JPH06508363A - 組織治療用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 組織治療用組成物 本発明は、組織治療用組成物、特に、性能が改善された組織接着剤に関し、およ び、このような組成物類の抗疹普または創傷治癒用組成物類として、徐放性薬剤 製剤として、組織または人工補綴材料被覆用、および細胞移植片の担体としての 用途に関する。

出血阻止および創傷密封のための血液凝集物質類の用途は、長きにわたり公知で あった。そういうわけで、フィブリン粉末の止血効果がおよそ８０年はど昔に報 告され、脳および一般外科における出血阻止のためにフィブリンまたはフィブリ ンバッチ類が用いられてきた。

今日、生体接着剤としてこのようにフィブリンを使用することが広く受け入れら れており、多くの外科分野において適用が見いだされている。一般に、フィブリ ン密封剤はフィブリノーゲンおよびトロンビンという２種の成分に基づいている 。フィブリノーゲン分子がトロンビンの作用で切断されフィブリンモノマー類が 形成され、それらが自動的に重合し、主に水素結合によって結合されている３次 元ネットワークのフィブリンを形成するように、フィブリン凝固体がこれらの成 分の混合物として形成される。このことは、自然の血液凝集カスケードの最終相 に対応しており、この凝集速度は使用したトロンビンの濃度に依存している。

引張強さを改善するために、フィブリン鏡開の共有結合架橋が、密封剤組成物に 第Ｘ）１１因子を含有させることによって付与される。フィブリン血餅の強度は 、さらに、前記組成物にフィブロネクチンを添加することによって改善され、こ のフィブロネクチンは架橋されかつ形成されたフィブリン網状体に結合している 。

フィブリン分解によって余り早期にフィブリン血餅が分解されることを防止する ために、前記フィブリン密封剤組成物は、アプロチニンのようなプラスミノーゲ ン活性化因子阻害剤またはプラスミン阻害剤からなることもできる。このような 阻害剤は、また、前記フィブリノーゲン組成物中にプラスミノーゲンがい（らか でも残留しているとその結果としてフィブリン分解活性を低下させるであろう。

同様に、本発明によるヒアルロン酸（またはその他の多糖類）を含む組成物類は 、また、周囲の組織中に常に存在するヒアルロニダーゼによるヒアルロン酸組成 物の余りに早すぎる分解を防止する（すなわち、持続を長期化する）ために１種 以上のフラボノイド類（またはその他の多糖類に対する対応する阻害剤類）のよ うなヒアルロニダーゼ阻害剤からなることもできる。上記にも述べたように、前 記ヒアルロン酸は架橋させることができ、市販の例はＨｙｌａｎ＠（登録商標、 Ｂ　ｉ　ｏｍａ　ｔ　ｒ　ｉｘ、Ｒｉｔｃｈｆｉｅｌｄ、Ｎ、Ｙ、、ＵＳＡから 市販）である。前記ヒアルロン酸組成物類は、たとえば、ゲル、溶液等のような 形態をとることができる。

フィブリン密封剤によって得られる結果は、基本的に、（ｉ）止血。フィブリン 血餅は、止血障壁として作用し、血清、リンパ液および液体の漏出リスクを低減 する。

（ｉ）接合。その接着性の故に、フィブリン密封剤は、組織間に強い結合を形成 することによって傷害することなく組織を結合し、不均等な創傷表面を修復する 。この接合効果は、露出したコラーゲンに結合したフィブロネクチンによって増 強される。

（ｉｉ）創傷治癒。フィブリン密封剤は、効率的止血と創傷表面間の接合ととも に、治癒過程を改善するフィブロブラストの内部成長を促進する。フィブリン密 封剤によって創傷治啼が促進されると、その結果、慶痕が大きく形成され、ゆ着 形成が防止されない。しかし、本発明による組成物類を抗癒普／創傷治癒組成物 として使用することによって、ｆｉ＆痕組織組織はむしろ通常の（再生）組織が 形成され、すなわち、最適な創傷治癒がもたらされる。さらに、このような組成 物類は、また、下記の第４表に報告した試験結果から明らかであるように、炎症 反応を低下させる。

適用分野として、特に、耳、鼻および咽喉手術、一般外科、歯科、神経外科、形 成外科、胸郭および血管外科、腹部外科、整形外科、事故手術、婦人科、泌尿器 科、および眼科が含まれる。フィブリン密封剤類は、また、抗生物質、成長因子 および細胞性塞栓剤類のような薬剤の局所適用のためにも使用されてきた。

市販のフィブリン接着剤類（ヒト血漿から調製）が、登録名、Ｔｉ５ｓｕｃｏｌ 、Ｔｉ５ｓｅｅ＋およびＦｉｂｒｉｎ−Ｋｌｅｂｅｒ　Ｈｕｍａｎｏ　Ｉｍｍｕ ｎ。

（Ｉｍｍｕｎｏ　ＡＧ、Ｖｉｅｎｎａ、Ａｕ５ｔｒｉａ）およびＢｅｒｉｐｌａ ｓｔ　（Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ　ＡＧ、ＭａｒｂｕｒｇＳＧｅｒｍａｎｙ） （これらの登録名は、数カ国では登録商標である）で入手可能である。Ｔｉ５ｓ ｅｅｌ”は、塩化カルシウムを含む液体トロンビン成分および第Ｘｌｌ＋因子、 フィブロネクチン、アプロチニンおよびプラスミノーゲンを含むやや粘稠のフィ ブリノーゲン成分を含む２成分キットである。前記２種の成分類は、２個の別々 のシリンジ中で強く凍結させるかまたは対応するアプロチニンと溶媒としてのカ ルシウム溶液を有する２種の凍結乾燥粉末として市販されている。上記でも説明 したように、前記２種の成分を混合するとフィブリンモノマーの凝集によって前 記フィブリン密封剤は固化する。固定速度はトロンビン濃度に依存し、数秒（ト ロンビン高濃度）から数分（トロンビン低、１１度）まで変化する。

しかし、公知の調製物について重要かつ周知の欠点として、適用した際の前記成 分の水様流動性が挙げられ、この接着剤の取扱いがかなり困難となる。この問題 を克服するために力が注がれ、ダブルシリンジアプリケータ（例　登録名、Ｄｕ ｐｌｏｊｅｃｔ■、Ｉｍｍｕｎ。

ＡＧＳＶｉｅｎｎａＳＡｕｓｔｒｉａで供給されており、たとえば米国特許出願 ４．３５９，０４９で開示されており、または、たとえば欧州特許出願１５６　 ０９８で開示されているような特殊なスプレーシステムとして供給されている） 。しかし、低粘性の接着剤にも根本的問題が残っている。まず第１に、非粘稠ま たは低粘度接着剤は、固定前に流れ出してしまうので、非水平表面で使用するに は不適である。第２に、望ましくない部位に流出して合併症の原因となるかもし れないので、不粘性または低粘性の接着剤にも明らかなリスクがある。このこと は、液体接着剤が固定する前に血管内部に到達しそれによって血栓塞栓症合併症 の原因となるので、血管手術において特に当てはまる。一方、瞬間固定フィブリ ン接着剤（高１度のトロンビン含有）は、密封する部位がその後において修復を 必要とする場合、使用できない。

異なる手法が、参考文献として引用したＪ、Ｖａｓｅ。

Ｓｕｒｇ、１９９０．Ｍａｙ　１１　（５）＋７１８−２５においてｉ、ａ、Ｂ ａ５ｓらによって開示されている。

本論文では、レーザー組織ソールダリング（またはウヱルディング）と称される 手技を開示しており、レーザーエネルギー吸収色素（発色団）およびフィブリノ ーゲンがレーザーによって結合され、従来の縫合吻合よりも迅速な治癒であると 言われている強度の吻合をもたらす。

同様の凝集および／または結合効果が、他のタンパク質類およびエネルギー源に よっても達成できる。

本発明の目的は、上２の低粘性問題がなくしがも廠痕が形成されることもなくま たは癒着が進行することもない改善されたフィブリン接着剤を提供することであ る。

本目的は、上述のタイプのフィブリン接着剤組成物中に生分解性および生体適合 性で粘稠な水溶液を形成可能なポリマーを粘性を増加させる量、含有させること によって達成される。したがって、本発明によれば、このような粘性増強ポリマ ーを添加することによって、前記接着剤組成物は、その取扱いと適応を促進しか つ改善させるために適した粘性を得るであろうが、一方、フィブリン接着剤の好 適な性質が悪影響を受けることがない。しがし、創傷治癒および抗癒着目的のた め、前記接着性が表面化することは少なく、または、消失することさえある。

したがって、本発明は、（ｉ）フィブリンまたはフィブリノーゲン（ｉｉ）生分 解性および生体適合性でがっ粘稠の水溶液、時にはその他のタンパク質類を形成 可能なポリマーからなる組織治療用組成物に関する。

本組繊接着用組成物のひとつの使用形態は、したがって、使用に際して、所望の 部位または部分にその適用が簡単かつ安全にできるような粘性を示す改善された フィブリン密封剤または接着剤である。

もうひとつの形態では、本組織治療用組成物は治療物質からなり、かつ、前記治 療物質の局所投与のための薬剤組成物を構成する。ある特別な態様において、こ の治療物質は、下記でさらに詳細に説明するような前記粘稠ポリマー自体または それに結合した種である。

本組織治療用組成物のさらにもうひとつの使用形態は、創傷治癒剤および抗癒着 性組成物であり、前記高分子組成物は、前記組成物に対して癒着防止性を付与し 、その結果、手術過程において隣接組織の癒着を防止するために使用することも できる。このような抗癒着用途に関連するのは、創傷治癒のための本組織治療用 組成物の用途である。たとえば、前記治療用組成物により創傷端を接合すること によって、きれいな傷跡となる。さらに、細胞移植片、特に、皮膚移植片が、迅 速に治癒するであろう。このことは、当然、形成外科において特に関心が寄せら れるであろう。

上述の生分解性および生体適合性で水溶液形成可能なポリマーは、（将来入手可 能となるであろう物質類も含めて）極めてさまざまな物質類から選択でき、かつ 、その選択は、当業者が容易にできるであろう。

前記生分解性かつ生体適合性のポリマー類は以下では粘性増強ポリマー類と頻繁 に称され、このポリマー類の好適な群は、高分子量ポリグリカン類または多糖類 から構成される。本発明の目的のためのこうした多糖類の例として、キサンタン 、デキストラン、セルロースおよびプロテオグリカン、特にヒアルロン酸、およ びその塩類および誘導体類である。セルロース誘導体類の例としてその数例を述 べると、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）およびヒド ロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）である。高分子多糖類の他の粘性 増強ポリマー類の例は、ゼラチンおよびポリビニルピロリドンである。

好適な多糖／ポリグリカンは、ヒアルロン酸およびその塩類および誘導体類であ る。ヒアルロン酸ナトリウムは、２糖単位が繰り返して構築された高分子量直鎮 多糖である。それは、全組織の細胞外腔に存在し、かつ、全種において同一の単 純な化学的構造を有している。したがって、生成されたヒアルロン酸塩を適用す ると内因性物質類の局所濃度が一時的に高くなるが、それを前記組成物中で使用 しても、ゆえに、全く生理的に有害な影響はないであろう。前記ヒアルロン酸塩 は、溶液では、非常に長いランダムコイル形態を取り、それは低濃度において可 撓性の分子網に既に組み込まれていて、ヒアルロン酸溶液に本目的のために有用 な興味ある流動性を付与している。

ヒアルロン酸ナトリウムの粘弾性は、スペーサーとしての臨床用途をもたらし、 眼科手術領域における手術手技を向上させることになった。また、耳鼓膜上皮の 再生を増強する点において生体活性であることおよび血管内皮細胞の内部成長を 阻害することが明らかとされている。

さらに、それは創傷治癒に作用し、顆粒組繊細胞の移動に影響を及ぼし、かつ、 手術後形成された癒着量を減少させる。ヒアルロン酸ナトリウム自体の生体内有 用性は、その迅速な代謝および短半減期の故に限定されている。

前記組織治療用組成物を改善された組織接着剤として使用すると、液体フィブリ ン接着剤中において適用される前記粘性増強ポリマーの比率は、フィブリン血餅 化に悪影響を及はすことなく、目的とする適用のために適切な粘性を付与するよ うに選択されるべきであり、前記ポリマーおよび製造される特定の組織接着用組 成物に依存するであろう。各特定適用について全体としての組成物の最終溶液混 合物の適切な当初の粘性は、当業者であれば容易に決定できるが、通常、約５０ ０〜１，０００゜０００センチポアズ（ｃＰ）、好適には約１．０００〜約５０ ０，０００センチポアズの範囲であろう。本文で使用した用語”最終溶液混合物 ′とは、必ずしも均質状態を！味していない。それどころか、混合過程に応じて 、前ｓｉ２混合物は、多くの場合、血餅化以前において均質または均一状態に到 達しないであろう。当業者に周知であるように、前記粘性は、濃度および極限粘 度数η・−（Ｃｏｎｃ、ｘ　［η１　”’　／Ｉ　Ｏ）と相関している。Ｍｏｒ ｒｉｓら、Ｃａｒｂｏ、ｈｙｄｒａｔｅ　ｐｏｌｙｍｅｒｓＳＶｏｌ、ｌ、１９ ８１Ｓｐ、５−２１によって改変しである。我々は、［η」から、Ｃ１ｅｌａｎ ｄの式、ｒｒｒＪ　＝ｋｘ平均分子量に１、Ｃ１ｅｌａｎｄら、Ｂｉｏｐｏｌｙ ｍｅｒｓ、Ｖｏｌ、９，１９７０、ｐ、７９９−８０を用いて分子量を得る。

本発明の組織接着用組成物は、先行技術のフィブリン密封剤と同様に、付加的構 成要素からなることができる。

したがって、前記組成物は、密封剤タンパク質およびたとえば高分子多糖のよう な粘性増強ポリマーに加えて、好適には第Ｘｌｌ＋因子および／またはフィブロ ネクチンおよび／またはプラスミノーゲンからなるであろう。前記組成物がさら に血餅化酵素すなわちトロンビンを塩化カルシウムのような２価のカルシウムと 特に併用して含有するのが有益である。塩化カルシウムの濃度は、その際、前記 組織接着用組成物の特定の目的に応じて、たとえば４０ｍＭから０．２Ｍまで変 化するであろう。高１度の塩化カルシウムはフィブロブラストの成長を阻害しそ れ故に（フィブロブラストの内部成長を刺激するフィブロネクチンがないことと ともに）抗癒着適用に好適である。

さらに、たとえば、アプロチニン、アプロチニン、アルファー２−アンチプラス ミン、アルファー２−マクログロブリン、アルファー１−アンチトリプシン、ニ ブシロン−アミノカブロン酸またはトラネキサム酸のようなプラスミン阻害剤、 またはたとえばＦＡＩ−１またはＰＡｌ−２のようなプラスミン活性化因子阻害 剤のようなフィブリン分解阻害剤を含有することが重要である。

本発明の組織治療用組成物類中における過去に公知の成分類の比率は先行技術の 組成物を指針として選択できるが、粘性増強ポリマーの必要量は、特定ポリマー および目的とする使用形態に応じて当業者が容易に決定できる。したがって、も し前記粘性増強ポリマーの濃度および／または分子量が余りに小さいと、粘性増 加が不十分となろう。また、余りに濃度が高かったりおよび／または分子量が大 きいと、フィブリン重合と組織への粘着が阻害されるである・）。

トロンビン１度を高めることによって、フィブリノーゲンの重合が迅速となり、 その結果、接着剤が固定するまでの時間か影響を受けるであろう。低トロンビン １度では、フィブリン接ＩＦ組成物が適用後数分間やや流動性を保ったままであ ろう。本発明による粘性増強ポリマーによる粘性増強のさらに葺益な効果は、し たがって、低濃度のトロンビンを使用する可能性であり、このことは、蜜月すべ き部位が非水平表面上においてさえもその後に修復を要するような状況において 必要である。

本発明の組織治療用組成物は、先行技術密封剤と同一タイプの調製物で提供でき る。したがって、本組織接着剤は、好都合な態様において、ｌ成分は血液血餅化 タンパク質（類）からなり他方はトロンビンおよび２価のカルシウムならびにフ ィブリン分解阻害剤を含む可能な添加剤からなる、２成分調製物である。前記粘 性増強ポリマーは、組織接着剤の意図する用途に応じて、前記２成分の１者また は両者に含有させることができる。フィブリン接着剤の場合、前記粘性増強ポリ マーは前記２成分のいずれかまたは両者に含有させることができるが、他の適用 の場合には、それは、好適には、フィブリンまたはフィブリノーゲン成分と会合 している。少なくとも理論的には、前記の粘性増強ポリマーを別個の成分として 提供することも当然ながら可能である。前記成分類は、十分に凍結した溶液形態 でまたは凍結乾燥粉末として提供でき、使用に先立ち、たとえば、それぞれ、ア プロチニンおよびカルシウムイオンを含有する適切な水溶液類で希釈する。

本発明の組織治療用組成物は、また、当技術でそれ自体公知の種々の組み合わせ で使用することもできる。たとえば、上述の２成分態様に関して述べると、ｌ成 分は事前に織り込んだ単位として生体適合性固体マトリックスで提供でき、かつ 、他（の活性化）成分は、使用時点で添加することかできる。その際には、前記 の粘性増強ポリマーは、前記成分類のいずれがまたは両者と共に付与できる。

このような態様において、本発明の組織接着剤は、不織布のような組織適合性平 坦マトリックス材料を含むことができ、その中に、血液凝集物質、たとえば高分 子量の多糖のような粘性増強ポリマー、および任意の付加的構成成分類を浸種さ せる。ひとつの改変として、前記粘性増強ポリマーをトロンビンとともに添加す る。もうひとつの改変として、前記マトリックス材料をトロンビンに浸種させ、 さらに、血液凝集物質を使用時点で粘性増強ポリマーともに添加する。このよう な不織布は、たとえば、（好適には多孔性の）コラーゲン、グロブリン、ミオグ ロブリン、カゼインまたはアルブミンのようなグリコプロティン、ゼラチン；シ ルクフィブロインまたはセルロースのような多糖；またはそれらの混合物である 。

このような態様は、たとえば、出血の停止および創傷被覆用に特に有用である。

しかし、容易にわかるように、抗疹着目的のためには、コラーゲンのような疹着 増強性を有する材料は適切でないことに留意されたい。この点では、セルロース がより適切な材料であろう。このような浸種された平坦材料は、凍結乾燥形態で 付与されるのが好都合である。

もうひとつの態様では、組織治療用組成物が、フィブリンと粘性増強ポリマーの 非架橋組み合わせからなる手術用フィルムまたはシートとして付与される。

本発明の組織治療用組成物はその他のあらゆる調製物中で当然使用でき、従来の フィブリン接着剤類についてたとえば米国特許出願４，６４２．１２０において 記載されているような先行技術フィブリン接着剤類がたとえば関節軟骨インブラ ント材料としておよび胎児軟骨細胞または間葉細胞と併用して骨欠損修復材料と して付与されてきた。

既に上記で述べたように、本組織治療用組成物は、たとえば上述の態様のいがな るものにおいても、薬剤活性物質の適用のために使用できる。抗生物質、成長因 子等のような薬剤を前記組織接着剤中に取り入°れることによって、この組織接 着剤の適用で形成されるフィブリン網状組織中に包含されるであろう。それによ って、前記薬剤は適用部位に固定され、一方、たとえば、目薬、創傷治癒調製物 等として使用された際に、前記組成物から確実に徐放されるであろう。

同様に先に述べたように、前記組織接着用組成物から放出される薬剤活性物質は 、粘性増強ポリマーそれ自体であることもそれに結合した物質であることもでき る。

前記の粘性増強要件を満足しならびに治療上および薬理学的有用性を有しており 、生体有用性を持続することが望まれるこのような増強ポリマーの特殊な例とし て、上述のように、ヒアルロン酸および容易に水に可能なその塩類および誘導体 類は、極めて短い生物学的半減期を有している。本発明の組織治療用組成物は、 したがって、ヒアルロン酸およびその塩類および誘導体類のようなプロテオグリ カン類のための有益な持効性調製物を構成し、その生体有用性を実質的に高める 。

本発明の組織治療用組成物は、たとえば、前記の先行技術組織接着剤類と同様の 投与形態で調製されかつ撮供される。

前記組成物類がその接着性に限定されていないことを強調したく、非接着性の組 成物類も特に前記組成物類が主に創傷治癒用を意図している際に同様に含まれる 。後者の組成物類は、特に、アルブミンおよび／または成長因子類のような非接 着性のタンパク質類を含むことができる。実質的に非接着性の組成物類は、同様 に、前記組成物のポリマー部分が前記タンパク質部分の接着性を阻害する際に得 ることができる。この意味からして、本発明が接着性と非接着性の両者の組成物 からなることを強調しなければならない。ただし、本明細書では実施例も含めて 、しばしば”接着物質”として称されている。

下記において本発明をより詳細に非限定的実施例によって説明する。■実施例に おいて組織治療用組成物態様の接着性を動物実験において試験したが、添付図面 を参照されたく、その中の唯一の図面は、３カ所の縫合を有するクランプ付血管 の略側面図である。第２の実施例では、もうひとつの組織接着用組成物態様の調 製を示している。第３の実施例では、徐放性調製物としての前記組織接着用組成 物の用途を例示しており、第４の実施例では、抗疹着および創傷治癒促進剤とし て組織接着用組成物の性質を記載している。

実施例１ 動物 体重２３０−３４５グラム（７）Ｓｐｒａｇｕｅ−ＤａｗＩｅｙ雄性ラット２１ 匹を使用した。水および食餌を自由に摂取させ、これらを標準的環境条件下で実 験前１週間飼育した。

手術手技 前記動物を、ミダゾラン：０．３８ｍｇ／１００ｇ体重（Ｄｏ　ｒｍ　ｉ　ｃ　 ｕｍ＠、Ｒｏｃｈｅ　ＡＧ、５ｗ１ｔｚｅｒｌａｎｄ）皮下投与と併用して、フ ルアニゾン；０．７５ｍｇ／ｌ’ｏ　Ｏｇ体重およびツェナチル；０．０２４ｍ ｇ／１００ｇ体重（ＨｙｐｎＯｒｍＯｌ、Ｊａｎｓｓｅｎ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）で 麻酔した。３０−４５分後に追加投与した。

前記動物を３７℃に設定した温水毛布（Ａｑｕａｍａｔｉｅ　Ｋ−２０−Ｄ、Ｈ ａｍｉｌｔｏｎ、Ｃ１ｎｃｉｎａ　ｔ　ｔ　ｉ、ＵＳＡ）上においた。

Ｌ型に鼠暎部を切開して大腿血管を露出させ、この動脈を鼠暎靭帯から上背部血 管まで可動な状態とした。深部動脈は、２極シアチルミーによって焼灼した。４ ０ｍｇ／ｍ　Ｉのパバベリン（ＡＣＯ）　、Ｓｗｅｄｅｎ　数μ！を局所投与し 、前記の手術術創によって誘発された血管れん縮を解除させた。２〜３分後、２ つのミクロ血管クランプを別々に適用し、はさみでこの動脈を分割した。

血管切断端をミクロディレーターによってゆるやかに拡張させ、腔を数ミリリッ トルの生理食塩水で洗浄した。

次に、互いに１２０度に配置した１Ｏ３０ナイロン（ＳＴＴ）縫合糸で前記動脈 を縫合した。各縫合間における血管圧は、第１図にも大略水したように０．２− ０．４ｍｍのギャップの原因となった。図中、図面番号ｌは、血管を、番号２は クランプを、番号３は縫合を、かつ、番号４は前記ギャップを示している。

通常全体で８−１２の縫合を要する吻合を完璧なものとせず、縫い目間のギャッ プを、フィブリン接着剤でＤｕｐｌｏｊｅｃｔ■（Ｉｍｍｕｎｏ　ＡＧ、Ａｕ５ ｔｒｉａ）で適用し密封した。吻合の接着手技は、下記の３つの接着調製物類の ひとつに無作為に振り分けた。

■、オリジナルＴｉ５ｓｅｅｌ＠　（Ｉｍｍｕｎｏ　ＡＧ、Ａｕ５ｔｒｉａ）で は、ｌシリンジ（”フィブリノーゲン成分”）が、７５−１１５ｍｇ／ｍ＋のフ ィブリノーゲン、２−９ｍｇ／ｍｌの血漿フィブロネクチン、１Ｏ−５０Ｕの第 Ｘ１１１因子、４０−１２０μ＋のプラスミノーゲンおよび３０００ＫＩＵ／ｍ ｌのアプロチニンを含有しており、粘性的１００ｃＰを有していた。他のシリン ジ（”トロンビン成分２）は、５００１Ｕ／ｍｌのトロンビンおよび４０ｍＭの ＣａＣ１ｔを含有しており、粘性１．２ｃＰを有していた。前記２種のシリンジ 類の混合物（１＋１）の当初の粘度は、１００ｃＰよりもはるかに小さかった。

Ｉｌ、Ｔｉ５ｓｅｅｌ＠　フィブリノーゲン成分を１０ｍｇ　／　ｍ　［のヒア ルロン酸ナトリウム溶液と１＋１で混合し、平均分子量４，０００，０００、ゼ ロせん断粘度３００．０ＯＯｃＰを有し、０．００２Ｍ　リン酸Ｎ　ａ　ｓＯ， １４５Ｍ　ＮａＣｌ、　ｐＨ７，３（Ｈｅａｌｏｎ＠、Ｋａｂｉ　Ｐｈａｒｍａ ｃｉａ　ＡＢＳＳｗｅｄｅｎ）に溶解した。したがって、ヒアルロン酸塩を添加 すると、最終アプロチニンおよびフィブリノーゲン濃度が半分に低下し、粘度的 ２４．０００ｃＰとなった。ヒアルロン酸添加フィブリノーゲン成分とトロンビ ン成分との（ｌ＋１）混合により得られた溶液の当初の粘度は、約２゜０００ｃ Ｐであった。

■、前記のフィブリノーゲン成分を、０．１４５ＭＮａＣ１によって１＋１に希 釈し、調製物■のアプロチニンとフィブリノーゲンと同一最終濃度にした。

接着剤適用５分後において、血管クランプを遠端から開始して除去した。時に出 血したが、手でゆるやかに抑えて制御した。

Ａｕｃｌａｎｄの開通試験（Ａｕｃｌａｎｄ　Ｒ，Ｄ。

、Ｍｉｃｒｏｓｕｒｇｅｒｙ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　Ｍａｎｕａ　ｌ、第２版、１ ９８０、Ｍｏ５ｂｙＳＳｔ、Ｌ。

ｕｉｓ）によって、吻合完了後２０分で開通性を試験した。その後皮膚を断続縫 合によって閉じ、動物を麻酔から覚醒させた。

２４時間後、動物をブラインド法で再評価した。動物を麻酔し、吻合の開通性を 上述のようにして試験した。

その後過剰量のバルビッール酸でラットを層殺し、開通した動脈を摘出した。過 剰のフィブリン接着剤を除去し、血管および吻合を再度縦方向に切開し、内部か ら観察した。血管内部血栓物質を生理食塩水で洗浄して静かに除去し、残留した 壁粘着フィブリン接着剤沈着物を血管内径の百分率で半定量的に評価した。　前 記３種の接着調製物の吻合開通性およびフィブリン接着沈着物に及ぼす効果を、 １方向ＡＮＯＶＡを使用し、それぞれ、吻合完了２０分後および２４時間後にお いて、最小有意差の方法に従って複数範囲試験で比較することによって、群Ｉ、 ■および■を評価した。全データを平均＋ＳＥＭで示した。５％レベルにおける 差を有意と見なした。結果を下記の第１表に示した。

第１表 実験群 術後２４時間　３５．７±１３．３　８５．７±９．７　３５．７±１３．３開 通血管内部のフィブリン塊 表から明らかであるように、吻合完了２０分後の開通性は、１群および■群より も■群において有意に高かった（ｐｒｏ、０１）。開通血管内部に到達したフィ ブリン塊の量を半定量的にめたが、１群および■群においてよりもヒアルロン酸 ナトリウム処置フィブリン調製物において有意に低かった。

本研究で達成した開通率は、最小数の縫合と付加的フィブリン接着（５０−７５ ％）を組み合わせて行ったミクロ血管吻合で過去に報告されているもの（たとえ ば、Ａｕｃｌａｎｄ　Ｒ，Ｄ、、上記参照）に匹敵する。

吻合完了２０分後の開通率は、したがって、Ｔｉ５ｓｅｅｌ＠をヒアルロン酸ナ トリウムと併用した群において有意に高かった。この改善は前記調製物の粘度増 加により、フィブリンの希釈にはよらず、ごのことは、生理食塩水による希釈が 開通率に影響を及ぼさなかったという事実によって明らかである。この機構は、 さらに、血管内部に到達したフィブリンがヒアルロン酸ナトリウム処置群で低か ったという事実によっても明らかである。

実施例２ 実施例１の組成物■に対応するフィブリン接着組成物であるがキサンタンをヒア ルロン酸に代えたものを、実施例１に示したものと同一組成を有するオリジナル Ｔ１５ｓｅｅｌ■（Ｉｍｍｕｎｏ　ＡＧ、Ａｕ５ｔｒｉａ）のフィブリノーゲン 成分の１部をゼロせん断粘度１．　０００．０ＯＯｃＰを有する１０ｍｇ／ｍｌ のキサンタン水溶液１　（容量）部と混合することによって、調製した。

Ｔｉ５ｓｅｅｌＯおよびキサンタンを含有する生成した溶液は粘度８０．０ＯＯ ｃＰを有しており、その後、Ｔｉ５ｓｅｅｌ■　トロンビン成分（５００１Ｕ／ ｍｌ；粘度１．２ｃＰ）と（１＋１で）混合した。当初的６゜４００ｃＰの粘度 を有していた生成した混合物中におけるその後のフィブリン血餅化は、３７℃で レノメーターで追跡した。３０分後、相角度は約４℃であり、弾性（保存）係数 は、１，３００Ｐａであった。

比較のため、オリジナルＴｉ５ｓｅｅｌ＠のフィブリノーゲン成分ｌ　（容量） 部を生理食塩水（０，１５ＭＮａＣ１）ｌ　（容量）部と混合した。生成したフ ィブリノーゲン含有溶液を上記のように３７℃で追跡した。３０分後、相角度は 約２°Ｃであり、弾性（保存）係数は、１．８００Ｐａであった。

以上より、両者の場合において、極めて弾性で近似的に同一の曲げ剛性（弾性係 数）のゲル類（相角度はθ℃ニ近似）が、３７℃で形成された。

実施例３ 試験操作 １％（ｌｏｍｇ／ｍｌ）のヒアルロン酸ナトリウム（ＮａＨＡ）（Ｈｅａｌｏｎ ＠、Ｋａｂｉ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を、ｉ＋ ｉでＴｉ５ｓｅｅｌ＠フィブリン接着剤（Ｉｍｍｕｎ。

ＡＧ、Ｖｉｅｎｎａ、Ａｕ５ｔｒｉａ）のアプロチニンおよびフィブリノーゲン 含有シリンジと、実施例１の接着調製物について記載のようにして混合した。第 ２に、前記フィブリン接着剤のトロンビン含有成分を、Ｄ　ｕ　ｐ１ｏｊｅｃｔ ■アプリケーター（Ｉｍｍｕｎｏ　ＡＧ％ＶｉｅｎｎａＳＡｕｓｔｒｉａ）で添 加し、最終濃度０゜２５％　Ｎ　ａ　ＨＡとした。この最終組成物１００ｍｇを シャーレ底に入れた。設定時間１分後（Ａ群）および１０分後（Ｂ群）、０．１ ４５Ｍ　ＮａＣｌ　１０ｍ１を添加した。シャーレを３７°ｃＳ振動数ＩＨｚの 振とぅ浴に入れるか、または、３７℃に設定した！ｌ温潤組織培養チャンバー中 静置した（それぞれ、ＣおよびＤ群）。

対応する対照群は、０．１４５Ｍ　ＮａＣｌで１＋３に希釈した１％ＮａＨＡ　 （Ｈｅ　ａ　ｌ　ｏｎ＠）とし、実験群におけるＮａＨＡと同一最終濃度（０， ２５％）とした。対照を娠とう（ＡＣおよびＢＣ群）および非振とう（ＣＣおよ びＤＣ群）の実験群と同一方法で処理した。

添加ＮａＣ１溶液の試料をＮａＨＡ分析３０分後、６０分後、４時間後、８時間 後および２４時間後に採取した。

前記ＮａＣｌ溶液のＮａＨＡ１度は、ＨＡ試験５０（Ｋａｂｉ　Ｐｈａｒｍａｃ ｉａ　ＡＢＳＵｐｐｓａｌａ。

Ｓｗｅ　ｄ　ｅ　ｎ）によって測定した。

結果 対照群において、ＮａＣ１溶液はほとんど瞬時に飽和され、試料を静置時に採取 しようが振とう時に採取しようがそれとは無関係に、実際、２４時間後までＮａ ＨＡａ度がさらに増加することはなかった。一方、実験群において、ＮａＣｌ溶 液中のＮａＨＡｉ１度は安定して増加した。溶解速度は、フィブリン血餅がＮａ Ｃｌ溶液添加１０分前に固定できたかおよびそれらが静置または振とうされたか に依存していた。結果を下記の第２表に示しｔこ。

第２表 ＮａＨＡが如何に急速に溶解したかを示すため、最終量のＡの３０％がＮａＣｌ 溶液中に観察されるまでの時間を計算した。結果を下記の第３表に示した。

上記結果は、ヒアルロン酸ナトリウムがフィブリン血餅中に取り込まれると、生 理食塩水溶液中で１５０倍までゆっくりと溶解することを示している。この溶解 時間は、前記溶媒が添加される前にどれだけ長くフィブリン接着材が固定された かに大きく依存している。フィブリン束の架橋を完成させるには数時間を要する らしいので、前記溶解速度は、もしこの血餅がさらに長時間固定されるとさらに 低下するであろうと予測できる。さらに、もし溶解速度の長期化が所望であるな らば、ＮａＨＡとフィブリンの混合物を動かすべきではないことが明らかである 。

実施例４ 動物および試験操作 体重４４０−４８０グラムのＳｐｒａｇｕｅ　ＤａｗＩｅｙ雄性ラットｌＯ匹を 使用した。環境条件および麻酔は、上記の実施例１に記載と同一とした。中央線 切開によって、開腹術を施行した。中央に直径１１ｍｍの円形孔を有するチタン ディスクを右背面肝葉表面に置いた。

ディスク孔中に露出させた肝の紫膜表面をナイロン歯間歯ブラシで点状出血が得 られるまでブラッシングした。

同一方法で、やや広範囲の壁側腹膜を損傷した。前記２カ所のブラッシングした 表面が互いに直接接触するように、損傷壁側表面部位を選択した。これまでの研 究から、強固な癒着が、両者の紫膜表面が直接接触している部位でのみ進行する ことが示されている。それぞれ５匹の動物を、無処置、または、実施例１の接着 調製物について記載されているようなヒアルロン酸塩およびフィブリン接着物の 混合物による処置に振り分けた。第２の場合、肝要面上の外接病巣を前記ヒアル ロン酸塩およびフィブリン混合物０．４ｍｌで被覆した。ヒアルロン酸塩は、Ｔ ｉ５ｓｅｅｌ＠のフィブリノーゲン含有シリンジ内容物（上記実施例１の接着調 製物■）に１＋１で添加混合した。

ラットを、混合物適用後２０分間仰向けに保持し、接着剤固定時に壁側および内 臓表面が接触しないように確保した。その後、腹部および皮膚を同時４．０Ｄｅ ｘｏｎ縫合によって層状に閉じた。４８日後、動物を屠殺した。腹部を中央切開 によって再度露出させ、癒着を評価した。進行し−た接着の頻度と範囲を、当初 の紫膜損傷の百分率で示した。

癒着進行に及ぼすヒアルロン酸塩−フィブリン接着の効果をｕｎｐａｉｒｅｄ　 ｔｗｏ−ｔａｉｌｅｄ　ｔｅｓｔによって評価した。データを平均＋ＳＥＭとし て示した。５％レベルにおける差を有意と見なした。

生！ 観察された癒着は全て、肝と腹壁内表面の間に局在しており、肝表面をブラッシ で損傷した部位に限局されていた。対照群の１匹を除く全動物で癒着が観察され たが、一方、処置群ではいかなる癒着をも示したものは皆無であった。結果を下 記の表４に示した。

第４表 ＊５％レベルにおける有意性 ヒアルロン酸塩とフィブリン接着の併用処置は、このように、完全に接着の進行 を消滅させ、これまでいずれの処置単独（Ｌｉｎｄｅｎｂｅｒｇ　Ｓ、ら、Ａｃ ｔａＣｈｉｒ、５ｃａｎｄ、１５１：５２５−５２７．１９８５；およびＡｍ１ ｅｌ　Ｄ、ら、Ｊ、Ｈａｎｄ、Ｓｕｒｇ、（Ａｍ）１４：８３７−８４３．１９ ８９）でも達成されなかったものであった。この知見の機構は明確ではない。ヒ アルロン酸塩が長時間にわたり創傷部位に保持されたという事実およびフィブリ ン血餅の組成変化が、創傷治癒のための条件を最適化し、がっ、過剰の撥痕組織 形成を防止するらしい。

さらに、前記組成物は、炎症反応を著明に低下させ、このことは、創傷治癒が、 鍛痕組織形成と収縮というよりもむしろ、再生によって誘発されることを示唆し ている。

本発明は、たとえば′ポリマー”、”タンパク質類“、”多糖類°、゛ポリグリ カン類”等に対して言及した場合、その際にはまた、その塩類、誘導体類および その他の修飾体類も包含しており、これらは、機能的に本文で開示した性質に関 して同等である。

ＦＩＧ、１ 補正書の写しく翻訳文）提出書 （特許法第１８４条の７第１項） 平成５年１２月１７日

Claims (27)

【特許請求の範囲】
1. １．（ｉ）フィブリンまたはフィブリノーゲンおよび（ｉｉ）生分解性かつ生体 適合性の粘稠水溶液を形成可能なポリマーからなる組織治療用組成物。
2. ２．構成要素（ｉ）がフィブリンまたはフィブリノーゲンおよび第ＸＩＩＩ因子 からなることを特徴とする請求の範囲第１項に記載の組織治療用組成物。
3. ３．請求の範囲第１項または第２項に記載の組織治療用組成物で、それが、その 適用時点において混合される２成分組成物であり、１成分がフィブリノーゲンか らなり他がトロンビンからなり、前記粘稠ポリマーが前記２成分類の１者または 両者に含有されることを特徴とする前記組織治療用組成物。
4. ４．前記フィブリノーゲンからなる成分が、さらに、第ＸＩＩＩ因子、フィブロ ネクチン、プラスミン阻害剤、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤、およびプラ スミノーゲンから選択される少なくとも１種の追加員からなることを特徴とする 請求の範囲第１項、第２項または第３項に記載の組織治療用組成物。
5. ５．前記トロンビンからなる成分がさらに２価のカルシウムを含有することを特 徴とする請求の範囲第３項または第４項に記載の組織治療用組成物。
6. ６．前記粘稠ポリマーが前記フィブリンまたはフィブリノーゲンからなる成分に 含有されることを特徴とする請求の範囲第３項乃至第５項のいずれか１項に記載 の組織治療用組成物。
7. ７．前記粘稠ポリマーが高分子量の多糖またはプロテオグリカンであることを特 徴とする請求の範囲第１項乃至第６項のいずれか１項に記載の組織治療用組成物 。
8. ８．前記高分子量多糖がキサンタン、デキストラン、セルロースおよびグリコサ ミノグリカン類、およびその塩類および誘導体類からなる群から選択されること を特徴とする請求の範囲第７項に記載の組織治療用組成物。
9. ９．前記高分子量のグリコサミノグリカンがヒアルロン酸またはその塩またはそ の誘導体であることを特徴とする請求の範囲第８項に記載の組織治療用組成物。
10. １０．前記混合組成物の粘性が、適用された際に、約５００乃至約１，０００， ０００ｃＰ、好適には約１，０００乃至約５００，０００ｃＰであることを特徴 とする請求の範囲第１項乃至第９項のいずれか１項に記載の粗織治療用組成物。
11. １１．前記成分類のひとつが固体マトリックスまたは担体物質上に保持されてい ることを特徴とする請求の範囲第３項乃至第１０項のいずれか１項に記載の組織 治療用組成物。
12. １２．ヒアルロン酸またはその塩または誘導体の投与のための請求の範囲第９項 乃至第１１項のいずれか１項に記載の組織治療用組成物。
13. １３．請求の範囲第１項乃至第１２項のいずれか１項に記載の組織治療用組成物 で、それが十分に凍結したかまたは凍結乾燥形態であることを特徴とする前記組 織治療用組成物。
14. １４．先行請求の範囲のいずれか１項に記載の組織治療用組成物で、それが組織 接着性組成物であることを特徴とする組織治療用組成物。
15. １５．抗癒着性組成物で、それが、請求の範囲第１項乃至第１４項のいずれか１ 項に記載の組織治療用組成物からなることを特徴とする前記抗癒着性組成物。
16. １６．徐放性薬剤製剤で、それが、請求の範囲第１項乃至第１４項に記載の組織 治療用組成物からなることを特徴とする前記製剤。
17. １７．前記治療物質が前記粘稠ポリマー自体またはそれに結合した種であること を特徴とする請求の範囲第１６項に記載の徐放性薬剤製剤。
18. １８．創傷治癒促進用組成物で、それが、請求の範囲第１項乃至第１４項のいず れか１項に記載の組織治療用組成物からなることを特徴とする前記組成物。
19. １９．癒着および瘢痕形成防止用組成物で、それが、請求の範囲第１項乃至第１ ４項のいずれか１項に記載の組成物からなることを特徴とする前記組成物。
20. ２０．人工補綴材料被覆用または細胞移植片担体としての組成物で、それが、請 求の範囲第１項乃至第１４項のいずれか１項に記載の組成物からなることを特徴 とする前記組成物。
21. ２１．請求の範囲第１７項乃至第２０項のいずれか１項に記載の組成物で、それ が、さらに、少なくとも１種の創傷治癒促進タンパク質からなることを特徴とす る前記組成物。
22. ２２．前記少なくとも１種の創傷治癒促進タンパク質が、血清タンパク質類、組 織成長因子類、ホルモン類、走化性タンパク質類、および栄養タンパク質類から なる群から選択されることを特徴とする請求の範囲第２１項に記載の組成物。
23. ２３．請求の範囲第１項乃至第１４項のいずれか１項に記載の組成物の抗癒着性 組成物としての用途。
24. ２４．請求の範囲第１項乃至第１４項のいずれか１項に記載の組成物の徐放性薬 剤組成物としての用途。
25. ２５．請求の範囲第１項乃至第１４項のいずれか１項に記載の組成物の創傷治癒 組成物としての用途。
26. ２６．請求の範囲第１項乃至第１４項のいずれか１項に記載の組成物の人工補綴 材料被覆のための用途。
27. ２７．請求の範囲第１項乃至第１４項のいずれか１項に記載の組成物の細胞移植 片担体としての用途。