ：０．１％ＴＦＡ／精製水、溶出液Ｂ：０．１％ＴＦ
Ａ／アセトニトリル、濃度勾配：０分（１５％Ｂ）→１
５分（１５％Ｂ）→１００分（６０％Ｂ）の条件の下、
ＨＰＬＣ法を用い行った。

【００３７】又、実施例１記載の分析装置を用い、得ら
れた主ピークに対するアミノ酸組成を求め、目的ペプチ
ドであることを確認した後、アミノ酸組成の一致したピ
ークを凍結乾燥し、凍結乾燥品５５．６ｍｇを得た。以
下に得られたペプチドのアミノ酸組成の分析値（分子当
たりの個数）を示す。丸かっこ内は、目的ペプチドのア
ミノ酸組成の理論値（分子当たりの個数）を示す。 〔Ｇｌｕ：３．１（３）、Ｓｅｒ：３．０（３）、Ｇｌ
ｙ：９．７（９）、Ｐｒｏ：６．９（２）、Ｖａｌ：
２．９（３）、Ｌｅｕ：６．０（６）、Ａｌａ：２．０
（１）〕

【００３８】（実施例８） ペプチド−１リジン残基への二官能性配位子（ＤＴＰ
Ａ）の導入 実施例１で得られたペプチド−１の５．０μｍｏｌを
０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）３．０ｍｌに溶解
させ、室温で攪拌しながら１０倍等量の無水ＤＴＰＡを
加え３０分間反応させた。混合液を検出波長２３０ｎｍ
を用い、ＨＰＬＣにて分取し、３本のピーク成分を得
た。目的ピーク決定のため、各ピーク成分に対しインジ
ウム−１１１標識を行い、アセチルセルロース膜を用い
た電気泳動法から、標識率を求めた。

【００３９】各ピーク成分の放射化学的純度は、ピーク
１：９６．０％、ピーク２：９８．０％、ピーク３：３
８．０％であった。ピーク２成分は、標識率が９８．０
％と高いことから、ペプチドに二官能性配位子が結合し
た目的化合物であることが判明した。このピーク２成分
を凍結乾燥し、ＤＴＰＡ結合ペプチド７．１ｍｇを得
た。

【００４０】（実施例９） キトサン−５糖（ＣＨＩ−５糖）への二官能性配位子
（ＤＴＰＡ）の導入 ＣＨＩ−５糖の３２．８μｍｏｌを０．１Ｍ重炭酸緩衝
液（ｐＨ９．７）３．０ｍｌに溶解させ、攪拌しながら
５倍等量の無水ＤＴＰＡを加え、室温で１時間反応させ
た。混合液は、旭化成株式会社製電気透析装置（Ｍｉｃ
ｒｏ Ａｃｉｌｙｚｅｒ Ｓ１）を用い、電気透析を
２．５時間行うことにより精製した。この試料に対し、
未反応の１級アミンをニンヒドリン反応を用い定量し
た。その結果、未反応の１級アミンは、少なくとも２個
存在することが確認され、ＤＴＰＡがＣＨＩ−５糖へ１
〜３導入されたことを確認した。

【００４１】（実施例１０） ペプチド−３−Ｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣ−ＣＨＩ−５糖−
ＤＴＰＡの合成 実施例９で得られたＤＴＰＡ−ＣＨＩ−５糖の１０ｎｍ
ｏｌを５０ｍＭのほう酸緩衝液（ｐＨ７．６）８．０ｍ
ｌに溶解させ、３０℃の水溶液中で攪拌しながらＳｕｌ
ｆｏ−ＳＭＣＣ５０ｎｍｏｌを加え、１時間反応させ
た。旭化成株式会社製電気透析装置を用い、電気透析に
て精製を行い、凍結乾燥し得られた化合物の３７．５％
を分取し、０．１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）に
溶解させた。この混合物に実施例３で得られたペプチド
−３の１２μｍｏｌを加え、低温室中で一晩反応させた
後、このペプチド含有混合液を濃縮し、ＨＰＬＣにて精
製を行い、２１５ｎｍの検出波長により２本のピーク成
分（保持時間 ピーク１：６１分、ピーク２：７３分）
を得た。各ピーク成分に対し、インジウム−１１１標識
を行い放射化学的純度を電気泳動法にて求めたところ、
ピーク１：８２．６％とピーク２：８３．４％であっ
た。ＣＨＩに結合するペプチド数が増加するほど化合物
全体としての疏水性も増加することから目的化合物と考
えられたＨＰＬＣ保持時間の長い、ピーク２を用いて、
以後の実験を行った。

【００４２】（実施例１１） ＫＧＧＰＥＬＬＧＧＰＳＶ（ペプチド−１）のＮ末端ア
セチル化 実施例１で得られたペプチド−１の８．０μｍｏｌを
０．３Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．３）１．０ｍｌに溶解
させ、４℃で攪拌しながら無水酢酸２０μｌを加え、１
２時間反応させた。反応後、ニンヒドリン反応によって
Ｎ末端アセチル化の確認を行った。波長５７０ｎｍで吸
光度を測定した結果、アセチル化を行わないペプチド−
１のＮ末端アミンの吸光度は１．７３４、アセチル化後
のペプチド−１のＮ末端アミンの吸光度は０．２４９で
あり、従って８５．７％がアセチル化された。Ｎ末端に
アセチル基が結合するとペプチドの疏水性が増加し、逆
相ＨＰＬＣを行うと保持時間の延長が認められることの
知見に基づきＨＰＬＣ分析を行った結果、保持時間がＮ
末端アセチル化しないものは１３．７２分、Ｎ末端アセ
チル化したものは１４．９３分であり、約１分間の保持
時間の延長が認められ、当該ペプチドのＮ末端がアセチ
ル化されたことを確認した。

【００４３】（実施例１２） Ｃ（Ａｃｍ）ＧＣ（Ａｃｍ）ＧＧＧＫＥＹＫＡＫＶＳＮ
ＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫ（ペプチド−４）のＣ末端
アミド化及びＮ末端アセチル化 実施例１記載の方法において、ＨＭＰ樹脂の替わりに、
ミリポア社製のＰＡＬ樹脂 (Peptide Amide Linker）を
用い、Ｃ末端がアミド化されたＣ（Ａｃｍ）ＧＣ（Ａｃ
ｍ）ＧＧＧＫＥＹＫＡＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩ
ＳＫを合成し、次いでＮ末端をＮ−ヒドロキシベンゾト
リアゾール（ＨＯＢｔ）を活性化剤として使用し、無水
酢酸によりアセチル化を行った。

【００４４】ペプチドの切出しは、得られた化合物の１
５０ｍｇをのＥＤＴ０．２５ｍｌ、結晶フェノール０．
７５ｇ、チオアニソール０．５ｍｌ、精製水０．５ｍｌ
及びＴＦＡ９．５ｍｌを混合した溶液の１０ｍｌ水中で
２時間反応させて行った。精製は、カラム：ＹＭＣ−Ｐ
ａｃｋＲ＆Ｄ−ＯＤＳ−５−ＳＴ（２０×１５０ｍ
ｍ）、溶出速度：８ｍｌ／分、溶出液Ａ：０．１％ＴＦ
Ａ／精製水、溶出液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／アセトニトリ
ル、濃度勾配：０分（１０％Ｂ）→１５分（１５％Ｂ）
→７５分（５０％Ｂ）の条件の下、ＨＰＬＣ法を用いて
行った。

【００４５】アミノ酸組成の分析は、実施例１記載の分
析装置を用い行い、得られた主ピークに対するアミノ酸
組成を求め、目的ペプチドであることを確認した後、ア
ミノ酸組成の一致したピークを凍結乾燥し、純度９５％
以上の凍結乾燥品３２ｍｇを得た。以下に得られたペプ
チドのアミノ酸組成の分析値（分子当たりの個数）を示
す。丸かっこ内は、目的ペプチドのアミノ酸組成の理論
値（分子当たりの個数）。 〔Ａｓｎ：１．１（１）、Ｇｌｕ：２．１（２）、Ｓｅ
ｒ：２．０（２）、Ｇｌｙ：３．８（４）、Ｔｈｒ：
１．１（１）、Ａｌａ：３．１（３）、Ｐｒｏ：２．１
（２）、Ｔｙｒ：０．６（１）、Ｖａｌ：１．０
（１）、Ｃｙｓ：−（２）、Ｉｌｅ：２．２（２）、Ｌ
ｅｕ：１．２（１）、Ｌｙｓ：５．９（６）〕

【００４６】（実施例１３） Ｃ（Ａｃｍ）ＧＣ（Ａｃｍ）ＧＧＫＴＫＰＲＥＱＱＹＮ
ＳＴＹＲＶＶ（ペプチド−７）のＣ末端アミド化及びＮ
末端アセチル化 実施例１記載の方法において、ＨＭＰ樹脂の替わりに、
ミリポア社製のＰＡＬ樹脂を用い、Ｃ末端がアミド化さ
れたＣ（Ａｃｍ）ＧＣ（Ａｃｍ）ＧＧＫＴＫＰＲＥＱＱ
ＹＮＳＴＹＲＶＶを合成し、次いでＮ末端をＮ−ヒドロ
キシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を活性化剤として
使用し、無水酢酸によりアセチル化を行った。

【００４７】ペプチドの切出しは、得られた化合物の１
５０ｍｇをＥＤＴ０．２５ｍｌ、結晶フェノール０．７
５ｇ、チオアニソール０．５ｍｌ、精製水０．５ｍｌ及
びＴＦＡ９．５ｍｌを混合した溶液の１０ｍｌ水中で
１．５時間反応させて行った。精製は、カラム：ＹＭＣ
−ＰａｃｋＲ＆Ｄ−ＯＤＳ−５−ＳＴ（２０×１５０ｍ
ｍ）、溶出速度：８ｍｌ／分、溶出液Ａ：０．１％ＴＦ
Ａ／精製水、溶出液Ｂ：０．１％ＴＦＡ／アセトニトリ
ル、濃度勾配：０分（１０％Ｂ）→１５分（１０％Ｂ）
→７５分（５０％Ｂ）の条件の下、ＨＰＬＣ法を用いて
行った。

【００４８】アミノ酸組成の分析は、実施例１記載の分
析装置を用い行い、得られた主ピークに対するアミノ酸
組成を求め、目的ペプチドであることを確認した後、ア
ミノ酸組成の一致したピークを凍結乾燥し、純度９５％
以上の凍結乾燥品２３ｍｇを得た。以下に得られたペプ
チドのアミノ酸組成の分析値（分子当たりの個数）を示
す。丸かっこ内は、目的ペプチドのアミノ酸組成の理論
値（分子当たりの個数）。 〔Ａｓｐ：１．１（１）、Ｇｌｘ：３．２（３）、Ｓｅ
ｒ：０．９（１）、Ｇｌｙ：３．１（３）、Ａｒｇ：
２．２（２）、Ｔｈｒ：２．２（２）、Ｐｒｏ：１．１
（１）、Ｔｙｒ：１．３（２）、Ｖａｌ：１．６
（２）、Ｃｙｓ：−（２）、Ｌｙｓ：５．９（６）〕

【００４９】（実施例１４） インジウム−１１１標識ペプチドの調製 実施例８で得られたペプチド−１−ＤＴＰＡの１００〜
２００ｎｍｏｌを０．１Ｍクエン酸緩衝液でｐＨを調製
後（ｐＨ５．７）、塩化インジウム（¹¹¹In ）の３７Ｍ
Ｂｑ〜７４ＭＢｑを加え、攪拌後１５分間放置した。そ
の一部をとり電気泳動法で標識率を確認した。目的化合
物の放射化学的純度は９８％であった。又、実施例１０
で得られたペプチド−３−Ｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣ−ＣＨ
Ｉ−ＤＴＰＡも同様の方法でＩｎ−１１１標識を行っ
た。目的化合物の放射化学的純度は９０％であった。

【００５０】（実施例１５） ＣＧＣ配列を含むペプチドのテクネチウム−９９ｍ標識 実施例２で得られたペプチド−２を各バイアルに２４０
〜３００ｎｍｏｌとり、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
８．０）で全量を３００μｍｏｌとし、バイアル内をア
ルゴン置換した。その中にジチオトレイト−ル１８０〜
３００ｎｍｏｌを加え、室温で１時間反応させた。次い
で、塩化第一スズ１２０ｎｍｏｌ及び過テクネチウム酸
ナトリウム７４０〜１１１０ＭＢｑを加え、緩やかに攪
拌しながら１時間放置し、テクネチウム−９９ｍ標識ペ
プチド−２を得た。ＴＬＣによる放射化学的純度は、９
０％以上であった。

【００５１】（実施例１６） テクネチウム−９９ｍ標識グルコヘプタネートの調製 Ｇｌｕｃｏｈｅｐｔａｎｉｃ ａｃｉｄ２０．４μｍｏ
ｌを０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）に溶解させ、
全量を４５０μｌにし、バイアル内をアルゴンで置換し
た後、塩化第一スズ１２０μｍｏｌ及び過テクネチウム
酸ナトリウム１．５〜２．２ＧＢｑを加え、緩やかに３
０分間攪拌し、テクネチウム−９９ｍ標識グルコヘプタ
ネートを得た。

【００５２】（実施例１７） Ｃ（Ａｃｍ）ＧＣ（Ａｃｍ）配列を含むペプチドのテク
ネチウム−９９ｍ標識 実施例４〜７で得られたペプチド０．２〜１．０μｍｏ
ｌを各バイアルにとり、０．１Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ
８．０）で全量を５００μｌにし、バイアル内をアルゴ
ン置換した。次いで、実施例１６で得られたテクネチウ
ム−９９ｍ標識グルコヘプタネートの１．５〜２．２Ｇ
Ｂｑ／ｍｌを５００μｌずつ各バイアルに加え、素早く
攪拌後、沸騰水浴中で２０分間反応させた。放冷後のＴ
ＬＣによる標識率は、９０〜９５％であった。

【００５３】（実施例１８） インジウム−１１１標識ペプチドを用いた炎症部位のイ
メージング 体重２２０ｇ前後のＳＤ系ラット（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄ
ａｖｌｅｙ Ｒａｔｓ）の右大腿部皮下にテレビン油１
００μｌを投与し、２４時間後、明らかに炎症が認めら
れた時点に、ラボナール麻酔を施し、実施例１４で得ら
れたペプチド−１−ＤＴＰＡ−インジウム−１１１及び
ペプチド−３−Ｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣ−ＣＨＩ−ＤＴＰ
Ａ−インジウム−１１１を各３．７ＭＢｑ〜７．４ＭＢ
ｑを尾静脈内投与し、１時間、３時間及び６時間後にガ
ンマカメラにてイメージを撮像した。イメージ上に関心
領域を設定し、炎症部位の総カウント（Ｔ）と対足健常
同部位の総カウント（Ｂ）の比（〔Ｔ〕／〔Ｂ〕比）を
求めた。投与後１時間での〔Ｔ〕／〔Ｂ〕比はペプチド
−１−インジウム−１１１標識体２．６３、ペプチド−
３−インジウム−１１１標識体２．０９を示し、明らか
に病巣部位を描出することを確認した。表１に３匹のラ
ットにおける各ペプチドの時間経過に伴う〔Ｔ〕／
〔Ｂ〕比（平均値±標準誤差）を記す。

【００５４】

【表１】

【００５５】（実施例１９） テクネチウム−９９ｍ標識ペプチドを用いた炎症部位の
イメージング 実施例１８記載のモデルラットにラボナール麻酔を施し
た後、実施例１５で得られたテクネチウム−９９ｍ標識
−ペプチド−２及び実施例１７で得られたペプチド−
４、５、６、７の３７ＭＢｑ〜７４ＭＢｑを尾静脈内投
与し、３０分、１時間、３時間及び６時間間後にガンマ
カメラを用い、イメージの撮像を行った。イメージ上に
関心領域を設定し、〔Ｔ〕／〔Ｂ〕比を求めた。ペプチ
ド２、４、５、６、７の投与後１時間の〔Ｔ〕／〔Ｂ〕
比は、それぞれ３．３５、４．２７、４．４１、４．９
８及び３．３６を示し明らかに病巣部位の描出が可能で
あることを確認した。表２に、各ペプチドの３匹のラッ
トにおける各ペプチドの時間経過に伴う〔Ｔ〕／〔Ｂ〕
比（平均値±標準誤差）を記す。

【００５６】

【表２】

【００５７】（実施例２０） 感染症ラットモデルを用いたテクネチウム−９９ｍ標識
ペプチドを用いたイメージング スタフィロコッカス・アウレウス (Staphylococcus aur
eus) １０⁸ 個の生菌を生理食塩水１．０ｍｌに懸濁さ
せ、その内の１００μｌをＳＤ系ラット２２０ｇ前後の
右大腿部に筋肉内投与し、２４時間経過後、明らかに炎
症が認められたモデルラットにラボナール麻酔を施し、
実施例１７で得られたテクネチウム−９９ｍ標識−ペプ
チド−６の３７〜７４ＭＢｑを尾静脈内投与し、１時
間、３時間及び６時間後にガンマカメラにてイメージを
撮像した。イメージ上に関心領域を設定し、〔Ｔ〕／
〔Ｂ〕比を求めた。投与後１時間の〔Ｔ〕／〔Ｂ〕比は
１．９２を示し、明らかに病巣部位の描出が可能である
ことを確認した。表３に、本ペプチドの時間経過に伴う
〔Ｔ〕／〔Ｂ〕比（平均値±標準誤差）を記す。

【００５８】

【表３】

【００５９】（実施例２１） ペプチドの安全性 ペプチド−１、４及び５を用い、ヒトの臨床投与量を
１．０ｍｇ／６０ｋｇと仮定し、ラット１．０ｇ当たり
８．３μｇ及びコントロールとして溶媒（生理食塩水）
を尾静脈内からボーラス投与した。投与後、ただちに観
察を開始し、０分、１０分、３時間、６時間、１日、２
日、３日、４日、５日後までラットの動態を観察した。
その結果、ペプチド投与直後のよだれ、嘔吐、眼球突
出、行動異常等の症状は認められず、更に５日後までの
体重変化を観察した結果、極端な増減は認められなかっ
た。又、５日目の体重測定後にラットを解剖し、肉眼で
組織異常を検査した。その結果、いずれの組織において
もうっ血、色素沈着、変色等の異常は認められなかっ
た。以上の結果より、本ペプチドは臨床予定投与量の１
０００倍量以上投与しても安全であることが推定され
た。

【００６０】

【発明の効果】本発明により、患者への無用な被曝、薬
剤使用施設の限定、施術者への感染の危険性、早期診断
情報入手の困難性及び薬剤調製時のハンドリングの煩雑
性かつ熟練を必要としない、投与後速やかに炎症部位に
集積し、イメージング撮像に適当な時間保持され、腎臓
から尿中へのクリアランスも良好な、ヒトを含む哺乳動
物の炎症部位をイメージングするのに有用なペプチド又
はその化学修飾体、該ペプチド又はその化学修飾体から
誘導される放射性金属標識ペプチド及びこれらのペプチ
ドを含有してなる放射性診断剤の提供が可能となった。
また、本発明の放射性金属標識診断剤は投与後数十分で
イメージングが可能である。

【図面の簡単な説明】

【図１】炎症モデルラットを用いた放射性金属標識ペプ
チド−４の投与後１時間の全身シンチグラム（生物の形
態）。

【図２】炎症モデルラットを用いた放射性金属標識ペプ
チド−５の投与後１時間の全身シンチグラム（生物の形
態）。

【図３】炎症モデルラットを用いた放射性金属標識ペプ
チド−６の投与後１時間の全身シンチグラム（生物の形
態）。

【図４】感染症モデルラットを用いた放射性金属標識ペ
プチド−６の投与後１時間の全身シンチグラム（生物の
形態）。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成７年１月２５日

【手続補正１】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】全図

【補正方法】変更

【補正内容】

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 14/475 8318−4Ｈ // Ｃ０７Ｋ 103:00

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記のアミノ酸配列群から選択されるア
   ミノ酸配列の少なくとも１を含有する炎症親和性ペプチ
   ド。 ＬＬＧＧＰＳ、 ＬＬＧＧＰＳＶ、 ＫＥＹＫＡＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫ、 ＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫ、 ＫＴＫＰＲＥＱＱＹＮＳＴＹＲ、 ＫＴＫＰＲＥＱＱＹＮＳＴＹＲＶＶ、 但し、Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、
   Ｓ、Ｔ、Ｖ及びＹは、一文字表示のアミノ酸残基を示
   す。
2. 【請求項２】 請求項１記載の炎症親和性ペプチドに、
   二官能性架橋剤が結合してなる炎症親和性ペプチド誘導
   体。
3. 【請求項３】 請求項１記載の炎症親和性ペプチドに、
   二官能性配位子が結合してなる炎症親和性ペプチド誘導
   体。
4. 【請求項４】 請求項２記載の炎症親和性ペプチドの二
   官能性架橋剤を介してキャリアーが結合してなる炎症親
   和性ペプチド誘導体。
5. 【請求項５】 請求項４記載の炎症親和性ペプチドのキ
   ャリアーを介して二官能性配位子が結合してなる炎症親
   和性ペプチド誘導体。
6. 【請求項６】 二官能性架橋剤が、スルホサクシンイミ
   ジル ４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン
   −１−カルボキシレート、３−マレイミドベンゾイック
   アシッド Ｎ−ヒドロキシサクシンイミドエステル、又
   はＮ−（ε−マレイミドカプロイルオキシ）サクシンイ
   ミド、サクシンイミジル ４−（ｐ−マレイミドフェニ
   ル）ブチレートのいずれかである請求項２、４又は５記
   載の炎症親和性ペプチド誘導体。
7. 【請求項７】 二官能性配位子がジエチレントリアミン
   ５酢酸、エチレンジアミン４酢酸、又は１，４，７，１
   ０−テトラアザシクロドデカン−１−アミノエチルカル
   バモイルメチル−４，７，１０−トリス［（Ｒ，Ｓ）メ
   チル酢酸］のいずれかである請求項３又は５記載の炎症
   親和性ペプチド誘導体。
8. 【請求項８】 キャリアーが、ポリリジン又はキトサン
   のいずれかである請求項４又は５記載の炎症親和性ペプ
   チド誘導体。
9. 【請求項９】 請求項１、３、５又は７記載の炎症親和
   性ペプチド又はそれらの誘導体に放射性金属イオンが配
   位してなる放射性金属標識ペプチド。
10. 【請求項１０】 放射性金属イオンがテクネチウム−９
    ９ｍ又はインジウム−１１１である請求項９記載の放射
    性金属標識ペプチド。
11. 【請求項１１】 請求項９又は１０記載の放射性金属標
    識ペプチドを含有してなる放射性診断剤。