JPH0656679A - クロストリジウム・ディフィシル下痢症および偽膜性大腸炎の予防ならびに治療用医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 電子出願以前の出願であるので 要約・選択図及び出願人の識別番号は存在しない。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、クロストリジウム・ディフィシル下 痢症および偽膜性大腸炎の予防ならびに治療医薬 組成物に関するものである。

（従来の技術および発明が解決しようとする課題） ヒトが生れると共に、その腸管内である種の微 生物が腸内に住み着きはじめ１００兆個に達して ほぼ安定な腸内菌叢を形成する。腸内菌叢を構成 する個々の微生物についていえば、物質産生、分 解能等で宿主に害あるいは益をなす場合があるが、 腸内菌叢としてはビタミン供給、感染防止および、 腸機能（蠕動、吸収）への係わりが指摘され、腸 内菌叢のありようは宿主の健康に深く関与してい る。

腸内菌叢は、宿主の生理的条件、植物、薬物、 ストレス等により変動する。ことに、近年におい ては臨床の場に優れた抗菌力と幅広い坑菌スペク トラムを有する坑菌剤が、多種多量に提供され、 種々の感染症の治療および予防を目的として利用 されている。ところが、抗菌剤投与は腸内菌叢に 影響を及ぼす最も大きな要因であり、宿主の常在 菌叢を破壊することで、日常ではその増殖が抑制 されている病原菌の異常増殖を引き起こし、下痢 症、腸炎等の発生を招くことが知られている。特 に人臨床において、抗菌剤を投与された患者の腸 内で異常に増殖したクロストリジウム・ディフィ シル(Clostridium difficile)が産生した毒素に よるクロストリジウム・ディフィシル下痢症およ び偽膜性大腸炎は、時として、患者を死に至らし める重篤な疾患として問題視されている。

クロストリジウム・ディフィシル下痢症および 偽膜性大腸炎の治療では使用抗菌剤の投与中止、 変更、さらにはその原因菌であるクロストリジウ ム・ディフィシルに対して強い抗菌力を有する腸 管内殺菌剤投与など処置されるが、先行する感染 症に対する治療、腸管内殺菌剤自体の抗菌性によ る宿主腸内菌叢の一層の攪乱、乱れた菌叢下での 新たな感染、病原菌の薬剤耐性化等の危険、クロ ストリジウム・ディフィシルが腸内で抗菌剤に本 来的に耐性を持つ芽胞を形成するため、長期間の 化学療法によっても容易に排除されず治療の中止 後に、残存したクロストリジウム・ディフィシル の芽胞が再び発芽増殖することで本疾患が再発し て患者を著しく衰弱させるなど、実際には豊富な 経験に基づく高度な臨床的判断が要求され、その 有効な予防および治療手段が切望される。

したがって、本発明の目的は、新規なクロスト リジウム・ディフィシル下痢症そよび偽膜性大腸 炎の予防ならびに治療用医薬組成物を提供するこ とにある。

（課題を解決するための手段） 上記目的は、酪酸菌の菌体または芽胞および糖 類よりなるクロストリジウム・ディフィシル下痢 症および偽性大腸炎の予防ならびに治療用医薬組 成物により達成される。

（作用） ところで、本疾患の新たな治療法として、酪酸 菌を実験用小動物であるゴールデンハムスタのク ロストリジウム・ディフィシル下痢症病態モデル に用い効果を証明した例が報告されている。本発 明者らは、酪酸菌が抗腐敗性をもちクロストリジ ウム・ディフィシルと生化学的性質が近い腸管内 での増殖競合作用が期待され、また、酪酸菌が宿 主常在菌叢に影響を与えないことからも人におけ るクロストリジウム・ディフィシル下痢症および 偽膜性大腸炎の予防および治療薬の開発を着想し たが先の報告の人への適用に関してはその投与量 が極めて大量（＞１kg／ｄａｙ成人）であり、酪 酸菌のラットを用いた急性経口毒性、ＬＤ_５０５， ０００mg／kgを上まわること、乾燥菌末の投与に おける嗜好性、動物種間における腸内菌叢の違い に起因する有効性に対する疑問等から不可能であ った。

そこで、本発明者らは、ハムスタとヒトの腸内 菌叢を検索したところ、ヒトでは菌密度がハムス タに比較して１０倍程度高く酪酸菌の作用を人で 期待するには、その腸内における酪酸菌濃度を高 める必要性を感じた。その対策として酪酸菌の一 種であるクロストリジウム・ブチリカム・ミヤイ リ５８８(Clostridium butyricum MIYAIRI 58 8) （ＣｂＭと略記する。）菌ペーストを、本菌株が 炭素源として利用しやすく腸管から直接に吸収さ れることのない糖類であるコーンスターチに練合、 乾燥した散剤を調製した。ＣｂＭとコーンスター チの練合比率は所定であるが、「ミヤＢＭ」（Ｃ ｂＭ菌末４０mgを９６０mgのコーンスターチに練 合、ＣｂＭ芽胞を１ｇに１０^８ＣＦＵ含む。）を ＣｂＭ散剤として抗菌剤を投与されているヒトに 投与し、糞便からの回収を検査したところ、少量 の投与（１０^６ＣＦＵ／kg）でもハムスタの実験 と比較して高い回収（１０^７ＣＦＵ／ｇ糞便）を 示し、腸内におけるＣｂＭの高濃度化が達成され たと推察した。また、散剤はＣｂＭ特有の臭気も ほとんどなく、コーンスターチの練合は嗜好性に も寄与した。つぎに消化管に特記すべき疾患をも たずに、抗菌剤療法を受ける入院患者を対象に抗 菌剤投与前に糞便を検索し、ついで、ＣｂＭ散剤 を１回量１ｇを１日１〜３回与えた群と与えない 群とに分け、引続いて糞便を検索したところ、Ｃ ｂＭ投与群では糞便中にクロストリジウム・ディ フィシルあるいはその毒素を検出した患者は、Ｃ ｂＭ投与者の５％に当り、非投与群の３０％に比 較してＣｂＭ投与がヒト腸内におけるクロストリ ジウム・ディフィシルの増殖抑制に著効をしめし た。さらに、抗菌剤投与後の腹部症状を訴え、そ の糞便中にクロストリジウム・ディフィシルが検 出される入院患者に「ミヤＢＭ」をＣｂＭ散剤と して１回量１ｇを１日１〜３回与えたところ、腹 部症状および便性状に改善がみられ、「ミヤＢＭ」 投与１０日目には糞便中のクロストリジウム・デ ィフィシルは培養陰性を示し、発明の完成に至っ た。ＣｂＭは嫌気性の有芽胞菌であり嫌気的条件 下、一般的な培地で増殖し、芽胞形成する。例え ばコーンスターチ２％添加普通ブイヨン等が適当 である。

本発明で使用される糖類としては酪酸菌が資化 できるもので、単糖類、二糖類および多糖類のい ずれも使用できるが、好ましくは多糖類である。

単糖類としては、キシロース、アラビノース、グ ルコース、マンノース、果糖等がある。二糖類と しては、ショ糖、マルトース、セロビオース、ラ クトース等がある。多糖類としては、スターチ、 デキストリン、グリコーゲン、ペクチン、ラフィ ノース、アミグダリン、グリコマンナン等があり、 特にラフィノース、スターチ等である。これらの 糖類は、酪酸菌の菌体または芽胞１０^８ＣＦＵに 対して１mg〜１０ｇ配合される。

また、本発明による医薬組成物は、ヒトの体重 １kg当り酪酸菌の菌体または芽胞として１０^６〜 １０^９ＣＦＵ投与される。また、該組成物は、必 要により医薬的に許容される担体を配合して経口 的に投与される。

酪酸菌は、その代謝産物として酪酸を産生する 微生物をさすが、特にクロストリジウム・ブチリ カムが好ましい。

抗菌剤としては、ペニシリン群(Penicillins) セファロスポリン群(Cephalosporins)、アミノグ リコシド(Aminoglycosides)、マクロライド(Mac rolides)、リンコサミド(Lincosamides)、テトラ サイクリン(Tetracyclines)、ペプチド(Peptide s)、デプシペプチド(Depsipeptides)、リファマ イシン群(Rifamycins)、スルホンアミド化合物(S ulfonamides)、ピリドンカルボン酸群(Pyridon c arboxylic acids)ニトロフラン化合物(Nitrofura ns)ニトロイミダゾール化合物(Nitroimidazole)、 合成抗結核剤(Antituberculous agents)、抗腫瘍 物質(Antineoplastic agents)、抗真菌性物質(A ntimycotics)、トリメトプリム(Trimethoprim)、 クロラムフェニコール(Chloramphenicol)、ノボ ビオシン(Novobiocin)、フシジン酸(Fusidic aci d)、ホスホマイシン(Fosfomycin)、サイクロセリ ン(Cycloserine) 本発明による医薬組成物は、 急性ならびに慢性毒性が極めて低い。

（実施例） 以下実施例により本発明を詳細に説明する。な お、実験に使用したクロストリジウム・ブチリカ ム・ミヤイリ５８８(Clostridium butyricum MIY AIRI 588)は受託番号微工研条寄第２７８９号と して微生物工業技術研究所に保存されている。

実施例 １ １５匹のゴールデンハムスタ（７０ｇ，雄性） の糞便、および消化管に特記すべき疾患をもたず 抗菌剤療法を受ける前の患者６９名の糞便を対象 に、一般に知られる方法に従い腸内菌叢を検索し た。結果は表１に示すようにヒト腸内菌叢では嫌 気性菌が特に優勢で、糞便１ｇ当りの菌密度はハ ムスタの１０倍に達することが知見された。

実施例 ２ ５匹のゴールデンハムシタ（７０ｇ，雄性）そ れぞれにセフェム系抗生物質の１つであるセファ トリジン(Cefatrizine)（ＣＦＴと略記する。） の５．２５mg力価を精製水に懸濁し、ゾンデを用 いてただ１度経口投与したのち、１匹当たりの一日 量１０^９ＣＦＵのＣｂＭ芽胞を含むＣｂＭ乾燥菌 末を１mlの精製水に懸濁し、一日３回に分けて経 口的に与えた投与５日目の直腸内便、および「ミ ヤＢＭ」（ＣｂＭ菌末４０mgを９６０mgのコーン スターチに練合し、ＣｂＭの芽胞を１ｇに１０^８ ＣＦＵ含む。）をＣｂＭ散剤として１回量１ｇを １日１〜３回投与されている消化管に特記すべき 疾患をもたずに、抗菌剤療法（ペニシリン群、セ ファロスポリン群抗生物質）を受けた５名の患者 の糞便を対象に糞便中のＣｂＭの生菌数を測定し た。ＣｂＭの分離培養はＣｂＭ用５％馬血液ＢＬ 寒天培地（シクロセリン(Cycloserine)３５０mg、 カナマイシン(Kanamycin)１mg、クリンダマイシ ン(Clindamycin)７５μｇ、トリメトプリム (Trimethoprim)１２mgをそれぞれ培地１ｌに添加。

）を用いて嫌気的に培養（３７℃、７２ｈｒ）し た。結果は、表２に示すようにし１０例すべての 検体からＣｂＭが検出された。ヒトに「ミヤＢＭ」 をＣｂＭ散剤として投与した場合の回収ＣｂＭ濃 度は、ＣｂＭ菌末をハムスタに投与した場合より も高く、体重当りの投与量からみた投与効率は、 人に「ミヤＢＭ」をＣｂＭ散剤として投与した場 合ではハムスタの１０００倍に達示、ＣｂＭ芽胞 にコーンスターチを密着させ腸内に送り込むこと でコーンスターチがＣｂＭにとって優良な炭素源 である等、なんらかの原因でＣｂＭの増殖が助長 されたものと考えられる。糞便内菌叢は腸管内菌 叢を反映しており、人腸管内におけるＣｂＭの作 用を期待するのに経口用薬剤としてはＣｂＭとコ ーンスターチを練合したＣｂＭ製剤が必要と考え られる。

実施例 ３ 消化管に特記すべき疾患をもたずに、抗菌剤療 法を受ける入院患者を対象に、抗菌剤投与前の糞 便、抗菌剤療法（ペニシリン群、セファロスポリ ン群抗生物質）を受けたのちのそれらの入院患者 を「ミヤＢＭ」（ＣｂＭ菌末４０mgを９６０mgコ ーンスターチに練合し、ＣｂＭ芽胞を１ｇに１０^８ ＣＦＵ含む。）をＣｂＭ散剤として１回量１ｇ を１日１〜３回与えた群（２０名）と与えない群 （２０名）のそれぞれ糞便を対象のクロストリジ ウム・ディフィシルならびにその毒素の検出を試 験した。方法は、クロストリジウム・ディフィシ ルの検出を、ＣＣＦＡ培地を用いて嫌気培養（３ ７℃、７２ｈｒ、培養の検出限界は、４００ＣＦ Ｕ／ｇ（糞便）であった。）し、クロストリジウ ム・ディフィシルの毒素の検出は、ラテックス試 薬［クロストリジウム・ディフィシルＤ−１毒素 の検出は５００ｎｇ／ml（試料）で可能。］で行 なった。結果は表３に示すようにＣｂＭ投与群で は糞便中にクロストリジウム・ディフィシルある いはその毒素を検出した患者はＣｂＭ投与者の５ ％であり非投与群の３０％と比較してＣｂＭ投与 は人腸内におけるクロストリジウム・ディフィシ ルの増殖抑制に著効をしめした。

実施例 ４ 消化管に特記すべき疾患をもたずに、抗菌剤療 法（経口用アンピシリン）を受けた入院患者のう ち、その糞便中のクロストリジウム・ディフィシ ルが検出される２名の入院患者に「ミヤＢＭ」を ＣｂＭ散剤として１回量１ｇ、１日１〜３回与え た。結果は、表４に示す通り２名とも便性状に改 善がみられ「ミヤＢＭ」投与１０日目には糞便中 のクロストリジウム・ディフィシルは培養陰性を 示し、ＣｂＭが糞便から検出された。また、当初 訴えていた腹部症状は「ミヤＢＭ」投与後２〜３ 日で２名とも解消した。

１）検出陽性例を＋、検出陰性例を−で示す。

２）糞便中の生菌数は２．６（Log No.CFU/g糞便） 以上で測定可能。

（発明の効果） 以上述べたように、本発明は、酪酸菌の菌体ま たは芽胞および糖類よりなるクロストリジウム・ ディフィシル下痢症および偽膜性大腸炎の予防な らびに治療用医薬組成物であるから、これを投与 することにより前記症状が予防ないし治療され、 しかも毒性が極めて低いという利点がある。

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【手続補正書】

【提出日】平２．８．２３ 明細書を次のとおり補正する。 （１）第１２頁第１８行「…しめした。」の後に、「ク
ロストリジウム・ディフィシルの臨床分離株の性状は、
表４のとおりであった。」を追加。 （２）第１３頁第５行「…表４に示す…」を、「…表５
に示す…」と訂正。 （３）第１３頁第１０行「…解消した。」の後に、「ク
ロストリジウム・ディフィシルの臨床分離株の性状は、
表６のとおりであった。」を追加。 （４）第１５頁と第１６頁の間に、別紙表４を挿入。 （５）第１６頁第１５行「表４」を、「表５」と訂正。 （６）第１６頁と第１７頁の間に、別紙表６を挿入。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 酪酸菌の菌体または芽胞および糖類より
   な るクロストリジウム・ディフィシル下痢症および 偽膜性大腸炎の予防ならびに治療用医薬組成物。