JPH07107871A - ラン科植物の培養方法 - Google Patents
ラン科植物の培養方法Info
- Publication number
- JPH07107871A JPH07107871A JP5275975A JP27597593A JPH07107871A JP H07107871 A JPH07107871 A JP H07107871A JP 5275975 A JP5275975 A JP 5275975A JP 27597593 A JP27597593 A JP 27597593A JP H07107871 A JPH07107871 A JP H07107871A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tissue
- plant
- culturing
- orchidales
- plb
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 ラン科植物のプロトコーム様球体の内部組織
を採取して培養することを特徴とするラン科植物の培養
方法並びにラン科植物のプロトコーム様球体の内部組織
を採取して培養し、該組織の細胞から再分化能を有する
組織体を誘導し、該組織体からさらにプロトコーム様球
体を形成させ、ラン科の植物体を再生させることを特徴
とするラン科植物の培養方法。 【効果】 本発明によれば、ラン科植物のプロトコーム
様球体の内部組織を培養し、該培養により得た再分化能
を有する組織体からプロトコーム様球体を形成させ、目
的とするラン科植物を再生することができる。
を採取して培養することを特徴とするラン科植物の培養
方法並びにラン科植物のプロトコーム様球体の内部組織
を採取して培養し、該組織の細胞から再分化能を有する
組織体を誘導し、該組織体からさらにプロトコーム様球
体を形成させ、ラン科の植物体を再生させることを特徴
とするラン科植物の培養方法。 【効果】 本発明によれば、ラン科植物のプロトコーム
様球体の内部組織を培養し、該培養により得た再分化能
を有する組織体からプロトコーム様球体を形成させ、目
的とするラン科植物を再生することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ラン科植物の培養方法
に関し、詳しくは組織培養によるラン科植物の培養方法
に関する。さらに詳しくはラン科植物のプロトコーム様
球体（Protocorm-like body:以下、ＰＬＢと略すことが
ある。）の内部組織を採取して培養することよりなるラ
ン科植物を培養方法に関する。
に関し、詳しくは組織培養によるラン科植物の培養方法
に関する。さらに詳しくはラン科植物のプロトコーム様
球体（Protocorm-like body:以下、ＰＬＢと略すことが
ある。）の内部組織を採取して培養することよりなるラ
ン科植物を培養方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来からシンビジウム等のラン科植物は
茎頂またはえき芽より生長点を摘出し、ＰＬＢを誘導
し、増殖を経て幼植物体を得る技術が既に産業的に実用
化されている。これらラン科植物のＰＬＢから分割によ
り増殖を繰り返し、さらには形態形成の過程を経て、活
発に増殖することが認められている。また、ラン科植物
は茎頂，葉，芽などからカルスが誘導されており、該カ
ルスから幼植物体が再生されることも報告されている。
茎頂またはえき芽より生長点を摘出し、ＰＬＢを誘導
し、増殖を経て幼植物体を得る技術が既に産業的に実用
化されている。これらラン科植物のＰＬＢから分割によ
り増殖を繰り返し、さらには形態形成の過程を経て、活
発に増殖することが認められている。また、ラン科植物
は茎頂，葉，芽などからカルスが誘導されており、該カ
ルスから幼植物体が再生されることも報告されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】上記したように、ＰＬ
Ｂから形態形成の過程を経て、活発に増殖することが認
められているが、この現象はＰＬＢの表皮部分において
のみ生起しており、ＰＬＢの内部組織（表皮部分を含ま
ない組織）は全く不活性であることが報告されている。
Ｂから形態形成の過程を経て、活発に増殖することが認
められているが、この現象はＰＬＢの表皮部分において
のみ生起しており、ＰＬＢの内部組織（表皮部分を含ま
ない組織）は全く不活性であることが報告されている。
【０００４】本発明者は、ラン科植物の茎頂よりＰＬＢ
を誘導し、ＰＬＢの内部組織のみを摘出し、該組織から
植物体を再生する能力を有する組織体を誘導するための
条件について検討した。さらに、該組織体より完全な植
物体を再生させるための条件についても検討した。ま
た、各段階での細胞および組織を組織学的に観察し、幼
植物を形成する経緯を検討した。その結果、ラン科植物
のＰＬＢの内部組織を採取して培養することによりラン
科植物を再生できることを見出し、本発明に到達したの
である。
を誘導し、ＰＬＢの内部組織のみを摘出し、該組織から
植物体を再生する能力を有する組織体を誘導するための
条件について検討した。さらに、該組織体より完全な植
物体を再生させるための条件についても検討した。ま
た、各段階での細胞および組織を組織学的に観察し、幼
植物を形成する経緯を検討した。その結果、ラン科植物
のＰＬＢの内部組織を採取して培養することによりラン
科植物を再生できることを見出し、本発明に到達したの
である。
【０００５】
【課題を解決するための手段】すなわち、本発明はＰＬ
Ｂの内部組織を採取して培養することを特徴とするラン
科植物の培養方法並びにこのようにして得た組織の細胞
から再分化能を有する組織体を誘導し、該組織体からさ
らにＰＬＢを形成させ、ラン科植物を再生させることを
特徴とするラン科植物の培養方法に関する。
Ｂの内部組織を採取して培養することを特徴とするラン
科植物の培養方法並びにこのようにして得た組織の細胞
から再分化能を有する組織体を誘導し、該組織体からさ
らにＰＬＢを形成させ、ラン科植物を再生させることを
特徴とするラン科植物の培養方法に関する。
【０００６】以下、本発明に関する主要な事項につき説
明する。 １．培地および培養条件 培地はムラシゲ・スクーグ培地（以下、ＭＳ培地と略
す。），ハイポネックス培地，ニッチ培地，リンズマイ
ヤー・スクーグ培地，ホワイト培地，Ｂ−５培地，ガム
ボルグ培地などを用いることができる。炭素源としては
ショ糖，グルコース，フルクトースなどが単独で又は２
種類以上の混合物として用いられ、炭素源は培地中に１
〜５０ｇ／リットルの濃度で存在すればよいが、好まし
くは２０〜４０ｇ／リットルである。
明する。 １．培地および培養条件 培地はムラシゲ・スクーグ培地（以下、ＭＳ培地と略
す。），ハイポネックス培地，ニッチ培地，リンズマイ
ヤー・スクーグ培地，ホワイト培地，Ｂ−５培地，ガム
ボルグ培地などを用いることができる。炭素源としては
ショ糖，グルコース，フルクトースなどが単独で又は２
種類以上の混合物として用いられ、炭素源は培地中に１
〜５０ｇ／リットルの濃度で存在すればよいが、好まし
くは２０〜４０ｇ／リットルである。
【０００７】培地のｐＨは4.０〜7.０に調整するのが適
当であり、特に5.０〜6.０の範囲が好ましい。培養温度
は１５〜３０℃の範囲内、望ましくは１８〜２６℃であ
る。また、培養の際の照度は１０〜５０μMol ／sec ・
m2の範囲内とし、望ましくは２０〜３０μMol ／sec ・
m2とする。培養に際して、必要により、カイネチン，ベ
ンジルアミノプリン，ゼアチンなどのサイトカイニン
類、２，４−Ｄ，α−インドール酢酸，α−インドール
酪酸，α−ナフタレン酢酸などのオーキシン及びアブシ
ジン酸やジベレリンなどの植物ホルモンを添加すること
ができる。
当であり、特に5.０〜6.０の範囲が好ましい。培養温度
は１５〜３０℃の範囲内、望ましくは１８〜２６℃であ
る。また、培養の際の照度は１０〜５０μMol ／sec ・
m2の範囲内とし、望ましくは２０〜３０μMol ／sec ・
m2とする。培養に際して、必要により、カイネチン，ベ
ンジルアミノプリン，ゼアチンなどのサイトカイニン
類、２，４−Ｄ，α−インドール酢酸，α−インドール
酪酸，α−ナフタレン酢酸などのオーキシン及びアブシ
ジン酸やジベレリンなどの植物ホルモンを添加すること
ができる。
【０００８】２．再分化能を有する組織体の誘導 ラン科植物の茎頂等の外植体を摘出し、ＭＳ培地等に置
床してＰＬＢを誘導する。誘導されたＰＬＢは液体培地
において振盪培養することにより増殖し、定期的に継代
を行う。顕微鏡下で無菌的に該ＰＬＢの表皮を除き、内
部組織を摘出し、該組織を固体培地に置床し、３〜８週
間培養する。このようにして、再分化能を有する組織体
を誘導することができる。
床してＰＬＢを誘導する。誘導されたＰＬＢは液体培地
において振盪培養することにより増殖し、定期的に継代
を行う。顕微鏡下で無菌的に該ＰＬＢの表皮を除き、内
部組織を摘出し、該組織を固体培地に置床し、３〜８週
間培養する。このようにして、再分化能を有する組織体
を誘導することができる。
【０００９】３．体細胞および植物体の形成 上記の方法で誘導された組織体は、固体培地に置床し、
培養することにより、プロトコームが誘導される。該プ
ロトコームをさらに培養することにより、完全な植物体
が形成される。
培養することにより、プロトコームが誘導される。該プ
ロトコームをさらに培養することにより、完全な植物体
が形成される。
【００１０】
【実施例】以下に本発明を実施例によってさらに具体的
に説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定され
るものではない。 実施例１ Cymbidium x Tranksgiving, cv. NATIVITY茎頂より誘導
されたＰＬＢを、炭素源としてショ糖を３％添加したＭ
Ｓ液体培地（ｐＨ5.７）において２５℃、照度２０μMo
l ／sec ・m2、１ｒｐｍで振盪培養して増殖させ、新し
く生長した直径３〜４mmのＰＬＢを得た。該ＰＬＢを主
軸に沿って縦に４分割し、分割したＰＬＢ片から顕微鏡
下で無菌的に２または３層の細胞からなる表皮（表面か
ら１〜２ｍｍ）を取り除いた内部組織片を取り出した。
該組織片を、α−ナフタレン酢酸を２ｍｇ／リットル添
加し、ｐＨ5.７に調整したＭＳ固体培地に置床して２５
℃、照度３０μMol/sec ・m2、照明時間１６時間／日の
条件で６週間培養した。その結果、２０個体の該組織片
のうち、９個体より胚様体形成能を有する組織体が誘導
された。
に説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定され
るものではない。 実施例１ Cymbidium x Tranksgiving, cv. NATIVITY茎頂より誘導
されたＰＬＢを、炭素源としてショ糖を３％添加したＭ
Ｓ液体培地（ｐＨ5.７）において２５℃、照度２０μMo
l ／sec ・m2、１ｒｐｍで振盪培養して増殖させ、新し
く生長した直径３〜４mmのＰＬＢを得た。該ＰＬＢを主
軸に沿って縦に４分割し、分割したＰＬＢ片から顕微鏡
下で無菌的に２または３層の細胞からなる表皮（表面か
ら１〜２ｍｍ）を取り除いた内部組織片を取り出した。
該組織片を、α−ナフタレン酢酸を２ｍｇ／リットル添
加し、ｐＨ5.７に調整したＭＳ固体培地に置床して２５
℃、照度３０μMol/sec ・m2、照明時間１６時間／日の
条件で６週間培養した。その結果、２０個体の該組織片
のうち、９個体より胚様体形成能を有する組織体が誘導
された。
【００１１】実施例２ Cymbidium x Tranksgiving, cv. NATIVITY茎頂より誘導
されたＰＬＢを実施例１と同様の条件にて培養し、新し
く生長した直径３〜４mmのＰＬＢを得た。このＰＬＢを
主軸に沿って縦に４分割し、分割したＰＬＢ片から顕微
鏡下で無菌的に表皮を除いて内部組織片を取り出した。
該組織片を、２，４−Ｄを0.５ｍｇ／リットル添加し、
ｐＨ5.７に調整したＭＳ固体培地に置床して２５℃、照
度３０μMol/sec ・m2、照明時間１６時間／日の条件で
６週間培養した。その結果、２０個体の該組織片のう
ち、８個体より胚様体形成能を有する組織体が誘導され
た。
されたＰＬＢを実施例１と同様の条件にて培養し、新し
く生長した直径３〜４mmのＰＬＢを得た。このＰＬＢを
主軸に沿って縦に４分割し、分割したＰＬＢ片から顕微
鏡下で無菌的に表皮を除いて内部組織片を取り出した。
該組織片を、２，４−Ｄを0.５ｍｇ／リットル添加し、
ｐＨ5.７に調整したＭＳ固体培地に置床して２５℃、照
度３０μMol/sec ・m2、照明時間１６時間／日の条件で
６週間培養した。その結果、２０個体の該組織片のう
ち、８個体より胚様体形成能を有する組織体が誘導され
た。
【００１２】実施例３ 実施例１で得た胚様体形成能を有する組織体を、植物ホ
ルモンを含まず、ｐＨ5.７に調整したＭＳ固体培地に置
床して２５℃、照度３０μMol/sec ・m2、照明時間１６
時間／日の条件で培養した。その結果、２週間後に１２
検体の組織体のうち、８検体が緑色に変化し、さらに２
週間後に球状のプロトコームが形成された。該プロトコ
ームからは、２〜３週間で毛状の仮根と葉原基を有する
シュートが誘導され、４ヶ月以内に完全な植物体を形成
した。
ルモンを含まず、ｐＨ5.７に調整したＭＳ固体培地に置
床して２５℃、照度３０μMol/sec ・m2、照明時間１６
時間／日の条件で培養した。その結果、２週間後に１２
検体の組織体のうち、８検体が緑色に変化し、さらに２
週間後に球状のプロトコームが形成された。該プロトコ
ームからは、２〜３週間で毛状の仮根と葉原基を有する
シュートが誘導され、４ヶ月以内に完全な植物体を形成
した。
【００１３】実施例４ 実施例３におけるＰＬＢ内部組織からシュートを形成す
るまでの過程において、各検体をＦＡＡに固定し、脱水
後、パラフィンに固定し、次いで１０〜１２μｍの切片
を作製し、デラフィールドのヘマトキリンで染色後、光
学顕微鏡による組織学的観察を行ったところ、以下のよ
うな知見が得られた。
るまでの過程において、各検体をＦＡＡに固定し、脱水
後、パラフィンに固定し、次いで１０〜１２μｍの切片
を作製し、デラフィールドのヘマトキリンで染色後、光
学顕微鏡による組織学的観察を行ったところ、以下のよ
うな知見が得られた。
【００１４】胚様体形成能を有する組織体はＰＬＢ内部
組織の培養開始から５日後に維管束の柔細胞から発生す
るのが認められ、該組織体は細胞分裂により発達する。
該組織の発生，発達は、維管束の柔細胞の環境により、
若干の相違が見られた。
組織の培養開始から５日後に維管束の柔細胞から発生す
るのが認められ、該組織体は細胞分裂により発達する。
該組織の発生，発達は、維管束の柔細胞の環境により、
若干の相違が見られた。
【００１５】維管束の柔細胞の周囲に他の細胞が存在す
る場合、維管束の端の細胞が分裂し、細胞が外へ送り出
されて球状突起物の組織体が誘導される。該組織体は細
胞分裂とともに発達し、プロトコームを形成することが
認められた。なお、該組織体には表皮系は存在しなかっ
た。
る場合、維管束の端の細胞が分裂し、細胞が外へ送り出
されて球状突起物の組織体が誘導される。該組織体は細
胞分裂とともに発達し、プロトコームを形成することが
認められた。なお、該組織体には表皮系は存在しなかっ
た。
【００１６】維管束の柔細胞が直接培地と接している場
合、培地に沿って組織体が発達した。組織体の一部の細
胞は、基部側の細胞と先端側の細胞に分裂し、さらに分
裂を繰り返して前胚様体が形成された。基部側の細胞は
細胞分裂が低頻度であり、胚様体の胚柄に発達し、一方
先端側の細胞は細胞分裂が高頻度であり、形成された細
胞は胚様体の球状部に発達した。
合、培地に沿って組織体が発達した。組織体の一部の細
胞は、基部側の細胞と先端側の細胞に分裂し、さらに分
裂を繰り返して前胚様体が形成された。基部側の細胞は
細胞分裂が低頻度であり、胚様体の胚柄に発達し、一方
先端側の細胞は細胞分裂が高頻度であり、形成された細
胞は胚様体の球状部に発達した。
【００１７】上述した球状突起物の組織体は２，４−Ｄ
またはＮＡＡを添加した培地で形成され、その一部から
さらに２〜３個の突起物が発生し、植物ホルモンを含ま
ない培地に移植すると、その一部が発達してＰＬＢを形
成することなどから、このプロセスは胚発生であり、該
組織は不定胚形成能を有するカルス（embryogenic call
us) であることが示唆された。
またはＮＡＡを添加した培地で形成され、その一部から
さらに２〜３個の突起物が発生し、植物ホルモンを含ま
ない培地に移植すると、その一部が発達してＰＬＢを形
成することなどから、このプロセスは胚発生であり、該
組織は不定胚形成能を有するカルス（embryogenic call
us) であることが示唆された。
【００１８】
【発明の効果】本発明によれば、ラン科植物のプロトコ
ーム様球体の内部組織を培養して組織体を誘導すること
ができ、さらに該培養により得た再分化能を有する組織
体からプロトコーム様球体を形成させ、目的とするラン
科植物を再生することができる。
ーム様球体の内部組織を培養して組織体を誘導すること
ができ、さらに該培養により得た再分化能を有する組織
体からプロトコーム様球体を形成させ、目的とするラン
科植物を再生することができる。
Claims (3)
- 【請求項１】 ラン科植物のプロトコーム様球体の内部
組織を採取して培養することを特徴とするラン科植物の
培養方法。 - 【請求項２】 ラン科植物のプロトコーム様球体の内部
組織を採取して培養し、該組織の細胞から再分化能を有
する組織体を誘導し、該組織体からさらにプロトコーム
様球体を形成させ、ラン科の植物体を再生させることを
特徴とするラン科植物の培養方法。 - 【請求項３】 ラン科植物がシンビジウム属に属するも
のである請求項１または２記載の培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5275975A JPH07107871A (ja) | 1993-10-08 | 1993-10-08 | ラン科植物の培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5275975A JPH07107871A (ja) | 1993-10-08 | 1993-10-08 | ラン科植物の培養方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07107871A true JPH07107871A (ja) | 1995-04-25 |
Family
ID=17563033
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5275975A Pending JPH07107871A (ja) | 1993-10-08 | 1993-10-08 | ラン科植物の培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07107871A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102893871A (zh) * | 2012-10-24 | 2013-01-30 | 泰安市泰山林业科学研究院 | 蕙兰杂交育种的方法 |
| CN105309309A (zh) * | 2015-10-15 | 2016-02-10 | 南宁旺弘生物科技有限公司 | 一种墨兰培养基及制备方法 |
| CN109042342A (zh) * | 2018-11-01 | 2018-12-21 | 翁源县天下泽雨农业科技有限公司 | 一种春兰的组织培养方法 |
| CN109699498A (zh) * | 2019-03-11 | 2019-05-03 | 成都大学 | 一种杜鹃兰愈伤组织的培养方法 |
| CN111264394A (zh) * | 2020-04-07 | 2020-06-12 | 无锡向山兰园科技有限公司 | 一种大花蕙兰的组织培养方法 |
-
1993
- 1993-10-08 JP JP5275975A patent/JPH07107871A/ja active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102893871A (zh) * | 2012-10-24 | 2013-01-30 | 泰安市泰山林业科学研究院 | 蕙兰杂交育种的方法 |
| CN105309309A (zh) * | 2015-10-15 | 2016-02-10 | 南宁旺弘生物科技有限公司 | 一种墨兰培养基及制备方法 |
| CN109042342A (zh) * | 2018-11-01 | 2018-12-21 | 翁源县天下泽雨农业科技有限公司 | 一种春兰的组织培养方法 |
| CN109699498A (zh) * | 2019-03-11 | 2019-05-03 | 成都大学 | 一种杜鹃兰愈伤组织的培养方法 |
| CN109699498B (zh) * | 2019-03-11 | 2021-09-03 | 成都大学 | 一种杜鹃兰愈伤组织的培养方法 |
| CN111264394A (zh) * | 2020-04-07 | 2020-06-12 | 无锡向山兰园科技有限公司 | 一种大花蕙兰的组织培养方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ziv et al. | Organs and plantlets regeneration of Gladiolus through tissue culture | |
| Chen et al. | Efficient production of protocorm-like bodies and plant regeneration from flower stalk explants of the sympodial orchid Epidendrum radicans | |
| Gupta et al. | Somatic embryogenesis and plant regeneration from suspension cultures of switchgrass | |
| JP2970277B2 (ja) | シャクナゲ属植物における培養苗条の発根促進法 | |
| Nešković et al. | Somatic embryogenesis and bud formation from immature embryos of buckwheat (Fagopyrum esculentum Moench.) | |
| Dunstan et al. | In vitro studies on organogenesis and growth in Allium cepa tissue cultures | |
| Ignacimuthu et al. | Regeneration of plantlets from cotyledon and embryonal axis explants of Vigna mungo L. Hepper | |
| Reynolds | Somatic embryogenesis and organogenesis from callus cultures of Solanum carolinense | |
| JPH07107871A (ja) | ラン科植物の培養方法 | |
| JP4647804B2 (ja) | 組織培養によるサクラ属の大量増殖法 | |
| JPH0611209B2 (ja) | 木本性植物の大量増殖法 | |
| Hirimburegama et al. | In vitro growth of Ananas comosus L. Merr (pineapple) shoot apices on different media | |
| Ruffoni et al. | Organogenesis and embryogenesis in Lisianthus russellianus Hook | |
| Sanago et al. | Morphoregulatory role of thidiazuron: morphogenesis of root outgrowths in thidiazuron-treated geranium (Pelargonium x hortorum Bailey) | |
| JPH07213183A (ja) | オオムギ植物体の再生方法 | |
| JP3806156B2 (ja) | オオムギ植物体の再生方法 | |
| JP2631765B2 (ja) | 木本性植物の苗条原基の増殖方法 | |
| JPH0866134A (ja) | サクラの多芽体による増殖方法 | |
| JP2931675B2 (ja) | シクラメンの不定芽の増殖用培地および増殖方法 | |
| JPS61242522A (ja) | 植物組織体の苗化方法 | |
| JPH08308412A (ja) | フタバガキ科樹木の組織培養による多芽体作出法 | |
| JP2712217B2 (ja) | 植物組織培養法 | |
| Maity et al. | In vitro propagation of Mussaenda erythrophylla Schum and Thom cv. scarlet through multiple shoot regeneration | |
| JP2000262279A (ja) | 針葉樹不定胚の培養方法 | |
| US4977087A (en) | Method of regenerating plantlets from mesophyll protoplasts of phaseolus angularis |