JPH07107970A - 動物細胞の培養方法 - Google Patents
動物細胞の培養方法Info
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- JPH07107970A JPH07107970A JP5039919A JP3991993A JPH07107970A JP H07107970 A JPH07107970 A JP H07107970A JP 5039919 A JP5039919 A JP 5039919A JP 3991993 A JP3991993 A JP 3991993A JP H07107970 A JPH07107970 A JP H07107970A
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【構成】 一般式（Ｉ）または（II）の化合物を用いて
動物細胞を培養する。 （式中のＸはアルキレン基またはヒドロキシ基置換アル
キレン基を示す） （式中のＸは、アルキレン基またはヒドロキシ基置換ア
ルキレン基を示す） 【効果】 抗体産生は顕著に増大する。
動物細胞を培養する。 （式中のＸはアルキレン基またはヒドロキシ基置換アル
キレン基を示す） （式中のＸは、アルキレン基またはヒドロキシ基置換ア
ルキレン基を示す） 【効果】 抗体産生は顕著に増大する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、動物細胞の培養方法
に関するものである。さらに詳しく言えば、この発明
は、抗体産生を増大させる動物細胞培養方法に関するも
のである。
に関するものである。さらに詳しく言えば、この発明
は、抗体産生を増大させる動物細胞培養方法に関するも
のである。
【０００２】
【従来の技術】従来より、動物細胞を培養して、インシ
ュリン、インターフェロン、成長ホルモン、抗体などの
生理活性物質を生産する試みがなされている。このう
ち、抗体は、生体の免疫作用に関係するタンパク質で、
種々の疾病の診断や治療への利用が進められている。
ュリン、インターフェロン、成長ホルモン、抗体などの
生理活性物質を生産する試みがなされている。このう
ち、抗体は、生体の免疫作用に関係するタンパク質で、
種々の疾病の診断や治療への利用が進められている。
【０００３】動物細胞を培養する際には、培地に、アミ
ノ酸、ビタミン類や無機物を添加するとともに、細胞が
生存できるｐＨを維持するためにｐＨ緩衝剤を添加して
いる。このようなｐＨ緩衝剤としては、グッドｐＨ緩衝
剤のひとつである、２−（４−（２−ヒドロキシエチ
ル）−１−ピペラジニル）エタンスルホン酸（以下 Ｈ
ＥＰＥＳと略記する）が広く用いられている。一方、抗
体の産生量を増大させるため、ラクトフェリン、カゼイ
ン、卵黄リポタンパク質などの抗体産生増殖因子（以下
ＩＰＳＦと略記する）を添加することが検討されてい
る。
ノ酸、ビタミン類や無機物を添加するとともに、細胞が
生存できるｐＨを維持するためにｐＨ緩衝剤を添加して
いる。このようなｐＨ緩衝剤としては、グッドｐＨ緩衝
剤のひとつである、２−（４−（２−ヒドロキシエチ
ル）−１−ピペラジニル）エタンスルホン酸（以下 Ｈ
ＥＰＥＳと略記する）が広く用いられている。一方、抗
体の産生量を増大させるため、ラクトフェリン、カゼイ
ン、卵黄リポタンパク質などの抗体産生増殖因子（以下
ＩＰＳＦと略記する）を添加することが検討されてい
る。
【０００４】しかしながら、これらのＩＰＳＦを用いる
場合には、これらのＩＰＳＦが高価である点や、品質に
差異があり、安定な細胞培養が困難であることに加え、
ＩＰＳＦ由来のタンパク質の高分子混合物から、目的と
する抗体の分離精製に多くの費用と労力を必要とするな
どの問題もあった。また、生理活性物質の産生に最適な
培養条件をととのえる重要な要素のひとつとして、ｐＨ
緩衝剤の種類と添加量が挙げられるが、一般に用いられ
ているＨＥＰＥＳはそのｐＨ緩衝領域や細胞の増殖能を
指標として選択されたものであり、必ずしも抗体の産生
に最適な培養環境を与えていないという問題もあった。
場合には、これらのＩＰＳＦが高価である点や、品質に
差異があり、安定な細胞培養が困難であることに加え、
ＩＰＳＦ由来のタンパク質の高分子混合物から、目的と
する抗体の分離精製に多くの費用と労力を必要とするな
どの問題もあった。また、生理活性物質の産生に最適な
培養条件をととのえる重要な要素のひとつとして、ｐＨ
緩衝剤の種類と添加量が挙げられるが、一般に用いられ
ているＨＥＰＥＳはそのｐＨ緩衝領域や細胞の増殖能を
指標として選択されたものであり、必ずしも抗体の産生
に最適な培養環境を与えていないという問題もあった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】そこで、この発明は、
上記の従来技術の問題点を解決するためになされたもの
であって、適当なｐＨ緩衝剤を添加し、抗体産生に最適
な培養環境を与えて抗体産生を増大させる動物細胞の培
養方法を提供することを目的としている。
上記の従来技術の問題点を解決するためになされたもの
であって、適当なｐＨ緩衝剤を添加し、抗体産生に最適
な培養環境を与えて抗体産生を増大させる動物細胞の培
養方法を提供することを目的としている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】この発明は、上記の課題
を解決するものとして、次の一般式（Ｉ）
を解決するものとして、次の一般式（Ｉ）
【０００７】
【化３】
【０００８】（式中のＸは、アルキレン基またはヒドロ
キシ基置換アルキレン基を示す）で示される化合物を用
いることを特徴とする動物細胞の培養方法を提供する。
また、この発明は、上記の課題を解決するものとして、
次の一般式（II）
キシ基置換アルキレン基を示す）で示される化合物を用
いることを特徴とする動物細胞の培養方法を提供する。
また、この発明は、上記の課題を解決するものとして、
次の一般式（II）
【０００９】
【化４】
【００１０】（式中のＸは、アルキレン基またはヒドロ
キシ基置換アルキレン基を示す）で示される化合物を用
いることを特徴とする動物細胞の培養方法をも提供す
る。この発明で、上記一般式（Ｉ）で示される化合物お
よび一般式（II）で示される化合物のいくつかは、上記
グッドｐＨ緩衝剤として知られており、生体成分の分離
や精製および組織培養を行なうにあたって、広く用いら
れている。そして、この発明では、一般式（Ｉ）で示さ
れる化合物としては、２−モルホリノエタンスルホン酸
（以下ＭＥＳと略記する）や、３−モルホリノプロパン
スルホン酸（以下ＭＯＰＳと略記する）が挙げられる。
また、一般式（II）で示される化合物としては、Ｎ−シ
クロヘキシル−３−アミノプロパンスルホン酸（以下Ｃ
ＡＰＳと略記する）やＮ−シクロヘキシル−２−ヒドロ
キシ−３−アミノプロパンスルホン酸（以下ＣＡＰＳＯ
と略記する）が挙げられる。
キシ基置換アルキレン基を示す）で示される化合物を用
いることを特徴とする動物細胞の培養方法をも提供す
る。この発明で、上記一般式（Ｉ）で示される化合物お
よび一般式（II）で示される化合物のいくつかは、上記
グッドｐＨ緩衝剤として知られており、生体成分の分離
や精製および組織培養を行なうにあたって、広く用いら
れている。そして、この発明では、一般式（Ｉ）で示さ
れる化合物としては、２−モルホリノエタンスルホン酸
（以下ＭＥＳと略記する）や、３−モルホリノプロパン
スルホン酸（以下ＭＯＰＳと略記する）が挙げられる。
また、一般式（II）で示される化合物としては、Ｎ−シ
クロヘキシル−３−アミノプロパンスルホン酸（以下Ｃ
ＡＰＳと略記する）やＮ−シクロヘキシル−２−ヒドロ
キシ−３−アミノプロパンスルホン酸（以下ＣＡＰＳＯ
と略記する）が挙げられる。
【００１１】一般式（Ｉ）で示される化合物および一般
式（II）で示される化合物の動物細胞培養のための培地
への添加量は、２．５ｍＭから７５ｍＭの濃度で、望ま
しくは、５ｍＭから５０ｍＭ添加すればよい。また、一
般式（Ｉ）で示される化合物および一般式（II）で示さ
れる化合物を組み合せて動物細胞培養のための培地への
添加してもよい。さらに、ＨＥＰＥＳなどの他のｐＨ緩
衝剤と一般式（Ｉ）で示される化合物および一般式（I
I）で示される化合物を組み合せて動物細胞培養のため
の培地への添加してもよい。実施例に示したように、ハ
イブリドーマＨＢ４Ｃ５細胞による抗体（ＩｇＭ）の生
産の際に、ＨＥＰＥＳの代りに一般式（Ｉ）で示される
化合物または一般式（II）で示される化合物を加えれ
ば、ＨＥＰＥＳを添加した際よりも、抗体の生産量を高
めることができる。
式（II）で示される化合物の動物細胞培養のための培地
への添加量は、２．５ｍＭから７５ｍＭの濃度で、望ま
しくは、５ｍＭから５０ｍＭ添加すればよい。また、一
般式（Ｉ）で示される化合物および一般式（II）で示さ
れる化合物を組み合せて動物細胞培養のための培地への
添加してもよい。さらに、ＨＥＰＥＳなどの他のｐＨ緩
衝剤と一般式（Ｉ）で示される化合物および一般式（I
I）で示される化合物を組み合せて動物細胞培養のため
の培地への添加してもよい。実施例に示したように、ハ
イブリドーマＨＢ４Ｃ５細胞による抗体（ＩｇＭ）の生
産の際に、ＨＥＰＥＳの代りに一般式（Ｉ）で示される
化合物または一般式（II）で示される化合物を加えれ
ば、ＨＥＰＥＳを添加した際よりも、抗体の生産量を高
めることができる。
【００１２】以上のことから、この発明は、抗体の産生
量を増大させる動物細胞培養方法として非常に有効であ
るといえる。この発明が適用できる動物細胞としては、
白血球やリンパ芽球細胞などの動物細胞に用いることが
できる。また、種々のミエローマと正常ひ臓細胞（Ｂ−
リンパ球など）が融合して生成するハイブリドーマ細胞
の培養に用いることができる。
量を増大させる動物細胞培養方法として非常に有効であ
るといえる。この発明が適用できる動物細胞としては、
白血球やリンパ芽球細胞などの動物細胞に用いることが
できる。また、種々のミエローマと正常ひ臓細胞（Ｂ−
リンパ球など）が融合して生成するハイブリドーマ細胞
の培養に用いることができる。
【００１３】ハイブリドーマ細胞の例としては、ＨＢ４
Ｃ５、ＡＥ６Ｆ４、ＡＤ２、ＨＦ１０Ｂ４、ＳＵ−１、
ＳＰＳ−６、ＭＣＢ−１、ＭＢ−４、ＢＤ９Ｄ１２、４
Ｄ１１、５Ｈ１１、ＥＭＫＦ７、６−３Ｃ８などが挙げ
られる。これらのハイブリドーマ細胞は、組織培養７
（２），５５−５９，１９８１に記載の方法で製造する
ことができ、またそれらはソーク インスチツート（Sa
lkInstitute（La Jolla California ））に保存され、
求めに応じ入手可能である。
Ｃ５、ＡＥ６Ｆ４、ＡＤ２、ＨＦ１０Ｂ４、ＳＵ−１、
ＳＰＳ−６、ＭＣＢ−１、ＭＢ−４、ＢＤ９Ｄ１２、４
Ｄ１１、５Ｈ１１、ＥＭＫＦ７、６−３Ｃ８などが挙げ
られる。これらのハイブリドーマ細胞は、組織培養７
（２），５５−５９，１９８１に記載の方法で製造する
ことができ、またそれらはソーク インスチツート（Sa
lkInstitute（La Jolla California ））に保存され、
求めに応じ入手可能である。
【００１４】動物細胞培養のための基礎培地として、一
般の動物細胞の培養に持ちいられるものであればいかな
るものも用いることができる。具体的に好適な基礎培地
としては、Dulbecco Modified Eagle Medium（ＤＭＥと
略記する）、Ｆ−１２、ＲＰＭＩ−１６４０、Ｅａｇｌ
ｅ培地（これらは「組織培養」、朝倉書店（１９８１第
５刷）、中井準之助ら編集、７〜２４頁に記載されてい
る）、Ｅ−ＲＤＦ（極東製薬工業社製）などの合成培地
が挙げられる。
般の動物細胞の培養に持ちいられるものであればいかな
るものも用いることができる。具体的に好適な基礎培地
としては、Dulbecco Modified Eagle Medium（ＤＭＥと
略記する）、Ｆ−１２、ＲＰＭＩ−１６４０、Ｅａｇｌ
ｅ培地（これらは「組織培養」、朝倉書店（１９８１第
５刷）、中井準之助ら編集、７〜２４頁に記載されてい
る）、Ｅ−ＲＤＦ（極東製薬工業社製）などの合成培地
が挙げられる。
【００１５】また、これらの基礎培地にインシュリン
（２〜１０μｇ／ｍｌ）、トランスフェリン（１０〜３
５μｇ／ｍｌ）、セレニウム（１×１０-10 〜１×１０
-8Ｍ）、ピルビン酸（０．５〜５ｍＭ）、テミジン（１
×１０-7〜１×１０-5）、ヒポキサンチン（１×１０-6
〜１×１０-4Ｍ）、エタノールアミン（１×１０-6〜１
×１０-4Ｍ）などを添加した培地も基礎培地として用い
ることができる。さらにまた、これらの基礎培地に、Ｅ
ＧＦ、ＦＧＦなどの動物細胞成長促進因子や血清アルブ
ミンなどを添加してもよい。また、ラクトフェリン、カ
ゼイン、卵黄リボタンパク質などの抗体産生増殖因子を
添加してもよい。
（２〜１０μｇ／ｍｌ）、トランスフェリン（１０〜３
５μｇ／ｍｌ）、セレニウム（１×１０-10 〜１×１０
-8Ｍ）、ピルビン酸（０．５〜５ｍＭ）、テミジン（１
×１０-7〜１×１０-5）、ヒポキサンチン（１×１０-6
〜１×１０-4Ｍ）、エタノールアミン（１×１０-6〜１
×１０-4Ｍ）などを添加した培地も基礎培地として用い
ることができる。さらにまた、これらの基礎培地に、Ｅ
ＧＦ、ＦＧＦなどの動物細胞成長促進因子や血清アルブ
ミンなどを添加してもよい。また、ラクトフェリン、カ
ゼイン、卵黄リボタンパク質などの抗体産生増殖因子を
添加してもよい。
【００１６】次に、実施例をあげて、さらに具体的に、
この発明のよる動物培養方法について説明するが、この
発明は、その要旨を越えない限り、以下の実施例に制約
されるものではない。
この発明のよる動物培養方法について説明するが、この
発明は、その要旨を越えない限り、以下の実施例に制約
されるものではない。
【００１７】
【実施例】実施例１ ハイブリドーマＨＢ４Ｃ５細胞（１×１０5 細胞／ｍ
ｌ）を、ＨＥＰＥＳを含まない極東Ｅ−ＲＤＦ培地（極
東製薬工業社製）にＩＴＥＳ培地（インシュリン５μｇ
／ｍｌ、トランスフェリン２０μｇ／ｍｌ、エタノール
アミン２０μＭ、亜セレン酸ナトリウム２０ｎＭいずれ
も最終濃度）を添加した培地（以下、ＩＴＥＳ−ＥＲＤ
Ｆ培地と略記する）に、ＭＥＳ、ＭＯＰＳ、ＣＡＰＳ、
またはＣＡＰＳＯを１５ｍＭの濃度となるように添加し
た培地で、３７℃で５％炭酸ガスインキュベータ中で４
日間培養した。培養後、培養液を遠心分離（５００×ｇ
５分間）して得られた培養上清中の抗体（ＩｇＭ）量
をＥＬＩＳＡ法で定量した。結果を表１に示した。
ｌ）を、ＨＥＰＥＳを含まない極東Ｅ−ＲＤＦ培地（極
東製薬工業社製）にＩＴＥＳ培地（インシュリン５μｇ
／ｍｌ、トランスフェリン２０μｇ／ｍｌ、エタノール
アミン２０μＭ、亜セレン酸ナトリウム２０ｎＭいずれ
も最終濃度）を添加した培地（以下、ＩＴＥＳ−ＥＲＤ
Ｆ培地と略記する）に、ＭＥＳ、ＭＯＰＳ、ＣＡＰＳ、
またはＣＡＰＳＯを１５ｍＭの濃度となるように添加し
た培地で、３７℃で５％炭酸ガスインキュベータ中で４
日間培養した。培養後、培養液を遠心分離（５００×ｇ
５分間）して得られた培養上清中の抗体（ＩｇＭ）量
をＥＬＩＳＡ法で定量した。結果を表１に示した。
【００１８】この表１から明らかなように、抗体産生量
は顕著に増加している。比較例１ 同様にしてＨＥＰＥＳについても定量し、その結果も表
１に示した。抗体産生量は、実施例１の場合に比べて小
さいことがわかる。
は顕著に増加している。比較例１ 同様にしてＨＥＰＥＳについても定量し、その結果も表
１に示した。抗体産生量は、実施例１の場合に比べて小
さいことがわかる。
【００１９】
【表１】
【００２０】実施例２ ＩＴＥＳ−ＥＲＤＦ培地に、ＭＥＳ、ＭＯＰＳ、ＣＡＰ
Ｓ、またはＣＡＰＳＯを５ｍＭから５０ｍＭの濃度で添
加し、実施例１と同様に培養した。培養上清中の抗体
（ＩｇＭ）量をＥＬＩＳＡ法で定量した。結果を表２に
示した。抗体産生量の増大が認められた。比較例２ ＩＴＥＳ−ＥＲＤＦ培地に、ＨＥＰＥＳを５ｍＭから５
０ｍＭの濃度で添加し、実施例１と同様に培養した。培
養上清中の抗体（ＩｇＭ）量をＥＬＩＳＡ法で定量し
た。結果を表２に示した。抗体産生量は実施例２に比べ
て劣っていた。
Ｓ、またはＣＡＰＳＯを５ｍＭから５０ｍＭの濃度で添
加し、実施例１と同様に培養した。培養上清中の抗体
（ＩｇＭ）量をＥＬＩＳＡ法で定量した。結果を表２に
示した。抗体産生量の増大が認められた。比較例２ ＩＴＥＳ−ＥＲＤＦ培地に、ＨＥＰＥＳを５ｍＭから５
０ｍＭの濃度で添加し、実施例１と同様に培養した。培
養上清中の抗体（ＩｇＭ）量をＥＬＩＳＡ法で定量し
た。結果を表２に示した。抗体産生量は実施例２に比べ
て劣っていた。
【００２１】
【表２】
【００２２】実施例３ ＩＴＥＳ−ＥＲＤＦ培地に、ＭＥＳおよびＭＯＰＳの各
々を１５ｍＭの濃度で添加し、表３に記載のハイブリド
ーマ細胞を実施例１と同様に培養した。培養後、培養上
清中の抗体（ＩｇＭ）量をＥＬＩＳＡ法で定量した。結
果を表３に示した。抗体産生量の増大が認められた。比較例３ ＩＴＥＳ−ＥＲＤＦ培地に、ＨＥＰＥＳを１５ｍＭの濃
度で添加し、実施例３と同様に培養した。培養上清中の
抗体（ＩｇＭ）量をＥＬＩＳＡ法で定量した。結果を表
２に示した。
々を１５ｍＭの濃度で添加し、表３に記載のハイブリド
ーマ細胞を実施例１と同様に培養した。培養後、培養上
清中の抗体（ＩｇＭ）量をＥＬＩＳＡ法で定量した。結
果を表３に示した。抗体産生量の増大が認められた。比較例３ ＩＴＥＳ−ＥＲＤＦ培地に、ＨＥＰＥＳを１５ｍＭの濃
度で添加し、実施例３と同様に培養した。培養上清中の
抗体（ＩｇＭ）量をＥＬＩＳＡ法で定量した。結果を表
２に示した。
【００２３】
【表３】
【００２４】
【発明の効果】この発明によって、以上詳しく説明した
通り、抗体産生の顕著な増大が可能な動物細胞培養が可
能となる。
通り、抗体産生の顕著な増大が可能な動物細胞培養が可
能となる。
Claims (2)
- 【請求項１】 一般式（Ｉ） 【化１】 （式中のＸはアルキレン基またはヒドロキシ基置換アル
キレン基を示す）で示される化合物を用いることを特徴
とする動物細胞の培養方法。 - 【請求項２】 一般式（II） 【化２】 （式中のＸは、アルキレン基またはヒドロキシ基置換ア
ルキレン基を示す）で示される化合物を用いることを特
徴とする動物細胞の培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5039919A JPH07107970A (ja) | 1993-03-01 | 1993-03-01 | 動物細胞の培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5039919A JPH07107970A (ja) | 1993-03-01 | 1993-03-01 | 動物細胞の培養方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07107970A true JPH07107970A (ja) | 1995-04-25 |
Family
ID=12566352
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5039919A Pending JPH07107970A (ja) | 1993-03-01 | 1993-03-01 | 動物細胞の培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07107970A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014030726A1 (ja) * | 2012-08-23 | 2014-02-27 | 日産化学工業株式会社 | タンパク質産生促進剤 |
| JPWO2013147264A1 (ja) * | 2012-03-30 | 2015-12-14 | 味の素株式会社 | 硫酸化化合物を含む幹細胞増殖用培地 |
| US9664671B2 (en) | 2012-07-24 | 2017-05-30 | Nissan Chemical Industries, Ltd. | Culture medium composition and method of culturing cell or tissue using thereof |
| US10017805B2 (en) | 2012-08-23 | 2018-07-10 | Nissan Chemical Industries, Ltd. | Enhancing ingredients for protein production from various cells |
-
1993
- 1993-03-01 JP JP5039919A patent/JPH07107970A/ja active Pending
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2013147264A1 (ja) * | 2012-03-30 | 2015-12-14 | 味の素株式会社 | 硫酸化化合物を含む幹細胞増殖用培地 |
| JP2017018147A (ja) * | 2012-03-30 | 2017-01-26 | 味の素株式会社 | 硫酸化化合物を含む幹細胞増殖用培地 |
| US9890359B2 (en) | 2012-03-30 | 2018-02-13 | Ajinomoto Co., Inc. | Culture medium for proliferating stem cell, which contains sulfated compound |
| US10689622B2 (en) | 2012-03-30 | 2020-06-23 | Ajinomoto Co., Inc. | Culture medium for proliferating stem cell, which contains sulfated compound |
| US9664671B2 (en) | 2012-07-24 | 2017-05-30 | Nissan Chemical Industries, Ltd. | Culture medium composition and method of culturing cell or tissue using thereof |
| US10590380B2 (en) | 2012-07-24 | 2020-03-17 | Nissan Chemical Industries, Ltd. | Culture medium composition and method of culturing cell or tissue using thereof |
| US11371013B2 (en) | 2012-07-24 | 2022-06-28 | Nissan Chemical Industries, Ltd. | Culture medium composition and method of culturing cell or tissue using thereof |
| WO2014030726A1 (ja) * | 2012-08-23 | 2014-02-27 | 日産化学工業株式会社 | タンパク質産生促進剤 |
| JPWO2014030726A1 (ja) * | 2012-08-23 | 2016-08-08 | 日産化学工業株式会社 | タンパク質産生促進剤 |
| US10017805B2 (en) | 2012-08-23 | 2018-07-10 | Nissan Chemical Industries, Ltd. | Enhancing ingredients for protein production from various cells |
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