JPH0686388B2 - クコ由来細胞賦活作用剤 - Google Patents
クコ由来細胞賦活作用剤Info
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- JPH0686388B2 JPH0686388B2 JP63271818A JP27181888A JPH0686388B2 JP H0686388 B2 JPH0686388 B2 JP H0686388B2 JP 63271818 A JP63271818 A JP 63271818A JP 27181888 A JP27181888 A JP 27181888A JP H0686388 B2 JPH0686388 B2 JP H0686388B2
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- ethanol
- wolfberry
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- cell activating
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
- A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
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- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
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- General Health & Medical Sciences (AREA)
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- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔発明の目的〕 本発明は、新規な細胞賦活作用剤（因子）の開発に関す
る。
る。
さらに詳しくは、ナス科植物（Solanaceae）のクコ（Ly
cium chinense Miller）から抽出されるある特定な理化
学的諸性質を示す水溶性の分画を有効成分とする、新規
な細胞賦活作用剤に関するものである。
cium chinense Miller）から抽出されるある特定な理化
学的諸性質を示す水溶性の分画を有効成分とする、新規
な細胞賦活作用剤に関するものである。
「産業上の利用分野」 本発明によるクコ由来の水溶性分画は、細胞に対して優
れた賦活作用を示す。
れた賦活作用を示す。
よって本剤の利用分野としては、例えば、医薬品、医薬
部外品、あるいは化粧品（人及びその他の動物用）をは
じめとする皮膚外用剤などに配合して用いることが有用
である。
部外品、あるいは化粧品（人及びその他の動物用）をは
じめとする皮膚外用剤などに配合して用いることが有用
である。
また、組織培養などにおける培地への添加剤としての利
用も可能である。
用も可能である。
「従来の技術」 クコには、解熱作用や慈養強壮といった効果があるとさ
れ、古くから医薬品あるいは食品などに用いられてき
た。
れ、古くから医薬品あるいは食品などに用いられてき
た。
例えば、クコの根部（地骨皮）のエタノール抽出エキス
についての解熱作用は、高木敬次郎ら：和漢薬物学 P1
15,南山堂刊（1982年）に示されている。
についての解熱作用は、高木敬次郎ら：和漢薬物学 P1
15,南山堂刊（1982年）に示されている。
しかしながら、そのような生理学的に有効な成分につい
ては、未だ解明されるまでに至っておらず、また、クコ
の有用性について言及されている文献なども少ない。
ては、未だ解明されるまでに至っておらず、また、クコ
の有用性について言及されている文献なども少ない。
「発明が解決しようとする課題」 本発明者らの課題は、植物の有効利用をはかることにあ
り、特に、ヒトや動物の美容と健康に役立つような植物
由来の有効成分の開発とその応用を提供することにあ
る。
り、特に、ヒトや動物の美容と健康に役立つような植物
由来の有効成分の開発とその応用を提供することにあ
る。
本発明者らは、この目的のため各種植物成分のスクリー
ニングを継続してきた。
ニングを継続してきた。
そしてその過程において、クコの油出物中に細胞に対し
て強い賦活作用を有する成分が含まれていることを見い
出し、さらにその追求を試みたところ、次に示すごとく
の理化学的データ及び生物学的データをもって特定する
ことに成功し、本発明を完成するに至った。
て強い賦活作用を有する成分が含まれていることを見い
出し、さらにその追求を試みたところ、次に示すごとく
の理化学的データ及び生物学的データをもって特定する
ことに成功し、本発明を完成するに至った。
本発明は、ナス科植物のクコから抽出された、次の
（ａ）〜（ｄ）の性質を有する分画を有効成分とする細
胞賦活作用剤をもってなる。
（ａ）〜（ｄ）の性質を有する分画を有効成分とする細
胞賦活作用剤をもってなる。
（ａ）分子量1,500付近 （ｂ）ペーパークロマトグラム［展開溶媒：水・エタノ
ール混液（1:1）］のRf値が、0.64〜0.68にある。
ール混液（1:1）］のRf値が、0.64〜0.68にある。
（ｃ）水及び60％エタノールに可溶 80％以上のエタノールには難溶 無水エタノール、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、クロロ
ホルム、石油エーテル、エーテルには不溶 （ｄ）モーリッシュ反応及びニンヒドリン反応が陽性 「課題を解決するための手段」 〔Ａ〕製造法（抽出手段） 本発明による細胞賦活成分は、ナス科植物のクコ（生薬
名：地骨皮、枸杞子、枸杞葉を用いても良い）を出発原
料となし、抽出、精製することによって製造出来る。そ
の際の出発原料は組織培養法によって得られたクコを用
いてもよい。その製造法は次のごとくである。
ホルム、石油エーテル、エーテルには不溶 （ｄ）モーリッシュ反応及びニンヒドリン反応が陽性 「課題を解決するための手段」 〔Ａ〕製造法（抽出手段） 本発明による細胞賦活成分は、ナス科植物のクコ（生薬
名：地骨皮、枸杞子、枸杞葉を用いても良い）を出発原
料となし、抽出、精製することによって製造出来る。そ
の際の出発原料は組織培養法によって得られたクコを用
いてもよい。その製造法は次のごとくである。
クコ（乾燥物）１部に対して、５〜10部の水を加え、４
℃にて時々撹拌しながら数日間浸漬を行う。
℃にて時々撹拌しながら数日間浸漬を行う。
浸漬後、ろ過してろ液を採取し、これを減圧下において
10分の１〜20分の１になるまで濃縮する。次いで、その
濃縮液に対してエタノールを50％濃度になるように添加
し、さらに遠心分離して上清液を分取する。
10分の１〜20分の１になるまで濃縮する。次いで、その
濃縮液に対してエタノールを50％濃度になるように添加
し、さらに遠心分離して上清液を分取する。
次に、この上清液に対してさらにエタノールを80％濃度
になるように添加し、遠心分離機にかけて沈殿物を分取
して、クコ由来細胞賦活成分を得る。
になるように添加し、遠心分離機にかけて沈殿物を分取
して、クコ由来細胞賦活成分を得る。
「実施例１」 クコ（乾燥物）1Kgに対して、５〜10部の水を加え、４
℃にて時々撹拌しながら３日間浸漬する。その後、ろ過
してろ液をとり、減圧下において10〜20分の１量になる
まで濃縮し、この濃縮液に対してエタノールを50％濃度
になるように添加した後、遠心分離して上清液を分取す
る。
℃にて時々撹拌しながら３日間浸漬する。その後、ろ過
してろ液をとり、減圧下において10〜20分の１量になる
まで濃縮し、この濃縮液に対してエタノールを50％濃度
になるように添加した後、遠心分離して上清液を分取す
る。
次に、この上清液に対してさらにエタノールを80％濃度
になるように添加し、遠心分離し、沈殿物を採取する。
になるように添加し、遠心分離し、沈殿物を採取する。
この沈殿物を水で溶解した後、セファデックスＧ−25メ
ディウムを充填したカラム（25×60cm）を用いゲル濾過
を行い、Kav値で、0.3〜0.6に流出するフラクションを
得る（第１図）。
ディウムを充填したカラム（25×60cm）を用いゲル濾過
を行い、Kav値で、0.3〜0.6に流出するフラクションを
得る（第１図）。
さらにこれを凍結乾燥して、本発明による細胞賦活成分
を得る。尚、上記方法によって得られたそれの収量は、
約5gである。
を得る。尚、上記方法によって得られたそれの収量は、
約5gである。
〔Ｂ〕理化学的特性に関するデーター （ａ）分子量測定 本発明による細胞賦活成分の分子量は、以下の試験法を
もって推定するとき、1,500前後であることが確認され
た。（第２図）。
もって推定するとき、1,500前後であることが確認され
た。（第２図）。
（測定法の概要） 平均分子量1,000および3,000のポリエチレングリコール
（ポリエチレングリコール1,000,ポリエチレングリコー
ル4,000）を標準として、セファデックスＧ−25ファイ
ン（ファルマシア社製）で分画して分子量を推定する。
（ポリエチレングリコール1,000,ポリエチレングリコー
ル4,000）を標準として、セファデックスＧ−25ファイ
ン（ファルマシア社製）で分画して分子量を推定する。
（ｂ）ペーパークロマトグラム 東洋ろ紙No.50を使用し、展開溶媒として、エタノール
・水混液（1:1）を使用した場合のクロマトグラム上のR
f値は、0.64〜0.68であることが確認された。
・水混液（1:1）を使用した場合のクロマトグラム上のR
f値は、0.64〜0.68であることが確認された。
尚、ｎ−ブタノールに溶解したニンヒドリンを噴霧し、
100℃に加熱すると、紫色に呈色する。
100℃に加熱すると、紫色に呈色する。
又、展開溶媒を変えて、エタノール・水混液（4:1）を
使用した場合は原点にとどまった。
使用した場合は原点にとどまった。
（ｃ）溶媒に対する溶解性 水及び60％エタノール水溶液には易溶であるが、80％以
上のエタノール水溶液では難溶である。
上のエタノール水溶液では難溶である。
又、無水エタノール、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、ク
ロロホルム、石油エーテル、エーテルには不溶である。
ロロホルム、石油エーテル、エーテルには不溶である。
（ｄ）その他の反応 モーリッシュ反応：水に溶解した液に、15％α−ナフ
トールを滴下し硫酸を加える時、赤紫色を呈する。
トールを滴下し硫酸を加える時、赤紫色を呈する。
ニンヒドリン反応：水に溶解した液に、ニンヒドリン
試液を加え、水浴中で３分間加熱する時紫色を呈する。
試液を加え、水浴中で３分間加熱する時紫色を呈する。
〔Ｃ〕発明の効果 （１）細胞生着率の促進作用 モルモットの初代線維芽細胞、さらにマウスの初代腹腔
マクロファージは、無血清のMEM中では、培養器に生着
せず死滅する。
マクロファージは、無血清のMEM中では、培養器に生着
せず死滅する。
これに対して、実施例１で得た凍結乾燥物は、無血清の
培地において、細胞の生着性（率）を促進し、死滅する
ことを防止した。
培地において、細胞の生着性（率）を促進し、死滅する
ことを防止した。
すなわち、本成分を添加することにより細胞が生着し、
１週間以上生存することがわかった。
１週間以上生存することがわかった。
尚、その際の添加量は、培養液1mL当り50μｇである
（細胞数５×104個/mL）。
（細胞数５×104個/mL）。
（２）コロニー形成からみた促進作用 モルモットの初代培養線維芽細胞を用いて、コロニー形
成能（率）を求めてみると形成が良好である。この促進
作用は線維芽細胞に限らず、上皮細胞等においても同様
に確認された。
成能（率）を求めてみると形成が良好である。この促進
作用は線維芽細胞に限らず、上皮細胞等においても同様
に確認された。
第１表（次表）は、10〜1,000個のモルモットの初代培
養線維芽細胞を、直径6.0cmのペトリ皿（培養液:MEM＋
５％FBS＜牛胎児血清＞）に播種し、本成分を培養液1mL
当り50μｇ添加し２週間後のコロニー数を測定した成績
結果である。
養線維芽細胞を、直径6.0cmのペトリ皿（培養液:MEM＋
５％FBS＜牛胎児血清＞）に播種し、本成分を培養液1mL
当り50μｇ添加し２週間後のコロニー数を測定した成績
結果である。
（３）安全性 ＜皮膚一次刺激性試験＞ 実施例１で得たクコの水溶液分画について、１％水溶液
を調整し、背部を除毛した兎（１群３匹，体重3.9Kg前
後）の皮膚に貼付した。判定は、貼布後24,48,72時間に
一次刺激性の評点法により紅斑および浮腫を指標として
行った。
を調整し、背部を除毛した兎（１群３匹，体重3.9Kg前
後）の皮膚に貼付した。判定は、貼布後24,48,72時間に
一次刺激性の評点法により紅斑および浮腫を指標として
行った。
その結果、何等、紅斑および浮腫を認めず陰性と判定さ
れた。
れた。
＜急性毒性試験＞ 試験前４時間絶食させたddY系マウス（１群５匹,30g前
後）を使用し、実施例１で得たクコの水溶性分画を2,00
0mg/Kg量経口投与し、毒性症状の発現、程度等を経時的
に観察した。
後）を使用し、実施例１で得たクコの水溶性分画を2,00
0mg/Kg量経口投与し、毒性症状の発現、程度等を経時的
に観察した。
その結果、すべてのマウスにおいて14日間何等異常を認
めず、また解剖の結果も異常がなかった。LD502,000mg/
Kg以上と判定された。
めず、また解剖の結果も異常がなかった。LD502,000mg/
Kg以上と判定された。
（４）用途 以上、本発明によるクコから得られた水溶性分画は、細
胞賦活作用に優れ、しかも安全な素材であることがわか
る。
胞賦活作用に優れ、しかも安全な素材であることがわか
る。
よって例えば、潰瘍部あるいは外傷部などの再生治癒の
促進剤、あるいは細胞賦活剤として、医薬品あるいは化
粧品など、美容や健康に役立つ製剤などに応用すること
が有用である。
促進剤、あるいは細胞賦活剤として、医薬品あるいは化
粧品など、美容や健康に役立つ製剤などに応用すること
が有用である。
特に、皮膚や頭髪用の化粧品（スキンケア，ヘアーケア
製品）などには、常用される基剤とともに配合すればよ
く、その際、添加量については、先の有効性、安全性の
結果からみてクコ由来の有効成分が処方中の１％以下の
範囲となる量が望ましい。
製品）などには、常用される基剤とともに配合すればよ
く、その際、添加量については、先の有効性、安全性の
結果からみてクコ由来の有効成分が処方中の１％以下の
範囲となる量が望ましい。
第１図は、本発明によるクコ由来細胞賦活成分（実施例
１の工程で得られたフラクションのセファデックスＧ−
25ファインによる分画）による溶出図である。 第２図は、本発明によるクコ由来細胞賦活成分の分子量
測定に当って、標準物質を用いて作成した、分子量とKa
v値による検量線である。 第２図中、Ａはポリエチレングリコール1,000（平均分
子量1,000）、またＢはポリエチレングリコール4,000
（平均分子量3,000）を示す。
１の工程で得られたフラクションのセファデックスＧ−
25ファインによる分画）による溶出図である。 第２図は、本発明によるクコ由来細胞賦活成分の分子量
測定に当って、標準物質を用いて作成した、分子量とKa
v値による検量線である。 第２図中、Ａはポリエチレングリコール1,000（平均分
子量1,000）、またＢはポリエチレングリコール4,000
（平均分子量3,000）を示す。
Claims (1)
- 【請求項１】ナス科植物のクコから抽出された、次の
（ａ）〜（ｄ）の性質を有する分画を有効成分とする細
胞賦活作用剤。 （ａ）分子量1,500付近 （ｂ）ペーパークロマトグラム［展開溶媒：水・エタノ
ール混液（1:1）］のRf値が、0.64〜0.68にある。 （ｃ）水及び60％エタノールに可溶 80％以上のエタノールには難溶 無水エタノール、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、クロロ
ホルム、石油エーテル、エーテルには不溶 （ｄ）モーリッシュ反応及びニンヒドリン反応が陽性
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63271818A JPH0686388B2 (ja) | 1988-10-26 | 1988-10-26 | クコ由来細胞賦活作用剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63271818A JPH0686388B2 (ja) | 1988-10-26 | 1988-10-26 | クコ由来細胞賦活作用剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02117686A JPH02117686A (ja) | 1990-05-02 |
| JPH0686388B2 true JPH0686388B2 (ja) | 1994-11-02 |
Family
ID=17505274
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63271818A Expired - Fee Related JPH0686388B2 (ja) | 1988-10-26 | 1988-10-26 | クコ由来細胞賦活作用剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0686388B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4076296B2 (ja) * | 1999-01-22 | 2008-04-16 | 株式会社ナリス化粧品 | 化粧料 |
| ITMI20041631A1 (it) * | 2004-08-06 | 2004-11-06 | Indena Spa | Uso di piante medicinalime di loro estratti come promotori della crescita in veterinaria e zootecnia |
-
1988
- 1988-10-26 JP JP63271818A patent/JPH0686388B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH02117686A (ja) | 1990-05-02 |
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |