JPH0650971A - ヒトインターフェロンαの免疫学的測定法およびその試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】ヒトインターフェロンαの免疫学的測定法およ
びその試薬を提供する。 【構成】 ヒトインターフェロンαを担体上に保持さ
れた抗体（Ａ）で認識させ、 上記のヒトインターフェロンαを抗体（Ａ）と抗
原決定部位が異なる抗体（Ｂ）あるいは抗体（Ｂ）誘導
体で認識させた後（ただし、抗体（Ａ）と抗体（Ｂ）の
うち少なくとも一方はモノクロナール抗体である）、 上記の抗体（Ｂ）を認識する標識化された特異抗
体で、あるいは抗体以外の物質であって上記の抗体
（Ｂ）誘導体の誘導体部分に特異的に結合する標識化さ
れた物質で認識させ、 上記の標識物質を定量するヒトインターフェロン
αの免疫学的測定法およびその試薬。 【効果】ヒトインターフェロンαを高感度に測定でき
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ヒトインターフェロン
αの免疫学的測定法およびその試薬に関する。

【０００２】

【従来の技術】ヒトインターフェロンα（以下、ｈＩＦ
Ｎαと称することがある）は、ウイルス、エンドトキシ
ン、細菌、癌細胞などにより活性化された白血球により
産生される１６６個（または１６５個）のアミノ酸から
なる分子量約２０,０００の蛋白質である。その主な生
物活性としては、ウイルス増殖の抑制、細胞分裂の抑
制、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性化、マクロフ
ァージの機能調節などが挙げられる。近年の遺伝子工学
の進歩により、ｈＩＦＮαの遺伝子を導入した大腸菌あ
るいは動物細胞に、大量にｈＩＦＮαを生産させること
が可能になった。ｈＩＦＮαは、臨床において、Ｂ型慢
性肝炎、腎癌、Ｃ型肝炎などの治療に用いられ良好な成
績を挙げている。臨床における治療効果は各種の臨床検
査パラメーターをモニターすることにより可能である
が、ｈＩＦＮαの血液中または体液中の濃度を測定する
ことは、最も重要な臨床検査パラメーターの一つであ
る。従来、ｈＩＦＮαの体液あるいは他の試料中の濃度
を測定するには、抗体感作血球とそれに対する抗原（ｈ
ＩＦＮα）との凝集反応に基づく逆受け身赤血球凝集試
験（ＲＰＨＡ）（特公昭６０−１９９８２８号）、ウイ
ルスによる培養細胞の破壊を阻止する能力を測定するバ
イオアッセイ法（ルービンスタインら、 J. Virol. ３
７, ７５５−７５８ （１９８１））、あるいは抗ｈＩ
ＦＮα抗体と放射性物質で標識された抗ｈＩＦＮα抗体
を使用するラジオイミュノアッセイ法（ＲＩＡ）（ＷＯ
８２／０１７７３号やＵＳ４６２３６２１号）が主に用
いられてきた。しかしながら、逆受け身赤血球凝集試験
は血清などのサンプル中のＩＦＮαの濃度を測定するに
は不向きであり、また定量性が劣る。また、バイオアッ
セイ法の操作は煩雑であり、ｈＩＦＮαと他のｈＩＦＮ
のタイプ（β、γ）を区別することはできない。

【０００３】また、非放射性物質を標識物質として使う
免疫学的測定法は近年急速な発展を遂げつつあり、代表
的な標識物質としてはホースラディッシュパーオキシダ
ーゼ（ＨＲＰ）などの酵素、ＦＩＴＣ（フルアレッセイ
ンイソチオシアネート）などの蛍光物質が挙げられる。
該免疫学的測定法は放射性物質を使用しないために、取
り扱い上の規制が無く、簡便で鋭敏かつ高速な定量法と
して急速に普及しつつある。しかしながら、非放射性物
質にはバックグラウンドとの信号／雑音比（Ｓ／Ｎ比）
が放射性物質に比べて低いという問題、また測定に使用
する抗体の選択と組み合わせ、使用する順序、非特異的
な認識によるバックグラウンドの上昇、非放射性物質の
濃度測定の最適条件の設定が難しいなどの問題があっ
て、現在のところ、ｈＩＦＮαに選択的で、非放射性物
質を標識物質とする高感度な測定法は開発されていな
い。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、ヒトインタ
ーフェロンαを高感度に定量できる免疫学的測定法およ
びその試薬を提供するものである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記事情に
鑑み鋭意研究した結果、ヒトインターフェロンαを選択
的、かつ鋭敏に定量できる測定法を見いだし、本発明を
完成するに至った。即ち、本発明は、 （１） ヒトインターフェロンαを担体上に保持され
た抗体（Ａ）で認識させ、 上記のヒトインターフェロンαを抗体（Ａ）と抗
原決定部位が異なる抗体（Ｂ）あるいは抗体（Ｂ）誘導
体で認識させた後（ただし、抗体（Ａ）と抗体（Ｂ）の
うち少なくとも一方はモノクローナル抗体である）、 上記の抗体（Ｂ）を認識する標識化された特異抗
体で、あるいは抗体以外の物質であって上記の抗体
（Ｂ）誘導体の誘導体部分に特異的に結合する標識化さ
れた物質で認識させ、 上記の標識物質を定量するヒトインターフェロン
αの免疫学的測定法、および （２） 担体上に保持された抗体（Ａ）、 抗体（Ａ）と抗原決定部位が異なる抗体（Ｂ）ある
いは抗体（Ｂ）誘導体（ただし、抗体（Ａ）と抗体
（Ｂ）のうち少なくとも一方はモノクローナル抗体であ
る）、および 抗体（Ｂ）を認識する標識化された特異抗体、ある
いは抗体以外の物質であって抗体（Ｂ）誘導体の誘導体
部分に特異的に結合する標識化された物質を組み合わせ
てなるヒトインターフェロンαの免疫学的測定用試薬に
関するものである。本発明において抗体（Ａ）と抗体
（Ｂ）の両者が同じ動物種から得られる抗体である場合
には抗体（Ｂ）の代わりに抗体（Ｂ）誘導体が好ましく
用いられる。

【０００６】本発明におけるｈＩＦＮαは主にヒト白血
球により産生される一群のｈＩＦＮαであり、ｈＩＦＮ
α２Ａ、２Ｂなど数種類が亜種として報告されている
（ベストカら、 Ann. Rev. Biochem. ５６，７２７−７
７７（１９８７））。本発明におけるｈＩＦＮαは、ｈ
ＩＦＮαの遺伝子を導入された大腸菌により産生される
糖鎖を持たないものでもよく、またヒト白血球あるいは
ｈＩＦＮαを産生する細胞を移植されたハムスターなど
の動物によって産生される糖鎖を持つものでもよい。ま
た、糖鎖を持たないｈＩＦＮαに糖あるいは糖鎖を導入
したものでもよく、あるいは糖鎖を持つｈＩＦＮαの糖
鎖を修飾したものでもよい。しかしながら、これらに限
定されるものではない。本発明におけるｈＩＦＮαは、
ｈＩＦＮαのアミノ酸組成の一部を変更したミューテイ
ン（mutein）でもよい。本発明における抗体（Ａ）およ
び抗体（Ｂ）の２種の抗体は、それぞれポリクロナール
抗ｈＩＦＮα抗体およびモノクローナル抗ｈＩＦＮα抗
体のいずれであってもよいが、少なくとも一方がモノク
ローナル抗体であることが好ましい。また、２種の抗体
はそれぞれ抗原決定部位が異なっているものが選ばれ
る。これらの抗体はｈＩＦＮαの活性を中和するもので
もよい。該ポリクローナル抗体は、ヒトインターフェロ
ンαを抗原として自体公知の方法で動物に免疫して得ら
れる特異抗血清あるいはこれを精製して得られる抗体を
いう。ここでいう動物とは、例えば馬、羊、山羊、兎、
鶏などが挙げられるが、好ましくは馬、羊、山羊、兎で
あり、さらに好ましくは馬、山羊である。該モノクロー
ナル抗体は、ヒトインターフェロンαを抗原として動物
に免疫し、得られる脾臓細胞を同じ動物種の骨髄由来細
胞と融合させ、産生される抗体の抗原に対する特異性を
指標にして融合細胞（ハイブリドーマ）を選別し、クロ
ーン化させて得られる単一ハイブリドーマから産生され
る抗原に特異的に反応する抗体を得る自体公知な方法で
得られる抗体を含む培養上清、腹水、あるいはこれらを
精製して得られる抗体をいう。ここでいう動物とは、上
記ポリクローナル抗体を得る動物種とは異なる動物種で
あれば特に限定されないが、ラット、マウスなどが好ま
れる。また、マウスの系統（ストレイン）としてはバル
ブシー（Ｂａｌｂ／Ｃ）が好まれるが、これに限定され
る訳ではない。

【０００７】また、抗体（Ａ）および抗体（Ｂ）のクラ
スとしては、Ｍ、Ｇなどが挙げられるが、Ｇが好まれ
る。また、パパイン、キモトリプシンなどで自体公知の
方法で該モノクローナル抗体を酵素処理して得られる、
例えばエフエービープライム２（Ｆ（ａｂ）’２）ある
いはエフエービー（Ｆ（ａｂ））などのフラクションが
用いられる場合もある。

【０００８】本発明における抗体誘導体とは、目的とす
る抗体の機能を失わずに、標識化された物質と特異的に
結合するように作製されたものであればよい。例えば、
自体公知の方法により、ガラクトース、マンノース、グ
ルコース、 Ｎ−アセチルグルコース、Ｎ−アセチルガラ
クトース、フコースなどの単糖もしくは複数の単糖から
構成される糖鎖（例、シアル酸、トリアセチルジトトリ
オースなど）を抗体に共有結合させたものであるが、こ
れらに限定されるものではない。本発明における抗体
（Ｂ）を認識する標識化された特異抗体とは、標識物質
を結合した特異抗体であり、該特異抗体とは、上記ポリ
クロナール抗体またはモノクローナル抗体を得る動物種
の抗体を自体公知な方法で動物に免疫して得られる特異
抗血清もしくはこれを精製して得られる抗体、あるいは
モノクローナル抗体、またはこれらのフラクションであ
る。該フラクションとしては、上記したものと同様なも
のが挙げられる。該特異抗体は免疫された抗体を特異的
に認識できるものでなければならない。また、該特異抗
体としては、抗体（Ａ）に使用される上記ポリクローナ
ル抗体またはモノクローナル抗体を得る動物種の非特異
血清に結合する抗体を除去したものが好ましい。

【０００９】本発明における抗体誘導体の誘導体部分に
特異的に結合する標識化された物質における標識化され
た物質とは、標識物質を結合した物質である。該標識物
質を結合した物質における物質としては、該誘導体部分
に特異的に結合する物質であればよく、例えば、該誘導
体部分が単糖あるいは糖鎖である場合、それぞれの単糖
あるいは糖鎖を特異的に認識するレクチン、コンカナバ
リンＡ、ドリコスマメ凝集素などが挙げられる。レクチ
ンは豆などの植物、動物あるいは甲殻類などから抽出、
精製されるものであり、単糖あるいは糖鎖を特異的に認
識するものである。従って、単糖あるいは糖鎖で標識さ
れた抗ｈＩＦＮα抗体は、レクチンで特異的に認識され
る。例えば、ベータガラクトース（β−ＧＡＬ）とキャ
スタービーン（Ｃastor Beam）由来のレクチン（ＲＣＡ
−Ｉ）の組み合わせなどが知られている。

【００１０】本発明の標識物質としては、放射性物質ま
たは非放射性物質のいずれであってもよいが、好ましく
は非放射性物質が使用される。該放射性物質としては、
α線、ベータ線、ガンマー線などの放射線を出す放射性
同位元素が挙げられる。該非放射性物質としては、例え
ば、酵素、蛍光プローブ（蛍光色素）、色素、化学発光
物質、レーザー色素などがあり、好ましくは酵素、蛍光
色素である。該酵素としてはホースラディッシュパーオ
キシダーゼ（ＨＲＰ）、ウリカーゼ、アルカリフォスフ
ァターゼ、グルコースオキシダーゼなどが挙げられる
が、通常、免疫学的測定法において標識酵素として用い
られるものまたはその可能性のあるものであれば、特に
限定されるものではない。該化学発光物質としては、例
えば、ピリドピリダジン誘導体またはその塩が挙げられ
る。特開平５−０７８３５６号には、ピリドピリダジン
誘導体またはその塩の化学発光反応を利用することを特
徴とするアッセイ法について記載されており、本発明の
方法においても適用できる。

【００１１】本発明における特異抗体あるいは抗体誘導
体の誘導体部分に特異的に結合する抗体以外の物質へ標
識物質を結合させるには、使用される標識物質の特性に
応じて自体公知な方法が採用される。また、該抗体以外
の物質においては、該物質と標識物質との複合体を形成
させてもよく、例えば、ビオチンを結合した標識物質と
アビジンあるいはストレプトアビジンとの間で形成され
る複合体が挙げられる。アビジンまたはストレプトアビ
ジンは卵白あるいは菌体などから抽出、精製されるもの
であり、ビオチンを特異的に認識するものである。本発
明における放射性物質の量の測定は自体公知な方法で行
なわれる。本発明における非放射性物質の量あるいは濃
度の測定は、使用される物質の特性に応じて自体公知な
方法で行なわれる。例えば、該物質として、例えばＨＲ
Ｐが使用される場合には、基質として、例えばオルトフ
タレンジアミン（ＯＰＤ）、エヌ、エヌ、エヌ、エヌテ
トラメチルベンジディン（ＴＭＢ）、２、２アジノビス
（３エチルベンズチアゾリンスルフォン酸）（ＡＢＴ
Ｓ）などが用いられ、それぞれの基質の酵素反応成生物
に特徴的な最大吸収波長付近の波長の吸光度を測定する
ことにより行なわれる。該物質が蛍光色素、例えばフル
アレッセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）である場
合、その量あるいは濃度は、ＦＩＴＣの最大励起波長付
近の波長の光で励起された時に発せられる最大の蛍光が
得られる波長付近の波長の蛍光強度を測定することによ
り測定される。該物質が酵素、例えば、アルカリフォス
ファターゼ、ＨＲＰなどである場合には、化学発光の原
理が使用されてもよく、通常の基質を用いての吸光度を
測定する場合に比較して検出感度が上昇することが期待
される。

【００１２】本発明においてｈＩＦＮαを選択的、かつ
高感度に定量するには、上記各種抗体あるいはそのフラ
クション、または抗体誘導体の誘導体部分の物質あるい
は該誘導体部分に特異的に結合する物質などの選択、そ
れぞれの濃度の最適化、使用する器具への上記各物質の
非特異的吸着の防止、標識物質が非放射性物質である場
合、その量あるいは濃度の測定条件の最適化、例えば検
量線の直線性が成立する範囲が低濃度から高濃度になる
ための各種操作が行なわれる。

【００１３】本発明において用いられる担体上に保持さ
れた抗体における担体としては、例えば、ゲル粒子
［例、アガロースゲル（セファロース４Ｂ、セファロー
ス６Ｂ（ファルマシア・ファインケミカル社（スエーデ
ン）製）など）、デキストランゲル（セファデックスＧ
−７５、セファデックスＧ−２００（ファルマシア・フ
ァインケミカル社製）など）、ポリアクリルアミドゲル
（バイオゲルＰ−３０、バイオゲルＰ−６０、バイオゲ
ルＰ−１００（バイオラッド・ラボラトリーズ社（米
国））など］、セルロース粒子［例、アビセル（旭化成
製）、イオン交換セルロース（ジエチルアミノエチルセ
ルロース、カルボキシメチルセルロースなど）］、物理
的吸着剤［例、ガラス（ガラス球、ガラスロッド、アミ
ノアルキルガラス球、アミノアルキルガラスロッドな
ど）、シリコン片、スチレン系樹脂（ポリスチレン球、
ポリスチレン粒子など）、イムノアッセイ用マイクロプ
レート（ヌンク社（デンマーク）製など）］、イオン交
換樹脂［弱酸性陽イオン交換樹脂（アンバーライトＩＲ
Ｃ−５０（ローム・アンド／ハースト社（米国））
製）、ゼオカーブ２２６（パームチット社（ドイツ）製
など）、弱塩基性陰イオン交換樹脂（アンバーライトＩ
Ｒ−４Ｂ、ダウエックス３（ダウケミカル社（米国）製
など）］などが挙げられる。

【００１４】担体に抗体を保持させるには、常套手段を
応用し得るが、例えば“代謝” 第８巻 （１９７１
年）、第６９６頁に記載されているブロムシアン法、グ
ルタルアルデヒド法などが挙げられる。また、より簡易
な方法として物理的に担体表面に吸着させてもよい。以
下に、ｈＩＦＮαの非放射性物質を利用した免疫学的測
定法の操作について具体例を挙げて説明するが、勿論こ
れに限定されるものではない。非放射性物質を利用した
ｈＩＦＮαの免疫学的測定には９６穴（ウエル）マイク
ロプレート（一体型あるいは分割型）、あるいはガラス
ビーズと試験管などの自体公知な各種器具、吸光度計、
蛍光光度計、吸光、蛍光、化学発光などに対応したマイ
クロプレートリーダーなどの機器が使用される。

【００１５】マイクロプレートを例にとると、マイクロ
プレートの各ウエルに抗体（Ａ）を緩衝液で希釈したも
のを一定量加え、一定時間放置し反応させる。反応時間
は低温（例えば冷蔵庫内）では長く（例えば１２時
間）、室温（例えば２５℃前後）では短く（２時間〜３
時間）設定される。この反応時間は以下の各操作におい
ても適用される。該抗体の希釈率は、１００倍から１０
０,０００倍であり、好ましくは２,０００倍から３０,
００ ０倍、さらに好ましくは５,０００倍から２０,０
００倍である。該緩衝液のペーハー（ｐＨ）は、７から
１０が好ましく、塩濃度は１／２０モル（Ｍ）から１モ
ル（Ｍ）が好ましい。緩衝塩の種類としては、重炭酸ソ
ーダ、燐酸ソーダまたはカリウムが好ましい。特に好ま
しい緩衝液は、１／１０ＭのｐＨ９．６の重炭酸ソーダ
緩衝液である。一定時間反応させた後、該マイクロプレ
ートの各ウエルはツイーン２０（バイオラッド）などの
界面活性剤を含む洗浄液で充分に洗浄される。例えば、
抗体（Ａ）を含む液を排出後、通常ウエルの容量とほぼ
同量の洗浄液を満たし、これを排出する操作を少なくと
も３回繰り返す。該ツイーン２０の濃度は０．０１％
（ｖ／ｖ）〜０．５％（ｖ／ｖ）が好まれ、０．０５％
（ｖ／ｖ）〜０．１５％（ｖ／ｖ）がさらに好まれる。
該洗浄液は燐酸のアルカリ金属塩などを用いて緩衝能を
持たせてもよい。また、該洗浄液には、免疫実験用ブロ
ッキング剤（例、ブロックエース、雪印乳業）を０．５
％（ｖ／ｖ）〜１０％（ｖ／ｖ）、好ましくは１％（ｖ
／ｖ）〜５％（ｖ／ｖ）含ませてもよい。洗浄操作終了
後、ブロックエースを中性付近（ｐＨ７前後）の燐酸緩
衝液などで希釈したものをマイクロプレートの各ウエル
に、各ウエルの容量とほぼ同量を添加し、一定時間放置
し反応させる。この操作は、以後の各操作に使用される
抗体などの各試薬のウエルへの非特異的吸着を防止する
ために行われる。ブロックエースの濃度は、１０％（ｖ
／ｖ）〜５０％（ｖ／ｖ）が好ましく、２０％（ｖ／
ｖ）から４０％（ｖ／ｖ）がさらに好まれる。ブロック
エースの希釈にはｐＨ５〜８の緩衝液が用いられ、燐酸
のアルカリ金属塩を含む生理食塩水が好まれる。反応終
了後は前記と同様の洗浄操作が行なわれる。

【００１６】次に、上記の洗浄操作が行なわれたマイク
ロプレートの各ウエルに、緩衝液で希釈されたブロック
エースで希釈された試料（ｈＩＦＮαを含む体液（血清
など）など）が一定量ずつ加えられ反応が行なわれる。
該緩衝液としては、燐酸のアルカリ金属塩でｐＨが５〜
８に調整された生理食塩水が好まれる。ここで用いられ
るブロックエースの希釈率は１０％（ｖ／ｖ）〜５０％
（ｖ／ｖ）が好まれ、２０％（ｖ／ｖ）から４０％（ｖ
／ｖ）がさらに好まれる。該試料の希釈率は、含まれて
いるｈＩＦＮαの濃度により一概には決められないが、
少なくとも２倍以上に希釈され、検量線の直線性が成立
する範囲内に試料の中のｈＩＦＮαの濃度が収まるよう
に希釈率が選択される。本操作においては既知量のｈＩ
ＦＮαに対して、上記の希釈されたブロックエースによ
る順次希釈系列が作成され、同じマイクロプレートに上
記試料と同様な操作が行なわれる。これらはｈＩＦＮα
の検量線として使用される。反応終了後、前記と同様の
洗浄操作が行なわれる。続いて、抗体（Ｂ）あるいは抗
体（Ｂ）誘導体を緩衝液で希釈したものを一定量加え、
反応が行なわれる。該緩衝液は燐酸のアルカリ金属塩で
ｐＨ５〜８に調整された生理食塩水が好ましい。該抗体
またはそのフラクションの希釈率は、 １００倍〜３０,
０００倍であり、好ましくは５００倍〜１５,０００で
あり、１,０００倍〜５,０００倍がさらに好まれる。該
緩衝液には、前記操作において用いられた抗体（Ａ）が
得られたのと同じ動物種の非特異血清、あるいはモノク
ローナル抗ｈＩＦＮα抗体を得る際に、ｈＩＦＮαに結
合して抗原として用いられる蛋白質（例、牛血清アルブ
ミンなど）が添加されていてもよい。該非特異血清の添
加される濃度は０．０１％（ｖ／ｖ）〜１０％（ｖ／
ｖ）であり、０．１％（ｖ／ｖ）〜５％（ｖ／ｖ）が好
まれ、０．２％（ｖ／ｖ）〜２％（ｖ／ｖ）が特に好ま
れる。また、抗体（Ｂ）がモノクローナル抗体である場
合、抗原決定部位（エピトープ）の異なるモノクローナ
ル抗ｈＩＦＮα抗体またはそのフラクションを用いれ
ば、各種のｈＩＦＮαの亜種を識別することも可能であ
る。反応終了後、前記と同様の洗浄操作が行なわれる。

【００１７】続いて、上記抗体（Ｂ）を認識する標識化
された特異抗体、または抗体（Ｂ）誘導体の誘導体部分
に特異的に結合する標識化された抗体以外の物質を、緩
衝液で希釈したものを一定量加え反応させる。本反応は
室温（例えば１５℃〜２５℃が好まれる）で行われ、反
応時間は１５分〜３時間が好まれ、３０分〜２時間がさ
らに好まれる。該特異抗体あるいは抗体以外の物質の希
釈率は、１,０００倍〜１００,０００倍であり、５,０
００倍〜５０,０００倍が好まれ、７,５００倍〜３０,
０００倍が特に好まれる。該緩衝液には、 ブロックエー
スが１％（ｖ／ｖ）〜５０％（ｖ／ｖ）、好ましくは５
％（ｖ／ｖ）〜４０％（ｖ／ｖ）、特に好ましくは１０
％（ｖ／ｖ）〜３０％（ｖ／ｖ）が添加される。該緩衝
液としては、燐酸のアルカリ金属塩でｐＨ５〜８に調整
された生理食塩水が好まれる。該緩衝液には前記操作に
おいて用いられた抗体（Ａ）が得られたのと同じ動物種
の非特異血清、あるいはモノクローナル抗ｈＩＦＮα抗
体を得る際に、ｈＩＦＮαに結合して抗原として用いら
れる蛋白質（例、牛血清アルブミンなど）が添加されて
もよい。該非特異血清が添加される濃度は、０．０１％
（ｖ／ｖ）〜１０％（ｖ／ｖ）であり、０．１％（ｖ／
ｖ）〜５％（ｖ／ｖ）が好まれ、０．２％（ｖ／ｖ）〜
２％（ｖ／ｖ）が特に好まれる。本操作においては、前
記操作において抗体（Ｂ）が用いられれば、該抗体を認
識する標識化された特異抗体が、抗体（Ｂ）誘導体が用
いられれば、該抗体誘導体の誘導体部分に特異的に結合
する標識化された抗体以外の物質が用いられる。反応終
了後、前記と同様な洗浄操作が行われる。続いて、以上
の操作でマイクロプレートに残存した非放射性物質の量
あるいは濃度が測定される。ここでは非放射性物質がＨ
ＲＰである場合について以下に説明するが、これに限定
されるものではない。

【００１８】該酵素の基質としては、ＯＰＤ、ＴＭＢ、
ＡＢＴＳなどが用いられる。必要に応じて使用直前に該
基質の溶液が調製される。該基質溶液は一定量ずつマイ
クロプレートの各ウエルに加えられ、それぞれ自体公知
の方法で定量操作を行うことができる。ＯＰＤあるいは
ＴＭＢの場合、酵素反応停止剤として硫酸が用いられ、
該硫酸の濃度としては１〜４規定が好まれる。各ウエル
内で行なわれる基質の酵素反応生成物の量あるいは濃度
の測定には、通常、マイクロプレートリーダーなどの機
器が使用されるが、これらの機器の測定能力範囲（直線
性が成立する範囲）内に反応生成物の量あるいは濃度が
収まるように基質の濃度、液量、反応時間などを選択す
ればよい。例えば、ウエル内の液量が多ければ反応時間
を短くしたり、あるいは基質の濃度が低ければ反応時間
を長くするなどの方法を採用すればよいが、要は前記の
目的が達成されればよく、これらに限定されるものでは
ない。

【００１９】本発明において使用される抗体などの各試
薬は最適濃度に調整された後、自体公知の方法で真空乾
燥あるいは凍結乾燥されてもよい。また、複数の試薬が
同時に反応に供される場合には、これらが混在した状態
で、真空乾燥あるいは凍結乾燥されてもよい。また、洗
浄に使用される各試薬も同時に使用される場合には、こ
れらが混在した状態で真空乾燥あるいは凍結乾燥されて
もよい。真空乾燥あるは凍結乾燥が困難な場合には冷蔵
あるいは冷凍保存が好まれる。また、必要に応じて各種
保存剤、防腐剤が添加されてもよい。また、抗体（Ａ）
を吸着させ、さらにブロッキング操作および洗浄をおこ
なったイミュノプレートを真空乾燥したものを室温ある
いは冷所で保存しておき、サンプル中のインターフェロ
ンα濃度を測定してもよい。

【００２０】

【実施例】以下に実施例、比較例を挙げて本発明をさら
に具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるも
のではない。

【００２１】

【実施例１】抗体として以下のものを使用した： １）抗ｈＩＦＮα馬血清（ロット番号００１：日本ケミ
カルリサーチ社（ＪＣＲ）。抗体（Ａ）（一次抗体）） ２）抗ｈＩＦＮαマウスモノクローナル抗体（ロット番
号ＭＩＦ１ー１０１０２：林原生化学研究所。抗体
（Ｂ）（二次抗体）） ３）ペルオキシダーゼ標識抗マウスイミュノグロブリン
Ｇ（ロット番号０６１８９１ｊ２。ケミコン社。抗体
（Ｂ）を認識する標識化された特異抗体（三次抗体）） 上記一次抗体を、１／１０ＭのｐＨ９．６の重炭酸ソー
ダ緩衝液で１０,０００倍に希釈し、９６穴イミュノプ
レート（ヌンク社イミュノプレート、マキシソープＦ９
６）の各穴に１００μｌずつ分注しプレートシーラー
（三光純薬）で密封した後、冷蔵庫内で一晩インキュベ
ートした。各穴に入れた前記抗体希釈液を排出した後、
５％（ｖ／ｖ）のブロックエース（雪印乳業）と０．１
％（ｖ／ｖ）のツイーン２０（バイオラッド）を含むＰ
ＢＳ（フローラボラトリーズ）を３００μｌ注入し、さ
らにこれを排出するという洗浄操作を３回繰り返した
（イミュノウオッシャーＮＫー１００（インターメッド
社）を使用）。

【００２２】各穴内に少量残留する洗浄液をブロット紙
上でできるだけ排出後、２５％（ｖ／ｖ）のブロックエ
ースを含むＰＢＳの３００μｌを各穴に入れプレートシ
ーラーで密封後、冷蔵庫内で一晩インキュベートした。
前記の洗浄操作を５回繰り返した後、ＰＢＳで１０％
（ｖ／ｖ）に希釈したブロックエースでインターフェロ
ンα製剤（キャンフェロン（３００万単位（ＩＵ）含
有）。武田薬品）を所定の濃度（０ＩＵ／ｍｌ〜３０Ｉ
Ｕ／ｍｌ）に希釈した希釈系列を作製し、該イミュノプ
レートの所定の穴に１００μｌずつ分注しプレートシー
ラーで密封後、冷蔵庫内で一晩インキュベートした。翌
日、前述の方法で各穴の洗浄操作を５回おこなった。

【００２３】各穴内に少量残留する洗浄液をブロット紙
上でできるだけ排出後、ＰＢＳで１０％（ｖ／ｖ）に希
釈したブロックエースで２,０００倍に希釈した２次抗
体を該イミュノプレートの各穴に１００μｌずつ分注し
プレートシーラーで密封後、冷蔵庫内で一晩インキュベ
ートした。翌日、前述の方法で各穴の洗浄操作を５回お
こなった。各穴内に少量残留する洗浄液をブロット紙上
でできるだけ排出後、ＰＢＳで１０％（ｖ／ｖ）に希釈
したブロックエースで１０,０００倍に希釈した３次抗
体を該イミュノプレートの各穴に１００μｌずつ分注し
プレートシーラーで密封後、室温（約２２℃）で１時間
インキュベートした。インキュベート終了後、前述の方
法で各穴の洗浄操作を５回おこなった。各穴内に少量残
留する洗浄液をブロット紙上でできるだけ排出後、パー
オキシダーゼ用発色試薬ティーエムブルー（ＴＭ Ｂｌ
ｕｅ、ビーエム機器）を各穴に１００μｌずつ分注し、
室温（約２２℃）で１０分間反応させ、１．５規定の硫
酸を２５μｌを各穴に分注することにより反応を停止さ
せ、４５０ナノメーターのフィルターを有するマイクロ
プレートリーダー（エムティーピー３２（ＭＴＰー３
２）、コロナ社）で各穴の吸光度を測定することにより
反応生成物の濃度を決定した（６３０ナノメーターのフ
ィルターでの吸光度をバックグラウンドとして差し引い
ている）。該反応生成物の濃度は抗インターフェロンα
抗体により固定されたインターフェロンαの量に比例す
るため、インターフェロンαの濃度を定量することがで
きる。測定結果を〔図１〕に示す。〔図１〕において、
横軸はインターフェロンαの濃度を縦軸は吸光度を示
す。インターフェロンαを含まない場合には吸光度がほ
ぼゼロであり、かつインターフェロンαの濃度が０ＩＵ
／ｍｌ〜３０ＩＵ／ｍｌの間でほぼ直線的な関係が成立
していることがわかる。

【００２４】

【実施例２】抗体として以下のものを使用した： １）抗ｈＩＦＮα馬血清（ロット番号００１：日本ケミ
カルリサーチ社（ＪＣＲ）。一次抗体。） ２）抗ｈＩＦＮαマウスモノクローナル抗体（ロット番
号ＭＩＦ１ー１０１０２：林原生化学研究所。二次抗
体。） ３）ペルオキシダーゼ標識抗マウスイミュノグロブリン
Ｇ（ロット番号０６１８９１ｊ２。ケミコン社。三次抗
体。） 非特異正常血清として以下のものを使用した： 正常馬血清（ハイクローン社） 上記一次抗体を、１/１０ＭのｐＨ９．６の重炭酸ソー
ダ緩衝液で１０,０００倍に希釈し、９６穴イミュノプ
レート（ヌンク社イミュノプレート、マキシソープＦ９
６）の各穴に１００μｌずつ分注し、プレートシーラー
（三光純薬）で密封した後、冷蔵庫内で一晩インキュベ
ートした。その後、各穴に入れた前記抗体希釈液を排出
し、５％（ｖ／ｖ）のブロックエース（雪印乳業）と
０．１％（ｖ／ｖ）のツイーン２０（バイオラッド）を
含むＰＢＳ（フローラボラトリーズ）を３００μｌ注入
し、さらにこれを排出するという洗浄操作を３回繰り返
した（イミュノウオッシャーＮＫ−１００（インターメ
ッド社）を使用）。各穴内に少量残留する洗浄液をブロ
ット紙上でできるだけ排出後、２５％（ｖ／ｖ）のブロ
ックエースを含むＰＢＳの３００μｌを各穴に入れ、プ
レートシーラーで密封後、冷蔵庫内で一晩インキュベー
トした。前記と同様の洗浄操作を５回繰り返した後、Ｐ
ＢＳで１０％（ｖ／ｖ）に希釈したブロックエースで、
インターフェロンα製剤（キャンフェロン（３００万単
位（ＩＵ）含有）。武田薬品）を所定の濃度（０ＩＵ／
ｍｌ〜６０ＩＵ／ｍｌ）に希釈した希釈系列を作製し、
イミュノプレートの所定の穴に１００μｌずつ分注し、
プレートシーラーで密封後、冷蔵庫内で一晩インキュベ
ートした。翌日、前述の方法で各穴の洗浄操作を５回お
こなった。各穴内に少量残留する洗浄液をブロット紙上
でできるだけ排出後、ＰＢＳで１０％（ｖ／ｖ）に希釈
したブロックエースで、２,０００倍に希釈した２次抗
体（１％（ｖ／ｖ）の非特異正常馬血清を含有）を該イ
ミュノプレートの各穴に１００μｌずつ分注し、プレー
トシーラーで密封後、冷蔵庫内で一晩インキュベートし
た。翌日、前述の方法で各穴の洗浄操作を５回おこなっ
た。各穴内に少量残留する洗浄液をブロット紙上ででき
るだけ排出後、ＰＢＳで１０％（ｖ／ｖ）に希釈したブ
ロックエースで、１０,０００倍に希釈した３次抗体
（１％（ｖ／ｖ）の正常非特異馬血清を含有）を該イミ
ュノプレートの各穴に１００μｌずつ分注し、プレート
シーラーで密封後、室温（約２２℃）で１時間インキュ
ベートした。インキュベート終了後、前述の方法で各穴
の洗浄操作を５回おこなった。各穴内に少量残留する洗
浄液をブロット紙上でできるだけ排出後、パーオキシダ
ーゼ用発色試薬ティーエムブルー（ＴＭ Ｂｌｕｅ、ビ
ーエム機器）を各穴に１００μｌずつ分注し、室温（約
２２℃）で１０分間反応させた。１．５規定の硫酸を２
５μｌを各穴に分注することにより反応を停止させ、４
５０ナノメーターのフィルターを有するマイクロプレー
トリーダー（エムティーピー３２（ＭＴＰー３２）、コ
ロナ社）で各穴の吸光度を測定することにより、反応生
成物の濃度を決定した（６３０ナノメーターのフィルタ
ーでの吸光度をバックグラウンドとして差し引いてい
る）。該反応生成物の濃度は、抗インターフェロンα抗
体により固定されたインターフェロンαの量に比例する
ため、インターフェロンαの濃度を定量することができ
る。測定結果を〔図２〕の○として示す。〔図２〕にお
いて、横軸はインターフェロンαの濃度を縦軸は吸光度
を示す。インターフェロンαを含まない場合には吸光度
がほぼゼロであり、かつインターフェロンαの濃度が０
ＩＵ／ｍｌ〜６０ＩＵ／ｍｌの間でほぼ直線的な関係が
成立していることがわかる。

【００２５】

【実施例３】抗体として以下のものを使用した： １）抗ｈＩＦＮα山羊血清（ロット番号００１：日本ケ
ミカルリサーチ社（ＪＣＲ）。一次抗体。） ２）抗ｈＩＦＮαマウスモノクローナル抗体（ロット番
号ＭＩＦ１ー１０１０２：林原生化学研究所。二次抗
体。） ３）ペルオキシダーゼ標識抗マウスイミュノグロブリン
Ｇ（ロット番号０６１８９１ｊ２。ケミコン社。三次抗
体。） 非特異正常血清として以下のものを使用した： 正常山羊血清（ロット番号０４１７９０ＣＨＭ。ケミコ
ン社。） 上記一次抗体を、１／１０ＭのｐＨ９．６の重炭酸ソー
ダ緩衝液で８,０００倍に希釈し、９６穴イミュノプレ
ート（ヌンク社イミュノプレート、マキシソープＦ９
６）の各穴に１００μｌずつ分注し、プレートシーラー
（三光純薬）で密封した後、冷蔵庫内で一晩インキュベ
ートした。その後、各穴に入れた前記抗体希釈液を排出
し、５％（ｖ／ｖ）のブロックエース（雪印乳業）と
０．１％（ｖ／ｖ）のツイーン２０（バイオラッド）を
含むＰＢＳ（フローラボラトリーズ）を３００μｌ注入
し、さらにこれを排出するという洗浄操作を３回繰り返
した（イミュノウオッシャーＮＫ−１００（インターメ
ッド社）を使用）。各穴内に少量残留する洗浄液をブロ
ット紙上でできるだけ排出後、２５％（ｖ／ｖ）のブロ
ックエースを含むＰＢＳの３００μｌを各穴に入れプレ
ートシーラーで密封後、冷蔵庫内で一晩インキュベート
した。前記の洗浄操作を５回繰り返した後、ＰＢＳで１
０％（ｖ／ｖ）に希釈したブロックエースでインターフ
ェロンα製剤（キャンフェロン（３００万単位含有）。
武田薬品）を所定の濃度（０ＩＵ／ｍｌ〜３０ＩＵ／ｍ
ｌ）に希釈した希釈系列を作製し、該イミュノプレート
の所定の穴に１００μｌずつ分注しプレートシーラーで
密封後、冷蔵庫内で一晩インキュベートした。翌日、前
述の方法で各穴の洗浄操作を５回行った。各穴内に少量
残留する洗浄液をブロット紙上でできるだけ排出後、Ｐ
ＢＳで１０％（ｖ／ｖ）に希釈したブロックエースで
２,０００倍に希釈した２次抗体（１％（ｖ／ｖ）の非
特異正常山羊血清を含有）を該イミュノプレートの各穴
に１００μｌずつ分注しプレートシーラーで密封後、冷
蔵庫内で一晩インキュベートした。翌日、前述の方法で
各穴の洗浄操作を５回おこなった。

【００２６】各穴内に少量残留する洗浄液をブロット紙
上でできるだけ排出後、ＰＢＳで１０％（ｖ／ｖ）に希
釈したブロックエースで１０,０００倍に希釈した３次
抗体（１％（ｖ／ｖ）の正常非特異山羊血清を含有）を
該イミュノプレートの各穴に１００μｌずつ分注しプレ
ートシーラーで密封後、室温（約２２℃）で１時間イン
キュベートした。インキュベート終了後、前述の方法で
各穴の洗浄操作を５回おこなった。各穴内に少量残留す
る洗浄液をブロット紙上でできるだけ排出後、パーオキ
シダーゼ用発色試薬ティーエムブルー（ＴＭ Ｂｌｕ
ｅ、ビーエム機器）を各穴に１００μｌずつ分注し、室
温（約２２℃）で１０分間反応させ、１．５規定の硫酸
を２５μｌを各穴に分注することにより反応を停止さ
せ、４５０ナノメーターのフィルターを有するマイクロ
プレートリーダー（エムティーピー３２（ＭＴＰー３
２）、コロナ社）で各穴の吸光度を測定することにより
反応生成物の濃度を決定した（６３０ナノメーターのフ
ィルターでの吸光度をバックグラウンドとして差し引い
ている）。該反応生成物の濃度は抗インターフェロンα
抗体により固定されたインターフェロンαの量に比例す
るため、インターフェロンαの濃度を定量することがで
きる。測定結果を〔図２〕の●として示す。インターフ
ェロンαを含まない場合には吸光度がほぼゼロであり、
かつインターフェロンαの濃度が０ＩＵ／ｍｌ〜３０Ｉ
Ｕ／ｍｌまでほぼ直線的な関係が成立していることがわ
かる。

【００２７】

【比較例】

（１）抗体として以下のものを使用した： １）抗ｈＩＦＮα馬血清（ロット番号００１：日本ケミ
カルリサーチ社（ＪＣＲ）。一次抗体。１,０００倍希
釈。） ２）抗ｈＩＦＮα山羊血清（ロット番号００１：日本ケ
ミカルリサーチ社（ＪＣＲ）。二次抗体。１,０００倍
希釈。） ３）ペルオキシダーゼ標識抗山羊血清（カッペル社。三
次抗体。１,５００倍希釈。） 上記抗体の希釈操作及びその他の操作は実施例１の操作
に準じた。インターフェロンα製剤（キャンフェロン
（３００万単位（ＩＵ）含有）。武田薬品）は所定の濃
度（０ＩＵ／ｍｌ〜６０ＩＵ／ｍｌ）に希釈した希釈系
列を作製した。測定結果を〔図３〕の□として示す。
〔図３〕において、横軸はインターフェロンα濃度を縦
軸は吸光度を表す。〔図３〕の□から、一次抗体および
二次抗体ともにポリクローナルを使用した場合、インタ
ーフェロンαを含まない場合でも吸光度が非常に高く、
またインターフェロンαの濃度が上昇しても吸光度の変
化がわずかであることが分かる。 （２）抗体として以下のものを使用した： １）抗ｈＩＦＮα馬血清（ロット番号００１：日本ケミ
カルリサーチ社（ＪＣＲ）。一次抗体。１０００倍希
釈。） ２）抗ｈＩＦＮα山羊血清（ロット番号００１：日本ケ
ミカルリサーチ社（ＪＣＲ）。二次抗体。１０００倍希
釈。） ３）ペルオキシダーゼ標識抗山羊血清（カッペル社。三
次抗体。１５００倍希釈。） 非特異正常血清として以下のものを使用した： 正常馬血清（ハイクローン社） 上記抗体の希釈操作及びその他の操作は実施例１の操作
に準じた。インターフ１ェロンα製剤（キャンフェロン
（３００万単位（ＩＵ）含有）。武田薬品）は所定の濃
度（０ＩＵ／ｍｌ〜３７．５ＩＵ／ｍｌ）に希釈した希
釈系列を作製した。 正常馬血清は、１％（ｖ／ｖ）の
濃度で二次抗体および三次抗体の希釈液にに添加され
た。測定結果を〔図３〕の◆として示す。〔図３〕の◆
から、（１）の系に、非特異正常血清を添加することに
より、インターフェロンαが存在しない場合のバックグ
ラウンドの吸光度はほぼゼロになったが、インターフェ
ロンαの濃度がゼロ付近では直線関係が成立している
が、インターフェロンα濃度がさらに上昇するにつれて
吸光度の上昇は鈍くなり飽和現象が見られた。以上の結
果から、非特異正常血清によるバックグラウンドの吸光
度は顕著に減少する効果は得られたものの、一次抗体お
よび二次抗体ともにポリクローナル抗体を使用した場合
には、インターフェロンαの濃度と吸光度が比例する範
囲が非常に狭く、実用的な測定系にはなりにくい。

【００２８】

【実施例４】抗体として以下のものを使用した： １）抗ｈＩＦＮα馬血清（ロット番号００１：日本ケミ
カルリサーチ社（ＪＣＲ）。一次抗体。１０,０００倍
希釈。） ２）抗ｈＩＦＮαマウスモノクローナル抗体（ロット番
号１１５５８９２１ー０４Ａ：ベーリンガーマンハイム
社。二次抗体。２,０００倍希釈。） ３）ペルオキシダーゼ標識抗マウスイミュノグロブリン
Ｇ（ロット番号０６１８９１ｊ２。ケミコン社。三次抗
体。１０,０００倍希釈。） 非特異正常血清として以下のものを使用した: 正常馬血清（ハイクローン社） 正常馬血清は、 １％（ｖ／ｖ）の濃度で二次抗体および
三次抗体の希釈液に添加された。上記抗体の希釈操作及
びその他の操作は、二次抗体にｈＩＦＮαの活性を中和
するモノクロナール抗ｈＩＦＮα抗体を用いた以外は、
実施例２に準じた。測定結果を〔図４〕に示す。〔図
４〕において、横軸はインターフェロンα濃度を縦軸は
吸光度を表す。〔図４〕から明らかなように、ｈＩＦＮ
αを中和する抗体を用いても実施例２とほぼ同じ結果を
得ることができた。

【００２９】

【実施例５】 （１）抗体として以下のものを使用した： １）抗ｈＩＦＮα馬血清（ロット番号００１：日本ケミ
カルリサーチ社（ＪＣＲ）。（一次抗体） ２）抗ｈＩＦＮαマウスモノクローナル抗体（ロット番
号ＭＩＦ１ー１０１０２：林原生化学研究所）。（二次
抗体） ３）ペルオキシダーゼ標識抗マウスイミュノグロブリン
Ｇ（ロット番号０６１８９１ｊ２：ケミコン社）。（三
次抗体） 非特異正常血清として以下のものを使用した： 正常馬血清（ハイクローン社） 上記抗体の希釈操作およびその他の操作は実施例２の操
作に準じた。インターフェロンα製剤（キャンフェロン
（３００万単位（ＩＵ）含有）。武田薬品）は、ＰＢＳ
で１０％（ｖ／ｖ）に希釈したブロックエースに２５％
（ｖ／ｖ）の濃度になるようにラット血清を添加したも
ので、所定の濃度（０ＩＵ／ｍｌ〜３０ＩＵ／ｍｌ）に
希釈した希釈系列を作製した。測定結果を〔図５〕の○
として示す。 （２）抗体として以下のものを使用した： １）抗ｈＩＦＮα馬血清（ロット番号００１：日本ケミ
カルリサーチ社ＪＣＲ）。（一次抗体） ２）抗ｈＩＦＮαマウスモノクローナル抗体（ロット番
号ＭＩＦ１ー１０１０２：林原生化学研究所）。（二次
抗体） ３）ペルオキシダーゼ標識抗マウスイミュノグロブリン
Ｇ（ロット番号０６１８９１ｊ２：ケミコン社）。（三
次抗体） 非特異正常血清として以下のものを使用した： 正常馬血清（ハイクローン社） 上記抗体の希釈操作およびその他の操作は実施例２の操
作に準じた。インターフェロンα製剤（キャンフェロン
（３００万単位（ＩＵ）含有）。武田薬品）は所定の濃
度（０ＩＵ／ｍｌ〜３０ＩＵ／ｍｌ）に希釈した希釈系
列を作製した。定結果を〔図５〕の●として示す。〔図
５〕において、横軸はインターフェロンα濃度を縦軸は
吸光度を表す。両者の吸光度がほぼ一致していることか
ら、ラットの血清がインターフェロンαに共存しても測
定結果には影響を与えないことがわかる。したがって、
本発明のインターフェロンαの免疫学的測定法は、血清
中濃度測定用のシステムとしてすぐれたものであること
がわかる。

【００３０】

【実施例６】抗体として以下のものを使用した： １）抗ｈＩＦＮα馬血清（ロット番号００１：日本ケミ
カルリサーチ社（ＪＣＲ）。一次抗体。） ２）抗ｈＩＦＮαマウスモノクローナル抗体（ロット番
号ＭＩＦ１０１０２：林原生化学研究所。二次抗体。） ３）ペルオキシダーゼ標識抗マウスイミュノグロブリン
Ｇ（ロット番号０６１８９１ｊ２。ケミコン社。三次抗
体。） 測定対象として天然型ｈＩＦＮα６００万単位を１バイ
アル中に含有するスミフェロン（住友製薬）を用いた。
該スミフェロンの希釈系列を作成して（３単位／ｍｌ〜
１５単位／ｍｌ）定量を行った。定量操作の詳細は実施
例２の方法に準じた（正常馬血清は使用せず）。結果を
〔表１〕に示す：

【表１】 少なくともこの濃度の範囲では濃度と吸光度の間にほぼ
直線関係が成立した。この結果より、天然型ｈＩＦＮα
も本発明の免疫学的測定法により測定できることが示さ
れた。

【００３１】

【発明の効果】本発明で得られるインターフェロンαの
測定法は、バックグランドの値がほとんどなく、かつ直
線性が成立する範囲（ダイナミックレンジ）が広いた
め、Ｃ型肝炎などの治療薬として繁用されつつあるイン
ターフェロンαの血液中または体液中の濃度のモニター
用として医療分野への貢献は多大なものがある。

【図面の簡単な説明】

【図１】は実施例１の実験結果を示したものである。

【図２】は実施例２および３の実験結果を示したもので
ある。

【図３】は比較例の実験結果を示したものである。

【図４】は実施例４の実験結果を示したものである。

【図５】は実施例５の実験結果を示したものである。

【符号の説明】

〔図１〕の△はインターフェロンαの濃度と吸光度の関
係を示す。 〔図２〕の○はインターフェロンαの濃度と吸光度の関
係を示す。 〔図２〕の●はインターフェロンαの濃度と吸光度の関
係を示す。 〔図３〕の□はインターフェロンαの濃度と吸光度の関
係を示す。 〔図３〕の◆はインターフェロンαの濃度と吸光度の関
係を示す。 〔図４〕の□はインターフェロンαの濃度と吸光度の関
係を示す。 〔図５〕の○はインターフェロンαの濃度と吸光度の関
係を示す。 〔図５〕の●はインターフェロンαの濃度と吸光度の関
係を示す。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ヒトインターフェロンαを担体上に保
   持された抗体（Ａ）で認識させ、 上記のヒトインターフェロンαを抗体（Ａ）と抗
   原決定部位が異なる抗体（Ｂ）あるいは抗体（Ｂ）誘導
   体で認識させた後（ただし、抗体（Ａ）と抗体（Ｂ）の
   うち少なくとも一方はモノクローナル抗体である）、 上記の抗体（Ｂ）を認識する標識化された特異抗
   体で、あるいは抗体以外の物質であって上記の抗体
   （Ｂ）誘導体の誘導体部分に特異的に結合する標識化さ
   れた物質で認識させ、 上記の標識物質を定量するヒトインターフェロン
   αの免疫学的測定法。
2. 【請求項２】標識物質が非放射性物質である請求項１記
   載の免疫学的測定法。
3. 【請求項３】非放射性物質が酵素である請求項２記載の
   免疫学的測定法。
4. 【請求項４】 担体上に保持された抗体（Ａ）、 抗体（Ａ）と抗原決定部位が異なる抗体（Ｂ）ある
   いは抗体（Ｂ）誘導体（ただし、抗体（Ａ）と抗体
   （Ｂ）のうち少なくとも一方はモノクローナル抗体であ
   る）、および 抗体（Ｂ）を認識する標識化された特異抗体、ある
   いは抗体以外の物質であって抗体（Ｂ）誘導体の誘導体
   部分に特異的に結合する標識化された物質を組み合わせ
   てなるヒトインターフェロンαの免疫学的測定用試薬。
5. 【請求項５】標識物質が非放射性物質である請求項４記
   載の免疫学的測定用試薬。
6. 【請求項６】非放射性物質が酵素である請求項５記載の
   免疫学的測定用試薬。