JPH07165597A - ハマビシ科植物の有機抽出物を含有する抗ウイルス剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 抗ウイルス剤を提供する。 【構成】 ハマビシ科（Ｚｙｇｏｐｈｙｌｌａｃｅａ
ｅ）に属する植物の有機溶媒抽出物を有効成分として含
有する。 【効果】 特にヘルペスシンプレックスウイルス及びサ
イトメガロウイルスに対する抗ウイルス作用を有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ハマビシ科（Ｚｙｇｏ
ｐｈｙｌｌａｃｅａｅ）に属する植物の有機溶媒抽出物
を有効成分として含有する抗ウイルス剤に関する。本発
明の抗ウイルス剤は、特にヘルペスシンプレックスウイ
ルス１型（以下、ＨＳＶ−１と称することがある）及び
ヘルペスシンプレックスウイルス２型（以下、ＨＳＶ−
２と称することがある）、並びにサイトメガロウイルス
（以下、ＣＭＶと称することがある）に対して有効であ
る。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】中国で
は、古来より漢方薬として生薬類が知られており、それ
らの抽出エキスからなる製剤は、わが国でも漢方製剤と
して実用化されている。近年、生薬の抗ウイルス作用と
しては、例えば、甘草に含まれるサポニンであるグリシ
ルリジンのヘルペスシンプレックスウイルスやエイズウ
イルスに対する増殖抑制作用［M.Ito, et al., Antivir
al Res., 7, 127-137 (1987)］や、カワミドリ（Agast
ache rugosa）中のフラボン及びそのアナログ体にライ
ノウイルスの増殖抑制作用［藤生守男他，薬学会第１０
８年会講演要旨集，S-95 (1988) ］などが見出されてい
る。しかし、必ずしも臨床評価は芳しいものではなかっ
た。

【０００３】南米パラグアイ産の薬草であるパロ・サン
ト（Ｐａｌｏ ｓａｎｔｏ）（一般名）は、ハマビシ科
に属する植物であるブルネシア・サルミエンティ・ロレ
ンツ（学名：Ｂｕｌｕｎｅｓｉａ ｓａｒｍｉｅｎｔｉ
Ｌｏｒｅｎｔｚ）から調製され、その茎の乾燥物をお
がくず状に破砕した形で薬草として主に南米市場に出回
っている。薬草・パロ・サントから温浸又はアルコール
冷浸にて抽出した液は、リューマチや打撲などの抗炎症
作用、利尿作用、あるいはコレステロール軽減作用があ
るとされている。しかし、その抽出成分が抗ウイルス作
用を有することは全く知られていなかった。

【０００４】一方、ヘルペスシンプレックスウイルス
（ＨＳＶ）は、単純疱疹ウイルスとも呼ばれ、抗原的に
皮膚型（１型）と陰部型（２型）とに分類されている。
現在、最も広く人を侵襲するウイルスのひとつであり、
まれに、初感染で、髄膜脳炎などの重篤な症状を発する
こともある。最近、子宮ガン患者の血清抗体からヘルペ
ス２型の抗体が約８０％の高頻度で見つけられており、
子宮ガンとの関連性が注目されている。

【０００５】また、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に
は、成人の半数が感染しており、我が国では約６０％の
確率で出生直後に感染する。ただし、多くの場合、不顕
性感染で、特に病状はないが、顕性感染の場合は、死
産、小頭症、知能障害、新生児全身感染、成人の伝染性
単核症、輸血後発症などを引き起こす。最近の知見で
は、エイズ感染者が免疫不全による二次感染から上記病
状を併発することがある。なお、ＣＭＶはインターフェ
ロンに耐性がある。

【０００６】本発明者は、ハマビシ科に属する植物、特
に前記パロ・サントの有機溶媒抽出エキスに抗ウイルス
作用、特に、ＨＳＶ−１及びＨＳＶ−２、並びにＣＭＶ
に対する抗ウイルス作用のあることを見出した。本発明
は、こうした知見に基づくものである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】従って、本発明は、ハマ
ビシ科（Ｚｙｇｏｐｈｙｌｌａｃｅａｅ）に属する植物
の有機溶媒抽出物を含有することを特徴とする、抗ウイ
ルス剤に関する。

【０００８】ハマビシ科（Ｚｙｇｏｐｈｙｌｌａｃｅａ
ｅ）に属する植物は特に制限されないが、好ましくはブ
ルネシア（Ｂｕｌｕｎｅｓｉａ）属に属する植物、例え
ば、パロ・サント（Ｂｕｌｕｎｅｓｉａ ｓａｒｍｉｅ
ｎｔｉ Ｌｏｒｅｎｔｚ）、トリブルス（Ｔｒｉｂｕｌ
ｕｓ）属に属する植物、グアイアカム（Ｇｕａｉａｃｕ
ｍ）属に属する植物を挙げることができ、特には、ブル
ネシア属に属する植物が好ましく、なかでもパロ・サン
トを用いるのが好ましい。前記植物の任意の部位の１種
又は２種以上を組み合わせて、抽出工程に用いることが
できるが、茎、葉又は根を用いるのが好ましく、それら
の部位を乾燥させてから抽出工程に用いるのが特に好ま
しい。

【０００９】有機溶媒としては、ハロゲン化アルキル、
ケトン又はアルコール（特には水性アルコール）、ある
いはそれらの混合物を用いることができる。ハロゲン化
アルキルとしては、好ましくは塩素原子１個又はそれ以
上（特には１又は２個）で置換されている炭素数１〜４
個の低級アルキルを用いることができる。具体的には、
クロロメタン、ジクロロメタン、トリクロロメタン、４
塩化炭素、クロロエタン、ジクロロエタン、トリクロロ
エタン又はそれらの混合物を挙げることができ、特には
ジクロロメタンを用いるのが好ましい。

【００１０】ケトンとしては、好ましくは炭素数３〜５
個の脂肪族ケトン、例えば、アセトン、エチルメチルケ
トン又はメチルプロピルケトン、又はそれらの混合物を
挙げることができ、特にはアセトンを用いるのが好まし
い。また、アルコールとしては、好ましくは炭素数１〜
４個の低級アルコール、例えば、メチルアルコール、エ
チルアルコール、ｎ−若しくはｉ−プロピルアルコー
ル、又はｎ−、ｉ−、ｓ−若しくはｔ−ブチルアルコー
ル、又はそれらの混合物を挙げることができ、特にはメ
チルアルコールを用いるのが好ましい。

【００１１】抽出工程は、前記のハマビシ科に属する植
物の適当な部位を、好ましくは乾燥させた後で粉砕し、
好ましくは高めた温度（特には還流下）で、前記有機溶
媒の１種又はそれ以上によって抽出し、有機溶媒抽出液
を、好ましくは減圧下で濃縮することからなる。得られ
た濃縮液をそのまま、或いは更に濃縮乾固させて、本発
明の抗ウイルス剤の有効成分として用いることができ
る。

【００１２】ハロゲン化アルキル又はケトンによる抽出
物は、特にサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に対して優
れた抗ウイルス作用を示す。また、ケトンによる抽出物
は、特にヘルペスシンプレックスウイルス１型（ＨＳＶ
−１）に対しても優れた抗ウイルス作用を示す。更に、
アルコール（特には水性アルコール）による抽出物は、
特にヘルペスシンプレックスウイルス２型（ＨＳＶ−
２）に対して優れた抗ウイルス作用を示す。

【００１３】本発明による抗ウイルス剤は、前記の有機
溶媒抽出物の非毒性かつ有効量と、場合により適当な担
体とから構成することができ、経口的又は非経口的に投
与することができる。経口投与には舌下投与が含まれ、
非経口投与には、皮下、静脈、筋注、直腸又は肺投与な
どが含まれる。

【００１４】本発明の抗ウイルス剤は、錠剤、粉末剤、
顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、分散剤、注射剤、舌
下錠、細粒剤、外用剤、軟膏剤、座剤又はテープ剤など
の各種剤型で用いることができる。これらの各製剤は、
それぞれ、必要により公知の担体（例えば、結合剤、賦
形剤、潤滑剤、崩壊剤、湿潤剤、着色剤、希釈剤、乳化
剤、懸濁化剤又は充填剤）を用いて、常法によって調製
することができる。担体としては、例えば、顆粒剤にト
ウモロコシデンプン、錠剤に結晶セルロース、カプセル
剤に無水ケイ酸、又は、注射剤にブドウ糖液などを用い
ることができる。本発明による抗ウイルス剤は、有効成
分である前記有機溶媒抽出物（濃縮乾固物）を５〜１０
０重量％、好ましくは２５〜１００重量％の量で含有す
る。投与量は、投与対象、投与ルート及び／又は症状な
どによっても異なるが、通常０．１〜２００ｍｇ／ｋｇ
／日であり、これを１日１〜５回に分けて投与すること
ができる。

【００１５】

【実施例】以下、実施例によって本発明を具体的に説明
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。なお、以下の実施例（抗ウイルス活性測定試験例
１）において、抗ウイルス作用は、Ｒｕｄｉ Ｐｏｕｗ
ｅｌｓらのＭＴＴ法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏ
ｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ 第２０巻第３０９
頁，１９８８年）に準じた方法で評価した。すなわち、
ＭＲＣ−５細胞培養系にＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２のウ
イルス調製液を加え、３７℃で６〜７日間培養し感作さ
せる。次に、３−（４，５−ジメチルチアゾ−２−イ
ル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド液
（ＭＴＴ液）を添加すると、ウイルスに感染せずに生存
している細胞であれば、黄色のテトラゾリウムが細胞内
のミトコンドリアのデヒドロゲナーゼの代謝を受け、青
色のホルマザンに変化する。この変色の程度を５４０ｎ
ｍ及び６９０ｎｍの波長の吸光度で読み取り、それらの
吸光度の差を非特異的な吸収の除外された吸光度値とし
て用い、下記の抗ウイルス活性計算式により、５０％効
果濃度（ＥＤ₅₀）を算出する。

【００１６】

【００１７】前記の抗ウイルス活性計算式において、各
記号の意味は以下の通りである。 （ＯＤ_T ）_HSV ：（ＨＳＶウイルス感作ＭＲＣ−５細胞
＋本発明有機溶媒抽出物成分）の吸光度 （ＯＤ_C ）_HSV ：（ＨＳＶウイルス感作ＭＲＣ−５細
胞）のみの吸光度 （ＯＤ_c ）_mock：（ウイルス無感作ＭＲＣ−５細胞）の
みの吸光度 （ＯＤ_B ） ：（無細胞系での本発明有機溶媒抽出物
成分）の吸光度

【００１８】各種濃度の本発明有機溶媒抽出物に対する
抗ウイルス活性を予め検量線として定め、その５０％抗
ウイルス活性時の有機溶媒抽出物濃度をＥＤ₅₀値とす
る。一方、無感作のＭＲＣ−５細胞に有機溶媒抽出物添
加時の吸光度（ＯＤ_T ）_mockと前記の（ＯＤ_c ）_mockと
の比が５０％であった時の有機溶媒抽出物濃度が、その
まま５０％細胞毒性濃度ＣＤ₅₀値として表され、ＣＤ₅₀
／ＥＤ₅₀＝ＳＩ＞１の場合に抗ウイルス活性があるもの
と判定した。

【００１９】調製例：パロ・サント抽出物の調製 （１）パラグアイ産の薬草パロ・サント（Ｐａｌｏ ｓ
ａｎｔｏ）の茎の乾燥物の粉末（１５０ｇ）を５００ｍ
ｌのナス型フラスコ内で、還流下にジクロロメタン、ア
セトン又は７０％メチルアルコール（各３００ｍｌ）で
抽出した。得られた各有機抽出液から減圧下で溶媒を留
去し、それぞれ濃縮乾固してジクロロメタン抽出物（以
下、ＰＤと称する）１１．１ｇ、アセトン抽出物（以
下、ＰＡと称する）６．５ｇ及び７０％メチルアルコー
ル抽出物（以下、ＰＭと称する）１．６ｇを得た。 （２）前記（１）で用いたパロ・サントの茎の乾燥物の
粉末（１５０ｇ）をアセトン３００ｍｌにて還流下に２
回抽出し、抽出液を得た。それらの抽出液をシリカゲル
〔商品名：キーゼルゲル６０（メルク社製）〕５００ｍ
ｌにくるませ、カラムクロマトグラフィ（内径８ｃｍ×
５０ｃｍ）にてトリクロロメタン−メチルアルコール展
開溶媒で濃度勾配をつけて処理した。すなわち、最初は
トリクロロメタン単独、次にトリクロロメタン／メチル
アルコール（１０：１）、そしてトリクロロメタン／メ
チルアルコール（５：１）、最後にトリクロロメタン／
メチルアルコール（１：１）で展開した。５種のフラク
ション（各１リットル）ＰＡ−１〜ＰＡ−５に分け、薄
層クロマトグラフィーによりトリクロロメタン／メチル
アルコール（２０：１）で展開したところ、スポット像
は図１に示すとおりであった。各フラクションをそれぞ
れ濃縮乾固して、ＰＡ−１（２．７ｇ）、ＰＡ−２
（１．２ｇ）、ＰＡ−３（０．６ｇ）、ＰＡ−４（１．
５ｇ）及びＰＡ−５（２．９ｇ）を得た。

【００２０】抗ウイルス活性測定試験例１：抗ヘルペス
シンプレックスウイルス活性の測定（ＭＴＴ法） ９６穴平底マイクロプレートにＭＲＣ−５細胞を集約状
態（ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）まで培養し、前記調製例
（１）で得たジクロロメタン抽出物（ＰＤ）、アセトン
抽出物（ＰＡ）及び７０％メチルアルコール抽出物（Ｐ
Ｍ）、又は前記調製例（２）で得たアセトン抽出物から
のフラクションＰＡ−１〜ＰＡ−５をそれぞれエタノー
ルで可溶化し、生理的食塩水で任意の濃度に希釈した検
体液を１００μｌ／穴の量で添加し、ＨＳＶ−１及びＨ
ＳＶ−２を含有するウイルス調製液（２５ＴＣＩＤ₅₀／
２５μｌ／穴）を加えた。なお、ＴＣＩＤ₅₀とは、Ｒｅ
ｅｄ−Ｍｕｅｎｃｈ法により定量された、培養瓶中での
５０％細胞変性効果の現れるウイルス希釈倍数のことで
ある。一方、ウイルス調製液の代わりに生理的食塩水を
加えた場合をコントロールとした。３７℃で６日間（Ｈ
ＳＶ−１の場合）又は７日間（ＨＳＶ−２の場合）、Ｃ
Ｏ₂ インキュベーター内で培養し、７．５ｍｇ／ｍｌと
して調製したＭＴＴ液を２０μｌ／穴の量で添加し、３
７℃で２４時間培養した後、培養液を除去し、１０％ト
リトンＸ−１００を含む塩酸イソプロパノール混液の溶
出液を１００μｌ／穴の量で添加した後、直接、５４０
ｎｍ及び６９０ｎｍの二波長の吸光度を測定した。その
後、前記の計算式を用いて、ＥＤ₅₀とＣＤ₅₀を算出し
た。その結果、ＰＭ及びＰＡ−３にのみ抗ウイルス作用
が見出された。

【００２１】また、同様の方法にて、エイズウイルス
（ＨＩＶ）、Ａ型インフルエンザウイルス（Ｆｌｕｖ−
Ａ）、ＲＳ（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉ
ａｌ）ウイルスの３種のＲＮＡウイルスについても調べ
た。結果を下記の表１及び表２に示す。

【００２２】

【表１】 メチルアルコール抽出物（ＰＭ）の抗ウイルス活性 ウイルス ＥＤ₅₀（μg/ml） ＣＤ₅₀（μg/ml） ＳＩ ＲＳウイルス ＞１８．３ １８．３ ＜１ Ａ型インフルエンザ ＞４５．９ ４５．９ ＜１ エイズ ＞４４．７ ４４．７ ＜１ ヘルペス１型 ＞４５．５ ４５．５ ＜１ ヘルペス２型 ９．６２ ４６．２ ４．８

【００２３】

【表２】 フラクションＰＡ−３（アセトン抽出物）の抗ウイルス活性 ウイルス ＥＤ₅₀（μg/ml） ＣＤ₅₀（μg/ml） ＳＩ ＲＳウイルス ＞８．３９ ８．３９ ＜１ Ａ型インフルエンザ ＞４５．５ ４５．５ ＜１ エイズ ＞３３．７ ３３．７ ＜１ ヘルペス１型 １８．８ ４６．７ ２．５ ヘルペス２型 ＞４４．３ ４４．３ ＜１

【００２４】抗ウイルス活性測定試験例２：抗サイトメ
ガロウイルス活性の測定（マイクロプラークレダクショ
ン法） ９６穴平底マイクロプレートにＭＲＣ−５細胞を集約状
態（ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）まで培養し、前記調製例
（１）で得たジクロロメタン抽出物（ＰＤ）若しくはア
セトン抽出物（ＰＡ）、又は前記調製例（２）で得たア
セトン抽出物からの各フラクションＰＡ−１〜ＰＡ−５
をエタノールで可溶化し、生理的食塩水で任意の濃度に
希釈した検体液を１００μｌ／穴の量で添加し、ＣＭＶ
を含有するウイルス調製液（３０ＰＦＵ／１００μｌ／
穴）を加えた。次いで、そのプレートを遠心分離（７０
０×ｇ；１７５０ｒｐｍ；室温；４０分間）した後、３
７℃で６〜７日間、ＣＯ₂ インキュベーター内で培養し
た。一方、検体の代わりに生理的食塩水を加えた場合を
コントロールとし、ＣＭＶによって生じるフォーカスを
顕微鏡下で確認した後、１０％ホルマリンを加えた生理
的食塩水約５０μｌ／穴を加え、一夜室温にて放置し
た。プレートを水道水で洗浄した後、０．０２５％クリ
スタルバイオレット液（約１００μｌ／穴）で２０〜３
０分間染色し、水道水で洗浄してから乾燥させ、顕微鏡
下（×４０）で観察した。なお、各種濃度の本発明有機
溶媒抽出物に対する抗ウイルス活性を予め検量線として
定め、その５０％抗ウイルス活性時の有機溶媒抽出物濃
度をＥＤ₅₀値とする。一方、細胞毒性は、ウイルス調製
液の代わりに維持培地（２％ウシ胎児血清添加イーグル
ＭＥＭ培地）を加え、前記と同様の方法で処理し、染色
した後で細胞形態を顕微鏡下で観察し、５０％細胞毒性
の観察された時点での有機溶媒抽出物濃度を、そのまま
５０％細胞毒性濃度ＣＤ₅₀値とし、ＣＤ₅₀／ＥＤ₅₀＝Ｓ
Ｉ＞１の場合に抗ウイルス活性があるものと判定した。
結果を表３に示す。

【００２５】

【表３】 抗サイトメガロウイルス活性 抽出物 ＥＤ₅₀（μg/ml） ＣＤ₅₀（μg/ml） ＳＩ ＰＤ ０．８ ４ ５ ＰＡ ０．８ ４ ５ ＰＡ−１ ＞０．８ ０．８ ＜１ ＰＡ−２ ＞６０ １００ １．７ ＰＡ−３ ２０ ２０ ＜１ ＰＡ−４ ２．４ ４ １．７ ＰＡ−５ ２．４ ４ １．７

【００２６】製剤調製例 前記調製例（１）で得たパロ・サントのジクロロメタン
抽出物１０重量部と乳糖４２１．０重量部とジャガイモ
澱粉５０重量部とをよく混合し、この混合物を流動層造
粒機に入れ、ヒドロキシプロピルセルロース（結合剤）
１８．７５重量部を５％水溶液にして噴霧し、顆粒を得
た。次いで、カルボキシメチルセルロースカルシウム
（崩壊剤）２０重量部とステアリン酸マグネシウム（滑
沢剤）１５重量部とを添加して混合した。得られた混合
物を１錠の重量が１２５ｍｇとなるようにして、加圧成
形し錠剤を得た。この錠剤に下記の処方のコーティング
液を噴霧して、腸溶性錠剤を得た。 セルロースアセテートフタレート ５．０重量部 ９５％エタノール ４７．５重量部 酢酸エチル ４７．５重量部

【００２７】

【発明の効果】本発明の抗ウイルス剤は、特にヘルペス
シンプレックスウイルス及びサイトメガロウイルスに対
する抗ウイルス作用を有し、ウイルス感染症の治療剤と
して有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】本明細書の調製例（２）において実施した、本
発明で用いるアセトン抽出物のクロロメタン／メチルア
ルコール濃度勾配クロマトグラフィーにより分離して得
られた５種のフラクションの薄層クロマトグラフィーの
スポット像を模式的に示す図面である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ハマビシ科（Ｚｙｇｏｐｈｙｌｌａｃｅ
   ａｅ）に属する植物の有機溶媒抽出物を含有することを
   特徴とする、抗ウイルス剤。