JPH07157498A - 短鎖ホスホロチオエート結合オリゴデオキシヌクレオチド - Google Patents
短鎖ホスホロチオエート結合オリゴデオキシヌクレオチドInfo
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- JPH07157498A JPH07157498A JP30621393A JP30621393A JPH07157498A JP H07157498 A JPH07157498 A JP H07157498A JP 30621393 A JP30621393 A JP 30621393A JP 30621393 A JP30621393 A JP 30621393A JP H07157498 A JPH07157498 A JP H07157498A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】一般式
【化１】
［式中、ｎは１乃至７の整数を表し、Ｂは各ヌクレオチ
ド単位において、独立に核酸塩基を示し、Ｘは、それぞ
れ独立にＳおよびＯ原子を示す。ただし、少なくともＸ
の１つはＳである。］で表される化合物又はその塩。 【効果】 本発明の化合物は、エイズ疾患の治療及び予
防薬として有用である。
ド単位において、独立に核酸塩基を示し、Ｘは、それぞ
れ独立にＳおよびＯ原子を示す。ただし、少なくともＸ
の１つはＳである。］で表される化合物又はその塩。 【効果】 本発明の化合物は、エイズ疾患の治療及び予
防薬として有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、優れた抗ウイルス作用
を有する新規な短鎖ホスホロチオエート結合オリゴデオ
キシリボヌクレオチドに関する。
を有する新規な短鎖ホスホロチオエート結合オリゴデオ
キシリボヌクレオチドに関する。
【０００２】
【従来の技術】ある遺伝子に相補的な配列を有するオリ
ゴデオキシリボヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌク
レオチド）はその遺伝子の機能発現を阻害することが知
られている。また、ウイルス遺伝子又は癌遺伝子に対す
るオリゴデオキシリボヌクレオチドはその遺伝子の機能
を阻害することにより、それぞれウイルスの複製又は細
胞の増殖を阻害しうることが報告されている（P. C. Za
mecnik, M. L. Stephenson, Proc. Natl. Acad. USA, 7
5 巻, 1 号, 280 頁（1978）およびP. C. Zamicnik, J.
Goodchild, Y. Taguchi, Sarin, S. J., Proc. Natl.
Acad. USA, 83 巻, 6 号, 4143頁（1986））。
ゴデオキシリボヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌク
レオチド）はその遺伝子の機能発現を阻害することが知
られている。また、ウイルス遺伝子又は癌遺伝子に対す
るオリゴデオキシリボヌクレオチドはその遺伝子の機能
を阻害することにより、それぞれウイルスの複製又は細
胞の増殖を阻害しうることが報告されている（P. C. Za
mecnik, M. L. Stephenson, Proc. Natl. Acad. USA, 7
5 巻, 1 号, 280 頁（1978）およびP. C. Zamicnik, J.
Goodchild, Y. Taguchi, Sarin, S. J., Proc. Natl.
Acad. USA, 83 巻, 6 号, 4143頁（1986））。
【０００３】しかしながら、天然型のオリゴデオキシリ
ボヌクレオチドは細胞内への取込み効率が低いこと、ヌ
クレアーゼによる分解を受けやすいこと等の理由によ
り、抗ウイルス剤あるいは抗腫瘍剤としての薬効および
その持続性に問題があった。
ボヌクレオチドは細胞内への取込み効率が低いこと、ヌ
クレアーゼによる分解を受けやすいこと等の理由によ
り、抗ウイルス剤あるいは抗腫瘍剤としての薬効および
その持続性に問題があった。
【０００４】このような欠点を補うために、天然型のオ
リゴデオキシリボヌクレオチドについての誘導体が種々
合成され、ウイルス感染細胞あるいは癌遺伝子を有する
細胞（腫瘍細胞）に対する効果について研究されてき
た。特に、ホスホジエステル結合部分の水酸基をメチル
基で置換したメチルホスホネートオリゴデオキシリボヌ
クレオチド（米国特許4, 511, 713 号）やホスホジエス
テル結合の酸素原子を硫黄原子で置換したホスホロチオ
エートオリゴデオキシリボヌクレオチド（日本国特許出
願平1-503302）については、ウイルスの感染や腫瘍細胞
に対してコロニー形成率の低下や増殖阻害を引き起こす
ことが見出され、抗ウイルス剤、抗腫瘍剤としての薬効
が確認されている。
リゴデオキシリボヌクレオチドについての誘導体が種々
合成され、ウイルス感染細胞あるいは癌遺伝子を有する
細胞（腫瘍細胞）に対する効果について研究されてき
た。特に、ホスホジエステル結合部分の水酸基をメチル
基で置換したメチルホスホネートオリゴデオキシリボヌ
クレオチド（米国特許4, 511, 713 号）やホスホジエス
テル結合の酸素原子を硫黄原子で置換したホスホロチオ
エートオリゴデオキシリボヌクレオチド（日本国特許出
願平1-503302）については、ウイルスの感染や腫瘍細胞
に対してコロニー形成率の低下や増殖阻害を引き起こす
ことが見出され、抗ウイルス剤、抗腫瘍剤としての薬効
が確認されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかし、これらアンチ
センスオリゴデオキシリボヌクレオチドが、その作用を
示すためには、生体内で標的とするＲＮＡもしくはＤＮ
Ａと安定なハイブリッドを形成しなければならず、その
ためには、１０〜２０ヌクレオチド程度以上の長さのオ
リゴデオキシリボヌクレオチドであることが必要とされ
ていた（Sarin, P. S., Agrawal, S., Civeira, M. D.,
Goodchild, J., Ikeuchi, T. and Zamecnik, P. C., P
roc. Natl. Acad. Sci.,85、20、7448(1988)）。ここで、
一般に、長さが１０ヌクレオチド程度以上のものは、合
成コストの問題により、その実用化が困難であった。ま
た、これらアンチセンスオリゴデオキシリボヌクレオチ
ドによるウイルスの複製又は細胞の増殖阻害活性も十分
満足するものとはいえず、さらに、宿主の正常細胞に対
する毒性も比較的高かった。
センスオリゴデオキシリボヌクレオチドが、その作用を
示すためには、生体内で標的とするＲＮＡもしくはＤＮ
Ａと安定なハイブリッドを形成しなければならず、その
ためには、１０〜２０ヌクレオチド程度以上の長さのオ
リゴデオキシリボヌクレオチドであることが必要とされ
ていた（Sarin, P. S., Agrawal, S., Civeira, M. D.,
Goodchild, J., Ikeuchi, T. and Zamecnik, P. C., P
roc. Natl. Acad. Sci.,85、20、7448(1988)）。ここで、
一般に、長さが１０ヌクレオチド程度以上のものは、合
成コストの問題により、その実用化が困難であった。ま
た、これらアンチセンスオリゴデオキシリボヌクレオチ
ドによるウイルスの複製又は細胞の増殖阻害活性も十分
満足するものとはいえず、さらに、宿主の正常細胞に対
する毒性も比較的高かった。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、これまで
特異的な阻害活性を発揮しえないと考えられていた９ヌ
クレオチド以下のオリゴデオキシリボヌクレオチドにつ
いて、種々の塩基配列、各塩基間の結合を鋭意検討した
結果、特定の塩基配列からなるホスホロチオエート結合
を含むオリゴデオキシリボヌクレオチドが、顕著に高い
抗エイズウイルス作用を有し、宿主の正常細胞に対する
毒性は低く、かつ、合成も比較的容易で実用性があるこ
とを見出し、本発明を完成するに至った。
特異的な阻害活性を発揮しえないと考えられていた９ヌ
クレオチド以下のオリゴデオキシリボヌクレオチドにつ
いて、種々の塩基配列、各塩基間の結合を鋭意検討した
結果、特定の塩基配列からなるホスホロチオエート結合
を含むオリゴデオキシリボヌクレオチドが、顕著に高い
抗エイズウイルス作用を有し、宿主の正常細胞に対する
毒性は低く、かつ、合成も比較的容易で実用性があるこ
とを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】本発明の新規な短鎖ホスホロチオエート結
合オリゴデオキシリボヌクレオチドは、一般式
合オリゴデオキシリボヌクレオチドは、一般式
【０００８】
【化２】
【０００９】を有する。
【００１０】上式（１）において、ｎは１乃至７の整数
を表し、Ｂは各ヌクレオチド単位において、独立に核酸
塩基を示し、Ｘは、それぞれ独立にＳ又はＯ原子を示
す。ただし、少なくともＸの１つはＳである。
を表し、Ｂは各ヌクレオチド単位において、独立に核酸
塩基を示し、Ｘは、それぞれ独立にＳ又はＯ原子を示
す。ただし、少なくともＸの１つはＳである。
【００１１】前記式（１）において、Ｂの核酸塩基は、
天然の核酸に含まれる塩基であり、好適には、アデニン
（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、チミン
（Ｔ）である。
天然の核酸に含まれる塩基であり、好適には、アデニン
（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、チミン
（Ｔ）である。
【００１２】前記式（１）において、ｎは好適には、１
乃至６の整数である。
乃至６の整数である。
【００１３】前記式（１）において、化合物全体におけ
る塩基配列に関し、好適なものとしては、５’末端から
４番目のヌクレオチド単位の核酸塩基がグアニンのもの
であり、さらに好適なものとしては下記α群に記載のも
のであり、最も好適なものとしては下記β群に記載のも
のである。
る塩基配列に関し、好適なものとしては、５’末端から
４番目のヌクレオチド単位の核酸塩基がグアニンのもの
であり、さらに好適なものとしては下記α群に記載のも
のであり、最も好適なものとしては下記β群に記載のも
のである。
【００１４】なお、αおよびβ群中、Ａはアデニン、Ｇ
はグアニン、Ｃはシトシン、Ｔはチミンを示す。また、
各配列の左端が５’末端であり、右端が３’末端であ
る。
はグアニン、Ｃはシトシン、Ｔはチミンを示す。また、
各配列の左端が５’末端であり、右端が３’末端であ
る。
【００１５】（α群） ＴＧＧＧＡＧ、ＴＧＧＧＡ、Ｔ
ＧＧＧＧ、ＴＧＧＧ、ＴＧＧＧＡＧＧ、ＣＧＧＧＡＧ
Ｇ、ＴＴＧＧＡＧＧ、ＴＴＧＧＧＡＧＧ、ＴＧＣＧＡＧ
Ｇ、ＧＧＧＧＡＧＧ、ＣＴＧＧＧＡＧＧ、ＧＧＧＣＧＧ
ＧＧＣ、ＴＡＧＧＡＧＧ、ＴＧＧＧＡＧＧＴ、ＴＧＧＧ
ＣＧＣＡＧ、ＣＣＧ、ＴＣＧＧＡＧＧ、ＧＴＧＧＧＡＧ
Ｇ、ＴＧＧ、ＴＧＧＧＡＧＡ、ＡＡＴＧＧＧＡＧＧ （β群）ＴＧＧＧＡＧ、ＴＧＧＧＡ、ＴＧＧＧＧ、ＴＧ
ＧＧ、ＴＧＧＧＡＧＧ、ＣＧＧＧＡＧＧ、ＴＴＧＧＡＧ
Ｇ、ＴＴＧＧＧＡＧＧ、ＴＧＣＧＡＧＧ、ＧＧＧＧＡＧ
Ｇ、ＣＴＧＧＧＡＧＧ 本発明の前記式（１）を有する化合物は、塩の形で使用
することができる。そのような塩としては、例えばナト
リウム、カリウムのようなアルカリ金属；カルシウムの
ようなアルカリ土類金属；アンモニア；リジン、アルギ
ニンのような塩基性アミノ酸；トリエチルアミンのよう
なアルキルアミン類；などの無機塩類又は有機塩類を挙
げることができ、好適にはナトリウム、カリウムのよう
なアルカリ金属塩である。
ＧＧＧＧ、ＴＧＧＧ、ＴＧＧＧＡＧＧ、ＣＧＧＧＡＧ
Ｇ、ＴＴＧＧＡＧＧ、ＴＴＧＧＧＡＧＧ、ＴＧＣＧＡＧ
Ｇ、ＧＧＧＧＡＧＧ、ＣＴＧＧＧＡＧＧ、ＧＧＧＣＧＧ
ＧＧＣ、ＴＡＧＧＡＧＧ、ＴＧＧＧＡＧＧＴ、ＴＧＧＧ
ＣＧＣＡＧ、ＣＣＧ、ＴＣＧＧＡＧＧ、ＧＴＧＧＧＡＧ
Ｇ、ＴＧＧ、ＴＧＧＧＡＧＡ、ＡＡＴＧＧＧＡＧＧ （β群）ＴＧＧＧＡＧ、ＴＧＧＧＡ、ＴＧＧＧＧ、ＴＧ
ＧＧ、ＴＧＧＧＡＧＧ、ＣＧＧＧＡＧＧ、ＴＴＧＧＡＧ
Ｇ、ＴＴＧＧＧＡＧＧ、ＴＧＣＧＡＧＧ、ＧＧＧＧＡＧ
Ｇ、ＣＴＧＧＧＡＧＧ 本発明の前記式（１）を有する化合物は、塩の形で使用
することができる。そのような塩としては、例えばナト
リウム、カリウムのようなアルカリ金属；カルシウムの
ようなアルカリ土類金属；アンモニア；リジン、アルギ
ニンのような塩基性アミノ酸；トリエチルアミンのよう
なアルキルアミン類；などの無機塩類又は有機塩類を挙
げることができ、好適にはナトリウム、カリウムのよう
なアルカリ金属塩である。
【００１６】ホスホロチオエート結合を含むオリゴデオ
キシリボヌクレオチドは通常のオリゴデオキシリボヌク
レオチド同様、標準溶液方法、又は自動シンセサイザ
ー、例えば、アプライド・バイオシステムズ社のホスホ
ロアミダイト法によるモデル３８０Ｂを用いて、同社の
使用マニュアルに従い、合成しうるが、この方法に限定
されるわけではない。
キシリボヌクレオチドは通常のオリゴデオキシリボヌク
レオチド同様、標準溶液方法、又は自動シンセサイザ
ー、例えば、アプライド・バイオシステムズ社のホスホ
ロアミダイト法によるモデル３８０Ｂを用いて、同社の
使用マニュアルに従い、合成しうるが、この方法に限定
されるわけではない。
【００１７】本発明のホスホロチオエート結合を有する
オリゴデオキシリボヌクレオチドは、アプライド・バイ
オシステムズ社のＤＮＡ合成機モデル３８０Ｂで、ホス
ホロアミダイトを用いる同社の使用マニュアルに従って
合成することができる。
オリゴデオキシリボヌクレオチドは、アプライド・バイ
オシステムズ社のＤＮＡ合成機モデル３８０Ｂで、ホス
ホロアミダイトを用いる同社の使用マニュアルに従って
合成することができる。
【００１８】得られる５’末端にジメトキシトリチルを
有し、リン酸部にシアノエチル基を有し、かつ、ＣＰＧ
（コントロールドポアグラスカラム）に結合した目的の
塩基配列を有するホスホロチオエート結合オリゴデオキ
シヌクレオチド−ＣＰＧ複合体に、アンモニア水を作用
させて、ＣＰＧを除去し、さらに加熱して、脱シアノエ
チル化（５５℃、８時間）を行うことにより、５’末端
にジメトキシトリチルを有するホスホロチオエートオリ
ゴマーが得られる。次に、窒素を吹き付けて、アンモニ
アを留去した後、０．１Ｍトリエチルアミンアセテート
緩衝液を加える。この溶液を逆相ＨＰＬＣ（ナカライテ
スク社；５Ｃ１８ＡＲ、０．１Ｍトリエチルアミンアセ
テート緩衝液、ｐＨ７−アセトニトリル（２０％、１５
分で４５％に増加；流速9ml/min.））を用いて精製する
と、純粋な５’末端にジメトキシトリチルを有するホス
ホロチオエートオリゴマーの溶液が得られる。この溶液
に、２倍液量の０．１Ｍトリエチルアミンアセテート緩
衝液（実施例では、０．２５ｍｌ）を加え、全体をSep-
Pak （ウォーターズ社）に付す。０．２％のトリフルオ
ロ酢酸（実施例では、０．２５ｍｌ）でカラムを洗浄
し、さらに０．２％のトリフルオロ酢酸（実施例では、
０．２５ｍｌ）を加え、カラムを閉じ、そのまま、室温
にて２０分乃至１時間放置することにより、ジメトキシ
トリチル基を除去する。
有し、リン酸部にシアノエチル基を有し、かつ、ＣＰＧ
（コントロールドポアグラスカラム）に結合した目的の
塩基配列を有するホスホロチオエート結合オリゴデオキ
シヌクレオチド−ＣＰＧ複合体に、アンモニア水を作用
させて、ＣＰＧを除去し、さらに加熱して、脱シアノエ
チル化（５５℃、８時間）を行うことにより、５’末端
にジメトキシトリチルを有するホスホロチオエートオリ
ゴマーが得られる。次に、窒素を吹き付けて、アンモニ
アを留去した後、０．１Ｍトリエチルアミンアセテート
緩衝液を加える。この溶液を逆相ＨＰＬＣ（ナカライテ
スク社；５Ｃ１８ＡＲ、０．１Ｍトリエチルアミンアセ
テート緩衝液、ｐＨ７−アセトニトリル（２０％、１５
分で４５％に増加；流速9ml/min.））を用いて精製する
と、純粋な５’末端にジメトキシトリチルを有するホス
ホロチオエートオリゴマーの溶液が得られる。この溶液
に、２倍液量の０．１Ｍトリエチルアミンアセテート緩
衝液（実施例では、０．２５ｍｌ）を加え、全体をSep-
Pak （ウォーターズ社）に付す。０．２％のトリフルオ
ロ酢酸（実施例では、０．２５ｍｌ）でカラムを洗浄
し、さらに０．２％のトリフルオロ酢酸（実施例では、
０．２５ｍｌ）を加え、カラムを閉じ、そのまま、室温
にて２０分乃至１時間放置することにより、ジメトキシ
トリチル基を除去する。
【００１９】カラムを０．１Ｍトリエチルアミンアセテ
ート緩衝液（実施例では、５ｍｌ）で洗浄し、５０％ア
セトニトリル−０．１Ｍトリエチルアミンアセテート緩
衝液で本発明の目的物を溶出する。得られた溶液を凍結
乾燥して、目的化合物を得ることができる。
ート緩衝液（実施例では、５ｍｌ）で洗浄し、５０％ア
セトニトリル−０．１Ｍトリエチルアミンアセテート緩
衝液で本発明の目的物を溶出する。得られた溶液を凍結
乾燥して、目的化合物を得ることができる。
【００２０】本方法によれば、１μｍｏｌｅのＣＰＧを
用いることにより、２００μｇ乃至１ｍｇの目的物が得
られる。
用いることにより、２００μｇ乃至１ｍｇの目的物が得
られる。
【００２１】上記ホスホロアミダイト法により、以下に
示す実施例化合物を合成した。
示す実施例化合物を合成した。
【００２２】
【００２３】
【表１】 ────────────────────────── 実施例 配列 保持時間（分） ────────────────────────── １ ＡＡＴＧＧＧＡＧＧ ８．４４ ２ ＴＧＧＧＣＧＣＡＧ ８．３８ ３ ＣＴＧＧＧＡＧＧ ８．２７ ４ ＧＴＧＧＧＡＧＧ ８．２７ ５ ＴＧＧＧＡＧＧＴ ８．３４ ６ ＴＴＧＧＧＡＧＧ ８．４４ ７ ＣＧＧＧＡＧＧ ８．２１ ８ ＧＧＧＧＡＧＧ ８．１８ ９ ＴＡＧＧＡＧＧ ８．４２ １０ ＴＣＧＧＡＧＧ ８．３２ １１ ＴＧＣＧＡＧＧ ８．３５ １２ ＴＧＧＧＡＧＡ ８．３２ １３ ＴＧＧＧＡＧＧ ８．３０ １４ ＴＴＧＧＡＧＧ ８．３６ １５ ＴＧＧＧＡＧ ８．３９ １６ ＴＧＧＧＡ ８．３０ １７ ＴＧＧＧＧ ８．２２ １８ ＴＧＧＧ ８．２０ １９ ＣＣＧ ８．０２ ２０ ＴＧＧ ８．１１ ２１ ＧＧＧＣＧＧＧＧＣ ８．１６ ──────────────────────────
【００２４】
【発明の効果】本発明の化合物はエイズウイルス（ＨＩ
Ｖ−１）に対して、特異的な障害活性を有し、感染細胞
における本ウイルスの増殖を特異的に抑制しうる、した
がって、本発明の化合物はエイズ疾患の治療および予防
薬として有用である。
Ｖ−１）に対して、特異的な障害活性を有し、感染細胞
における本ウイルスの増殖を特異的に抑制しうる、した
がって、本発明の化合物はエイズ疾患の治療および予防
薬として有用である。
【００２５】以下に、試験例を挙げて、本発明による効
果を具体的に説明する。
果を具体的に説明する。
【００２６】
１。抗ＨＩＶ−１活性の測定 抗ＨＩＶ−１活性の測定はパウエルらの方法によって測
定した（Pauel, R. etal, J. Virological Methods, 20
巻, 309 頁(1988)）。すなわち、対数増殖期にあるＭ
Ｔ−４細胞を150 x g で５分間遠心し、得られた細胞沈
澱を培地にて懸濁した後、ＨＩＶ−１（IIIB型）を10 C
CID50 の濃度で３７℃１時間感染させた。その後、牛胎
児血清10% を含むRMPI-1640 培地（以下「血清培地」と
称する）で遠心し、洗浄することによりＨＩＶ−１感染
ＭＴ−４細胞を得た。
定した（Pauel, R. etal, J. Virological Methods, 20
巻, 309 頁(1988)）。すなわち、対数増殖期にあるＭ
Ｔ−４細胞を150 x g で５分間遠心し、得られた細胞沈
澱を培地にて懸濁した後、ＨＩＶ−１（IIIB型）を10 C
CID50 の濃度で３７℃１時間感染させた。その後、牛胎
児血清10% を含むRMPI-1640 培地（以下「血清培地」と
称する）で遠心し、洗浄することによりＨＩＶ−１感染
ＭＴ−４細胞を得た。
【００２７】ＨＩＶ−１感染ＭＴ−４細胞およびＨＩＶ
−１非感染ＭＴ−４細胞をそれぞれ4x105 細胞／mlにな
るように血清培地にて懸濁した。96穴プラスチックマイ
クロタイタープレート中にあらかじめ段階希釈した検体
化合物溶液（血清培地に懸濁したもの）を各穴に100 μ
l づつ入れ、ついでこの各穴に上記細胞懸濁液を各々10
0 μl づつ添加し、5%の炭酸ガス存在下で６日間静置培
養した。
−１非感染ＭＴ−４細胞をそれぞれ4x105 細胞／mlにな
るように血清培地にて懸濁した。96穴プラスチックマイ
クロタイタープレート中にあらかじめ段階希釈した検体
化合物溶液（血清培地に懸濁したもの）を各穴に100 μ
l づつ入れ、ついでこの各穴に上記細胞懸濁液を各々10
0 μl づつ添加し、5%の炭酸ガス存在下で６日間静置培
養した。
【００２８】同様に、検体化合物添加のＨＩＶ−１感染
ＭＴ−４細胞および検体化合物無添加のＨＩＶ−１非感
染ＭＴ−４細胞を培養した。
ＭＴ−４細胞および検体化合物無添加のＨＩＶ−１非感
染ＭＴ−４細胞を培養した。
【００２９】培養終了後、MTT(3-(4,5-dimethylthiazol
e-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide)法に基づ
き、生細胞を測定し（L. M. Green et al, J. Immunol.
Methods, 70巻, 257 頁(1984)）、ＨＩＶ−１による細
胞障害活性を求めた。検体化合物無添加のＨＩＶ−１感
染ＭＴ−４細胞の細胞障害活性を100%とし、検体化合物
無添加のＨＩＶ−１（IIIB型）非感染ＭＴ−４細胞の細
胞障害活性を0%として、ＨＩＶ−１感染ＭＴ−４細胞の
細胞障害活性を50% 阻害しうる検体の濃度（IC50）を求
めた。また、検体化合物の細胞毒性活性として、ＨＩＶ
−１非感染ＭＴ−４細胞の増殖を50% 阻害する濃度（CC
50）を求めた。これらの測定結果を表２に示す。
e-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide)法に基づ
き、生細胞を測定し（L. M. Green et al, J. Immunol.
Methods, 70巻, 257 頁(1984)）、ＨＩＶ−１による細
胞障害活性を求めた。検体化合物無添加のＨＩＶ−１感
染ＭＴ−４細胞の細胞障害活性を100%とし、検体化合物
無添加のＨＩＶ−１（IIIB型）非感染ＭＴ−４細胞の細
胞障害活性を0%として、ＨＩＶ−１感染ＭＴ−４細胞の
細胞障害活性を50% 阻害しうる検体の濃度（IC50）を求
めた。また、検体化合物の細胞毒性活性として、ＨＩＶ
−１非感染ＭＴ−４細胞の増殖を50% 阻害する濃度（CC
50）を求めた。これらの測定結果を表２に示す。
【００３０】その結果、表２に挙げた修飾オリゴデオキ
シリボヌクレオチドはいずれも、特に高い抗ＨＩＶ−１
活性を有することが明かとなった。
シリボヌクレオチドはいずれも、特に高い抗ＨＩＶ−１
活性を有することが明かとなった。
【００３１】これらの化合物はいずれも２０μｇ／ｍｌ
以下の濃度で抗ＨＩＶ−１活性を示した。
以下の濃度で抗ＨＩＶ−１活性を示した。
【００３２】
【表２】
【００３３】
【製剤例１】（注射剤） 1.5 重量% の実施例９の化合物を、10容量% のプロピレ
ングリコール中で撹拌し、次いで、注射用水で一定量に
した後、滅菌して製造した。
ングリコール中で撹拌し、次いで、注射用水で一定量に
した後、滅菌して製造した。
【００３４】
【製剤例２】（ハードカプセル剤） 標準二分式ハードゼラチンカプセルの各々に、100mg の
粉末状の実施例９の化合物、１５０ｍｇのラクトース、
５０ｍｇのセルロースおよび６ｍｇのステアリン酸マグ
ネシウムを充填することにより、単位カプセルを製造
し、洗浄後、乾燥した。
粉末状の実施例９の化合物、１５０ｍｇのラクトース、
５０ｍｇのセルロースおよび６ｍｇのステアリン酸マグ
ネシウムを充填することにより、単位カプセルを製造
し、洗浄後、乾燥した。
【００３５】
【製剤例３】（ソフトカプセル剤） 消下性油状物、例えば、大豆油、綿実油又はオリーブ油
中に入れた、実施例９の化合物の混合物を調製し、正置
換ポンプでゼラチン中に注入して、１００ｍｇの活性成
分を含有するソフトカプセルを得、洗浄後、乾燥した。
中に入れた、実施例９の化合物の混合物を調製し、正置
換ポンプでゼラチン中に注入して、１００ｍｇの活性成
分を含有するソフトカプセルを得、洗浄後、乾燥した。
【００３６】
【製剤例４】（錠剤） 常法に従って、１００ｍｇの実施例９の化合物、０．２
ｍｇのコロイド性二酸化珪素、５ｍｇのステアリン酸マ
グネシウム、２７５ｍｇの微結晶性セルロース、１１ｍ
ｇのデンプンおよび９８．８ｍｇのラクトースを用いて
製造した。
ｍｇのコロイド性二酸化珪素、５ｍｇのステアリン酸マ
グネシウム、２７５ｍｇの微結晶性セルロース、１１ｍ
ｇのデンプンおよび９８．８ｍｇのラクトースを用いて
製造した。
Claims (6)
- 【請求項１】一般式 【化１】 ［式中、ｎは１乃至７の整数を表し、Ｂは各ヌクレオチ
ド単位において、独立に核酸塩基を示し、Ｘは、それぞ
れ独立にＳおよびＯ原子を示す。ただし、少なくともＸ
の１つはＳである。］で表される化合物又はその塩。 - 【請求項２】請求項１において、すべてのＸがＳである
化合物又はその塩。 - 【請求項３】請求項２において、ｎが１乃至６である化
合物又はその塩。 - 【請求項４】請求項２において、ｎが１乃至６であり、
５’末端から４番目のヌクレオチド単位の核酸塩基がグ
アニンである化合物又はその塩。 - 【請求項５】請求項２において、化合物Ｉ全体における
塩基配列が、下記α群から選択される塩基配列である化
合物又はその塩。 （α群） ＴＧＧＧＡＧ、ＴＧＧＧＡ、ＴＧＧＧＧ、Ｔ
ＧＧＧ、ＴＧＧＧＡＧＧ、ＣＧＧＧＡＧＧ、ＴＴＧＧＡ
ＧＧ、ＴＴＧＧＧＡＧＧ、ＴＧＣＧＡＧＧ、ＧＧＧＧＡ
ＧＧ、ＣＴＧＧＧＡＧＧ、ＧＧＧＣＧＧＧＧＣ、ＴＡＧ
ＧＡＧＧ、ＴＧＧＧＡＧＧＴ、ＴＧＧＧＣＧＣＡＧ、Ｃ
ＣＧ、ＴＣＧＧＡＧＧ、ＧＴＧＧＧＡＧＧ、ＴＧＧ、Ｔ
ＧＧＧＡＧＡ、ＡＡＴＧＧＧＡＧＧ（但し、各配列の左
末端が５’末端であり、右末端が３’末端である。） - 【請求項６】請求項２において、化合物Ｉ全体における
塩基配列が、下記β群から選択される塩基配列である化
合物又はその塩。 （β群）ＴＧＧＧＡＧ、ＴＧＧＧＡ、ＴＧＧＧＧ、ＴＧ
ＧＧ、ＴＧＧＧＡＧＧ、ＣＧＧＧＡＧＧ、ＴＴＧＧＡＧ
Ｇ、ＴＴＧＧＧＡＧＧ、ＴＧＣＧＡＧＧ、ＧＧＧＧＡＧ
Ｇ、ＣＴＧＧＧＡＧＧ（但し、各配列の左末端が５’末
端であり、右末端が３’末端である。）
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30621393A JPH07157498A (ja) | 1993-12-07 | 1993-12-07 | 短鎖ホスホロチオエート結合オリゴデオキシヌクレオチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30621393A JPH07157498A (ja) | 1993-12-07 | 1993-12-07 | 短鎖ホスホロチオエート結合オリゴデオキシヌクレオチド |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07157498A true JPH07157498A (ja) | 1995-06-20 |
Family
ID=17954357
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30621393A Pending JPH07157498A (ja) | 1993-12-07 | 1993-12-07 | 短鎖ホスホロチオエート結合オリゴデオキシヌクレオチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07157498A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6172217B1 (en) | 1996-12-27 | 2001-01-09 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Method of synthesizing phosphorothioate oligonucleotides |
-
1993
- 1993-12-07 JP JP30621393A patent/JPH07157498A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6172217B1 (en) | 1996-12-27 | 2001-01-09 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Method of synthesizing phosphorothioate oligonucleotides |
| US6403781B2 (en) * | 1996-12-27 | 2002-06-11 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Method of synthesizing phosphorothioate oligonucleotides |
| US6780989B2 (en) * | 1996-12-27 | 2004-08-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Diribonucleoside Phosphoramidites |
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