JPH0692834A - 転移タンパク質含有化粧用組成物 - Google Patents

転移タンパク質含有化粧用組成物

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JPH0692834A
JPH0692834A JP4053470A JP5347092A JPH0692834A JP H0692834 A JPH0692834 A JP H0692834A JP 4053470 A JP4053470 A JP 4053470A JP 5347092 A JP5347092 A JP 5347092A JP H0692834 A JPH0692834 A JP H0692834A
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チェリー・モロー
Laruel Rene
ルネ・ラリュエル
Sabadie Michel
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Elf Sanofi SA
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 本発明は、表皮回復効果およびその結果皮膚
老化遅延効果を有する化粧用組成物を提供するものであ
る。 【構成】 化粧品に許容され得る添加剤に植物組織また
は微生物由来の少なくとも１種のリン脂質転移タンパク
質の化粧品としての有効量を含むことを特徴とする化粧
用組成物。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、表皮回復効果およびそ
の結果皮膚老化遅延効果を有する化粧用組成物に関す
る。さらに具体的には、本発明は皮膚老化を遅延させる
化粧用組成物に関するものであり、これは回復効果を伴
う、リン脂質を表皮へ転移させることができる、植物組
織または微生物からの転移タンパク質を含む。
【０００２】
【従来の技術】膜転移タンパク質と称し本明細書で「転
移タンパク質」と表示される細胞質タンパク質が存在
し、リン脂質分子をある膜から別の膜へ転移させる能力
があることは周知である。この特性はウィルツら(ジャ
ーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(Ｊourna
l ofＢiological Ｃhemistry)２４３巻３９５６−３
６０２頁(１９６８年)により初めて発見された。彼らは
リン脂質がミクロゾームおよびラット肝ミトコンドリア
間で転移されることを観察した。種々動物または植物組
織から出発して、および原核細胞性または真核細胞性微
生物から出発して、多くの種々のタンパク質が精製さ
れ、特徴付けられている。転移タンパク質の作用により
ある膜から別の膜の転移するリン脂質は、すなわちホス
ファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミンお
よびホスファチジルイノシトールである。転移タンパク
質は単一のリン脂質の転移に特異的であってもよいし、
非特異的であってもよく、すなわち任意の膜リン脂質の
転移を促進する。
【０００３】このタンパク質のリン脂質転移作用は、天
然膜、例えばヒト赤血球または真核性もしくは原核性微
生物細胞、または合成かもしくは天然リポソームのよう
な人造膜に含有されるリン脂質から出発するイン・ビト
ロででも発現することも知られている。これらの知見に
基づいて、フランス特許出願第２６３１２３６号では、
転移タンパク質および脂肪親和性または両親媒性成分を
含有する「活性系」を、素材工学、医学、薬学および化粧
品を含む種々の技術分野において、この系と標的細胞の
間での脂質交換に用いることが想定されている。しかし
ながら、そこに含まれる一般的な開示では、当業者は上
記の何れも実用にすることはできない。事実、これは実
際に用いることができる転移タンパク質(これらのうち
には安定性および／または狭雑物の問題があるものもあ
る)に関して、引用された種々の用途におけるそれらの
作り方およびそれらの利用法(量、比活性等)の具体的な
教授は何ら含まない。さらに、このフランス特許出願に
よると、交換は、両方向で、いわゆる「活性系」から標的
細胞へか、または標的細胞から「活性系」へのどちらかで
起こるという事実にもかかわらず、望ましい転移を得る
方法に関する教示はない。
【０００４】
【課題を解決するための手段】特定の起源の転移タンパ
ク質の化粧用としての有効量を含み、この化粧用組成物
を皮膚に適用すると表皮細胞をリン脂質で富ませる、安
定した化粧用組成物を得ることができることが今回判明
した。このリン脂質はすでに皮膚上に存在しているもの
であるか、またはそのままもしくはリポソームとして転
移タンパク質と組み合わせることができる。このよう
に、リン脂質に富むと皮膚老化を遅延させる回復効果を
引き起こす。本発明の化粧用組成物において適切に用い
ることができる転移タンパク質は植物組織から、または
好ましくは微生物から得られ、純粋な産生物として、ま
たは好ましくは所望により精製されたそれの溶液として
用いることができる。
【０００５】本発明の第１の目的は、従って植物組織か
らのまたは微生物からの転移タンパク質を化粧品的に有
効量を化粧品的に許容できる賦形剤中に含む化粧用組成
物である。
【０００６】植物組織から得ることができ、所望により
化学的に修飾してもよい転移タンパク質の中で、例えば
以下のものを引用できる: −ドウデイらにより、ビオキミカ・エ・ビオフィジカ・
アクタ(Ｂiochimica etＢiophysica Ａcta)、７１０巻
１４３−１５３頁(１９８２年)に報告されているような
トウモロコシの苗(ゼア・メイス(Ｚea mais))から抽出
したタンパク質;−ワタナベらにより、ビオキミカ・エ
・ビオフィジカ・アクタ(Ｂiochimica et Ｂiophysica
Ａcta)、８７６巻１１６−１２３頁(１９８６年)に報告
され、タキシマらにより、ビオキミカ・エ・ビオフィジ
カ・アクタ(Ｂiochimica et Ｂiophysica Ａcta)、８７
０巻２４８−２５５頁(１９８６年)で特徴が明らかにさ
れているトウゴマから抽出したタンパク質; −カーデルらにより、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ
・バイオケミストリー(Ｅuropean Ｊournal of Ｂioche
mistry)、１３９巻４１１−４１６頁(１９８４年)に、
またはジュリエンらにより、コンプチス・レンダス・ヘ
ブドマダイレス・デス・セアンセス・デル・アカデミー
・デス・サイエンセス・パリ(ＣomptesＲendus Ｈebdom
adaires des Ｓeances de Ｉ'Ａcademie des Ｓciences
Ｐaris)、２９６巻セリーＩＩＩ(serieＩＩＩ)６１７
−６２０頁(１９８３年)に報告され、ブイロンらにより
ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・バイオケミストリー
(Ｅuropean Ｊournal of Ｂiochemistry)、１６６巻３
８７−３９１頁(１９８７年)で特徴が明らかになったホ
ウレンソウ(スピナシア・オレラシアＬ．(Ｓpinacia ol
eraceaＬ．))から抽出されたタンパク質; −きのこから抽出されたもの、例えばチャバントらによ
りバイオケミストリー・アンド・メタボリズム・オブ・
プラント・リピッズ(１９８２年)、Ｊ．Ｆ．Ｇ．Ｍ．ウ
ィンターマンズ、Ｐ．Ｊ．Ｃ．クイパー編、エルセビア
ー・ビオメディカル・プレス、Ｂ．Ｖ．１２５−１２８
頁に報告されたムコール・ムセド(Ｍucormucedo)などの
きのこから抽出したタンパク質。 本発明の好ましい態様によると、適切に用いることがで
きるその他の転移タンパク質は微生物とりわけ細菌およ
び酵母菌、例えば以下のものから得られたものである; −フレヘルらによりビオキミカ・エ・ビオフィジカ・ア
クタ(Ｂiochimica et Ｂiophysica Ａcta)、２２３巻２
９２頁(１９７０年)、またはブローらによりＦＥＢＳレ
ターズ(ＦＥＢＳ Ｌetters)、３９巻３３２−３３６頁
(１９７４年)に報告されたようなバチルス・ズブチリス
(Ｂacillus subtilis)からの抽出物に含有されるタンパ
ク質; −コーエンらによりジャーナル・オブ・ビオロジカル・
ケミストリー(Ｊournalof Ｂiological Ｃhemistry)、
２５４巻７２１−７２８頁(１９７９年)に報告されたよ
うに得られたロドプセウドモナス・スファエロイデス
(Ｒhodopseudomonasspaeroides)の抽出物に含有される
タンパク質; −コボンらによりビオキミカ・エ・ビオフィジカ・アク
タ(Ｂiochimica et Ｂiophysica Ａcta)、４４１巻２５
５−２５９頁(１９７６年)、ダウムらによりビオキミカ
・エ・ビオフィジカ・アクタ(Ｂiochimica et Ｂiophys
ica Ａcta)、７９４巻３８５−３９１頁(１９８４年)、
またはボザットらによりビオケミストリー・アンド・セ
ル・バイオロジー(Ｂiochem．Ｃell Ｂiol.)、６５巻１
９５−２０２頁(１９８７年)に報告されるように得られ
たサッカロマイセス・セレビシア(Ｓaccharomyces cere
visiae)の抽出物に含有されるタンパク質。
【０００７】この転移タンパク質は、上記に引用した開
示に報告されたような古典的な文献的方法に準じて調製
される。典型的には、望ましい転移タンパク質を種々の
比率で含有するタンパク質の混合物が得られる。必要な
または望ましい場合、このように得られた調製物を１回
またはそれ以上精製し、そして転移タンパク質に富む調
製物を生じる。この転移タンパク質に富む調製物を、今
度はさらに本質的に望ましい転移タンパク質から成る調
製物になるまで精製できる。
【０００８】転移タンパク質を含有する任意のこれらの
調製物の比活性を、リン脂質転移活性として、すなわち
時間当たりに転移されるリン脂質のナノモルを調製物中
の全タンパク量で割った値として適切に表現できる。こ
のリン脂質転移活性は供与膜(中性14Ｃ−標識化脂質お
よび3Ｈ−標識化リン脂質を含有する卵ホスファチジル
コリンから出発する抽出物により得られた単一ラメラリ
ポソームから成る)とラット肝ミトコンドリアから成る
受容膜の間のリン脂質転移を測定する方法により分析さ
れる。この試験では、分析する試料を両方の型の膜の存
在下３０℃で３０分間恒温培養し、次いで、遠心により
供与膜を除去し、受容膜に転移したリン脂質のパーセン
テージをトリチウム放射活性の計量により算出する。14
Ｃ−放射活性の計量を行って、非特異的転移および供与
膜による受容膜の残存狭雑物を評価する。試料の転移活
性は、時間当たりの転移リン脂質のナノモルを試料自体
中の全タンパク質量で割った値で表現する。
【０００９】本発明による化粧用組成物は、用いる調製
物に含有されるタンパク質の比活性により変化する量の
植物組織または微生物からの少なくとも１種の転移タン
パク質を含む。用いる転移タンパク質調製物の比活性が
高いほど、望ましい回復効果を達成するのに必要な重量
は少なくなり、そして逆も同様である。本発明による化
粧用組成物を得るために、２５nＭ／mg／時間もの低い
比活性を有する転移タンパク質調製物を適切に用いるこ
とができるが、少なくとも約２５０nＭ／mg／時間の比
活性を有する調製物が好ましい。実際に使用する場合、
本発明の化粧用組成物は、植物組織からまたは微生物か
らの少なくとも１種の転移タンパク質を、０．０００１
から１０重量％、好ましくは０．００１から５重量％の
比率で含有する。本発明の化粧用組成物の転移タンパク
質は微生物、主に酵母菌から得たものであるのが好まし
い。
【００１０】酵母菌、すなわち、サッカロマイセス・セ
レビシア(Ｓaccharomyces cerevisiae)を文献に報告さ
れている様に成長させ、転移タンパク質含有抽出物をそ
こから浸透圧ショックにより、または超音波崩壊器を用
いて得るのが好ましい。任意のサッカロマイセス・セレ
ビシア(Ｓaccharomyces cerevisiae)株、野性型かまた
は遺伝子修飾した株のどちらかを、リン脂質転移タンパ
ク質を得るために適切に用いることができる。カルチャ
ー・コレクション、例えばＡＴＣＣ、ＮＲＲＬ、ＣＢＳ
等に寄託した株に加えて、通常的に入手可能で日常的に
用いられる株、例えば「パン屋のイースト」と称される株
も含まれなければならない。
【００１１】本発明の好ましい態様に準じて、転移タン
パク質を本発明の化粧用組成物中１種またはそれ以上の
リン脂質と組み合わせる。本発明による化粧用組成物に
おける転移タンパク質に組み合わせることができるリン
脂質は、典型的なものではホスファチジルコリン、ホス
ファチジルエタノールアミンおよびホスファチジルイノ
シトールを含む。
【００１２】さらにより好ましい態様によると、転移タ
ンパク質を本発明の化粧用組成物中リポソームまたはリ
ポソーム混合物の形態で１種またはそれ以上のリン脂質
に組み合わせる。リポソームは細胞膜に類似の構造を有
する二重ラメラ脂質小胞であり、種々リン脂質から出発
して形成することができる。脂溶性物質は脂質膜に固定
でき、一方水溶性物質は水性層に留どまる。種々リン脂
質を用いることができ、リポソームは固体または液体で
よい。これらのリン脂質は以下のものであるのが好まし
い: −ホスファチジルエタノールアミン、 −卵レシチン(ホスファチジルコリン)、所望によりホス
ファチジルセリンと混合する、 −ホスファチジルイノシトール、 −ジパルミトイルホスファチジルコリン。 これらのリン脂質にコレステロールを加え、クロロホル
ムに溶解し、次に得られた溶液を減圧下ロータリー蒸発
装置で乾燥する。
【００１３】リポソームの電荷はホスファチジン酸(脂
質混合物中小さな負の電荷を包含するため)またはステ
アリルアミン(正の電荷のため)のようなある種の物質を
添加することにより改変できる。このような物質が存在
しない場合はリポソーム小胞は中性になる。本明細書で
用いられる「リポソーム」なる用語は上記および文献中
(リポソームズ(Ｌiposomes)、Ｍ．オストロ編、マーセ
ル・デッカー、ニュー・ヨーク１９８３年)に報告され
るように、任意の天然もしくは合成、中性、塩基性また
は酸性リン脂質小胞を意味する。
【００１４】異なる層の数、物理的な大きさおよび調製
方法に依存して、リポソームを少なくとも４個の異なる
カテゴリーに分類することができる: −多重ラメラ小胞、これは多くの水性の同心状の層によ
り特徴づけられ、これの直径は０．１−２μｍの範囲で
よい; これらは一般的に適当な有機溶液中溶解した脂質
の薄膜を沈澱させて調製した後、緩衝化水性溶液中に分
散して乾燥脂質を水和する; −単一膜および単一水性層を有し、直径約２５nmである
小さい単一ラメラ小胞;これらは音波処理、リン脂質の
エタノール溶液の水または緩衝化溶液中への急速注入、
混合界面活性剤／リン脂質ミセルからの界面活性剤除
去、フレンチ・プレスによる高圧押し出しまたはホスフ
ァチジン酸を含有する分散液から出発する自然形成、分
散液のpＨの急速上昇により調製できる; −大きな単一ラメラ小胞、これは直径０．２−１μｍ
で、脂質二重層により囲まれ、中心に大きな区画があ
る; これはエーテル注入もしくは周知の技術に準じたカ
ルシウム誘起の融合により、またはこれもまた周知であ
るこれらの方法の変法により調製できる; および −相蒸発により得られる小胞で、これは２段階: 乳液形
成しているリン脂質有機溶液の分散、続いて減圧下溶媒
の蒸発で調製される大きな単一ラメラ小胞である。 これら全てのリポソームの型は、本発明の化粧用組成物
における使用に適している。
【００１５】本発明の化粧用組成物中転移タンパク質に
組み合わせることができるリン脂質またはリポソーム
は、タンパク質の転移能力に対応するように適当に選択
できる。例を挙げると、ホスファチジルコリンまたはホ
スファチジルコリン含有リポソームを用いる場合、ホス
ファチジルコリンに特異的な転移タンパク質をそれに組
み合わせると有用である。それに対して、種々リン脂質
の混合物または種々リン脂質を含有するリポソームを用
いる場合、非特異的転移タンパク質をそれに組み合わせ
るか、またはその混合物中に存在するリン脂質に各々特
異的である種々転移タンパク質をそれに組み合わせるの
が有利である。本発明の好ましい態様により、転移タン
パク質を１種またはそれ以上のリン脂質に組み合わせる
場合、このリン脂質は一般的に０．００１−５０％、好
ましくは０．０１−２０％になる比率で存在する。本発
明のさらにより好ましい態様により、転移タンパク質に
組み合わせたリン脂質がリポソームまたはリポソームの
混合物の形態である場合、これらは本発明の組成物中
０．０１−５０％、好ましくは１−２０重量％になる比
率で含まれる。これらは水および／または皮膚および組
成物自体の有効成分に適合する溶媒もしくは希釈剤を含
有できる。
【００１６】本発明の化粧用組成物は一般的に、各々特
定の剤形に特異的な必要性に依存して、局所適用に適し
た、組成物中都合よく用いられるものから選択した賦形
剤または添加剤を含有する。これらは例えば濃化剤、湿
潤剤、柔軟剤、滑沢剤、安定剤、消泡剤、界面活性剤、
紫外線フィルター、抗酸化剤、着色剤および／または顔
料、並びに香料を含有できる。明らかに、本発明の化粧
用組成物がリポソームを含有する場合、添加物のいくつ
かとりわけ界面活性剤をリポソーム自体に適合したもの
の中から適切に選択することが必要であろう。
【００１７】本発明の化粧用組成物は、外部攻撃剤に対
する保護もしくは阻害を介して(例えばフィルム形成物
または抗遊離基化合物)、または表皮再生および／また
は再構築を介してコラーゲン合成刺激剤、コラゲナーゼ
またはエラスターゼ阻害剤等)のどちらかによる抗老化
効果を有するその他の活性物質をも含有できる。本発明
の化粧用組成物は、活性成分または成分の混合物を所望
により安定剤と混合して、化粧品学において通常用いら
れ、それに適合する賦形剤、例えばラノリンまたは植
物、鉱物もしくは合成油と組み合わせてあるクリームの
形態にできる。本発明の化粧用組成物は、賦形剤、例え
ばセルロースエステルまたはアクリル誘導体のようなゼ
リー化剤とし供にゲルの形態にもできる。
【００１８】本発明による化粧用組成物は、活性成分の
混合物が溶解または微細分散されるローションまたは溶
液の形態にもできる。本発明による化粧用組成物は、従
って、水、１種またはそれ以上の適合する界面活性剤、
および所望によりリポソームを含有する液体中の微細分
散剤の形態にできる。この分散剤は微細乳剤と同じ特性
を有し、真の溶液と同じ外観を呈する。これはまた構成
成分が分離した形態でもあり、使用直前に混合する。こ
の微細乳剤は安定性が良く、用時まで０−６０℃の温度
で成分の沈降または非可逆的な相分離もなく貯蔵するこ
とができる。
【００１９】本発明の化粧用組成物の界面活性剤は化粧
品学において典型的に用いられる界面活性剤の中から選
択し、リポソームが存在する場合は低濃度でこれらと適
合しなければならない。ほとんど中性のpＨが維持しな
ければならない場合、中性化剤を組成物に加えることが
できる。この所望による中性化剤には、リン酸緩衝液の
ような緩衝液、またはモノ−、ジ−もしくはトリ−エタ
ノールアミンのような簡単な生体適合アミンがある。本
発明の化粧用組成物は耐性が良く、光毒性を示さず、皮
膚に長期間適用しても何ら望ましくない作用をもたらさ
ない。一般に、本発明による化粧用組成物を３０日間適
用すると、皮膚の外観に著明な改善およびしわ形成の遅
延を認めることができる。
【００２０】以下の実施例は本発明をさらに説明するも
のであり、限定するものではない。 転移タンパク質回収の実施例 実施例１−３ つぎに記載する本質的に同じ一般的方法が、サッカロマ
イセス・セレビシア(Ｓaccharomyces cerevisiae)(パン
屋のイースト)から出発するリン脂質転移タンパク質に
富む溶液の調製およびこのリン脂質転移活性の評価のた
めの以下の実施例において用いられる。 生物量を得るための一般法 (a)発酵 サッカロマイセス・セレビシア(Ｓaccharomyces cerevi
siae)の生物量は、古典的なフェド−バッチ培養により
得られる。接種物から出発して、細胞はＹＮＢＧ培地
(イースト・ニトロゲン・ベース＋グルコース)を含有す
るエルレンマイヤー・フラスコ中で成長する。この純粋
培養を撹拌しながら３０℃で約２４時間恒温培養し、次
に５％(容量／容量)の比率で、カッペリ栄養培地を含有
する３個のラッシュトン・タービンを装備したビオラフ
ィッテ発酵器に接種するのに用いる。次に、以下の条件
下６０−７０時間成長させる: −温度: ３０℃ −撹拌: 生物量に依り１５０−３５０rpm −圧力: ０．４バール −pＨ: ４ −酸素分圧: ５０％飽和 グルコース含有栄養培地(フェド・バッチ)の添加を規則
的に制御することにより、約６０g／lの濃度の生物量が
得られる。
【００２１】抽出一般法 (b)細胞の回収および洗浄 細胞は４℃に冷却したベックマンＪ２.２１遠心分離機
中、５０００gで１０分間遠心して回収する。次に培養
培地を捨て、細胞塊を氷水で洗浄し、遠心し、以下の抽
出用緩衝液で洗浄する: １mＭ ＥＤＴＡ(エチレンジア
ミノ四酢酸)、４００mＭ サッカロース、８mＭ ２−
メルカプトエタノールおよび４mＭ 塩酸システインを
含有する１００mＭ トリス・塩酸(トリス＝トリス(ヒ
ドロキシメチル)アミノメタン)。pＨ７．５。 (c)摩砕 乾燥物質の濃度を約１５g／lに調製した後、細胞をグル
コース／水循環により４℃に冷却した、直径０．２５−
０．５mmのビーズ５１０mlを含有する０．６１ビンを装
備し、予め抽出用緩衝液で平衡にしたディノ・ミル・キ
ッズ・ビーズ・ホモジナイザー中連続的に摩砕する。ビ
ン中の平均存在時間は４−１０分であり、処理容量は乾
燥物の１５％(重量／容量)の濃度で洗浄細胞２９０−８
００mlであり、ホモジナイザーからの摩砕細胞を溶融中
の氷の中の試験管中に収集する。ホモジネートのpＨを
１Ｍ トリスを添加することにより７．５にする。 (d)清澄化 得られたホモジネートを、４℃に冷却し、ＪＡ１０ロー
ターを装備したベックマンＪ２.２１遠心分離機中１０
０００gで２０分間遠心することにより清澄化する。得
られた上清を次に、４℃に冷却し６×２５０mlローター
を装備したジョアンＰＲ２０遠心分離機中４５０００g
で２０分間かまたは１２０００gで２時間、２回目の遠
心に供する。 (e)沈降 次に３７％塩酸を４℃を維持した目視により透明な上清
に添加してpＨを５．１にし、不溶物を沈降させる。次
いで沈降物を遠心により回収し、上清のpＨを１Ｍ ト
リスを添加することにより７．５に再調整する; 上清を
次に６０％飽和の硫酸アンモニウムを添加する２回目の
沈降に供する。別法として、目視により透明な上清を、
先に酸性沈降に供さず、直接６０％飽和硫酸アンモニウ
ムによる沈降に供する。 (f)精製 上清を排除した後に回収して得られた沈降物をクロマト
グラフ用緩衝液: ２％グリセロールおよび所望により８
mＭ ２−メルカプトエタノールを含有する２０mＭ ト
リス−塩酸、pＨ７．５に再懸濁し、タンパク濃度を２
０−３０mg／ｍｌにし、０．４５μｍフィルター（サル
トリウス)で濾過する。得られた溶液の５０−７５mlの
容量を、次にセファクリルゲルＳ２００ＨＲ(ファルマ
シア)排除クロマトグラフィーカラム(容量＝１．６１;
直径＝５０mm、高さ＝８１．５cm)を予めクロマトグラ
フィー用緩衝液で平衡にしたものに装填する。１５mlの
分画が収集される。抽出方法の各段階におけるタンパク
質濃度は、標準としてウシ血清アルブミンを用いたビオ
ラッド定量キットを用いてブラッドフォード法により測
定する。排除クロマトグラフィーから得られた調製物の
リン脂質転移活性を分析するために、分画を内容量に依
存して適当にプールする。
【００２２】実施例１ 抽出段階では、出発物質として洗浄細胞２９０mlを、乾
燥物で１５％の濃度で、用いる。４分間ホモジナイズし
た後、ホモジネート７００mlが得られ、これはタンパク
質５．６５g含有し、乾燥物のg当たり抽出タンパク質１
３１mgに相当する。ホモジネートは２回目の遠心を４５
０００gで２０分で行って清澄化し、これにより全タン
パク質３．２gを含有する上清５４０mlが得られる。目
視により透明な上清を、硫酸ナトリウム添加による沈降
に直接供し２．１gのタンパク質を得、概説部分に記載
したように、クロマトグラフィー用緩衝液: ２％グリセ
ロールおよび８mＭ ２−メルカプトエタノールを含有
する２０mＭ トリス・塩酸、pＨ７．５、５５ml中にタ
ンパク質１．６gを懸濁し、０．４５μｍフィルターで
濾過して排除クロマトグラフィーにより精製すると、
２．１gのタンパク質が得られる。このようにして２個
のプールが得られる: −ＰＴ１、１５００nＭ／mg／時間の比活性を有するタ
ンパク質１６２mgを含有、および −ＰＴ２、１５７００nＭ／mg／時間の比活性を有する
タンパク質１２mgを含有。
【００２３】実施例２ 乾燥物で１５％の濃度の洗浄細胞８００mlを４分３０秒
間ホモジナイズし、全タンパク質２５．２g含有するホ
モジネート１０５０mlが得られ、これは乾燥物g当たり
抽出タンパク質２００mgに相当する: このホモジネート
を次に上記一般法に準じて２回目の遠心を１２０００
g、２時間で行うことにより清澄化する。このようにし
て得られた清澄上清(５６５ml)は全タンパク質１１．３
gを含有し、一般法の(e)の項に記載されるように２段階
沈降に供し、全タンパク質４．０３gが得られる。この
ように得られたタンパク質の一部を、概説中に記載する
ようにクロマトグラフィー用緩衝液: ２％グリセロール
および８mＭ ２−メルカプトエタノール含有２０mＭ
トリス・塩酸 pＨ７．５、７５ml中タンパク質１．８g
を懸濁し、０．４５μｍフィルターで濾過して排除クロ
マトグラフィーにより精製する。このようにして１個の
プールが得られる: −ＰＴ３、９２０nＭ／mg／時間の比活性を有する全タ
ンパク質８７５mgを含有。
【００２４】実施例３ 実施例２の沈降タンパク質の別の分画を、クロマトグラ
フィー用緩衝液: ２％グリセロール含有２０mＭ トリ
ス・塩酸、pＨ７．５、５０ml中タンパク質１．１５gを
懸濁し、０．４５μｍフィルターで濾過して排除クロマ
トグラフィーにより精製する。以下のプールが得られ
る: −ＰＴ４、１５００nＭ／mg／時間の比活性を有する全
タンパク質４４０mgを含有。得られた転移タンパク質調
製物は安定であり、本発明の化粧用組成物、例えばクリ
ームおよびローションに都合よく用いることができる。
得られた分画の−２０℃、＋８℃および＋２０℃におけ
る安定性、並びに転移活性を規則的に測定した。あらゆ
る微生物の狭雑を避けるために、アジドナトリウム
(０．２％)をクロマトグラフィー用緩衝液に添加した。
実施例１および２の調製物を−２０℃、＋８℃および＋
２０℃で７週間貯蔵したが、リン脂質転移活性の損失は
認められなかった; 並びに実施例３の調製物を１週間貯
蔵したが活性の損失はなかった。
【００２５】化粧用組成物の調製の実施例 簡略化するために、組成物の成分を商品名で示したもの
もあるが、以下に定義する: アクリゾール : アクリレート／メタクリレート共
重合体、セピックより市販 フィンソルブＴＮ : 安息香酸の(Ｃ12−Ｃ15)アルコー
ルエステル、ウィッコより市販 ソルトールＨＳ１５: ポリエチレングリコール６００
１２−ヒドロキシステアレート、バスフより市販 セチオールＨＥ : ポリエチレングリコール ７−グ
リセリルココエート、ヘンケルより市販 親水性ラブラファック: ポリオキシエチレン(Ｃ7−Ｃ8)
トリグリセリド、ガッテフォセより市販 アビル８８５１Ｂ : ジメチコン−ポリオール、ゴール
ドシュミットより市販 カルボポール９３４: カルボキシポリメチレン類、グッ
ドリッチより市販 カルボポール９４０: カルボキシポリメチレン類、グッ
ドリッチより市販 ＥＤＴＡ : エチレンジアミン四酢酸 ＵＶＡフィルター : ２−エチル−ヘキシル−４−メト
キシシンナメート(商標パルソールＭＣＸ)、ジボーダン
より市販 セピシドＨＢ : 保存剤混合物(p−ヒドロキシ安息
香酸フェノキシエタノールエステル類)、セピックより
市販 ペムレンＴＲ２ : アクリレート／(Ｃ10−Ｃ30)アル
キルアクリレート−クロスポリマー、グッドリッチより
市販 セピゲル３０５ : ポリアクリルアミド、イソパラフ
ィンおよびエトキシレーティッド−ドデカノールの混合
物、セピックより市販 ハイパンＳＡ−100H: トリエタノールアミンで中性化し
たアクリルアミド共重合体、リポ・ケミカルズより市販 コビオックスＴ50 : トコフェロール異性体混合物、ヘ
ンケルより市販
【００２６】実施例４ リポソームベースのゲルを以下の成分から出発して調製
する: 脱塩水 適量を加えて 全量を１００．０００ グリセロール ３．０００ ヒアルロン酸ナトリウム ０．０２０ カルボポール９４０ ０．５００ ポリグリセリルメタクリレート ５．０００ トリエタノールアミン ０．５００ ブチレングリコール ５．０００ 香料 ０．１００ イミダソリジニル尿素 ０．５００ p−ヒドロキシ安息香酸メチル ０．２００ ホスファチジルエタノールアミン−リポソーム １０．０００ 全タンパク質１．０００ を含有する実施例２(ＰＴ３)の転移タンパク質調製物の
容量
【００２７】実施例５ 下記の組成を用いて液体状乳液を調製する。 水 適量を加えて 全量を１００．０００ ブチレングリコール ３．５００ ２−エチル−ヘキシルパルミタート ３．０００ フィンソルブＴＮ ３．０００ プロピレングリコールジカプラート／ジカプリラート ３．０００ ワセリン油 ３．０００ ペムレンＴＲ２ ０．２００ トリエタノールアミン ０．２００ セプシッドＨＢ ０．５００ 香料 ０．２００ ＥＤＴＡ ０．１００ ホスファチジルエタノールアミン リポソーム ５．０００ 全タンパク質量０．５００ を含有する実施例３（ＰＴ４）の転移タンパク質調製物
の容量
【００２８】実施例６ 抗老化ゲル乳液として用いることができる以下の組成物
を調製する: 水 適量を加えて 全量を１００．０００ ＥＤＴＡ四ナトリウム ０．１００ ハイパンＳＡ−１００Ｈ ０．２００ ワセリン油 １０．０００ ２−エチルヘキシル−パルミテート １０．０００ プロピレングリコール−ジペラルゴネート １０．０００ ペムレンＴＲ２ ０．２５０ トリエタノールアミン ０．６００ セピゲル３０５ ２．０００ ブチレングリコール ５．０００ セピシッドＨＢ ０．５００ コビオックスＴ５０ ０．０５０ ホスファチジルエタノールアミン・リポソーム ５．０００ タンパク質全量で０．５００ を含有する実施例１(ＰＴ２)の転移タンパク質調製物の
容量
【００２９】実施例７ 保護用ゲル乳液として用いることができる以下の組成物
を以下の成分から調製する: 水 適量を加えて 全量で１００．０００ ＥＤＴＡ三ナトリウム ０．１００ セピゲル３０５ ３．０００ ブチレングリコール ５．０００ セピシッドＨＢ ０．５００ コビオックスＴ５０ ０．５００ 乳酸(Ｃ12−Ｃ14)アルコールエステル ２．０００ エトキシル化−ソルビタン−モノラウレート ０．５００ 商標パルソールＭＣＸ ２．０００ ホスファチジルコリン・リポソーム １０．０００ タンパク質の全量０．５００ を含有する実施例１(ＰＴ１)の転移タンパク質調製物の
容量
【００３０】実施例８ ナイトクリームとして用いることができる以下の組成物
を調製する: 脱塩水 適量を加えて 全量を１００．０００ ブチレングリコール ５．０００ イソプロピル−パルミテート ５．０００ セチルアルコール ２．０００ ステアリンＴＰ ２．５００ 植物油 ３．０００ グリセロール−モノラウレート ５．０００ ワセリン油 ４．０００ シリコン油 ０．５００ 植物性トリグリセリド ２．０００ 保存剤 １．０００ トリエタノールアミン １．０００ ＥＤＴＡ四ナトリウム ０．１００ ホスファチジルコリン １．０００ タンパク質全量１．０００ を含有する実施例２(ＰＴ２)の転移タンパク質調製物の
容量
【００３１】実施例９ メイクアップベースとして用いることができる以下の組
成物を調製する: 脱塩水 適量を加えて 全量を１００．０００ エトキシル化豆ステロール類 ４．０００ 豆ステロール類 ０．５００ グリセロール・モノステアレート １．０００ 植物油 １．５００ ２−エチルヘキシル−パルミテート ４．０００ セチルアルコール ０．５００ 短脂肪酸トリグリセリド類 １．５００ ワセリン油 １．８００ シリコン油 １．０００ ラノリンアルコール類 ０．２００ プロピレングリコール−ジペラルゴネート ３．０００ プロピレングリコール ４．０００ 保存剤 １．０００ カルボポール９４２ ０．２００ トリエタノールアミン ０．２００ アルファ−トコフェロール ０．０２０ ＥＤＴＡ四ナトリウム ０．１００ 香料 ０．２００ ホスファチジルコリン ０．１００ タンパク質の全量１．０００ を含有する実施例３(ＰＴ４)の転移タンパク質調製物の
容量
【００３２】実施例１０ 以下の成分: 脱塩水 適量を加えて 全量を１００．０００ ソルトールＨＳ１５ １．０００ 親水性ラブラファック ０．２５０ セチオールＨＥ ０．２００ アビル８８５１ ０．０５０ プロピレングリコール １２．５００ エタノール １２．５００ カルボポール９４０ ０．４００ 香料 ０．３００ 保存剤 ０．５００ トリエタノールアミン ０．４００ タンパク質の全量０．１００ を含有する実施例１(ＰＴ２)の転移タンパク質調製物の
容量を用いることにより、微細乳液が得られる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｃ１２Ｒ 1:865） (72)発明者 ミシェル・サバディ フランス27500ベルネ、リュ・ドゥ・ラ・ フォンテーヌ・サン−ジェルマン（番地の 表示なし)

Claims (13)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 化粧品に許容され得る添加剤に植物組織
    または微生物由来の少なくとも１種のリン脂質転移タン
    パク質の化粧品としての有効量を含むことを特徴とする
    化粧用組成物。
  2. 【請求項２】 リン脂質転移タンパク質が微生物から得
    られるものである、請求項１記載の組成物。
  3. 【請求項３】 上記リン脂質転移タンパク質がサッカロ
    ミセス・セレビシアエ(Ｓaccharomyces cerevisiae)か
    ら抽出されるものである、請求項２記載の組成物。
  4. 【請求項４】 上記リン脂質転移タンパク質が０．００
    ０１〜１０重量％の比率で含まれるものである、請求項
    １〜３のいずれか１項記載の組成物。
  5. 【請求項５】 上記リン脂質転移タンパク質が０．００
    １〜５重量％の比率で含まれるものである、請求項４記
    載の組成物。
  6. 【請求項６】 リン脂質転移タンパク質が、少なくとも
    ２５nＭ／mg／時間のリン脂質転移比活性を有するリン
    脂質転移タンパク質を含むタンパク質調製物として導入
    されるものである、請求項１〜５のいずれか１項記載の
    組成物。
  7. 【請求項７】 リン脂質転移タンパク質が、少なくとも
    ２５０nＭ／mg／時間のリン脂質転移比活性を有するリ
    ン脂質転移タンパク質を含むタンパク質調製物として導
    入されるものである、請求項６記載の組成物。
  8. 【請求項８】 組成物がリン脂質またはリン脂質混合物
    をも含むものである、請求項１〜７のいずれか１項記載
    の組成物。
  9. 【請求項９】 上記リン脂質またはリン脂質混合物が
    ０．００１−５０重量％の比率で含まれるものである、
    請求項８記載の組成物。
  10. 【請求項１０】 上記リン脂質またはリン脂質混合物が
    ０．０１−２０重量％の比率で含まれるものである、請
    求項９記載の組成物。
  11. 【請求項１１】 転移タンパク質に組み合わせる上記リ
    ン脂質がリポソームまたはリポソーム混合物の形態であ
    る、請求項８記載の組成物。
  12. 【請求項１２】 リポソームまたはリポソーム混合物が
    ０．０１−５０重量％の比率で含まれるものである、請
    求項１１記載の組成物。
  13. 【請求項１３】 上記リポソームまたはリポソーム混合
    物が１−２０重量％の比率で含まれるものである、請求
    項１２記載の組成物。
JP4053470A 1991-03-12 1992-03-12 転移タンパク質含有化粧用組成物 Withdrawn JPH0692834A (ja)

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