JPH06507630A - 哺乳類ｔ細胞の応答を調節する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 じ　の店　・　１玉１訴 発明の分野 本発明は哺乳類の治療法の分野に関する。より詳しくは、本発明は、ＭＢＣによ って制限された哺乳類Ｔ細胞の応答を調節する新規な方法、及び抗原に結合した ＭＨＣを認識するＴ細胞抗原受容体と結合できろ化合物を用いて哺乳類のＭＭＣ 関連疾病を治療する方法に関する。

政府助成金 ここに発表された研究は、米国国立衛生研究所助成金第１Ｒ２９Ａ１２８５０３ −０１号により部分的に援助された。合衆国政府は本発明に対して一定の権利を 有する。

発明の背景 哺乳類のＭＩＩＣ関連疾病、例えばリウマチ様関節炎及び若年性糠尿病に寄与す る因子は、主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ＋　として公知の第６染色体の 一部に暗号化されている。

ヒトではＨＬＡ（ヒト白血球抗原）と呼ばわるこの複合体は、５個の主要な遺伝 子座に区分され１世界保健機構の命名法によればＨＬＡ−Ａ　、　ＨＬＡ−Ｂ　 、　ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−Ｄ及びＨＬＡ−ＤＲと称される。Ａ、Ｂ及びＣ座は単 一遺伝子座である、Ｄ及びＤＲは、多遺伝子座である。Ａ、Ｂ及びＣ座は伝統的 な移植抗原を暗号化しているのに対して、Ｄ及びＤＲ座は、免疫応答性を制御す る産生物を暗号化している。より最近の定義では、構造及び機能に基づき、ＨＬ Ａの遺伝子産生物を３クラス　（１，ＩＩ及びＩＩＩＨこ区分する。クラスＴは 、ＨＬＡ−Ａ　、　ＨＬＡ−８及びＨＬＡ−Ｃ座、並びにＱａ／ＴＬｆｆｉ域の 産生物を包含する。　ＨＬＡ−Ｄ及びＨＬＡ−ＤＲ関連遺伝子の産生物はクラス １■に含まれる。クラスエエの抗原は、α　（約３４．０００ダルトンの）グリ コペプチド及びβ　（約２９．０００ダルトンの）グリコペプチドで構成される ヘテロ二量体であると考えられている。クラスＩＩの遺伝子座の数及び遺伝子順 序は暫定的なものである。第三のクラス、すなわちクラスＩＩＩには補体成分が 含まれる。ここに　。

用いられる限りで、ｒＭＨＣＪという用語は、上記の遺伝子座はもとより、それ と密接に関連する遺伝子座をも包含するものとされる。

クラスＩＩの抗原産生物は、免疫へと導（活性化の段階を触発するための正常な 免疫応答に不可欠である。免疫系が不適切に活性化され、正常な組織を攻撃して 、自己免疫を生じさせるときでさえ、これらクラスＩＩの分子は、疾病へと導く 免疫活性化に不可欠の役割を演じる。このことから、自己免疫病１例えばリウマ チ様関節炎におけるＭＨＣクラスＩＩ遺伝子の役割は、免疫系にシグナルを発し て特定の標的への攻撃を続行する「青信号」のような、許容性分子シグナルとし て機能することであるという概念が導かれる。リウマチ様関節炎の場合、標的は 、関節の滑液を分泌する内層にあると考えられる。

■細胞は胸腺に由来し、したがってＴ細胞と呼ばれる。それらは身体の血管及び リンパ管内を自由に循環し、そのために、外来侵入者、すなわちウィルス、アレ ルゲン、腫瘍及び自己抗原を探知し、それらと反応することができる。　ｗｒＪ ｌｌｔｓ下でのそれらの一様な形態にもかかわらず、Ｔ細胞は、ヘルパー、サプ レッサー及びキラーなど数種類の別個の機能的サブセットを含む異種成分からな る集団を構成する。

■細胞抗原受容体（ＴＣＲ）と呼ばれる認識系を通じて、■細胞は、侵入する病 原体の存在を探知し、Ｔ細胞因子と呼ばれる、Ｂリンパ球に抗体の産生を開始さ せ、又は抑制するよう１図する多様な別個のＴ細胞リンホカインの放出を命令し 、そして、より多（の食細胞その他の白血球を作り出して、病原体を中和し、か つ腫瘍細胞及びウィルス感染細胞を破壊するよう白血球系を調節する。

このように、■細胞による病原体の探知及び結合は、Ｔ細胞因子の放出の触発、 及びこれらの因子が開始させる宿主防御活動のカスケード反応に関連している。

Ｔ細胞は、生理的状況下では、そのＴ細胞抗原（Ａｇｌ受容体（ＴＣＲ）を介し て活性化されると考えられている。これらの受容体は、ＭＨＣ分子の溝の中に保 持された抗原ペプチドに結合すると考えられる。Ａｇ−Ｍ）Ｉｃ複合体は、Ａｇ が内在化され、ＭＨＣ分子と結合できる形態へと加工された後に抗原提示細胞（ ＡＰＣ１上に形成される。抗原ペプチド及びＭ）ＩＣ分子は、ともにＴ細胞の活 性化を必要とする。

それらは一体となって、受容体の生物学では多少とも独自である三分子による複 合体を形成する。リガンド−受容体又は受容体−受容体相互作用の大半は二分子 性である。　ＴＣＲ−Ａｇ−ＭＨ（：複合体が三分子性であることは、それが関 与する相互作用を特に解明し難くしている。

い（つかの最近の研究は、抗原ペプチドとＭ）ＩＣ分子との相互作用の特性記述 に集中されている。抗原ペプチドのＭＨＣ分子への直接的な結合は、数グループ によって疑問の余地なく立証されている［Ｓ、　Ｂｕｕｓら＝「「加工された１ オボアルブミンとＩａ分子との相互作用Ｊ　、　Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔ、、　Ａｃａｄ、　Ｓｅｔ、　ＵＳＡ　、第８３巻（１９８６年）３，９ ６８ページ；Ｓ、　Ｂｕｕｓら：　「主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）の 制限とＩａが免疫原ペプチドと結合する能力との関係Ｊ　、　５ｃｉｅｎｃｅ　 、第２３５巻（１９８７年１１，３５３〜１．３５８ページ、Ｓ、Ｂｕｕｓら： 　「Ｔ細胞の認識に必要な抗原−Ｉａ複合体の単離及び特性記述Ｊ　、　Ｃｅ１ ｌ、第４７！（１９８６年１１，０７１〜１，０７７ベージ；　Ｂ、Ｐ、　Ｂａ ｂｂｉｔｔら；　「ペプチド−Ｉａ結合のレベルでの抗原競合Ｊ　、　Ｐｒｏｃ 、　Ｎａｔ、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　、第８３巻（１９８６年１４．５ ０９〜４．５１３ベージ；　Ｊ、Ｄ、　Ａｓｈｗｅｌｌら＝「Ｔ細胞による抗原 の認識及び三重複合体としてのＩａ分子」、　Ｎ　ａ　ｔ　ｕ　ｒ　ｅ、第３２ ０巻（１９ｇ６年）１７６〜１７８ページ、Ｔ、Ｇ、Ｇｕｌｌｅｔら：　「免疫 学的自己非自己識別Ｊ　、　５ｃｉｅｎｃｅ　、第２３５巻（１９８７年）８６ ５〜８７０ページ；　Ｐ、Ｍ、　Ａ１１ｅｎら＝ｒ丁細胞及びＴ細胞抗原性エピ トープのＩａ接触残基の同定」、　Ｎａｔｕｒｅ、第３２７巻（１９８７年ン７ １３〜７１５ページ１゜この結合の特徴性には、遅いオン速度、及びエンドソー ム区画に存在するのと同程度の酸性のｐＨによって加速される著しく遅いオフ速 度が含まれる。このことは、抗原提示細胞の表面に存在するＡｇ−Ｍ）ＩＣ複合 体は、寿命が長く、い＜−）かのＴ細胞のＴＣＲへの安定的な複合体の提示を可 能にすることを意味する。

ＴＣＲとの抗原の結合は、い（つかの非常に限定された状況以外には、立証する ことが困難であった。例えば、フルオレセイン＋Ｍｌ（Ｃに特異的なＴ細胞クロ ーンが確立されていて、フルオレセインのみとの親和力の低い結合相Ｉ１作用を 有する［Ｒ，Ｆ、　５ｉｌｉｃｉａｎｏら：　ｒＭＨＣ制限Ｔ細胞クローンのＴ 細胞表面のＴｉＣ−βヘテロニ量体上の名目的抗原結合部位の存在の直接的証拠 Ｊ　、　Ｃｅ１ｌ、第４７巻（１９８６年）１６１〜１７１ベージ〕、このこと は、いくつかの事例でのＴＣＲとＡｇどの直接的相互作用を意味する。また、こ のことは、宙光エネルギーの移動を利用した、Ｔ細胞を介した抗原ペプチドとＭ ＨＣ分子との会合の研究にも含意されていた［Ｔ、Ｈ，’１ｌａｔｔｓら＝「消 散波（ｅｖａｎｅｓｃｅｎｔ　ｗａｖｅ）の場でのエネルギー移動によって検出 された、Ｔ細り包を介したペプチド抗原と主要組織適合性遺伝子複合体蛋白質の 会合Ｊ　、　Ｎａｔｕｒｅ、第３２０巻（１９ｇ６年）１７９〜＋８１−ジ］。

これらの研究によって、フルオレセインで標識した抗原ペプチドからテキサスレ ッドで襟識したクラスＩＩのＭ）ＩＣ分子への、そのＡｇ−ＭＨＣ複合体に特異 的なＴ細胞ハイブリドーマの存在下での共鳴エネルギーの移動に関する証拠が示 された。このことは、Ａｇ−ＭＨＣ−ＴＣＲ間の三重複合体の形成を示唆する。

対照的に、ＴＣＲに対するＭＢＣの直接的結合は確定されていない。Ｔ細胞との ＭＨＣ分子又はＭＨＣ由来の分子の特異的相互作用に向けられた研究はすべて、 機能的な読み取り、例えば細胞溶解又はサイトカイン産生を利用している［　Ｊ 、　５ｃｈｎｅｃｋら：　ｒＨ−２Ｋｂ由来のペプチドによるアロ認識の阻害は 、主要組織適合性遺伝子複合体分子におけるＴ細胞結合領域の証拠であるＪ　、 　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　、第８６巻（１９８９年１８．５１６〜８．５２０ページ； Ｗ。

Ｒ，Ｈｅａｔｈら：　「アロ反応性である細胞毒性Ｔリンパ球によって認識され る抗原決定基のＭＨＣペプチドによる阻害を用いたマツピングＪ　、　Ｊ、　Ｉ ｍｍｕｎｏｌ、　、第１４３巻（１９８９年１１，４４１〜１，４４６ページ； 　Ｊ、　５ｃｈｎｅｃｋら：［可溶性クラスＩ蛋白質及びペプチドによるアロ特 異的Ｔ細胞ハイブリドーマの阻害：ＭＨＣに対するＴ細胞受容体の親和力の推計 Ｊ　、Ｃｅ１ｌ、第５６巻（１９８９年ａ）４７〜５５ベージ］。ある研究では ［Ｊ、　５ｃｈｎｅｃｋら二同上（１９８９年ａ）］、可溶性クラスＩ蛋白質及 びペプチドの機能的作用を研究するために、アロ特異的なりラスエで制限された Ｔ細胞ハイブリドーマが用いられた。このハイブリドーマは、Ｈ−２Ｋ””に対 して、より弱い反応性を有するＨ−２に″特異的であり、これらの刺激に応答し てＩＬ−２を産生じた。　Ｈ−２Ｋ””に応答してのＩＬ−２の産生は、可溶性 Ｈ−２Ｋ”はもとより、ｌ卜２Ｋ”の第１６３〜１７４アミノ酸から誘導された ペプチドによっても減少したが、Ｈ−２にｂ１１０配列から誘導された類似のペ プチドによっては減少しなかった。もう一つの研究［Ｊ、　５ｃｈｎｅｃｋも二 同上（１９８９年ｂ）］では、Ｈ−２に勧由来のこの同じペプチドが、Ｈ−２Ｋ ”’　、　Ｈ−２Ｋ”１１％　Ｈ−２Ｋ””及びＨ−２Ｋ”’°など数系統から 誘導されたアロ特異的な細胞毒性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）よって、Ｈ−２Ｋ”標的 細胞の溶解を阻害することが立証された。また、このペプチドは、Ｈ−２に″と Ｈ−２Ｌ’の双方の特異性に対してアロ反応性である単一のバルクＣＴＬ培養に よって、前者の標的の溶解を阻害したが、後者のそれは阻害しなかった。しかし 、Ｈ−２に０分子の第１１１〜１２２アミノ駿から誘導された類似のペプチドの 研究は、これらの知見に関するもう一つの可能な解釈を登場させた［　Ｌ　Ｒ， Ｈｅａｔｈら：同上（１９８９年）］。このペプチドは、アロ反応性ＣＴＬクロ ーンによってＨ−２Ｋ”　ｍ的の溶解を阻害したが、ＣＴＬクロクロ上に存在す る同系Ｈ−２に’によって提示されたときには、このＣＴＬクローンもＨ−２に ’第１１１−１２２ペプチドを認識した。著者らは、Ｈ−２Ｋ”第１１１〜１２ ２ペプチドは、Ｔ細胞受容体との直接的相互作用ではなくしてペプチドの自己提 示の誘発によって機能したと示唆した。

ＭＨＣ分子の構造的研究は、特にクラスエのＭＨＣ分子に関して実施されている 。ＨＬＡ−Ａ２分子の結晶構造は、抗原結合部位は、一連の逆平行βプリーツシ ートに裏打ちされた２本の平行なαヘリックスを含むことを示した。この結果、 結晶化したＨＬＡ分子内の未同定の構造が占める抗原結合溝の形成が生じた。そ のような結合表面に利用できる潜在的な分子間相互作用を分析すると［ｌ１１． Ｖ、　ＮｉＮ１１ｌｉａら：　「抗原−主要組織適合性遺伝子複合体−Ｔ細胞受 容体相互作用：ｔｌｌｌ造分析Ｊ　、　Ｉ＋ｍｍｕｎｏ１．　Ｒｅｓ、　、第７ 巻（１９８８年）３３９〜３５０ページ］、Ｔ細胞受容体との相互作用を増進さ せる際の結合溝内の抗原の役割は、少なくとも二面においてであり得る。一方の 筋書では、ＴＣＲはＭＨＣ分子単独については親和力が低く、抗原は、主にＴＣ Ｒ直接結合することによって機能して、Ａｇ−ＭＨＣ複合体に対するＴＣＲの親 和力高める。他方の筋書では、ＴＣＲは、何らかの強い誘引性相互作用、及び何 らかの同様に強い反発性相互作用によるＭＨＣ分子に対する低い親和性を有する 。この場合、抗原は、反発性相互作用を低下させることによって、例えば反発性 の残基配向を立体配座上変えることによって機能する。

最近のいくつかの研究は、機能に関するデータに基づいて、ＴＣＲ−Ａｇ−ＭＨ Ｃ相互作用の分子的モデルを発展させた［Ｊ、Ｓ、　Ｄａｎｓｋａら：　「Ｔ細 胞受容体のα及びβ鎖双方の仮定的ＣＤＲ３領域がミオグロビンペプチドに対す るＴ細胞の特異性を決定するＪ　、Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、、第１７２巻（１ ９９０年）２７〜３３ベージ；　Ｍ、Ｍ、　Ｄａｖｉｓら二　「Ｔ細胞受容体と ＭＨＣペプチドとの相互作用に関するモデルＪ　、　Ａｄｖ、　Ｅｘｐ。

Ｍｅｄ、　Ｂｉｏｌ、、第２５４巻（１９８９年）１３〜１６ページ、Ｊ、Ｍ、 Ｃ１ａｖｅｒｉｅら：　「Ｔ細胞受容体に関するＦａｂ様構造の意味するものＪ 　、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｔｏｄａｙ、第１０巻（１９８９年１１０〜１４ペー ジ；　Ｐｌ、　Ｂｊｏｒｋｍａｎら二　「Ｔ細胞受容体とペプチド／ＭＨＣ？Ｉ 合体との相互作用に関するモデルＪ　、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏ ｒ　Ｓｙｍｐ、　Ｑｕａｎｔ、　Ｂｉｏｌ、　、第５４巻（１９８９年）３６５ 〜３７３ページ。これらは、ＴＣＲと免疫グロブリン構造との相同関係に基づい ている。すべては、ＭＨＣ分子のαヘリックスとのＴＣＲの有意味の接触を予測 してしｓる。

発明の要約 本発明によれば、そのような治療が必要であると推測される哨乳類のＭＨＣ関連 疾病を治療するための新規な方法であって、該ＭＨＣの抗原認識部位の少なくと も一部に実質的に一致するアミノ酸配列を有し、未結合Ｔ細胞抗原受容体は抗原 に結合した該Ｍ）ＩＣを認識すること力≦可能であるＴ細胞抗原受容体と結合す ることが可能な有効量のペプチド石しくはペプチド模倣体を該晴乳類に投与する 段階を含む方法が提供される。

本発明によれば、更に、そのような調節が必要であると推測される哨乳類のＭＭ Ｃによって制限されたＴ細胞の応答を調節するための新規な方法であって、該Ｍ ＨＣの抗原認識部位の少なくとも一部に実質的に一致するアミノ酸配列を有し、 未結合Ｔ細胞抗原受容体は抗原に結合した該ＭＭＣを認識することが可能である Ｔ細胞抗原受容体と結合することが可能な有効量のペプチド若しくＧよペプチド 模倣体に該Ｔ細胞を接触させる段階を含む方法が提供される。Ｔ細胞受容体に結 合するＭＨＣ抗原認識部位をこ由来するペプチド及びペプチド模倣体は、以下に 、より厳密に詳述するとおり、生物活性を有する免疫調節物質として有用である と考えられる。

図面の簡単な説明 図１：ペプチドとの抗体の結合、抗体は、硫酸アンモニウム沈澱法によって腹水 又は培養上清から調製し、透析し、０．１％のアジ化ナトリウムを含有するＰＢ Ｓに１％ＢＳＡを溶解したＦＡＣ５緩衝液中で希釈した。固相放射線免疫検定法 （ＲＩＡ）を用いて、記載のとおり結合を研究した、Ａには、増加する量のＩＡ ’ａａ−ａｓペプチドとの異なる抗体の結合を示す。Ｂには、増加する量のペプ チドとのｌＯ，２，１６の一回希釈物　（１：　１０）の結合を示す。Ｃには、 増加する皿の１．０．２．１６による８μｇ／穴との結合を示す図２　：　ＩＡ ”分子との１０．２．１６の結合を阻害できるペプチドの能力。ＦＡＣ３分析の 際にＲＴ４．１５．ＨＰ細胞上に発現されたＩＡ″分子と結合させるために使用 する前に、抗体をｌ　ｍｇ／　ｍｌの　（Ａ）、又は変化する量の　（Ｂ）ペプ チドとともに予備温室した。Ａには、１０．２．１６と１５−　＋−５Ｐの対比 で染色した細胞についてのΔ平均チャンネル数を示す。Ｂには、増加する量のＩ Ａ″０−、、ペプチドの存在下での１０、２．１６の結合について、Δ平均チャ ンネル数の減少する百分比を示す。

図３　：　ＩＡ”、、、、ペプチドによるＤｌｏ、Ｇ４の増殖の阻害。

Ａには、特異的抗原　（コンアルブミン）及び抗ＴＣＲε抗体（２Ｃ１１）につ いて、増加する量のＩＡ’ペプチドに対する取り込まれた毎分カウント数（ＣＰ Ｍ）を示す、Ｂには、増加する量のＩＡ’ｍ５−ｓｓペプチドの存在下で取り込 まれたＣＰ賛について、増殖阻害の百分比を示す。

図４　：　ＩＡ’５ｓ−ｘペプチドによるＤＩ（１，０４の増殖の阻害の抗原提 示細胞（ＡＰＣ）投与量に対する依存性。変化する量のＩＡ’ペプチドの存在下 で、材料及び方法の項で説明したとおりのコンアルブミン及び二様の量のＡＰＣ でＤｌｏ、Ｇ４を刺激した。増加する投与量のペプチドについて、取り込まれた 最高ΔＣＰＭの百分比を示す。５　Ｘ　１０”のＡＰＣを用いて取り込まれた最 高ΔＣＰＭは約１５，０００であり、５×１０４のＡＰＣを用いてのそれは約５ ，０００であった。

図５・ＩＡ’５ｓ−ｓｓペプチドによる抗クロノタイプの結合阻害。材料及び方 法の項で述べたとおりに抗体で染色する前に、ＤＩＯ，Ｇ４をＩＡ’ｎ＠−ｓｓ ペプチド　（ｍｇ／ａ＋１）とともに予備！置した。Δ平均チャンネル数は、抗 体の不在下での平均チャンネル数を抗体の存在下でのそれから減算することによ って算出し、減少の百分比を計算した。二つの実験については、平均値上標準誤 差を示す。

図６：ベブチドーウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）結合体による抗クロノタイプの 結合阻害。実験記録は上記のとおりであるが、カップリングされていないＩＡ’ ａａ−ｍｓペプチドに代えてペプチド−ＢＳＡ結合体を用いた。結合体は、１　 ｖａｇ／　ｍｌの最終濃度で用いた。

図７　：　Ｄｌｏ、Ｇ４細胞とのＩＡ’５ａ−ｓｘペプチド−ＢＳＡ結合体の結 合。ペプチド＝ＢＳＡ結合体は、材料及び方法の項で述べたとおり、フルオレセ インを付加した。細胞を、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）−ペ プチド−ＢＳＡの１：ｌＯ希釈物とともにＦＡＣ３緩衝液中で室温で４５分間温 買置、２回洗浄し、そして分析した。　Ｄｌｏ、Ｇ４又は２２、Ｊ１１細胞をＦ ＩＴＣ−ＩＳｌ　ペプチド−ＢＳＡ　（左）又はＦＩＴＣ−ＩＡ”５ａ−８３ペ プチド−ＢＳＡ　（右）のいずれがとともに温置した。

結合体と温置した異なる細胞系について、平均チャンネル数を示す。

図８＝細胞へのＦＩＴＣ−ペプチド−ＢＳＡの結合阻害。

（Ａ）：細胞を１ｍｇ／ｍｌのフルオレセイン未付加ペプチドーＢＳＡ結合体１ ００ｕ、ｌとともに室温で４５分間予備温温置た。次いで、ＦＩＴＣニー　ＩＡ ”、、、、ペプチド−ＢＳＡ結合体を室温で更に４５分間加え、細胞を２回洗浄 し、そして分析した。　（Ｂ）：細胞を超最適濃度の各抗体１（１０μｍ（未希 釈の硫酸アンモニウム画分）とともに室温で４５分間予備温温置た。次イテ、Ｆ ＩＴＣ−ＩＡ’ａａ−ｍｉヘブチＦ　−ＢＳＡ結合体を室温で更に４５分間加え 、細胞を２回洗浄し、そして分析した。　（Ａ）については、結合体とともに温 置した異なる細胞系についての平均チャンネル数を示す。Ｆ汀Ｃ−ＩＡゝＳ、− □ペプチドーＢＳＡのみとともに温置した細胞と比較した平均チャンネル数の減 少の百分比を各条件について示す。

発明の詳細な説明 本発明によって、そのような調節又は治療が必要であると推測される哺乳類にお いて、ＭＨＣによって制限された哺乳類のＴ細胞の応答を調節する方法、及びＭ ＨＣ関連疾病を治療する方法が提供される。この方法は、それぞれ、該Ｍｌ（Ｃ の抗原認識部位の少なくとも一部に実質的に一致するアミノ酸配列を有する有効 量のペプチド若しくはペプチド模倣体を該哺乳類に投与する段階、又はＴ細胞と 接触させる段階を含み、該ペプチドもしくはペプチド模倣体は、未結合のＴ細胞 抗原受容体が抗原に結合した該ＭＨＣを認識することが可能であるＴ細胞抗原受 容体と結合することが可能である。

ここで用いられる限りでのｒＭＨＣ関連疾病」の定義は、特定のＭＨＣｖＬ原を 発現している個体が疾病を発症する相対的な危険率が、集団全体の危険率の少な くとも２倍であるような哺乳類の疾病を指す、ここで、相対危険率は、下式から 算出される： 相対危険率＝　（抗原に陽性の患者の％）（抗原に陰性の対間の％）／（抗原に 陰性の患者の％）（抗原に陽性の対照の％） 現在公知であるか、又は推測されているＭＨＣ関連疾病の例を表１に示す。

ＤＲ２０，２ 疾病　抗原　相対危険率 組織中で問題の咄乳類ＭＨＣを決定する榎準的方法が利用可能である。より最近 では、哺乳類でのＭＨＣを分子的に組織的に類型区分する方法が実際に示されて いる［Ｘ。

Ｇａｏら：　［対立遺伝子特異的又は群特異的な増幅を用いたクラスＩＩＨＬＡ 抗原についてのＤＮＡの類型区分、そのｌ：　ＨＬＡ−ＤＲ４のサブセットの類 型区分Ｊ　、　Ｊ、　ＨｕＩＩｌａｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　、第２７巻（１９９ ０年）４０〜５０ページ］。

ここに用いられる限りで、「ペプチド模倣体」という語句は、ここに記載された ペプチドを機能的に模倣するすべての化合物を指す。すなわち、ペプチド模倣体 は、抗原に結合されたＭＨＣを認識するＴ細胞抗原受容体と結合できなければな らない。すなわち、このＴ細胞抗原受容体は、ＭＨＣ−Ａｇと結合することがで きる。このＴ細胞抗原受容体は、ＭＢＣ−抗原フラグメント複合体を特異的に結 合させる類型のものである。

ここに用いられる限りで、　ＭＨＣの「抗原認識部位」とは、Ｔ細胞受容体への 正常な抗原提示を担当するＭ）ＩＣの部分を指す。一般に、抗原結合部位は、Ｊ 、Ｈ，Ｂｒｏｗｎら＝「クラスＩＩ組織適合性分子の外来抗原結合部位の仮説的 モデルＪ　、　Ｎａｔｕｒｅ、第３３２巻（１９８８年４月２８日）８４５〜８ ５０ページに記載されたとおり、βプリーツシートによって底部が裏打ちされた ２本のαヘリックスから形成される「溝」に近似すると考えられている。

本発明に有用なペプチドは、少なくとも抗原認識部位の一部に実質的に一致する アミノ酸配列を有する。このペプチド又はペプチド模倣体は、その未結合状態で 抗原−Ｍ）ＩＣ複合体と結合　（認識）できる、Ｔ細胞抗原受容体と結合できる ことを必要とするのみである。このペプチドのアミノ酸配列は、好ましくは、抗 原認識部位のαヘリックスの少なくとも一部に実質的に一致するであろう。以下 、本発明に用いるのに適したペプチド及びペプチド模倣体を選び出す方法の例を 考察する。

表１に示したＭＨＣ関連疾病に関するＭｌ（Ｃ抗原のほとんどは、特性記述がな されている、すなわち、該ＭＨＣのアミノ酸配列が決定されている。公知の配列 は、各種の商業的データベース、例えばＧｅｎＢａｎｋから発表され、かつ／又 は入手できる。

ＭＨＣ抗原が未知である場合には、該ＭＨＣ抗原の配列を決定するための操作が 当技術に公知である０問題のＭＨＣクローニング及び配列決定を教示する参考文 献の例には、　Ｐｏｈｅａら：　ｒＨＬＡ−８及びＩＩ　Ｌ　Ａ　−Ｃの配列に おける対立遺伝子上の変化形、及びＨＬＡ−Ｂ対立遺伝子の進化Ｊ　、　Ｉｍｍ ｕｎ。

ｇｅｎｅｔｉｃｓ、第２９巻（１９８９年１２９７〜３０７ベージ；　Ｍ、Ｓ、 　Ｋｒａｎｇｅｌ　：　ｒＲＮＡスプライシングの別経路を経由するＨＬＡ−Ａ 及び−Ｂ抗原の分泌Ｊ　、　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、、第１６３巻（１９８６ 年）１、１７３〜１．１９０ページＨＷｅｉｓｓら：　ｒＨＬＡ−８２７遺伝子 の構成、配列及び発現：　ＨＬＡ及び疾病の付随を分析するための分子的アプロ ーチＪ　、　Ｉｍ＋ｎｕｎｏ１ｏｇｙ、第１７０巻（１９８５年）３６７〜３８ ０ページＨＡｕ５ｕｂｅｌら＝　「分子生物学における最新の実験計画Ｊ（Ｆ、 Ｍ、　Ａｕ５ｂｅｌ　、　Ｒ，Ｂｒｅｎｔ、　Ｒ，Ｅ、　Ｋｉｎｇｓｔ。

ｎ　、　Ｄ、Ｄ、　Ｍｏｏｒｅ、　Ｊ、Ｇ、　Ｓｅｉｄｍａｎ、　Ｊ、＾、　Ｓ ｍ１ｔｈ、　Ｋ、　５ｔｒｕｈ１編）　、　Ｇｒｅｅｎ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ 　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ及びＷｉｌｌｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、　Ｊｏｈ ｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ　、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、米国ニューヨーク化（ １９ｇ９年）　；　Ｓａｍｂｒｏｏｋら＝　「分子クローニングー−実験室マニ ュアルＪ（，１，Ｓａｍｂｒｏｏｋ　、　Ｅ、Ｆ、　Ｆｒ１ｔｓｃｈ、Ｔ、　Ｍ ａｎｉａｔｉｓ編）　、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　１（ａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏ ｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ　、　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ、米国 ニューヨーク化（１９８９）；及びＶａｎＺｅｅｌａｎｄら＝　「全細胞性ＲＮ Ａから調製したＨＰＲＴｃＤＮＡの生体外増幅後の唾乳類細胞のＨＰＲＴ遺伝子 座での点突然変異の配列決定Ｊ　、　Ｃｕｒｒｅｎｔ　ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉ ｏｎｓ　ｉｎｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂｉｏｌｏｇｙ　、　Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ 　Ｃｈａｉｎ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ　（Ｈ，Ａ、　Ｅｈｒｌｉｃｈ　、　Ｒ，Ｇｉ ｂｂｓ、　Ｈ，Ｈ，Ｋａｚａｚｉａｎ、　Ｊｒ、編）　、（：ｏｌｄＳｐｒｉｎ ｇｈ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ、　（：ｏｌｄ　Ｓｐ ｒｉｎｇ　ＨａｒｂＯｒ、米国ニューヨーク化（１９８９年）１１９〜１２４ペ ージが含まれる。

略述すると、ＭＭＣ抗原配列を得るには、ＭＨＣの部分的アミノ酸配列を暗号化 しているか、又は部分的アミノ酸配列を暗号化しているそのようなりＮＡ分子に 対する相補的ＤＮＡ鎖を表すＤＮＡを合成する。次いで、この合成りＮＡ子を用 いて、晴乳類の細胞又は組織から単離された、哺乳類のゲノム性ＤＮＡに、ある いはｍＲＮ＾のｃＤＮＡコピーに由来するＤＮＡ配列におけるＤＮＡ配列の相同 性を検査してもよい。一般に、相同のＤＮＡの一義的同定には、配列中の少なく とも５個のアミノ酸の一義的決定に必要な、１５個又はそれ以上のヌクレオチド が必要である。決定されたアミノ酸配列を暗号化できる異なるＤＮＡ分子の数は 、非常に大きく変動し得るが、それは、それぞれのアミノ酸は、６個までの一義 的なトリヌクレオチドＤＮＡ配列又はコドンによって暗号化され得るからである 。したがって、可能なすべての合成りＮＡプローブを個々に試験することは非実 用的であり、いくつかのそのようなりＮＡ分子のプールをプローブとして付随的 に用いることが可能である。「縮退」プローブと呼ばれるそのようなプールの作 成は、当技術に広く公知である。プローブ混合物中のただ１個のＤＮＡ分子が、 問題の遺伝子との厳密な配列の相同性を何するであろうが、プール中の合成りＮ Ａ分子のいくつかは、高度の相同性のみが必要とされることから、遺伝子を一義 的に同定することが可能であり得る。したがって、可能なすべてのＤＮＡプロー ブの配列を含むわけではない合成りＮＡプローブのプールを用いて、問題の遺伝 子を成功裡に単離することが達成され得る。事実、それぞれのアミノ酸について 、その生物に最も高頻度に用いられるＤＮＡコドンのみを含ませることによって 、ただ１個の配列のＤＮＡプローブを作成し得るが、このアプローチは常に好結 果をもたらすわけではないことが理解されるであろう。

遺伝子配列を同定する一つの手法では、ポリメラーゼ連鎖反応法（ＰＣＲ）が用 いられる。例えば、米国特許第４゜６８３、１９５号及び第４．６８３．２０２ 号明細書（これらは、引用により、ここで充分に説明されたもののように本発明 に組み込まれる）を参照のこと。基本的には、ＰＣＲは、配列の２カ所の末端部 分が公知であるときに、選ばれたＤＮＡ配列の作成を可能にする。問題の配列の それぞれの末端と一致するプライマー、すなわちオリゴヌクレオチドプローブを 得る。次いで、ＰＣＲを用いて、このＤＮＡ配列の中央部を合成によって形成す る。

ＰＣＲを用いて、哺乳類のＭＨＣ遺伝子を暗号化している遺伝子を得るそのよう な一方法では、その哺乳類からＲＮＡを単離かつ精製する。次いで、ＲＮＡをｃ ＤＮＡへと逆転写するには、デオキシチミジル酸を末端とするオリゴヌクレオチ ドをプライマーとして用いる。次いで、上記の縮退プローブにおけるような、以 前に決定されたＭ）ＩＣ蛋白質のアミノ末端アミノ酸配列を暗号化することがで きる合成りＮＡ又は合成りＮＡ混合物を生成する。このＤＮＡ混合物をデオキシ チミジル酸を末端とするオリゴヌクレオチドとともに用いて、ＰＣＲ反応を開始 させる。　ＰＣＲ反応を開始させるために用いられる合成りＮＡ　ｆｉ合物は、 所望のｍＲＮＡに特異的であるから、所望のｃＤＮＡのみが効果的に増幅される ことになる。得られる生成物は、いかなる数の公知のクローン化ベクターとも結 合させることができる。それにもかかわらず、類似のアミノ酸配列を有するＭＨ Ｃペプチドの「ファミリー」が哺乳類には存在し得ること、及び、そのような場 合には、混合されたオリゴヌクレオチドのプライマー配列を用いることは、これ らの関連するペプチドを暗号化している関連する一種またはそれ以上のｃＤＮＡ の増幅を招き得ることが理解されるであろう。

最後に、慣用の手法を用いて、形成されたｃＤＮＡを適切なベクター内にクロー ン化し、分析し、そしてヌクレオチド塩基配列を決定する。これらのＰＣＲ生成 物のアミノ酸への直接的な翻訳によって、それらがＭＨＣ蛋白質に対する完全な 暗号化配列に一致することが明らかにされるであろう。

配列決定されたＭＨＣの抗原結合部位の位置を特定するには、当業者には少なく とも二つの方法が公知である。

Ｊ、Ｈ，Ｂｒｏｗｎら＝　ｒクラスＩＩ組織適合性分子の外来抗原結合部位の仮 説的モデルＪ　、　Ｎａｔｕｒｅ、第３３２巻（１９８８年４月２８日）８４５ 〜８５０ページに記載されたような「配列の整合」を利用することができ、又は 、ｐ、Ｊ、　３ｊｏｒｋｍａｎら：「ヒトのクラスＩ組織適合性抗原であるＨＬ Ａ−Ａ２の構造」Ｎａｔｕｒｅ、第３２９巻（１９８７年ｌθ月８日１５０６〜 ５１１ページ、及びＰ、Ｊ、　Ｂｊｏｒｋｍａｎら＝　「クラスＩ組織適合性抗 原の外来抗原結合部位及びＴ細胞認識領域Ｊ　、　Ｎａｔｕｒｅ、第３２９（１ ９８７年１０月８日）５１２〜５１８ページに記載されたようなＨＬＡ分子の三 次元構造を結晶学的に決定することによる。そのような方法を用いて構造を調べ ることによって、抗原認識分子　（又は結合Ｊ）の構造的特徴、及びそれに対応 するアミノ酸配列がそれによって同定される。

好都合には、配列整合法が好適である。ＭＨＣ抗原の配列を知ったならば、次い で、Ｂｒｏｗｎらに教示されたとおり、ＨＬＡ−Ａ２　（又は他の結晶学的に公 知のＨＬＡ抗原）との相同性が最高となるようにＭＨＣ配列を整合させることが できる。抗原認識部位に対応する配列は、Ｂｒｏｗｎら二同上（１９８８年）に 記載されたαヘリックスを含むそれである。これらは、溝に沿って存在するヘリ ックスであり、１（ＬＡ−Ａ２対立遺伝子の第６０〜８６番及び第１４０〜１７ ４番目のアミノ酸残基、及びＢｒｏｗｎら二同上（１９８８年）に記載された配 列と整合する他のＨＬＡ型からの配列を含む。

問題のＭＨＣの抗原認識部位が同定されたならば、該部位のアミノ酸配列の少な くとも一部を、それが本発明の方法に用いるのに適するように選ぶことができる 。該αヘリックスに実質的に対応するペプチドは、特に有用であると予測される 。例えば、試験　（例えばＨＬＡ−Ａ２の第６０〜８６番目の残基）のために認 識部位の−へワックスの配列全体を用いることができる。試験　（例えばＨＬＡ −Ａ２の第６０〜８６番目、第６５〜７５番目、第６０〜８６番目等々）のため に、より短い重なり合うペプチドを合成することができる。例えばＨＬＡのＤＲ ４のβ鎖中のある領域（Ｂｒｏｗｎら二同上＋１９８８年）１を試験するために 、特に興味ある領域を合成することができるが、それはリウマチ様関節炎に関係 があるが、ＱＫ残基は、リウマチ様関節炎に関係のない対立遺伝子には常に不在 である。こうして、ＭＨＣ関連疾病に何らかの関連があると推定されるＭＨＣ抗 原結合部位の領域中のアミノ酸配列を選び、そして、この領域に的を絞ってい（ つかのペプチド類似体を選ぶことができる。

特定の作用機構と結び付けられてはいないものの、ここに記載されたペプチド又 はペプチド模倣体は、ＴＣＲに結合し、　ＴＣＲ−Ａｇ−ＭＨＣ第三級複合体の 形成に触発された宿主防御作用のカスケード反応を阻害するものと考えられる本 発明の方法に有用なペプチドは、当業者には公知の方法によって、合成により、 又は組み換えによって調製することができる。

本発明での使用に適したペプチド又はペプチド模倣体は、当業者には公知のいか なる方法によっても、抗原に結合したＭＨＣを認識するＴ細胞受容体とのそれら の結合能力についてふるい分けすることができる。そのような結合に対する榎準 的免疫検定法には、流動微小蛍光測定法による適当な細胞系との結合；ペプチド の存在下での■細胞の増殖を測定するためのトリチウム化チミジン取り込み検定 法又は類似の検定法；免疫検定法又は生物学的応答検定法（例えば、サイトカイ ンに対するサイトカイン依存性細胞系の増殖）によって測定されるような、ペプ チドの存在下でのサイトカイン　（例えばインターロイキン）の放出；細胞毒性 Ｔ細胞の活性を測定するためのクロム５１の放出又は類似の検定法；橿準的リガ ンド結合検定法又は競合によるＴ細胞受容体との直接的結合；Ｔ細胞活性化及び ／又は増殖の阻害若しくは刺激、　ＩＩＩＨＣハブロタイブ特異的抗体との結合 が含まれる。他のふるい分は方法、例えば、自己免疫疾患の実験的モデルの進行 に対して生体内又は生体外で影響を及ぼすことも、有用であると考λられる。

本発明に用いるのに適したペプチドは、長さがアミノ酸２個程度に短いこと、又 は、長さがアミノ酸約６０個であると一般に予測されるαヘリックスであること が可能である。

抗ＭＨＣ関連病薬剤として用いるには、このペプチド又はペプチド模倣体を通常 の無害の担体中に有効量のペプチドを含有する製剤組成物へと配合することがで きる。

例えばＡ、　Ｇｅｎｎａｒｏ　：レミントン薬科学、第１７版（１９８５年）　 、　Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ、　、　Ｅａｓｔ、ｏｎ、米国ペン シルバニア州を参照のこと。この組成物は、該組成物の形態に適合した経路を経 由して投与することができる。そのような組成物は、例えば、溶液、懸濁液、乳 濁液その他などの、通常の液体製剤の形態であって、一般的には、経口的に、静 脈内に、皮下に、筋向に、又は局所的に与えられる。該組成物は、適当な液相担 体の添加によって使用　、のための液体に復元され得る乾燥製剤として供するこ ともできる。

投与される該組成物の量は、患者の年齢及び性別、ＭＨＣ関連病の類型及び重篤 度等々とともに変化するであろう。有効量のペプチド又はペプチド模倣体は、動 物において、ＭＨＣ関連病を治療できる量、又はＭＨＣに対するＴ細胞の応答を 調節できる量である。該組成物は、蛋白質として計算して、１日あたり体重１ｋ ｇあたり約０．０１〜約５、　［１００ｍｇの置で、好ましくは分包量として投 与されることになる。

実施例 材料及び方法 ペプチド・ペプチドはすべて、前述のとおり、固相法を用いて合成した［Ｗ、　 ＷｉｌＨａｍｓら；　「しオウイルスタイブ３の細胞付着部位及びその抗イディ オタイプ／抗受容体抗体の配列：それらの三次元構造のモデル形成Ｊ　、　Ｐｒ ｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　、第８５巻Ｆ１９８８年ａ 　）６．４８８〜６゜４９２ベージ；　ＬＶ、　Ｗｉｌｌｉａｍｓも：　「分子 的に定義された内部イメージイディオタイプ抗原決定基に対する免疫応答Ｊ　、 　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　、第１４２巻（１９８９年）　４．３９２〜４．４ ００−ジ］。ペプチドは、セファデックスＧ２５カラムの通過によって、又はア セトニトリル５０％及び水５０％中でＴＳＫ３０００カラム（Ｗａｔｅｒｓ）に よるアイソクラチックな実施でのＨＰＬＣによって、精製した。使用に先立ち、 ペプチドを凍結乾燥させた。細胞培養のために、使用に先立ち、１０，０００ラ ドでの照射　（コバルト線源）によって、ペプチドを滅菌した。用いたペプチド 表１に示す。

ＢＳＡとのカップリングのためには、６ａ＋ｇ／ａ＋ｌのＢＳＡとともに０．１ ％グルタルアルデヒドに６Ｂ／ｍｌで０．１モルとして溶解したＮａＨＣＯ，に ペプチドを悲濁させ、空気に接触させて、２３℃で一晩撹拌した。ペプチド−Ｂ ＳＡ結合体は、３回交換した蒸留水に対して透析し、使用に先立って凍結乾燥さ せた。

ペプチド−ＢＳＡ結合体は、下記のとおりにしてフルオレセインを付加した。フ ルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴ（：ｌ（Ｓｉｇｍａ、　Ｓｔ、　Ｌｏ ｕｔｓ　、米国ミズーリ（＋（）を０．１ルのＮａ２ＣＯｚに１ｍｇ／ｍｌで溶 解した。この溶液に、凍結乾燥したペプチド−ＢＳＡ結合体を４ｍｇ／ｌｌ１ｌ の最終濃度で加えた。溶液を４℃で一晩攪拌し、使用に先立ち、リン酸緩衝禽塩 水（ＰＢＳ）に対して透析した。

マウス＝６〜８週齢の雌のＡＫＲマウスを米国国立癌研究所から入手し、米国国 立衛生研究所及びペンシルバニア大学の指針に従って飼育した。

細胞培養及び培地：　Ｄｌｏ、Ｇ４細胞をアメリカ模式菌培養コレクション（Ａ ＴＣＣ）から入手し、ペニシリン／ストレプトマイシン、Ｌ−グルタミン、非必 須アミノ酸、ピルビン−酸ナトリウム、５　Ｘ　１０−”モルのβ−メルカプト エタノール　（以上はすべてＧＩＢＣＯより）及び１０％のウシ胎児血清（Ｆ　 ＣＳ　ｌ　（Ｈｙｃ　１　ｏ　ｎ　ｅより）を加えたＲＰＭＩ中で増殖させた。

コンアルブミンはＳｉｇｍａ社　（米国ミズーリ州Ｓｔ、　ＬｏｕｉｓＪより購 入した。細胞を５　Ｘ　１０’個／＋ｏｌの抗原提示細胞（ＡＰＣ）（２，５（ １０ラドで照射したＡＫＲの牌臓細胞）及び２００μｇ／ｍｌのコンアルブミン とともに５　Ｘ　１０’個、／ｆｆ１ｌで継代した。これに代えて、１０％のラ ット牌臓細胞のコンアルブミンＡ上清中で一週間ごとに継代した。これは、それ ぞれ増殖及びＦＡＣ３によって判定した限りで、クローンの抗原応答性又は抗原 受容体の発現を変化させなかった。２２．０１１細胞　（ハトのシトクロームＣ ＋　Ｉ−Ｅ”特異的なマウスのヘルパーＴ細胞ハイブリドーマ）をＹｖｏｎｎｅ 　Ｐａｔｅｒｓｏｎから入手し、Ｆ、Ｒ，Ｃａｒｂｏｎｅら＝　「ハトのシトク ロームＣ決定因子９５〜１０４内での新たなＴヘルパー細胞の特異性Ｊ　、　Ｅ ｕｒ、　Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、第１７巻（１９８７年）８９７〜８９９ペー ジに記載のとおり、ｌＯ％ＦＣ３を含有するダルベツコの改良イーグル培地（Ｄ ＭＥＭＪ中で増殖させた。

ＩＡ”分子を発現しているマウスＬ細胞（ＲＴ４．１５．ＨＰ）　［Ｊ。

ＭｃＣｌｕｓｋｅｙら：　ｒＡｐｃαのアミノ末端ドメインの細胞表面発現。ア ロ抗体ではなくアロ特異的Ｔ細胞による単離ＭＨＣ抗原性構造の認識Ｊ　、　Ｊ 、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　、第１４０巻（１９８８年）２，０８１〜２，０８９ベ ージ］は、Ｒｏｎ　Ｇｅｒｍａｉｎ（米国国立衛生研究所）により好意的にも提 供され、推奨された濃度で加えられたＧ４１８を含む１０％ＦＣＳ含有ＤＭＥＭ 中で増殖させた。使用に先立ち、Ｖｅｒｓｅｎｅ（ＧＩＢＣＯ、すなわちＧｒａ ｎｄＩｓｌａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｏ、より）とともに部属すること によって、細胞を再懸濁させ、回転させ、洗浄した。

抗体：下記のモノクローナル抗体を用いた：　１５−１−５Ｐ抗）１−２に’Ｄ ’　（マウスＩｇＧ２ｂ）及び１０．２．１６抗ＩＡ’　（マウスＩｇＧ２ｂ） （ともにアメリカ模式菌培養コレクション（ＡＴ（１：Ｃ１、Ｒｏｃｋｖｉｌｌ ｅ　、米国メリーランド州より）、３Ｄ３抗ＤｌＯ，Ｇ４クロノタイプ　（マウ スＩｇＧ１）［Ｊ、　Ｋａｙｅら＝　「クローン化されたヘルパーＴ細胞系に対 する個人特有の決定因子について特異的なモノクローナル抗体及び抗血清は、Ｔ 細胞の活性化の際に抗原及び抗原提示細胞と置換することができるＪ　、　、Ｊ 、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、、第１５８巻（１９８３年）８３６〜８５６ベージ；　 Ｊ、Ｍ、　Ｒｏｊｏら：　「抗Ｔ細胞受容体のＶ領域のモノクローナル抗体の生 物学的活性は、認識された抗原決定基によって決定されるＪ　、Ｊ、　Ｉｍｍｕ ｎｏｌ、　、第１４０　（１９ｇ９年１１，０８１〜１，０８８ページ］、及び Ｃｌ９３．５（Ｃ，Ｊａｎｅｗａｙ、私信）（ともにＣｈａｒｌｅｓ　Ｊａｎｅ ｗａｙ博士、イエール大学、Ｎｅｗ　Ｈａｖｅｎ　、米国コネチカット州により 好意的にも提供された）　；　５００Ａ２［Ｗ、Ｌ、　Ｈａｖｒａｎら＝　［マ ウスのＣＤ４　ＣＤ８　＋胸腺細胞におけるＣＤ３抗原受容体の発現及び機能Ｊ 　、Ｎａｔｕｒｅ、第３３０巻（１９８８年）１７０〜１７３ページ］、及び１ ４５−２Ｃ１１［Ｐ、　Ｌｅａら＝「ＦＣ受容体に媒介されたＣＴｌ−溶解によ る、Ｔ細胞受容体複合体について特異的なモノクローナル抗体の同定Ｊ　、　Ｊ 、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　、第１３７巻（１９ｇ６１３，８７４〜３，８８０ベー ジ］（それぞれ、Ｊ、　Ａ１１ｊｓｏｎ及びＪｅｆｆｒｅｙ　Ｂｌｕｅｓｔｏｎ ｅから入手したハムスターの抗マウスＴＣＲ鎖）。

ハイブリドーマは培地中で増殖させ、使用に先立ち、上清のフィルターを滅菌し た。フィルターの滅菌及び使用に先立ち、多少の抗体を更に硫酸アンモニウムに よる沈澱及びリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳＩに対する透析に付した（Ｗ、　Ｗｉｌ ｌｉａｍｓら：同上（１９８８年ａ　）］。

放射線免疫検定法：これは前述のとおり［１，Ｗｉｌｌｉａｍｓら：同上（１９ ｇ８年ａ）］であった。略述すると、ペプチドを濃度を変えて蒸留水に懸濁させ 、９６穴■底プレート（Ｄｙｎａｔｅｃｈ　ＣａｂｓＪ上で５０μｍ　／穴を蒸 発させた。この穴をＰＢＳ中で洗浄し、ＦＡ（：Ｓ緩衝液（０，１％アジ化ナト リウム含有ＰＢＳに１％ＢＳＡを溶解）で遮断し、そして抗体をＦＡＣ３中で希 釈度を変えてその５０μｌ／穴を加えた。抗体を４℃で一晩装置し、ＰＢＳで穴 を洗浄し、　１２５ニーヤギ抗マウスを１穴あたり毎分５０．０００〜１００． ０００カウント（ＣＰＭ）として加え、そして３７℃で少なくとも１時間、又は ４℃で一晩？？Ａ　Ｉした。この穴を水道水で１０回洗浄し、切り出し、そして 計測し７た。

増殖の検定：　Ｄｌｏ、Ｇ４細胞（１０４個／穴）を２，５００ラドを照射した ＡＫＲ牌臓細胞（線量については図を参照）とともに、各種の刺激を与えて７２ 時間培養した。次いで、穴をトリチウム化チミジン　（１ｕＣｉ／穴）で更に１ ８時間パルス照射し、ガラス繊維フィルター上に細胞を回収し、そして標準的な 液体シンチレーション装置系で計測した。

ＦＡＣ５分析：これは前述のとおり［Ｗ、　ＷＨｌｉａｍｓら二同上（１９８８ 年ａｌｌであった。略述すると、細胞を１０？個／ｍｌとしてＦＡＣ３緩衝液に 再懸濁し、Ｄｌｏ、Ｇ４細胞については、ペプチド、結合体又は抗体とともに２ ３℃で３０〜６０分間予備温置した装置細胞を発現するＩＡ’については、細胞 を添加する前に、抗体をペプチドとともに２３℃で３０〜６０分間予備温置した 装置体又はＦＩＴ（ニーペプチド−ＢＳＡ結合体及び細胞を併せ、４℃で２０分 間温買置た。二次抗体を加える前に、細胞をＦＡＣ３緩衝液５００μｍに再懸濁 し、回転沈降させ、そして洗浄した　（表示されている場合）。ＦＩＴＣヤギ抗 マウス１　ｇ　（Ｆｉｓｈｅｒ）を４℃で２０分間加え、細胞を２回洗浄し、そ してＷ、　Ｗｉｌｌｉａｍｓ　：同上（１９８８年）記載のとおり分析した。下 記のとおり抗体を用いた：　１５−１−５Ｐ　、　ｌｏ、２．１６　、３０３　 、５００Ａ２及び１４５−２Ｃ１１を培養上清の硫酸ナトリウム画分として調製 し、１：５０の希釈度で用いた。（：１９３．５は、未希釈の培養上清として用 いた。

結果 実施例Ｉ ＩＡ’ペプチドと抗ＩＡ’抗体との相互作用本研究で用いたペプチドを表工に示 す。ＩＡ’ａｅ−ａｍペプチドは、ＩＡ″分子のＡｇ結合溝沿いに存在するαヘ ワックスであると予測される領域と一致する。この部位は、ＩＡ５分子に向けら れたハブロタイブ特異的抗体による認識に関与する可能性のある多形残基を含む ［Ｊ、Ｈ，Ｂｒｏｗｎら二　「クラスＩＩ組織適合性分子の外来抗原結合部位の 仮説的モデルＪ　、　Ｎａｔｕｒｅ、第３３２巻（１９Ｈ年）８４５〜８５０ペ ージ］。この制御ペプチド（ＩＳＩと呼ばれる）　、　ＩＡ’ペプチドと同じ正 味電荷及び疎水性を有するよう設計された。

各配列にアミン末端システィン残基を付加してペプチドの二量体化を可能にし、 それによって、各種の受容体構造に対するそれらの結合活性を増大させた。

表■ 合成ペプチド 呼称　配列 ＩｓＩ　ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：　１　（Ｃｙｓ）　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｔ ｙｒＰｒｏ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　ＴｈｒＡｌａ　Ａｓｎ　Ａｓｎ 　Ａｒｇ ＩＡｌ′ａｓ−ａｘ　ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ　：　２　（Ｃｙｓ）　Ｌｅｕ　Ｇｌ ｕ　Ａｒｇ　ＴｈｒＡｒｇ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　ＴｈｒＶａｌ　 Ｃｙｓ　Ａｒｇ　１（ｉｓ　Ａｓｎ　Ｔｙｒこのペプチドが生来の分子中に存在 する類似の立体配座へと折り畳まれる能力を確認するために、抗ＩＡ”抗体であ る１Ｏ０２，１６がこのペプチドと結合する能力を固相ＲＩ＾で測定した　（図 １）。認め得るとおり、この抗体のＩＡゝペプチドへの少ないが明確な結合を投 与量依存的な様式で立証できる。対照のイソタイプに適合させた抗体は、このペ プチドに有意には結合しない　（図ＩＡ）。同様に、対照ペプチドは、１０．２ ．１６によって有意には結合されナイ（図ＩＢ及びＣ）−コ（７）コトは、１０ ．２．１６とＩＡ”ｅ、−８□との特異的な相互作用を示唆している。

液相で、ペプチドが適当な立体配座へと折り畳まれるか否かを判定するために、 このペプチドが、ＩＡ”分子を発現するマウスＬ　ＩＩ維芽細胞への１０．２． １６の結合を阻害する能力を測定した　（図２）、ＩＡ”ペプチドは、）Ｉ−２ に’Ｄ１′と（７）１５−１−５Ｐ　（７）結合に作用すルコとなく　１０．２ ．１６　（７）結合を特異的に阻害した　（図２Ａ）、この結合阻害は投与量依 存性であるが、対照ペプチドは作用が皆無であった（図２８＋。このことは、Ｉ Ａ’ａｍ−□ペプチドは、液相で１０、２．１６に結合し、ＩＡ’分子の生来の 構造を模倣できることを意味する。また、このペプチドは、完全なＩＡ’分子と も直接的に作用し合う生体高分子と作用し合うことができることも示唆する。

実施例２ ＩＡ”ｅｓ−ｓｎによるＤｌＯ，Ｇ４活性化の阻害ＩＡ’５ｓ−ｓｓペプチドが 完全なＩＡｋ分子の一部を模倣できることは、このペプチドは工＾１で制限され るＴ細胞上のＴＣＲとも作用し合う可能性があることを示唆する。この仮説を検 定するために、ＩＡ’＋コンアルブミンに応答するマウスＴＨ２クローンである Ｔ細胞クローンの０１０．Ｇ４を用いた［Ｊ、　Ｋａｙｅら：同上（１９８３年 ）　：　Ｊ、　Ｋａｙｅら：「高原受容体に特異的なモノクローナル抗体によっ て誘発されたクローン化されたヘルパーＴ細胞系の増殖：インターロイキン２に 対する受容体の発現にはインターロイキンｌが必要であるＪ　、　Ｊ、　Ｉｍｒ ａｕｎｏｌ、　、第１３３巻（１９８４年）１，３３９〜１，３４５ページ］。

このようにして、このペプチドが、コンアルブミン及びＩＡ”を有する抗原提示 細胞（ＡＰＣ）に応答するこのクローンの増殖を阻害する能力を判定した。結果 を図３に示す。認め得るとおり、ＩＡｋペプチドは、コンアルブミンに応答する ＤＩＯ，Ｇ４の増殖の投与量依存性の阻害を生起した。これはマイクロモルの範 囲の濃度で生じた。対照的に、ＴＣＲ−ＭＨＣ相互作用を免れる細胞を直接刺激 できる抗ＴＣＲε抗体（１４５−２Ｃ１１）に応答する増殖は、非常に高いペプ チド投与量における以外は変化を受けなかった。他の刺激　（抗ＴＣＲＡｂ　５ ００Ａ２、コンカナバリンＡ）に応答するＤｌＯ，Ｇ４の刺激も、ＩＡ″′３． −８．によって、高投与量においてのみ、かつコンアルブミンに対する応答の阻 害と同程度にではなく阻害され、そしてＩＡ’ｓｓ−。ペプチドは、植物凝集素 で刺激されたヒト末梢血単核球の増殖を阻害しなかった　（データは示さず）。

このことは、認められた阻害の少なくとも幾らかは、ペプチドによる非特異的毒 性の結果ではなくて、細胞及び刺激に特異的であることを示唆する。

このペプチドの作用をＤＩＯ，Ｇ４について、数種類のＡＰＣ与量で試験した。

ペプチドがＴＣＲへの結合に関して競合しているならば、より低い投与量は、よ り少ないＩＡ”子が存在してこれらの細胞上のＴＣＲを活性化するときには、　 Ｄｌｏ、６４の活性化を効果的に阻害するはずである。したがって、より低い投 与量のＩＡｋペプチドは、より低い濃度のＡＰＣが存在して、利用可能なＴＣＲ に対して競合する場合に、Ｄｌｏ、Ｇ４の活性化を阻害するはずである。５×１ ０３個／穴に満たないＡＰＣを用いると、抗原特異的な増殖は僅かしか誘発され なかった。　５ｘｌＯ’　ＡＰＣ／穴及び５Ｘ　１０’　ＡＰＣ／穴では、特異 的増殖が誘発された。コンアルブミン及び２種類の濃度のＡＰＣに応答するＤＩ Ｏ，Ｇ４の増殖に対する増加する量のＩＡ’ペプチドの作用を図４に示す６５Ｘ ＩＯ’個／穴のＡＰＣの存在下では、　１２５　μｇ　／ｍｌという少量のＩＡ ”５ａ−ｓｓが増殖を少なくとも６０％阻害した。ｓ　ｘ　１０＠ＡＰＣ／穴で は、２５０μｇ／１ｍｌのペプチドを加えるまで増殖の阻害は認められなかった 。これは、Ｄｌｏ、０４細胞の特異的部位との相互作用に対するＡＰＣとＩＡ’ ＠ａ−＠Ｎペプチドとの競合現象と一致する。

実施例３ ＩＡ’ａｓ−ａｓペプチドによる抗ＴＣＨの結合の阻害上記の研究は、Ｉ　Ａ’ １１１１−８１ペプチドとＤｌＯ，Ｇ４のＴＣＲとの相互作用を示唆するが、そ れらはこの相互作用を直接的な方法では確定していない。この可能性を更に判定 するために、０１０．　Ｇ４のＴＣＲと反応する数種類の抗体を入手した。最初 の研究は、ＦＡＣ５分析でのこれらの抗体による細胞の染色を確立するために実 施した。２種類の抗クロノタイプ抗体、すなわち３Ｄ３及びＣｌ９３．５、並び に抗ＴＣＲ複合体抗体である１４５−２Ｃ１１及び５００Ａ２　、更に抗Ｈ２− ＫｋＤｋ抗体である１５−１−５Ｐによって、適当な染色が達成された。

ＩＡ’ペプチドがこれらの抗体の結合を阻害する能力を検定した。抗クロノタイ プについては、数種類の検定法で僅かな阻害が認められた。２ｆｌｉの検定法の 結果を図５に併せて示す。抗ＴＣＲの結合の特異的阻害は、このペプチドが３０ ３及びＣｌ９３．５の双方の結合を阻害できることによって証明されるとおり、 弱いが再現可能であるのに対し、同じ細胞に存在するＨ２−ＫＩＬＤ’に対する １５−１．−５Ｐの結合を阻害しなかった。

生起された低い程度の阻害は、ＩＡ’５ｓ−ｓｘペプチドとＴＣＲとの相互作用 の親和性が低いことによる可能性があった。この問題を回避するために、ＩＡ” ｓｓ−。ペプチドをＢＳＡにカップリングすることによって、多価誘導体を開発 した。制御ペプチドを同様にカップリングさせ、これらの結合体が抗ＴＣＨの結 合を阻害する能力を判定した。代表的な実験を図６に示す。ＩＡ”、、−□ペプ チドーＢＳＡ結合体は、双方の抗ＴＣＲ抗体による細胞の染色を著しく阻害した 。対照的に、対照ペプチド−ＢＳＡ結合体は有意な作用が皆無であった。Ｈ２〜 に′Ｄｋに対する１５−１−５Ｐの結合は、ＩＡ’ａｓ−ａｍペプチド−ＢＳＡ 結合体によって、より低い程度に阻害された　（データは示さず）。このことは 、０１０゜Ｇ４細胞に存在するＴＣＲとのＩＡ”ｓｓ−ａｍペプチドの直接的相 互作用を示唆する。

実施例４ ＤＩＯ，Ｇ４細胞に対するＩＡ’ｍ５−ｍ５ペプチド−ＢＳＡ結合体の結合 次に、マウスＴ細胞に対するペプチド−ＢＳＡ結合体の直接的結合を測定した。

ペプチド−ＢＳＡ結合体にフルオレセインを付加し、得られた複合体を用いて、 Ｄｌｏ、Ｇ４細胞はもとより２２．０１１細胞（Ｉ−Ｅ”に関連してハトのシト クロームＣに特異的なマウスＴ細胞のハイブリドーマ）も染色した。これらの細 胞系を異なるフルオレセイン付加結合体とともに１置し、洗浄し、そして蛍光光 度について分析した　（図７）。両細胞型において、いずれのＦＩＴＣ−ペプチ ドーＢＳＡ結合体についても多少の染色が明らかであるのに対し、ＦＩＴＣ−Ｉ Ａｋ、、、、−ＢＳＡによるＤｌｏ、Ｇ４の染色　（７Ｂ）は、いずれの結合体 による２２．０１１の染色　（７Ｃ及びＤ）、又はＦＩＴＣ−１ｓＩ　−ＢＳＡ によるＤＩＯ，Ｇ４の染色　（７Ａ）のいずれよりもはるかに高かった。ＦＩＴ Ｃ−ＩＡ’ｓｓ−ａｍ　ＢＳへの結合は、フルオレセインが付加されていないＩ Ａ”ｓ□、、−ＢＳＡによる部分的な競合を受けたが、ｌ５ｌ−ＢＳＡによって は受けなかった　（図８）、これは、この結合体のＩＡ″５ｓ−ａｓペプチド部 分に特異的な結合を示す、その上、ＦＩＴＣＩＡｋａｓ−□−ＢＳＡの結合も、 Ｄｌｏ、６４のＴ細胞受容体に特異的な抗クロノタイプ抗体によって部分的に阻 害されたが、これらの細胞に存在するＣＤ３７１合体の他の成分についてはそう でなかった　（図８Ｂ）。全体として、これらの結果は、ＦＩＴＣ−ＩＡ１′ｓ ａ−ｍｓ−ＢＳＡ結合体はＤｌｏ、Ｇ４細胞のＴ細胞受容体に結合したこと、及 びこの結合はＩＡ′６ａ−ｍ３ペプチドに媒介されたことを示唆する。

初めに、ＭＨＣ由来のペプチドが適当な立体配置に折り畳まれる能力を調べたａ 　ＩＡ’ｓｓ−ａｍペプチドとの抗ＩＡ’モノクローナル抗体の結合、及びこの ペプチドが完全なＩＡ５分子との抗体の結合を阻害できることは　（図１及び２ ）、このペプチドは、結合のための適切な立体配座へと折り畳まれことができる ことを示した。

ＩＡ”１１５−ｍ５ペプチドは、コンアルブミン＋ＩＡ″に応答するＤＩＯ，Ｇ ４の活性化を遮断する際に生物学的作用を示す　（図３及び４）。これらの実験 で認められた活性化の阻害は、特異的抗原を加えることなしにペプチドを用いた 結果と比較したとき興味が持たれる。用いたペプチドは、アミノ末端システィン 残基を有し、これが二量体ペプチドの形成を招（はずであることが特筆される。

補助細胞の存在下でのＴＣＨの架橋結合は、しばしば活性化へと導（ことがら、 ペプチドが０１０．Ｇ４細胞を活性化する可能性があり得る。実際、数例の実験 では、増殖の促進が認められた。−実験では、取り込まれたＣＰＭは、ＩＡ’ｓ ＋＋−ａｘペプチドの不在下テノ１６．２７２±７６２８がら５００　Ｉｔｇ／ ｍｌのＩＡｋｅａ−ｓｓペプチドの存在下での４７．９３５±６３４９まで増大 した。したがって、コンアルブミンの存在下で認められる阻害は、Ｄｌｏ、Ｇ４ のＴＣＲに対する結合についての競合に、部分的には起因するようにみえるが、 コンアルブミンの不在下では、ペプチドによる受容体の架橋結合が活性化に寄与 する可能性がある。

このことは、遊離ペプチドがこれらの細胞のＴＣＲに対する抗クロノタイプ結合 を阻害できること　（図５）によって裏付けられた。しかし、この阻害は弱く、 多少整合していない　（データは示さず）。このペプチドの結合活性を増大させ れば、より整合性のある結果が得られるであろうと推論された。ＢＳＡとのＩＡ ”ｍｓ−ａｓの多価結合体を用いることによって、より多大な抗クロノタイプ結 合の阻害が認められたが、対照ペプチド−ＢＳＡ結合体は、阻害作用を僅かしか 示さなかった　（図６）。ＩＡ’−ｍ−ｓｓ　ＢＳＡ結合体は、非特異的作用も いくらか示したものの、それによる抗クロノタイプ結合の阻害は、概して、それ による非クロノタイプ結合の阻害よりも大きかった　（データは示さず）。しか しながら、この結合体の結合の特異性に関するそれ以上の確認を追求した。

フルオレセイン付加標本は、ＩＥ’で制限されたＴ細胞ハイブリドーマと対比し て、顕著に多く　０１０．Ｇ４細胞と結合させたが、対照フルオレセイン付加ペ プチド−ＢＳＡ合体は、どちらの細胞型にも同程度に結合した　１図７）この結 合は、それが適当なペプチド−ＢＳＡ結合体はもとより、抗クロノタイプ抗体に よっても減少するという点では、少な（とも部分的に特異的である　（図８）。

配列リスト （１）全般的情報 （ｉｌ出願人：マーク・Ｉ・グリーン ドナルド・Ｈ・ルピン （ｉｉ１発明の名称：Ｄｆ！乳類のＴ細胞の応答を調節する方法 （ｉｉｉ）配列数；２ Ｉｉｖ）連絡先： ＦＡ）名宛人；ウッドコック・ウォッシュバーン・クルツ マツキーウイソツ＆ノリス （Ｂ）街路：ワン・リバティー・ブレイス、４６階（Ｃ１市：フィラデルフィア （ＤＪ州：ペンシルベニア （Ｅ）国・アメリカ合衆国 （Ｆ）郵便番号：　１９１０３ （ｖ）コンピュータ可読形態： （Ａｌ媒体形式：フロッピーディスク ｆＢ）コンピュータ：ＩＢＮ　ＰＣ互換型（Ｃ）オペレーティングシステム：　 ＰＣ−ＤＯ８／ＭＳ−ＤＯ３（Ｄ）ソフトウェア・パテントイン、 発売番号＃１．０、バージョン＃１．２５（ｖｉ）最新出願データ； （Ａ）出願番号：米国特許 （Ｂ）受理臼： （Ｃ）分類： （ｖｉｉｉ）弁理士／代理人情報 （Ａ）氏名：バトリシア・Ａ・シュレック（Ｂ）登録番号：　３３，７７７ （Ｃ）参照番号／整理番号：　ＵＰＮ−０１，７２（ｉｘ）遠隔通信情報； （Ａ）電話：　（２１５１５６８−３１００（Ｂ）テレファックス：　（２１５ ）５６８−３４３９（２）配列特定番号１に関する情報 （ｉ）配列特性： （Ａｌ　長さ・１４アミノ酸 （Ｂ）形式二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー；不明 （ｘｉ）配列の説明：配列特定番号Ｉ Ａｓｎ　Ａｒｇ （２）配列特定番号２に関する情報 （ｉ１配列特性： （Ａ）長さ：１６アミノ酸 ｆＢ）形式二アミノ酸 （Ｄ）トボロジー：不明 （ｘｉ）配列の説明：配列特定番号２ ■穴あたりのペプチドの量 ｌ穴あたりのペプチドの量 −ロー（Ｓｉ 抗体の希釈度 図ＩＣ −一一コンアルブミン 図３Ａ 一つ−コンアルブミン 濃　度　（ＬＬ（１／Ｔｎｌ） 図３Ｂ −Ｏ−５０００００ −さ−５００００ 濃　度　（ｕｇ／Ｔｒｌｌ） 図４ 図７ 国際調査報告 フロントページの続き （７２）発明者　ルーピン、ドナルド　エイチ。

アメリカ合衆国　１９０９６　ペンシルベニア。

ウィンウッド、アシトン　ロード　１０１（７２）発明者　ワイナ、ディピッド 　ビー。

アメリカ合衆国　１９０９６　ペンシルベニア。

ウィンウッド、ヘンリー　ロード　２３（７２）発明者　グリーン、マーク　ア イ。

アメリカ合衆国　９５９４６　ペンシルベニア。

ペンバリー、ライターズ　ミル　ロード

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. １．ＭＨＣ関連疾病を治療するための治療薬の製造における、該ＭＨＣの抗原認 識部位の少なくとも一部に実質的に一致するアミノ酸配列を有するペプチド又は ペプチド模倣体の用途であって、 該ペプチド又はペプチド模倣体がＴ細胞抗原受容体と結合することが可能であり 、未結合のＴ細胞抗原受容体は抗原に結合した該ＭＨＣを認識することが可能で あり、更に、該Ｔ細胞受容体はアロ反応性Ｔ細胞由来のものではない、前記用途 。
2. ２．ペプチドが、抗原認識部位のαヘリックスの少なくヒも一部に実質的に一致 するアミノ酸配列を有する請求の範囲第１項に記載の用途。
3. ３．ＭＨＣ遺伝子産生物によって制限されたＴ細胞の応答を阻害するための治療 薬の製造における、該ＭＨＣの抗原認識部位の少なくとも一部に実質的に一致す るアミノ酸配列を有するペプチド又はペプチド模倣体の用途であって、 該ペプチド又はペプチド模倣体がＴ細胞抗原受容体と結合することが可能であり 、未結合のＴ細胞抗原受容体は抗原に結合した該ＭＨＣを認識することが可能で あり、更に、該Ｔ細胞受容体はアロ反応性Ｔ細胞由来のものではない、前記用途 。
4. ４．ペプチドが、抗原認識部位のαヘリックスの少なくとも一部に実質的に一致 するアミノ酸配列を有する請求の範囲第３項に記載の用途。
5. ５．ペプチドが、主要組織適合性遺伝子複合体のα１領域に由来する残基に実質 的に一致するアミノ酸配列を有する請求の範囲第１項に記載の用途。
6. ６．ペプチドが、主要組織適合性遺伝子複合体のα１領域に由来する残基に実質 的に一致するアミノ酸配列を有する請求の範囲第３項に記載の用途。