JPH06510756A - 新規な医薬的使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 新規な医薬的使用 本発明は、新規な医薬的使用、さらに詳しくは筋組織の再生のための医薬の製造 におけるインスリン様因子■（ＩＧＦ−ＩＩ　）の使用に関する。

インスリン様成長因子、ＩＧＦ−１および■は、最初ヒト血清から単離された２ つのペプチドである。ＩＧＦの名称は、これらのペプチドがインスリン様の作用 を発揮し、またそれらの構造がインスリンのそれと相同であるという事実によっ て選択された。ＩＧＦ−ＩとＩＧＦ−Ｉｔの間の類似性にもかかわらず、それら の生理学的挙動は全（異なっている。たとえば、下垂体成長ホルモン、ＧＨは、 成長因子、ソマトメジンの形成、血液中での循環および末梢組織に対する作用を 誘導することによって骨格組織に作用することが見出されている。ＩＧＦ−ＩＩ の場合はそれと異なり、ＧＦＩの同じ制御下にはなくて、ＩＧＦ−１１の生理的 役割はまだ明確ではない。

インスリン様成長因子ｎ　（ＩＧＦ−ＩＩ　）は、構造的にＩＧＦ−■とは有意 に異なり、その治療的有用性についてはほとんど知られていない。ＩＧＦ−ＩＩ は６７のアミノ酸残基を含む単一鎖ペプチドである。ＩＧＦ−ｎについてのさら に詳細は、Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、１９０．４４５−４６２　（１ ９９０）、Ｒｅｎｅ　Ｅ。

Ｈｕ＋ｗｂｅｌ、Ｒｅｖｉｅｗ　Ｉｎ５ｕｌｉｎｅ−１ｉｋｅ　Ｇｒｏｗｔｈ　 Ｆａｃｔｏｒｓ　Ｉおよび■を参照されたい。ＩＧＦ−ｎとＩＧＦ−１は別の受 容体を介して作用する。ＩＧＦ−ｎに対する受容体は分子量２６０ｋＤの単一鎖 受容体で、マンノース−６−リン酸受容体と同一である［Ｍｏｒｇａｎら、Ｎａ ｔｕｒｅ、３２９．　３０１−３０７　（１９８７）　；Ｋｉｅｓｓら、Ｊ、Ｂ ｉｏｌ、Ｃｈｅｔ、２６３．　９３３９−９３４４　（１９８８））。■ＧＦ− ＩＩ受容体は、ダイマーでありプロティンキナーゼ活性を示すＩＧＩ−Ｉ受容体 とはホモロジーがない。ＩＧＦ−ＩＩはＩＧＦ−１受容体と交叉反応するが、Ｉ ＧＦ−ＩはＩＧＦ−ＩＩ受容体とは交叉反応はしない（Ｒｏｔｈ　Ｒ＾、５ｃｉ ｅｎｃｅ。

１９８８、２３９．　１２６９−１２７１）。

広範な実験的研究に関連して、驚くべきことにＩＧＦ−■は、筋組織の再生を効 果的に促進することが見出された。一方、ＩＧＦ−Ｉにはこのような作用はない 。すなわち、ラットにおけるインビボでの実験で、ＩＧＦ−ＩＩは筋組織の再生 を有意に促進し、すなわち、そのペプチドを筋組織の処置に有用とすることが示 された。心筋における創傷治癒に関する類似の実験では、予期に反して、治癒の 増進および／または慶痕形成の低下が観察された。

これは、心筋組織は再生しないというのが確立された知識であることから、新し い所見である。

したがって、本発明の主要な目的は、筋組織の再生の改善に有効な医薬を製造す るための新しい技術を提供することにある。

本発明の他の目的は、心筋組織の治癒に有用な医薬を提供することにある。

本発明の第三の目的は、平滑筋組織、たとえば腸平滑筋組織の治癒に使用する医 薬を製造するための技術を提供することにある。

さらに他の目的は、筋組織の再生の目的での医学的処置方法を提供することにあ る。

したがって、本発明は、筋組織の再生用医薬の製造のためのＩＧＦ−ｎの使用に ある。本発明の好ましい態様によれば、この使用は、心筋組織の治癒に使用する ための医薬の製造を意図するものである。本発明の別の態様は、腸平滑筋組織の 治癒に使用する医薬の製造のためのＩＧＦ−Ｈの使用にある。

本発明はまた、筋組織の改善された再生を生じる医薬的処置方法に関する。上記 方法には、相当する処置を必要とする患者にＩＧＦ−ｎの有効量を投与する工程 を包含する。

本発明によって使用される医薬組成物は、従来の製薬的慣用手段に従って、治療 目的でのヒトまたは動物用医薬に処方される。この組成物には、活性成分ＩＧＦ −ｎが、固体、半固体または液体の医薬的に許容される担体と配合して含有され る。

これらの組成物には、局所的適用に適合する形態の組成物が包含されるが、池の 経路による投与用に設計することもできる。

本発明技術の適用に際して使用される組成物の適当な形態には、錠剤、カプセル 、シロップ、懸濁液、溶液および注射または輸液に適当な形態が包含される。注 射または輸液用に意図された後者の形態が好ましい。このような組成物には、慣 用の製薬的慣用手段に従って、慣用の医薬的に許容される物質、たとえば希釈剤 、結合剤、着色剤、フレーバー、防腐剤、崩壊剤等を、薬剤処方技術における熟 練者にはよく知られた方法で含有させることができる。

注射または輸液可能なＩＧＦ−ＩＩ組成物は、再生治癒に付される筋組織の部位 に注射または輸注によって投与されたのちＩＧＦ−ＩＩの濃度の上昇が起こるの で、とくに適している。心筋の処置にと（に好ましい部位は心腹であり、投与は 様々な形態、たとえばＩＧＦ−ｎ含有徐放性処方の輸注または移植によって行う ことができる。

活性成分、ＩＧＦ−ｎの投与用量は広い限界内で変動させることができるが、好 ましい範囲は約０１〜約１ｈｇ／日の１週間投与である。用量はもちろん、損傷 の程度および種類、患者の種類および状態に依存して、各症例ごとに決定される ことになる。

本発明は、以下に特定の実施例によってさらに詳細に説明するが、これらの実施 例は添付の請求の範囲における定義以」−に本発明の範囲を限定するものではな い。本発明の例示は添付の図面を参照しながら行われる。

図１ａ、ｌｂおよび１ｃは、凍結組織サンプルからの切片であって、図１ａは対 照サンプル、図１ｂはＩＧＦ−■で処置後のサンプル、図１０はＩＧＦ−ＩＩで 処置後のサンプルであり、 図２ａは、図１ｃの切片の拡大細部であり、図２ｂは、同じく図１ｃに相当する プラスチック包埋サンプルからの切片であり、 図３ａおよび３ｂは、プラスチック包埋サンプルからの横断面を示し、図３ａは 光学顕微鏡での結果、図３ｂは電子顕微鏡での結果を例示し、 図４ａおよびｂは、ＩＧＦ−Ｉで処置した組織サンプルからの相当する切片を示 し、 図５ａ−ｄは、ラット心筋からの切片を、対照およびＩＧＦ−ｒｌ処置サンプル について比較して例示する。

本例では、使用した動物は雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット、体重的２ ２５ｇであった。動物は麻酔し、生理食塩水中試験物質、および対照用のビヒク ル、０．１％（ｖ／ｖ）ウシ血清アルブミンを、ラットの長指伸筋に直接、この 筋肉に挿入しミニポンプに連結した薄いＰＥｌ０カテーテルを介して、注入した 。与えられた総用量は、１週間に投与された０２ｍ１であった。この１−週間の 総用量はＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−ｎそれぞれ３０μｇであった。

最終投与後、処置筋肉を固定操作に付した。注入領域から、一つには光学顕微鏡 および電子顕微鏡検査用のプラスチック包埋のために、他方では免疫組織化学的 検討のための凍結材料用に、サンプルを採取した。

結　果 図１ａ、１ｂおよび１ｃは、凍結組織からの切片を例示し、図１ａはビヒクルの みを用い、ＩＧＦは使用していない対照であり、図２ｂおよび２ＣはそれぞれＩ ＧＦ−ＩおよびＴＧＦ−１１て処置後のサンプルの相当する切片を示す。

ビヒクルのみを注入した動物では、「正常」な肉芽組織がカテーテルの周囲に形 成され、この組織は、線維芽細抱、血管および若干の炎症細胞を包含している（ 図１ａ）。同じビヒクル中ＩＧＦ−Ｉを注入した動物ではほぼ同じ像が見られ、 ＩＧＦ−Ｉでは有意な影響は生じないことが示されている（図１ｂ）。

他方、同じビヒクル中ＩＧＦ−ＩＩを注入した動物では、むしろ小さい伸長した 、しばしば多核の細胞が見出された（図３ｂ、プラスチック包埋切片）。凍結切 片中の相当する細胞はデスミン陽性、すなわち筋肉細胞であった（図１ｃおよび ２ａ）。

この結果から判断すると、ＩＧＦ−ＩＩ処装によって生じる細胞は、ＩＧＦ−１ 処置の場合の細胞に比較して、より分化していることがわかる。

例　２ 例１の操作を、ＩＧＦ−ＩＩとＩＧＩ　Ｉを比較するために反復し、いずれも総 用量３０μｇを１週間に投与した。図３ａおよび３ｂは、ＩＧＦ−ＴＩ処置後の プラスチック包埋組繊の切片を例示し、図４ａおよび４ｂはＩＧＦ−Ｉ処置後の 相当する切片を示す。

得られた結果から、ＩＧＦ−ｎはＩＧＦ−Ｉの場合とは異なる、より効率的な作 用を示すことがわかる。ＩＧＦ−ＩＩでは、カテーテルに隣接して、比較的均一 なデスミン陽性細胞集団を生じ、これらの細胞はそれら自体を、比較的近接して 配列された束状構造に配列する傾向を有することがわかる。このような数個の群 が、図３ａおよび３ｂに示されている。カテーテルに隣接した領域には血管は比 較的少なく、これは、ＩＧＦ−ＩＩが血管形成には作用をもたないことを示して いる。

これに対し、ＩＧＦ−１ではデスミン陽性細胞のある程度の増殖は生じるが、こ れらの細胞はより分散していて、ＩＧＦ−ＩＩ処置後のような様式での束状構造 への配列傾向はなかった（図４ａおよび４ｂ）。また、ＩＧＦ−ｎではデスミン 陽性細胞の選択的増殖を示すのに対して、ＩＧＦ−Ｉでは、この種の細胞の弱い 増殖に加えて、線維芽細胞および血管のような他の細胞成分も活性化されること が認められる。この観察は、ＩＧＦ−Ｉと異なり、ＩＧＦ−ｎが損傷部位におい て筋組織の再生に有用であることを明瞭に示している。すなわち、ＩＧＦ−ＩＩ 処装では、十分に分化され、構造化された筋組織を生じ、したがって通常は不可 逆的に形成される慶痕は排除されることがわかる。

ラット心筋傷害の局所処置モデル 雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗ１．ｅｙラット、体重的３５０ｇを使用する。

実験期間中、動物には飼料および水を自由に摂取させる。

」導潰 筋肉障害はマーカインの筋肉内注射によって誘導した。

マーカイン注射では、筋肉細胞に選択的な傷害を生じ、一方、血管は残っている （Ｂｕｔｃｈｅｒ、　１９８９）　ｏベンドパルビタール４５ｍｇ／ｋｇ体重の 腹腔内投与によって動物を麻酔する。腹壁正中切開を行い、横隔膜を通過して０ ．２５ｍ１のマーカイン（２，５ｍｇ／ｍｌ）を心筋層の尖部に注射する。

ついで正中切開を閉じて、動物を放置して回復させる。

傷害の処置 検討すべき薬剤は、浸透圧ポンプ（ａｌｚｅｔ、２ＭＬｉ型、ポンプ作動７日、 または２１１１Ｌ２型、ポンプ作動１４日）に接続したカテーテルを通して６膜 に注入する。カテーテルは改良Ｓｅｌｄｉｎｇｅｒ法によって６膜に挿入する。

心筋傷害の誘発後の予め選択された時間に、動物を再びベンドパルビタール４５ ｍｇ／　ｋｇ体重で麻酔し、正中切開を再び開く。

Ｖｅｎｆｌ、ｏｎカテーテル（１，７ｍｆｆ１００）を、横隔膜を貫通し、心壁 を針で傷害しないことを確認しながら、６膜に短距離挿入する。ついで、プラス チックカテーテルはその位置に残して、スチールの針を引抜（。シラスティック の管（０，０２５ｉｎ、　ＩＤ　；　０．０４７ｉｎ、　００）をカテーテルを 通して６膜に挿入し、最後に、Ｖｅｎｆｌｏｎカテーテルを引抜いてシラステイ ンクの管を心腹嚢に留置する。シラスティックの管を６１０の絹の縫合糸で腹壁 に固定し、ついで腹膜で浸透圧ポンプに連結する。切開を縫合したのち、動物は 放置して回復させる。

実験の最後に、使用したポンプに応じて１または２週後、動物を麻酔する。シラ スティック管を通して小容量のメチレンブルーを注射してシラスティック管の正 しい位置を制御する。動物は、マーカイン注射による傷害領域を損わないように 注意しながら、４％緩衝ホルムアミドの心臓内潅流によって固定する。さらに３ 時間の固定後処理ののち、心臓を７．５％スクロース含有リン酸緩衝食塩溶液に 移し、その後の処理まで＋４℃に保持する。

組織学的検討 治癒過程の進行は、中間フィラメントおよび活動アイソフオームの免疫染色なら びにプラスチック切片の光学顕微鏡観察によって評価する。

それぞれの心臓の尖部を、傷害領域を横切る矢状縫合切断によって分割する。一 方はメタクリレートプラスチック（Ｈｉｓｔｏｒｅｓｉｎ、　Ｒｅｉｃｈｅｒｔ −Ｊｕｎｇ）中に包埋し、１μ■厚の切片に切断する。他の部分からは一連の凍 結切片を調製し、デスミン（Ｄａｋｏｐａｔ）、ビメンチン（Ｄａｋｏｐａｔ） に対するモノクローナル抗体で染色する。免疫反応は、二次ＲＲＰ一連結抗体（ 八＠６ｒｓｈａ＋ｓ）ついでＤＡＢ反応により可視化上に略述した操作ののち、 １日５μｇのＩＧＦ−ＩＩを７日間投与する。このＩＧＦ−１１処置はマーカイ ンの注射ｖｉ３日から開始する。対照としては０１％ＢＳ＾を使用する。

ＢＳ＾処置は通常、結合織とともに廉痕組織の形成および線維芽細胞および肉芽 管の増殖を生じる。

ＩＧＦ−ＩＩｎ処置結果は図５ａ−ｄに示す。図ａおよび５ｂには、それぞれ対 照およびＩＧＦ−ＩＩｎ処置、デスミンに対するモノクローナル抗体による染色 を用いて例示する。矢印を囲む白い領域は心筋切片における傷害領域であり、５ ａおよび５ｂの上記領域の比較から、有意な再生および治癒がＩＧＦ−ＩＩｎ処 置より起こっていることがわかる。

図５ｃおよび５ｄは、染色にビメンチンを用いた対照とＩＧＦ−ＩＩｎ処置同様 な比較を示し、５ａおよび５ｂの間の比較とともに、ＩＧＦ−ｎ処置による治癒 過程の本質的な改善を反映するものである。

例　４ ＩＧＦ−ＩＩの用量を倍の１０μｇ／日にするほかは、例３を同様にして反復す る。ＩＧＦ−ｎ処置の結果は、対照に比較してラット心筋の驚異的な拡大を生じ る。組織学的検討ては、結合織増殖または高血圧に関連した二次的肥大で観察で きる傷害は認められなかった。この予期し得ない結果は、心筋梗塞における心筋 能力の回復のためのＩＧＦ−ＩＩｎ処置有用性を明確に街示するものである。

本発明が極めて有用であろうと考えられるとくに一つの適応症は、心不全すなわ ち、冠梗塞におけるパーフォーマシスの回復である。すべてではないにしても、 多くの冠梗塞患者が、心筋における痢痕組織の形成により、冠機能の障害をもっ ている。このような廠痕組織は正常な心筋組織の収縮／ポンプ機能を欠き、心機 能の低下を生じることになる。

本発明はまた、治癒および組織再生がよい方向に働く他の平滑筋組織、たとえば 血管壁および腸管壁の処置にも有用である。

ＦＩＧ、１ａ ＦＩＧ、２ａ ＦＩＧ、２ｂ ＦＩＧ、３ａ ＦＩＧ、３ｂ ＦＩＧ、４ａ ＦＩＧ、４ｂ ＦＩＧ、５ａ　ＦＩＧ、５ｂ ＦＩＧ、５ｃ　ＦＩＧ、５ｄ 補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８） １、国際出願の表示 ＰＣＴ／ＳＥ　９２１００３９７ ２、発明の名称 新規な医薬的使用 ３、特許出願人 住所　スウェーデン国ニス−７５１８２ウプサラ（番地なし）名称　カビ・ファ ーマシア・アクチェボラーグ４、代理人 住所　東京都千代田区麹町３丁目２番地（相互第一ビル）電話　（３２６１）２ ０２２ 請求項１〜１０は、新たな請求項１と置き換えられた。

以上 請求の範囲 １、心筋組織または平滑筋組織に関連する筋組織の再生または廠痕形成の抑制用 の医薬の製造のためのＩＧＦ−■の使用。

国際調査報告 １．１ｍｓ、、ａｌ　１１ｍｄｉＩｌａ　Ｐσ／ＳＥ　９２１００３９７１＋＋ 、ｓ（１ｍｓ１１．ｅ、、＋ａ＋　ＰＣＴ／ＳＥ　９２１００３９７国際調査報 告

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．筋組織の再生または瘢痕形成の抑制用の医薬の製造のためのＩＧＦ−ＩＩの 使用。
2. ２．心筋組織の治癒に使用する医薬を製造するための請求項１に記載の使用。
3. ３．平滑筋組織の治癒に使用する医薬を製造するための請求項１に記載の使用。
4. ４．筋組織の再生を目的とする医薬的処置方法において、そのような処置を必要 とする患者にＩＧＦ−ＩＩを投与する工程からなる方法。
5. ５．心筋組織の治癒のための請求項４に記載の方法。
6. ６．平滑筋組織の治癒のための請求項５に記載の方法。
7. ７．欠陥組織の部位にＩＧＦ−ＩＩを局所的に投与する工程からなる請求項４、 ５または６に記載の方法。
8. ８．創傷の治癒時の瘢痕形成を最小限にする方法において、創傷患者にＩＧＦ− ＩＩの有効量を投与する工程からなる方法。
9. ９．傷害後の望ましくない組織の接着を予防するための請求項８に記載の方法。
10. １０．手術時の望ましくない組織の接着を予防するための請求項９に記載の方法 。