JPH06509072A - 化学療法により誘発される脱毛の予防および治療法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 化学療法により誘発される脱毛の予防および治療法技術分野 本発明は、一般的に、脱毛の予防および治療法に関し、具体的な態様では、化学 療法薬により誘発される脱毛の予防および治療法に関する。

背景技術 脱毛症は、多くの化学療法薬に共通する悲痛な副作用であり、現在のところ、そ れに対する効果的な予防法はない。最近の研究では、化学療法を受けた４６人の 患者のうち３５人が脱毛が吐気よりも重大であるとしている（Ｔｈｉｅｒｎｅｙ 　ｅｔ　ａｌ、　Ｂ１．　Ｃａｎｃｅｒ、　６２：５７２〜５２Ｂ　、１９９０ ）。

最近、若いラットモデルを用いて、本発明者等は、細菌５ｅｒｒａｔｉａ　ｍａ ｒｃｅｓｃｅｎｓから調製した生物学的応答変更因子であるＩｍｕＶｅ　ｒ　ｔ が、シトシンアラビノシト又はアドリアマイシンにより誘発される脱毛から動物 を保護することを明らかにした（Ｈｕｓｓｅｌｎ　ｅｔ　ａｌ、、　５ｃｉｅｎ ｃｅ　２４９：　１５Ｂ４〜１５Ｂｆｉ、１９９０）。

その後の研究で、組み換えインターロイキン−１（ＩＬ−１）ベータから、ＡＲ Ａ−Ｃ誘発脱毛からの同様の保護が観察された（ｊｉｍｅｎｅｚ　ｅｔ　ａｔ、 、　ＦＡＳＥＢ　Ｊ、、１９９１）。

本発明は、揄自の化学療法誘発脱毛症の予防および冶療方法を提供する。本発明 による方法では、表皮成長因子（ＥＧＦ）や線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）等の 成長因子を使用する。本発明者等が知るかぎりでは、ＩｍｕＶｅ　ｒ　ｔは、Ｅ ＧＦやＦＧＦの産生を刺激することが示されなかっただけでなく、そのような産 生を刺激することを意図するものでもなかった。

また、本発明は、ビタミンＤ３又はその代謝物を、単独又はＥＧＦと組み合わせ て、脱毛を予防又は治療することに関する。ビタミンＤ３は、魚肝油又は照射酵 母の摂取後吸収される。植物と動物源は、不活性なビタミンＤ前駆体である７− ジヒドロコレステロール又はエルゴステロールしか含有していない。７−ジヒド ロコレステロールは、皮膚に保存され、日光によりビタミンＤ３に転化される。

しかしながら、摂取されるか紫外線照射により皮膚に形成するかには無関係に、 ビタミンＤは、活性代謝物に変換される。ビタミンＤ３は、肝酵素により２５− ヒドロキシコレカルシフェロールに転化される。

その後、腎臓において、２種の化合物、１．２５−ジヒドロキシコレカルシフェ ロール及び２４．２５−ジヒドロキシコレカルシフェロールが形成される。ビタ ミンＤ活性代謝物は、脇道からのカルシウムの吸収、骨沈着及び骨再吸収に重要 な役割を果たしている。

ビタミンＤ３の活性代謝物である１、２５−ジヒドロキシビタミンＤ３は、ＥＧ Ｆレセプターを乳癌細胞（Ｆａｌｅｔｔｅ　ｅｔａｌ、、Ｍｏ１ｅｃ、ａｎｄ　 Ｃｅ１１．　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、、Ｈ（１−２）：１８９〜１９８　、１９ ８９）及びラット頭蓋冠から造成した細胞系（Ｐｅｔｋｏｖｉｃｈ　ｅｔａｌ、 　Ｊ、　Ｂｌｏｔ、　Ｃｈｅｓ、　２６２（２８）：１３４２４〜１３４２８． １９８７）において増加させることが明らかにされた。しかしながら、本発明者 等が知る限りでは、脱毛に対するビタミンＤ３又はその代謝物の効果は、明らか にも提案もされてもいない。

発明の概要 本発明の目的は、脱毛の治療および予防方法を提供することである。本発明の具 体的な目的は、周期特異的医薬（シトシンアラビノシト（ＡＲＡ−Ｃ）等）及び 非周期特異的医薬（シトキサン（Ｃｙｔｏｘａｎ）等）をはじめとする化学療法 薬を、個々又は組み合わせて用いた治療を受けている患者の脱毛を予防および治 療することである。

本発明の更なる目的及び利点は、以下の説明から明らかとなろう。

図面の簡単な説明 第１図は、実験１１表１　（下記参照）のラット１０匹の写真である。全てのラ ットにＡＲＡ−Ｃを５０ｍｇ／ｋｇで７日間与えた。上のラット５匹には緩衝液 を皮下投与（ｓ、ｃ、）Ｌ、下のラット５匹にはマウスＥＧＦを２μｇで７日間 毎日皮下投与（ｓ、ｃ、）Ｌ、、た。

第２図は、実験■、表１　（下記参照）のラット６匹の写真である。全てのラッ トにＡＲＡ−Ｃを５０ｍｇ／ｋｇで７日間与えた。上のラット３匹には緩衝液を 皮下投与（ｓ、ｃ、）Ｌ、下のラット３匹にはｒＨｕ−ＥＧＦを２μｇで７日間 毎日皮下投与（ｓ、ｃ、）した。

第３図は、局所的マウス−ＥＧＦ実験（下記参照）でのラット４匹の写真である 。全てのラットにＡＲＡ−Ｃを５０ｍｇ／ｋｇで７日間投与した。左のラット２ 匹にはＤＭＳＯ中マウスＥＧＦ　１０μｇで７日間毎日肩甲骨間１ｃｍ２の面積 にわたって局所的にこすって投与した。

右のラット２匹には、緩衝液を局所的に投与した。

第４図は、ＡＲＡ−Ｃ−ａＦＧＦ実験でのラット１２匹の写真である（下記参照 ）。全てのラットにＡＲＡ−Ｃを５０ｍｇ／ｋｇで７日間与えた。上のう・ノド ６匹には緩衝液を皮下投与（ｓ、ｃ、）Ｌ、下のう・７８６匹に第５図は、シト サンとアドリアマイシンの組み合わせ化学療法で処理したラット８匹の写真であ る。上のラット４匹は、更にマウスＥＧＦで処理した。下のう・７６４匹は、緩 衝液で処理した。

第６図は、ＶＰ−１６で処理したラット１０匹の写真である。上の全てのラット には、ＶＰ−１６を１．５ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇで３日間を腹腔内投与（ｉ、り、 　）　Ｉ、た。上のラット５匹には、処理前４日間緩衝液を与えた。下のラット ５匹には、処理前４日間ビタミンＤ　５０μｇ７日で投与した。

第７図は、シトサンとアドリアマイシン（それぞれ２５ｍｇ／ｋｇで１日間ｔ、 ｐ、投与及び２．５ｍｇ／ｋｇ’？３日間ｔ、ｐ、投与）の組み合わせ化学療法 で処理したラット６匹の写真である。上のラット３匹は、処理前４日間緩衝液を 与えた。下のラット３匹には、処理前４日間ビタミンＤ　５０μｇ／日で投与し た。

第８図（Ａ−Ｃ）：各実験ごとに、５日令のラットを同数づつランダムに分けた 。ラットの実験群（上の群）には、１．２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の０． 　２μｇ無水エタノール溶液０．１５ｍ１／日を、頭上と首に毎日適用した。対 照ラット（下の群）を、無水エタノール０．１５ｍ１で同様に処理した。最後の 局所処理から１日後、第８Ａ図のラットをシトサン（ＣＴＸ）で処理し、第８Ｂ 図のラットをエトポシド（ＶＰ−１６）投与で処理し、第８Ｃ図のラットをＣＴ Ｘ＋アドリアマイシン（ＡＤＭ）投与で処理した。

第９図＝２５日令のラットを、各々１０匹づつの２つのグループにランダムに分 けた。ラットの実験群（上のグループ）には、１．２５　（ＯＨ）２Ｄ３の０． １μｇ無水エタノール溶液０．１ｍｌ／日を、頭上のみに５日間適用した。対照 ラット（下のグループ）を、無水エタノール０．１ｍｌで同様に処理した。最後 の局所処理から１日後、Ｖ　Ｐ　−、１６を投与し、て全でのラットを処理した 。

第１０図：　３９１１令のラットをランダムに２つのグループに分Ｕた。ラット の実験群（上のグループ）には、Ｒ，０２３−７５５３の１μｇの無水エタノー ル溶液０．２ｍ１７日を、６部と背部に６日間局所的に適用した。対照ラット（ ■；のグループ）を、無水エタノールＱ、２ｍｌで同様に処理した。最後の局所 処理から１日後、ＶＰ〜１６投与で全てのラットを処理した。

第１１図は、毛成長に及ぼす１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の影響を示す 。

発明の詳細な説明 本発明は、一般的に、特に化学療法を受けている患者の脱毛を予防又は低減する 方法に関する。本発明者等は、ＥＧＦ等の成長因子及びビタミンＤ３が毛嚢に化 学療法薬の毒性作用に対する耐性を付与して、脱毛を防止することを明らかにし た。

本発明の方法の一実施態様では、化学療法を受けている患者に、成長因子を、化 学療法治療計画に伴う脱毛を予防又は低減するに十分な量を投与する。

本発明の方法に使用するのに適した成長因子には、ＥＧＦ、ＦＧＦ、形質転換成 長因子（ＴＧＦ）及び血漿板由来成長因子（ＰＤＧＦ）が含まれる。成長因子は 、天然源（例えば、ヒト組織又はげっ菌類組織）由来のものでよいが、比較的低 コストで多量に製造できることから組み換えにより製造するのが好ましい。また 、化学合成された因子も使用できる。ＥＧＦ″ｐＦＧＦ等の成長因ｒの一部分や 誘導体も、それから因子自体で観察されるのと同じ結果が得られる限りは使用す ることができ乙１、本発明の別の実施態様では、ビタミンＤ３又はその代謝物、 類似体、誘導体若しくは構造的変異体（例えば、１．２５−ジヒドロキジ−１６ −エネ（ｅｎｅ）−２３−イネ（ｙ　ｎ　ｅ）コレカルシフェロール；１−α− ヒドロキシビタミンＤ　；１−α−２４−ジヒドロキシビタミンＤ　ＭＣ９０３ 等）を、温血動物、例えば、ヒト３ゝ に対して、脱毛を予防又は低減させたり、毛の成長を刺激するのに十分な量で投 与する。ビタミンＤ３で治療したり予防できる脱毛は、化学療法や男性型禿頭症 （しかしこれには限定されない）をはじめとする他の原因によるものである。本 発明の方法に使用するのに適当なビタミンＤ３代謝物としては、例えば、１，２ ５−ジヒドロキシビタミンＤ３及び１．２５−ジヒドロキシ−１６−エネー２３ −イネコレカルシフェロールが挙げられるが、これらには限定されない。

請求の範囲に記載の方法で使用するのに適当な組成物には、活性剤として、成長 因子、ビタミンＤ３（又はその代謝物若しくは類似体）又はそれらの両方の組み 合わせが含まれる。このような組成物は、薬学上許容されるビヒクル（担体、希 釈剤又は賦形剤）とともに活性剤を、適切に設計された治療プロトコールに準じ て投与したときに予防効果を得るに十分な量混合することにより、配合できる。

組成物は、投与単位形態でよい。

本発明の方法は特定の作用形態に限定されるものではないが、ビタミンＤ３は、 上置レベルでＥＧＦのレセプターを増加することにより、脱毛症を防止すること が示唆される。したがって、成長因子とビタミンＤ３を組み合わせて投与するこ とにより、保護がより大きくなることが期待できる。

本発明の方法に使用するのに適当な組成物は、局所投与に適当な形態でよい。こ の場合、組成物は、溶液、ローション、クリーム、ゲル又は軟膏の形態をとるこ とができる。組成物を注射により投与するときには、溶液の形態が有利である。

組成物の形態とは関係なく、使用されるビヒクルは、不活性でもよいし、それ自 体、生理学的又は薬学的に有益な効果を有していてもよい。

種々添加物を組成物に含有させることができる。これに関して、患者自身の成長 因子の産生を刺激する薬剤を組成物に含有せしめることが意図される。局所投与 に適当な組成物に、ＤＭＳＯ又はエタノール等の浸透増強剤を含有させることが 好ましい。有効期間を延ばす安定化剤も、配合方法によらず、組成物に含有させ ることができる。

成長因子及び／又はビタミンＤ３を、上記の組成物において、種々の濃度で使用 できることは、当業者には理解されるところであろう。最適濃度は、当業者によ り容易に決定できる。

上記したように、本発明に係る方法では、活性剤（成長因子及び／又はビタミン Ｄ３若しくはその代謝物）を局所適用するか、注射投与することができる。活性 剤の量及び投与頻度は個人により異なり、当業者により容易に最適化できる。− 例として、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３を無水エタノールに２〜１００ μｇ　／　ｍ　１を溶解して溶液を調製し、その溶液３〜５ｍｌを頭皮の種々の 場所にドロッパーで直接適用後、頭皮を３〜５分間マツサージして、平均して分 布させることができる。

化学療法が行なわれるときには、この治療は、化学療法の開始５〜８日前に１日 １〜２回投与することで開始し、化学療法中継線するのが有利である。しかしな がら、活性剤を、化学療法薬の投与と実質的に同時か、投与後に投与することも できる。

実施例に示されている本発明に係る方法では、細胞周期特異的薬剤であるＡＲＡ −Ｃを化学療法薬として使用するとき、及びアドリアマイシン（ｃｅｌｌ　ｃｙ ｃｌｅ　５ｐｅｃｉ−ｆｌｃｓ細胞周期特異的）とシトサン（ｎｏｎ　ｃｅｌｌ 　ｃｙｃｌｅｓｐｅｃｌＮｃ、非細胞周期特異的）を使用するとき、効果的であ ることがわかる。しかしながら、本発明の方法を使用して、他の化学療法薬での 治療から生じる脱毛を予防できる。さらに、成長因子及び／又はビタミンＤ３を 使用して、規則的に、そして禿頭の最初の兆候、例えば、頭皮のはげが生じやす い部分に１日１回又は１日おきに使用するならば男性型禿頭症を予防したり抑制 することができる。

本発明者等によって見いだされた脱毛の予防効果は、全く予想外のことである。

ＥＧＦ等の成長因子は、皮膚細胞成長を刺激すると思われるものである。したが って、これらの薬剤は、上置を誘発し、細胞周期に入り、化学療法薬、特にＡＲ Ａ−Ｃ等の細胞周期特異的薬剤に対する上置の感受性を高めることが予想される 。したがって、化学療法を受けている患者に対して成長因子を投与することによ り、脱毛を悪化させることが予想される。しかしながら、逆の効果が得られたの である。したがって、ＥＧＦ及びＦＧＦについての本発明者等による知見は、新 規であり、文献において提示も記載もされていない。

同様に、体におけるビタミンＤ３の役割について、ビタミンが化学療法等により 誘発される脱毛に対してこのような優れた防護効果があることは何も示唆されて いない。

以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に のみは限定されない。

実　施　例 以下の詳細な実験は、以下に記載の実施例１〜■に関する。

ＳＤクラット、米国マサチューセッツ州つィルミングトンにあるチャールズ・リ バー・ラボラトリーズ社から購入し、シタラビン（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ）（ＡＲ Ａ−Ｃ）は、米国ミシガン州力うマズーにあるアップジョン・カンパニー社から 購入した。マウス下あご腺由来のレセプターグレードＥＧＦ、ヒト組み換えＥＧ Ｆ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）及びビタミンＤ３は、米国ミズーリ州セ ントルイスにあるシグマ・ケミカル社から購入し、ａＦＧＦは、米国カリフォル ニア州すウザンド・オークスにあるアムゲン社（ＡＭＧＥＮ　Ｃｏｒｐ、　）か ら購入した。

各実験での全てのラットを、７日間毎日ＡＲＡ−Ｃ５０ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇで腹 腔内ｃｉ、ｐ、）処理した。皮下（ｓ、ｃ、）注射の場合、ＥＧＦとＦＧＦを、 ＰＢＳＩ％ＢＳＡ溶液とした。脱毛を、実験の１２日目に必ず記録し、上記した ように評価した（Ｈｕｓｓｅｎ　ｅｔ　ａｌ、　５ｃｉｅｎ−ｃｅ、　２４９： １５Ｂ４〜１５６６．１９９０；Ｊｉｓｅｎｅｚ　ｅｔ　ａｔ、　ＦＡＳＥＢ　 Ｊ、、１９９１）。

局所処理の場合、マウスＥＧＦを、以下のようにして調製した。１バイアルのＥ ＧＦ　（１００μｇ）を、ＰＢＳＩ％ＢＳＡ０，２ｍｌに溶解し、この溶液０． １２ｍ１をＤＭＳＯ０，４８に添加した。ＡＲＡ−Ｃ注射の３時間前に、ＥＧＦ −ＤＭＳＯ混合物０．　１ｍｌを、ラバーチップアプリケータを用いて、各ラッ トの料量の１ｃｍ２の領域に適用した。次に、ラットを、個々に３時間隔離して おいた後、処理領域を、石鹸と水で入念に洗浄し、乾燥した。処理を７日間継続 した。対照動物を、ＥＧＦなしにＤＭＳＯを用いて同様に処理した。

実施例Ｉ ＥＧＦの保護効果 マウスＥＧＦ（ｙ′）ＡＲＡ−Ｃ誘発脱毛保護効果を試験するため１こ、二種の 別個の実験を行った。実験Ｉでは、２２匹の７日令ラットを、各々１１匹ずつ２ つのグループにランダムに分けた。グループＩには、ＡＲＡ−Ｃの他に、Ａ　Ｒ Ａ　、−、−Ｃ注射の３時間前に、毎日７日間２本の後ろ脚間の後ろにマウスＥ ＧＦ２μｇをｓ、ｃ、処理した。グループ■には、緩衝液を同様に投与し、対照 とした。グループ■において、ラット１１匹のうち１０匹に、実質的に体全体に 脱毛が生し、１匹のラットに、５０％を超える脱毛が生じた。これに対して、グ ループＩでは、５匹のラットには毛の損失がみられず、６匹の脱毛は軽度であっ た（表１、実験１．（第１図））。実験■では、２７７日令ラットを、各々６匹 づつ２つのグループに分けた。グループＩては、ＡＲＡ−Ｃの他に、マウスＥＧ Ｆ　１μｇを、毎日７日間Ｓ、Ｃ，処理した。グループ■では、緩衝液をＳ、Ｃ ，投与した。グループ■では、６匹のラット全てが重度に近い脱毛から重度の脱 毛を生じたのに対して、グループＩでは、１匹のラットには観察できる脱毛が生 じず、５匹のラットには極小さい脱毛が生じただけであった（表１１実験■）。

次の実験では、γＨｕ−ＥＧＦを使用した。１２匹の７日令のラットを、６匹づ つの２つのグループに分けた。

グループ■には、ＡＲＡ−Ｃの他に、側腹部にγＨｕ−ＥＧＦ２μｇを７日間毎 日ｓ、ｃ、投与した。グループＨには、緩衝液をＳ、Ｃ，投与した。グループ■ では、ラット６匹全ての体全体に脱毛が生じたのに対して、グループＩでは、い ずれのラットにも体全体の脱毛が生じず、１匹のラットには同等観察できる脱毛 が生じず、４匹のラットには軽度の脱毛が生じ、１匹のラットには中程度の脱毛 が生じた（表１１実験■（第２図））。

ＡＲＡ−Ｃで処理したラットにおける脱毛の発生、マウスＥＧＦ及びγＨｕ−Ｅ ＧＦの効果 脱毛率 実験！ ＡＲＡ−Ｃ００１１０ ＡＲＡ−Ｃ＋マウスＥＧＦ２μｇ　５６００実験■ ＡＲＡ−Ｃ００３３ ＡＲＡ−Ｃ＋マウスＥＧＦ１μｇ　１５００実験■ ＡＲＡ−Ｃ０００６ ＡＲＡ−Ｃ＋７Ｈｕ−ＥＧＦ２μｇ　１　４　１　０全ての実験に、７日令ラッ トを使用した。全てのう・ソトに、ＡＲＡ−Ｃ５０ｍｇ／ｋｇ１．Ｐ、Ｏ，１ｍ ｌを７日間投与した。マウスＥＧＦ及びγＨｕ−ＥＧＦのＰＢＳＩ％ＢＳＡを、 ＡＲＡ−Ｃの３時間前に、１日１回０．１ｍ１ｓ、ｃ、で７日間投与した。対照 には、ＰＢＳＩ％ＢＳＡＯ，１ｍ１ｓ、ｃ、で７日間投与した。

データは、１２日目に記録した。

観察できる脱毛なし二〇；脱毛５０％未満の軽度脱毛＝１＋；５０％を超える中 程度の脱毛：２＋；及び全体又は実質的に全体（９０％）に及ぶ脱毛：３＋。

次の実験において、１２匹の７日令のラットを、６匹づつ２つのグループに分け た。グループｌでは、ＡＲＡ−Ｃの他に、マウスＥＧＦ１０μｇをＤＭＳＯ溶液 で、毎日７日間、コツトンチップアプリケータを用いて、肩甲骨間１ｃｍ２の面 積にわたって局所的にこすった。グループ■には、対照溶液を局所投与した。グ ループ■では、６匹全てのラットに、体全体に脱毛が生じた。グループＩでは、 ＥＧＦを局所的に適用した場所を除いて、体全体に脱毛が生じた（第３図）。

実施例■ ａＦＧＦの保護効果 １４匹の７日令のラットを、２つのグループにランダムに分けた。全てのラット に、７日間ＡＲＡ−Ｃを５０ｍｇ／ｋｇ／日投与した。さらに、グループＩには 、ａＦＧＦ２μｇを、頭の後部に７日間毎日ｓ、ｃ、投与した。グループ■には 、緩衝液を注射し、対照とした。

脱毛を、実験の１２日目に記録した。グループ■では、全てのラットの体全体に 脱毛が生じた。これに対して、グループＩの全てのラットは、注射部位が局所的 に保護された（第４図）。

実施例■ シトキサン／アドリアマイシン誘発脱毛からの保護 ８匹の４日令ＳＤラットを、４匹づつ２つのグループに分けた。グループＩには 、ＥＧＦ２μｇを、頭部に７日間毎日ｓ、ｃ、投与した。グループ■には、緩衝 液を注射し、対照とした。ＥＧＦ又は緩衝液投与を停止してから１日後、全ての ラットに、シトキサン２５ｍｇ／ｋｇを１日ｉ、ｐ、投与し、アドリアマイシン ２．５ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇを３日間ｉ、１）、投与した。グループ■では、全て のラットに、頭部と首部に３＋の脱毛が生じた。これに対して、グループＩでは 、１匹のラットには軽度の脱毛が生じ、１匹のラットには極小さい脱毛が生じ、 ２匹のラットには頭及び首に何ら脱毛が生じなかった（第５図）。ＩｍｕＶｅｒ ｔを同様の条件下で使用しても、シトキサン／アドリアマイシンの組み合わせに より生じる脱毛に対する保護は得られなかった。

実施例■ ビタミンＤ３の保護効果 １２匹の７日令ラットを、２つのグループに分けた。

グループＩには、緩衝液０．１ｍｌを、４日間毎日Ｓ。

Ｃ１投与した。第ニゲループには、ビタミンＤ　５０μｇを、頭部に４日間毎日 Ｓ、Ｃ，投与した。緩衝液又はビタミンＤ３投与を停止した後、全てのラットに 、ＶＰ−１６（エトポシド）１．５ｍｇ／ｋｇを、３日間毎日ｉ、ｐ、投与した 。グループＩの全てのラットには、体全体に脱毛が生じたのに対して、グループ Ｈのラットは保護されていた（第６図は、各グループからのラット４匹を示す） 。

他の実験では、ビタミンＤ３で前処理したラットにおいて、エトポシド、シトキ サン、シタラビン並びにシトキサンとアドリアマイシンとの組み合わせにより生 じる脱毛に対する優れた保護効果が示された（第７図）。結果を表■に示す。

ビタミンＤ３での前処理による、化学療法誘発脱毛がらの保護試験に用いた脱毛 性薬剤　実験総数　動物総数　脱毛保護エトポシド（ＶＰ−１６）　２　２２　 有り本シトキサン（ＣＴＸ）　７　８９　有り車シタラビン（ＡＲＡ−Ｃ）　１ 　８　有り本アドリアマイシン＋ＣＴＸの組み合わせ　６　７７　有り＊化学療 法薬を、以下のようにして投与した：ＶＰ−１６を１．５ｍｇ／ｋｇ３日間毎日 ｉ、ｐ、投与；シトキサン３２．５ｍｇ／ｋｇ単一注射、ＡＲＡ−Ｃ５０ｍ　ｇ 　／　ｋ　ｇを７日間毎日ｉ、ｐ、投与；組み合わせの場合、アドリアマイシン ２．５ｍｇ／ｋｇ３日間毎日ｉ。

ｐ、投与＋シトサン２５　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ単一注射。ビタミンＤ　、は、化 学療法の前に、４日間、毎日５０マイクログラムｉ、ｐ、投与又はｓ、ｃ、投与 した。

＊：これらの実験では、ビタミンＤ３で処理した全ての動物には、化学療法誘発 脱毛からの保護が一様に観察さ他の実験において、１．２５−ジヒドロキシビタ ミンＤ　３　（０、５ｔｔ　ｇ　／日）を５０％エタノール又はＤＭＳＯ溶液で 局所的に適用した場合も、ｖｐ−１６誘発脱毛からのラットの保護がなされた。

実施例Ｖ ビタミンＤ３前処理の保護効果 １．２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の局所適用：１．２５−ジヒドロキシビタ ミンＤ３を無水エタノールに溶解し、アプリケータを用いて局所適用した。対照 動物を、同量のエタノールで同様に処理した。次に、ラットを個々に３時間隔離 しておいた後、処理領域を石鹸と水で入念に洗浄し、乾燥した。処理は、誕生５ 日目から開始して毎日行い、１０日目に終了した。

化学療法： 全ての化学療法は、１．Ｐ、投与により１１日令で開始した。ＣＴＸ３５ｍｇ／ ｋｇを、１日だけ投与した。

ＶＰ−１６を１．５ｍｇ／ｋｇ、３日間投与した。

ＣＴＸとＡＤＭの組み合わせの場合、ＣＴＸ２５ｍｇ／ｋｇを１日投与し、ＡＤ Ｍ２．５ｍｇ／ｋｇを３日間投与した。これらの投与量では、ＣＴＸもＡＤＭも 単独では脱毛を生じなかった。脱毛は化学療法開始から１０日目に記録した。

合計４種の実験を行った。第一の実験において、シトサン誘発脱毛保護を試験し た。実験群を、１．２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の０．２μｇの無水エタノ ール０．１５ｍ１溶液を頭と首に局所適用して前処理し、対照群には、アルコー ル０．１５ｍ１を投与した。対照群のラット１０匹全てに、全体に脱毛が生じた 。これに対して、実験群の動物全ては、脱毛に対する保護が得られた（第８Ａ図 ）。第二の実験では、同様の条件で、ＶＰ−１６誘発脱毛に対する保護について 試験した。対照群のラット１０匹の全てに、体全体に脱毛が生じた。これに対し て、実験群の全てのラットでは、脱毛に対する保護が得られた（第８Ｂ図）。第 三の実験では、シトキサン−アドリアマイシンの組み合わせにより誘発される脱 毛保護について試験１．た。各グループを１１匹のラットで構成した。対照群の ラット６匹では頭と首に脱毛が生じ、５匹のラットには体全体に脱毛が生じた。

これに対し゛Ｃ１実験群の全てのラットは保護された（第８Ｃ図）。

第四の実験では、１．２５−ジヒドロキシビタミンＤ３の投与量を０．１μｇの ０．１ｍｌ無水エタノール溶液としての頭部のみに局所適用した以外は、ＶＰ− １６誘発脱毛を同様に試験した。対照群のラット１０匹全てが完全脱しく７た。

これに対して、実験群の全てのラットは、主に１．．２５−ジヒドロキシビタミ ンＤ３適用部位において保護された（第９図）。

１．２５−ジヒドロキシビタミンＤ０．２μｇによる保護は、適用部位に限定さ れず体全体におよび、全身吸収を示していることは注目に値する。投与量を０． １μｇに減少させて頭部にのみ適用したとき、ＶＰ−１６誘発脱毛に対する保護 は、全身からより適用部位に限定されるようになった。

実施例■ Ｒ０２３−７５５３の局所適用によるＶＰ−１６誘発脱毛からの保護 ＲＯ２３−７５５３（１，２５−ジヒドロキシ−１６−エン−２３−イエンーコ レ力ルシフェロール）を無水エタノールに溶解し、アプリケータを用いて局所適 用した。対照動物を、同量のエタノールで同様に処理した。

次に、ラットを個々に３時間隔離しておいた後、処理領域を石鹸と水で入念に洗 浄し、乾燥した。処理は、誕生９日目から開始し、１４日目に終了した。

１５日目に、全ての動物にＶＰ−１６を１．５ｍｇ／ｋｇで、３日間ｉ、ｐ、投 与した。脱毛を２５日目に記録した。

ラット１３匹をランダムに２つのグループに分けた：実験群ラット７匹：対照群 ラット６匹。実験群には、Ｒ０２３−７５５３を１μｇの無水エタノール０．２ ｍｌ溶液で首と背に局所適用し、対照群には無水エタノール０．２ｍｌを投与し た。対照群の６匹のラット全てが首部と背部において完全脱毛した。これに対し て、実験群の全ての動物は脱毛に対する保護が得られた（第１０図）。化学療法 を１４日令で開始したとき、頭部は脱毛しなかった。

実施例■ ビタミンＤ３による毛成長の刺激 ビタミンｌ）　３及びその活性類似体である１、２５−ジヒドロキシビタミンＤ ３による化学療法誘発脱毛からの保護についての上記の研究の過程で、］、］２ ５−ジヒド＋：＋１−シビタミンＤで処理したラットは、化学療法誘発脱毛に対 して保護されただけでなく、これらのラッｊ・は１、処理部の毛コートがよりよ く、毛がより長くなっていることが分かった。これらのことは、１．２５−ジヒ ドロキシビタミンＤ３による毛成長の刺激についてのさらなる実験でも明らかと なった。

１９匹の２５日令ＳＤラットの背部をそり、２つのグループにランダムに分けた 。

グループＩ（対照ラット１０匹）には、そった部分に、エタノール０．１ｍｌを １日１回１５日間局所適用した。

グループ■（カルジトリオール９ラツト）には％　１１２５−ジヒドロキシビタ ミンＤ　５０μｇのエタノール０．１ｍｌ溶液を、１日１回１４日間、そった部 分に局所適用した。

１５日Ｂｋ、６ｃｍＸ６ｃｍの部分を再びそって毛の成長の刺激についてのアッ セイを行った。毛を集めて、重量を計った。２つのグループ間の差は、統計的に 高度に有意であった。Ｐ値は、０．００３であった（表■及び第１１図参照）。

表■ ラットにおυるカルジトリオールによる毛成長の刺激上の重量（ｍｇ） 対　照　カシオトリオール 平均Ｓ、Ｅ、　Ｍ、　平均Ｓ、Ｅ、　Ｍ。

１１３±８　１６４±１３ ラツトに局所投与した１、２３−ジヒドロキシビタミンＤ３による毛成長の刺激 を示すこれらのデータから、１．２５−ジヒドロキシビタミンＤ３は、いずれの 原因の脱毛の場合にも毛成長の刺激剤として使用するできることが期待できる。

さらに、データは、ビタミンＤ３とその代謝物が最適な毛成長に必要であり、し たがって、男性型禿頭症をはじめとするいずれかの原因での毛の損失の防止に使 用できることを示唆している。

実施例■ 製　剤 以下は、活性成分として１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３を含む４種の製剤 とそれらの製造方法である。

１、局所溶液 成分　％（Ｗ／Ｗ） １．２５−’ｊヒトａ−＋シビ９　ミンＤ３　０．０００２〜０．１０プロピレ ングリコール　１０．００ プロピレングリコールシカ−ブリレート／シカプレート＊　３０．００ ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）　０．０５ブチル化ヒドロキシアニソー ル（ＢＨＡ）　０．０５エチルアルコール（無水）　全量１００．００まで＊： 下記の物質で置換できる：　（１）中鎖トリグリセリド；　（２）ジメチルイソ ソルビド；　（３）ポリエチレングリコール；　（４）エトキシジグリコール製 造手順 ■、適当量のブａピレングリコールシカブリレート／シカプレート、エチルアル コール、プロピレングリコールを、ステンレス容器に秤量する。

Ｈ，工程（１）の溶液に、ＢＨＴとＢＨＡを溶解する。

１ｉｉ、工程（ｌ　Ｉ）の混合物に１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３を添加 し、溶解するまで攪拌する。

２、緩衝局所溶液 成分　％（Ｗ／Ｗ） １．２５−ジヒドロキシビタミンＤ３　０．０００２〜０．１０プロピレングリ コール　５０．　００ ヒドロキシプロピルセルロース（Ｋｌｕｃｅｌ　ＭＦ　）　０．　５０メチルパ ラベン　０．２０ ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＩＴ）　０．０５ブチル化ヒドロキシアニソー ル（ＢＨＡ）　０．０５第一りん酸ナトリウム　０，４３ 第二りん酸ナトリウム　０．７０ 水酸化ナトリウム（ｐＨ−７にするに要するｆｉ）　０．０４エチルアルコール （濃度９５％）　３０．　００水　全ｊ１１００．００まで 製造手順 １、第一りん酸ナトリウム、第二りん酸ナトリウム、水酸化ナトリウムを、ステ ンレス容器中の水に溶解する。

溶液のｐＨを測定する。溶液のｐＨは、７．０でなければならない。もし７．０ でなければ、ｐＨを調整する。

目、工程（１）の溶液に、プロピレングリコール及びエチルアルコールを添加す る。

１ｊ１．工程（１１）の溶液に、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ　メチルパ ラベン、ＢＨＴ及びＢＨＡを溶解す３ゝ る。

ｉｖ、に１ｕｃｅｌ　ＭＦを、工程（ｌｉｔ）の溶液に溶解する。

３．水中油型緩衝局所溶液 成分　％（Ｗ／Ｗ） １．２５−ジｔ：ｔ’ｏ＋シビタミンＤ３　０．０００２〜０．１０セチルアル コール　０．２５ ステアリルアルコール　０．５０ ソルビタンモノステアレート　２．００グリセリルモノステアレート　４．　０ ０ポリオキシステアレートとの配合物 （アルラセル（Ａｒ　１ａｃｅ　１）１６５）ポリソルベート６０　１．　００ 鉱油　４．００ プロピレングリコール　５．００ ブチル化ヒトσキシアニソール　０．０５プロピルパラベン　０．０５ 緩衝剤（ｐＨ−７にするに要する量）　７．　００ソルビトール溶液　２．００ エデテート二ナトリウム　０．１０ メチルパラベン　０．１８ 水　全量１００．００まで 製造手順 １、ステンレス容器内で緩衝液（ｐＨ７，０）を調製する。

目、ステンレス容器において、摂氏７０度で、セチルアルコール、ステアリルア ルコール、ソルビタンモノステアレート、アルラセル１６５、ポリソルベート６ ｏ１鉱油、ブチル化ヒドロキシアニソール、プロピルパラベン及び５０％プロピ レングリコールを一緒に溶融する。

１１１、工程（１）の溶液にソルビトールを添加し、溶液を摂氏７０度に加熱す る。

ｌｖ、工程（１１１）の溶液に、エデテート二ナトリウムとメチルパラベンを添 加する。

Ｖ、　ビーカ内で、１．２５−ジヒドロキシビタミンＤ　を約４０％プロピレン グリコールに溶解し、これを、混合しながら、工程（１１）の溶融液に添加する 。容器を１０％プロピレングリコールですすぎ、これを工程（１１）からの混合 物に添加する。

ｖｆ、工程（ｖ）と工程（ＩＶ）の両方の相を摂氏７０度にして、工程（Ｖ）の 液を工程（Ｉｖ）の液に添加する。得られたエマルジョンを、２００ｍ温度に冷 却する。

４、局所ゲル 成分　％（Ｗ／Ｗ） １．２５−ジヒドロキシビタミンＤ３　０．０００２〜０．１０ブチル化ヒドロ キシトルエン（ＢＩＴ）　０．０５ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）　 ０．０５ヒドロキシプロピルセルロース　３．００エチルアルコール（濃度９５ ％）　５０．００水　全ｊｌ１００．００まで 製造手順 １、　ステンレス容器に、エチルアルコールと水を秤量する。

１１、工程（ｉ）の溶液に、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３、ＢＨＴ及び ＢＨＡを溶解する。

１１１、工程（１１）の溶液に、ヒドロキシプロピルセルロースを溶解する。

上記で引用した全ての文献の内容全体は、引用することにより本明細書の内容と なる。

以上、本発明を明瞭化及び理解を深めることを目的としである程度詳細に説明し たが、本発明の範囲を逸脱することなく態様及び詳細についての種々の変更が可 能であることは、当業者には理解されるところであろう。

ＦＩＧ、　１ ＦＩＧ、　２ ＦＩＧ、　３ ＦＩＧ、　５ ＦＩＧ、　７ ＦＩＧ、　８ａ ＦＩＧ、　８ｂ ＦＩＧ、　８ｃ ＦＩＧ、　１０ ＦＩＧ、ｌｌ 手　続　補　正　書 平成　６　年　２　月　Ｌ７　口器 ＰＣＴ／ｌＪｓ　９２１０５２４１ 、発明の名称 ３　補正をする者 事件との関係　特許出願人 ユニバージティー、オブ、マイアミ ５　補正命令の日付 発送日　平成　年　月　日 ６　補正の対象 フロントページの続き （３１）優先権主張番号　８１０，４１２（３２）優先臼　１９９１年１２月２ ０日（３３）優先権主張国　米国（ＵＳ） （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＳＥ）、０Ａ（ＢＦ 、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、ＣＩ、ＣＭ、ＧＡ、ＧＮ、ＭＬ、ＭＲ，ＳＮ、ＴＤ、ＴＧ ）、ＡＴ、ＡＵ、ＢＢ、ＢＧ、ＢＲ，ＣＡ、ＣＨ，Ｃ３，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＩ、ＧＢ、ＨＵ、ＪＰ、ＫＰ、ＫＲ，ＬＫ、ＬＵ、ＭＧ、ＭＮ、 ＭＷ、ＮＬ、Ｎｏ、ＰＬ、ＲＯ、ＲＵ、ＳＤ、ＳＥ

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. １．化学療法によって誘発される脱毛を予防または低減させる方法であって、化 学療法を受けている患者に対して、ビタミンＤ３又はその誘導体、類似体若しく は構造的類似体を、前記予防または低減の効果を得るに十分な量投与すること含 んでなる、方法。
2. ２．前記誘導体が、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３又は１，２５−ジヒド ロキシ−１６−エン−２３−イエン−コレカルシフェロールである、請求項１に 記載の方法。
3. ３．前記ビタミンＤ３又はその誘導体、類似体若しくは構造的類似体を、局所投 与する、請求項１に記載の方法。
4. ４．前記化学療法薬が細胞周期特異的である、請求項１に記載の方法。
5. ５．前記化学療法薬がシトシンアラビノシドである、請求項４に記載の方法。
6. ６．前記化学療法薬が非細胞周期特異的である、請求項１に記載の方法。
7. ７．前記化学療法薬がシトキサン（Ｃｙｔｏｘａｎ）である、請求項６に記載の 方法。
8. ８．前記化学療法薬が細胞周期特異的薬剤と非細胞周期特異的薬剤との組み合わ せである、請求項１に記載の方法。
9. ９．前記ビタミンＤ３又はその誘導体、類似体若しくは構造的変異体を、前記化 学療法開始前に投与する、請求項１に記載の方法。
10. １０．前記患者に対して、少なくとも１種のタンパク様成長因子を、前記予防ま たは低減効果を得るに十分な量投与することをさらに含んでなる、請求項１に記 載の方法。
11. １１．前記成長因子が表皮成長因子である、請求項１０に記載の方法。
12. １２．前記成長因子が線維芽成長因子である、請求項１０に記載の方法。
13. １３．化学療法によって誘発される脱毛を予防または低減させる方法であって、 化学療法を受けている患者に対して、タンパク様成長因子を、前記予防または低 減の効果を得るに十分な量投与すること含んでなる、方法。
14. １４．前記成長因子が表皮成長因子である、請求項１３に記載の方法。
15. １５．毛成長を刺激する方法であって、前記刺激を必要としている温血動物に対 して、ビタミンＤ３又はその代謝物、類似体若しくは誘導体を、前記刺激効果を 得るに十分な量投与すること含んでなる、方法。
16. １６．前記動物に対してタンパク様成長因子を投与することをさらに含んでなる 、請求項１５に記載の方法。
17. １７．前記成長因子が表皮成長因子である、請求項１６に記載の方法。
18. １８．前記温血動物が男性型禿頭症を患っているヒトである、請求項１５に記載 の方法。
19. １９．毛成長の刺激に使用するのに適当な組成物であって、ビタミンＤ３又はそ の代謝物、類似体若しくは誘導体、及び、タンパク様成長因子の有効量を、薬学 的に許容させる担体とともに含んでなる、組成物。
20. ２０．前記組成物がゲル、クリーム、ローション又は軟膏の形態である、請求項 １９に記載の組成物。