JPH06504376A - 全血中の被分析物測定用テストキャリア - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 全血中の被分析物測定用テストキャリア本発明は、テストキャリア中に含まれる 呈色試薬を含んでなる試薬システムの助けて全血中の被分析物の測定を行なうテ ストキャリアのための、血液サンプルが付されるサンプル適用面および被分析物 の試薬システムとの反応の結果光学的に検出可能な変化が起こる検出面を有し、 サンプル中に含まれる赤血球が検出面に接近しないように設計されたテストフィ ールドに関する。

血液の構成物の定性または定量分析的測定のために、いわゆるキャリア結合テス トがますます用いられるようになってきている。このテストでは、試薬システム は固体テストキャリアの、少なくとも１つのテストフィールドに埋め込まれてお り、該テストフィールドは単層または複数の層からなり、該テストキャリアはサ ンプルと接触せしめられる。サンプルと試薬システムのとの反応は、光学的に検 出可能な変化、とくに目視的にまたは器械の助けをもって、通常反射測光により 評価可能な色変化をもたらす。色変化を導くかわりに、反応によって、たとえば 螢光や発光のような何がほかの光学的に検出可能な信号の発生または変化をもた らしてもよい。

テストキャリア（英語の文献ではよく、「固体試薬分析エレメント」とも呼ばれ る）は、本質的に、プラスチック材料で作られた長手方向のキャリア層とそれに 付される単数または複数のテストフィールドとからなるテストストリップとして 設計されることが多い。しかしながら、写真用スライドのように、テストフィー ルドがプラスチックフレームでとり囲まれたテストキャリアも知られている。

キャリア結合テストは、とくに使用が容易であるという点で特徴づけられる。今 日までに知られているテストキャリアのほとんどで、全血として直接血液を用い ることができないのは、なんとも残念なことである。それどころか、無色の血漿 または血清をうるために赤血球を分離することが必要である。通常、これは遠心 によってなされる。しかしながら、これには比較的大量の血液および高価な装置 を必要とする、付加的な操作が欠がせない。

それゆえに血液から直接的に分析結果がえられるテストキャリアを提供する多く の試みがなされてきた。２つの根本的に異なる、可能な解決法を認めることがで きる。

第１に試みられた解決法では、サンプルが付されるのと同じテストフィールドの 面において、色変化の評価が目視的にまたは器械を用いて行なわれる。この構成 では、テストフィールドは、サンプルからの被分析物がテストフィールド表面を とおって試薬に至る一方赤血球は保持されるように構成されている。一定時間の のち、血液サンプルはテストフィールド表面からぬぐい去られるが洗浄され、色 変化が観察される。このようなテストキャリアの例は米国特許第３６３０９５７ 号明細書中ならびに欧州特許第１３０３３５号明細書中および欧州特許出願公開 第２１７２４６号明細書中に記載されている。

第２に試みられた解決法では、サンプルはテストフィールドの片側（サンプル適 用面）に適用され、別の側（検出面）で色の変化が記録される。この検出法の主 たる利点は、血液を除去したり洗い流す必要がないことである。このため、これ らのテストキャリアはノン　ワイプ（ｒＮＷＪ　）−テストキャリアとも呼ばれ ている。

除去操作にともない、面倒な操作のみならず、血液が除去されなければならない 時間を正確に守らないために生じうる誤差の原因をも免れうる。しかし、この試 みられた解決法は、具体化するのがとくに困難である。一方で強く発色している 血液成分を確実に保持し、他方で被分析物を完全にかつ充分迅速に通り抜けさせ るような赤血球または血色素のフィルターが必要である。これらの必要条件を満 たすテストフィールドの成分を見つけ出すことはたいへんに困難であることがわ かってきている。

米国特許第３６６３３７４号明細書および米国特許第４２５６６９３号明細書に おいてはメンブレンフィルターが使用されている。メンブレンフィルターは原理 的には赤血球を濾し去るのに好適であるが、テストキャリアでそれを用いること は好結果を収めなかった。メンブレンフィルターとガラスファイバ一層とを組み 合わせた同様の適用法もこれらの米国特許に開示されており、該ガラスファイバ 一層はあらい粒子てメンブレンフィルターがつまるのを防ぐことを意図したもの である。このタイプのテストキャリアの製造は、満足のいく機能かえられないの に、高価なものとなるであろう。

米国特許第４０６９０１７号明細書および同一出願者からの複数の特許ではまた 、赤血球の通過を防げる中間層をテストキャリア内に設ける可能性も述べており 、該中間層は評価装置の光線が赤血球を含む層にはいれないようにするための放 射阻止成分を同時に含むものである。しかしながら、この明細書には、赤血球の 濾過をなしとげるためにそれぞれのばあいでどのように中間層を構成するかに関 する詳細が含まれていない。

米国特許第４８２４６３９号明細書で、赤血球分離の目的での、商業的な分離手 段（逆浸透）として知られているような非対称膜の使用が述べられている。その 膜は、部分的にまたは完全にゲル化した層を凝固浴に浸すことによる凝固法で製 造される。膜には試薬を含んでいてもよい。

この構成では、（ふき取り後の）血液の適用面からでもその反対側からででも、 光学的評価を行なうことができると述べられている。

欧州特許出願公開第０３０２２８７号明細書においては、サンプル適用面に面す る基盤層上に、呈色試薬を含んだ検出層を溶液状態で適用することにより製造さ れる複合層を有するテストフィールドが開示されている。基盤層は、ポリマーフ ィルム形成剤、珪藻土および顔料を含む。検出層は、溶液状態で付与する際に部 分的に基盤層に浸透して赤血球を保持する遷移領域を形成するようなポリマーフ ィルム形成剤を含む。

血液の色素成分によりひき起こされる問題は、通常用いられる皮膚に刺針してえ られた毛細管面は、それにともなう機械的圧力のために必然的に一部溶血してい る、すなわち破壊された赤血球から遊離した血色素を含むという事実により、さ らに悪化する。溶血の割合は一般的にはＧ、１％より小であるが、発色が強いた めに、赤血球が完全に分離されたばあいにもなお、遊離血色素が測定の誤差をひ き起こす。

赤血球の分離をともなうＮＷテストキャリアで、以前に知られている具体例のう ち、すべての点で満足のいく特性を示すものは１つもなかったので、このような テストキャリアの商業的に使用可能な具体例では、赤血球の分離は完全に省かれ 、強い赤色のために生じるひずみは、２つの異なる波長で測定する技術をもって 測定において補正されている。しかしながら、血液の暗色が実質的にシグナルの 差、すなわちテストの測定範囲内での拡散反射の測定値の差を減じ（およそ半分 程度）るために、測定精度はそこなわれる。さらに、装置における評価に要する 価格が非常に増大するうえ、色変化の目視による確認ができない。

本発明の目的は、血色素を確実に分離させ、分光的検出シグナルを迅速に高強度 に作り出すことのできる（そしてさらに、測定精度の高い）テストフィールドを ＮＷテストキャリアにとって利用可能なものとすることである。同時に、できう る限り製造が容易であるべきである。

前文で述べられるようなタイプのテストフィールドにおいて、以下のようにして 目的が達成される。前記テストフィールドは、ポリマーフィルム形成剤の分散液 または乳濁液から形成される、血色素分離と検出とを組合せた層を有し、前記分 散液もしくは乳濁液は、フィルム形成剤マスの固体物質含量に関して３０重量％ 以上の濃度の顔料、ポリマーフィルム形成剤、呈色試薬および膨潤剤を均一な分 布状態で含むものであり、該膨潤剤は、膨潤性にすぐれるために検出面での光学 的に検出可能な変化が遅くとも１分間ののちに測定可能となるものである。

フィルム形成剤分散液は、キャリア流体（通常は水）中で不溶性の極微ポリマー 粒子を含み、該粒子はキャリア流体中きわめて良好な分布状態で分散している。

フィルム形成時に、流体は蒸発乾燥により除去され、各粒子が互いに近づいてい き、最終的には接触するまで動く。

この構成の際に生しる強い力とフィルム形成にともなう表面エネルギーの増大の ために、粒子は合体して本質的に封じ込められたフィルム層を形成する。さらな る詳説は、たとえば「ラテックス　フィルム　フォーメーションＪ　（”Ｌａｔ ｅｘ　ｆｉｌｍ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ”　）　ジエイ　ダプリューパンデルホフ （１，Ｗ、　Ｖａｎｄｅｒｈｏｌ＋）のポリマーニュース（Ｐｏ１７ｍｅ＋　Ｎ ｅｗｔ）１９７７．１９４〜２０３頁の論文に見られる。

かわりに、フィルム形成剤を溶媒中に溶かしたものの乳濁液も用いることができ る。溶解したポリマーを、その溶媒と非混和性のキャリア流体中に乳濁化する。

ポリビニルエステル、ポリ酢酸ビニル、ポリアクリルエステル、ポリメチルアク リル酸（Ｐｏｌｙｍｅ１７１ｘｃＢｌ＋：１ｕｒｅ）、ポリビニルアミド、ポリ アミドおよびポリスチレンが、このようなフィルム形成剤のためのポリマーとし てとくに好適である。均質ポリマーに加えて混合重合体たとえば、ブタジェン、 スチレンまたはマレイン酸エステルの混合重合体もまた好適である。

顔料粒子の平均粒子径は、好ましくは０．２と１１１１１１とのあいだである。

二酸化チタンが広く利用可能な顔料であって、本発明にもとくに好適である。

血色素分離および検出の層の性質は、フィルム形成剤、顔料および膨潤剤のみな らずこの層に含まれるテストを構成する成分にも当然依存する。これには実際の テストシステムに加えて、たとえば界面活性剤、緩衝液および保護コロイドのよ うな補助的な材料も含まれる。

このような可能な変形の多様性の結果として、血色素の分離および検出層を形成 する層形成剤マスの量的な組成を決定する普遍的な法則を述べることは不可能で ある。

しかしながらここに記載された情報に基づいて、当業者は当然、選択した組成物 についてテストし、特定の適用のための層形成剤マスの組成を至適化することが できる。

顔料の割合は、層形成剤マスの総固体含量に関して３０重量％以上、好ましくは ４０重量％以上と、通常高い値である。血色素の分離および検出の層が極めてう ずくでも、すぐれた放射阻止特性かえられる、すなわちサンプル適用面の赤色は 光学的評価を妨害しない。

おどろいたことに、すぐれた膨潤特性を有する膨潤剤（すなわち、水を吸収する ことによりかさが増大する物質）を添加することによって、サンプル溶液が比較 的迅速に浸透する層がえられるのみでなく、膨潤剤のこの開孔効果にもかかわら ず、良好な血色素分離能がえられることが見い出された。ここに記載した説明に 基づき、膨潤剤の必要な質および量を、特定の層の組成に対して経験的に設定す ることができる。どんなばあいでも、膨潤特性は少なくとも、呈色−たとえば伝 統的なグルコース検出反応で−の速度がおもにサンプル溶液が層を通る浸透速度 に依存しているテストにおいて光学的に検出可能な反応が遅くとも１分間ののち に測定しつるような結果をもたらす程度にすぐれたものであるべきである。

メチルビニルエーテルマレイン酸無水物共重合体が、とくに好適な膨潤剤である ことがわかっている。

本発明に関連して行なわれた実験から、フィルム形成剤と顔料とは互いにほぼ等 しい重量比とすべきであると推測される。それぞれのばあいの状況に応じてフィ ルム形成剤の顔料に対する重量比は１：１０から２：１のあいだが好ましいこと が明らかになった。

概して、フィルム形成剤マスの固体物質含量中のフィルム形成剤と顔料の合計の 総割合が比較的高い（通常７０％をこえる）方が都合がよい。しかしながら、分 析反応の特性のために試薬システムの重量割合が異常に高くなる必要がある構成 に関しても、フィルム形成剤マスの固体物質含量に関して４０％のフィルム形成 剤と顔料の固体物質含量で、肯定的な結果かえられている。たとえば珪藻土（キ ーゼルガー（Ｋｉｅｓｅ１ｇｕｈ＋））のような、顔料の性質を有しないかまた はわずかじか有しない、平均粒子系がＩ１１！＋１よりかなり大である不活性の 無機粒子をフィルム形成剤マスに加えないかもしくは加えても１０％より低い、 非常に低い濃度にすべきである。

前記した成分の均一な分散液からの、血色素分離と検出とを組合せた層の製造に より、実質的に均一な層構造物かえられる。ここで本発明の血色素分離および検 出の層は、米国特許第４８２４６３９号明細書の前文で述べられた非対称膜とは 根本的に異なっている。

重要な点は、血色素分離と検出とを組合せた層が非常にうすいことである。乾燥 した層の平均の厚さは好ま１゜くは０．０５ｍｍよりも小であり、とくに好まし くは０．０２５ｍ＋ｎよりも小、そしてもっとも好ましくは０．０１５ｍｍより も小である。

使用の容易さはさておき、本発明のテストキャリアは、きわめて短い反応時間と 強い呈色を特徴とする。さらに、テストフィールドは、自己計量性（＋　ｅ　ｌ 　ｂ目ｄｏｓｉｅｒｅｎｄ）である。過剰に付されたサンプル（たとえば５μｌ から５０μｌのあいだ）から、再現可能な小部分（たとえば２μｌ）だけを吸収 する。

本発明は、今日までに提案されたＮＷテストフィールドの根本的な発展を表わし ている。これまでの試みでは、テストフィールドは通常、１つは赤血球分離用で いま１つは呈色反応後の検出用の、別々の層もしくは領域を含む複合層でなって いたが、−力木発明では、２つの機能が単一の均一に構成された層、すなわち血 色素分離および検出の層に結合されている。テストフィールドは、好ましくは血 色素の分離および検出の層のみからなる。これはきわめて薄く、少量の液体しか 吸収しないので、ごく少量の血液サンプルでも機能しつる。しかし、例外的なば あいには、血色素分離および検出の層は、ほかのテ、スト層、たとえばサンプル 適用面上に前もって設置される、横方向の拡散を誘導する層（拡散層）や、血色 素分離および検出の層に含まれる試薬と合わせることのできない試薬を含む試薬 層と組合せてもよい。

血色素分離および検出の層は、その検出面で透明なキ、ヤリアフィルムに付けら れてもよい。しかしその代わりとしてとくに有利なのは、その層を開孔性の複合 繊維構造に浸透させることである。

ほかのとくに好ましい具体例として、血色素分離および検出の層を微小多孔性プ ラスチック層（膜）に直接に、被覆して付けてもよい。この構成では、血色素分 離および検出の層を非対称の膜と組合せるのがとくに好ましいことがわかった。

該膜は、その一部が赤血球分離能を有しているのである。このタイプの膜は、現 在種々の濾過の目的で販売されている。概説は、たとえば「ザ　ストラフチャー 　アンド　サム　プロパティーズ　オブ　グレイデッド　ハイリー　アシンメト リカル　ボーラスメンブレンズＪ　（’Ｔｈｅ　＋ｔ＋ｕｃｌｕ＋ｅ　ａｎｄ　 ｔａｍｅ　ｐｒｏｐｚｌｉｅｓｏｆ　Ｈａｄｅｄ　ｈｉｇｈｌｙ　ａｓ７ｍｍｅ ＋＋１ｃａｌ　ｐｏｒｏｕｓ　ｍｅｍｂｒａｎｅｓ’）ダブリュー　ウラシトロ （Ｗ、　Ｗ＋ａ＋１ｄｌｏ）およびケイ　ジエイ　マイセルズ（Ｋ、１．　Ｍｙ ｓｅｌｆ）、ジャーナル　オブ　バレンチラル　サイエンス　アンド　テクノロ ジー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａ＋ｅｎｔｅｒａｌ　５ｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ 　ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＨ９８４，２４〜３１頁の文献に見られる。ここでとく に好都合なのは、血色素分離および検出の層が、血球を分離するだけでなく、血 色素が実際に起こる濃度で存在する限りにおいて、血色素の効率の良い分離をも たらすことである。実験的に、本発明の層が０．５％まで溶血したサンプルの処 理にさえも適切であることが確証された。この値は、実際に生じる多くて０．１ ％の溶血の値を充分安全なまでの余裕をもって越えている。０．５％溶血した血 液から血球が完全に除去されても、残りの血清はなお強い赤色を呈している。し かしながら、このような血清がサンプル適用面から本発明の血色素分離および検 出の層へと適用されると血色素が完全に分離されるので、評価面における分析測 定は、測定精度内で実際的に血色素によりそこなわれることがない。

本発明を、後掲の図で図表的に表わした実施例によって詳細に説明する： 図１＝本発明に好適なテストフィールド構造物の断面図を大きく拡大した図、該 テストフィールド構造物は湿潤状態にある； 図２：本発明のテストキャリアの断面図を大きく拡大した図； 図３＝本発明に好適な複合繊維構造の電顕像からの平面図； 図４および図５．別のテストフィールドの実施例の断面図を大きく拡大した図； 図６・実施例のうちの１つに関する複数のスペクトル；図７：実施例のうちの１ つにおけるフィルム形成剤マスの構成が及ぼす影響を説明するグラフ。

図１および２は、赤血球分離および検出の層１が複合繊維構造２に浸透している テストフィールド材料の断面図を示す。ここで「複合繊維構造」　（“Ｆｓｓｅ ＋ｖｅ＋ｂｕｎｄ＋ｔ＋ｏｋｔｕ＋”という語は、本発明に必要な性質、すなわ ちきわめて薄＜　（０，１ｍｍ以下、好ましくは０．０２〜０．０６ｍｍ）　、 適切な開孔を有する糸もしくは繊維の複合物を示す。複合繊維構造は、好ましく は織物または編まれた生地であることができる。きわめてうずく、目のあらいマ ットも使用できるが、これはさほど好ましくない。

複合繊維構造は、単フィラメントの糸または複フィラメント繊維（すなわち、多 くの個々の糸からなり、それらをより合わされた繊維）からなってもよく、単フ ィラメントの糸でとくに好結果かえられることがわかっている。

図３は、本発明に好適な単フィラメントの織物の典型的な構造物を示す。糸３は 目のあらい、開孔４を有する格子様の構造を形成する。孔径Ａは、０．０２と０ ．０６ｍｍのあいだがよく、好ましくは０．０３と０．０４１＋＋＋ｎのあいだ である。

示したような四角形の孔のばあい、「孔径」という語はその縁の長さを意味する 。四角形から逸脱した孔の形を用いるばあいには、孔径は平均孔断面の平方根と して定義される。

複合繊維構造物を形成する糸の大さＢは、好ましくは０．０２とＯ，［１６ｍｍ のあいだであり、とくに好ましくは０．０３と０、０４ｍｍのあいだである。ポ リエチレンが糸の材料として好結果をうるちのであることがわかっているが、ほ かの材料もふされしい。

前記のように、本発明のテストキャリアのテストフィールドは、好ましくはキャ リア材料に付された血色素分離および検出の層のみからなる。このようなテスト キャリアを図２に図示する。番号５で全体的に示したテストフィールドは、フレ ーム６で支持される。サンプルは、サンプル適用面７から適用される。光学的評 価は検出面８で行なわれる。

開孔性複合繊維構造に浸透した血色素分離および検出層の開示された構造は、と りわけそれが自立性である（ｓｅｌｂｓｔｌ＋ａｇｅｎｄ）　、すなわち基盤と しての透明なキャリアフィルムを必要としないという点に特徴がある。しかしな がら、この構成では、サンプル適用面７に適用された血液が小さな裂は目や割れ 目をとおって接近することができないように、複合繊維構造物の孔が完全に閉そ くしていることが重要である。というのも、血液の強い赤色のために比較的少な い量でも光学的測定の結果を乱す可能性があるからである。

これを確実にするために、テストフィールド材料を製造する際に、開孔を有する 複合繊維構造物からなるキャリア材料のリボンに浸透したフィルム形成浸透マス を形成するために、浸透マスがキャリア材料の孔に広く浸透するような方法で血 色素分離および検出の層をなす物質を加工処理すると、有利である。つぎに、浸 透マスを平滑化具の助けをもって平滑化する。そののち、テストフィールド材料 のリボンを接触しないようにして乾燥する。

キャリア材料の中空部分が実質上完全に満たされ、糸が両面とも浸透マスでうず くおおわれるように、浸透マスを全体に付する。平滑化したのちの状態を図１に きわめて図解的に示す。

乾燥工程の結果、浸透マスの層の厚さは減少する。これによって図２に示すよう に糸のあいだのテスト層表面でわずかに凹状に湾曲した特徴的な構造が生まれる 。

図１〜３によって説明されるように、複合繊維構造物に浸透した血色素分離およ び検出の層は、層が両側で周囲の空気に触れるような、自立性のテスト層材料が 所望されるばあいに、とりわけ好ましい。これは、空気中の酸素の助けて酸化を 行なう段階が含まれる試薬システムに、とくにあてはまる。

図４は、空気中の酸素と無関係に機能するテストシステムに好適なテストフィー ルドの構成を示す。この構成では、血色素分離および検出の層１を、透明のプラ スチックフィルム１θ上に被覆している。

図５は、血色素分離および検出の層を微小多孔性プラスチック層（膜）ｌｌ上に 被覆した実施態様を示す。膜は、図示するように、好ましくは血液適用面７に面 している。

以下の実施例により本発明をさらに詳細に説明する。

全血中のグルコースの定量分析用の血色素分離および検出の層を製造するため、 以下の組成の分散液を製造した： この混合物を単フィラメントのポリエチレンまたはナイロンの織物にドクター（ ドクターのギャップは約０．０８ｍｍ）を用いて約０．０５ｍｍの厚さになるよ うに付し、そののち接触させないようにして６０℃にて約３０分直接熱風で乾燥 した。

グルコース濃度に応じて、前記の方法で製造された試薬層は、グルコースを含む 血液で、レミッション（Ｒｅｍ口日ｏｎ）分光計を用いて５６５ｎｍにて測定可 能な、段階的な青の反応色を良好に示す。反応層のブランク値を１００％レミッ ションとし、黒色フィルムを４％レミ・ソションとして測定装置を検量すると、 下記のレミッションが対応する血中グルコース濃度としてえられる：図６に、レ ミッション分光測定の４つの異なるスペクトルを示す。これはレミッション（Ｒ ，％表示）を波長（λ、ナノメーター表示）に対してプロットしたものである。

スペクトルａ、ｂおよびＣは、実施例１のテストフィールドに関するもので、グ ルコースを含まないサンプル（ａ）、グルコース含量が３０ｍｇ／　ｄ　ｌ　（ ｂ　）およびグルコース含量が７００ｍｇ／　ｄｉ　（ｃ　）のサンプルを用い ている。指示薬ＭＢＴＨの典型的な吸収極小が観察される。

スペクトルａとスペクトルｂおよびＣとの差が、選択された測定波長における有 用なシグナルを表わす。

スペクトルｄは、サンプルは実施例のｂと同じ３０ｍｇ／ｄ１のグルコースを含 むが、血色素の分離が不完全な検出層を用いたばあいに関する。赤色の血色素は 、測定に重要な範囲で著しい極小を生じさせる。この結果出てくる測定シグナル が、容認できないほどの誤差を生じることは明白である。

実施例２゜ 顔料およびフィルム形成剤の種々の濃度の血色素分離能に及ぼす影響を調べるた めに、実施例１の組成をこれら２つの成分の含量に関して変化させた。

その結果を図７に示す。顔料Ｐの固形物重量を横座標に、フィルム形成剤Ｆの固 体物重量を縦座標にプロットしている。中抜きの円は、血色素分離能が満足のい くものでなかったものの組成を示し、十の印はその機能が満足のいくものであっ たものの組成を示す。星印は、充分な赤血球分離がなされるものの、層の放射阻 止能が不充分であるものの組成を示す。実施例１からの値の組合せを、円で囲ん だ十印で示す。これはとくにすぐれた血色素分離効果により特徴づけられる。

この結果より、使用される顔料の量およびフィルム形成剤の量の両方が非常に小 さいばあいは、えられる分離効果が良好でないことが示される。顔料の割合を増 加し、フィルム形成剤の割合を増加することの両方によって満足のいく結果が達 成される。両者が互いにほぼつりあいがとれていて、層形成組成物中のそれらの 総重量が充分に高いばあいに、とくに良好な結果が達成される。

実施例２ａ； 種々の膨潤剤の影響を調べるために、実施例１の組成中のガントレツＡＮ１３９ をケルトロール（ＫｅＮｒｏｌ）　Ｆ（製造元：ケルコ／エイル　インターナシ ョナル社（Ｋｅｌｃｏ／　Ａｉｌ　Ｉｎ１ｅ＋ｎｘ［１ｏｎａｌ　ＣｖｂＨｌ　 、ハンブルグ、ドイツ）におきかえた。下記の表に、その２つの組成で、２つの 異なる血液サンプルに対して測定した拡散反射（％レミッション）の経過を示す 。膨潤剤ガントレツＡＮＩ３９を用いたばあいには、３０秒後にすてに安定な値 にまで上昇し、そののちの３０秒間変化しないままであることがわかる。ケルト ロールＦを用いたばあいには、もつとゆっくりと最終値に近づいていく。しかし ながら、このばあいでも１分以内ののちにすぐれた精度で、適切な検量を示す信 頼性のある測定を行なうことが可能である。

たとえば、テスト層の組成においてしばしば用いられるアルギン酸のような膨潤 特性に劣る膨潤剤を用いたばあい、それほど良い結果はえられない。

実施例３ 血中のトリグリセリド検出用のテストキャリアのためのテストフィールドの製造 。

組成成分から均一な被覆マスを製造する。ｐＨを確認し、必要ならばｐ　Ｈ７， ５に調整する。その後ただちに、被覆マスを湿潤フィルム厚が約０．０６ｍｍと なるように、複フィラメントのポリエチレンの織物（厚さは約０．０４ｍｍ）に 塗布して、空気循環乾燥機中で５０℃にて約６０分間乾燥した。

トリグリセリドを含む血液サンプルの分析に際して、５０〜３０ＧＩＩ１ｇ／　 ｄ　ｌの濃度範囲内でうまく段階的に青色かえられ、この色は６６０■にてレミ ッション分光計により評価できる。

実施例４： 種々の顔料物質の使用の可能性を調べるために、実施例１の組成を顔料に関して 変更し、種々の濃度比で実験した。下記の表に、実験を行ない、満足のいく血色 素分離能を示した組成の、乾燥物質重量を示す。

硫酸バリウムは、平均粒子径０．６ｕｍのものを用いた（製造元：メルク（Ｍｅ ＋ｃｋｊ社、ダームスタート（Ｄｘｒｍｓｌａｄｌｌ　、ドイツ）。

オルガツル２００２は、顔料の性質を有するポリアミドの粒子粉末であり、アト ケム（Ａｌｏｃｂｅｍ）　、エルツーアクイタイン（Ｅｌｌ−人ｑｕＮａｉｎｅ ）社、オルテ゛ソ（０＋ｊｅｚｌ　、フランスにより製造されたものである。平 均粒子径は０．４−である。

実施例５゜ グルコースの還元的検出用の試薬フィルムの製造。

組成物を均一とし、ポカロン（Ｐｏｋ＊１ｏｎ）　フィルム（製造元：ロンザ（ Ｌｏ１１！１１社、スイス）上に０．１＋ａ＋ａの厚さで塗布した。そののち６ ０℃にて乾燥した。えられた試薬フィルムは、すぐれた赤血球分離能と、グルコ ース濃度に依存した強い呈色性を示す。

この実施例によって、本発明の血色素分離および検出の層が、そのテストの特異 性のために試薬システムの可溶性構成要素が比較的高濃度で存在しなければなら ないようなばあいにでも製造可能であることが示される。このばあい、塩化テト ラエチルアンモニウムと２．１８−フォスフォロモリブテン酸との指示薬の組合 せの総乾燥重量は、顔料とフィルム形成剤の総乾燥重量とほぼ同じ桁の大きさ内 にある。

λｌｎｍ１− 手続補正書（睦） 平成５年１１月２４日

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. １．テストキャリア中に呈色試薬を含んでなる試薬システムを含んで、該試薬シ ステムの助けで全血中の被分析物を定量するためのテストキャリアであって、血 液サンプルが付されるサンプル適用面（７）と、被分析物の試薬システムとの反 応の結果光学的に検出しうる変化が起こる検出面（８）を有するテストフィール ド（５）を有し、 該テストフィールド（５）が、サンプル中に含まれる赤血球が検出面に接近しな いように設計されており、前記テストフィールド（５）は、血色素分離および検 出の組合わされた層（１）としてフィルム層を有し、該フィルム層は、ポリマー フィルム形成剤の分散液または乳濁液から作られ、該分散液または乳濁液がフィ ルム形成剤マスの固体物質含量に関して３０重量％以上の濃度の顔料、ポリマー フィルム形成剤、呈色試薬および膨潤剤を均一な分布状態で含み、 該膨潤剤の膨潤特性が良好であるために検出面における光学的に検出可能な変化 が遅くとも１分間ののちには測定しうるような、 全血中の被分析物測定用テストキャリア。
2. ２．血色素分離および検出の層（１）の平均の厚さが０．０５ｍｍ以下、好まし くは０．０２５ｍｍ以下、とくに好ましくは０．０１５ｍｍ以下であることを特 徴とする請求項１記載のテストキャリア。
3. ３．血色素分離および検出の層（１）が、開孔を有する複合繊維構造（２）に浸 透し、ゆえにその孔にゆきわたって封鎖せしめることを特徴とする請求項１また は２記載のテストキャリア。
4. ４．複合繊維構造（２）の平均孔径が０．０２と０．０６ｍｍとのあいだ、好ま しくは０．０３と０．０５ｍｍとのあいだであることを特徴とする請求項３記載 のテストキャリア。
5. ５．血色素分離および検出の層（１）が、微小多孔性プラスチック層（１１）上 に被覆されることを特徴とする請求項１または２記載のテストキャリア。
6. ６．微小多孔性プラスチックフィルム（１１）が、テストキャリアのサンプル適 用面（７）に面することを特徴とする請求項５記載のテストキャリア。
7. ７．微小多孔性プラスチックフィルム（１１）が、非対称構造を有し、少なくと も部分的には赤血球を分離することを特徴とする請求項５または６記載のテスト キャリア。
8. ８．血色素分離および検出の層（１）が、プラスチックフィルム（１０）上に被 覆されることを特徴とする請求項１または２記載のテストキャリア。