JPH07196689A - 寄生虫に対する感染防御のための抗原及びその用途 - Google Patents
寄生虫に対する感染防御のための抗原及びその用途Info
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-
- A—HUMAN NECESSITIES
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【構成】 マンソン住血吸虫由来の１４−１５ｋＤａの
範囲の分子量を有し、そのアミノ酸配列が（Ｉ）であ
り、脂肪酸を結合する能力を有するタンパク質であっ
て、実験動物においてその腸内寄生虫感染に対する感染
防御抗原性が１００％まで補助剤の存在下または非存在
下で１０μｇ以下の生のタンパク質、組み替え体のタン
パク質または合成形のタンパク質を３投与量までワクチ
ン投与することにより達成されることを特徴とする前記
タンパク質であるＳｍ１４． 【効果】 これらのタンパク質は寄生虫に対する効果的
で長期にわたり持続する感染防御をもたらすことのでき
る腸内寄生虫由来の抗原性物質、特に腸内寄生虫に対し
て感染防御免疫をもたらす。
範囲の分子量を有し、そのアミノ酸配列が（Ｉ）であ
り、脂肪酸を結合する能力を有するタンパク質であっ
て、実験動物においてその腸内寄生虫感染に対する感染
防御抗原性が１００％まで補助剤の存在下または非存在
下で１０μｇ以下の生のタンパク質、組み替え体のタン
パク質または合成形のタンパク質を３投与量までワクチ
ン投与することにより達成されることを特徴とする前記
タンパク質であるＳｍ１４． 【効果】 これらのタンパク質は寄生虫に対する効果的
で長期にわたり持続する感染防御をもたらすことのでき
る腸内寄生虫由来の抗原性物質、特に腸内寄生虫に対し
て感染防御免疫をもたらす。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、寄生虫に対する有効な
且つ長期永続的防御を誘導しうる蠕虫由来抗原性物質、
特に、蠕虫に対する防御免疫を媒介する抗原に関する。
且つ長期永続的防御を誘導しうる蠕虫由来抗原性物質、
特に、蠕虫に対する防御免疫を媒介する抗原に関する。
【０００２】
【従来の技術】蠕虫の中で、二生類吸虫すなわち吸虫類
は１００を越える種類を含む。その大部分は、脊椎動物
の腸管および他の器官中に生存している比較的無害な寄
生虫であり、したがって、応用寄生虫学者によってほと
んど研究されていなかった。ヒトにおいて重大な疾患を
引起こすこのような吸虫は、動物に感染する極めて重要
な寄生虫である血液吸虫すなわち住血吸虫並びに肝吸虫
および肺吸虫である。
は１００を越える種類を含む。その大部分は、脊椎動物
の腸管および他の器官中に生存している比較的無害な寄
生虫であり、したがって、応用寄生虫学者によってほと
んど研究されていなかった。ヒトにおいて重大な疾患を
引起こすこのような吸虫は、動物に感染する極めて重要
な寄生虫である血液吸虫すなわち住血吸虫並びに肝吸虫
および肺吸虫である。
【０００３】最も重要な肝吸虫であるファスキオラ属
（Ｆａａｃｉｏｌａ）は、主として家畜用の反芻動物に
おける寄生虫であり且つ世界中のいたるところで重大な
経済的損失の原因となっている（ウシ、ヒツジおよびヤ
ギ）。
（Ｆａａｃｉｏｌａ）は、主として家畜用の反芻動物に
おける寄生虫であり且つ世界中のいたるところで重大な
経済的損失の原因となっている（ウシ、ヒツジおよびヤ
ギ）。
【０００４】該疾患並びに前述の動物の病変、罹病率お
よび死亡率の原因となるものの主な特性は、宿主の肝臓
組織の破壊および胆管に対する損傷である。罹病率は若
い動物の方が高く、特に、罹病し且つ衰弱するようにな
り、そして致死する。ファスキオラ属は、更に、機会が
与えられるとヒトに寄生することがあり、それはキュー
バおよびラテンアメリカの国々において一層頻繁であ
る。それにもかかわらず、真のヒト肝吸虫は、中国、日
本、韓国、ベトナムおよびインドの広範囲に及んでいる
別の寄生虫、すなわち肝ジストマ（Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉ
ｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）である。病変は、基本的には胆
管壁が厚くなることによって引起こされ、そして苛酷な
症例においては肝硬変および致死を引起こす。
よび死亡率の原因となるものの主な特性は、宿主の肝臓
組織の破壊および胆管に対する損傷である。罹病率は若
い動物の方が高く、特に、罹病し且つ衰弱するようにな
り、そして致死する。ファスキオラ属は、更に、機会が
与えられるとヒトに寄生することがあり、それはキュー
バおよびラテンアメリカの国々において一層頻繁であ
る。それにもかかわらず、真のヒト肝吸虫は、中国、日
本、韓国、ベトナムおよびインドの広範囲に及んでいる
別の寄生虫、すなわち肝ジストマ（Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉ
ｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）である。病変は、基本的には胆
管壁が厚くなることによって引起こされ、そして苛酷な
症例においては肝硬変および致死を引起こす。
【０００５】ファスキオラ属および肝ジストマは両方と
も食物（ファスキオラ属および肝ジストマに関してそれ
ぞれ牧草および生魚）と一緒に摂取されるメタセルカリ
アとして受動的に侵入するが、脊推動物宿主身対中にお
けるそれらの胆管への移動経路は異なる。
も食物（ファスキオラ属および肝ジストマに関してそれ
ぞれ牧草および生魚）と一緒に摂取されるメタセルカリ
アとして受動的に侵入するが、脊推動物宿主身対中にお
けるそれらの胆管への移動経路は異なる。
【０００６】肝ジストマはファーター膨大部を介して腸
管から胆管樹に現れるが、ファスキオラ属は腹腔を通っ
て移動し、腸壁および肝実質にうまく貫入して、宿主組
織に対する一層重大な損傷を引起こす。
管から胆管樹に現れるが、ファスキオラ属は腹腔を通っ
て移動し、腸壁および肝実質にうまく貫入して、宿主組
織に対する一層重大な損傷を引起こす。
【０００７】家畜の肥大吸虫属（Ｆａｓｃｉｏｌｏｓｉ
ｓ）に関して、粗抽出物による免疫感作後の肝蛭（Ｆａ
ｓｃｉｏｌａ ｈｅｐａｔｉｃａ）に対するヒツジまた
はヤギ獲得免疫（シンクレア（Ｓｉｎｃｌａｉｒ）、１
９６７年）を示唆するためには相反する結果があり且つ
証拠は不十分である。
ｓ）に関して、粗抽出物による免疫感作後の肝蛭（Ｆａ
ｓｃｉｏｌａ ｈｅｐａｔｉｃａ）に対するヒツジまた
はヤギ獲得免疫（シンクレア（Ｓｉｎｃｌａｉｒ）、１
９６７年）を示唆するためには相反する結果があり且つ
証拠は不十分である。
【０００８】更に、実験的に感染したヒツジにおいて少
なくとも１１年間感染が持続することがありうることを
示す根拠がある（ダービン（Ｄｕｒｂｉｎ）、１９５２
年）。更に、寄生虫に対して起こる宿主の反応は極めて
少ないかまたは全くなく、したがって、ヒツジの生存は
摂取されたメタセルカリアの数に完全に依存することが
報告されている（ボーレイ（Ｂｏｒａｙ）、１９６９
年）。ウシはより耐性であると考えられており；概し
て、肝蛭はこの宿主中で９〜１２か月生存するが、一層
苛酷な臨床的肝蛭症を示すのは若い子ウシである。
なくとも１１年間感染が持続することがありうることを
示す根拠がある（ダービン（Ｄｕｒｂｉｎ）、１９５２
年）。更に、寄生虫に対して起こる宿主の反応は極めて
少ないかまたは全くなく、したがって、ヒツジの生存は
摂取されたメタセルカリアの数に完全に依存することが
報告されている（ボーレイ（Ｂｏｒａｙ）、１９６９
年）。ウシはより耐性であると考えられており；概し
て、肝蛭はこの宿主中で９〜１２か月生存するが、一層
苛酷な臨床的肝蛭症を示すのは若い子ウシである。
【０００９】肝蛭症に対する有効なワクチンを開発する
ための十分な根拠を与えうる免疫学的予防用抗原を決定
するいくつかの試みがなされてきた。基本的には、
（１）放射線照射生ワクチンによって誘導された免疫お
よび（２）非生ワクチンによって誘導された免疫に基く
２種類の独立した実験計画が数人の科学者によって得ら
れた。
ための十分な根拠を与えうる免疫学的予防用抗原を決定
するいくつかの試みがなされてきた。基本的には、
（１）放射線照射生ワクチンによって誘導された免疫お
よび（２）非生ワクチンによって誘導された免疫に基く
２種類の独立した実験計画が数人の科学者によって得ら
れた。
【００１０】それにもかかわらず、音波処理吸虫抽出物
を用いる子ウシの肝蛭に対する獲得耐性（ロス（Ｒｏｓ
ｓ）、１９６７年；ホール（Ｈａｌｌ）およびラング
（Ｌａｎｇ）、１９７８年；ヒリアー（Ｈｉｌｌｙｅ
ｒ）、１９７９年）に関してはほとんど試みられなかっ
たし、そしてそれらは相反するデータを報告した。
を用いる子ウシの肝蛭に対する獲得耐性（ロス（Ｒｏｓ
ｓ）、１９６７年；ホール（Ｈａｌｌ）およびラング
（Ｌａｎｇ）、１９７８年；ヒリアー（Ｈｉｌｌｙｅ
ｒ）、１９７９年）に関してはほとんど試みられなかっ
たし、そしてそれらは相反するデータを報告した。
【００１１】放射線照射生ワクチンによって誘導された
免疫は、更に、マウス、ウサギまたはヒツジにおいて行
なわれた実験において失望させる結果を示しており（カ
ンプベル（Ｃａｍｐｂｅｌｌ）ら、１９７８年、ヒュー
ゲス（Ｈｕｇｈｅｓ）１９６３年）；それは、放射線照
射メタセルカリアの投与後のこれらの動物において免疫
が生じた証拠が存在しないことによる。
免疫は、更に、マウス、ウサギまたはヒツジにおいて行
なわれた実験において失望させる結果を示しており（カ
ンプベル（Ｃａｍｐｂｅｌｌ）ら、１９７８年、ヒュー
ゲス（Ｈｕｇｈｅｓ）１９６３年）；それは、放射線照
射メタセルカリアの投与後のこれらの動物において免疫
が生じた証拠が存在しないことによる。
【００１２】更に、成体の胆汁段階の吸虫からの種々の
抽出物または排出／分泌産物に関する実験は、ワクチン
注射された動物がその肝実質において低防御および病理
学的病変を示したとすれば免疫原性ではなかった。
抽出物または排出／分泌産物に関する実験は、ワクチン
注射された動物がその肝実質において低防御および病理
学的病変を示したとすれば免疫原性ではなかった。
【００１３】当該技術分野のこれまでの事情で反映され
るように、ウシは非生ワクチンを用いるワクチン注射に
対して一層よく応答するであろうと予想されるが、実験
動物において多数の異なる抗原によって誘導された可も
なく不可もない防御のみの基準でヒツジに対しても同様
の予測ができるかどうかは疑わしかった。
るように、ウシは非生ワクチンを用いるワクチン注射に
対して一層よく応答するであろうと予想されるが、実験
動物において多数の異なる抗原によって誘導された可も
なく不可もない防御のみの基準でヒツジに対しても同様
の予測ができるかどうかは疑わしかった。
【００１４】異種免疫による肝蛭に対する防御免疫の誘
導は、更に、ヒツジの細頸襄虫（Ｃｙｓｔｉｃｅｒｃｕ
ｓ ｔｅｎｕｉｃｏｌｌｉｓ）、すなわち、イヌ条虫類
である胞状条虫（Ｔａｅｎｉａ ｈｙｄａｔｉｇｅｎ
ａ）のメタセストーデ（ｍｅｔａｃｅｓｔｏｄｅ）段階
による感染が肝蛭に対して部分的防御を生じたことを示
したカンプベルら（１９７７年）によって予想された
が、しかしながら、ヒューゲスら（１９７８年）はこの
結果を確証することができなかった。他の実験も、この
条虫を用いて実験動物の肝蛭に対する防御を誘導するこ
とはできなかった。
導は、更に、ヒツジの細頸襄虫（Ｃｙｓｔｉｃｅｒｃｕ
ｓ ｔｅｎｕｉｃｏｌｌｉｓ）、すなわち、イヌ条虫類
である胞状条虫（Ｔａｅｎｉａ ｈｙｄａｔｉｇｅｎ
ａ）のメタセストーデ（ｍｅｔａｃｅｓｔｏｄｅ）段階
による感染が肝蛭に対して部分的防御を生じたことを示
したカンプベルら（１９７７年）によって予想された
が、しかしながら、ヒューゲスら（１９７８年）はこの
結果を確証することができなかった。他の実験も、この
条虫を用いて実験動物の肝蛭に対する防御を誘導するこ
とはできなかった。
【００１５】マンソン住血吸虫（Ｓ．ｍａｎｓｏｎｉ）
の両性成体に感染したマウスは肝蛭に対して統計的に有
意の耐性を生じ、そして両方の寄生虫による同時感染は
定住する住血吸虫の数を減少させ且つ蠕虫当りの住血吸
虫の産卵を減少させた。更に、Ｓ．ボビス（ｂｏｖｉ
ｓ）に感染したウシは、肝蛭に対する若干の耐性および
あまり顕著でない肝組織損傷を示した（シラグ（Ｓｉｒ
ａｇ）ら、１９８１年）。
の両性成体に感染したマウスは肝蛭に対して統計的に有
意の耐性を生じ、そして両方の寄生虫による同時感染は
定住する住血吸虫の数を減少させ且つ蠕虫当りの住血吸
虫の産卵を減少させた。更に、Ｓ．ボビス（ｂｏｖｉ
ｓ）に感染したウシは、肝蛭に対する若干の耐性および
あまり顕著でない肝組織損傷を示した（シラグ（Ｓｉｒ
ａｇ）ら、１９８１年）。
【００１６】ペリー（Ｐｅｌｌｅｙ）およびヒリアー、
１９７８年、ヒリアーおよびデ・アティカ（ｄｅ Ａｔ
ｉｃａ）１９８０年は、住血吸虫卵中で見出された肝蛭
とマンソン住血吸虫とに共通の抗原を報告した。交差反
応性免疫を示すもう一つの知見は、両方の寄生虫が風土
病である地域において偽陽性反応が生じることである。
ヒリアー、１９８５年およびヒリアーら、１９８７年
は、更に、肝蛭由来の抗原混合物が肝蛭およびマンソン
住血吸虫双方による引続きの感染に対して防御を与える
ことができることを実証した。
１９７８年、ヒリアーおよびデ・アティカ（ｄｅ Ａｔ
ｉｃａ）１９８０年は、住血吸虫卵中で見出された肝蛭
とマンソン住血吸虫とに共通の抗原を報告した。交差反
応性免疫を示すもう一つの知見は、両方の寄生虫が風土
病である地域において偽陽性反応が生じることである。
ヒリアー、１９８５年およびヒリアーら、１９８７年
は、更に、肝蛭由来の抗原混合物が肝蛭およびマンソン
住血吸虫双方による引続きの感染に対して防御を与える
ことができることを実証した。
【００１７】住血吸虫症およびビルハルチア病は、４０
００年前にエジプト人によって記録された古代の飲料水
媒介伝染病であり、そして今日、第三世界の都市および
都市周辺地域において２億を越える人々を苦しめている
と予想される世界的に周知の健康問題である。ヒトに感
染する３種類の主な住血吸虫は、淡水巻貝によっておよ
び、水中に落とされ且つ宿主皮膚に直接的に貫入しうる
セルカリアと称される自由に泳ぐ幼虫によって伝播され
る。真皮から肺を介して肝門脈系へ移動後、住血吸虫は
細い腸間膜静脈または骨盤静脈中に住むようになり、そ
こにおいてそれぞれの雌は１日に１００個以上の卵を血
流中に生む。組織中にとどまるようになるこれらの卵に
対する宿主の免疫反応は、慢性の衰弱させる、そしてし
ばしば致命的な疾患の大きな原因となる。灌漑計画の拡
大、ダムの建設およびヒト集団の集中は、今日、住血吸
虫感染の分布および激しさを増大させる一因となってい
る。巻貝の管理および化学療法は、決して満足のいくも
のではないが主要な抑制法である。有効なワクチンは、
該疾患を根絶する試みを大いに助ける究極の目的であろ
う。
００年前にエジプト人によって記録された古代の飲料水
媒介伝染病であり、そして今日、第三世界の都市および
都市周辺地域において２億を越える人々を苦しめている
と予想される世界的に周知の健康問題である。ヒトに感
染する３種類の主な住血吸虫は、淡水巻貝によっておよ
び、水中に落とされ且つ宿主皮膚に直接的に貫入しうる
セルカリアと称される自由に泳ぐ幼虫によって伝播され
る。真皮から肺を介して肝門脈系へ移動後、住血吸虫は
細い腸間膜静脈または骨盤静脈中に住むようになり、そ
こにおいてそれぞれの雌は１日に１００個以上の卵を血
流中に生む。組織中にとどまるようになるこれらの卵に
対する宿主の免疫反応は、慢性の衰弱させる、そしてし
ばしば致命的な疾患の大きな原因となる。灌漑計画の拡
大、ダムの建設およびヒト集団の集中は、今日、住血吸
虫感染の分布および激しさを増大させる一因となってい
る。巻貝の管理および化学療法は、決して満足のいくも
のではないが主要な抑制法である。有効なワクチンは、
該疾患を根絶する試みを大いに助ける究極の目的であろ
う。
【００１８】様々な宿主の種は、放射線で弱毒化された
セルカリアによる以前の感染または免疫感作後に、マン
ソン住血吸虫に対して部分的な耐性を生じることがある
（スミサーズ・アンド・デンホッフ（Ｓｍｉｔｈｅｒｓ
＆ Ｄｏｅｎｈｏｆｆ）、１９８２年）。マンソン住
血吸虫に対する実験的免疫感作の可能性を考えることが
許容されてきたこれまでの状況（クレッグ・アンド・ス
ミス（Ｃｌｅｇｇ ＆Ｓｍｉｔｈ）は、この寄生虫に対
する決定的且つ有効なワクチンを死滅ワクチンを用いて
生産する可能性に対する現在の熱意（テンドラー（Ｔｅ
ｎｄｌｅｒ）、１９８７年）に取って代わられた。それ
にもかかわらず、主な限界は依然として、精製され且つ
化学的に同定された寄生虫抗原を用いる大部分の実験の
被験動物において得られた不完全な防御率にある。数人
の著者によって記載され且つスミサーズ、１９８２年に
よって論及されたように、実験的免疫学的予防によって
誘導される防御水準を増大させる要求は一般的な合意で
あった。しかしながら、住血吸虫症に対する有効なワク
チンの開発に十分な動物モデルの確立は、達成するのが
極めて困難であった。その進歩は、防御免疫を媒介する
と考えられる極めて有効な抗原分子の識別および精製に
かかっている（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｍａｎｓｏｎ
ｉ；Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ，Ｍ．テ
ンドラー−メム・インスト・オスワルド・クルース（Ｍ
ｅｍ．Ｉｎｓｔ．Ｏｓｗａｌｄ Ｃｒｕｚ）、リオデ・
ジャネイロ、８２巻、補遺ＩＶ：１２５〜１２８，１９
８７）。
セルカリアによる以前の感染または免疫感作後に、マン
ソン住血吸虫に対して部分的な耐性を生じることがある
（スミサーズ・アンド・デンホッフ（Ｓｍｉｔｈｅｒｓ
＆ Ｄｏｅｎｈｏｆｆ）、１９８２年）。マンソン住
血吸虫に対する実験的免疫感作の可能性を考えることが
許容されてきたこれまでの状況（クレッグ・アンド・ス
ミス（Ｃｌｅｇｇ ＆Ｓｍｉｔｈ）は、この寄生虫に対
する決定的且つ有効なワクチンを死滅ワクチンを用いて
生産する可能性に対する現在の熱意（テンドラー（Ｔｅ
ｎｄｌｅｒ）、１９８７年）に取って代わられた。それ
にもかかわらず、主な限界は依然として、精製され且つ
化学的に同定された寄生虫抗原を用いる大部分の実験の
被験動物において得られた不完全な防御率にある。数人
の著者によって記載され且つスミサーズ、１９８２年に
よって論及されたように、実験的免疫学的予防によって
誘導される防御水準を増大させる要求は一般的な合意で
あった。しかしながら、住血吸虫症に対する有効なワク
チンの開発に十分な動物モデルの確立は、達成するのが
極めて困難であった。その進歩は、防御免疫を媒介する
と考えられる極めて有効な抗原分子の識別および精製に
かかっている（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｍａｎｓｏｎ
ｉ；Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ，Ｍ．テ
ンドラー−メム・インスト・オスワルド・クルース（Ｍ
ｅｍ．Ｉｎｓｔ．Ｏｓｗａｌｄ Ｃｒｕｚ）、リオデ・
ジャネイロ、８２巻、補遺ＩＶ：１２５〜１２８，１９
８７）。
【００１９】住血吸虫に対する防御免疫を媒介する抗原
の追及に関する従来の研究において、本発明者は、リン
酸緩衝溶液中の生きていて且つ新たに灌流されたマンソ
ン住血吸虫の成体蠕虫のインキュベーションの際の初期
に放出された住血吸虫成分（ＳＥと称する）の複合混合
物の使用について報告した（テンドラー・アンド・スカ
ピン（Ｔｅｎｄｌｅｒ ＆ Ｓｃａｐｉｎ）、１９７９
年；コーン（Ｋｏｈｎ）ら、１９７９年）。セルカリア
威染に対する防御をワクチンとして用いて達成する試み
に集中して、マンソン住血吸虫感染に対してそれぞれ十
分に感受性で且つ部分的に耐性であることが知られてい
るＳＷマウスおよびＮＺウサギの２種類の異なる異種交
配された動物宿主での実験モデルを設計した。
の追及に関する従来の研究において、本発明者は、リン
酸緩衝溶液中の生きていて且つ新たに灌流されたマンソ
ン住血吸虫の成体蠕虫のインキュベーションの際の初期
に放出された住血吸虫成分（ＳＥと称する）の複合混合
物の使用について報告した（テンドラー・アンド・スカ
ピン（Ｔｅｎｄｌｅｒ ＆ Ｓｃａｐｉｎ）、１９７９
年；コーン（Ｋｏｈｎ）ら、１９７９年）。セルカリア
威染に対する防御をワクチンとして用いて達成する試み
に集中して、マンソン住血吸虫感染に対してそれぞれ十
分に感受性で且つ部分的に耐性であることが知られてい
るＳＷマウスおよびＮＺウサギの２種類の異なる異種交
配された動物宿主での実験モデルを設計した。
【００２０】ニュージーランドウサギのマンソン住血吸
虫モデルにおいて、感染後の長時間の寄生虫の数および
寸法並びに雄／雌比率の点から、かなり均一の成体蠕虫
量を用いる経皮感染の確実なパターンを確立することは
可能であった（テンドラー、１９８２年、１９８５年、
１９８６年）。最近の資料は、マンソン住血吸虫の実験
用宿主としてウサギを用いることが、該疾患に関する新
規の免疫モデルとなりうることを示唆している（アルメ
イダ（Ａｌｍｅｉｄａ）ら、１９８７年）。
虫モデルにおいて、感染後の長時間の寄生虫の数および
寸法並びに雄／雌比率の点から、かなり均一の成体蠕虫
量を用いる経皮感染の確実なパターンを確立することは
可能であった（テンドラー、１９８２年、１９８５年、
１９８６年）。最近の資料は、マンソン住血吸虫の実験
用宿主としてウサギを用いることが、該疾患に関する新
規の免疫モデルとなりうることを示唆している（アルメ
イダ（Ａｌｍｅｉｄａ）ら、１９８７年）。
【００２１】ウサギにおいてＳＥ混合物を用いて行なわ
れた免疫感作実験では、試験投与によって極めて高水準
の防御がもたらされた（スカピンら、１９８０年；テン
ドラー、１９８０年；テンドラーら、１９８２年）（マ
ンソン住血吸虫のブラジル系統ＬＥからの同数および同
プールの活性セルカリアを用いて同時に試験投与された
場合、免疫感作動物においては、正常対照に匹敵する性
別および年齢と比較して９０％平均の蠕虫量減少）。更
に、ＳＥで免疫感作されたＳＷマウスは、正常セルカリ
アを用いる試験投与に対して有意に防御され且つ致死感
染に対して充分に耐性であることを示した（テンドラ
ー、１９８６年）。耐性を測定するために、ワクチン注
射され且つ試験投与された動物および対照を平行して、
成体寄生虫量の決定用に肝および腸間膜灌流に供する。
防御率は、ワクチン注射された動物に対する対照から回
収された寄生虫数の差によって計算される（テンドラー
ら、１８２）。
れた免疫感作実験では、試験投与によって極めて高水準
の防御がもたらされた（スカピンら、１９８０年；テン
ドラー、１９８０年；テンドラーら、１９８２年）（マ
ンソン住血吸虫のブラジル系統ＬＥからの同数および同
プールの活性セルカリアを用いて同時に試験投与された
場合、免疫感作動物においては、正常対照に匹敵する性
別および年齢と比較して９０％平均の蠕虫量減少）。更
に、ＳＥで免疫感作されたＳＷマウスは、正常セルカリ
アを用いる試験投与に対して有意に防御され且つ致死感
染に対して充分に耐性であることを示した（テンドラ
ー、１９８６年）。耐性を測定するために、ワクチン注
射され且つ試験投与された動物および対照を平行して、
成体寄生虫量の決定用に肝および腸間膜灌流に供する。
防御率は、ワクチン注射された動物に対する対照から回
収された寄生虫数の差によって計算される（テンドラー
ら、１８２）。
【００２２】異なる生活環段階の寄生虫に対して生じた
抗体が、好酸球または補体依存細胞毒性検定において有
効である（グルツィク（Ｇｒｚｙｃｈ）ら、１９８２
年；スミスら、１９８２年）というインビトロの根拠を
考慮して、論証しうる免疫宿主からの血清によって認識
された抗原の特性決定は、防御免疫に関係した抗原分子
を同定するのに用いられる（ビックル（Ｂｉｃｋｌｅ）
ら、１９８６年；ホロヴィッツ・アンド・アーノン（Ｈ
ｏｒｏｗｉｔｚ ＆ Ａｒｎｏｎ）、１９８５年）。ウ
ェスターンブロット実験は、ＳＥワクチン注射されたウ
サギの抗体応答を分析するために着手された。同様のス
キームによって免疫感作されたウサギ由来の抗血清のパ
ネルを用いてＳＥ抗原をプローブして（ＳＥ−ＦＣ
Ａ）、著者は、イムノプロットにおいてこれらの個体の
ＳＥ抗原の２種類の独特の認識パータンを実証すること
ができた。興味深いことに、若干のＳＥ抗原は、ほぼ完
全に防御されたウサギからの抗血清によってのみ限定的
に認識された。この知見により、著者は、ＳＥ中の抗原
の２種類のサブセット、すなわち、個々のウサギ抗血清
全部に共通の一つと、高度に防御された動物に限定され
る第二サブセットとを同定することができた。これらの
２種類のパターンをそれぞれ低および高防御パターンと
称し且つ「判別」抗体として用いた。同様の免疫感作ス
キームに対して（おそらくは、異種交配された集団にお
いて生じることが予想される個々の変動によって）「判
別的に」応答したウサギからの多クローン性抗体による
ＳＥ成分のこれらの２種類の認識パターンを利用して、
これらの血清を用いてｃＤＮＡライブラリーをスクリー
ニングする計画を行なった。実験およびヒト住血吸虫症
双方における防御応答の臨界的機序についての不完全な
理解に拘束されながら、他のものによって採用されたス
クリーニング法は、しばしば、若干の特性決定されてい
ない抗原に対して向けられている感染ヒト血清（風土病
地域の「推定上の」免疫若しくは「感受性」個体［カー
ター・アンド・コリー（Ｃａｒｔｅｒ ＆ Ｃｏｌｌｅ
ｙ）、１９８６年］または免疫感作動物からの選択され
た単クローン性若しくは多クローン性血清［ラナール
（Ｌａｎａｒ）ら、１９８６年；バルール（Ｂａｌｌｏ
ｕｌ）ら、１９８７年］）の使用を必要とした。
抗体が、好酸球または補体依存細胞毒性検定において有
効である（グルツィク（Ｇｒｚｙｃｈ）ら、１９８２
年；スミスら、１９８２年）というインビトロの根拠を
考慮して、論証しうる免疫宿主からの血清によって認識
された抗原の特性決定は、防御免疫に関係した抗原分子
を同定するのに用いられる（ビックル（Ｂｉｃｋｌｅ）
ら、１９８６年；ホロヴィッツ・アンド・アーノン（Ｈ
ｏｒｏｗｉｔｚ ＆ Ａｒｎｏｎ）、１９８５年）。ウ
ェスターンブロット実験は、ＳＥワクチン注射されたウ
サギの抗体応答を分析するために着手された。同様のス
キームによって免疫感作されたウサギ由来の抗血清のパ
ネルを用いてＳＥ抗原をプローブして（ＳＥ−ＦＣ
Ａ）、著者は、イムノプロットにおいてこれらの個体の
ＳＥ抗原の２種類の独特の認識パータンを実証すること
ができた。興味深いことに、若干のＳＥ抗原は、ほぼ完
全に防御されたウサギからの抗血清によってのみ限定的
に認識された。この知見により、著者は、ＳＥ中の抗原
の２種類のサブセット、すなわち、個々のウサギ抗血清
全部に共通の一つと、高度に防御された動物に限定され
る第二サブセットとを同定することができた。これらの
２種類のパターンをそれぞれ低および高防御パターンと
称し且つ「判別」抗体として用いた。同様の免疫感作ス
キームに対して（おそらくは、異種交配された集団にお
いて生じることが予想される個々の変動によって）「判
別的に」応答したウサギからの多クローン性抗体による
ＳＥ成分のこれらの２種類の認識パターンを利用して、
これらの血清を用いてｃＤＮＡライブラリーをスクリー
ニングする計画を行なった。実験およびヒト住血吸虫症
双方における防御応答の臨界的機序についての不完全な
理解に拘束されながら、他のものによって採用されたス
クリーニング法は、しばしば、若干の特性決定されてい
ない抗原に対して向けられている感染ヒト血清（風土病
地域の「推定上の」免疫若しくは「感受性」個体［カー
ター・アンド・コリー（Ｃａｒｔｅｒ ＆ Ｃｏｌｌｅ
ｙ）、１９８６年］または免疫感作動物からの選択され
た単クローン性若しくは多クローン性血清［ラナール
（Ｌａｎａｒ）ら、１９８６年；バルール（Ｂａｌｌｏ
ｕｌ）ら、１９８７年］）の使用を必要とした。
【００２３】可能な防御ＳＥ成分の分子クローニングに
対する最初の試みにおいて、クリンカート博士（Ｄｒｓ
Ｋｌｉｎｋｅｒｔ）、ハイデルベルグ大学およびドネ
ルソン（Ｄｏｎｎｅｌｓｏｎ）／ヘンクル（Ｈｅｎｋｌ
ｅ）、アイオワ大学によってそれぞれ構築されたマンソ
ン住血吸虫および日本住血吸虫（Ｓ．ｊａｐｏｎｉｃｕ
ｍ）の成体蠕虫全体からの２種類のｃＤＮＡライブラリ
ーを、判別スクリーニングによって二重フィルターを用
いてスクリーニングした。クローンの２種類の異なるセ
ットが検出されたそれらのイムノブロットの結果に関し
て比較しうると考えられるが、それはおそらく感受性で
且つ耐性のウサギ抗ＳＦ血清による認識の相違に対応す
る。ＳＥ成分の識別を目的とする更に別の実験におい
て、本発明者は、イムノブロットにおいて、精製住血吸
虫パラミオシン（Ａ．シェア（Ｓｈｅｒ）博士、ＮＩＨ
によって快く提供された）に対するウサギ多クローン性
抗ＳＥ血清（高および低防御）とウサギ抗血清と比較し
た。このタンパク質は、Ｍｒ（ｘ１０−３）９５および
７８（ピアス（Ｐｅａｒｃｅ）ら、１９８６年）の２種
類の主要分解産物へのタンパク質分解に対して感受性で
あることが示されたＭｒ（ｘ１０−３）９７の、同系交
配マウスにおけるマンソン住血吸虫試験投与感染に対し
て部分的に防御する最近定義された分子である（ラナー
ル（Ｌａｎａｒ）ら、１９８６年）。９７／９５／７８
ｋＤ複合体は、高および低防御抗ＳＨ血清および単一特
異性抗パラミオシン血清双方によって認識された。
「高」防御抗ＳＥ血清は、パラミオシンに加えて、防御
活性および免疫学的役割に関して十分に特性決定され且
つ評価される状態で残っている他のポリペプチドを認識
した。ＳＥの成分としてのパラミオシンの知見は、パラ
ミオシンに関して実証されたのと同様に（ピアス（Ｐｅ
ａｒｃｅ）ら、１９８６年）、寄生虫表面上および筋肉
層間（メンドンサ（Ｍｅｎｄｏｎｃａ）ら、１９８７
年）の卵と反応したウサギ抗ＳＥ血清を用いて成体住血
吸虫の段階で実施された従来の間接免疫蛍光法実験を強
化する。この知見は、更に、前述のように実施されたｃ
ＤＮＡライブラリーの免疫スクリーニングの結果に平行
していた。再度、一般的パラミオシンクローンを抗パラ
ミオシンおよび抗ＳＥ血清双方によって単離し、特別の
クローンは後者のウサギ血清（高防御）によってのみ認
識された。低分子量の他のＳＥ成分の内、住血吸虫症の
診断に可能な候補者として記載され（クリンカートら、
１９８７年）且つ住血吸虫消化管中にあるプロテアーゼ
として最近同定された３１／３２ＫＤダブレットも同定
された（クリンカートら、１９８８年）。食塩水抽出物
中で同定されたこれらの抗原および他のものは、検査さ
れた場合に極めて低い防御を示した。
対する最初の試みにおいて、クリンカート博士（Ｄｒｓ
Ｋｌｉｎｋｅｒｔ）、ハイデルベルグ大学およびドネ
ルソン（Ｄｏｎｎｅｌｓｏｎ）／ヘンクル（Ｈｅｎｋｌ
ｅ）、アイオワ大学によってそれぞれ構築されたマンソ
ン住血吸虫および日本住血吸虫（Ｓ．ｊａｐｏｎｉｃｕ
ｍ）の成体蠕虫全体からの２種類のｃＤＮＡライブラリ
ーを、判別スクリーニングによって二重フィルターを用
いてスクリーニングした。クローンの２種類の異なるセ
ットが検出されたそれらのイムノブロットの結果に関し
て比較しうると考えられるが、それはおそらく感受性で
且つ耐性のウサギ抗ＳＦ血清による認識の相違に対応す
る。ＳＥ成分の識別を目的とする更に別の実験におい
て、本発明者は、イムノブロットにおいて、精製住血吸
虫パラミオシン（Ａ．シェア（Ｓｈｅｒ）博士、ＮＩＨ
によって快く提供された）に対するウサギ多クローン性
抗ＳＥ血清（高および低防御）とウサギ抗血清と比較し
た。このタンパク質は、Ｍｒ（ｘ１０−３）９５および
７８（ピアス（Ｐｅａｒｃｅ）ら、１９８６年）の２種
類の主要分解産物へのタンパク質分解に対して感受性で
あることが示されたＭｒ（ｘ１０−３）９７の、同系交
配マウスにおけるマンソン住血吸虫試験投与感染に対し
て部分的に防御する最近定義された分子である（ラナー
ル（Ｌａｎａｒ）ら、１９８６年）。９７／９５／７８
ｋＤ複合体は、高および低防御抗ＳＨ血清および単一特
異性抗パラミオシン血清双方によって認識された。
「高」防御抗ＳＥ血清は、パラミオシンに加えて、防御
活性および免疫学的役割に関して十分に特性決定され且
つ評価される状態で残っている他のポリペプチドを認識
した。ＳＥの成分としてのパラミオシンの知見は、パラ
ミオシンに関して実証されたのと同様に（ピアス（Ｐｅ
ａｒｃｅ）ら、１９８６年）、寄生虫表面上および筋肉
層間（メンドンサ（Ｍｅｎｄｏｎｃａ）ら、１９８７
年）の卵と反応したウサギ抗ＳＥ血清を用いて成体住血
吸虫の段階で実施された従来の間接免疫蛍光法実験を強
化する。この知見は、更に、前述のように実施されたｃ
ＤＮＡライブラリーの免疫スクリーニングの結果に平行
していた。再度、一般的パラミオシンクローンを抗パラ
ミオシンおよび抗ＳＥ血清双方によって単離し、特別の
クローンは後者のウサギ血清（高防御）によってのみ認
識された。低分子量の他のＳＥ成分の内、住血吸虫症の
診断に可能な候補者として記載され（クリンカートら、
１９８７年）且つ住血吸虫消化管中にあるプロテアーゼ
として最近同定された３１／３２ＫＤダブレットも同定
された（クリンカートら、１９８８年）。食塩水抽出物
中で同定されたこれらの抗原および他のものは、検査さ
れた場合に極めて低い防御を示した。
【００２４】化学的規定培地（ＰＢＳ）中の新たに灌流
された住血吸虫のインキュベーションは、生きている成
体蠕虫から初期に放出された抗原（具体的には、排出／
分泌産物および外皮成分）の抽出を目的としていた。こ
の計画は、理論的には適切な機能抗原を枯渇させること
ができるマンソン住血吸虫の種々の粗抽出物によって住
血吸虫感染に対する一貫した耐性を誘導する前者の失敗
した試みを考慮して採用された。この前提は、死滅した
寄生虫の使用に由来する一般的に採用された抽出方法に
よって主に影響を受けた。実際に、ＦＣＡ（優先的アジ
ュバントとして）中に乳化され且つ皮下／皮内経路によ
って投与されるＳＥを用いて、本発明者は、マンソン住
血吸虫感染に対する２種類の実験動物宿主において高く
且つ長期間の防御を達成している。防御試験において並
外れたウサギモデルを使用する理論的根拠は、部分的に
耐性の宿主における潜在的防御および分離した抗原（感
受性宿主において更に検査される）を最初に識別するた
めであったが、ウサギは既知の有力な抗体生産者である
ので、したがって、寄生虫を死滅させる免疫応答および
エフェクター機序を「増幅」させることができると考え
られる。
された住血吸虫のインキュベーションは、生きている成
体蠕虫から初期に放出された抗原（具体的には、排出／
分泌産物および外皮成分）の抽出を目的としていた。こ
の計画は、理論的には適切な機能抗原を枯渇させること
ができるマンソン住血吸虫の種々の粗抽出物によって住
血吸虫感染に対する一貫した耐性を誘導する前者の失敗
した試みを考慮して採用された。この前提は、死滅した
寄生虫の使用に由来する一般的に採用された抽出方法に
よって主に影響を受けた。実際に、ＦＣＡ（優先的アジ
ュバントとして）中に乳化され且つ皮下／皮内経路によ
って投与されるＳＥを用いて、本発明者は、マンソン住
血吸虫感染に対する２種類の実験動物宿主において高く
且つ長期間の防御を達成している。防御試験において並
外れたウサギモデルを使用する理論的根拠は、部分的に
耐性の宿主における潜在的防御および分離した抗原（感
受性宿主において更に検査される）を最初に識別するた
めであったが、ウサギは既知の有力な抗体生産者である
ので、したがって、寄生虫を死滅させる免疫応答および
エフェクター機序を「増幅」させることができると考え
られる。
【００２５】寄生虫を死滅させる機能的に適切なＳＥ防
御成分、部位および機序並びに防御マーカーの識別を目
的とするワクチン注射された動物における誘導免疫応答
の研究は、近年において本発明者の研究の中心であった
が、ＳＥの分子組成、更にはその防御成分の識別および
単離に関する情報は最近まで入手可能であった。
御成分、部位および機序並びに防御マーカーの識別を目
的とするワクチン注射された動物における誘導免疫応答
の研究は、近年において本発明者の研究の中心であった
が、ＳＥの分子組成、更にはその防御成分の識別および
単離に関する情報は最近まで入手可能であった。
【００２６】ルイジ・メシネオ・アンド・マウロ・スカ
ーピン（Ｌｕｉｇｉ Ｍｅｓｓｉｎｅｏ ＆ Ｍａｕｒ
ｏ Ｓｃａｒｐｉｎ）の名義で１９８３年８月２日発行
の米国特許第４，３９６，０００号明細書（削除された
１９８６年２月１１日発行の再審証明書４６１ Ｂ１
４，３９６，０００号による）は、０．１５Ｍ塩化ナト
リウム−リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．８）中のイ
ンキュベーションによって得られた、タンパク質、炭水
化物および核酸および／または後者成分の副生成物を含
み且つＧ−１００およびＧ−２００セファデックスカラ
ム中のゲルクロマトグラフィーによって４つの主要画分
中に分解する成体マンソン住血吸虫蠕虫の抽出物を記載
した。ウサギ抗全抽出物血清による免疫拡散試験は、画
分ＩおよびＩＩ並びにＩＩＩまたはＩＶによる一方に対
応する３種類の沈殿ラインを示した。この全抽出物によ
って免疫感作されたウサギは、試験投与感染に対して完
全にまたは部分的に（少なくとも７７％）耐性であるこ
とが分かった。食塩水抽出物抗原性物質は、住血吸虫症
および他の住血吸虫感染の治療および免疫感作に有効な
ワクチンであった。
ーピン（Ｌｕｉｇｉ Ｍｅｓｓｉｎｅｏ ＆ Ｍａｕｒ
ｏ Ｓｃａｒｐｉｎ）の名義で１９８３年８月２日発行
の米国特許第４，３９６，０００号明細書（削除された
１９８６年２月１１日発行の再審証明書４６１ Ｂ１
４，３９６，０００号による）は、０．１５Ｍ塩化ナト
リウム−リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．８）中のイ
ンキュベーションによって得られた、タンパク質、炭水
化物および核酸および／または後者成分の副生成物を含
み且つＧ−１００およびＧ−２００セファデックスカラ
ム中のゲルクロマトグラフィーによって４つの主要画分
中に分解する成体マンソン住血吸虫蠕虫の抽出物を記載
した。ウサギ抗全抽出物血清による免疫拡散試験は、画
分ＩおよびＩＩ並びにＩＩＩまたはＩＶによる一方に対
応する３種類の沈殿ラインを示した。この全抽出物によ
って免疫感作されたウサギは、試験投与感染に対して完
全にまたは部分的に（少なくとも７７％）耐性であるこ
とが分かった。食塩水抽出物抗原性物質は、住血吸虫症
および他の住血吸虫感染の治療および免疫感作に有効な
ワクチンであった。
【００２７】前述の通知書は発明者の二つの論文に基い
ており且つここでは本発明の原理として用いられた。本
発明の背景に対応する大部分のデータの内、最も最近の
データは、Ｓｍ−１４として同定されたＳＥ誘導成分の
クローニングおよび配列決定であった。
ており且つここでは本発明の原理として用いられた。本
発明の背景に対応する大部分のデータの内、最も最近の
データは、Ｓｍ−１４として同定されたＳＥ誘導成分の
クローニングおよび配列決定であった。
【００２８】ごく最近の公開された研究は、「１４ｋＤ
ａマンソン住血吸虫ポリペプチドは脂肪酸結合タンパク
質の遺伝子ファミリーと相同である−１９９１年５月５
日発行のＴｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇ
ｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−２６６巻，１３号，８
４７７〜８４５４頁；Ｄ．モサー（Ｍｏｓｅｒ）、Ｍ．
テンドラー（Ｔｅｎｄｌｅｒ）、Ｇ．グリフィス（Ｇｒ
ｉｆｆｉｔｈｓ）およびマックィーン・クリンカート
（Ｍｃ−Ｑｕｅｎ Ｋｌｉｎｋｅｒｔ）」である。この
研究は、Ｓｍ−１４構造に対して脂質を結合するタンパ
ク質としてのＳｍ−１４の遺伝子の配列決定および機能
的活性の実証を記載している。
ａマンソン住血吸虫ポリペプチドは脂肪酸結合タンパク
質の遺伝子ファミリーと相同である−１９９１年５月５
日発行のＴｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇ
ｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−２６６巻，１３号，８
４７７〜８４５４頁；Ｄ．モサー（Ｍｏｓｅｒ）、Ｍ．
テンドラー（Ｔｅｎｄｌｅｒ）、Ｇ．グリフィス（Ｇｒ
ｉｆｆｉｔｈｓ）およびマックィーン・クリンカート
（Ｍｃ−Ｑｕｅｎ Ｋｌｉｎｋｅｒｔ）」である。この
研究は、Ｓｍ−１４構造に対して脂質を結合するタンパ
ク質としてのＳｍ−１４の遺伝子の配列決定および機能
的活性の実証を記載している。
【００２９】Ｓｍ−１４と称されるマンソン住血吸虫タ
ンパク質をコードしている完全なヌクレオチド配列は、
大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）中のバク
テリオファージラムダｇｔＩＩにおいて増殖したｃＤＮ
Ａクローンから決定された。１４．８ｋＤａタンパク質
は、疎水性リガンドを結合する一連の関連ポリペプチド
と有意の相同性を有する。サイトゾルタンパク質のこの
群のメンバーは、本来、長鎖脂肪酸に対するそれらの親
和性に基いて識別された。精製された組換え体タンパク
質は、１６のＮ末端アミノ酸を欠失している突然変異体
とは対照的に、脂肪酸に対する親和性を示した。完全な
ヌクレオチド配列は、ヌクレオチド１２３〜１２５に位
置した開始トリプレットＡＴＧで開始する読取り枠とし
て記載することができる。コーディング領域は、５２１
位で終わる３９９ヌクレオチドを含む。１３３アミノ酸
残基のタンパク質は、配列基準で計算された１４．８４
７ｋＤａの分子質量を有する。
ンパク質をコードしている完全なヌクレオチド配列は、
大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）中のバク
テリオファージラムダｇｔＩＩにおいて増殖したｃＤＮ
Ａクローンから決定された。１４．８ｋＤａタンパク質
は、疎水性リガンドを結合する一連の関連ポリペプチド
と有意の相同性を有する。サイトゾルタンパク質のこの
群のメンバーは、本来、長鎖脂肪酸に対するそれらの親
和性に基いて識別された。精製された組換え体タンパク
質は、１６のＮ末端アミノ酸を欠失している突然変異体
とは対照的に、脂肪酸に対する親和性を示した。完全な
ヌクレオチド配列は、ヌクレオチド１２３〜１２５に位
置した開始トリプレットＡＴＧで開始する読取り枠とし
て記載することができる。コーディング領域は、５２１
位で終わる３９９ヌクレオチドを含む。１３３アミノ酸
残基のタンパク質は、配列基準で計算された１４．８４
７ｋＤａの分子質量を有する。
【００３０】Ｓｍ−１４は、下記のアミノ酸配列を表示
することによって特性決定される。 更に、モサー，Ｄ．らは、実験動物に対して免疫を与え
る場合にＳｍ１４はタンパク質混合物中においてどの役
割を果たしているか、そしてそれが寄生虫に対する有効
な免疫学的攻撃に適切な抗原であるかどうかを評価する
ことが望ましいであろうと開示している。
することによって特性決定される。 更に、モサー，Ｄ．らは、実験動物に対して免疫を与え
る場合にＳｍ１４はタンパク質混合物中においてどの役
割を果たしているか、そしてそれが寄生虫に対する有効
な免疫学的攻撃に適切な抗原であるかどうかを評価する
ことが望ましいであろうと開示している。
【００３１】プレッツ，Ｊ．Ｒ．ら、Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＰａｒａｓｉｔｏｌｏ
ｇｙ，７４巻，４号，１９９２年６月は、免疫学的予防
Ｆｈ１２抗原に対する抗血清に対して交差反応性である
ポリペプチドが、Ｓｍ１４と表わされた１４．８ｋＤａ
マンソン住血吸虫脂肪酸結合タンパク質（モサーら、１
９９１年）と有意のアミノ酸配列相同性を有することを
開示している。更に、Ｆｈ１２は、住血吸虫症および肝
蛭症双方の予防に有力な免疫原であり且つ免疫学的予防
分子候補者（ヒリアー、１９８５年、ヒリアーら、１９
８７年）であり、更にはヒト肝蛭症における有用な免疫
学的診断マーカーであること（ヒリアーら、１９９２
年）、そして著者が、Ｆｈ１５エピトープサブセットお
よびサブセット組合せを含む組換え体抗原標品の発生を
追跡していたことが開示されている。Ｆｈ１５はＦｈ１
２と同様のタンパク質でありうる。
ｏｆ ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＰａｒａｓｉｔｏｌｏ
ｇｙ，７４巻，４号，１９９２年６月は、免疫学的予防
Ｆｈ１２抗原に対する抗血清に対して交差反応性である
ポリペプチドが、Ｓｍ１４と表わされた１４．８ｋＤａ
マンソン住血吸虫脂肪酸結合タンパク質（モサーら、１
９９１年）と有意のアミノ酸配列相同性を有することを
開示している。更に、Ｆｈ１２は、住血吸虫症および肝
蛭症双方の予防に有力な免疫原であり且つ免疫学的予防
分子候補者（ヒリアー、１９８５年、ヒリアーら、１９
８７年）であり、更にはヒト肝蛭症における有用な免疫
学的診断マーカーであること（ヒリアーら、１９９２
年）、そして著者が、Ｆｈ１５エピトープサブセットお
よびサブセット組合せを含む組換え体抗原標品の発生を
追跡していたことが開示されている。Ｆｈ１５はＦｈ１
２と同様のタンパク質でありうる。
【００３２】それにもかかわらず、（モサー，Ｄ．らお
よびプレッツ，Ｊ．Ｒ．らによる）本発明に最も密接に
関係した研究でさえも、実験動物に対して免疫を与える
場合のタンパク質混合物ＳＥ中においてＳｍ１４が果た
している役割およびそれが住血吸虫または肝蛭などの他
の蠕虫による感染に対する有効な防御抗原であるかどう
かを評価していなかった。
よびプレッツ，Ｊ．Ｒ．らによる）本発明に最も密接に
関係した研究でさえも、実験動物に対して免疫を与える
場合のタンパク質混合物ＳＥ中においてＳｍ１４が果た
している役割およびそれが住血吸虫または肝蛭などの他
の蠕虫による感染に対する有効な防御抗原であるかどう
かを評価していなかった。
【００３３】本発明は、Ｓｍ１４が、マンソン住血吸虫
および肝蛭のどちらかによる感染に対する実験動物にお
ける組換え体での高水準の防御免疫を刺激しうるＳＥの
極めて活性の防御成分であることを証明した従来公開さ
れた研究を継続する結果として得られた。
および肝蛭のどちらかによる感染に対する実験動物にお
ける組換え体での高水準の防御免疫を刺激しうるＳＥの
極めて活性の防御成分であることを証明した従来公開さ
れた研究を継続する結果として得られた。
【００３４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、蠕虫
感染に対する防御抗原として定義された分子Ｓｍ１４で
ある。
感染に対する防御抗原として定義された分子Ｓｍ１４で
ある。
【００３５】本発明のもう一つの目的は、Ｓｍ１４の組
換え体であるｒＳｍ１４である。
換え体であるｒＳｍ１４である。
【００３６】本発明のもう一つの目的は、ウシ、ヤギお
よびヒツジにおいて肝蛭によって引起こされた感染に対
するワクチンである。
よびヒツジにおいて肝蛭によって引起こされた感染に対
するワクチンである。
【００３７】本発明の更にもう一つの目的は、ヒトおよ
び動物における感染および疾患に応答性である、住血吸
虫および住血吸虫属の他の種全部によって引起こされた
感染に対するワクチンである。
び動物における感染および疾患に応答性である、住血吸
虫および住血吸虫属の他の種全部によって引起こされた
感染に対するワクチンである。
【００３８】本発明の更に別の目的は、医学的および獣
医学的に関心を呼ぶ蠕虫の全種によって引起こされた感
染に対するワクチンである。
医学的に関心を呼ぶ蠕虫の全種によって引起こされた感
染に対するワクチンである。
【００３９】本発明の更に別の目的は、住血吸虫症およ
び肝蛭症の診断薬である。
び肝蛭症の診断薬である。
【００４０】
【課題を解決するための手段】これらの目的は、ヒトお
よび動物の蠕虫感染に対して防御免疫を与える抗原並び
に獣医およびヒトの医学的関心を呼ぶ蠕虫学的疾患の免
疫学的予防用の予防接種法を提供することによって、更
には、免疫学的診断薬として作用する抗原を提供するこ
とによって達成することができる。
よび動物の蠕虫感染に対して防御免疫を与える抗原並び
に獣医およびヒトの医学的関心を呼ぶ蠕虫学的疾患の免
疫学的予防用の予防接種法を提供することによって、更
には、免疫学的診断薬として作用する抗原を提供するこ
とによって達成することができる。
【００４１】本発明により、該抗原は、実験動物蠕虫感
染、特に、マンソン住血吸虫および肝蛭感染において防
御免疫を刺激する能力を有する、マンソン住血吸虫由来
のタンパク質Ｓｍ１４から成る。
染、特に、マンソン住血吸虫および肝蛭感染において防
御免疫を刺激する能力を有する、マンソン住血吸虫由来
のタンパク質Ｓｍ１４から成る。
【００４２】更に、本発明は、バクテリオファージＴ７
のキャプシドタンパク質との融合タンパク質である、Ｓ
ｍ１４の組換え体ｒＳｍ１４を含む。
のキャプシドタンパク質との融合タンパク質である、Ｓ
ｍ１４の組換え体ｒＳｍ１４を含む。
【００４３】発明の詳細な説明ヒトおよび様々な動物を
冒す様々な寄生虫の種により引き起こされる病気の免疫
学的予防に同じワクチン注射用抗原を使用することによ
るヒトの住血吸虫種に対するワクチンを開発する方法が
下記の工程により説明される：−動物およびヒトの両方
の病気を高度に予防する共通の交差反応性抗原（本発明
の好ましい実施態様による場合はＳｍ−１４）を単離す
る工程；−感染および／または該病気を引き起こす寄生
虫の実験用の確かな宿主で動物の病気の免疫学的予防の
ためのワクチンとしてこの抗原を試験する工程；−動物
の宿主、すなわち家畜の反すう動物のワクチン注射から
得られた情報を分析し、例えば毒物学および病理学など
一定のヒトの病気に対するワクチンの最終的開発につい
て関連するあらゆる質問および予め必要な条件に焦点を
合わせる工程。本発明の方法を使用して、家畜およびヒ
トの両方の２種類の寄生虫病を予防するワクチンとして
同時に非常に有効な抗原を見つけることが可能である。
本発明の好ましい実施態様によると、家畜とヒトの両方
の寄生虫病はそれぞれ肝ひる症と住血吸虫症であり、特
にヒトおよび様々な動物種を冒すじゅ虫（腸内寄生虫）
による病気もある。
冒す様々な寄生虫の種により引き起こされる病気の免疫
学的予防に同じワクチン注射用抗原を使用することによ
るヒトの住血吸虫種に対するワクチンを開発する方法が
下記の工程により説明される：−動物およびヒトの両方
の病気を高度に予防する共通の交差反応性抗原（本発明
の好ましい実施態様による場合はＳｍ−１４）を単離す
る工程；−感染および／または該病気を引き起こす寄生
虫の実験用の確かな宿主で動物の病気の免疫学的予防の
ためのワクチンとしてこの抗原を試験する工程；−動物
の宿主、すなわち家畜の反すう動物のワクチン注射から
得られた情報を分析し、例えば毒物学および病理学など
一定のヒトの病気に対するワクチンの最終的開発につい
て関連するあらゆる質問および予め必要な条件に焦点を
合わせる工程。本発明の方法を使用して、家畜およびヒ
トの両方の２種類の寄生虫病を予防するワクチンとして
同時に非常に有効な抗原を見つけることが可能である。
本発明の好ましい実施態様によると、家畜とヒトの両方
の寄生虫病はそれぞれ肝ひる症と住血吸虫症であり、特
にヒトおよび様々な動物種を冒すじゅ虫（腸内寄生虫）
による病気もある。
【００４４】複合体ＳＥ混合物中の抗原の一つであるＳ
ｍ−１４は無性生殖され、タンパク質を結合する脂肪酸
および肝ひる抗原のＦｈ１５を有する有意な同族体を示
す。この交差反応性抗原のＳｍ−１４はその組み替え型
ｒＳＭ１４では住血吸虫と肝ひる症の両方を予防する免
疫性を与える。ｒＳＭ１４は上記で定義したようにＴ７
タンパク質の２６０番目の残基とＳｍ１４の最初のメチ
オニン（ＭＥＴ）とをアミノ酸配列で次のように橋掛け
することにより得られたバクテリオファージＴ７キャプ
シドタンパク質の最初の２６０個のアミノ酸と完全なＳ
ｍ１４ポリペブチドとの融合タンパク質である：キャプ
シドタンパク質残基２６０−ＬＥＵ−ＬＥＵ−ＴＨＲ−
ＬＥＵ−ＴＨＲ−ＬＹＳ−ＧＬＹ−ＬＹＳ−ＡＬＡ−Ｌ
ＹＳ−ＳＥＲ−ＡＬＡ−ＧＬＵ−ＬＥＵ−ＧＬＵ−ＰＨ
Ｅ−ＶＡＬ−ＡＳＰ−ＬＥＵ−ＧＬＵ−ＧＬＹ−ＳＥＲ
−ＶＡＬ−Ｓｍ１４．
ｍ−１４は無性生殖され、タンパク質を結合する脂肪酸
および肝ひる抗原のＦｈ１５を有する有意な同族体を示
す。この交差反応性抗原のＳｍ−１４はその組み替え型
ｒＳＭ１４では住血吸虫と肝ひる症の両方を予防する免
疫性を与える。ｒＳＭ１４は上記で定義したようにＴ７
タンパク質の２６０番目の残基とＳｍ１４の最初のメチ
オニン（ＭＥＴ）とをアミノ酸配列で次のように橋掛け
することにより得られたバクテリオファージＴ７キャプ
シドタンパク質の最初の２６０個のアミノ酸と完全なＳ
ｍ１４ポリペブチドとの融合タンパク質である：キャプ
シドタンパク質残基２６０−ＬＥＵ−ＬＥＵ−ＴＨＲ−
ＬＥＵ−ＴＨＲ−ＬＹＳ−ＧＬＹ−ＬＹＳ−ＡＬＡ−Ｌ
ＹＳ−ＳＥＲ−ＡＬＡ−ＧＬＵ−ＬＥＵ−ＧＬＵ−ＰＨ
Ｅ−ＶＡＬ−ＡＳＰ−ＬＥＵ−ＧＬＵ−ＧＬＹ−ＳＥＲ
−ＶＡＬ−Ｓｍ１４．
【００４５】我々は、肝ひる、マンソン住血吸虫ばかり
でなくそのほかの全ての種の住血吸虫およびエキノコッ
クスおよびヒトおよび動物の病気の原因となると推定さ
れる他の寄生虫に対し高度の感染防御を与えるＳｍ−１
４の組み替え型の能力をここに示す。数百の動物に実験
的にワクチン注射を与えて達成された感染防御の程度か
ら、Ｓｍ−１４はＳＥ由来の主要感染防御分子であり、
抗住血吸虫ワクチンおよび抗肝ひるワクチンの両方の志
願者であることが明らかにされた。本発明は実施例によ
り説明されるがこれに限定されるものではない。
でなくそのほかの全ての種の住血吸虫およびエキノコッ
クスおよびヒトおよび動物の病気の原因となると推定さ
れる他の寄生虫に対し高度の感染防御を与えるＳｍ−１
４の組み替え型の能力をここに示す。数百の動物に実験
的にワクチン注射を与えて達成された感染防御の程度か
ら、Ｓｍ−１４はＳＥ由来の主要感染防御分子であり、
抗住血吸虫ワクチンおよび抗肝ひるワクチンの両方の志
願者であることが明らかにされた。本発明は実施例によ
り説明されるがこれに限定されるものではない。
【００４６】
【実施例】実施例１ 組み替え体Ｓｍ−１４を得て、特性を明らかにし、精製
する工程を以下に説明する： 段階１ 感染防御用食塩水抽出物（ＳＥ）から分子のワクチンへ
の推移は以下のように達成された： ａ）ＬＦ、すなわちマンソン住血吸虫λｇｔｌｌｃＤＮ
Ａライブラリーのブラジル株（マンソン住血吸虫のＬＥ
固有株の成虫から調製されたもの）は充分に感染防御さ
れた個体（すなわち、この明細書で既に説明したように
兎と兎の「高度感染防御」血清）由来の免疫性血清の抗
ＳＥで識別された。 ｂ）非常に強力な信号を提供する兎の抗ＳＥ高度感染防
御血清により認められたｃＤＮＡクローンの１種が選ば
れた。 ｃ）その配列および特性化によりＳｍ−１４と名付けら
れた１４−ｋＤａのタンパク質が明らかにされた（ヌク
レオチドおよび推論されたアミノ酸配列はすでにＭｏｓ
ｅｒ，Ｔｅｄｌｅｒらにより公表されている）。ｃＤＮ
Ａクローンを製造する方法の実施例は現在の技術的水準
で説明されている。
する工程を以下に説明する： 段階１ 感染防御用食塩水抽出物（ＳＥ）から分子のワクチンへ
の推移は以下のように達成された： ａ）ＬＦ、すなわちマンソン住血吸虫λｇｔｌｌｃＤＮ
Ａライブラリーのブラジル株（マンソン住血吸虫のＬＥ
固有株の成虫から調製されたもの）は充分に感染防御さ
れた個体（すなわち、この明細書で既に説明したように
兎と兎の「高度感染防御」血清）由来の免疫性血清の抗
ＳＥで識別された。 ｂ）非常に強力な信号を提供する兎の抗ＳＥ高度感染防
御血清により認められたｃＤＮＡクローンの１種が選ば
れた。 ｃ）その配列および特性化によりＳｍ−１４と名付けら
れた１４−ｋＤａのタンパク質が明らかにされた（ヌク
レオチドおよび推論されたアミノ酸配列はすでにＭｏｓ
ｅｒ，Ｔｅｄｌｅｒらにより公表されている）。ｃＤＮ
Ａクローンを製造する方法の実施例は現在の技術的水準
で説明されている。
【００４７】段階２ 有効なベクター系にＳｍ−１４を発現 ＰＤＳ−１４までこれを実施する方法はクローン化され
たｃＤＮＡ配列の同定および結果と共に現在の技術的水
準で説明されており（１４−ｋＤＡマンソン住血吸虫ポ
リペプチドは脂肪酸係合タンパク質の遺伝子族の同族体
である、ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉ
ｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．２６６，Ｎｏ．
１３，５月５日発行、８４４７−８４５４頁、１９９１
年）、参考のためにここに引用する。住血吸虫抽出物で
免疫性を与えられた兎で作られた抗血清は成虫のマンソ
ン住血吸虫ｃＤＮＡライブラリー（前出）を識別するに
使用された。Ｓｍ−１４と表示されたクローンは３回の
免疫スクリーニングの後でプラク精製された。組み替え
体ファージは大腸菌Ｙ１０８９で溶原化され、１２２ｋ
ＤＡのベータガラクトシダーゼ−Ｓｍ−１４融合タンパ
ク質を発現させた。このタンパク質は予備のＳＤＳ−ポ
リアクリルアミド・ゲルの電気泳動により精製され、該
融合タンパク質の抗体は兎で作られた。Ｓｍ−１４につ
いての全体の読みとり枠暗号化を最初の構成体ｐＤＳ−
Ｓｍ−１４からＢａｍｌｌｌおよびＨｉｍｄ１１１を使
って開裂することにより切り取ること。得られたフラグ
メントは同じ酵素で開裂されたｐＧＥＭＥＸ−１（プロ
メガ）に連結された。
たｃＤＮＡ配列の同定および結果と共に現在の技術的水
準で説明されており（１４−ｋＤＡマンソン住血吸虫ポ
リペプチドは脂肪酸係合タンパク質の遺伝子族の同族体
である、ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉ
ｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．２６６，Ｎｏ．
１３，５月５日発行、８４４７−８４５４頁、１９９１
年）、参考のためにここに引用する。住血吸虫抽出物で
免疫性を与えられた兎で作られた抗血清は成虫のマンソ
ン住血吸虫ｃＤＮＡライブラリー（前出）を識別するに
使用された。Ｓｍ−１４と表示されたクローンは３回の
免疫スクリーニングの後でプラク精製された。組み替え
体ファージは大腸菌Ｙ１０８９で溶原化され、１２２ｋ
ＤＡのベータガラクトシダーゼ−Ｓｍ−１４融合タンパ
ク質を発現させた。このタンパク質は予備のＳＤＳ−ポ
リアクリルアミド・ゲルの電気泳動により精製され、該
融合タンパク質の抗体は兎で作られた。Ｓｍ−１４につ
いての全体の読みとり枠暗号化を最初の構成体ｐＤＳ−
Ｓｍ−１４からＢａｍｌｌｌおよびＨｉｍｄ１１１を使
って開裂することにより切り取ること。得られたフラグ
メントは同じ酵素で開裂されたｐＧＥＭＥＸ−１（プロ
メガ）に連結された。
【００４８】段階３ 得られた構造体は次にＴ７ＲＮＡポリメラーゼ・プロモ
ーターの制御の下でＴ７遺伝子１０タンパク質との融合
タンパク質として発現するために枠の中にある遺伝子と
なって、ｌａｃＵＶの制御の下でＴ７ＲＮＡポリメラー
ゼの遺伝子を含有する大腸菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）を形
質転換するために使用された。大腸菌株ＲＬ２１（ＤＥ
３）は組み替え体タンパク質の発現のために使用され
た。大腸菌の他の菌株も既に現在の技術水準にある他の
発現系たとえばＰＤＳ−１４などと共に同じ目的のため
に代わりに使用できる。
ーターの制御の下でＴ７遺伝子１０タンパク質との融合
タンパク質として発現するために枠の中にある遺伝子と
なって、ｌａｃＵＶの制御の下でＴ７ＲＮＡポリメラー
ゼの遺伝子を含有する大腸菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）を形
質転換するために使用された。大腸菌株ＲＬ２１（ＤＥ
３）は組み替え体タンパク質の発現のために使用され
た。大腸菌の他の菌株も既に現在の技術水準にある他の
発現系たとえばＰＤＳ−１４などと共に同じ目的のため
に代わりに使用できる。
【００４９】段階４ 組み替え体プラスミドを含有するコロニーを一晩中成長
させ、ＩＰＴＧ（イソプロピルチオ−β−Ｄ−ガラクト
シド）を添加することにより次の対数増殖期の間にＴ７
ＲＮＡポリメラーゼを発現させた。この工程により予想
分子量４０ｋＤａ（Ｓｍ−１４から１４ｋＤａと遺伝子
１０タンパク質から２６ｋＤａ）を有する融合タンパク
質を発現させた。
させ、ＩＰＴＧ（イソプロピルチオ−β−Ｄ−ガラクト
シド）を添加することにより次の対数増殖期の間にＴ７
ＲＮＡポリメラーゼを発現させた。この工程により予想
分子量４０ｋＤａ（Ｓｍ−１４から１４ｋＤａと遺伝子
１０タンパク質から２６ｋＤａ）を有する融合タンパク
質を発現させた。
【００５０】段階５ 細菌の細胞を遠心分離機（５０００ｒｐｍ／１０分）に
より集めて溶菌緩衝液（５０ｍＭのトリスＨｃｌ，ｐＨ
７．５；２ｍＭのＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢
酸）、１ｍＭのＤＴＴ（ジチオトレイトール）、２ｍｇ
／ｍｌのリゾチーム）に再懸濁させ、氷の上で１５分間
培養する。次に得られた溶菌産物を３０秒間を２回高周
波音により分解し再び遠心分離した。得られたペレット
を洗浄用緩衝液（５０ｍＭのトリスＭｃｌ、ｐＨ７．
５；１０ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＤＴＴ、０．５％の
トリトンｘ−１００）に再懸濁して遠心分離した。
より集めて溶菌緩衝液（５０ｍＭのトリスＨｃｌ，ｐＨ
７．５；２ｍＭのＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢
酸）、１ｍＭのＤＴＴ（ジチオトレイトール）、２ｍｇ
／ｍｌのリゾチーム）に再懸濁させ、氷の上で１５分間
培養する。次に得られた溶菌産物を３０秒間を２回高周
波音により分解し再び遠心分離した。得られたペレット
を洗浄用緩衝液（５０ｍＭのトリスＭｃｌ、ｐＨ７．
５；１０ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＤＴＴ、０．５％の
トリトンｘ−１００）に再懸濁して遠心分離した。
【００５１】段階６ 更にもう１回再懸濁と遠心分離を行った後に最終ペレッ
トを水に再懸濁した。次に、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ドデシ
ル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動）
を実施し、抗原を電気溶出により精製し、使用するまで
−７０゜Ｃから−２００゜Ｃまでの範囲の温度で保存し
た。図１はｒＳｍ１４の精製度と発現の高い効率を示し
ている。ニトロセルロース紙に移された合計のマンソン
住血吸虫ＳＥ抗原と精製されたＳｍ−１４のポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動の分析。レーン１−３のＳＥとＳ
ｍ−１４はそれぞれ１０％と１５％のＳＤＳ−ＰＡＧＥ
に溶解し、青色で着色された。レーン２と４は免疫の吸
着。レーン２はＳＥで免疫性を与えられた兎から得られ
た多クローン性抗血清で精査された。レーン４は兎の抗
Ｓｍ−１４融合蛋白抗血清で精査された。標準分子の低
い標識は図の両側に示されている。以下図２を参照して
Ｓｍ１４の立体的構造を示す。本発明によるＳｍ−１４
の構造のコンピュータ模型製作は結晶構造が既に決定さ
れているタンパク質を有するＳｍ−１４の周知の高度な
同族関係に基づいてなされている。これはコンピュータ
製作により作られるＳｍ−１４の詳細で信頼できる立体
的構造を与える。
トを水に再懸濁した。次に、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ドデシ
ル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動）
を実施し、抗原を電気溶出により精製し、使用するまで
−７０゜Ｃから−２００゜Ｃまでの範囲の温度で保存し
た。図１はｒＳｍ１４の精製度と発現の高い効率を示し
ている。ニトロセルロース紙に移された合計のマンソン
住血吸虫ＳＥ抗原と精製されたＳｍ−１４のポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動の分析。レーン１−３のＳＥとＳ
ｍ−１４はそれぞれ１０％と１５％のＳＤＳ−ＰＡＧＥ
に溶解し、青色で着色された。レーン２と４は免疫の吸
着。レーン２はＳＥで免疫性を与えられた兎から得られ
た多クローン性抗血清で精査された。レーン４は兎の抗
Ｓｍ−１４融合蛋白抗血清で精査された。標準分子の低
い標識は図の両側に示されている。以下図２を参照して
Ｓｍ１４の立体的構造を示す。本発明によるＳｍ−１４
の構造のコンピュータ模型製作は結晶構造が既に決定さ
れているタンパク質を有するＳｍ−１４の周知の高度な
同族関係に基づいてなされている。これはコンピュータ
製作により作られるＳｍ−１４の詳細で信頼できる立体
的構造を与える。
【００５２】この立体的構造から（１）Ｓｍ−１４はた
る型のタンパク質であり、（２）脂肪酸がたるの中で結
合しており、（３）たるは１０枚のベータプリーツ付き
シートで形成されており、（４）シートは短い輪により
接合されており、（５）輪は脂肪酸結合タンパク質の同
族の各員間の分岐を示していてＳｍ−１４の抗原性に反
応できる。
る型のタンパク質であり、（２）脂肪酸がたるの中で結
合しており、（３）たるは１０枚のベータプリーツ付き
シートで形成されており、（４）シートは短い輪により
接合されており、（５）輪は脂肪酸結合タンパク質の同
族の各員間の分岐を示していてＳｍ−１４の抗原性に反
応できる。
【００５３】実施例２ 実施例２では実験１−４が行われる。実験１−４のプロ
トコルは以下に説明されているように実施されたが、ス
イスマウスのＳＥとｒＳｍ−１４の感染防御活性を示し
ている。ＳＥ（動物に対する投与量当たり３００μｇ／
ｍｌ）およびｒＳｍ−１４タンパク質（投与量当たり１
０μｇ／ｍｌ）を使用する免疫性を与えるプロトコルは
以下の通り実施された。すなわち、この免疫性を与える
プロトコルは抗原を２回投与することからなり、フロイ
ドの補助剤を使用してもしなくてもよく、皮下注射によ
り７日間の間隔でテストを受けたことのないマウスに投
与され、第２回目の投与の後２１日経てから補助注射を
行った。ワクチンの投与の間隔は変えられる。６０日の
間隔の後で（これも例えば４５日などに変えられる）、
前記マウスに１００匹のセルカリア（吸虫類の幼虫）を
挑戦させた。各グループのマウス（免疫性を与えられ／
挑戦されたマウスとそれぞれの対照群）についての総合
的感染防御反応は以下のように計算された： （Ｃ−Ｖ）／Ｃｘ１００ 式中Ｃは対照群から回収された寄生虫であり、Ｖはワク
チンを投与されたマウスから回収された寄生虫である。
トコルは以下に説明されているように実施されたが、ス
イスマウスのＳＥとｒＳｍ−１４の感染防御活性を示し
ている。ＳＥ（動物に対する投与量当たり３００μｇ／
ｍｌ）およびｒＳｍ−１４タンパク質（投与量当たり１
０μｇ／ｍｌ）を使用する免疫性を与えるプロトコルは
以下の通り実施された。すなわち、この免疫性を与える
プロトコルは抗原を２回投与することからなり、フロイ
ドの補助剤を使用してもしなくてもよく、皮下注射によ
り７日間の間隔でテストを受けたことのないマウスに投
与され、第２回目の投与の後２１日経てから補助注射を
行った。ワクチンの投与の間隔は変えられる。６０日の
間隔の後で（これも例えば４５日などに変えられる）、
前記マウスに１００匹のセルカリア（吸虫類の幼虫）を
挑戦させた。各グループのマウス（免疫性を与えられ／
挑戦されたマウスとそれぞれの対照群）についての総合
的感染防御反応は以下のように計算された： （Ｃ−Ｖ）／Ｃｘ１００ 式中Ｃは対照群から回収された寄生虫であり、Ｖはワク
チンを投与されたマウスから回収された寄生虫である。
【００５４】結果を表１に示す。
【表１】 性別および年齢が同等のスイスマウスを特徴とする様々
な対照群に同時に同じ数のマンソン住血吸虫のセルカリ
アの水たまりを挑戦させたものを各個別の実験の感染対
照群として使用した。これらのマウスにはＰＢＳ（燐酸
塩緩衝食塩水）を同様に注射しただけである。融合タン
パク質（遺伝子１０）および補助剤（フロイドの完全な
補肋剤）についても別の対照群が用意された。
な対照群に同時に同じ数のマンソン住血吸虫のセルカリ
アの水たまりを挑戦させたものを各個別の実験の感染対
照群として使用した。これらのマウスにはＰＢＳ（燐酸
塩緩衝食塩水）を同様に注射しただけである。融合タン
パク質（遺伝子１０）および補助剤（フロイドの完全な
補肋剤）についても別の対照群が用意された。
【００５５】表ＩＩに明らかなように、実験１では、補
助剤（ＦＣＡ）を使用してもしなくてもＳｍ−１４の感
染防御的活性を遺伝子１０タンパク質の活性と並行して
分析した。精製遺伝子１０タンパク質のワクチンを投与
されたマウスから回収された虫の平均重量はＦＣＡを使
用してもしなくても実質的にＰＢＳ対照群のマウスから
採集された虫の重量と同じであった。
助剤（ＦＣＡ）を使用してもしなくてもＳｍ−１４の感
染防御的活性を遺伝子１０タンパク質の活性と並行して
分析した。精製遺伝子１０タンパク質のワクチンを投与
されたマウスから回収された虫の平均重量はＦＣＡを使
用してもしなくても実質的にＰＢＳ対照群のマウスから
採集された虫の重量と同じであった。
【００５６】実験２では、ｒＳｍ−１４とＦＣＡを使用
したｒＳｍ−１４とにより引き起こされた感染防御活性
をＳＥ（ＦＣＡを使用した場合あるいは使用しない場
合）のワクチンを投与した場合と比較して検査した。実
験３と４はＦＣＡの活性だけおよびｒＳｍ−１４のワク
チン投与により引き起こされた感染防御活性の再生性を
試験するために設計された。全ての実験では、マンソン
住血吸虫を更に挑戦させて感染させたマウスに対して有
意に高レベルの免疫感染防御をもたらすｒＳｍ−１４の
高い能力が結局実証されている。提示されたデータを統
計的に分析すると、ワクチン投与のグループから回収さ
れた虫の重量はワクチンを投与されずに感染したマウス
から得られた寄生虫の平均数より有意に低い（ｐ＜０．
０５）ことが明らかである。
したｒＳｍ−１４とにより引き起こされた感染防御活性
をＳＥ（ＦＣＡを使用した場合あるいは使用しない場
合）のワクチンを投与した場合と比較して検査した。実
験３と４はＦＣＡの活性だけおよびｒＳｍ−１４のワク
チン投与により引き起こされた感染防御活性の再生性を
試験するために設計された。全ての実験では、マンソン
住血吸虫を更に挑戦させて感染させたマウスに対して有
意に高レベルの免疫感染防御をもたらすｒＳｍ−１４の
高い能力が結局実証されている。提示されたデータを統
計的に分析すると、ワクチン投与のグループから回収さ
れた虫の重量はワクチンを投与されずに感染したマウス
から得られた寄生虫の平均数より有意に低い（ｐ＜０．
０５）ことが明らかである。
【００５７】実施例３ この実施例はＳＥとｒＳｍ−１４の兎における感染防御
活性を示す。免疫感作プロトコルは実施例２のスイスマ
ウスで使用されたものと同じである。兎１匹当たりの投
与量を表ＩＩに示す。兎に１０００匹のセルカリア（実
施例２の１００匹の代わり）を挑戦させた。表ＩＩはマ
ンソン住血吸虫を感染させた兎に対し有意に高レベルの
免疫感染防御をもたらすｒＳｍ−１４の能力を示してい
る。更に、この実施例はＳＥ混合物と比較して単離され
た抗原としてのｒＳｍ１４の活性を明確にしている。
活性を示す。免疫感作プロトコルは実施例２のスイスマ
ウスで使用されたものと同じである。兎１匹当たりの投
与量を表ＩＩに示す。兎に１０００匹のセルカリア（実
施例２の１００匹の代わり）を挑戦させた。表ＩＩはマ
ンソン住血吸虫を感染させた兎に対し有意に高レベルの
免疫感染防御をもたらすｒＳｍ−１４の能力を示してい
る。更に、この実施例はＳＥ混合物と比較して単離され
た抗原としてのｒＳｍ１４の活性を明確にしている。
【００５８】結果を表ＩＩに示す。
【表２】
【００５９】実施例４ この実施例は実施例２（同じ免疫感作プロトコルが使用
されたことを意味する）の実験１−４を実証するが、感
染防御性を評価するため別の方法を使用する。この方法
は一連の寄生虫範囲内の虫の重量の分布による虫の重量
頻度の母集団を分析してワクチン由来の耐性を確立する
ことに基づいている。
されたことを意味する）の実験１−４を実証するが、感
染防御性を評価するため別の方法を使用する。この方法
は一連の寄生虫範囲内の虫の重量の分布による虫の重量
頻度の母集団を分析してワクチン由来の耐性を確立する
ことに基づいている。
【００６０】結果を表ＩＩＩに示す。
【表３】 表ＩＩＩによると、精製された組み替え体Ｓｍ−１４融
合タンパク質は虫の重量の平均レベルにより判定される
ように不変のＳＥと有意な差のない感染防御レベルを刺
激している。ＳＥで達成された感染防御レベルは既に公
表された結果と一致する。特に興味深いのは、同じレベ
ルの感染防御が補助剤を使用してもしなくても達成され
るのでヒトに前記抗原を使用する場合に吉兆であるとい
う事実である。更に、我々は異系交配されたスイスマウ
スグループの感染防護に前記抗原を使って成功したとい
う事実は免疫系の遺伝的制限があるので感染防御反応の
結果として雑な変種をもたらすことはないことを示して
いる。
合タンパク質は虫の重量の平均レベルにより判定される
ように不変のＳＥと有意な差のない感染防御レベルを刺
激している。ＳＥで達成された感染防御レベルは既に公
表された結果と一致する。特に興味深いのは、同じレベ
ルの感染防御が補助剤を使用してもしなくても達成され
るのでヒトに前記抗原を使用する場合に吉兆であるとい
う事実である。更に、我々は異系交配されたスイスマウ
スグループの感染防護に前記抗原を使って成功したとい
う事実は免疫系の遺伝的制限があるので感染防御反応の
結果として雑な変種をもたらすことはないことを示して
いる。
【００６１】表１１１に示されるように、ワクチン注射
のグループ対非ワクチン注射のグループでは完全に異な
った虫の重量の分布のパターンが観察される。特に驚く
ことは０−１０匹の虫のグループにおけるマウスの数の
差である。１匹のマウス当たり１００匹のセルカリアを
感染させた後、ワクチン注射をしなかったマウスは１匹
もこの範囲の感染レベルを持たなかったし、感染された
（非ワクチン注射の）動物は頻度のピーク（６０％）が
２１−３０匹の虫の範囲であった。対照的に、ＳＥまた
はｒＳｍ−１４のワクチン注射をしたマウスの頻度のピ
ーク（６４．５％）は１匹のマウス当たり０−１０匹の
虫の範囲内である。
のグループ対非ワクチン注射のグループでは完全に異な
った虫の重量の分布のパターンが観察される。特に驚く
ことは０−１０匹の虫のグループにおけるマウスの数の
差である。１匹のマウス当たり１００匹のセルカリアを
感染させた後、ワクチン注射をしなかったマウスは１匹
もこの範囲の感染レベルを持たなかったし、感染された
（非ワクチン注射の）動物は頻度のピーク（６０％）が
２１−３０匹の虫の範囲であった。対照的に、ＳＥまた
はｒＳｍ−１４のワクチン注射をしたマウスの頻度のピ
ーク（６４．５％）は１匹のマウス当たり０−１０匹の
虫の範囲内である。
【００６２】本発明によると明らかなように、複合ＳＥ
混合物の感染防御効果のほとんど全部がこの単一の抗原
を使って再生されることは特に興味深いことである。Ｓ
Ｅ由来の他の限定された抗原（グルタチオン−Ｓ−トラ
ンスフェラーゼおよびパラマイシン）での試験では同じ
高レベルの感染防御は得られなかった。上記のように、
Ｓｍ−１４も様々な脂肪酸結合タンパク質と同じ有意な
レベルを有する。実験１−４の表ＩＩＩに示される結果
を図３−６のグラフに示す。図３−６は実験１−４に対
応する。これらの図面では、ワクチン注射グループ対非
ワクチン注射グループの虫の重量の母集団の輪郭を分析
することにより感染防御を評価することが可能である。
図７は収集された結果を示す。
混合物の感染防御効果のほとんど全部がこの単一の抗原
を使って再生されることは特に興味深いことである。Ｓ
Ｅ由来の他の限定された抗原（グルタチオン−Ｓ−トラ
ンスフェラーゼおよびパラマイシン）での試験では同じ
高レベルの感染防御は得られなかった。上記のように、
Ｓｍ−１４も様々な脂肪酸結合タンパク質と同じ有意な
レベルを有する。実験１−４の表ＩＩＩに示される結果
を図３−６のグラフに示す。図３−６は実験１−４に対
応する。これらの図面では、ワクチン注射グループ対非
ワクチン注射グループの虫の重量の母集団の輪郭を分析
することにより感染防御を評価することが可能である。
図７は収集された結果を示す。
【００６３】実施例５ この実施例では、ワクチン注射をしたマウス１匹当たり
に５００匹と１０００匹のセルカリアを挑戦させるか、
または２−３回１週間の間隔で（感染させた１匹の動物
当たり１００匹のセルカリア）挑戦させた。もちろん、
挑戦感染の大きさと数は変えられる。１０μｇ投与量の
タンパク質（ｒＳｍ−１４）を３回注射することにより
もたらされた感染防御率は１匹の動物当たり５００また
は１０００匹のセルカリア単独挑戦感染に対して５０％
以上である。同じ効果は１匹の動物当たり１００匹のセ
ルカリアを挑戦させて感染させた場合１週間の間隔をお
いて２回または３回繰り返した場合に同じ効果が認めら
れる。この実施例のプロトコルは以下の通りである。実
施例５のデータは表ＩＶと表Ｖにそれぞれ要約されてい
る。
に５００匹と１０００匹のセルカリアを挑戦させるか、
または２−３回１週間の間隔で（感染させた１匹の動物
当たり１００匹のセルカリア）挑戦させた。もちろん、
挑戦感染の大きさと数は変えられる。１０μｇ投与量の
タンパク質（ｒＳｍ−１４）を３回注射することにより
もたらされた感染防御率は１匹の動物当たり５００また
は１０００匹のセルカリア単独挑戦感染に対して５０％
以上である。同じ効果は１匹の動物当たり１００匹のセ
ルカリアを挑戦させて感染させた場合１週間の間隔をお
いて２回または３回繰り返した場合に同じ効果が認めら
れる。この実施例のプロトコルは以下の通りである。実
施例５のデータは表ＩＶと表Ｖにそれぞれ要約されてい
る。
【００６４】実施例６ マンソン住血吸虫由来の脂肪酸結合タンパク質、ｒＳｍ
−１４に対する住血吸虫症患者由来の血清の反応性を実
証するために実施例を次のように実施する。ブラジルの
特有の地域の患者の血清とその特有の地域外に住んでい
る若い人々の血清を組み替え体Ｓｍ−１４抗原に対して
免疫吸着することにより試験する。患者は臨床的な形お
よび卵の数によりグループに分類される。寄生虫学的診
断はカトー・カッツ法により達成される。結果は、感染
した全個体から得られた血清は年齢、虫の重量、または
臨床的な形とは関係なく免疫吸着でｒＳｍ−１４を確認
し、従ってｒＳｍ−１４の免疫原生を反映していること
を示している。
−１４に対する住血吸虫症患者由来の血清の反応性を実
証するために実施例を次のように実施する。ブラジルの
特有の地域の患者の血清とその特有の地域外に住んでい
る若い人々の血清を組み替え体Ｓｍ−１４抗原に対して
免疫吸着することにより試験する。患者は臨床的な形お
よび卵の数によりグループに分類される。寄生虫学的診
断はカトー・カッツ法により達成される。結果は、感染
した全個体から得られた血清は年齢、虫の重量、または
臨床的な形とは関係なく免疫吸着でｒＳｍ−１４を確認
し、従ってｒＳｍ−１４の免疫原生を反映していること
を示している。
【００６５】実施例７ 肝ひるの感染に対してスイスマウスにｒＳｍ−１４のワ
クチン注射をした場合を示しており、肝ひる症を完全に
感染防御した。実施例７は以下のように実施された。１
５匹のマウスから成る２つのグループに補助剤を使用し
てまたはしないでｒＳｍ−１４で免疫性を与えた。ワク
チン投与のプロトコルは、（ａ）ＦＣＡ（補助剤）で乳
化した場合と乳化しない場合の抗原（１０μｇ／投与量
／動物のｒＳｍ−１４）を１週間に２回注射する；
（ｂ）３週間後に新しい投与量の抗原の注射をする；
（ｃ）３回目の投与量の後４５日を経てから肝ひるのメ
タセルカリア３匹に挑戦させ感染の後３０日でいけにえ
にされた。この実施例は住血吸虫および肝ひるなどの異
なる腸内寄生虫の間の交差反応性の感染防御性抗原を示
す。
クチン注射をした場合を示しており、肝ひる症を完全に
感染防御した。実施例７は以下のように実施された。１
５匹のマウスから成る２つのグループに補助剤を使用し
てまたはしないでｒＳｍ−１４で免疫性を与えた。ワク
チン投与のプロトコルは、（ａ）ＦＣＡ（補助剤）で乳
化した場合と乳化しない場合の抗原（１０μｇ／投与量
／動物のｒＳｍ−１４）を１週間に２回注射する；
（ｂ）３週間後に新しい投与量の抗原の注射をする；
（ｃ）３回目の投与量の後４５日を経てから肝ひるのメ
タセルカリア３匹に挑戦させ感染の後３０日でいけにえ
にされた。この実施例は住血吸虫および肝ひるなどの異
なる腸内寄生虫の間の交差反応性の感染防御性抗原を示
す。
【００６６】関連のある寄生虫である肝臓の吸虫類肝ひ
るからクローン化されたＦＳｈ１５と呼ばれる抗原はＳ
ｍ−１４について予測されたアミノ酸配列のレベルと有
意な同族レベルを有しＳｍ−１４は肝ひるのこのタンパ
ク質の同族体であることを示す結果を提示していること
が最近報告された。従って、組み替え体Ｓｍ−１４はこ
の実施例に説明されるように肝ひる感染に対するワクチ
ン用抗原として試験された。図９、１０、１１には、非
ワクチン投与動物（図９と１０）対ワクチン投与動物
（図１１）の肝臓を示している。ｒＳｍ１４のワクチン
を投与された動物と非投与の動物（対照）について肝ひ
るによる感染を評価する寄生虫学試験を行った後で、１
匹のマウス当たり３匹のメタセルカリアで同じ感染をさ
せて、肝臓、腸、他の臓器を伝統的な組織学的方法によ
り検査して２つのグループの動物で展開した病理学を評
価した。主に肝臓と腸が肝ひるにより最も冒された臓器
であり従ってこれらの臓器が広範囲に検査された。
るからクローン化されたＦＳｈ１５と呼ばれる抗原はＳ
ｍ−１４について予測されたアミノ酸配列のレベルと有
意な同族レベルを有しＳｍ−１４は肝ひるのこのタンパ
ク質の同族体であることを示す結果を提示していること
が最近報告された。従って、組み替え体Ｓｍ−１４はこ
の実施例に説明されるように肝ひる感染に対するワクチ
ン用抗原として試験された。図９、１０、１１には、非
ワクチン投与動物（図９と１０）対ワクチン投与動物
（図１１）の肝臓を示している。ｒＳｍ１４のワクチン
を投与された動物と非投与の動物（対照）について肝ひ
るによる感染を評価する寄生虫学試験を行った後で、１
匹のマウス当たり３匹のメタセルカリアで同じ感染をさ
せて、肝臓、腸、他の臓器を伝統的な組織学的方法によ
り検査して２つのグループの動物で展開した病理学を評
価した。主に肝臓と腸が肝ひるにより最も冒された臓器
であり従ってこれらの臓器が広範囲に検査された。
【００６７】１匹のマウス当たり３匹の肝ひるのメタセ
ルカリアを使って伝統的な方法により経口感染させてか
ら３０日後に、その感染させたマウスは、ワクチンを投
与されなかったマウスと比べて、予めｒＳｍ１４のワク
チン投与した状態で得られた感染の重みを評価するため
にいけにえにされた。その臓器をミロン溶液で固定し、
切断し、ヘマトキシリン−エオシン法により着色し、光
学顕微鏡で検査した。ｒＳｍ−１４は寄生虫学および病
理解剖学的データに基づき肝ひる感染を防御できること
が図８、９、１０、１１により確実に実証される。ｒＳ
ｍ−１４のワクチンを投与されたマウスについては実質
的に１匹のマウスも３匹の肝ひるのメタセルカリア（１
匹のマウスに許される最大投与量）に露出した後で感染
しなかった。これに反して、ワクチンを投与されなかっ
た対照群のマウスは全て同じ露出の後感染した。
ルカリアを使って伝統的な方法により経口感染させてか
ら３０日後に、その感染させたマウスは、ワクチンを投
与されなかったマウスと比べて、予めｒＳｍ１４のワク
チン投与した状態で得られた感染の重みを評価するため
にいけにえにされた。その臓器をミロン溶液で固定し、
切断し、ヘマトキシリン−エオシン法により着色し、光
学顕微鏡で検査した。ｒＳｍ−１４は寄生虫学および病
理解剖学的データに基づき肝ひる感染を防御できること
が図８、９、１０、１１により確実に実証される。ｒＳ
ｍ−１４のワクチンを投与されたマウスについては実質
的に１匹のマウスも３匹の肝ひるのメタセルカリア（１
匹のマウスに許される最大投与量）に露出した後で感染
しなかった。これに反して、ワクチンを投与されなかっ
た対照群のマウスは全て同じ露出の後感染した。
【００６８】病理解剖学的見地から、ｒＳｍ−１４のワ
クチンを投与された全個体の肝臓の実質はグリソン鞘と
同一面にある繊維状の小さな区域を除いて肝ひるに関連
した変化は全く示さなかった。この所見は、挑戦用の寄
生虫はワクチンの効果により脊推動物の宿主における寄
生虫の生活史の非常に早い時期に殺されたことを示して
いる。それに反して、ワクチンを投与されず／感染した
マウスはグリソン鞘にまで至る激しい出血領域を伴った
肝実質細胞の広範囲な破壊を示した。図９および１０に
示されるように、肝臓の実質の広範囲な破壊は複数のマ
ウスに成虫の寄生虫が存在することともに認められた。
クチンを投与された全個体の肝臓の実質はグリソン鞘と
同一面にある繊維状の小さな区域を除いて肝ひるに関連
した変化は全く示さなかった。この所見は、挑戦用の寄
生虫はワクチンの効果により脊推動物の宿主における寄
生虫の生活史の非常に早い時期に殺されたことを示して
いる。それに反して、ワクチンを投与されず／感染した
マウスはグリソン鞘にまで至る激しい出血領域を伴った
肝実質細胞の広範囲な破壊を示した。図９および１０に
示されるように、肝臓の実質の広範囲な破壊は複数のマ
ウスに成虫の寄生虫が存在することともに認められた。
【００６９】
【００７０】
【図面の簡単な説明】
【図１】ＳＥと比較した最終抗原調製物（ｒＳｍ１４精
製）のゲルを示す。
製）のゲルを示す。
【図２】コンピュータ模型製作により予測されたＳｍ１
４の立体的構造を示す。
４の立体的構造を示す。
【図３】実験１によるｒＳｍ１４の感染防御の程度の評
価を示す。
価を示す。
【図４】実験２によるｒＳｍ１４の感染防御の程度の評
価を示す。
価を示す。
【図５】実験３によるｒＳｍ１４の感染防御の程度の評
価を示す。
価を示す。
【図６】実験４によるｒＳｍ１４の感染防御の程度の評
価を示す。
価を示す。
【図７】実験１、２、３、４の収集した結果を示す。
【図８】肝ひるの感染を予防するためにスイスマウスに
ｒＳｍ１４のワクチン注射をしたことを示す。
ｒＳｍ１４のワクチン注射をしたことを示す。
【図９】肝ひるに感染させた動物にワクチン注射をしな
かった場合の肝臓を示す。
かった場合の肝臓を示す。
【図１０】肝ひるに感染させた動物にワクチン注射をし
なかった場合の肝臓を示す。
なかった場合の肝臓を示す。
【図１１】肝ひるに感染させた動物にワクチン注射をし
た場合の肝臓を示す。
た場合の肝臓を示す。
フロントページの続き (72)発明者 ミリアム・テンドレル ブラジル国リオ・デ・ジェネイロ，リオ・ デ・ジェネイロ，22611−280 バラ・ド・ チジュカ，フーア・カリェイロス・ゴメス 481 (72)発明者 ナフターレ・カッス ブラジル国ミネス・ジェライス，30220− 060−ベロ・オリゾンチ，フーア・エステ ヴァン・ピント 673／800 (72)発明者 アンドリュー・ジョン・シンプソン ブラジル国ミネス・ジェライス，ベロ・オ リゾンチ，フーア・リグリア 35
Claims (24)
- 【請求項１】マンソン住血吸虫由来の１４−１５ｋＤａ
の範囲の分子量を有し、そのアミノ酸配列がＭＥＴ−Ｓ
ＥＲ−ＳＥＲ−ＰＨＥ−ＬＥＵ−ＧＬＹ−ＬＹＳ−ＴＲ
Ｐ−ＬＹＳ−ＬＥＵ−ＳＥＲ−ＧＬＵ−ＳＥＲ−ＨＩＳ
−ＡＳＮ−ＰＨＥ−ＡＳＰ−ＡＬＡ−ＶＡＬ−ＭＥＴ−
ＳＥＲ−ＬＹＳ−ＬＥＵ−ＧＬＹ−ＶＡＬ−ＳＥＲ−Ｔ
ＲＰ−ＡＬＡ−ＴＨＲ−ＡＲＧ−ＧＬＮ−ＩＬＥ−ＧＬ
Ｙ−ＡＳＮ−ＴＨＲ−ＶＡＬ−ＴＨＲ−ＰＲＯ−ＴＨＲ
−ＭＥＴ−ＬＥＵ−ＴＨＲ−ＧＬＵ−ＳＥＲ−ＴＨＲ−
ＰＨＥ−ＬＹＳ−ＡＳＮ−ＬＥＵ−ＳＥＲ−ＣＹＳ−Ｔ
ＨＲ−ＰＨＥ−ＬＹＳ−ＰＨＥ−ＧＬＹ−ＧＬＵ−ＧＬ
Ｕ−ＰＨＥ−ＡＳＰ−ＧＬＵ−ＬＹＳ−ＴＨＲ−ＳＥＲ
−ＡＳＰ−ＧＬＹ−ＡＲＧ−ＡＳＮ−ＶＡＬ−ＬＹＳ−
ＳＥＲ−ＶＡＬ−ＶＡＬ−ＧＬＵ−ＬＹＳ−ＡＳＮ−Ｓ
ＥＲ−ＧＬＵ−ＳＥＲ−ＬＹＳ−ＬＥＵ−ＴＨＲ−ＧＬ
Ｎ−ＴＨＲ−ＧＬＮ−ＶＡＬ−ＡＳＰ−ＰＲＯ−ＬＹＳ
−ＡＳＮ−ＴＨＲ−ＴＨＲ−ＶＡＬ−ＩＬＥ−ＶＡＬ−
ＡＲＧ−ＧＬＵ−ＶＡＬ−ＡＳＰ−ＧＬＹ−ＡＳＰ−Ｔ
ＨＲ−ＭＥＴ−ＬＹＳ−ＴＨＲ−ＴＨＲ−ＶＡＬ−ＴＨ
Ｒ−ＶＡＬ−ＧＬＹ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−ＴＨＲ−ＡＬＡ
−ＩＬＥ−ＡＲＧ−ＡＳＮ−ＴＹＲ−ＬＹＳ−ＡＲＧ−
ＬＥＵ−ＳＥＲであり、脂肪酸を結合する能力を有する
タンパク質であって、実験動物においてその腸内寄生虫
感染に対する感染防御抗原性が１００％まで補助剤の存
在下または非存在下で１０μｇ以下の生のタンパク質、
組み替え体のタンパク質または合成形のタンパク質を３
投与量までワクチン投与することにより達成されること
を特徴とする前記タンパク質であるＳｍ１４． - 【請求項２】前記Ｓｍ１４が図２に示されるようにポリ
ペプチド鎖が１０枚のベータプリーツ付きシートに折り
畳まれ短い輪により接合されて形成されることを特徴と
する請求項１のＳｍ１４． - 【請求項３】異系交配されたスイスマウスにおいてマン
ソン住血吸虫に対する感染防御抗原性が６７．９％まで
補助剤の非存在下で１０μｇ以下の生のタンパク質、組
み替え体のタンパク質または合成形のタンパク質を３投
与量ワクチン投与することにより達成されることを特徴
とする請求項１のＳｍ１４． - 【請求項４】異系交配されたスイスマウスにおいてマン
ソン住血吸虫に対する感染防御抗原性が７２．１％まで
フロイドの完全な補助剤の存在下で１０μｇ以下の生の
タンパク質、組み替え体のタンパク質または合成形のタ
ンパク質を３投与量ワクチン投与することにより達成さ
れることを特徴とする請求項１のＳｍ１４． - 【請求項５】ニュージランドの兎においてマンソン住血
吸虫に対する感染防御抗原性が８９％までフロイドの完
全な補助剤の存在下で８０μｇ以下の生のタンパク質、
組み替え体のタンパク質または合成形のタンパク質を３
投与量ワクチン投与することにより達成されることを特
徴とする請求項１のＳｍ１４． - 【請求項６】異系交配されたスイスマウスにおいて肝ひ
るに対する感染防御抗原性が１００％まで補助剤の非存
在下で１０μｇ以下の生のタンパク質、組み替え体のタ
ンパク質または合成形のタンパク質を３投与量ワクチン
投与することにより達成されることを特徴とする請求項
１のＳｍ１４． - 【請求項７】バクテリオファージＴ７キャプシドタンパ
ク質の最初の２６０個のアミノ酸と請求項１に限定され
ている完全なＳｍ１４ポリペプチドとの融合タンパク質
がＴ７タンパク質の２６０番目の残基とＳｍ１４の最初
のメチオニン（ＭＥＴ）と間にアミノ酸配列で次のよう
に橋掛けすることにより得られることを特徴とするｒＳ
ｍ１４：キャプシドタンパク質残基２６０−ＬＥＵ−Ｌ
ＥＵ−ＴＨＲ−ＬＥＵ−ＴＨＲ−ＬＹＳ−ＧＬＹ−ＬＹ
Ｓ−ＡＬＡ−ＬＹＳ−ＳＥＲ−ＡＬＡ−ＧＬＵ−ＬＥＵ
−ＧＬＵ−ＰＨＥ−ＶＡＬ−ＡＳＰ−ＬＥＵ−ＧＬＵ−
ＧＬＹ−ＳＥＲ−ＶＡＬ−Ｓｍ１４。 - 【請求項８】Ｔ７タンパク質が他のどんなタンパク質と
でも置き換えられることを特徴とする請求項７のｒＳｍ
１４。 - 【請求項９】微生物中に発現され適当な精製により得ら
れることを特徴とする請求項７または８のｒＳｍ１４。 - 【請求項１０】大腸菌に発現させることにより得られる
ことを特徴とする請求項７または８のｒＳｍ１４。 - 【請求項１１】音波処理、溶菌と遠心分離の繰り返しに
よる発現された融合タンパク質の最初の精製およびＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥゲルからの電気溶出による最終精製を特徴
とする請求項９または１０のｒＳｍ１４。 - 【請求項１２】ポリペプチド鎖の全部または一部を化学
合成することにより得られることを特徴とする請求項７
のｒＳｍ１４。 - 【請求項１３】腸内寄生虫によって引き起こされる病気
に対するワクチンであることを特徴とする請求項１のＳ
ｍ１４の用途。 - 【請求項１４】肝ひるによって引き起こされる病気に対
するワクチンであることを特徴とする請求項１のＳｍ１
４の用途。 - 【請求項１５】住血吸虫属によって引き起こされる病気
に対するワクチンであることを特徴とする請求項１のＳ
ｍ１４の用途。 - 【請求項１６】マンソン住血吸虫によって引き起こされ
る病気に対するワクチンであることを特徴とする請求項
１のＳｍ１４の用途。 - 【請求項１７】腸内寄生虫によって引き起こされる病気
に対するワクチンであることを特徴とする請求項７また
は８のｒＳｍ１４の用途。 - 【請求項１８】肝ひるによって引き起こされる病気に対
するワクチンであることを特徴とする請求項７または８
のｒＳｍ１４の用途。 - 【請求項１９】住血吸虫属によって引き起こされる病気
に対するワクチンであることを特徴とする請求項７また
は８のｒＳｍ１４の用途。 - 【請求項２０】マンソン住血吸虫によって引き起こされ
る病気に対するワクチンであることを特徴とする請求項
７または８のｒＳｍ１４の用途。 - 【請求項２１】請求項６に限定されているように、Ｓｍ
１４が他のどんなタンパク質とも置き換えられ、ヒトお
よび獣医用ワクチンとして存在することを特徴とする組
み替え体融合タンパク質の用途。 - 【請求項２２】住血吸虫症および肝ひる症のための診断
用試薬であることを特徴とする請求項１のＳｍ１４の用
途。 - 【請求項２３】住血吸虫症および肝ひる症のための診断
用試薬であることを特徴とする請求項７または８のｒＳ
ｍ１４の用途。 - 【請求項２４】動物およびヒトの両方の病気に対する感
染を防御する共通の交差反応性抗原を単離し；感染およ
び／または病気を引き起こす吸虫の動物の宿主において
動物の病気の予防免疫接種用のワクチンとして前記抗原
を試験し；動物の宿主にワクチン注射をした結果得られ
た情報を分析し；獣医用ワクチンをヒトの病気に適用す
るために関連したあらゆる質問および予め必要な要件に
焦点を合わせる工程からなるヒトに獣医用ワクチンを適
用する方法。
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