JPH06501617A - 新規な神経栄養因子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は神経組織の成長、調節または維持に関与するタンパク質に関する。さら に詳しくは、本発明はＮＧＦと相同性を有する神経−誘導因子に関する。

背景技術 神経成長因子（ＮＧＦ）は末梢神経系の感覚神経および交感神経の発達に優先的 に作用するタンパク質である。該ＮＧＦは、感受性を有するニューロンの細胞表 面の特異的な受容体を介して作用し、神経細胞の生存を支え、軸索の外側への成 長を促進し、神経化学的分化を進める。ＮＧＦ作用は神経細胞膜（コル−ら（Ｃ ｏｎｎｏｌｌｙ　ｅｔ　ａｌ、　）　、　１９８１．　Ｊ、Ｃｅ１ｌ　Ｒｉｏｌ 、　９０＋１７６；スケ−パー（Ｓｋａｐｅｒ）およびハロン（Ｖａｒｏｎ）　 、　１９８０．　Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ、　１９７：　３７９）　、神経タンパク 質のり／ｖ酸化状！！！（ユら（Ｙｕ　ｅｔ　ａｌ、）　、　１９８０．　Ｊ、 Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、　２５５：　１０４８１；　／’レクオ（１’１≠■ ｅｑｕｏｕａ）およびパトリック（Ｐａｔｒｉｃｋ）　、　１９８０．　Ｃｅ１ ｌ　２２：　５７１）の変化を伴い、ある種のｍＲＮＡおよびタンパク質が豊富 な状態で神経細胞の分化および機能に寄与しているようである（チェルシー（Ｔ ｉｅｒｃｙ）およびシュータ−（Ｓｈｏｏｔｅｒ）　。

１９８６、　Ｊ、Ｃｅ１１．Ｂｉｏｌ、　１０３：　２３６７）。

前脳神経もＮＧＦ反応性であり、その栄養面の支持にＮＧＦを必要とすると思わ れる（ヘフティ（Ｉｌｌｅｆｔｉ）　、　１９８６．　Ｊ、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、 、　６：２１５５）　ｏ実際、ＮＧＦおよび中枢神経系（ＣＮＳ）におけるその 受容体の分布および個体発生は、ＮＧＦが酊脳基底のコリン作用性神経のための 、標的−誘導性神経栄養因子であることを示唆している（コルノング（Ｋｏｒｓ ｃｈｉｎｇ）　、　ＮａｖｌＤｅｃ　１９８６．　Ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　Ｎｅｕ ｒｏ、　Ｓｃｉ、　ｐｐ　５７０−５７３）。

ＮＧＦ相同性の動物性物質が多く知られるようになったが、ＮＧＦに幾分の相同 性を有するにもかかわらず、明らかに区別し得る神経成長因子が同定されたのは 最近である（レイブＯツクら（Ｌｅｉｂｒｏｃｋ　ｅｔ　ａｌ、）　、　１９８ ９．　Ｎａｔｕｒｅ　３４１：１４９）。

この因子、脳−誘導神経栄養因子（ＢＤＮＦ）または今日ではＮＴ−２と呼ばれ るが、はブタ脳から精製され、Ｎ−末端および開裂後の断片の両者の部分アミノ 酸配列が決定された。幾つかのオーバーラツプする断片がら編集された最長の配 列を用いて２組のオリゴヌクレオチドを合成し、それをプライマーとして用いて 、ポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）によりブタゲノム鋳型を増幅した。２Ｉｌｌの プライマーの間のヌクレオチド配列を決定し、それを用いて、ブタ脳の上圧がら 単離した全ＲＮＡの逆転写によって得た相補的ＤＮＡ鋳型に対するＰＣＲに用い る特異的プライマーを合成した。このようにして得たヌクレオチド配列は４個の インフレーム（フレーム内）ストップコドン後方に最初に見出されるメチオニン から始まる、２５２アミノ酸のタンパク質をコードするオーブンリーディングフ レームを有していた。Ｌｅｉｂｒｏｃｋらは、ＢＤＮＦとＮＧＦのみが、構造と 機能的特徴を共有する神経栄養性タンパク質ファミーのメンバーであるとする理 由は全くないとしており、著者らは、これらの共通の構造上の特徴が、他のメン バーの発見に役立つだろうと期待している。

より最近では、神経細胞因子（ＮＦ）または二二一口トロフィン−３（ＮＴ−３ ）と呼ばれる、βＮＧＦおよびＢＤＮＦに密接に関連した他の新規な神経栄養因 子が発見された。（ホーンら（ｌｌｏｈｎ、　ｅｔ　ａｌ、　）　、　１９９０ ．　Ｎａｔｕｒｅ　３４４：　３３９；　フイソンピエールら（Ｍａｉｓｏｎｐ ｉｅｒｒｅ、　ｅｔ　ａｌ、　）　、　１９９０．５ｃｉｅｎｃｅ　２４７：　 １４４６；　Ｏ−ゼンクールら（Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ、　ｅｔ　ａｔ、）　、　 １９９０．　Ｎｅｕｒｏｎ　４：　７６７）　ａ　ＢＤＮＦとＮＴ−３は、その アミノ酸の約５０％がβＮＧＦと共通である。ＢＤＮＦおよびＮＴ＝３をコード するｍＲＮＡは、成熟唱歯類の脳に高レベルで存在する。βＮＧＦ、ＢＤＮＦお よびＮＴ−３はヒナ鶏の感覚神経細胞の選択されたものの生存を支持しており、 これは発生の過程での神経細胞生存の調節に別個の役割を有することを示唆して いる。

神経細胞の生存および成長はまた、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）　、上皮性成 長因子、およびインシュリン様成長因子等の非神経細胞に対する成長因子の影響 をも受ける（モリソンら（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、　）　、　１９８７ ．５ｃｉｅｎｃｅ　２３８ニア２：ウォリック（ｆａｌｉｃｋｅ）　、　１９８ ｇ、　Ｊ、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、　８：　２６１８：バット（Ｂｈａｔ）　、　１ ９８３．　Ｄｅｖ、Ｂｒ≠■ ｎ　Ｒｅｓ、　１１：　３１５）　ｏペイ／ツクＦ（１；Ｆ　（ｂＦＧＦ）は分 離した１歯類胎児神経細胞の培養中での初期（−次）の生存および以後の繊維の 成長を支える。多（の脳領域からの神経細胞が影響を受けるが、生存する神経細 胞集団が脳領域間で変化していることは、神経細胞の亜集団がｂＦＧＦに応答性 を有することを示唆している（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、、１９８６　Ｐ ｒｏｃ、Ｎａｔｌ＾ｃａｄ、ｓｃｉ、　８３°７５３７：　ｆａｌｉｃｋｅ　ｅ ｔ　≠戟A　。

１９８６：　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、　ＵＳ＾８３：３０１２ ）　。ｂ　ＦＧ　Ｆは、遊離されるタンパク質に典型的なシグナル配列を持たな いので、そして、脳におけるｂＦＧＦレベルは、βＮＧＦやＢＤＮＦのそれより もはるかに大きいので、ｂＦＧＦが神経栄養因子として生理学的な役割を担って いるか否かが疑問視され、ｂＦＧＦは細胞破壊に関連する事件に際し放出される ”障害因子”として作用すると提案された（トーエ不ンら（Ｔｈｏｅｎｅｎ、　 ｅｔ　ａｌ、）　、　１９ｇ？、　Ｒｅｖ、Ｐｈｙｓｉｏｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｐｈａｎａａｅｏｌ、　１O９ ：１４５）。

末梢神経系の異常に治療効果を有する可能性のある他の神経栄養因子としては、 線毛神経栄養因子（ｃｉｌｉａｒｙ　ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ　ｆａｃｔｏｒ 　：　ＣＮ　Ｔ　Ｆ　）がクローン化され、発現された。（リンら（Ｌｉｎ、　 ｅｔ　ａｌ、）　、　１９８９．５ｃｉｅｎｃｅ、　２４６：　１０２３）。成 熟兎の坐骨神経から精製されたＣＮＴＦは、末梢神経系に作用し、完全にＮＧＦ と無関係のようである。

本発明の目的はＮＧＦファミーに真する第４の神経栄養因子を同定すること、並 びにそのような因子をコードする核酸を得ることである。

他の目的は、組換え細胞培養内で、そのような新規な因子を合成することである 。

また、他の目的は、そのような新規な因子の変異体および改良形（修飾形）を与 えることである。

さらに、他の目的は、抗体を惹起するための免疫原を製造すること、並びにその ような新規な因子、その変異体または改良形と結合し得る抗体を得ることである 。

他の目的は、そのような新規な因子、その変異体または改良形を含有する、治療 および診断のための組成物、および治療的処置法を提供することである。

当業者に明らかなこれら、およびその他の本発明の目的は、まず、ＮＧＦ、ＢＤ ＮＦおよびＮＴ−３と関連した新規な神経−誘導因子（以下、神経栄養因子−４ またはＮＴ−４と称する）をコードする配列の少なくとも一部を得ることで達成 された。

１側面では、本発明はＮＴ−４をコードする単離された核酸を提供する。他の側 面では、本発明はこの核酸を含むベクターを提供する。第３の側面では、本発明 はこの核酸を含有する組換え宿主細胞を提供する。さらに他の側面では、本発明 は動物種起源のＮＴ−４を含有し、該動物種の不純物質（混在）ポリペプチドを 含有しない組成物を提供する。

ＮＴ−４をコードする核酸はまた、ＮＴ−４をコードする核酸と実質上配列相同 性を有する核酸を同定、単離するためのノゾブリダイセーション分析に用いるこ とができる。

ＮＴ−４またはそのフラグメント（それらはインビトロの方法で合成することも できる）を（組換え発現、またはインビトロの共有結合的な方法で）免疫原性ポ リペプチドと融合させ、次いで、この融合物を用いて動物を免疫し、ＮＴ−４エ ピトープに対する抗体を生産させる。抗ＮＴ−４抗体は免疫動物の血清から回収 される。あるいは、免疫動物の細胞から、常法通り、モノクローナル抗体を調製 する。通常のスクリーニングで同定された抗体はＮＴ−４と結合するが、ＮＧＦ 、ＢＤＮＦまたはＮＴ−３とは実質上、交差反応しないであろう。特に、固定化 抗ＮＴ−４抗体は特にＮＴ−４の診断（インビトロまたはインビボ）またはＮＴ −４の精製に有用である。

置換、欠失または挿入によるＮＴ−４の変異体をインビトロまたは組換え法で調 製し、ＮＴ−４との免疫交差反応性に関し、またはＮＴ−４拮抗またはアゴニス ト作用に関して、スクーニングする。

特にＮＴ−４またはその抗体の診断のために、またはＮＴ−４抗体のアフィニテ ィー精製のために、固定化および標識化ＮＴ−４を得るために、インビトロでＮ Ｔ−４の誘導体を調製する。

ＮＴ−４、その変異体またはその改良形、あるいはその抗体を生理学的に許容さ れる媒質、特に冶療用の媒質を用いて製剤化する。そのような媒質には、徐放性 製剤が含まれる。

他の面では、本発明は、ＮＴ−４、またはその変異体または改良形を製造する方 法であって、形質転換された宿主細胞を培養し、所望のポリペプチドを宿主細胞 培養物から回収することからなる方法を提供する。

ＮＴ−４は広範な組織分布を有し、ＮＧＦ、ＢＤＮＦおよびＮＴ−３と構造上、 関連することが分かった。その脳および筋肉組織における存在は、それが神経変 性性疾患および損傷神経細胞、例えば、外傷による神経損傷、の治療剤として有 用であることを示唆している。

従って、池の面では、本発明は、神経変性性疾患または損傷神経細胞を治療する 方法であって、哺乳類に有効量のＮＴ−４、またはその変異体または改良形を投 与することからなる方法を提供するものである。

図面の簡単な説明 図１は成熟ヒトＮＴ−４の全ヌクレオチドおよびアミノ酸配列をも含めて、ヒ１ −ＮＴ−４遺伝子（ＳＥＱ　ＩＤＮｏ　１）の部分ヌクレオチド配列および推定 のアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮｏ、２）を示す。矢印は成熟配列の開始位！を、 アストリスクは神経栄養因子フチミリ−の他のメンバーとの相同性の真定の始ま る位！を示し、終止コドンは円で囲まれている。アミノ酸は成熟領域のＮ−末端 から番号付けされている。

図２はヒトＮＴ−２（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、３）　、ＮＴ−３（ＳＥＱ　ＩＤ　 Ｎｏ。

４）およびＮＧＦ　（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、５）　、およびＮＴ−４の成熟およ び部分前駆体部分（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、６）の間のアミノ酸配列の相同性を示 す。配列上のセンス（ＮＧＸ−３４）およびアンチセンス（ＡＲＩ）プライマー の位置は太い縦の矢印で、成熟領域の開始位置は矢印で示されている。

図３はヒトＮＴ−４β（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、７）の一部をコードするｃＤＮ、 Ａ（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、７）のヌクレオチド配列、ＮＴ−４βのこの部分の推 定のアミノ酸配列（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ　８）を示す。

図４はヒトＮＴ−４７をコードするゲノムＤＮＡのヌクレオチド配列（ＳＥＱＩ Ｄ　Ｎｏ、９）および推定のアミノ酸配列（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、１０）である 。

最初のインフレームＭｅｔ残基はヌクレオチド位置３５６−３５８に位置し、ヒ トＮＴ−４７の開始コドンと推定される。

図５はヒトＮＴ−４ΔをコードするゲノムＤＮＡのヌクレオチド配列（ＳＥＱＩ ＤＮｏ、１１）、およびヒトＮＴ−４Δのこの部分の推定のアミノ酸配列（ＳＥ Ｑ　ＩＤ　Ｎｏ、１２）である。

図６はヒトＮＴ−４、ＮＴ−４β、ＮＴ−４γおよびＮＴ−４Δのアミノ酸配列 相互の相同性を示す。矢印は成熟ヒトＮＴ−４配列の開始位置を示す。

好ましい態様の詳細な説明 、本明細書中、“ＮＴ−４“は、図１に示すヒトＮＴ−４のためのアミノ酸配列 を持ったポリペプチド、そのようなポリペプチドのアミノ酸配列変異体、成熟ヒ トＮＴ−４および該アミノ酸配列変異体のペプチドフラグメント、ここに該ペプ チドは少なくとも約５アミノ酸長さであって、対応するポリペプチドの免疫エピ トープまたは他の生物学的に活性な部位を有する、および成熟ヒ）ＮＴ−４およ び該アミノ酸配列変異体およびペプチドフラグメントの改良形（ここにポリペプ チドまたはペプチドは天然に存在するアミノ酸以外の部分による置換によって共 有結合的に改良されている）を表す：但し、考慮下の特定のアミノ酸配列変異体 、ペプチドフラグメント、またはその改良形は、新規であり、従来技術から自明 でなく、かつどのような動物のＮＧＦＳＢＤＮＦまたはＮＴ−３とも同一でなく 、またそのようなＮＧＦ、ＢＤＮＦまたはＮＴ−３のいかなるフラグメントでも ないことを条件とする。

ＮＴ−４核酸はＮＴ−４ポリペプチドをコードするＲＮＡまたはＤＮＡであるか 、そのようなりＮ、Ａとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、結合状 態で安定に維持される約１０塩基長以上の核酸である：但し、そのようなハイブ リダイズする核酸は、新規であり、Ｎ　Ｇ　Ｆ　ＳＢ　Ｄ　Ｎ　ＦまたはＮＴ− ３をコードする核酸またはその相補的な核酸をも含めて、従来技術の核酸と同一 でないことを条件とする。ストリンジェント条件とは、（１）洗浄での低イオン 強度と高温の使用、例えば、０．１５Ｍ　ＮａＣ１１０，０１５Ｍ　クエン酸ナ トリウム１０．１％ＮａＤｏｄＳ○４．５０℃、あるいは（２）ハイブリダイゼ ーションの間にホルムアミド、例えば５０％Ｖ　／　Ｖホルムアミドを、０．１ ％ウシ血清アルブミン１０．１％フィコール（Ｆｉｃｏｌｌ）／　０．１％ポリ ビニルピロリドン１５０＠Ｍ　りん酸ナトリウムバッファー　（ｐＨ６，５）と ７５０ｍＭ　ＮａＣ１および７５＋ａＭ　クエン酸ナトリウムとを４２℃で用い る場合である。

ＮＴ−４をコードするＤＮＡは脳組織ｃＤＮＡライブラリー、またはゲノムＤＮ Ａ、またはインビトロ合成で得ることができる。ハイブリダイズする核酸は通常 、インビトロ合成で得られる。ＮＴ−４ＤＮＡの同定は、ヒトｃＤＮＡまたはゲ ノムライブラリーを図１の配列から通常の基準、例えば、配列長さが十分であり 疑似陽性を最小にするために非不明瞭さが十分であることなど、に従い選択され る標識オリゴヌクレオチドを用いてプローブすることにより最も好都合に行うこ とができる。通常、約３０から５０塩基の３２Ｐ標識オリゴヌクレオチドが適し 、特に、メチオニンまたはトリプトファンをコードするコドンを１またはそれ以 上含むオリゴヌクレオチドが好適である。単離された核酸とは、同定され、核酸 の供給源に由来する他のポリペプチドをコードする不純物核酸から分離されたも のであるだろう。核酸を診断目的で標識することもできる。

ＮＴ−４のアミノ酸配列変異体は、図１記載の配列内に１またはそれ以上のアミ ノ酸残基が挿入、欠失および／または置換されることによる、図１記載の成熟ヒ トＮＴ−４と異なるアミノ酸配列を有するＮＴ−４ポリペプチドである。一般に アミノ酸配列変異体は、その配列内の各位置にあるアミノ酸の比較に基づいて、 成熟ヒトＮＴ−４と、約７５％の相同性（そしてしばしば８５％以上の相同性） を有するであろう。

ＮＴ−４のアミノ酸配列変異体は、自然に生成するか、または、予め単離された ＮＴ−４ＤＮＡに適当なヌクレオチド変化を導入することにより、またはインビ トロで所望の変異ポリペプチドを合成することにより、合成法で生成され得る。

上記に示したように、そのような変異体は図１に示した成熟ヒトＮＴ−４のアミ ノ酸配列内に１またはそれ以上のアミノ酸残基の欠失、挿入または置換を有する であろう。変異体ＮＴ−４のアミノ酸配列を得るためには、生成する変異体ポリ ペプチドが所望の特性を有することを条件として、いかなる欠失、挿入、および 置換の組み合わせを行ってもよい。アミノ酸の変化はまた、組換え宿主内での発 現に際するＮＴ　４のさらなる修飾を与えるもの、例えば、グリコジル化部位の 導入または移動、あるいはメンプランアンカー配列の導入（ＰＣＴＷ○８９１０ １０４１．１９８９年２月９日公開による）であってもよい。

好ましくは、例えば、天然に存在するアレル等の、自然に起きるＮＴ−４のアミ ノ酸配列変異体は、そのような自然発生的な変異体の配列をコードする、適当な 宿主細胞のゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡ内で発現されることにより組換え法で生 成される。他のＮＴ−４のアミノ酸配列変異体は、先に単離しておいたＮＴ−４ ＤＮＡに、予め決定した突然変異を起こすことにより生成される。そのような予 定の突然変異を起こす上で考慮すべき可変的な基本事項が２つある：突然変異部 位の位置と、突然変異の性質である。一般に、突然変異の位置と性質の選択は改 変されるべきＮＴ〜４特性による。例えば、候補ＮＴ−４アンタゴニストまたは スーパーアゴニストはまず、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ−３およびＮＴ−４の間で 同一または高度に保存されているアミノ酸残基を位置付けることで選択されるで あろう。これらの残基を次いで、例えば、（１）達成される結果に応じて、まず 保存性選択で、次いでよりラジカルな選択によって置換する、（２）標的残基を 欠失させる、あるいは（３）位置する部位の隣と同じまたは異なる種類の残基を 挿入するという順で、あるいはこれら（１）、（２）および（３）の任意の組み 合わせにより修飾する。

１つの役立つ方法は“ａｌａスキャニンごと呼ばれる。この方法ではアミノ酸残 基または標的残基群を同定しアラニンまたはポリアラニンで置換する。次いで、 さらなるまたは異なる変異をアラニン置換部位にまたはアラニン置換部位の代わ りに導入することにより、アラニン置換に機能的な感受性を示すドメインに一層 磨きをかける。

明らかに、例えばＮＴ−４をＮＧＦＳＢＤＮＦ、またはＮＴ−３に変換するよう な変異、および当業界で新規性および進歩性を欠くようなＮＴ−４変異体または ポリペプチド配列のどのようなものも本発明範囲に含まない。このように、アミ ノ酸配列変異を導入する部位は予め決定されているが、突然変異の性質それ自体 は予め決定されていなくともよい。例えば、特定の部位での突然変異の達成を最 適にするために、標的コドンまたは標的領域でａｌａｌミスキャニングはランダ ム突然変異誘発を行い、発現されたＮＴ−４変異体を所望の活性の最適な組み合 わせに関してスクリーニングする。

アミノ酸配列の欠失は一般に約１−３０残基、好ましくは１−１０残基の範囲で あって、典型的には隣接する。欠失はＮＴ−４の活性を改良するために、ＢＤＮ Ｆ、ＮＧＦ、ＮＴ−３およびＮＴ−４間で相同性の低い領域に導入される。実質 的にＢＤＮＦ、ＮＧＦおよびＮＴ−３と相同な部位の領域からの欠失はＮＴ−４ の生物活性をより大きく変化させるであろう。保存的な欠失の数は、影響を受け るドメインの３次構造、例えば、ベーター布状（プリーツシート）構造またはア ルファへリックス構造等を保存するように選択される。

アミノ酸配列の挿入には、単一または複数アミノ酸の配列内への挿入と同様、長 さ１残基から、千またはそれ以上の残基を含有するポリペプチドのアミノ−およ び／またはカルボキノ−末端への融合が含まれる。配列内挿入（即ち、成′！Ａ ＮＴ−４配列内への挿入）は通常、約１から１０残基、好ましくは１から５残基 、最も好ましくは１から３残基の範囲である。末端挿入の例として、組換え宿主 細胞からの成熟ＮＴ−４の分泌を容易ならしめるための、異質のＮ−末端シグナ ル配列のＮＴ−，１分子のＮ−末端への融合が含まれる。そのようなシグナルは 通常、意図する宿主細胞と同質であって、例えば、大腸菌のための５ＴＩＩまた はｌｐｐ、酵母のためのアルファ因子、および哺乳類細胞のためのヘルペスｇＤ のようなウィルスシグナルがある。他の挿入には、細菌または酵母のタンパク質 のような免疫原性ポリペプチドのＮＴ−４のＮ−またはＣ−末端への融合を含む 。

第３の変異体は、ＮＴ−４内の少なくとも１個のアミノ酸残基、そして好ましく は唯一のアミノ酸残基が除去され、異なる残基がその部位に挿入されている変異 体である。１つの例は、アルギニンおよびリシンを他のアミノ酸に置換し、ＮＴ −４をセリンプロテアーゼに対して抵抗性にし、そのことによりより安定なＮＴ −４の変異体を創製するものである。置換突然変異にとって最も興味深い部位は 、ＢＤＮＦ、ＮＧＦ、ＮＴ−３、εよびＮＴ−４に見い出されるアミノ酸が、側 鎖の大きさ、電荷または疎水性において実質上翼なるが、選択した部位が様々な 動物種のＢＤ：’、：Ｆ、ＮＧＦおよびＮＴ−３同族体間で（即ち、全動物のＮ ＧＦ。

全動物のＮＴ−３およびＢＤＮＦの間で）高い相同性を有するような部位である 。

この分析により、栄養因子の活性の分化に関与し得る残基が強調され、それ故に 、これらの部位における変異はそのような活性に影響するであろう。成熟ヒトＮ Ｔ−４（Ｎ−末端から番号付け）におけるそのような部位は以下の通りである。

挿入の例としてＮＴ−４（Ｃ７８−−＞Ｋ、Ｈ，ＯまたはＲ）（それぞ１ＳＳＥ ＱＩＤＮ○１３．１４．１５および１６）およびＮＴ−４（Ｒ８５−−＞Ｅ、Ｆ 。

Ｐ、　ＹまたはＷ）（それぞれ、ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎ０１７，１８．１９．２０お よび２１）。その他興味深い部位は全動物種のＢＤＮＦ、ＮＧＦＳＮＴ−３およ びＮＴ−４間で同一残基の部位であり、この；ンホメーションの程崖は、４因子 全部に共通の生物活性を達成Ｔるのに重要であることを示している。これらの部 位、少なくとも他の３つで同一に保存されている部位の配列に含まれるものは比 較的保存的な方法で置換される。そのような保存的置換は、表１の好ましい置換 という表示の下に記載されている。そのような置換が生物活性の変化をもたらす ときには、さらに実質的な置換、表１で模範的な置換という表示の下に記載され ている変化、または後述のアミノ酸クラスを引用して記載してつる置換を導入し 、そして生成物をスクリーニングする。

表１ 元の残基　模範的−！換　好ましい置換Ａｌａ　ｆＡｌ　ｖａｌ；　ｌｅｕ；　 ｉｌｅ　ｖｉｌＡｒｇ　ｆＲＩ　ｌｙｉ；　ｇｉｎ；　ａｓｎ　ｌｙｓＡｓｎ　 ｆＮｌ　ｇｌｎ；　ｈｉｓ；　ｌｙｓ；　ａｒｇ　ｇｌｎＡｓｐ　ｆｌ）ｌ　ｐ ｌｕ　ｇｌｕ Ｃｙｓ　ＩＣＩ　ｓ＠ｒ　５ｅｒ Ｇｌｎ　ＩＱｌ　ｍａｎ　ａｓｒ＋ Ｇｌｕ　ｆＨｌ　ａｓｐ　ａｓｐ Ｇｌｖ　ｆＧＩ　ｐｒｏ　ｐｒ。

Ｈｒｓ　ｆＨｌ　ｉｓｎ；　ｇｌｎ：　ｌｙｓ；　ａｔｇ：　ａｒｇｍｅＩ；　 ａｌａ；　ｐｈ＠ｉｌｓ＋ Ｌｙｓ　ＩＫＩ　ａｒｇ；　ｇｌｎ；　１ｌｓｎ　ａｒｇＭｅｔ　ｆＭｌ　ｌｅ ｕ：　Ｏｈ＠；　ｉｔｓ　１ｅｕｐｈ＊　ＩＦＩ　ｌｅｕ：　ｖａｌ：　ｉｌｅ ；　ａｌａ　ｌｓｕ保存的！換に特に好ましい部位１＝、成熟ヒトＮＴ−４のＮ −末端からの番号付Ｉｔｉ：ＨＬ”、Ｒ１１、Ｇ１２、Ｒ１３、Ｔ１６、Ｄ１８ 、ｗ２３、Ｔ２４、Ｄ２６、Ｔ４０、Ｌ４１、Ｒ３４、Ｔ５５、Ｒ５６、Ｈ５８ 、Ｔ５９、Ｃ７７、Ｒ７９、Ｃ８０、Ｈ８５、Ｈ８６，、’、９９、　Ｌｌ、０ ０Ｓ　Ｔ１０１、ＷＩＩＯ，Ｒ１１１、Ｈ１１２，１１１３、Ｒ１１４，１１１ ５、Ｄ１１６およびＡ１１８である。ＮＴ−４の適切な二体配塞の維持に寄与し ていない／スティン残基も、分子の酸化安定性を向上し、真書’６７２差反応を 防ぐために、一般にセリン残基て置換することができる。この節で述べた上記以 外の部位も、既に一般的に述べた欠失；たは挿入研究に適している。

機能または免疫学的な同一性の実質的な改変は、（ａ）置換部位（エリア）にお けるポリペプチドハックボーンの構造、例えば／−トまたはへりヵルコンポメー ／ヨン、（ｂ）分子の標的部位の！荷またはｉＭ水性、または（Ｃ）側鎖の太き さ等、の維持に対する影響において有意に異する置換を選択することによって達 成される。天然に存在する残基は側鎖の性質の共通点に基づいて分類される。

（１）疎水性：　ｎｏｒｌｅｕｃｉｎｅ（ノルロイノン）、ｎｅｔ、　ａｌａ、 　ｖａｌ、ｌｅｕ、　ｉｌｅ；（２）中住親水性　ａｙｓ、　ｓｅｒ、　ｔｈｒ 　：（３）酸性：　ａｓｐ、　ｇｌｕ　＋ （４）塩基性：　ａｓｎ％ｇｉｎ、、ｈｉｓ、　ｌｙｓＳａｒｇ　：（５）鎖の 方向性に影響を及ぼす残基：　Ｈ１５、ｐｒｏ・そして（６）方言性：　ｔｒｐ 、　ｔｖｒおよびｐｈｅ。

非−保存的置換は、これらのクラスの１つに以下る１メンバーを他のものに交換 することで得られるであろう。そのような置換され７：残基はまた、前記の保存 的置換部位、または好ましくはその残余の（非保存的）部位に導入さＲ４る。

ＮＴ−４ｆ１体＋：＋：、ＮＴ−４（Ｅ６７−−＞Ｓ；ｊた＋：Ｔ）（”ｉｔぞ れ５ＥＱＩＤＮ０．２２および２３）（これはＮ−結合グリコシル化部位を回加 する）：ＮＴ−４（Ｇｌ−Ｃ６１）（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２５）（このような 記載の変異体は、指摘した残基を含む断片である）：ＭＴ−４（Ｇ　１−ｆｊ　 ７１　＋ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、　２６１：　ＮＴ−４１Ｃ１７−Ｃ６１１（ＳＥ Ｑ　ＩＤ　Ｎｏ、　２７１；　Ｎs４ｆＣ１７−Ｃ７Ｂｌ １ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、２８１：　ＮＴ−４ｆＣ１フーＣ９０１＋ＳＥＱ　ＩＤ 　Ｎｏ、２９１；　Ｎゴー４１Ｃ１７−Ｃ１１９１ｆｓＥＱ@ＩＤ　Ｎｏ、３０ １；　ＮＴ− ４ｆＣ１７−Ｃｌ２１　＋　１ｓＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、　３１１：　ＮＴ−４４Ｒ １１−Ｒ２７１＋ＳＥＱ　１ＯＮｏ、　３２１；　ＮＴ−４PＲ１＋　−Ｒ３４ ＋　ｔｓＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ。

３３１；　ＮＴ４＋Ｒ３４−Ｒ５３＋　１５ＥＯＩＤ　Ｎｏ、　３４１；　ＮＴ ４１Ｃ６１−Ｃ７Ｂ１　ｆｓＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、　３５１；@ＮＴ−４ｆＲ５３ −Ｃ６１１＋５ＥＱ ＩＤ　Ｎｏ、　３６１：　ＮＴ−４Ｃ６１−Ｃ１１９１＋ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、 ３７１；　ＮＴ−４１Ｃ６１−Ｃ７８１１ｓＥＱ　ＩＤ　Ｎ潤A　３８１：　Ｎ Ｔ−４１Ｃ７Ｂ− Ｃ１１９１＋ＳＥＯＩＤ　Ｎｏ、　３９１；　ＮＴ、４Ｃ６１−Ｃ９０１ｌ５Ｅ ＯＩＤ　Ｎｏ、　４０１；　ＮＴ−４１Ｒ６０−Ｃ７８１＋rＥＱ　ｔｏ　Ｎｏ 、　４１１； ＭＴ４１に６２−Ｃ１１９１ｔｓＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、　４２１　ＮＴ−４１に６ ２−に９１１　＋ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、　４３１；　ＮＴ４PＲ７９−Ｒ９Ｂ＋ 　＋５ＥＱ ＩＤ　Ｎｏ、　４４１；　ＮＴ４１Ｒ８３−に９３１１ｓＥＱ　ＩＣＮｏ、　４ ５１；　ＮＴ−４σ１０１−Ｒ１１１１＋ＳＥＱ　ＩＯＮｏA　４６１：　ＮＴ −４ｆＧ１− Ｃ１２１１ＶＬＴＶ　ＫＲＶＲＲｌ５ＥＱＩＤＮ０．４７１；　ＮＴ−４４Ｖ４ ０−Ｃ１２１１Ｖ　ＬＴＶ　Ｋ　ＲＶＦＩ　Ｒ＋ＳＥＱ　＋モhＮ０゜ ４８１；　ＮＴＪ（Ｔ４０−Ｃ１２１１Ｓ　Ｌ　Ｔ　Ｉ　Ｋ　ＲＩ　ＲＡ　ｌ５ ＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、　４９１　ＮＴ−４（Ｔ４０−Ｃ１２１PＴ　Ｌ　Ｓ　ＲＫ 　Ａ　Ｇ　Ｒ ＲＡ　ｌ５ＥＱ　１０　Ｎｏ、　Ｓｏｌ；　Ｄ　Ｄ　ＯＳ　Ｐ　Ｉ　Ａ　ＲＲＧ εｌ５ＶＣＯ５ＶＳＤＷＶＳＡＰＤＫＤＴＡＶＤＩ　Ｋ　Ｇ　Ｄ　Ｄ　Ｖ　Ｍ　 Ｖ　Ｌ　Ｋ　Ｋ　Ｖ　Ｇ　Ｉ　Ｎ　ＨＳ　Ｖ　ＮＴ−４Ｖ４０−Ｃ１２１１＋Ｓ ＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、　５１１G　ｈＮＧＦｌｓ＋　−Ｔ４８１　ＮＴ−４ｉＶ４ ０−Ｃ１２＋ｌ　ｈＮＧＦＩＶ１０９−Ａ１２０１１ｓＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、　５ ２１；　ＭＴ４（ＡＣ７Ｂ＋　１ｓＥＱ　ＩＤ　Ｎ潤A　５３１；　ＮＴ− ４（ΔＣ６１１１ｓＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、　５４１；　ＮＴ４＋ΔＱ５４−ΔＴ５ ９１１ｓＥＱ　ｌ０Ｎｏ、　５５１（このような方法で記載した変異体は指摘し た残基をも含めて、この範囲の欠失を含む）：ＮＴ−４（ΔＲｈｏ−△Ｄ８２） （ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、５６）＋ＮＴ−４（ΔＩ（６０−Δ８８）（ＳＥＱ　Ｉ Ｄ　Ｎｏ、５７）：ＮＴ−４（二Ｗ８６−△Ｔｌ０Ｉ）（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、 ５８）：ＮＴ−４（Ｒ５３−−＞Ｈ）（ＳＥＱＩＤＮ○　５９）：ＮＴ−４（Ｒ ９１−−＞Ｈ）（ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ　６０）：ＮＴ−４（Ｖ２Ｏ３−−＞Ｆ） Ｃ５ＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ　６１）：ＮＴ−４（Ｒ８４−−＞Ｑ、Ｈ，Ｎ、Ｔ、’ｌ −またはＷ）（それぞれ、ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、６２．６３．６４．６５．６６ および６７）：ＮＴ−４（Ｄ１１６−−＞Ｅ、Ｎ、Ｑ。

Ｙ、ＳまたはＴ）（それぞｉ、ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ　６８．６９．７０，７１、 Ｔ２．７３）つ さらに、位置７０がＧ、ＥＳＤ＊たはＰ以外のアミノ酸残基で１位置７１か、へ 、Ｐまたｊ；Ｍ以外のアミノ酸残基て置換さねており、モして／′また；：Ｃ１ Ｊ８３がＲ２ＤＳＳまた：まに以外のアミノ酸残基て置換さｒているＮＴ−４、 ＝ぴに、例えば以下の配列を含む環状ポリペプチドを初めとする環化、’、：Ｔ −４７ラグメントが含まれる。

ＩＫＴＧ　（ＳＥＯＩＤ　Ｎｏ、７４１、ＥＩＫＴＧ　＋ＳＥＯＩＤ　Ｎｏ、７ ５１．ＥＩＫＴＧＮ　ｆｓＥＱ　ＩＤＮｏ、　７６１．　ＳＰＶ、　５ＰＶＫ　 ＋ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、　７７１、ＨＯＶ、ＫＳＳ、　ＫＳＳＡ　＋ＳＥＱ　Ｉ Ｄ　Ｎｏ、　７８P．　ＹＡＥＩ−ＩＫｓ　＋ＳＥＱ　ＩＤＮｏ、　７９１、Ｒ ＹＡＥＩ−ＩＫＳ　ｆｓＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、　８０１．　ＲＹＡＥＨＫＳＨ！Ｓ ＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、　ａｌｌ、　ＹＡＥgＫＳＨｌ５ＥＯＩＤ　Ｎｏ。

８２１、ＡＮＲＴＳ　＋ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、８３１．ＮＲＴ、ＡＮＲＴ　ｌ５ ＥＯＩＤＮｏ、８４１、ＮＲＴＳ　＋ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、W５１．にＥＡ。

ＫＥＡＲｌ５ＥＯＩＤ　Ｎｏ、　８６１．　ＫＥＡＲＰ　ｌ５ＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ 、　８７１、ＩＤＤＫ　＋ＳＥＯＩＤ　Ｎｏ、　８８１．５dＮＮ　ｌ５Ｅ０１ ０　Ｎｏ。

８９１、　ＴＳＥＮＮ　１ｓＥ０１０　Ｎｏ、　９０１．　ＴＳＥＮＮＫ　ｌ５ ＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、　９１１　ｔ　ｔ−＋ｔ　ＫＬＶＧ　ｌTＥＱ　１０　Ｎｏ 、　９２１゜ また、本明細書記載のＮＴ−４変異体と類似の構造を有するＢＤＮＦ、ＮＴ−３ およびＮＧＦアミノ！！２配列変異体もＸ発明に包含される。例えば、ＮＴ−４ の位置７０における突然変異と同様に、ＮＧＦＳＮＴ−３およびＢＤＮＦの類似 の位置がそれぞれり、Ｅまたｊ；Ｐ以外の残基で置換されたものである。

ＮＴ−４のアミノ酸配列変異体をコードするＤＮＡは天体起源（天妖に存在する アミノ酸配列変異体の場合）から単離さｎるつ１、または先に調製された変異体 または変異していないＮＴ−４バージヨンをニードするＤＮＡに対する部位特異 的突然変異誘発によって製造される。十分な数の隣接するヌクレオチドと同様、 所望の突然変異のＤＮＡ配列をコードする特異的オリゴヌクレオチドを用いて、 トラバースすべき欠失シャンクンヨンの両側と安定な２本鎖を形成するに十分な サイズと十分な配列の複雑さを有するプライマーを得ることにより、部位特異的 突然変異によって５Ｔ−４が生成される。一般に、変更すべき配列ジャンクンヨ ンの両側に約５〜１０残基を持つ、約２０から２５ヌクレオチド長さのプライマ ーが好ましい。一般に、部位特異的突然変異誘発の方法は当業界でよく知られて おり、アデルマンら（＾ｄｅ１ｍａｎ、　ｅｔ　ａｌ、）の文献（１９８３，Ｄ ＮＡ２：１８３）に例示されている。

理解されるように、部位特異的突然変異誘発法には、通常、１本鎖および２本鎖 の両方の形で存在するファージベクターを用いる。部位特異的突然変異誘発に用 い得る代表的なベクターには、例えば、メソンングらの記載したＭ１３ファージ ベクターが含まれる（Ｍｅｓｓｉｎｇ、　ｅｔ　ａｌ、　、　１９８１．　Ｔｈ １ｒｄ　Ｃ１ｅｖｅｌａｎｄ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕ＋＊　ｏ■ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　ａｎｄ　Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ＤＮＡ、　 （Ａ、ｗａｌｔｏｎ、　Ｅｄ、、Ｅｌｓｖｉｅｒ、　Ａｍｓ狽■窒р≠香j。

これらのファージは商業的に容易に入手可能であり、それらの使用は一般に当業 者に既知である。また、１重鎖ファージ複製起点を有するプラスミドベクター［ ヴエイラら（Ｖｅｉｒａ、　ｅｔ　ａｌ、）　、　１９８７．　Ｍｅｔｈ、Ｅｎ ｚｙｍｏｌ、１５３：３コを１本鎖ＤＮＡの調製に用いることができる。あるい は、インビトロで適当なりＮＡ断片を合成することによってヌクレオチド置換を 導入し、それを当業者に自体既知のポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）法を用いて増 幅する。

一般に、本発明に用いる部位特異的突然変異誘発は、まず、その配列内に関連タ ンパク質をコードするＤＮＡ配列を有する１本鎖ベクターを得る。所望の突然変 異配列を担持するオリゴヌクレオチドブライマーを、通常、例えばフレアら［Ｃ ｒｅＬ１９７８．　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、　７５：　５７６ ５］の方法に従い合成的に調製する。

このプライマーを次いで、１本鎖−タンパク質配列−含有一ベクターとアニーリ ングし、大腸菌ポリメラーゼＩクレノウフラグメントのようなりＮＡポリメラー ゼ酵素処理に付し、突然変異−担持鎖の合成を完成させる。このようにして１本 の鎖は元の非突然変異配列を、他の第２の鎖は所望の突然変異を担持しているへ テロ２本鎖を得る。次いで、二のへテロ２本鎖ベクターを用いて、ＪＭｌｏｌの ような適当な細胞を形質転換し突然変異した配列アレンジメントを担持する組換 えベクターを含むクーローンを選択する。

そのようなり−ローンを選択した後、突然変異した領域を除去し、タンパク質の 生産のための適当なベクター、一般に、適当な宿主の形質転換に通常用いられて いる発現ベクター内に配する。

特にＮＴ−４のアミノ酸の欠失および挿入、および置換の大多数はその特性を急 激に変化させることを期待するものでなく、１つの置換ではＮＴ−４ポリペプチ ド内の少なくとも１つの免疫エピトープが保存される。

ＮＴ−４変異体を予め特性化することはしばしば困難であるため、所望の特性を 有する変異体を同定するためにある種のスクリーニングが必要であることが理解 されるであろう。促進された栄養活性、差別的な神経細胞型特異性、組換え細胞 培養または血清における安定性（例えば、タンパク質分解的加水分解に対する） 、アンタゴニスト作用の存在、酸化安定性、収率向上を伴う分泌される能力等に 関し、スクリーニングすることができる。例えば、特定の抗体への親和性等の、 ＮＴ−４の免疫学的特性の変化を競合型イムノアッセイで測定する。候補突然変 異体の神経栄養活性の促進または抑制における変化を樹状突起の外への成長また は体外移植組繊細胞の生存率により測る。酸化還元または温度安定性、疎水性、 プロテアーゼ分解の受け易さ、または担体との凝集またはマルチマーへの凝集の し易さ等のタンパク質の性賀の改変を当業者既知の方法で分析する。

トリプノンまたは他のプロテアーゼ開裂部位をコードするアミノ酸配列を対の塩 基性アミノ酸残基、例えば、隣接するアルギニルおよびリンル残基、に関して精 査することで同定する。これらは、以下の方法でプロテアーゼに不活性化するこ とができる。これら残基の１方を他の残基、好ましくはグルタミンのような塩基 性残基またはセリンのような疎水性残基で置換する８２個の塩基性残基の１つを 欠失する。後方の塩基性残基の直後にプロリル残基を挿入する。あるいは２つの 塩基性残基の間に池の残基を挿入する。

ＮＴ−４のアミノ酸配列変異体は一般に組換え法で製造することができる。即ち 、変異体ＮＴ−４をコードする核酸を組換え細胞培養て発現させ、所望により、 変異体ポリペプチドを細胞培養から、例えば変異体活性のバイオアッセイまたは ウサギ抗ＮＴ−４ポリクローナル抗体（それは該変異体の少なくとも１個のエピ トープであって天然のＮＴ−４にも存在するエピトープと結合する）を含有する イムノアフィニティーカラムへの吸着により、精製する。４０残基またはそれ以 下の小さいペプチドフラグメントはインビトロ法で好都合に作成することができ る。

一度ＮＴ−４をコードするＤＮＡが得られれば、さらにクローニングまたは発現 させるために、通常、それを複製可能なベクターに結合させる。ベクターは、受 容能力のある宿生細胞と協力（宿主−ベクター系）して２つの機能を行うのに有 用である。１つの機能はＮＴ−４をコードするＤＮＡのクローニングを容易にす る、即ち、使用可能な量の核酸を製造する機能である。他はＮＴ−４の発現に向 けられる。これら機能のいずれかまたは両者はベクター−宿主系によって達成さ れる。ベクターは、クローニングまたは発現のために選択した宿主細胞と同様、 それが達成すべき機能に応じて様々な成分を含有する。

各ベクターは上記のＮＴ−４をコードするＤＮＡを含有する。一般に、これはそ のアミノ末端に分泌シグナルを結合している成熟形のＮＴ−４をコードするＤＮ Ａである。この分泌シグナルは好ましくは、インビボで正常にヒト細胞からのＮ Ｔ−４の分泌を指令するＮＴ−４前記列である。しかしながら、他の動物ＮＴ− ４由来のシグナル、ＮＧＦ、ＮＴ−２またはＮＴ−３のシグナル、ウィルス性シ グナルまたは同じまたは近縁種の分泌ポリペプチドからのシグナル等にも適当な 分泌シグナルがある。

もしもシグナル配列が他の神経栄養ポリペプチド由来であれば、それは図２の、 ＮＴ−２、ＮＴ−３またはＮＧＦの開始メチオニン（Ｍ）残基から成熟タンパク 質の直前のアルギニン（Ｒ）残基までの間の前駆体配列、あるいはこれら前駆体 の相同性領域を考慮した、これら前駆体いずれか２つまたはそれ以上の配列から のコンセンサスまたはコンビネーション配列である。そのような前駆体領域のた めのＤＮＡを成熟ＮＴ−４をコードするＤＮＡのリーディングフレームに結合さ せる。

発現およびクローニングベクターはベクターを１またはそれ以上の選択した宿主 細胞内で複製させるヌクレオチド配列を含有する。一般に、クローニングベクタ ー内で、この配列はベクターを宿生染色体と独立に複製させるものであり、複製 起点または自律的な複製配列を有する。そのような配列は様々な細菌、酵母およ びウィルスに関して周知である。周知のプラスミドｐＢＲ３２２の複製起点は大 多数のグラム陰性細菌に有用であり、酵母のための２μプラスミド複製起点およ び様々なウィルス複製起点（ＳＶ４０．　ポリオーマ、アデノウィルス、ｖＳＶ またはＢＰＶ）は哺乳類細胞のためのクローニングベクターに有用である。哺乳 類発現ベクターには複製起点は不要である（ＳＶ４０複製起源は、通常、ただ、 それが早期プロモーターを有するという理由で用いられている）。大多数の発現 ベクターは“シャトル”ベクターであり、即ち、それらは少なくとも１種類の生 物内で複製可能であるが、他の生物にも発現のためにトランスフェクションする ことができるものである。例えば、あるベクターは大腸菌にクローンすることが でき、それは宿生染色体と独立して複製することはできないが、発現のために酵 母または哺乳類細胞を形質転換（トランスフェクション）することができる。

ＤＮＡは宿主ゲノムへの挿入によってもクローニングすることができる。これは 棹菌種で容易に行え、例えば、棹菌ゲノムＤＮＡに見いだされる配列に相補的な りＮＡ配列をベクターに含有させることで行われる。細菌をこのベクターでトラ ンスフェクションすると、ゲノムとの同種組換えとＮＴ−４ＤＮＡの挿入が起こ る。しかしながら、ＮＴ−４をコードするゲノムＤＮＡを回収するには、制限酵 素によるＮＴ−４ＤＮＡの切り出しが必要なので、遺伝子外で復製したベクター のＤＮＡの回収よりも複雑である。

発現ベクターおよびクローニングベクターは選択遺伝子または選択可能マーカー を含有すべきである。一般に、これはベクターで形質転換された宿主細胞の生存 または増殖に必要なタンパク質をコードする遺伝子である。この遺伝子の存在に よって、ベクターを失った宿主細胞はすべて、確実に、形質転換された細胞を凌 いで増殖または再生産するという利点を確実に得ることができない。代表的な選 択遺伝子は、（ａ）アンビンリン、ネオマイシン、メトトレキサアートまたはテ トラサイクリン等の抗生物質または他の毒素に対する耐性を付与するタンパク質 、（ｂ）相補性栄養要求欠損、または（Ｃ）棹菌のためのＤ−アラニンラセマー ゼ遺伝子等の、複合培地から得ることができない重要な栄養素の供給、等のタン パク質をコードする遺伝子である。

酵母で用いるための適当な選択遺伝子は、酵母プラスミド（ＹＲｐ７）に存在す るｔ　ｒｐｌ遺伝子である［スチンコムら（Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂ　ｅｔ　ａｌ 、　）　、　１９７９．Ｎａｔｕｒｅ２１１！２：３９：キックスマンら（Ｋｉ ｎｇｓｍａｎ、　ｅｔ　ａｌ、）、　１９７９．　Ｇｅｎｅ　７：　１４１：チ ェンバーら（Ｔｓｃｈｅｍｐｅｒ、　ｅｔ　ａｌ、　）、　１９８０．　Ｇｅｎ ｅ　１０：１５７］　ｏ　ｔ　ｒ　ｐ１遺伝子はトリプトファン中で成長する能 力を欠く酵母の突然変異種、例えば、ＡＴＣＣＮｏ、４４０７６またはＰＥＰ４ −１　（ジョーンズ（Ｊｏｎｅｓ）　１９７７、　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　８ｔ１＋ ：１２）＋：選択マーカーを与える。酵母宿主細胞ゲノムにｔ　ｒｐｌ病巣が存 在することは、トリブトファン不在下での培養による形質転換の検出に有効な状 況を与える。同様にＬｅｕ２欠損酵母種（ＡＴＣＣ２０，６２２または３８．６ ２６）はＬｅｕ２遺伝子を担持する既知のプラスミドにより相補される。

哺乳類細胞にとって適当な選択マーカーの例は、デヒドロ葉酸レダクターゼ（Ｄ ＨＦＲ）またはチミジンキナーゼである。そのようなマーカーはＮＴ−４核酸を 取り込む能力のある細胞の同定を可能にする。哺乳類細胞の形質転換体を、マー カーを取り込むことによってのみ形質転換体が生存し得るという、選択圧の下に 置く。形質転換体を培地内の選択剤の濃度が連続的に変化する条件下に置くこと により、選択圧を課し、それにより選択遺伝子とＮＴ−４をコードするＤＮＡの 両者を増幅させる。増幅は、成長に重要なタンパク質の生産がより大きく損なわ れた遺伝子が、連続的な組換細胞の世代の染色体内にタンデムに反復される過程 を指す。増大量のＮＴ−４が増幅されたＤＮＡから産生される。

例えば、ＤＨＦＲ選択遺伝子で形質転換された細胞はまず、ＤＨＦＲの競合的拮 抗物質であるメトトレキサート（Ｍｔｘ）を含有する培養培地で培養される。

この場合、適当な宿主細胞はＤＨＦＲ活性を欠くチャイニーズハムスターの卵巣 細胞（ＣＨＯ）細胞系であり、これはウララブ（Ｉｌｒｌａｕｂ）およびチャッ シン（Ｃｈａｓｉｎ）［１９８０，Ｐｒｏｅ、Ｎａｔｌ、Ａｅａｄ、Ｓｃｉ、　 ７７：　４２１６］によって製造され、市販されている。

特に有用なりＨＦＲは〜１ｔｘに高度に抵抗性の突然変異ＤＨＦＲ（ＥＰｌ　１ ７゜０６ＯＡ）である。次いで、形質転換された細胞を漸増濃度のＭｔｘにさら す。

このことでＤＨＦＲ遺伝子の複数コピーが合成され、同時に、ＮＴ−４をコード するＤＮＡのような他のＤＮＡを含有する発現ベクターの複数コピーが合成され る。あるいは、ＮＴ−４、ＤＨＦＲタンパク質、およびアミノグリコシド３°ホ スホトランスフエラーゼ（ＡＰＨ）をコードするＤＮＡ配列を含有する発現ベク ターで形質転換された宿主細胞をカナマイシンまたはネオマイシンまたはＧ４１ ８のようなアミノグリコンド抗生物質を含有する培地での細胞増殖により選択す る。真核性細胞は通常、内因性Ａ　Ｐ　Ｒ活性を発現しないので、ＡＰＨタンパ ク質をコードする遺伝子（一般にｎｅｏ’遺伝子類と称する）は、ベクターで形 質転換された宿主形質転換体を同定し得る、広範な真核性宿主細胞の選択可能マ ーカーとして優先的に用いられている。

ＮＴ−４の組換えを椎動物細胞培養での製造に適した他の方法、ベクターおよび 宿主細胞は［ゲッシングら（Ｇｅｔｈｊ、ｎｇ、　ｅｔ　ａｌ、）　、　１９８ １．　Ｎａｔｕｒｅ　２９８：６２０；マンティら（Ｍａｎｔｅｉ、　ｅｔ、　 ａｌ、）　、　１９７９．　Ｎａｔｕｒｅ　２８１：４０：　レビンソンら（Ｌ ｅｖｉｎｓｏｎ。

ｅｔ　ａｌ）、　ＥＰ　１１７．０６０＾ａｎｄ　１１７．Ｏ，＋８＾コに記載 されている。、ＮＴ−４の哺乳類細胞培養での発現に特に適したプラスミドはｐ ＲＫ５（欧州特許公開第３０７．　２４７号）＊たはｐＳＶ１６Ｂ　（ＰＣＴ公 開Ｗ０９０１０８２９１号、６／１３／９１公開）である。

発現ベクターはクローニングベクターと異なり、宿主生物によって認識され、Ｎ Ｔ−４核酸に機能的に結合したプロモーターを含有する必要がある。プロモータ ーは構造遺伝子の開始コドンから上流（一般に約１００から１０００ｂｐ）に位 ！する非翻訳配列であり、それらのコントロール下にある核酸の転写および翻訳 をコントロールする。それらは一般に、誘導可能なものと構成的なものの、２種 類に分類される。誘導可能なプロモーターは、培養条件のある変化（例えば栄養 物質の存在または不在、あるいは温度変化）に応じてそれらのコントロール下に ある核酸の転写および翻訳レベルの増大を開始するプロモーターである。現在で は、様々な有能な宿主細胞が認識する多くのプロモーターが知られている。これ らのプロモーターはそれらの起源の遺伝子から、制限消化によって除去した後、 ＮＴ−４の開始コドンの５°に挿入することでＮＴ−４をコードするＤＮＡと操 作可能に結合される。これはゲノムＮＴ　４プロモーターが使用不可能であるこ とを意味するものではない。しかしながら、通常、異種のプロモーターの方がＮ Ｔ−４の大きい転写と高収率を与えるであろう。

核酸はそれが他の核酸配列と機能的な関係に！かれているとき、それは機能的（ 操作可能）に結合していると言う。例えば、プレ配列または分泌リーダーはそれ がポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現されるとき暗号配列 と機能的に結合しており、プロモーターまたはエンハンサ−は、それが配列の転 写に影響するとき暗号配列と機能的に結合しており、またはりホソーム結合部位 は、それが翻訳を促進するように位！するとき、暗号配列と機能的に結合してい ると言う。一般に機能的に結合しているということは、結合しているｔ）ＮＡ配 列が隣接していること、そして分泌リーダーの場合には、それが隣接しておりか つ読み取り相内にあることを意味する。結合は、好都合な制限部位に結合させる ことで達成される。もしそのような部位が存在しない場合には、従来の実施に従 い合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカ−を用いる。

原核性宿主細胞に用いるのに適したプロモーターには、βラクタマーセおよびラ クトースプロモーター系［チャンら（Ｃｈａｎｇ、）　１９７ｇ、　Ｎａｔｕｒ ｅ　２７５：６１５：ゲラデルら（Ｇｏｅｄｄｅｌ　ｅｔ　ａｌ、　）　、　１ ９７９．　Ｎａｔｕｒｅ　２８１：５４４］　、アルカリホスファターゼ、トリ プトファン（ｔｒｐ）プロモーター系ロゲッデルら（Ｇｏｅｄｄｅｌ、　ｅｔ　 ａｌ、　）　、　１９８０、〜ｕｃｌｅｉｃ、Ａｃ１ｄｓ、Ｒｅｓ、　８：４０ ５７およ部ＰＯ出願公開第３６．７７６号コ、−ｔ　ａ　ｃプロモーターのよう なハイブリッドプロモーター系［ボアら（ｌ　ｄｅ　Ｂｏｅｒ、　ｅｔ　ａｌ） 、。

１９８３、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ゛１．　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ：、　８０：：１ コがある。しかしながら他の既知の細菌性プロモーターも適する。それらのヌク レオチド配列は公開されており、それにより、必要な制限部位を供給する任意の リンカ−またはアダプターを用いて、当業者はそれらをＮＴ−４をコートするＤ ＮＡに機能的に結合させることがてきる［ンーベンリストら（Ｓｉｅｂｅｎ］ｉ ｓｔ　ｅｔ　ａｌ、　）　、　１９８０．　Ｃｅ１ｌ　２０：２６９］　ｏ細菌 系で用いることができるプロモーターは、ＮＴ−４をコードするＤＮＡに機能的 に結合したンヤインーダルカーノ（Ｓ、Ｄ、　）配列を含有するだろう。

酵母宿主細胞に用いる適当なプロモーターの例には、３−ホスホグリセラードキ ナーゼのためのプロモーター上ソツマンら（Ｈｉｔｓｅｍａｎ、　ｅｔ　ａｌ、 　）　、　１９８０　Ｊ、　ＢｉｏＩ　Ｃｈｅｗ、　２５．ｉ：２０７３］また は他のグリコリティック（糖分解）酵素ｍ　７ヘスら（Ｂｅｓｓ、　ｅｔ　ａｌ 、　）　、　１９６ｇ、　Ｊ、　Ａｄｖ、　Ｅｎｚｙｍｅ　Ｒｅｇ、　７：１４ ９：ホランド（Ｈｏｌｌａｎｄ）　、@１９７８．８ｉ ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１７：４９００］であって、例えば、エノラーゼ、グリ セルアルデヒド−３−ホスフェート、デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピル バートデヵルボキンラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グツコース−６−ホスフ アートイソメラーセ、３−ホスホグリセラードキナーゼ、ビルバートキナーゼ、 トリオセホスファートイソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼおよびグル コキナーゼがある。

培養条件により転写が制御されるという利点をも有する誘導可能な酵母プロモー ターは、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソチトクロームＣ１酸ホスフアター ゼ、窒素代謝に関連する分解可能な酵素、メタロチオナイン、グリセルアルデヒ ド−３−ホスファートデヒドロゲナーゼ、およびマルトースおよびガラクトース 利用に関連する酵素類のプロモーター領域がある。酵母発現に用いられる適当な ベクターおよびプロモーターはハイラマン（Ｒ，Ｈｉｔｚｍａｎ、　ｅｔ　ａｌ 、　）の欧州特許７３＝６５７Ａに記載されている。酵母エンハンサ−も酵母プ ロモーターと用いると便利である。

哺乳類宿主細胞内でのＮＴ−４をコードするＤＮＡの転写はポリオーマ、サイト メガロウィルス、アデノウィルス、レトロウィルス、Ｂ−型肝炎ウィルスおよび 最も好ましくはンミアンウィルス４０　（ＳＶ４０）等、ウィルスゲノムがら、 あるいは、アクチンプロモーターのような、異種の哺乳類プロモーターから得ら れたプロモーターによってコントロールされる。ＳＶ４０ウィルスの早期および 後期プロモーターはＳＶ４０ウィルスの複製起点をも含む、ＳＶ４０制限断片と して好都合に得ることができる［ファイア−ら（Ｆｉｅｒｓ、　ｅｔ　ａｌ、） 　、　１９７ｇ、　Ｎａｔｕｒｅ　２７３：　１１３］。勿論、宿主細胞または 近縁種からのプロモーターも本発明には使用可能である。

哺乳類宿主細胞内でのＮＴ−４をコードするＤＮＡの転写はエンハンサ−配列を 該ベクターに導入することで促進される。エンハンサ−は通常、約１Ｏ−３００ ｂｐのヌクレオチド配列であって、その相対的な方向性および位置とは無関係に プロモーターに作用してその転写を増大させる。今日、多くの哺乳類遺伝子由来 のエンハンサ−配列が知られている（グロビン、ニラスターゼ、アルブミン、α フェトプロティン、およびインシュリン）。しかしながら、真核性細胞ウィルス 由来のエンハンサ−を用いるのが普通である。その例にはＳ〜・′４０の複製起 点の後方部位にあるエンハンサ−（ｂｐｌｏｏ−２７０）　、サイトメガロライ スルの早期プロモーターエンハンサ−１複製起点の後方部位にあるポリオーマエ ンＩ＼ンサー、およびアデノウィルスエンハンサ−がある。このエンハンサ−は ＮＴ−４をコードする配列の５°または３゛位置内にスプライスすることができ るが、プロモーターの５゛側が好ましい。

真核性宿生細胞（酵母、カビ（真菌）、昆虫、植物、動物、ヒトまたは他の多核 性生物由来の有核細胞）内で用いる発現ベクターは転写の終結とｍＲＮＡの安定 化のための配列をも含有する必要がある。そのような配列は通常、真核性または ウィルス性ＤＮＡまたはｃＤＮＡの５′および時には３°非翻訳領域から得るこ とができる。これらの領域はＮＴ−４をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分内でポ リアデニル化セグメントとして転写される領域を含む。３°非翻訳領域もまた転 写終止部位を有する。

本明細書記載のベクターのクローニングまたは発現に適した宿主細胞は原核性細 胞、酵母または上記の高等な真核性細胞である。適当な原核性細胞には、グラム 陰性またはグラム陽性生物、例えば、大腸菌や棹菌がある。好ましいクローニン グのための宿主細胞はＥ、ｃｏｌｉ　２９４　（ＡＴＣＣ３１，４４６）である が、他のグラム陰性またはグラム陽性原核性細胞、例えば旦８臼其Ｂ、旦ヰＸ１ ７７６　（ＡＴＣＣ３１，５３７）、旦、ｃｏｌｉＷ３１１０　（ＡＴＣＣ２７ ，３２５）　、ンｘ−トモナス種または５ｅｒｒａｔｉａ　ａ＋ａｒｃｅｓａｎ ｓも適する。

原核性細胞に加えて、繊維状真菌、または酵母はＮＴ−４をコードするベクター に適する。５ａｃｃｈａｒｏＩｌｌｙｃｅｓ　ｅｅｒｅｖｉｓｉａｅまたは通常 のノくン酵母が最も普通に用いられる下等真核性宿主微生物である。しかしなが ら多くの他の属、種および株も普通に手にいれ、本発明に用いることができる。

ＮＴ−４の発現に適した宿主細胞は多細胞生物から導かれる。そのような宿主細 胞は複雑なプロセシングとグリコノル化活性を有する。基本的には、それがを椎 動物または無を椎動物培養のいずれであろうと、高等真核細胞培養は有効である が、ヒト等の哺乳類細胞が奸才しい。培養されたそのような細胞の販売は自体既 知である。［Ｔｉ５ｓｕｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ、　１９７３．　Ｋｒｕｓｅ　ａｎ ｄ　Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ、　Ｅｄｓ、、＾ｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、　Ｎｃｖ 　Ｙｏｒｋコ。有用な哺乳類宿主細胞系はＶＥＲＯおよびＨｅＬａ細胞、チャイ ニーズハムスター卵巣細胞、Ｗ１３８．ＢＨＫ、ＣＯ５−７，ＭＤＣＫ細胞系お よびヒト胚腎細胞系２９３である。

宿主細胞は上記の発現またはクローニングベクターで形賀転換されプロモーター の誘導または増幅された遺伝子を含有する形質転換体の選択に適当な、通常の栄 養培地内で培養する。温度、ｐＨ等の培養条件はクローニングまたは発現のため に選択した宿主細胞に、従来用いられているものが適し、そしてそれらは、当業 者に明らかであろう。

ＮＴ−４は、分泌シグナルなしに直接発現されたときは宿主細胞の溶解液（リゼ ート）から回収されるが、分泌タンパク質として培養培地から回収することが好 ましい。ヒト起源でない組換え宿主細胞内でＮＴ−４が発現された場合、該ＮＴ −４は、ヒト起源のタンパク質を全く含んでいない。しかしながら、タンパク質 として実質上、均一な製品を得るためにはＮＴ−４を組換え細胞タンパク質から 精製する必要がある。第１工程として、培養培地またはリゼートを遠心して沈澱 性の細胞層を除去する。次いで、例えば、イムノアフィニティーまたはイオン交 換カラムによるフラクション処理：エタノール沈澱：逆相ＨＰＬＣニジリカゲル またはＤＥＡＥのような陽イオン交換樹脂を用いるクロマトグラフィー：クロマ トフオーカシング：　５ＤＳ−ＰＡＧＥ　：硫酸アンモニウム沈澱：または５ｅ ｐｈａｄｅｘ　Ｇ−７５等を用いるゲル電気泳動等によって共存する可溶性タン パク質からＮＴ−４を精製する。天然ＮＴ−４に対する残基の欠失、挿入または 置換のある変異体は、変異による実買上の特性の変化を考慮し、天然ＮＴ〜４と 同様に回収される。例えば、他のタンパク質、例えば細菌またはウィルス抗原、 とＮＴ−４との融合物の製造は該抗原に対する抗体を含有するアフィニティーカ ラムを用いて融合タンパク質を吸着させることができるので、精製を容易にする 。フェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）等のプロテアーゼインヒビ ターは、精製途中でのプロテアーゼによるタンパク質分解を阻害するので有用で あり、偶然の汚染の増大を避けるために抗体を含有させてもよい。当業者は天然 ＮＴ−４に適した精製法は、組換え細胞培養内でのＮＴ−４またはその変異体の 特性の変化を考慮して、改良する必要があるということを理解するであろう。

ＮＴ−４および改良形ＮＴ−４のペプチドフラグメントも本発明の範囲に含まれ る。約４０アミノ酸残基までのペプチドフラグメントをインヒドロ合成によって 常法通り製造することができる。

共有結合的な修飾はＮＴ−４ポリペプチドまたはペプチドフラグメントの標的ア ミノ酸残基を、選択した側鎖またはＮ−またはＣ−末端残基と反応し得る有機誘 導化剤と反応させることによって行う。

ンスティル残基は、最も一般的には、クロル酢酸またはクロル酢酸アミドのよう なα−ハロアセテート類（および対応するアミン類）と反応させ、カルボキンメ チルまたはカルボキンアミドメチル誘導体を得る。ンスティル残基はまた、プロ モトリフルオロアセトン、α−ブロモ−β−（５−イミドジイル）プロピオン酸 、クロロアセチルホスフェート、Ｎ−アルキルマレイミド、３−ニトロ−２−ピ リノル　／スルフィド、メチル　２−ピリジル　ジスルフィド、ｐ−クロロ水銀 ベンゾアート、２−クロロ水銀−４−ニトロフェノールまたはクロロ−７−二ト ロベンゾー２−オキサ−１，３−ジアゾール等との反応によっても誘導体化され る。

ヒスチ／ル残基はｐＨ５５−７，Ｑで、該ヒスチジンの側鎖に比較的特異的な試 薬であるジエチルビロカーボナートと反応させることて誘導体化される。ｐ−プ ロモフェナ／ルブロミドも有用である；反応は好ましくはｐＨ６，ｏて０．ＩＭ 　カコジル酸ナトリウム中で行う。

リノルおよびアミノ末端残基はクエン酸または他のカルボン酸無水物と反応させ る。これらの試薬による誘導体化はりンン残基の電荷の逆転効果がある。α−ア ミノ含有残基の誘導体化に適する他の適当な試薬には、メチルビコリンイミダー トのようなイミドエステル類、ビリドキサルホスフェート：ピリドキサル、タロ ロボロハイドライド、トリニトロベンゼンスルホン酸、○−メチルイソウレア、 ２．４−ペンタン７オンおよびグリコキノラードによるトランスアミナーセー触 媒反応である。

アルギニル残基は１または数個の常用の試薬との反応で修飾される。それらの試 薬には、フェニルグリオキサル、２，３−ブタンジオン、１．２−シクロヘキサ ンジオンおよびニンヒドリンが含まれる。グアニジノ官能基の高いｐＫ、値の故 に、アルギニンの誘導体化には、反応を塩基性条件下で行う必要がある。さらに 、これらの試薬をアルギニンイプンロンーアミノ基と同様、リジン基と反応させ てもよい。

チロノル残基の特異的な降飾は、芳香性ジアゾニウム化合物またはテトラニトロ メタンとの反応にり、チロシン残基へのスペクトルラベルを導入するという利益 を伴って行い得る。最も普通には、Ｎ−アセチルイミダゾールおよびテトラニト ロメタンを用い、それぞれＯ−アセチルチロンル種および３−ニトロ誘導体を得 る。チロノル残基を１２５Ｉまたは１３１１でヨウ素化するとラジオイムノアッ セイに用いる標識タンパク質が得られるが、上記のクロラミンＴ法が適当である 。

カルボキシル側鎖基（アスパラチルまたはグルタミル）は、１−シクロへキシル −３−（２−モルホリノ−４−エチル）カーポジイミドまたは１−エチル−３− （４−アゾニア−４，４−ジメチルペンチル）カーポジイミド等のカーポジイミ ド類（Ｒ’　−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｒ’　）との反応によって選択的に修飾される。さ らに、アスパルチルおよびグルタミル残基はアンモニウムイオンとの反応でアス パラギニルおよびグルタミル残基に変換される。

２機能性試薬による誘導体化は、抗ＮＴ−４抗体の精製のために、ＮＴ−４を水 不溶性支持体マトリックスまたは表面にクロスリンキングさせる、またはその逆 のために有用である。通常用いられるクロスリンキング剤には、例えば、１゜１ −ビス（ジアゾアセチル）−２−フェニルエタン、グルタルアルデヒド、例えば ４−アジドサリチル酸とのエステルのようなＮ−ヒドロキシスクシンイミドエス テル、例えば３．３゛　−ンチオビス（スクシンイミジルプロピオナート）のよ うなンスクシンイミシルエステルを始めとするホモ２１１！能性イミドエステル 、およびビス−Ｎ−マレイミド−１，８−オクタンのような２機能性マレイミド 類がある。メチル−３−Ｅ（ｐ−アジドフェニル）ンチオコプロビオイミダート のような誘導体化剤は光の存在下でクロスリンキングを形成し得る光活性な中間 体を与スる。あるいは、臭化ノアンー活性化炭仕水素のような反応性水不溶性マ トリクスと文献（米国特許第３．９６９．２８７　＋　３．６９１．０１６．４ ．１９５．１２８；　４．２’＋７．６４２；　４−２２９゜５３７、または４ ．３３０．４４０４）　記載の反応性基賀を用いてタンパク質の免疫原化を行う ことができる。

グルタミン酸およびアスパルチル残基はしばしば脱アミド化されて対応するグル タミルおよびアスパルチル残基になる。あるいは、これらの残基をおだやかな酸 性条件下で脱アミド化してもよい。これらの残基のいずれの形も本発明の範囲に 含まれる。

他の修飾には、プロリンおよびリシンのヒドロキシル化、セリルまたはスレオニ ル残基の水酸基のりん酸化、リシン、アルギニンおよびヒスチジン側鎖のαアミ ノ基のメチル化［フレトン（Ｃｒｅｇｈｔｏｎ）　、　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：　５ ｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、　１ ．　Ｈ，Ｆｒｅｅｍａｎ　＆　Ｃ，ｏ、　、　Ｓａｎ　Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、　 ｐｐ、　７９−８６）　、m−末端アミ ンのアセチル化、および任意のＣ−末端カルボキシル基のアミド化が含まれる。

ＮＴ−４はまた、非タンパク性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ポ リプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン類に、米国特許出願ｉ０７／２ ７５．２９６：　まメ：は米国特許第４．６４０．８３５　：　４．４９６．６ ８９．４．３０１．１４４＋　４．６０．４１７：　４．７９１．１X２ 、または４．１７９．３３７号に記載の方法で共有結合的に結合させる。

純化（精製）形のＮＴ−４、即ち、実質上池のポリペプチドまたはペプチドを伴 わないＮＴ−４を、例えばコアセルベーション法または相間重合等（例えば、そ れぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセル、およ びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル）によって調製したマイク ロカプセル、コロイド状薬物デリバリ−システム（例えば、リポソーム、アルブ ミンミクロスフオア、マイクロエマルション、ナノ−粒子およびナノカプセル） またはマクロエマルンヨシに入れることができる。そのような方法は文献（Ｒｗ ｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ、１６ｔ ｈ　ｅｄｉｔｉｏｎ、１９８０．　（＾、０ｓｏｌ　Ｅｄ、　j）に記 載されている。

ＮＴ−，４には神経細胞の生存率を向上する薬剤または外方成長を刺激する薬剤 としての用途が見つかった信じられる。従って、この物質は、アルツハイマー症 、パーキンソン病、ハンチ＞トン病、ＡＬＳ、末梢ニューロパシー（神経障害） 、およびその他の中枢、末梢または運動神経における神経細胞の壊死または喪失 を特徴とする他の症状の治療に有用である。加えて、これは、例えば、火傷や怪 事等の外傷条件により、糖尿病、腎不全、ガンやＡＩＤＳの化学療法の毒性作用 で損傷された神経細胞等の、損傷神経細胞の治療にも有用である。それはまた、 インビトロで神経細胞を培養する場合に培養培地に加える成分として有用である 。

最後に、ＮＴ−４製品は、放射性ヨウ素、酵素、発蛍光団、スピン標識等で標識 すると、ＮＴ−４のアッセイおよび競合型受容体結合アッセイにおける標準とし て有用である。

治療のためのＮＴ−４製剤は所望の純度のＮＴ−４を任意の生理学的に許容され る担体、賦形剤または安定化剤（（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’　ｓ　Ｐｈａｒｍａｃ ｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ。

前掲）と混合し、凍結乾燥ケーキまたは水溶液の剤形にして調製される。許容さ れる担体、賦形剤または安定化剤は用いられる用量および濃度において受容者に 非毒性であり、それには、りん酸、クエン酸、および他の有機酸のバッファー： アスコルビン酸等の抗酸化剤：低分子量（約１０残基以下）のポリペプチド、血 清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン等のタンパク質：ポリビニルビロ リドンのような親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギ ニンまたはリジン等のアミノ酸；単糖類：二糖類およびグルコース、マンノース およびデキストリン等の他の炭化水素：マンニトールやソルビトール等の糖アル コール：ナトリウム等の塩形成性カウンターイオン：および／またはＴｖｅｅｎ 、　ＰｌｕｒｏｎｉｃｓまたはＰＥＧ等の非イオン性界面活性剤が含まれる。

インビボに用いられるＮＴ−４は滅菌されている必要がある。これは凍結乾燥の 前または後で滅菌ろ過メンプランに通し、再構築することで容易に行われる。

ＮＴ−４は通常、凍結乾燥形で保存される。

治療用のＮＴ−４組成物は通常、滅菌のための栓を有する容器、例えば、皮下注 射針を突き刺すことができる静注溶液バッグまたはバイアルに入れられる。

所望により、ＮＴ−４をＮＧＦ、ＮＴ−３および／またはＢＤＮＦを含む他の神 経栄養因子と混合するか、あるいは−緒に投与し、他の変性性神経疾患の治療法 と共に用いる。

ＮＴ−４またはＮＴ−４抗体の投与経路は周知の方法により、例えば、静脈、腹 腔内、脳内、筋肉内、眼内、動脈内または病巣内経路への注射または注入、局所 適用、または下記の徐放性システムである。ＮＴ−４はＣＮＳの液体貯蔵所への 連続注入によって投与されるが、ホーラス注射も受容し得る。ＮＴ−４は脳小室 へ投与するか、さもなくば、ＣＮＳまたはを髄液に導入する。それはポンプのよ うな連続投与手段を用い、インドウニリング（ｉｎｄｖｅｌｌｉｎｇ）カテーテ ルによって投与するか、あるいは例えば徐放性ビヒクルの脳内移植のような移植 によって投与すべきである。より詳しくは、ＮＴ−４は慢性的に移植されている カニユーレを通して注射するか、浸透圧ミニポンプの助けを借りて慢性的に注入 する。タンパク質を小さい管を通して脳小室に供給する皮下ポンプも利用可能で ある。高精度のポンプは皮膚を通し、て再充填され、その供給速度は外科的処置 の介在なしにセットし得る。適当な投与プロトコルおよび皮下ポンプ装置または 完全に移植された薬物供給システムを通しての連続的脳小室注入を始めとする供 給システムの例は、アルツハイマー轡者、および文献５ハルバウ（Ｈａｒｂａｕ ｇｈ）　、　１９８７．　Ｊ、Ｎｅｕｒａｌ　Ｔｒａｎｓｍ、　５ｕｐｐ１．２ ４：　２７１：　ＤｅＹｅｂｅｎｅｓ、　ｅｔ　ａｌ、、　１９８７．　Ｍｏｖ 、　ＤｉｓｏｒпA　２：　１４ ３コ記載のパーキンソン病のための動物モデルへのドパミンアゴニスト、コリン アゴニストの投与に用いられるものである。ＮＴ−４抗体も同様の方法、または 血流またはリンパへの投与によって投与される。

徐放性製剤の適当な例には、例えば、フィルム、マイクロカプセル等の形の成型 された半透成型ポリマーマトリックスがある。徐放性マトリックスには、ポリエ ステル、ハイドロゲル、ポリラクチド（米国特許第３．７７３．９１９．　ＥＰ ５８．４８１）　、Ｌ−グルタミン酸とガンマエチル−Ｌ−グルタミン酸カンマ エチルとのコポリマー（ンドマンら（Ｓｉｄｍａｎ、ｅｔ　ａｌ、　）　、　１ ９８３．　Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ　２２：５４７）、ポリ（２−ヒドロキシエ チル−メタクリレート）（ランガーら（Ｌａｎｇｅｒ、　ｅｔａｌ、）　、　１ ９８１．　Ｊ、Ｂｉｏｍｅｄ、Ｍａｔｅｒ、Ｒｅｓ、１５：　１６７：ランガー （Ｌａｎｇｅｒ）　、　１９ｇ２．Ｃｈｅ撃撃戟B Ｔｅｃｈ、　１２：　９ｇ）、エチレンヒニルアセテート（Ｌａｎｇｅｒ　ｅｔ 　ａｌ、　、同）、ポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３．９８ ８Ａ）がある。徐放性ＮＴ−４組成物にはリポソームにくるまれたＮＴ−４も含 まれる。ＮＴ−４含有リポソームは自体既知の方法で調製される［エプスタイン ら（Ｅｐｓｔｅｉｎ　ｅｔ　ａｌ、）　、　１９８５．　ＰｒｏｃＮａｔｌ、＾ ｃａｄ、ｓｃｉ、　８２：　３６８８；　ハヮンら（Ｉｌｗａｎｇ、　ｅｔ　ａ ｌ、　）　、　１９８０．　Ｐｒｏｃ、　Ｎａ狽戟Oｃａｄ。

Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　７７：　４０３０：　ＤＥ　３．２１ｇ、　１２１Ａ；　Ｅ Ｐ　５２３２２＾：　ＥＰ　３６６７６Ａ；　ＥＰ　８８０S６Ａ：　ＥＰ　１ ４ ３９４９Ａ＋　ＥＰ　１４２６４１Ａ；　日本特許出願第８３−１１８００８号 ；米国特許第４．４８５．０４５号オヨび篤４．５４４５４５号：およびび１０ ２．３２４Ａコ。通常、リポソームは脂質含量が約３０ｍ０１％コレステロール の小さい（約２００−８００オングストローム）単一層タイプであり、ＮＴ−４ 治療に最適な割合に調整したものが選択される。

治療に用いられるＮＴ−４の有効量は、例えば、治療目的、投与経路、および患 者の状態等に依存するであろう。従って、治療者は最適な治療効果を得るよう、 用量を定量し、投与経路を改良することが必要である。典型的な１日あたりの用 量は上記の因子に応じて、約１μｇ　／ｋｇから１００　Ｑ１ｇ／ｋｇまたはそ れ以上の範囲であろう。一般に、臨床医は、神経細胞機能を修復し、維持し、そ して好適に、神経細胞機能を再確ユするだけの量のＮＴ−４を投与するであろう 。この治療の進行は従来からの分析により容易に改良し得る。

ＮＴ−４に対するポリクローナル抗体はＮＴ−４とアジュバントとを複数回、動 物に皮下（Ｓ　Ｃ）または腹腔内（ｉｐ）注射することで惹起される。ＮＴ−４ または、標的アミノ酸配列を免疫すべき増白で免疫原性を有するタンパク質、例 えば、キーホールリンベソトヘモンアニン、血清アルブミン、ウンチログロブリ ン、または大豆トリプシンインヒビターに、２機能性試薬または誘導体化試薬、 例えば、マレイミドベンゾイルスルホサクシンイミドエステル（システィン残基 を介して結合）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介して結合）、 グルタルアルデヒド、無水コハク酸、５ＯＣ１２またはＲ’Ｎ＝Ｃ＝ＮＲを用い て結合させることが有用である。

動物に、免疫原性コンシュケート１ｍｇまたは１μｇ（それぞれ兎またはマウス に対して）と、３容量のフロイント完全アジュバントを混合し、その溶液を複数 の支内部位に注射することで、動物を該コンジュゲートまたは誘導体に対して免 疫する。１力月後、元の、フロイントの完全アジュバント中コンジュゲートのの 約１１５から１／１０量を動物の皮内の複数箇所にブースター注射する。７〜１ ０日後に動物から採血し、血清を抗ＮＴ−４力価に関して分析する。力価が一定 になるまで動物にブースター注射を行う。好ましくは、動物を同じＮＴ−４ポリ ペプチドのコンジュゲートであるが、異なるタンパク質に結合しており、モして ／またはそれが異なるクロスリンキング剤を介して結合しているコンジュゲート でブースター注射する。コンジュゲートはまた、組換え細胞培養内で、融合タン パク質として製造され得る。また。免疫応答を高めるために、ミョウバンのよう な凝集剤を用いる。

モノクローナル抗体は免疫動物から膵臓細胞を回収し、例えば骨髄腫細胞との融 合またはＥＶウィルス形質転換等の常法に従い、該細胞を不死化し、所望の抗体 を発現しているクローンをスクリーニングすることで調製される。

ＮＴ−４抗体はＮＴ−４またはその抗体の診断分析に有用である。抗体を上記の ＮＴ−４の標識と同様の方法で標識し、かつ／または不溶性マトリックスに固定 化する。受容体結合分析の１態様では、全ＮＴ−４ファミリーを吸着させるため に、全部のまたは選択したＮＴ−４フアミリーの複数のメンバーと結合する抗体 組成物を不溶性マトリックスに固定化し、被検試料を固定化抗体組成物と接触さ せ、次いで、固定化ファミリーメンバーを各メンバーに特異的な複数の抗体であ って、その各々は、別個の発蛍光団等の特有の標識により、それぞれが予め決ま ったファミリーメンバーに特異的なものとして同定することが可能な抗体と接触 させる。各特有の標識の存在および／または各特有の標識の量を測定することで 各ファミリーメンバーの相対的な比率および量を決定することができる。

ＮＴ−４抗体はまた、ＮＴ−４の組換え細胞培養または天然起源からのアフィニ ティー精製に有用である。検出可能な程度にはＮＧＦ、ＮＴ−３またはＢＤＮＦ と交差反応しないＮＴ−４抗体は、これらの他のファミリーメンバーを含まない 精製ＮＴ−４の取得に有用である。

ＮＴ−４およびその抗体の適当な診断分析は自体既知である。上記のバイオアッ セイに加えて、競合法、サンドイツチ法および立体阻害アッセイが有用である。

競合法およびサンドインチ法は相分離工程部分を必要とするが、立体阻害アッセ イは単一の反応混合物で行われる。分析される物質の分子量に応じて、ある方法 が好ましいこともあるが、基本的には、ＮＴ−４およびＮＴ−４に結合する物質 について同じ工程を用いる。従って、本明細書では、それが抗原または抗体のい ずれの状態であるかを問わず、被検物質をアナライトと称し、アナライトと結合 するタンパク質を、抗体、細胞表面受容体または抗原のいずれであろうと、結合 パートナ−と称する。

ＮＴ−４またはその抗体のための分析学的方法はすべて、以下の試薬の１つまた はそれ以上を用いる：標識アナライト類似体（アナローブ）、固定化アナライト 類似体、標識結合パートナ−１固定化結合パートナーおよび立体コンジュゲート 。標識した試薬は“トレーサー”としても知られる。

用いる標識はアナライトとその結合パートナ−との結合を干渉しない検出可能な 機能物質である。イムノアッセイに用いられる多くの標識が既知であり、例えば 、西洋ワサビペルオキシダーゼ等の酵素、＋４（および１３１１等の放射性同位 元素、希土類キレートやフルオレスセイン等の発蛍光団、安定なフリーラジカル 等がある。これらの標識をタンパク質またはポリペプチドに共有結合させるには 、従来の方法を用いることができる。そのような結合法は、その全部がタンパク 質性であるＮＴ−４またはその抗体に用いるのに適する。

ある分析法では試薬の固定化が必要である。固定化は結合パートナ−と、溶液中 に遊離して残存するなんらのアナライトとの分離を伴う。これは、従来、分析に 先立って結合パートナ−またはアナライト類のいずれかを水不溶性のマトリック スまたは表面［ベニツヒら（Ｂｅｎｎｉｃｈ、　ｅｔ　ａｌ、　）　、　Ｕ、　 Ｓ、　Ｐａｔ、　Ｎｏ、　３．７２０．７６０１に、共有結合的カップリング（ 例えば、グルタルアルデヒド交差結合を用い）でマトリックスまたは表面に吸着 させるか、あるいは例えば免疫沈降により、後にパートナ−または類似体を不溶 化することで行われてきた。

その他、競合法またはサンドイツチ法として周知の分析法は十分に確立されてお り、商業的診断産業で広範に利用されている。

競合アッセイは、標識類似体（またはトレーサー）と被検試料アナライトとの、 共通の結合パートナ−上の限られた結合部位への結合能力によっている。通常、 結合パートナ−を競合の前または後に不溶化し、次いで、結合パートナ−と結合 したトレーサーおよびアナライトを結合しなかったトレーサーおよびアナライト から分離する。この分離はデカンチー／コン（競合反応前に結合パートナ−を不 溶化したとき）あるいは遠心（結合反応後に結合パートナ−を沈降させたとき） で行う。被検試料アナライトの量はマーカー物質の量の測定価としての結合トレ ーサーの量と逆比例する。既知量のアナライトについての用量一応答曲線を作成 し、試験結果と比較して被検試料中に存在するアナライトの量を定量的に決定す る。これらのアッセイにおいて酵素を検出可能なマーカーとして用いた場合、Ｅ ＬＩＳＡ系と称する。

他の競合分析である“ホモジーニアス“アッセイでは、相の分離を必要としない 。ここでは、酵素とアナライトとのコンジュゲートを調製し、抗アナライトかア ナライトに結合したとき、抗アナライトの存在が酵素活性を改変するように用い る。この場合、ＮＴ−４またはその免疫学的に活性な断片を２機能性の有機性ブ リッジを介してペルオキシダーゼのような酵素にコンジュゲート結合させる。

コンシュケートは、抗ＮＴ−４の結合が標識の酵素活性を阻害または強化するよ う、抗ＮＴ−４と共に使用するよう選択する。二の方法はそれ自体、ＥＭＩＴと いう名称で広範に用いらｎている。

立体コンシュゲートはホモシーニアスアソセイにおける立体阻害法に用いられる 。これらのコンジユゲートは、低分子量ハブテンを小さいアナライトに共有結合 で結合させることにより合成されるが、この場合、ハプテンに対する抗体か、実 質上、抗アナライトとして同時にコンジュゲートに結合することができないよう に合成される。この分析法では、被検試料に存在するアナライトが抗アナライト と結合し、それにより、抗ハブテンがコンジュゲートに結合することができ、そ の結果、コンツユケートハブテンの性質、例えば、ハプテンが発蛍光団であるば あいには蛍光、を変化させる。

サンドイツチ法は特にＮＴ−４またはＮＴ−４抗体の測定に有用である。連続サ ンドイツチ法では、固定化した結合パートナ−を用いて被検試料中のアナライト を吸着させ、被検試料を洗浄等で除去し、結合したアナライトを用いて標識した 結合パートナ−を吸着させ、次いで結合した物質を残存トレーサーから分離する 。結合したトレーサーの量は被検試料アナライトに正比例する。“同時”サンド イツチ法では、標識した結合パートナ−を加える前に被検試料を除去しない。

１方の抗体として抗ＮＴ−４モノクローナル抗体を、他の抗体としてポリクロー ナル抗ＮＴ−４抗体を用いる連続サンドイツチ法はＮＴ−４活性を試験するため の試料に有用である。

上記は、単にＮＴ−４および抗体の診断分析の例にすぎない。上記のバイオアッ セイを初めとして、今日、または将来、これらアナライトのために開発される他 の方法も本発明の範囲に包含される。

以下の実施例は例示のために示されたものであり、決して限定的なものではない 。

実施例１ ヒトゲノムおよびｃＤ＼Ａライブラリーから、ＮＧＦおよびＢＤＮＦプローブを 用いてＮＴ−４をコードするＤ　Ｎ　Ａ　８同定しｍ離する試みは失敗した。む しろＮＴ−４遺伝子の同定には、ヒトゲノムＤＮＡをポリメラーゼ鎖反応（ＰＣ Ｒ）（ムリスら（Ｍｕｌｌｉｓ、　ｅｔ　ａｌ、　）　、　１９８７．　Ｃｏ１ ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｓｙｍｐ、　Ｑｕａｎｔ、　aｉｏ１ ５１：２６３）によって増幅する必要があった。活性型のＮＧＦ、、ＢＤＮＦお よびＮＴ−３は一部のニクソンにコードされている（Ｌｅｉｂｒｏｅｋ、　ｅＩ ａｌ、　（前掲）：　Ｅｏｈｎ　ｅｔａｌ、（前掲＞：　Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒ ｒｅ　ｅｔ　ａｌ、　（前掲）：　Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ　ｅｔ　ａｌ、　（前掲 ））ので、上記のプライマーのための鋳型としてヒト胎笈ゲノムＤＮＡ（マニア ナイスら（Ｍａｎｉａｔｉｓ　ｅｔ　ａｌ、）　１９８２．　１１ｏｌｅｃｕｌ ａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ。　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、Ｃ盾Pｄ 　Ｓｐｒｉ ｎｇＨａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、〜ｅｖ　Ｙｏｒｋの、ゲノムＤＮＡ ライブラリーの調製の項を参考にして調製した）を用いた。ＮＧＦ％ＢＤＮＦお よびＮＴ−３のアミノ酸配列を共通の相同性領域に関して精査した。これらの領 域の多くが同定され、選択したＮＧＦ、、ＢＤＮＦおよびＮＴ−３配列のプラス およびマイナル峡のＤＮＡのすべての可能な配列に相補的な、旦虹、Ｘｂａおよ びＥｃｏＲＩのための制限部位を有する１末鎖プライマーブールを調製した。セ ンス鎖のためのプライマープールは（成熟ヒトβＮＧＦ）ＮＧＦの５０−５８残 基（ＮＧＸ−５４と命名）に相当していた。でンスプライマーは以下のものから 選択される配列を有Ｔる。（そｎぞれ、ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ、９３．９４．９３ ．９６）。

アンチセンス鎖のだめのプライマープールはＮＧＦの残基１０２−１１０（、へ Ｒ１と命名）に相当しており、下記のものから選択される配列を有する。（それ ぞれ、５ＥＱＩＤＮ０．９７．９８．９９および１００）。

５’−ＣＧＧＣＴＣＡＧＧＧＣＣＧＡＡＴＴＣＧＣＡＣＡＣＧＣＡＧＧＡＡＧＴ ＡＴＣ’ｒＡＴＣＣ’！’ｒＡＴ−：ｌ　’Ａ　ＴＡ　ＡｃＧ　Ｇ　Ａ　ＴＧＧ Ｇ　Ｔ　ＧＧ入 各プライマー配列は増幅配列のクローニングを容易にするために、その５°末端 に制限部位を持っていることに注ｔさｎたい。増幅条件の注意深い選択によって 、これらのプールがより短いアミノ酸配列（３２がら３２．０００倍の縮重）に 対して従来用いられたプールよりもかなり大きいという事実にもっ１かゎらず、 ＮＴ−４配列を増幅することができたＣ　（リーら（Ｌｅ＝、ｅｔ　ａｌ、）　 、　１９８８．５ｃｉｅｎｃｅ　２３９：１２８８ニストラスマンら（Ｓｔｒａ ｔｈｚａｎｎ、　ｅ＝　ａｌ、　）　、　１９８９．　Ｐｒｏｃ、＼ａｔ１．　 ＡｃａｄA　Ｓ ｃｉ、　８６：７７４０７；　Ｌｅｉｂｒｏｃｋ、ｅｔ　ａｌ。前掲）Ｃプライ マーを用いて増幅されたＤＮＡを調製し、次いてこれを配列決定した。増幅の条 と；＝以下の通りである。

１　′−ト拾磐ゲノムＤＮＡを用いるＰＣＲ最初は９５℃、５分の変性を１回 以後、以下を４４サイクル 変性、９５℃、１分 アニーリング・５５℃、１分 伸長、７２℃、１分 最後に伸長・７２℃、１５分 １０ｘバツフアー（最終＝５０ｍＭ　ＫＣＩ、１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ（ｐ Ｈ８゜４）、３、ＯｍＭ　ＭｇＣ１，）１０μｍヒトゲノムＤＮＡ３μｍ（３μ ｇ） ７．５ｎｇ／μｌプライマー　（３３ｍｅｒ６１μｇ＝約２．６　ｕＭ、従って 、１０３ｄｅｇ１０３ｄｅ、１０’＝ｐＭ） ７．５ｎｇ／μｌプライマー １０ｘｄＮＴＰ類１０μｌ　（最終＝０．２ｚＭ　ｄＮＴＰｓ）Ｔａｑポリメラ ーゼ１μｍ ｄＨ２０６１ｕ１ 合計　１００μＩ ＩＴ、旦ａｌＩおよびＥｃｏＲＩて切断し、シ望の約２１０ｂｐの大きさの生成 したフラグメントをケル精製し、Ｍ１３に基づくベクター、Ｍ１３ｍｐ１８　（ ファルマシア）にサブクローニングする。

ＮＧＦ、、ＢＤＮＦおよびＮＴ−３クローンをそれらの各々のｃＤＮＡ配列の唯 一の領域から導かれたオリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションによって 同定する。ハイブリダイゼ＝／ｉ１ンしない挿入物を含有するプラスミドを配列 決定しくスミス（Ｓｍｉｔｈ）　、　１９８０．　Ｍｅｔｈ、　Ｅｎｚｙｍｏｌ 、　６５：５６０）　、それらから可能な翻訳生成物をＮＧＦ、ＢＤＮＦおよび ＮＴ−３との相同性に関して分析した。

この工程によって、約５００のＮＧＦ、ＢＤＮＦおよびＮＴ−３クローンと７８ の無関係なりローンが存在することが判明した。さらに、新規１．；ＮＧＦ関連 因子の部分をコードする３つのＤＮＡ断片が同定され、これらをまとめてＮＴ− ４と命名した。ＰＣＲによって生成したＮＴ−４クローンの豊富度が低いことは 、ＤＮＡ配列とＰＣＲＣプライマー相同性の低さに起因していた。

ヒト胎児脳ｃＤＮＡライブラリー（ローゼンタールら（Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ、　 ｅｔ　ａｌ、　）　。

１９８７、　ＥＭＢＯＪ、　５：　３６４１）を、胎磐ケノムクローンをプロー ブとしてスクリーニングすると、なんら陽性のクローンが得られなかった。完全 なヒトＮＴ−４類似体を得るために、ヒトゲノムライブラリー（マニアナイスら （Ｍａｎｉａｔｉｓ　ｅｔ　ａｌ、　）、　１９７ｇ、　Ｃｅ１ｌ　１３：６８ ７）をもスクリーニングし、６ｋｂ断片を単離したつこの断片はＮＴ−４ｆｆ１ Ｍポリペプチドを囲む１６８アミノ酸をコードする単一のオーブンリーディング フレームを有することが分かった。

ヒト成熟ＮＴ−４およびその前駆体の少なくとも一部の完全なヌクレオチド配列 および推定のアミノ酸配列を図１に示す。シグナル配列を含む完全な前駆体領域 は、示した開始メチオニンと、成熟配列の開始前の開裂部位の最後のＡｒｇとの 間に示されているかもしれない。もし、そうであれば、ＮＴ−４の前駆体領域は 図２に示したＮＧＦ、ＢＤＮＦおよびＮＴ−３の前駆体領域よりもはるかに短い 。ＮＴ−４のための開始コドンの帰属は、ＮＧＦ、ＢＤＮＦおよびＮＴ−３の開 始コドンの位！に基づいて行った。成熟ヒトＮＴ−４のアミノ酸配列は、図２記 載の配列の比較に基づいて、ＮＧＦ、ＢＤＮＦおよびＮＴ−３と約４６％、５５ ％および５２％の配列相同性（同一性）を有する。

ＮＧＦ、ＢＤＮＦおよびＮＴ−３の活性な成熟形は、それらの約３０ｋＤの前駆 体から生成される１３−１４ｋＤのホモダイマーである（Ｌｅｉｂｒｉｃｋ　ｅ ｔ　ａｌ、前掲：　Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅ　ｅｔ　ａｌ前掲；　ｌ１ｌｏｈ ｎ　ｅｔ　ａｌ、前掲ニゲリーンおよびショーター（Ｇｒｅｅｎｅ　＆　５ｈｏ ｏｔｅｒ）　、　１９８０　Ａｎｎ　Ｒｅｖ、　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、　３：　３ ５３）　ｏ　ＮＴ　−４前駆体^ ンパク質もまた成熟領域の開始位置前に潜在的な４塩基の開裂部位を示し、これ はこのタンパク質ファミリーの４つのメンバー全部が同様のプロセツシングを受 けることを示している。この部位でのプロセツシングは１３．１４ｋＤ　（１３ ０アミノ酸）ポリペプチドを与える。

ＮＴ−４の可能な機能を評価するために、ノーサンプロット法でその組織内の分 布を調べた。ラットでは、ＮＴ−４ｍＲＮＡは心臓、筋肉、腎臓、肝臓、膵臓、 腸、肺、およびを髄、並びに幾つかの脳の領域、小脳および皮質を含めて、調べ た各組織に様々な濃度で存在していた。この、ＮＴ−４ｍＲＮＡの広範な器官で の分布は、抹消神経系では、ＮＴ−４は交感、感覚、および／または運動神経細 胞のための標的−誘導性の栄養因子であることを示唆していた。この理論を、組 換えヒトＮＴ−４をコードするＤＮＡを発現させ、その様々な活性を分析するこ とて試験した。

実施例２ 以下のＮＴ−４ＤＮＡの発現および生成したＮＴ−４の精製のプロトコルは、分 析目的に十分なＮＴ−４を与えると予測されるものであった。この実施例では精 製ＮＴ−４を試験してＮＧＦと比較するのに用いることができると考えられるア ッセイをも提供する。

発現ベクターとして、サイトメガロウィルスに基づく発現ベクターｐＲＫ５　［ ゴーマンら（Ｇｏｒｍａｎ、　ｅｔ　ａｌ、　）　、　１９９０．　ＤＮＡ　ａ ｎｄ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎ奄曹浮■■ ２：１およびＥＰ公開Ｎｏ、　３０７．２４７．１９８９年３月１５日発行、コ を用いる。ＮＴ−４ゲノムＤＮＡをそれがクローンされていたファージから切断 する。次いで、ＤＮＡ断片を、予め、ＤＮＡに適応させるように適当な制限酵素 で切断しておいたｐＲＫ５に標準的な結合法で結合させるニマニアナイスら（Ｍ ａｎｉａｔｉｓ　ｅｔ　ａｌ、　）　、　１９８２、　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃ ｌｏｎｉｎｇ：＾Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　！１ｎｎｕａ１．　Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒ ｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂ盾窒≠狽盾窒凵B Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）。得られたベクターをｐＲＫ−５ｈＮＴ−４と称する。

ヒト胚性腎臓２９３細胞系（グラフ１ムら（Ｇｒａｈａｍ　ｅｔ　ａｌ、　）　 、　Ｊ、　Ｇｅｎ、　Ｖｉｒｏｌ、　３６：５９）を全面成長まで増殖させる。

ＮＴ−４プラスミドＤＮＡ　（ｐＲＫ−５ｈＮＴ−４）１０μｇをＶＡ　ＲＮＡ 遺伝子をコードするＤＮＡ　［タイマ・ソｌくヤら（Ｔｈｉｍｍａｐｐａｙａ　 ｅｔ　ａＬ　）　、１９８２．　Ｃｅ１１．３１：５４３コ　１μｇと混合し、 １ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．１ｍＭ　ＥＤＴＡ、０．２２７Ｍ　ＣａＣＩｚ ５００μｌに溶解する。これに５０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ　（ｐＨ７，３５）　、２ ８０ｍＭ　ＮａＣ１，１，５ｍＭ　ＮａＰｏ、５００μｍをポルテックスしなが ら滴下して加え、２５℃で１０分間沈澱を析出させる。懸濁した沈澱を細胞（１ ００ｍＭ　プレート中）に加え、インキュベーター内で４時間静置する。次いで 培地を吸引除去し、りん酸緩衝化食塩水中２０％グリセロール２＋１１１を３０ 秒加える。細胞を血清不含培地５ｍｌで２回洗浄した後、新鮮な培地を加え、細 胞を５日間インキュベーションする。

２９３細胞をｐＲＫ５単独で同様に形質転換（トランスフェクション）する。

形質転換（トランスフェクション）の２４時間後、培地を交換し、細胞を２００ 　ｕ　Ｃｉ　／ｍｌ”　Ｓ−ンステインおよび２００μＣｉ／ｍ１３６Ｓ−メチ オニンの存在下で１２時間インキュベーションする。次いで調整培地を採取し、 凍結乾燥して５倍濃縮し、１５％ＳＤＳゲルに充填し、次いで、高め、乾燥し、 ２時間、フィルムに露出する。これらのデータは、はぼ予測される大きさく１４ −１５ｋＤ）のポリペプチドの存在を示すと思われる。

ＮＴ−４の大規模発現は、硫酸デキストラン法［ソンペイラ・ツクおよびダナ（ Ｓｏｍｐａｙｒａｃ　ａｎｄ　Ｄａｎｎａ）　、　１９８１．　Ｐｒｏｃ、　Ｎ ａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　１２：　７５７５］でｐＲＫ| ５ｈＮＴ−４７００Ｍｇを３リツターのＢｅ１ｃｏ　ｍ１ｃｒｏｃａｒｒｉｅｒ 　５ｐｉｎｎｅｒフラスコ内で最大密度（１，５リツター）に増殖させたヒト胚 腎臓２９３細胞系に一時的に導入することで行う。細胞をまず遠心して５ｐｉｎ ｎｅｒフラスコから濃縮し、りん酸緩衝化食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、ＤＮＡ− デキストラン沈澱を細胞ペレツト上で４時間インキュベーターンする。細胞を２ ０％グリセロールで９０秒間処理し、ＤＭＥＮＩ　Ｆ−１２培地（５０：５０） 等の培地で洗浄し、上記の培地−５μｇ／ｍｌウシインシュリンおよび０．１μ ｇ／＋１ウシトランスフェリンを含有する３リツターの５ｐｉｎｎｅｒフラスコ に再度導入する。上記のプロトコルを３個の別個の３リツター培養に関して行う 。

４日後、上記の大規模発現から得た約５リツターの調整培地を遠心し、濾過して 細胞と屑を除去し、１００倍濃縮する。バッファー、塩、および他の小さい分子 を２５１１Ｍのほう酸ナトリウム、ｐＨ９，０および４Ｍ尿素内に透析すること で交換し、５ｃｍ　ｘ　５ｃｍＤＥＡＥセファロース高速−イオン交換クロマト グラフィーカラム（ファルマシア）に適用する。カラム溶離液（４９５ｍｌ）を ２５０ｍＭ　３−　（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）バッフ ァー０．１容量を最終組成が２５ｍＭ　ＭＯＰＳ、ｐＨ７，０および４Ｍ尿素と なるように加えて中和（ｐＨ７，０）する。この試料を２．５ｃｍ　ｘ　２．５ ｃｍのＳ−セファロースイオン交換クロマトグラフィーカラム（ファルマシア） に適用し、洗浄し、２５ｍＭ　ＭＯＰＳ、　ｐＨ７，０，４Ｍ尿素、および０． ５Ｍ　ＮａＣ１（４Ｑ　ａｌｌ）で溶離する。

以下の２つの異なるアッセイは組換えヒトＮＴ−４がＳ−セファロース塩溶離液 （１３０μｇ／ｍｌ、合計５μｇ）にあることを示している：１）３種の型の雛 胚末梢神経節細胞における４８時間神経細胞生存および軸素の外への成長：それ らは、を椎傍交感神経鎖神経節細胞、後根神経節（腰仙領域）のを髄感覚神経細 胞、および結節性神経性細胞である、および２）ＮＴ−４でなく、βＮＧＦを免 疫原として用い、上記の発明の詳細な説明の項で述べたごと（にして生成するこ とができるヒトβＮＧＦに対するポリクローナル抗体を利用するＥＬＩＳＡアッ セイ（ルーカスら（Ｌｕｃａｓ、ｅｔ　ａｌ、）　、　１９８９．　Ｊ、Ｅｎｄ ｏｃｒｉｎｏｌ、１２０：　４４９）での免疫交差反応性。Ｓ−セファロース溶 離液を１Ｍ酢酸と４Ｍ尿素に透析し、１０倍に濃縮し、Ｓ−３００セフアクリル ゲルろ過カラム（１，５ｃｍ　ｘ　４４ｃｍ）に適用し、同じバッファーでクロ マトグラフする。

採取した各１＋１画分から２００μｍをとり、１Ｍ酢酸に透析し、凍結乾燥し、 ３０μｍのレムリ５ＤＳ−ＰＡＧＥ試料バッファ　−（Ｌａｅｍｌｉ、　１９７ ０．　Ｎａｔｕｒｅ　２２７：６８０）に再溶解する。ヒトβＮＧＦも同様にし て得られる。５ＤＳ−ＰＡＧＥに続いて銀染色したケルは、単一の優先的に染色 される約１５ｋＤポリペプチドを示す。この５ＤＳ−ＰＡＧＥ分析領域に対応す るＳ−３００力ラム溶離画分の３１１ブール作り、１１１１　（０，５μｍｏｌ ｅ）をプロトタイプ自動アミノ酸／−ケンサー（コール（Ｋｏｈｒ）　、　ＥＰ 　Ｐａｔ、　Ｐｕｂ、　Ｎｏ、　２５７．７３５）によるエドマン分解によるＮ −末端アミノ酸配列決定に付す。Ｎ−末端アミノ酸配列決定はアルギニンで終わ る４塩基の開裂配列で推測され、プレプロＮＧＦから成熟βＮＧＦのプロセッ／ ングによって推測される、グリノンから始まる単一の配列を与える。

最初の配列決定サイクルは３−カラム工程からの精製ヒトＮＴ−４の回収量を示 すために定量される。精製組換えヒトＮＴ−４を０１％酢酸に透析し、最終濃度 ３．２５μｇ、／ｍｌとする。このストック物質を、種々のバイオアッセイのた めに、４〜５Ｑｎｇ／ｍｌの範囲の様々な濃度で神経細胞培地（１０％ウシ胎児 血清を含有するＤＭＥ〜１高グルコース）で希釈してもよい。

ＮＴ−４の大規模生産のための好ましいベクターは上記のごと（、Ｓ　Ｖ　４０ から導いたベクター、例えばｐＳＶ１６Ｂであり、好ましい宿主細胞はチャイニ ーズハムスターの卵巣細胞であり、好ましい培地は生成物の収率を最適にするよ うグルコース１度を高めたＤＭＥＭまたはＤＭＥＭ：　Ｆ１２　（１：　１）培 地または米国特許４．７６７．７０４記載の血清不含培地である。

精ｇＮＴ−４の神経栄養活性を、デーヴイス（Ｄａｖｉｅｓ、　ｉｎ　Ｎｅｒｖ ｅ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔ。

ｒｓ、　１９８９　（Ｒ，Ａ、Ｒｕ５ｈ、　Ｅｄｌ、　Ｊｏｈｏｎ　Ｗｉｌｅｙ 　＆　５ｏｎｓ、　Ｂｏｓｔｏｎ）　ｐｐ、　９５−１０９jが記載 したように、幾つかの型の１次胚性１０日雛神経細胞に関して分析する。即ち、 を椎傍交感神経鎖神径節細胞（ＳＧ）、後根神経節（腰仙領域）（ＤＲＧ）、お よび結節性神経性細胞（ＮＧ）を１０日雛胚から得る。トリプシンまたパンクレ アチン（ＧＩＢＣＯ）を用いて神経細胞を神経節から分離し２回プレプレートし て非神経細胞の数を減少する。細胞を計数し、ポリオルニチン（５００Ｍｇ／ｍ ｌ）とラミニン（１０μｇ／ｍｌ）　ニリンドセーら（Ｌｉｎｄｓａｙ、ｅｔ　 ａｌ、）　、　１９８５．　Ｄｅｖ、Ｂｉｏｌ、　１１２：３１９）で前処理し た９６ウエルの組織培養プレートに撒（。細胞のは種数はＳＧ、ＤＲＧ、４００ ０細胞／ウエル、ＮＧ、２０００細胞／ウニルである。

ア、セイに用いた精製マウス下顎神経節βＮＧＦはＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｔｅ ｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ。

Ｉｎｃから得、０．１％酢酸に濃度１０μｇ／１１で溶解する。最終濃度３．２ ５μｇ／ｎｉｌ：Ｏ１１％酢酸に対して透析した精製組換えヒトＮＴ−４を用い る。細胞を因子類の存在下または非存在下に４８時間インキュベーションし、長 さが細胞体の５倍（５Ｘ）に達した軸素を有する輝相（ブライトフェーズ）の細 胞体の数を数える。ＤＲＧおよびＮＧ神経細胞の培養内では個々の神経細胞形質 を数えることができる。しかしながら、ＮＧ神経細胞は凝集するので、細胞凝集 体を数える。最大応答に際して生存する細胞はＤＲＧおよびＮＧ神経細胞に関し て約２０〜４０％であるが、ＮＧ神経細胞に関しては、凝集体が数えられている のでより高いであろう。ＮＧＦおよびＮＴ−４の各々を用いて４回の実験を行う 。

ＮＴ−４は末梢神経細胞に対し、最も活性であると思われる。を椎動物では、末 梢神経細胞は２つの区別される胚起源から導かれる：神経堤と神経ブラコードで ある［ルデュアリンおよびスミス（ＬｅＤｏｕａｒｉｎ　ａｎｄ　Ｓｍ１ｔｈ） 　、　１９８８．　Ａｎｎ、Ｒｅｖ、Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ。４：３７５Ｆ。神経 堤誘導細胞は神経細胞、および末梢神経系の支持細胞を生起し、ブラコード誘導 細胞は幾つかの感覚神経細胞と頭部神経細胞を生起する。

神経堤誘導後根感覚神経節（ＤＲＧ）細胞はＣＮＳおよび末梢組織にプロジェク ト（企画）されており、それらの両ターゲットから導かれる栄養因子に依存する 。　（リンセイら（Ｌｉｎｄｓａｙ、　ｅｔ　ａｌ、）　１９８５．　Ｄｅｖ　 Ｂｉｏｌ、１１２：３１９）　ｏ　この２重依存性は、すべての適当な連絡（コ ネクション）を形成する神経節のみの生存を確かにすることを可能ならしめる機 構である。ブラコード誘導感覚神経神経節（ＮＧ）、これもまた２重連絡性であ って、ＢＤＮＦのＣＮＳ因子に応答するが、は末梢誘導栄養因子（ＮＧＦ）に応 答しない。即ち、ＮＧ神経細胞の末梢標的神経支配は、他の機構を介し、または 他の因子によって確かにされると思われる。

脳および末梢におけるＮＴ−４の存在は、他の機能を示唆し、脳の神経細胞損傷 によって引き起こされるアルツハイマー、パーキンソン、ハンチントン病等の疾 患の治療における価値、および／または外傷により損なわれた神経の治療または 末梢神経細胞の損傷の予防における価値の可能性を示唆する。ＮＴ−４を、例え ばヘフディ（前掲）の確立された疾！動物モデル、または高齢ラットまたはガル を用いて、中枢神経系機能に関［７て試験する二とができる。

実施例ｌｌ１ １’ＪＴ−４の天然に存在するアミノ酸配列変異体を同定するために、上記の成 熟ヒトＮＴ−４の暗号配列を含有するゲノムＤＮＡ断片をハイブリダイゼ−７ヨ ンプローブとして用い、ヒト胎児脳ｃＤＮＡライブラリー［ローゼンタールラ（ Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ　ｅｔ　ａｌ、　）　、　ＥＭＢＯＪ、　６：３６４１］お よびヒトリンパ細胞ゲノムＤ　Ｎ　Ａライブラリー［Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、　 ｌ、ａ　Ｊｏｌｌａ　ＣＡｉにおける相同なりＮＡ類のスクリーニングを行った 。

ライブラリーＤ　Ｎ　Ａを含有するフィルターのハイブリダイゼーションおよび 洗浄は高ストリン／ニンノー条件下で行った。放射標識したＮＴ−４プローブの フィルターへのハイプリダイ七−ノヨンは５０％ホルムアミド、３ｘＳＳＣ（１ ｘ＝０、］、５５Ｍ　ＮａＣ１，０，０１３〜１　クエン酸Ｎａ）、０．１％ド デシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、０６１％ピロリン酸ナトリウム、５０ＩＩＩ Ｍ　りん酸ナトリウムｐＨ６，８，２Ｘ　Ｄｅｎｈａｒｄｔ　（デンハ−＋−） の溶液（１ｘ＝０．０２％フィコール、００２％ポリビニルピロリドン、００２ ％ウノ血清アルブミン）、１０％硫酸デキストラン中、４２℃で２０時間行う。

フィルターの洗浄は０．１％ＳＳＣ。

０１％ＳＤＳで４２℃で行う。

成熟ヒトＮＴ−４をコードするＤＮＡと有意な配列相同性を有する３つのＤＮＡ が同定された。これら相同性ＤＮＡの完全なヌクレオチド配列を、それらがコー ドするポリペプチド（それぞれ、ＮＴ−４β、ＮＴ−４γ、およびＮＴ−４Δと 命名）の推定のアミノ酸配列と共に、図３．４．５に示す。図３に示すヒトＮＴ −４βをコードするＤＮＡはヒト胎児脳ｃＤＮＡライブラリーから単離された。

図３に記載のヌクレオチド配列はヒトＮＴ−４βの一部をコードするようである 。

全ヒトＮＴ−４βをコードする完全長さのｃＤＮＡは、ヒト胎児脳ｃＤＮＡライ ブラリーを図３に開示されたｃＤＮＡを用いてプローブすることで容易に得るこ とができる。ヒトＮＴ−４７をコードするＤＮＡは図４に示す配列を有し、ヒト リンパ細胞ゲノムＤＮＡライブラリーから単離された。図５に示す配列を有する ヒトＮＴ−４ΔもヒＩ・リンパ細胞ゲノムＤＮＡライブラリーから単離された。

図６ｉ；！ｔニドＮＴ−４、ＮＴ−４β、ＮＴ−４γおよびＮＴ−４Δの７ミ／ 酸配列間の相同性を示す。ヒトＮＴ−４のアミノ酸配列は、図６に記載のアミノ 酸配列の比較に基づき、ＮＴ−４β、ＮＴ−４７およびＮＴ−４Δの各々と約７ ５％のアミノ酸相同性（同一性）を有する。本明細書で定義したように、ＮＴ− ４β、ＮＴ−４γおよびＮＴ−４Δは明らかにヒトＮＴ−４のアミノ酸配列変異 体であり、様々なアミノ酸の挿入および置換によってヒトＮＴ−４と異なってい る。

ＮＴ−４β、ＮＴ−４７およびＮＴ−４ΔはヒトＮＴ−４の天然に存在するアミ ノ酸配列変異体であるから、ＮＴ−４β、ＮＴ−４γおよびＮＴ−４ΔはヒトＮ Ｔ−４と同様にを椎動物の神経組織の正常な成長および／または発達の調節に役 割を有すると予測される。ＮＴ−４β、ＮＴ−４γおよびＮＴ−４Δは、上記の ごとく、これらのポリペプチドをコードするＤＮＡを含む発現ベクターによって 形質転換された適当な宿主細胞内での発現による組換え法によって容易に得るこ とができる。ＮＴ−４β、ＮＴ−４γおよびＮＴ−４Δの神経栄養作用を、上記 のＮＴ−４に関する記載と同様に分析する。

要約すると、ＮＴ−４は広範な組織分布の新規な栄養因子である。それはある末 梢神経細胞の栄養因子であるＮＧＦＳＢＤＮＦおよびＮＴ−３を補足するもので ある。ＮＴ−４β、ＮＴ−４γおよびＮＴ−４ΔはＮＴ−４の新規なアミノ酸配 列変異体である。これら因子の各々は定まった神経細胞サブセットに単独で、ま たは−緒に作用して中枢および末梢神経組織の両方における、正しい神経細胞連 絡を達成すると思われる。

（１）一般的な情報 （］）出願人　ノヱネンテク、インコーボレイチノドローゼンタール、アーノン （１、発明の名称　新規な神経栄養作用（口１）配列表の数　１００ （ｉｖ）住所 （＾）宛名　ノエネンテ乞イ／コーポレイテ、ド（Ｂ）通り　ポイント・す／・ ブルーノ・ブールバード４６０番（Ｃ）　市　サウス・サン・７ランンスコ（Ｄ ）州・カリフォルニア （Ｅ）国　アメリカ合衆国 （Ｆ）郵便番号　９４０８０ （いコンピューター読み取り可能なフオーム（Ａ）媒体型　５．２５１ｎｃｈ、 　３６０　ｒｂ　ｆｌｏｐｐｙ　ｄｉｓｋＣＢ）：ｆｆ＋／ビューター　ＩＢＩ Ｉ　ＰＣｃｏｓｐａｔｉｂｌｅ（Ｃ）オペレートティングンステム　に−ＤＯ５ ／璽５−ＤＯ５（Ｄ）ソフトウェア　ｐａｔｉｎ　（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（ｖ ｌ）現出覇のデータ （Ａ）出願番号 （Ｂ）出願日　１９９１年９月２４日 （Ｃ）分類 （ｖｉｉ）先の出願に関するデータ （Ａ）出願番号　０７／６４８４８２ （Ｂ）出願日　１９９１年１月３１日 （ｖｉｉ）先の出願に関するデータ （Ａ）出願番号・０７１５８７７０７ （Ｂ）出願日　１９９０年９月２５日 （ｖｉｉｉ）代理人／エージェントに関する情報（Ａ）氏名　Ｈｅｎ５ｌｅｙ、 　ｈｘ　Ｄ（Ｂ）登＃！番号　２７．０４３ （Ｃ）　ＩＩＥＦＥＲＥＮｃＥ／ＤＯＣ１［ＥＴ　ＩＩＬＩＩＩＢＥＲ：　６６ ６η（１ｘ）電話連絡に関する情報 （Ａ）電話　４１５／２６６−１９９４（’Ｂ）ファクシミリ　４１５／９５２ −９８８１（Ｃ）テレックス　９１０／３７１−７１６８（２）配列番号１に関 する情報 （１）配列の特徴 （＾）配列の長さ　６３４１！［基 （Ｂ）配列の；　核酸 （Ｃ）鎗の数　−末鎖 （Ｄ）トポロジー　Ｉ鎖状 （ｘｌ）配列　配列番号ｌ Ａπａ■ｒ罠冗工ロ０πａ印ロ叩匡Ａπロ■↑エゴ胃匡π口５０ＣＣＣＣＡＧＴ ＧＴＧ　Ｑｌ：ＡＡＴｒＧＡＧＴ　ＣＣＣＡＡＱｍ’　Ａσ）：ＴＣＡＡＣＡ　 ＴｒＧＣＣＣＣＣＴｒ　１［）ＯＭ　ＴＧＡＧＴＧＧＧＡＣＣｒＴＣＴＣＴＣＣ ＣＣＣＣＧＡＧＴＡＧＴ　Ｇ？ｒＧＴＣＴＡＧＧ　１５０質ｍ印τｍ石園父工σ ＴＣＴＧσロτａ京τχＡ圓σ弱鎚σ宵２■ＴＣＧＧＧＡＧＴＣＡ父Ａ弱丁追工 αα工晶α℃Ｃ＾父■釦訂圓ＧＧＴＧ届α２５０ＡＡＡＣＴＧＣＡＱ：　ＡＧＣ ＩＪＡ頒肩（Ｘ；α；ＧＴＧＡＧＣ３街ＡＴＧＣＡＧＴＣ３００肪ｍτｍ印拓Ａ ＣＡＧＡα刀工園Ａα２ゴσ圓Ａロ了疋石ツ凛℃αＡ３５０ＧＧＴＧＧＡｇＪゴ α〃工Ａ鎚πα↑χＡ匡拓は弱Ｇ釘σ匡π四σ４００＾ＧＴＡＣｎ’ＣＴｒ　Ｔ ＧＡＡＡＣＣｆｆ；ＣＴＧＣＡＡｅ　ＡＴＡＡＣＩスゴＧＡ　ＧＧＡＡＧＩテｒ ＧＧＣ４５０江α凛ん０Ｇ訂印届θ弱口σ恵〃石八訂凹ＡＣＡＧＧＡ弱Ωσ弱石 ５凹ＡＴＣＴＧＡＧＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＣＡＧＴＣＣＴＡＴＧＴ　ＧＣＧ ＧＧＣＡＴＴＧ　ＡＣＯＩ；ＣＴＧＡＴＧ　５５０ＣＣＣＡＧＧＧＣＣＧ　ＴＧ ｍ圓口圓ＣＧＡＴＧＧＡＴｒＣＧＡＡｌｍｌｉＡＣＡＣｍ　６００ＩＴ；ＣＡＣ ＡＣＴＣＣＴＣＡＧＣＯＩ刀ＡＣＴＧＧＣ印ＧＧＣＣＴＧＡＧ　６３４（２）配 列番号２に関する情報 （１）配列の特徴 Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　 Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ａｒｇ■ＩＳＶａｌ　Ｃｙｓ　Ａｓｐ　Ｓｅ ｒ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ　Ｓｅ ｒ　Ｓｅｒ　Ａ１ａ１１ｅ　Ａｓｐ　Ｉｌｅ　ＡｒＴＸＧｌｙ　Ｈｉｓ　Ｇｌｎ 　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ７ｈｒ　 Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　 Ｔｙｒ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　ＣｙｓＬｙｓ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ａｒｇ　Ｐ ｒｏ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　ｋｒｌｌ　Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　 Ａｓｐ　Ａｓｐ２（Ｋｌ　２０５　２１０ Ｌｙｓ　Ｈｉｓ　Ｔｒｐ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　Ｇｌｎ　Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　 Ｓｅｒ　Ｇｉｎ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　ＡｒｇＡｌａ　Ｌ５ＪＴｈｒ　Ｓｅ ｒ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ａｒ ｇ　Ｔｒｐ　ｌ１ｅ２３０　２３＋　２４０ Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　 Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｉｌｅ　ＧｌｙＡｒｇ　Ｔｈｒ （２）配列番号５に関する情報 （１）配列の特徴 （＾）配列の長さ　２４１アミノ酸 （Ｂ）配列の盟　アミノ酸 （Ｄ）トヂロノー　直鎖状 （ｘｌ）配列　配列番号５ （２）　配列番号、６に関する情報 （１）配列の特徴 （八）配列の長さ　１６８アミノ酸 （Ｂ）配列の型、アミ／ＩＩ （Ｄ）トボロノー　直鎖状 （ｘｉ）配列　配列番号・６ Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｖａｔ　ＶａＬ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　 Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｇａｙ　Ｐｒｏ　Ｐｒ。

Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　 Ｐｈｅ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｓ！ｒ＾ｌａ　ＧｌｙＡｌａ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ａｓ ｎ　Ａｒｇ　Ｓｅｔ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｔｈ ｒ＾１ａＰｒ。

＾１ａ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｖａｌ　 Ｃｙｓ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　ＧｌｙＴｒｐ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ａ ｓｐ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｇ ｌｙ　Ａｒｇ　ＧｌｕＶａｌ　Ｇｌｕ　ＶａＩＬｅｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ 　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　ＬｅｕＡｒｇ　 Ｇｌｎ　丁ｙｒ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　 Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ａｌａ　ＧｌｕＧＬｕＧａｙＧｌｙＰ１０５ＧＬｕＧ ａｙＧｌｙＰｒｏＧｌｙＡＬａＧＬｙＧｌｙＧｌｙＧＬｙＣｙｓＡｒ　１１５　 １２０ Ａｒｇ　Ａｒｇ　１ｌｉｓ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｃｙｓ　Ｌｙｓ 　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｖａ１Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　 Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　 Ｔｒｐ　Ａｒｇ　Ｔｒｐ１１ｅ　Ａｒｇ　Ｅｌｅ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｃ ｙｓ　Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　ＴｈｒＧｌ ｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ （２）配列番号、７に関する情報 （１）配列の特徴・ （＾）配列の長さ・６８５塩基 （２）配列番号　９に関する情報 （Ａ）配列の長さ　１１９０塩基 （Ｂ）配列の豐　核酸 （Ｃ）鎖の数　一本舗 （Ｄ）トポロジー　直鎖状 （ｘｌ）配列　配列番号　９ ＡＣＴＧＧＡＧＣＧＣＡＧＣＡＣＣＡＣＧＣＣＣＡＧＣＴＡＡＴｒ　ＴＴＧＧＴ ＡＴｒＡＴ　ＣＡＧＴＡＧＡＧＡＴ　５０石■汀πＡＣＡ釘引ｍ刀匡Ａ弱ＣＴＧ 訂口Ｃ話℃罠ＣＴＧ　ＡＣＣＴＣ晶引℃１００ＡＡＡＣＡＣＣＣＧＣＣＴＣＡＧ ＣＣＴＣＣＣＡＡＡＧＴＧＣＴＧ　ＧＧＡＣｒＡＣＡＧＧ　ＴＧＴＧＡＧＣＣＡ Ｔ　１５０ＡＧＴＧＣＣＴＧＡＣＣｒＧＴＡＧＴＴＧＴ　ＴＧＡＡＴＡｍＡ　Ｔ ｒＡＴＴＡＡＴ（ゴＡＣＡＡＧＴＴＧＧＧ　２００ＴＧＴＧＡＴＧＣＡＡ　ＧＴ ＣＣＴｒＴＡＴＡ　ＴＧＧＡＧＴＣＣＣＣＣＡＡＡＣＴｒＣＴＡ　ＧＡＧＣＡＡ ＧＧＧＣ２５０ＴｒＣＣＣＣＡＴＡＡ　ＴＣＣＴＧＧＣＡＧＧ　ＣＡＧＧＣＣＴ ＣＣＣＣＴＧＧＧＧ宵ＣＣＣＡＡＣＴＴＣＴＧＡ　３００ＣＣＣＣＡＣＴＧＡＡ 　ＧＴＧＴｒＴＡＴＣＴ　ＴＣＴｒＣＣＣＴＡＡ　ＴＣＣＣＡＧＣＣＴＣＣＴＴ ｒＴＣＣＣＴＧ　３５０ＴＣＴＣＣＡＴＧＴＧ　ＣＴＣＴＧＡＧＡＧＡ　ＴＧＣ ＴＣＴＧＡＧＡ　ＧＡＴＧＣＴＣＣＴＧ　ＣＴＣＣＣＣＣＡＧＧ　４００ＣＴＣ ＣＣＴＣＣＧＣＡＴＣＣＣＣＣＴＣＡ　ＴｒＴＩ’ＣＣＴＣＣＴ　ＣＣＣＣＡＧ ＴＧＴＧ　ＴＣＡＴｒＧＧＡＧＴ　４５０α：ＴＡＡＣＣＣＣＡ　ＴＣＣＴＣＧ ＡＣＡＴ　ＴＧＴＣＧＣＧＴｒＴ　ＴＣＣＴＣＣＴＣＣＡ　ＧＡＧＴＧＧＧＡＣ Ｃ５００ＴｒＣＴｒＴｒＣＣＣＣＣＧＡＧＴＧＧＴＣＣＴＧＴＣＴＡＧＧＧ　Ｇ ＴＧＣＣＧＣＴＧＣＣＧＧＧＣＣＣＣＣＴ　５５０ＣＴＧＧＴＣＴＴＣＣＴＧＣ ＴＧＧＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＴＴ　ＣＧＧＧＡＧＴＣＡＧ　ＣＡＧＧＣＧＣ ＣＣＧ　６００ＧＧＣＣＡＡＣＣＧＣＡＧａ：ＡＧＣＧＴＧ　ＧＧＧＴＧＡα＄ Ａ　ＴＡＣＴＴＣＡＣＣＧ　ＧＴ’ＧＡＧＴＣＡＴＣ６５０ＡＧＧＧＴＧＡＧＣ Ｔ　ＧＧＣＣＧＴＧＴＧＣＧＡＴＧＣＡＧＴＣＡ　ＣＴＧＴＣＴＧα；Ｔ　ＧＡ ＣＡＧＡＣＣＣＣ７００ＴＧＧＡＣＴＧＣＴＧ　ＴＧＧＡＣｒＴＧＧＧ　ｅα＾ Ｇ　ＧＴＧＧＡαｍ汀ｍ圓πＡＧＧＴ　７５０ＧＣＣＧＣＣＧＧＧＧ　ＴＧＴＧ ＧＡＣＣＧＧ　ＧＧＧＧＣＡＣＴＧＧ　ＧＴＧＴＣＴＧＡＧＴ　ＧＣＡＡＧＧＣ ＣＡＡ　９００ＧＣＡＧＴＣＣＴＡＴ　ＧＧＧＣＧＧＧＣＡＴ　ＴＧＡＣＣＡＣ ＴＧＡ　ＴＧＣＣＣＡＧＧＧＣＣＧＴＧＴＧＧＡＣＴ　９５０ＧＧＣＧＡＴＧＧ ＡＴＴＣＡＡＡＴＴＧＧＣ，４ＣＴＧ（ズーｒＧＴＧＴＣＴＧＣＡＣＡＣＴＣＣ ＴＣＡＧＣＣＧＧ１０００ＡＣＡＧＡＧＣＴＧＧ　ＡＴＧＣＴＧＡＧＡＧ　、Ａ ＣＩゴＣＡＧＧＧＴ　ＴＧＧＣＣＣＡＧＣＴ　ＧＣＴＣＴＡＣＧＧＡ　１１００ α＆ＡＣＣＣＣＡＧ　ＴｒＧＧＧＧＡＡＣＴ　ＣＡＴＣＡＡＡＴＣＡ　ＴＱＩＱ ＡＡＡＴＣＴＣＡＡＣＴＧＴＣｒ　１１５０（ｉ）配列の特徴。

（Ｄ）トポロジー　直鎖状 （ｘｌ）配列番号　１０ Ｓｓｒ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｐｈ＠　Ｐｒｏ　Ｉｌ＊　！ｌ＠　Ｌ會ｕ　Ａｌａ　 Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　！、＊ｕ　Ｇｌｙｌ　５　ユＯＸ５ Ｐｈ＠　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　５＠ｒ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　 Ｐｈｓ　Ｘ１ｍ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　＾−ｎＰｒｏ　Ｓａｔ　Ｌｅｕ　Ｌ ＩＩＬＩ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　５ｅｒ　Ｍｅｔ　ＣＹ＠　ｓａｒ　Ｇｌｕ 　Ａｒｇ　Ｃｙｓ　５４１ｒ丁ｈｒ　Ｌｅｕ　Ｓａｒ　Ａｒｇ　Ｐｈ・　Ｐｒｏ 　Ｐｒり　Ｐｒ口　Ｇｉｕ　τｒｐ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｐｒ。

１１０　８ｓ９０ Ａｒｇ　ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｓｕｒ　入ｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ａｌｍ　 Ａｌｍ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　’ｖ９５　ユ００　ユ Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｌ＠ｕ　Ｃ１ｕ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　入ｒｇ　 Ｇｌｕ　ｓｉｒ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　λ１曇　ンユユ０　ユニ５ 人１ａ　Ａｓｎ　Ａｒｇ　Ｓａｒ　０３．ｎ　入ｒｇ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｓｅｘ 　八−Ｐτｈｒ　５ｅｒ　Ｐｙ：ｏ　シａｌｆユ２５　１３０　ユ １１ｉｓ　ｌＪｎ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｃｙｍ　＾−２ 人１ａ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　フｒｐ　〜ユ４ｏ　ユ４ｓ 丁ｈ；　入ｕｐ　Ｉ’ｒｏ　フｒ？　Ｔｈｒ　Ａｌｍ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ 　ＧユｙＶａユ　Ｌｅｕ　０１ｇ　ｖａｌ　Ｃユ５５　ユ６０ Ｖａｌ　Ｌｌｌｕ　Ｃ１ｙ　Ｃ１ｕ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　λｉａｃユｙ　 Ｓｅｒ　５ｅｒ　Ｓｅｘ　！ａｕ　入；９　テ１７０　ニア５　＋ Ｈｉｓ　？ｈ＠　？ｈｔｒ　’：ａユ　：正　Ａｒｇ　Ｐｈ會　ＧユｕＡユａ　 入ｓｐ　Ｌｙｅ　５ｅｒ　Ｌｙｓ　Ｇ−ご二８Ｓ　ユ９０ Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｖａｎ　Ｇｎｙ　Ｇ：ｙ　ＧＩＹ　Ｐｒ６　ｋユｍＡ ユ１　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　ｒ＝ｐ　？’＝：　Ｃ２■ｏ　２０Ｓ （１）配列の特徴。

（Ａ）配列の長さ　９７１１基 （Ｂ）配列の；・ｔｉ＋ｉ＊ （Ｃ）　ＩＩの数・−末鎖 （Ｄ）トポウジ−直鎖状 （ｘｌ）配列　配列番号　１１ り ｅｃ入入＾Ｃτ丁σ丁　＾ｃｘｃｅ入＾Ｇ口ｃｅ丁丁ＣｅｅＣλτＡ　＾丁Ｃ： ＣＭＧＧＣＡＧ　ＧＣ八へｃｃｃ丁ＣＣ２００ＣＣＴＧＧＧＧＴＴＣｅｃｊＬＡ ｃ’ｌ’？ｃ？ｏ　Ａｃ０丁（ＪＣ〒Ｃ＾　ｘｃｔｃ＋ｘ丁ｅｅ↑Ｃ？？Ｃ’Ｔ ＣＴＡ　２３０（２）配列番号　１２に関する情報 （Ａ）配列の長さ　１８６　アミノ酸 （Ｂ）配列の：　アミノ酸 （ｘｌ）配列番号　１２ Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　丁ｈｒ　Ｌｅｕ　Ｓｅｔ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ　 Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　テｒｐ　入−２ｚ　５　１０　ｉｓ シ偕ｕ　ＨＬｍ　２Ｍ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｓｅｘ　Ａ ｒｇ　ＣＬｙ　Ａｉａ　Ａ１亀　入Ｌａ　ＧＬｙ’　２０　２５　３０ Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　Ｖａｌ　Ｐｈｅ　ＬａＩＪ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｔｈｅ 　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｔｒｐ　Ｇｌｕ　ＳｕｒコＳ　４０　４％ 入１ａ　Ｇｌｙ　Ｔｈｅ　Ａｒｇ　Ａｉａ　Ａｇｎ　Ａｒｇ　Ｓｅｔ　Ｇｉｎ　 Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｖａｎ　Ｓｅｘ　＾畠Ｐ　？ｈｒＳｏ　５５　６０ Ｓｇａｒ　Ｐｒｏ　入工ａ　Ｓ打　ＨＬｍ　Ｇｌｒ＋　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　’Ｌａ ｕ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｃｙ−＾り為１ａ　Ｖａ１６％　７０　フ５ 釦ｒ　Ｖａｌ　Ｔｒｐ　ｖａ工　丁社　Ａｌｐ　Ｐｒｏ　ｋｘＷ　丁ｈｒ　Ａｌ ａ　Ｖａｌ　入−ｐ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｖａ１８０　ａｓ　９０ Ｌ＠ｌｌ　０１＋４　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　ＶａＬ　ＴＡｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｖａ ｌ　ｊ’ｒｏ　為１−　λｌａＧユｙ　５＠Ｆ　ｊａｒｇ５　ユ００　ユリＳ ＄＊ｒ　ＬａＩＪ　Ｈｌｓ　Ｇｉｎ　ＨＬｍ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ｖａｌ　τ？、 ｒ　ｅｙｅ　Ｐ！１＠　Ｌｙｓ　為ユ―　Ａｌｐ　入１ｎ）ＬＯλユ５　ユ２０ Ｓ＠：　Ｇｌｕ　Ｃｌｌ１　Ｃ１ｙ　Ｇａｙ　ｉ’ｒｏ　Ｇａｙ　Ｖａｉ　Ｇｌ ｙ　ＧＡｙ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ａ１ａ　Ａｉａ　Ｇユｙユ２Ｓ　ユ３０　ユ３ｓ ＳＩＩｒ　丁ｙｒ　Ｖａｌ　λｒ９　λｌ＆Ｌ會ｕ　丁Ｍ　Ａｉｍ　Ａｍｐ　Ａ ｌｍ　Ｇ’＝＊　ＣＬｙ　入：ｇ　Ｖａｎ　入り丁’Ｐ　入ｒ９　丁ｒｐ　Ｈｌ ｓ　Ｇｌｎ　Ｔｈｅ　Ｇｌｙ　Ｔｈｅ−Ａｌａ　ｅｙｓ　Ｖａｌ　Ｃｙ−丁ｈｒ 　Ｌａｕ　ＬＯｕ１７０　１’ｌｓ　ＩＢＯ ＶａＬ　Ｃｙｓ　入−２１１ｍ　Ｖｍｌ　Ｓａｔ　ＧＬｙ　Ｔｒｐ　ＶａＬ　丁 社　入ｓｐ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　丁ｈｒ　Ａ１ａＶａｎ　入ｓｐ　Ｌａｕ　八ｒｇ 　Ｓｌｙ　Ａｒｇ　Ｇ１％Ｉ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　ＧＬｙ　Ｇｌ ｕ　Ｖａｌ　Ｐｒ。

Ａｌａ　入ｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｓｉｒ　Ｐｒｅ　Ｌａｕ　入ｒｇ　Ｇｉｎ　 Ｔｙｒ　ｐｈ＊　ＰＭ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　＾ｘ９ｓｏ　ｓｓ　ｓ口 Ｇｌｙ　ＶａＸ　Ｍａｒ　Ｇユリ　丁ｈｒ　入１ａ　Ｐｒｅ　Ａｉａ　Ｓｅｔ　 Ａｕｇ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ａｌａｌ　５　１０　エＳ Ｖａ！　Ｃｙｍ　Ｍｐ　Ａｌａ　Ｖｉｌ　＄・ｒ　Ｇｌｙ　Ｔｒ；＋　Ｖａｌ　 ？？、：　入協ア　八ｇ９　人；警　丁ｈｒ　Ａ１ｍＶａｎ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　 入ｒｇ　Ｇｌｙ　入ｒｇ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　 Ｏｌｕ　Ｖａｌ　Ｐｒ。

Ａ１＋１　Ａｉａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　５ｇ５ｔ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　入ｒｇ　Ｇｉ ｎ　丁ｙｒ　Ｐｈｅ　Ｐｈ酋　ｅｌｕ　Ｔｈｒ　λ；９Ｓロ　５５　６０ ｅＦ　Ｌｙ−Ａｉａ　入ｓｐ　Ａｇｎ　Ａｉａ　ｌｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｏｌ ｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｉａ　Ｃ１ｙ　Ｇｌｙ６８　７０　フ５ Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　ＨＬｍ　入ｒｇａユｙ　Ｖａｌ　ＡＬＰ　入ｒ９　Ａｒｇ　Ｈ ｌｓ　Ｐｒｅ　Ｖａｌ　Ｓａｒ　Ｇｌｕ　Ｃｙｍｓｏ　ａｓ　ｔ。

Ｌｙｅ　入１ａ　Ｌｙｓ　ＧＬｎ　Ｓｉｒ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　λｘ９　λ１龜シ リ　丁ｈｒ　Ａｉａ　Ａｍｐ　Ａｉａ　Ｃ工ｎｇ５　ユＯロ　ユ０５ Ｓｌｙ　入ｒｇ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　入ｘ９　丁ｒｐ　Ｈｌｓ　入ｒｇ　 工ｌ＠　Ａｌｐ　丁ｈｘ、＾ｌａ　Ｃｙｍ　ＶａｎユニＯｕｓ　１２０ ｅｙｅ　丁ｈｒ　Ｌａｕ　ｕｕ　Ｓａｔ　入ｒ９　丁ｈｒ　Ｇｌｙ　入ｒ９　λ １ａＬ２Ｓ　ユ３０ （ｘｌ）配列番号、１５ Ｃ１ｙ　Ｖａｌ　ＳＩＩ：　Ｇｌｕ　’：ｈ：　Ａｉａ　Ｐｒｏ　Ａｉａ　Ｍａ ｒ　ｂｇ　入；ｇ　ＣＬｙ　Ｃ１ｕ　Ｌ１１’４　人工島ユＳユロ！５ Ｖａｌ　ｃＹ−Ａｍｐ　Ａｌｍ　Ｖａｌ　Ｓａｒ　Ｇｌｙ　丁ｒｐＶａｌ　丁ｈ ｒ　入１ｐ　入ｒｇ　ｋｘｑ　Ｔｈｅ　＾工ａ２０２Ｓ−３０ Ｖａｌ　Ａｊｐ　Ｌｅｕ　入Ｆ９　ｅｌｙ　ｋｒｑ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　 ％’ａｌ　Ｌａｕ　Ｃ１ｙ　Ｃ１ｕ　Ｖａｌ　デｙ６３％４０４１ Ａｉａ　Ａｌａ　ＣＬｙ　Ｃ１ｙ　Ｍａｒ　Ｐｒ口　Ｔｘｕ　入ｘｇ　ＧＬｎ　 Ｔｙｒ　ｐｐ、＠　ｔｈｅ　Ｇ＞ｖ　テｈｒ　入；９ｏ５５６０ Ｃｙｍ　Ｌｙｓ　入１ａ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ａ１１　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　 ｃｌｙ　ｐｒｏ　ｄｌｙ　Ａｌｍ　Ｇｌｙ　０１ｙ６ｓフＯフ５ ｅ１ｙＣ１ｙｌａｉｎ入ｒｇＱｌｙＶａｌ＾ｓｐ入；９へｒｇＭＬｍ：ｑＶａｌ Ｓｓ：Ｇｌｕｅｙｓ０ａｓ９０ Ｌｙ＠　Ａｉａ　Ｌｙｓ　Ｃ１？ｌ　Ｓｓ：　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　入；；　八１ｍ 　Ｌａｕ　７ｈ＝　Ａｉａ　λＳ２人１ａ　（Ａｈ！ＳコＯｏ：り５ Ｇｌｙ＾；；シａユＣｉｙ丁ｒ２＾’９？ｒｐＸｌａ＾ｒ９ズユ・入Ｓ２τｈｒ Ａｉｍａｙｓ’、１１、ユニｏ！ｉｓ−コ０ Ｃ１ｙ　Ｖａｌ　ｊａｒ　Ｇｌｕ　τｈ！−λｌａ　Ｐｒｏ　入１ａ　Ｓ＠ｔ　 λご９　人ｒｇ　ＧＬｙ　＜ｌｕ　Ｌｅｕ　入１ａユ　５　ユＯユ５ Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ａｍｐ　入ｉｍ　Ｖｍｌ　Ｅａｒ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　 丁ｈｒ　入ｇｐ　入ｒ９人ｒ９　丁ｈｒ　Ａｌａ２０　Ｂ　３０ Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　入ｒｇ　Ｏｌｙ　Ａｒｇ　ｌ；ｌｕ　Ｖａｌ　Ｃ１ｕ 　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｏｌｙ　ＧユｕＶＩＩユ　２１口Ａｌｅ　入１ａ　Ｃ１ｙ　 Ｇｌｙ　５ｅｒ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　入ｒ９　Ｃ；’ｉｎ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ｐｈ ｅ　Ｇｌ＋ａ　丁ｈ；　入ご９Ｃｙｍ　Ｌｙｅ　Ａｉａ　Ａｓｐ　Ａｍｎ　入ｌ ａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｃ１ｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　入１ａ　Ｇｌｙ　Ｇｌ ｙＧｌｙ　Ｇｌｙ　）１ｒｇ　入ｘｇ　（ＩＩＹ　Ｖｍｌ　ＡＬＰ　λｒ９　人 ｒｇ　Ｈｌｍ　丁ｒｐ　Ｖａｌ　５ｓｒ　Ｃ１ｕ　ｅｙｓＬｙｓ　Ａｉａ　Ｌｙ ｓ　Ｇｉｎ　Ｓａｒ　Ｑｒ　Ｖａｌ　＾ｒ９　人１ｍ　Ｌｅｕ　丁ｈｒ　Ａｍ− 人ｍｐ　入１ｓ　Ｇ１ｎ９Ｓ　ユ００　１０５ Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｃ１ｙ　Ｔｒｐ　入ｒｇ　Ｔｒｐ　Ｘｉｓ　入ｒｇ　 ｌｉｅ　Ａｌｐ　丁ｈｒ　入１ａ　Ｃｙｓ　ＶａｌユニＯユニ５　ユ２０ Ｃｙｓ　丁ｈｒ　Ｌｅｕ　Ｌａｕ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　丁ｈｒ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　 入工鳳］２５　１ユ０ （２）　配列番号　１７に関する情報 （Ａ）　配列の長さ　１３０アミ／！！（Ｂ）配列の＝　アミノ酸 Ｇｕｙ　Ｖａｌ　ｊａｒ　Ｇｌｕ　丁ｈｒ　Ａｉａ　！’ｒｏ　Ａｌａ　Ｍａｒ 　入ｒ９　人ｒｇ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　入ＬａＶａｎ　ｃｙｓ　Ａｍｐ　 入１ｍ　Ｖｍｌ　Ｍａｒ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　丁ｈｒ　入ｍｐ　＾ｒ９　 人ｒ９　Ｔｈｅ　Ａ１ｍＶａｌ　ＡＬＰ　Ｌａｕ　入ｘｇ　Ｇｌｙ　ＪＬｒｇ　 Ｇｌｕ　Ｖａｌ　（：ｌｕ　Ｖａｌ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｐｅａ 人Ｌａ　ＡｌＩＩ　Ｃ１ｙ　Ｇｌｙ　Ｍａｒ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ 　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　ｔｈｅ　Ｇｌｕ　Ｔｈｅ　＾ｒｇｓｏ　ｓｓ　ｓ。

ｃｙｓ　ＬＹ＠　ＡＩＪＬ　Ａｓｐ　Ａｓｎ＾ｌａ　ｅｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　 Ｏｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ６５　７ｏ　）Ｓ ＧＬｙ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ａｍｐ　入；９　Ａｒｇ　 ＯＡｕ　Ｔｔｐ　Ｖａｌ　５ｅｒ　Ｇｌｕ　Ｃｙｓ８０　８５　９゜ ＬｙｓＡｓｎ　Ｌｙｅ　Ｇｉｎ　ｊａｒ　Ｔ’ｙｒ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　ｌａ　Ｌ ｅｕτｈｒ＾ｌａ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｇ１ｎ９％　１００　１０５ Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　入；９　丁ｒ：ｐ　Ｈｌｓ　Ａｒｇ 　ＨＬｍ　Ａｍｐ　丁ｈｘ　＾Ｌ＆　ｅｙｓ　Ｖａ１１ユロ１１５ユ２０ ｅｙｅ　丁ｈｅ　Ｌａｕ　ＬａＩＪ　Ｓａｒ　Ａｒｇ　丁ｈｒ　Ｃ１ｙ　Ａｒｇ 　Ａｌａ１２５　１コ０ （２）配列番号　１８に関する情報・ （Ａ）配列の長さ　１３０　アミノ酸 ０１ｙ　Ｖａｌ　５ａｒ　ＧＬｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｓｅｘ　 Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｃ１ｕ　Ｌｅｕ　入１ａユ５１０ｉｓ Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ａｓｐ　Ａｌｍ　Ｖａｌ　５ｅｒ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｖｉｌ　 Ｔｈｅ　Ｍｐ　入ｒｇ　Ａｒｇ　Ｔｈｅ　＾１ａ２ｏ　２５　コ０ Ｖａｌ　入ｓｐ　Ｌａｕ　λＺ９　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　ｅｌｕ　Ｖａｎ　Ｃ１ｕ　 Ｖａｌ　ＬＪｕ　Ｃ１ｙ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｐｒ。

Ａｌａ　入１ａ　Ｃ１ｙ　Ｇｌｙ　Ｓａｔ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　 ｑｒ　ＰＭ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　丁ｈｒ　入ｒ９５０　５５６゜ Ｃｙｓ　Ｌｙｅ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　八ｌａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　 Ｇｌｙ　Ｐｘｏ　Ｇｌｕ　入１ｍ　ＧＬｙ　ＧユｙＧｌｙＧｌｙＣｙｓＡｒｇＧ ｌｙＶａコ＾ｓｐ＾ｒ９人ｒ９ＰｈｌｌＴｒｐ”Ｊａ＞５ｅｒＧユｕＣｙ＊Ｌｙ ｓ　Ａｌａ　Ｌｙｅ　Ｇｉｎ　Ｓｅｔ　？ｙｒ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ａｉｍ　Ｌａ ｕ　Ｔｈｒ　入Ｌａ　八−ｐ＾ｌａ　Ｇ１ｎ９Ｓ　）００　ユ０５ ＣＬｙ　入ｒｇ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ａｒｇ　丁ｒｐ　！ｌ電　入ｒ９　 ニュー　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｖａ１１ユロ　ユニ５　ユ２０ Ｃｙ１τｈｒＬ＠ｕＬ＠ｕＳ＠：ＡｒｇＴｈｒＧＩＹλ；９λユａユ２５　１３ ０ （２〕Ｅ列＠４＋：１９に関する情報 （１）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ　１３０アミノ酸 ！Ｂ；　Ｅ列の；　−ミ／！Ｉ ＣＤ〕　−ヂ；ノー　ｌ鎮状 （工ｉ）Ｅ列＠号　１９ Ｇｌｕ　Ｖａｎ　ｓｉｒ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　入１ｍ　５ｓｒ　 入ｒ９　人＝ｇ　Ｃ１ｙ　ＧＬｓｓ　Ｌｅａｕ　Ａ１ｍ１　５　１０　ユ５ Ｖ＆ユ　ｅｙｓ　入ＩＩＰ入Ｌｍ　Ｖａｌ　Ｓｏ：　ＣＬｙ　Ｔｒｐ　ＶａＬ　 Ｔｈｒ　入１ｐ　入；９　人；９　τＦ、ｒ　λユ畠Ｖａｌ　入ｓｐ　シＯｕ　 Ａｒｇ　Ｓｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｖａｉ　Ｇｌｕ　ＶａＬ　Ｌｅｕ　配ｙ　Ｇ ｉｕ　ＶａＩ　Ｐｒ。

コＳ　４０　４５ λ工ａ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　ｄｌｙ　ＮｌＩｒ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　入ｒｇＧ工ｎ　 丁ｙｘ　Ｐｈａ　Ｐｈａ　Ｇｌｕ　丁ｈｒ　λｒ９５０　ｓｓ　ｓ。

Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　入り　入ａｎ　λ１１１　１：Ｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ 　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　入１ａ　Ｏｌｙ　ｅｌｙＧユｙ　入ｘｇ　Ｖａｌ　 Ｃ１ｙ　丁；ｐ　入ｒｇ　Ｔｒｐ　：ユｅ　Ａｒｇ　！ｌｅ　入部ｐ　：ｈ＝　 Ａｌａ　Ｃｙ参　Ｖａｌユユロ　１ユ５　ユ２゜ ｅｙｓ　Ｔｈｒ　Ｌ＠ｕ　Ｌｅｖ　Ｓａｔ：　入；９　フｈｒ　Ｇｌｙ　入；９ 　人１蟲１２５　ユ３０ （２）配列番号　２０に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ　１３０アミノ酸 （Ｂ）　Ｅ列の；　アミノ酸 （Ｄ）トポ：Ｉ；−ｉ鎮状 （Ｘ−）配列番号　２０ Ｃ−３７Ｖａｌ　８軒　Ｇ）ｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｓｓｒ　Ａ ｒｇ　Ａｒｇ　（ｉｌｙ　Ｇｌｕ　Ｌ畦　Ａｌａユニ。ｘｓ （２）配列番号　２１に関Ｔる情報 （Ａ）配列の長さ、１３０アミノ酸 （Ｂ）配列の型　アミノ酸 （Ｄ）トポフジ−ｌ鎮状 ｅｌｙ　Ｖａｌ　ｇ＠ｒ　Ｃ１％ｌ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｐｒｅ　入１ｍ　ｊａｒ 　入１９λｒｇ　ｃｌｙ　Ｇｌｕ　Ｌｓ＋ａ　入１ａユ　Ｓ　ユａ　、　ユ５ ＶａＩＣｙ＊ＡｓｐＡｌａＶａ１１＠：ＧユＹＴｒｉ？Ｖａユ丁ｈｒ＾ｊ？入ｒ ９λｒｇＴｈｒＡＸ畠Ｖｉｌλｍｐｕｕ＾ｘｇｅｌｙ＾ｘｇＯ１ｕＶａ工ｅｍｕ Ｖａｌシ書ｕＧｌｙＧ工ｕＶａｎＰｒ。

人１ａλ１ａＯ１ｙＧｌｕｊａｒＰｒｏＬｍｖＡｒｇＧｉｎ？ｙｒＰｈ＊ｔｈｅ Ｇｌｕフｈｒ＾ｒ９５０　Ｍ５　６０ ｅｌｙ　ｅｌｙ　ｃｙｓ　９ｇ　Ｃ１ｙ　Ｖｉｌ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　）＝ｇ　７ ＝ｐ　Ｔｒｐ　ＶａＩ　Ｓｏ：　Ｇユｕｅｙｓ６０　’　ａｓ　９０ Ｌｙｅ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｃ１＋ｓ　Ｓｅｔ　？ｙｒ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ａｌｅ 　Ｌｌｌｌｌ　丁ｈｒ　Ａｌａ　λりＡｌａ　ｅｌｎｇ５　ユ００　ユｏ５ Ｃユｙ＾ｒｇＶａユＧｌｙＴｉＡｒｇ？？ゴユｍ、％ｒｇ工１−＾ｍｐ丁ｈ；入 ユ入工ｙｓＶａｌユニ０　ユニ５　１２゜ ｅｙｓ　Ｔｈｒ　Ｌ＠ＩＪ　Ｌｅｕ　Ｓｈｅ　入ｒｇ　Ｔｈｘ　Ｇユｙ＾；９人 １ａユ２５　λ３゜ （２）配列番号　２２に関する情報 （ｉ）　ｆ！列の特徴 （Ａ）配列の長さ　４５アミノ酸 Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｉｙ　ｇ＠ｒ　Ｐｒｏ　Ｌ＠ｕ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　丁ｙｒ　 ＰＭ　Ｐｈｓ　Ｇｌｕ　丁ｈｒ　Ａｒｇ　ＣＹ＃Ｃｙ１　ＡＬＰ　１ｕｌｌ　Ｖ ａｌ　Ｓ＠ｒ　ＧＬＹ　Ｐｒｏ　ＶａＩ　Ｔｈｒ　八ｓｐ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｔ ｈｒ　入１ｍ　Ｖａｌｌ　５　ユ０　ユＳ ＾ｓｐ　Ｌａｗ　入ｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　ＶａＩ　Ｇｌｕ　Ｖａｎ　 Ｌ＠ｕ　Ｏｌｙ　Ｇｌｕ　ＶａＩ　Ｐｒｏ　＾１ａ＾１ａ　Ｃ１ｙ　Ｃ１ｙ　５ ｅｒ　Ｐｒｏ　Ｌ＠ｕ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　テｙｒ　Ｐｈｅ　ｉ’ｈ＊　Ｇｌｕ　 テｈｒ　Ａｒｇ　ＣＹ１１ＬＹＩＩ　入１ｍ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ 　Ｇ１％ｌ　ＧＡＹ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｇａｙ　Ｇｌｙ　Ｇｌ ｙＣｙｓ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｓｅｘ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｖａｎ　丁ｈｒ 　Ａｓｐ　Ａｒ９　Ａｒｇ　Ｔｈｅ　＾工ｍ　Ｖａｌｌ　５　１０　１５ λｓｐ　ｕｕ　八ｒｇ　ＧＡＹ　入ｒｇ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｌ ａｗ　Ｃｌｙ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　ｐｒｏ　＾１ａ＾１ａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｓ＠ ｒ　Ｐｒｏ　Ｌ健ｕ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ｔｙｒ　ＰＭ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ｔｈｅ 　Ａｒｇ　Ｃｙｓｌ５　４０　４５ ＬｙｓＡｌａＡｓｐＡｍｎ＾１ａＯ１ｕＧｌｕＯ１ｙＧｌｙＰｒｏＯ１ｙＡｌａ Ｏ１ｙａｎｙＧＬＹＳｏ　Ｉｓ　、　６０ Ｃｙｓ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｖａｎ　ｍ＠ｒ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ｔｈｅ　 Ａｓｐ　Ａｒｇ　ｘｒｇ　丁ｈｒ　為１ｍ　Ｖａｌｌ　５　１０　１％ ＾ｕｐ　Ｌ＠ｕ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　ＶａＬ　 Ｌ＠ｕ　Ｃ１ｙ　Ｇｌｕ　ＶａＬ　Ｐｔｏ　入１鳳２０　２％　３Ｏ Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｓ＠ｒ　Ｐｒｏ　ＬｅＩＪＭｇ　Ｏ１ｒ＋　Ｔｙｒ　 Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕτｈｘ　ｈｒｇ　ｅｙｅコＳ　４０　４％ Ａｌｅ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｓ＠ｔ　Ｔｙｒ　ν畠１　人ｒｇ　Ｊｋｌａ　Ｌｅ＋ ａ　丁ｈｒ　入１ａ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｇｉｎ　Ｃｌｙｇｏ　ａｓ　９０ ＾ｒｇ　Ｖａｎ　０１ｙ　Ｔｒｐ　Ａｒ９　丁ｒｐ！ｌ・　Ａｒｇ　！１＠　Ｍ ｐ　Ｔｈｒ　ｘｌａ　Ｃｙ＠　ｌ／ａＬ　ｅｙｓ９！　１００　１０８ （２）配列番号　３２に関する情報 λｘｑ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｌ＠ｕ　１１ｍ　Ｖａｎ　Ｃｙ−Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｖ ａｌ　Ｓ・ｒ　ＧＬｙ　Ｔｒｐ　ＶａＬ　Ｔｈｒｌ　５　ユＯ１５ ＡｒｇＧｌｙＣ１ｕＬ＠ｕ入１ｓＶａｌＣｙｓＡｓｐＡｌａＶａｎ５＠ｒＧｌｙ ＴｒｐＶａユτｈｒｌ　Ｓ　ｌ口　ユ５ ”Ｐ　Ａｒｇ　入ｒｇ　Ｔｈｅ　ｌａ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｒ９ＪｌＩ Ｊ”９　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　ＧｉＩＪ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ 　Ｃ１ｕ　Ｖａｌ　Ｉ’ｒロ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｇｌ■ ｌ　５　ユ〇　二５ りｘｉ）配列番号　３５ Ｃｙｓ　ＬＹ＃　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｏｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　 Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　ＧＬｙ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙｌ　５　ユＯ１５ Ｍｇ　Ｇｉｎ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅｔｈｅ　ＧＩＩＩＴｋｓｔ　Ｊｕｇ　Ｃｙｓｌ　 Ｓ　９ Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　入１ａ　入曹ｐ入＠ｎ　Ａｌａ　Ｏｌｕ　Ｏｌｕ　Ｃ１ｙ　Ｃ １ｙ　Ｐｒｏ　ＧＬｙ　＾ｌ確　Ｇｌｙ　Ｇｌｙｌ　ｓ　ユＯユ５ Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｃｙ−Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｖｌｌｌ　ＡＬＰ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　 Ｈｌｓ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　ｇｅｒ　Ｇｌｕ　ａｙｓ２０　２Ｓ　３０ Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｌｙｅ　Ｇｉｎ　Ｓｅｘ　丁ｙｘ　Ｖａｌ　入；９　人Ｌａ　 Ｌ＠ｕ　Ｔｈｅ　＾１龜　Ａｓｐ　入１ａＧλｎＧｕｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｃ１ ｙ　Ｔｒｐ　Ａｒｇ　Ｔｒｐ　！ｉｓ　入ｒ９　１１ｍ　Ａｓｐ　丁ｈｒ　１１ ｍ　０１ｍＣｙｓ　Ｌｙｅ　Ａｌｅ　Ａｍｐ＾ｓｎ＾ｌａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇ ｌｙ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙｌ　５　ユＯ１５ （２）配列番号　３９に関する情報 （１）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ　４２　？ミノ酸 （Ｂ）配列の＝　アミノ酸 （Ｄ）トポクツ−［鎮状 （λ１）配列番号　３９ （２ユ配列番号　４０に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ　３０　アミノ酸 （Ｂ）配列の鵞　アミノ酸 （Ｄ）ト＋ｌロジー　直鎖状 （ｘｌ）配列番号　４０ Ｃ７ｓ　ＬＹ廖　Ａｌａ　Ａｓｐ　ｋｅｎ　Ａｌａ　Ｏｌｕ　Ｇｉｇａ　Ｇｌｙ 　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａ１ｋ　Ｇｌｙ　ＧｌｙユＳユ０ＸＳ ０１Ｙ　ｃｌｙ　ｅｙｅ　入ｒｇ　Ｇｌｙ　Ｖａｎ　Ａｌｐ　＾ｒ９　Ａｒｇ　 Ｈｌｓ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｓ＠ｒ　Ｇｌｖ　Ｃｙｓ（２）配列番号　４１に関Ｔ る情報 （１）配列の特徴 （＾）配列の長さ　１９　アミノ酸 （Ｂ）配列の型　アミノ酸 （Ｄ）トポロジー　ｌ鎮状 （ｘｌ）配列番号　４１ Ａｚｇ　Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｍｎ　入１ａ　Ｇｌｕ　ＧＬｕ　 Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｇｌｙｌ　５　１ｏ　ユ５ Ｇユｙ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　的自 ユ９ り２）配列番号　４２に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ　５８　アミノ酸 （Ｂ）配列の；　アミノ酸 （Ｄ）　トｆ口／−直鎖状 （ｘｉ）配列番号　４２ Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｍｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｇニア　 Ｐｒ＠　Ｑコ、ｙ　Ａｌａ　Ｃ１ｙ　ｃｌｙ　ａユｙｌ　５　ユ。　１ｓ Ｇｌｙ　Ｏｙｓ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｈｉｍ　 Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ｓｕｒ　Ｇｌｕ　Ｃｙｓ　Ｌｙｍ２０　２５３゜ 入１ａＬｙｅＧｉｎＳＩＩｒＴｙｔＶ龜１λｒ９＾１ａＬｓｕτｈｌ＾ユａＡｓ ｐＡｌａＧｉｎＧｌｙ人ｒｇ　Ｖａｌ　Ｃ１ｙ　丁ｒｐ　Ａｒｇ　Ｔｒｐ　：ユ ＠　Ａｒｇ　工１ｅ　Ａｓｐ　τｈｒＡユ＆　Ｃｙｓｓｏ　ｓｓ　５ａ （２ユ配列番号　４３に関する情報 （１）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ　３０アミ／Ｉ！ （Ｂ）配列の型　アミノ酸 （Ｄ）トポロジー　直鎖状 （ｘｌ）配列番号　４３ Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ａ１１ｌ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｖ　（ｉｌ ｙ　Ｐｒ口　Ｃ１ｙ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙｌ　Ｓ　ユ’　１５ ｃｌｙＣｙｍＡｒｇＣ１ｙνａｌＡｓｐ入ｒ９＾ｒｇＨ４ｍＴｒｐＶａｎＥａｒ ＧｌｕＣｙｍＬｙｓ（２）配列番号、４４に関する情報 （１）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ　２０アミノ酸 （Ｂ）配列の豐　アミノ酸 （Ｄ）トポロジー　ｆ［鎖状 （Ｘ；）配列番号　４４ ＪＬｒｇ　Ｇｌｙ　ＶａｌＡｓｐ　Ａｒｇ　ｋｒｑ　Ｈｌｓ　？ｒｐνａｌ　Ｍ ａｒ　ＧＩＩＪ　ＣＹ＃　Ｌｙｅ　Ａｌａ　ＬｙｅＧｉｎ　Ｓｅｔ　Ｔｙｒ　Ｖ ａｌ　Ａｒｇ２゜ （２）配列番号　４５に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ　１１　アミ／ｌ！ （Ｂ）配列の：　アミノ酸 （Ｄ）トポロジー　［鎖状 （ｘｉ）配列番号　４５ （２）配列＃号　４６に関する情報 （１）配列の待機 （Ａ）配列の長さ　１１アミノ酸 （Ｂ）配列の豐　アミノ酸 （ｐ）トポクツ−・Ｉ鎮状 （Ｘユ）配列番号　４６ Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ａｓｐ　＾ユａＧユｎ　Ｇｌｙ　＾ｒ９　ＶａＩ　Ｇｌｙ　テ ；ｐ　入ｒ９ユ　５　ユ０　１ユ （２）配列番号　４７に関Ｔる情報 （１）配列の特徴 丈Ａ）配列の長さ　１３０アミノ酸 （Ｂ）配列の型　アミノ酸 （Ｄ）トポクツ−直鎖状 （Ｘユ）配列番号　４７ Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｍａｔ　Ｇｌｖ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　入１ｍ　ｓ＠ｒ　 入ｒ９　人ｒｇ　Ｏｌｙ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ａｌ畠Ｉ　Ｓ　ユ０　１ｓ Ｖａ工　Ｃｙｓ　Ａｓｐ　Ａｌａ　ｖａｌ　ｓ＠ｒ　Ｏｌｙ　Ｔｒｐ　ＶａＩ　 Ｔｈｒ　入−Ｐ　入ｒｇ　Ａｒｇ　テｈｒ　＾１龜Ｖａｌ　Ａｍｐ　Ｌｇａｕ　 ｘｒｇ　Ｇｌｙ　入ｒｇ　Ｏｌｕ　Ｖａｌ　Ｃ１ｕ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｇｌｖ　 Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｐｒ。

人１ａ＾ｌａ　Ｓｌｙ　Ｇｌｙ　Ｓｅｘ　Ｐｒｏ　Ｌ＠ｕ　入ｒｇ　Ｇｉｎ　Ｔ ｙｔ　Ｐｈｍ　Ｐｈｍ　Ｇｌｕ　１Ｍ　ｋｇ（’／＃　ＬＹ−人１ａ　Ａｌｐ　 入＠ｎ　ｋＬａ　Ｇｌｕ　Ｏｌｕ　Ｏｌｙ　Ｃ１ｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　 Ｇｌｙ　ＧｌｙＧａｙ　Ｏｌｙ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　ＶＪＩＩ　ＡＩＩＰ 　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｈｌｎ　Ｐｒｏ　Ｖａｎ　Ｓｅｒ　Ｇｌｖ　Ｃｙｓｓｏ　８ ５　９゜ Ｌｙｅ　Ａｌａ　Ｌｙｖ　Ｇｌｎ　Ｓａｔ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　＾ｒ９　人１ａ　 ｋｅｎ　τｐ、１　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｇ１ｎ９５　ユｏｏ　ユロ５ Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ａｒｇ　τｒｐＸユ・　入ｒ９　： ユ管　入り　τ尼　Ａｌａ　Ｃｙ４　Ｖａｌｌｌｏ　Ｈｌｓ　１２０ Ｃｙ＠　Ｖａｎ　Ｌｓｕ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｌｙｍ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　八ｒ９　 ＾ｒ９（２）配列番号　４８に関する情報 （１）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ　９１　アミノ酸 （Ｂ）配列の；　アミノ酸 （Ｄ）トポクツ−ｉ［鎖状 （ｘｌ）配列番号　４８ Ｖａｌ　Ｌ＠ｕ　Ｇｌｙ　（ｌｕ　ＶａＩ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｏｌｙ　 Ｇｌｙ　Ｍａｒ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　＾ｘｑ　Ｃ１ｎ１　５　ユ。　ユ５ Ｔｙｔ　Ｐｈ＠　Ｐｈ＠　Ｇｌｕ　テｈｒ　入ｒｇ　Ｃｙａ　Ｌｙｓ　Ａｌｅ　 入ｓｐ　＾ｓｒ＋　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　ＧｌｙＧｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　 Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｏｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　ＶａＩ　 ＡＩＩＰ　Ａｒｇ　Ａｒｇ（２）配列番号　４９に関する情報 （１）配列の特徴 （Ａ）　２列の長さ　９１アミノ蒙 （Ｂ）配列の；　アミノ酸 （Ｄ））ｆｏジノ−Ｉ［鎖状 （Ｘユ）配列番号　４９ （２）配列番号　５０に関する情報 （１）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ　９２アミノ酸 （Ｂ）配列の型　アミノ酸 ＶａＬ　Ｌａｕ　ＱＬｙ　ＧＬ％Ｘ　ＶａＬ　Ｐｒｏ　ＡＬａ　ＡＬａ　Ｇｕｙ 　６１ｙ　Ｓｕｒ　Ｐｒｏ　ｕｖ　Ａｒｇ　Ｇ１ｎ１　Ｓ　１０　１ｓ Ｔｙｒ　Ｐｈ會Ｐｈ＠Ｏ１ｕ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　（’Ｙ＃　Ｌｙｓ　ＡＩＪＩ＾ ｓｐ　Ａｓｒ＋　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　ＧａｙＧｌｙ　Ｐｒｏ　Ｏｌｙ　１ １ｍ　Ｇｌｙ　ＯＬｙ　０１ｙ　ｅｌｙ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｖｌｌｌ　 ＡＬＰ　ＡＪ９　＾ｒ９３５　４０　４ｓ １１１ｓ　丁ｒｐ　Ｖａｌ　Ｓａｔ　Ｇｌｕ　Ｃｙｓ　Ｌｙ−人１ｍ　Ｌｙｓ　 Ｇｉｎ　Ｓａｔ　テｙｒ　ＶａＬ　入ｒｇ　λユ龜ｋｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ａｓ ｐ　Ａｌａ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　入ｒｇ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　丁ｒＰ　入ｘ９　〒ｉ 　工Ｌｍ　Ａｒｇ６Ｓ　）０　フ５ ＸＬ＊　ｊＬｓｐ　Ｔｈｔ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｖａｌ　Ｃｙ−丁ｈｒ　９ｕ　Ｓ ｅｔ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　入ｚ９ａｏ　ａｓ　ｓ。

＾−ｐ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｓ＠ｃ　Ｐｒｏ　ｌ１１　へ１藝入ｒｇ　Ａｒ９　Ｇ ＬＹ　Ｇｌｕ　Ｘｌｅ　Ｓ拳ｙ　Ｖａｌ　Ｃｙｍｌ　５　ユロ　１５ λｓｐ　Ｓ＠ｒ　ＶａＬ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｔｒｐ　Ｖａｎ　５ｅｒ　Ａｌａ　 Ｐｒｏ　Ａｇｐ　Ｌｙｅ　＾−ｐ　丁ｈｒ　１ａＶａｌ　Ａｓｐ　Ｘｉｓ　Ｌｙ ｌｌ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　）ｌｅｔ　Ｖａｌ　Ｌ健ｕ　Ｌｙｓ　 Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ３５　４０　４％ Ｘｉｓ　入ｍｎ　ＨＬｍ　５＊ｒ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　 ｖａｌ　Ｐｒ口　Ａ１直　Ａｌａ　ＧユｙＧユｙＳ＠ｒ　ｉ’ｒｏ　Ｌｌｌｌ！ 　八ｒｇ　Ｇｉｎ　Ｔｙｒ　！’ｈｅ　アＭ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　入ｒｇ　Ｃｙｓ 　Ｌｙｅ　Ａｉａ　ＡｓｐＡｓｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｏｌｕ　Ｇｌｙ　Ｃ１ｙ　 Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　ｌａ　Ｃ１ｙ　Ｃ１ｙ　Ｃ１ｙ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　＾ｒ９１！ Ｏ８５９０ Ｃ１ｙ　ＶａＬ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｈｌｓ　丁ｒｐｖ−λ　Ｓ＠ｔ　Ｇ ｌｕ　Ｃ２Ｓ　Ｌｙｓ　Ａｌｅ　Ｌｙｍ　Ｇ１ｎ９５　Ｚｏｏ　ユｏ５ ＄＊ｒ　Ｔｙｒ　Ｖａ１＾τ９　人１ａ　Ｌ＠ｕ　Ｔｈｒ　ＡＬａ　八ｓｐ　Ａ Ｌａ　ＧＬｎ　ＣＬｙ　入ｒｇ　Ｖａｌ　Ｃ１ｙ１１０　ユニ５　１２０ τｒｐ　Ａｒｇ　丁ｒｐ　ＸＬ＠　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ａｇｐ　Ｔｈｔ　Ａｌａ　 Ｃｙｓ　Ｖａｌ　０７ｍ（２）配列番号・５２に関する情報 Ｓｏｒ　！＠ｒ　Ｓａｔ　ＨＬｍ　Ｐｒｅ工↓・ｐｈ・Ｈｉｓ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ 　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　５ｔａｒ　ＶａＬ　ｅｙｓｘ　ｓ　ｚｏ　ｉｓ λｓｐ　ｍ＠ｒ　Ｖａｌ　Ｓａｔ　Ｖａｌ　丁ｒｐ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　 Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　τｈｒＡ↓畠　Ｔｈｒ　Ａｓｐｘｌ＠　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｌｙ ｓ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｍｌｌｔ　ＶａＬ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　λ １れ　エユ・　入−ｎコ５　４０　４５ Ａｓｎ　Ｓａｒ　Ｍａｌ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　ＣＬｙ　Ｇｌｕ　ＶａＬ　Ｐｒｏ　 ＡＬａ　＾ニー　０１ｙ　Ｇｌｙ　ｍａｒ　Ｐｒ。

ｉｏ　５５　６０ Ｔａｎｓ　入ｒｇ　ＧＬｎ　Ｔｙｒ　ｐｈａ　Ｐｈｅ　ＧＬｕ　テｈｒ　入ｒｑ 　Ｃｙｍ　Ｌｙ−人１ａ　入ｍｐ　Ａｓｎ　Ａｌａ６Ｓ　フＯフ５ Ｇｌｕ　Ｏｌｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　ＡＬａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　 Ｏｌｙ　Ｇｌｙ　Ｃ２Ｓ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｖａｌｎｏ　ａｓ　ｓ。

Ａｓｐ　Ａｒｇ　入ｒｇ　ＭＬ−丁ｒｐ　Ｖａｌ　ｊａｒ　０１ｕ　Ｃ：ｙｍ　 Ｌｙｅ　ＡＩＪＬ　Ｌｙｅ　Ｇｉｎ　ｊａｒ　デｙｒ９５　ｌｏｏ　１ｏＳ Ｖａ１　人ｒｇ　入１ａ　Ｌ＠ｕ　？ｈ１：　λ１１＾ｓｐ　Ａｌａ　ＧＬｎ　 Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｏｌｙ　テｒｐλｒ９１ユＯユニＳ　１２０ ０１ｙ　Ｖａｌ　Ｓ＠ｔ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　＾１ｍ　Ｐｒｏ　入１ａ　Ｓｉｒ　 Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｌｎｕ　＾１ａｌ　Ｓ　１０　ｉｓ Ｖ＆ユ　Ｃｙｓ　Ａｓｐ　入１ａ　Ｖａｌ　Ｓａｒ：　ＧＬｙ　Ｔｒｐ　ＶａＬ 　丁ｈｒ　Ａｓｐ　八ｒ９　人；９　Ｔｈｒ　入１ａＶａｌ　Ａｓｐ　Ｌ＠ｕ　 Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　ＧＬｕ　Ｖａｎ　Ｇｌｕ　Ｖａｎ　Ｘ、ｅｕ　（ｉｌ ｙ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｐｒ。

コＳ　４０　４５ ＾１ａ　入１ａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　５ｅｒ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　入ｒｇ　ＧＬｎ　 Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　ＰＭ　Ｇｌｕ　丁ｈｒ　入；９ｓａ　５５　６０ （２）配列番号　５５に関する情報 （Ａ）配列の長さ　１２４アミノ酸 Ｇｌｙ　Ｖａｌ　ｊ＠ｒ　Ｇｌｕ　丁ｈｒ　ＡＬａ　Ｐｒｏ　ＡＬａ　ｍ＠ｒ　 Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｏｌｕ　Ｌａｕ　入１ａユＳ１０１ｇ Ｍａｌ　Ｃｙ−Ａｇｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｓａｔ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ｔ ｈｒ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　１１９　Ｔｈｒ　入工鳳２ｏ　２５　コロ Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　入ｒｇ　ＧＬｙ　入ｒ９　Ｇｌｕ　ＶａＬ　Ｇｉｎ　 Ｖａｌ　ｕｕ　Ｃ１ｙ　Ｏｌｕ　Ｖａｌ　Ｐｒ。

３５　４０　４Ｓ 八ｌａ　ＡＬａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｓｉｒ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｃ１ｎ　 Ｔｙｒ　ｐＨ＠　Ｐｈ＠　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ入ｒｇ　１４１ｉ　Ｔｒｐ　 Ｖａｌ　軸ｒ　Ｇｌｕ　Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　１ｕｌｌ　ＬＹＭ　Ｏｌｎ　５ｓｒ　 丁ｙｒ　Ｖａｌ　入；９ＡｌａＬ＠ｕＴｈｒＡ！ａＡＩＩＰＡｌａＧｉｎＧｕｙ 入ｒｇＶａｌＧＬｙτｒｐ＾ｘｇＴｉｐ！１ｅ８０　！Ｉｓ　９０ （２）配列番号　５７に関する情報・ （１）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ　３２６アミノ酸 （Ｂ）配列の；　アミノ酸 （Ｄ）トポクジ−直鎖状 くｘユ）配列番号　５７ Ｇｌｙ　Ｖａｌ　ｊａｒ　Ｇニー　Ｔｈｅ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｓｉｒ　 λｚ９λｘｇｃ工ｙ　ＧＬｕ　Ｌａｕ　入１ａｌ　Ｓ　１０　ユ５ Ｖａｌ　入ｓｐ　Ｌ＠ｕ　入ｒｇ　Ｏｌｙ　入ｒｇ　Ｃ１ｕ　Ｖａｌ　（ｌｕ　 ＶａＩ　Ｌｅｕ　ｅｌｙ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｐｒ。

３５　４０　４ｌ ｌ１ｍ　入１ａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　５＠ｒ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　入ｒｇ　ＧＩＦＩ 　丁ｙｒ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　丁ｈｒ　入ｘ９５０　５Ｓ　６０ Ｃｙｍ　Ｌｙ−Ａｌａ　Ａｓｐ　八ａｎ　入１ｍ　Ｃ１ｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｏ ｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　へｌａＧユｙ　ＧｌｙＧユｙ　Ｓｌｙ　Ｃｙｍ　入ｒｑ 　Ｇｌｙ　ＶａＬ　Ａｓｐ　＾τ９　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　ｃｙｓ　ＬＹ−人ｌａ　 Ｘ＋ｙｍ　Ｇ１ｎ５ｏ　！Ｉｓ　９０ Ｓ＠ｘ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｌ＠ｕ　Ｔｈｘ　Ａｌａ　Ａｓｐ　 Ａｉｍ　（＋ｌｎ　Ｃｍ！ＩＴ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｇｌｙｓｓ　１００　ユ０５ ？ｒｐ　入ｒｇ　Ｔｒｐ　Ｉｌｅ　Ａｒｇ　１１ｍ　Ａ−ｐ　Ｔｈｒ　Ａｌｅ　 Ｃ７６Ｖａｌ　（ｙ＠　丁ｈｒ　Ｌｓｕ　Ｌｅｕｌｌｏ　ユニ５　！２０ Ｓ＠ｔ　Ａｒｇ　ＴｈｔＧｌｙ　Ａｒｇ＾１ａ（２）配列番号　５８に関する情 報 （１）配列の特徴・ （Ａ）配列の長さ　１１４アミ７！！ （Ｂ）配列の；　アミノ酸 ＣＤ）トポロジー　直鎖状 （Ｘユ）配列番号　５８ Ｇｌｙ　ｖＭｌ　Ｓｅｒ　Ｇ３．ｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｓａｔ 　１％！’９　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｏｌｕ　Ｌｅｕ　Ａｌａｌ　Ｓ　１０　１ｓ Ｖａコ、ＣｙｓＡｓｐＡ１ｍＶａｌ釦ｒＧｌｙＴｒｐＶａｎＴｈｒＡｓｐＡｒｇ Ａｒｇっｒｈｒｋ５．Ｃ２０２１３Ｏ Ｖａｌ　ＡＬＰ　Ｌ＠％Ｉ　Ａｒｇ　ａｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ 　Ｖａｌ　Ｌｘ　Ｇ１．ｙ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｐｒ。

３５　４０　４ｌ ｌ１ｍ　Ａｌａ　Ｏｌｙ　Ｑｌｙ　Ｓｅｔ　ｌ１ｒｏ　Ｘａｕ　入ｒｇ　Ｇｉｎ 　Ｔｙｒ　Ｐｈ會　Ｐｈｓ　ＧＬｕ　Ｔｈｅ　＾ｘ９ｓｏ　ｓｓ　ｓ。

Ｃｙｍ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　ＡＩＩＰ　Ａ１１ｌｌ　Ａ１１ｌ　ＧｌＬＩ　Ｏｌｕ 　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　ＯユｙＡユａ　Ｇｌｙ　ＧｌｙＧｌｙ　Ｓｌｙ　Ｃ ｙ−入ｒｇ　Ｃ１ｙ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｍｊ、ｓ　Ａｌａ　＾ −Ｐ　Ａｌａ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ、８０　ａｓ　９０ ＾ｒｑ　Ｖａｎ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ａｒｇ　丁ｒｐｌユｅ　Ａｒｇ　工ｌｅ　Ａ ｌｐ　丁ｈｒ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｖａｎ　ｅｙ１９５　１００　ＸＯ５ 丁ｈｒ　Ｌｌｌｌｌ　Ｌａｕ　Ｓ＠ｔ　Ａｒｇ　丁ｈｒ　Ｏｌｙ　入ｒｇ　Ａ１ ｍ１１０　１ユ４ （２）配Ｊ１１番号・５９に関する情報。

（ｉ）配列の特徴。

（Ａ）配列の長さ・　１３０アミノ酸 （Ｂ）配列の型、アミノ酸 （ｐ）トポロジー　直鎖状 （ｘｉ）配列番号：５９ Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｔｌｖ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　 Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕしａｓｈｌ　５　１０　１５ Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ａｇｐ＾１ｍ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　ｌ’ａｌ　 Ｔｈｒ　ｊｓｐ　Ａｒｇ　Ａｒｇη「に１Ｐａｌ　Ａｔｐ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｇ ｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｖａｌしｘ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ 　Ｐｒ。

Ａ１ｍＡｉｍＧｌｙＧｌｙＳｅｒＰｒｏＬｅｕＲｉｇＧｉｎ丁ｙｒＰｈｅＰｈｅ ＧｌｕＴｈｒλｒｇＣｙｓ　Ｌｙｓ＾ｌａ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　 Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ６５　ＴＯ ７５ Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｖａｔ　ＡｔｐＡｘｚ　Ａｒｇ　Ｈ ｉｓ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　ＣｙｓＬｙｓ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｇｉ ｎ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ａｌａしｘ　Ｔｈｒ＾１ａ＾沖＾１ａ　 Ｇ１ｎＧｌｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ａｒｇ　Ｔｒｐ　Ｉｌｅ　Ａ ｒｇ　Ｉｌｅ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｖａｌｌｌｏ　１１５　１２ ０ Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　 Ａ１ｍＬｙｓ＾１ａＬｙｓＧｉｎＳｅｒ丁ｙｒＶａｌＡｒｇ＾１ｘＬ６Ｊ丁ｈｒ ＡｌａＡｓｐＡｈＧｉｎＧｌｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ａｒｇ　Ｔ ｒｐ　Ｉｌｅ　Ａｒｇ　Ｉｌｅ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｖａｌｌｌ ｏ　１１５　１２０ Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕしａ＋　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａ １ｍ（２）配列番号　６３に関する情報・ （１）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ、１３０アミ／１１ （Ｂ）配列の型　アミノ酸 （Ｄ）トポロジー二車鎖状 （ｘｌ）配列番号　６３ Ｇｌｙ　ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　 Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ａｌａｌ　５　１０　１５ Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　 Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　、ｕａＶａｌ　ＡＳＩ）　Ｌｅｕ　 Ａｎ　Ｇｌｙ　Ａｎ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　ＶａＩレ−Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｖ ａｌ　ｈ℃Ｘ５　４０　４５ Ａｌａ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｇｌｎ　 Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　ＡｒｇＣｙｓＬｙｓ＾ｌａＡｓｐＡ ｗＡｌａＧｌｕＧｌｕＧｌｙＧｌｙＰｒｏＧｌｙＡｌａＧｌｙＧｌｙＧｌｙ　Ｇ ｌｙ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ｈｉｓ　［ｌｉｓ　 Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　ｅｙｓａｏ　８５　９０ Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ａｌａ　 Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　、４ｓｐ　Ａｌａ　Ｇ１ｎＧｌｙＡｒｇＶａｌＧ１０ ５ＧｌｙＡｒ！丁ｒｐＩｌｅＡｒｇＩｌｅＡｓｐＴｈｒＡｌａＣｙｓＶａ１１１ ０　１１５　、１２０ Ｃｓ・ｓ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　、Ｊ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　 Ａ１ｍ（２）配列番号　６４に関する情報 （１）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ　１３０アミノ酸 （Ｂ）配列のｍ二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （！ｉ）配列番号二６４： Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　 Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ａ１ｍＶａｌ　Ｃｙｓ　Ａｓｐ　Ａ ｌａ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ａ ｒｇ　Ｔｈｒ　Ａ１ｍ２０　２５　３Ｇ Ｖａｌ　Ａｆｐ　Ｌｅａ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　 Ｖａｔ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｐｒ。

Ａｉｍ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｇ１１ｌ 　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　ＡｒｇＣｙｓ　Ｌｙｓ　Ａｉｍ　 Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ａｉｍ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　 Ａｌａ　Ｇｌｙ　ＧｌｙＧｌｙ　Ｇａｙ　Ｃｙｓ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ａ ｓｐ　Ａｒｇんｍ　Ｈｉｓ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　ｅｙｓａｏ　お 　郭 Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ａｉｍし ａ＋　Ｔｈｒ　Ａｌｅ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｇ１ｎＧＩＦＡｒｇＶａｌｃ１７Ｔｒ ｐＡｒＩＨＴｒｐＩ１０５ＧＩＦＡｒ＃Ｔｈｒ＾１ｍＣｙｓＶａ１Ｃｎ　Ｔｈｒ 　Ｌｅｕ　Ｌｅａ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａ１ｍ１２５　 １３Ｇ （２）配列番号二６５に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：　１３０アミノ酸 （Ｂ）配列の型・アミノ酸 （Ｄ）トポロジー　直鎖状 （ｘｉ）配列番号二６５゜ Ｃ１ｙ　Ｖａｌ　ｊ＠ｒ　Ｃ１ｕ　Ｔｈｒ　Ａｌｅ　Ｐｒｏ　Ａｌｍ　Ｓ＠ｒ　 Ａｒｇ　入ｒｑ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｌｅａ　入１ａｌ　Ｓ　１０　１ｓ Ｖｌｌｌ　ＣＹ＠　ＡＳＰ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｓｅｔ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　ｖａｌ 　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ｔｈｅ　入１龜＾１ａ　Ａｌｍ　にＧＬｙ 　Ｇｌｙ　Ｓａｔ　Ｐｒｏ　Ｌｓｕ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　丁ｙｒ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ 　Ｇｌｕ　Ｔｈｅ　＾ｘ９Ｓｏ　５５　６０ Ｃｙｍ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｃ１ｕ　Ｇｌｙ　 Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｏｌｙ　ＧｌｙＣ１ｙ（１ｙＣＹ−＾ｒｇＧ ｌｙＶａｌＡｍｐＡｒｇＴｈｒＨｉｓＴｒｐＶａｌＳｇｓｔＧｌｕＣｙｓ（２） 配列番号、６６に関する情報 （１）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ＝　１３０アミノ酸 （Ｂ）配列の型、アミ／ＩＩ （Ｄ）トポロジー　直鎖状 （ｘｌ）配列番号　６６ Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｇａｙ：　Ｃ１ｕ　Ｔｈｘ　入１ａ　Ｐｒｏ　入１ａ　Ｓ＠ｒ 　＾ｘ９　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｌａｕ　Ａ１ｍ１　５　ユ０　１５ Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｓ＠ｔ　Ｃ１ｙ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　 Ｔｈｅ　Ａｓｐ　入ｒ９＾ｒ９　Ｔｈｅ　入１ａ２ｏ　２５　コロ Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　入ｒｇ　Ｇｌｙ　入ｒｇ　Ｃ１ｕ　ＶａＩ　ＧユｕＶ ａユ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｐｒ。

人１ｍ　Ａｌａ　Ｏｌｙ　Ｇｌｙ　５＊ｒ　Ｐｒｏ　ＬａＬＩ　ｋｘｇ　Ｇｌｎ 　Ｔｙｘ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　丁ｈｒ　λｘ９ｓｏ　ｓｓ　ｓ。

Ｃｙｓ　ＬｙＩＩ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｓｒｉ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌ ｙ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｏｌｙ　入１ａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ６５　７０　フ５ ｅｌｙ　Ｇｌｙ　Ｃｙｍ　入ｒｇ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ｔｙｒ　 ＨＬ＊　丁ｒｐ　Ｖａｌ　５＊ｒ　Ｇｌ＋ａ　ＣＹｓＬｙｓ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　 Ｇｉｎ　５ＩＩｒ　Ｔｙｒ　ＶａＩ　入ｒｇ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ａｌｅ 　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｇ１ｎＧｌｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ａｒｇ　 丁ｒｐ　ＸＬ＠　Ａｒｇ　工ｌｅ　Ａｓｐ　Ｔｈｅ　Ａｌａ　ｅｙｅ　Ｖａｌユ １０　１ユＳ　ユ２０ （２）配列番号　６７に関する情報 （１）配列の特徴７ ＶａｌＡｓｐＬ＊ｕＡｒｇＧｌｙＡｒｇＧｌｕＶａｌＧｌｕＶａｎＬ倫ｕＧｌｙ ＧｌｕＶａｌＰｒ。

（Ａ）配列の長さ：　１３０アミノ酸 （Ｂ）配列の型、アミノ酸 （Ｄ）トポロジー・直鎖状 Ｖ＆ｌ　Ｃｙｓ　Ａｓｐ　ＡＬｍ　Ｖａｌ　Ｓａｔ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　 Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　入ｘ９　Ｔｈｅ　入１龜ＶａｌＡｓｐＴＡｕＡｒｇＧ ｌｙＡｒＱＧｌｕＶａｌＧｌｕＶａｌＬａｕＧｌｙＧｌｕＶａＬＰｅａＡｌａ　 Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　５ｅｒ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　ｋｒｑ　Ｇｉｎ　Ｔｙｔ　 Ｐｈ１ｔｈａ　Ｇｌｕτｈｒ　）ｉｒｇｃｙｍ　ｚｙｓ　八１ａ　Ａｓｐ　Ａｓ ｎ　Ａｉｍ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　ＧＬｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　ＡＬｍ　Ｇｌ ｙ　Ｇｌｙ６５　７ｏ　フ５ Ｇｌｙ　入ｒｇ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　丁ｒｐ　ｋｒｇ　Ｔｔｐ　Ｉｌｅ　入：９　 工１ｅ　λ廖Ｐ　Ｔｋｓｘ　Ａｌｍ　Ｃｙｓ　Ｖａｌエユ０　１１５　１２０ （１）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ　１３０アミノ酸 ＣＢ）配列の盟二アミノ酸 （Ｄ）トポロジー・直鎮状 （ｘｌ）配列番号、６８・ Ｇｌｙ　ＶａＩ　Ｓ＠ｔ　Ｃ１ｕ　丁）＋ｒ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ａｌｍ　Ｓ＠ｔ 　入ｒ９　人ｒｇ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　入１ａユＳ１０λ５ Ｖａｌ　Ｃｙｓ　ＡＩＩＰ　Ａｌｍ　Ｖａｌ　ｓ＠ｒ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ 　丁ｈｘ　Ａｓｐ　入ｒｇ　Ａｒｇ　丁ｈｒＡλａＶａｌ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　Ａ ｒｇ　Ｏｌｙ　ＪＬｒｇ　（：ｌｕ　ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｖａｎ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ 　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｐｒ。

３５　４０　４Ｓ Ａｌａ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｓ＠ｒ　Ｐｒｏ　Ｌｅａ　Ａｒｇ　Ｇｌｎ　 Ｔｙｒ　１ｌｈｅ　Ｐｈ會　Ｇｌｕ　丁ｈｒ　＾ｘ９Ｓｏ　５５　６０ Ｃｙｓ　ｒ、ｙ−１１ｍ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｃ１ｙ　 Ｃ１ｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｃ１ｙ　Ｃ１ｙＧｌｙ　Ｇｌｙ　Ｃｙ−Ａｒ ｇ　Ｏｌｙ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　１４ｉｓ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　５ ｅｒ　Ｃ１ｕ　ｅｙｓａｏ　８％　９０ ＧＩＹ　Ａｒｇ　Ｖｌｌｌ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ａｒｇ　Ｔｒｐ　ズｌｅ　Ａｒ９ 　ズ１ｍ　Ｇｌｕ　丁ｈｒＡユａＣｙ−シー１ユ１０　１１５　）２０ Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ｌ＠ｕ　Ｌｓｕ　ｓｅｒ　入ｒ９　丁ｈｒ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　 Ａｌａ１２５　ユコロ （２）配列番号・６９に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ・　１３０アミノ酸 （Ｂ）配列の型・アミノ酸 （Ｄ）トポロジー　直鎖状 （ｘｌ）配列番号　６９ Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｚ＠ｔ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ａコミ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　ｊａｒ　 Ａｒ９　人ｒｇ　Ｃ１ｙ　Ｇｌｕ　Ｌａｕ　入１ａ１　５　ユＯユ５ Ｖａｌ　Ｃｙｍ　Ａｓｐ　Ａｌａ　ＶａＩ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　丁ｒ′Ｐ　ｖ＆１ 　丁ｈｒ　入−ｐ　入ｒ９　人ｒ９　丁ｈｒ　入１ａＶａｌＡｓｐＬ＠ｕＡｒｇ ｃｌｙＡｒｇＧｌｕＶａユＧｌｕＶａ１ＬｅｕＣ１ｙＧＬｕＶａｌ？ｒ。

Ａｌａ　入１ａ　Ｇｌｙ　Ｏｌｙ　ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　 丁ｙｒ　ｔｈｅ　Ｉ’ｈｅ　Ｇｌｕ　丁ｈｒ　入ｒ９Ｓｏ　５５　６０ Ｌｙ・　入１ａ　Ｌｙｓ　ｃλｎ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　λｒ９人１ａ　！ Ａｌｌ　Ｔｈｒ　＾工龜入ｓｐ　入１ａ　Ｇ１ｎ９Ｓ１０ロ　１０Ｓ Ｇｌｙ　入ｒｇ　ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ａｒｇ　丁ｒｐ　ｎｏ　Ａｒｇ　Ｘ ｌｅ　＾ｓｎ　ｔｈｒ　入１ａ　Ｃ：ｙｍ　Ｖａｌｎｏ　１ｌＳ１２０ ｅｙｆｉ　Ｔｈｒ　Ｌａｕ　Ｌａｕ　Ｓｉｒ　入ｒ９　丁ｈｘ　Ｏｌｙ　入ｒ９ 　＾１ａユ２５　１３０ （２）配列番号、７０に関する情報 （ｉ）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ　１３０　アミノ酸 （Ｂ）配列の型　アミノ酸 （ｐ）トポロジー・直鎖状 （ｘｌ）配列番号・７０ Ｇｌｙ　ｖａｌ　Ｓｍｇ　Ｇｌｕ　Ｔｈｘ　ｋｌａ　Ｐｒｏ　八Ｌｍ　Ｓｅｒ　 Ａｒ９　人ｒｇ　Ｃ１ｙ　Ｇｌｕ　ＬａＩＩ　へ１ａユ５１０ｉｓ （２）配列番号＝７１に関する情報： （１）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ、１３０アミノ酸 （Ｂ）配列の！！！：　アミ７Ｎ！ （Ｄ）トポロジー　ｉ［１１状 Ｖａｎ　ｈ＠ｐ　Ｌａｕ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　 Ｖｉｌ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｐｒ。

Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　ｅｙｓ　Ａｒｇ　Ｏｌｙ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ａｒ９　Ａｒｇ　 １ｌｉｓ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　ｊａｒ　Ｇｌｕ　ｅｙｓｓｏ　ａｓ　ｓ口 Ｌｙｓ　Ａｌｍ　Ｌｙｓ　Ｇ工ｎ　Ｓｅｒ　Ｔｙｘ　Ｖａｎ　入ｘｇ　Ａｌａ　 Ｌ−ｕ　Ｔｈｒ　Ａｌｍ　Ａｓｐ　Ａｌｍ　Ｇ１ｎ９５　１０ロ　ユ０５ Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｃ１ｙ　Ｔｒｐ　Ａｒｇ　Ｔｒｐ　ＸＬｍ　ＪＬｒｇ 　Ｘｌｇａ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｃｙｍ　Ｖａｌｌｌｏ　１ユ５　１２０ （１）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ＝１３０アミノ酸 （Ｂ）配列の型　アミノ酸 （ｐ）トポロジー・直鎖状 （ｘｌ）配列番号・７２・ Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　ｌ１ｒｏ　入１ａ　Ｓａｔ 　Ａｒｇ　入ｘｇ　Ｇｌｙ　Ｏｌｕ　Ｌｅｕ　＾１ａＩ　Ｓ　１０　１ｓ Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ａｓｐ　Ａｌｍ　Ｖｍｌ　Ｓａｔ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　 丁ｈｒ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　ＪＬｒｇ　丁ｈｅ　ＡｌａＶａｌ　ＡＩＩＰ　ＬａＩ Ｉ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｏｌｕ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｇｌ ｙ　Ｇｌｖ　Ｖａｌ　Ｐｒ。

コＳ　４０　４５ ＾１ａ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｓｉｒ　Ｐｒｏ　Ｌ＠ｕ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　 Ｔｙｒ　ＰＭ　ｔｈｅ　Ｇｌｕ　丁ｈｒ　λｒ９Ｓｏ　５５　６０ ＣｙｍＬｙａＡｌｌｌＡＩＩＰＡｓｎＡユａＧｌｕＧｌｕＧｌｙＯ１ｙＰｒｏＧ ｌｙＡｌａＧｌｙＧｌｙＣ１ｙＧｌｙＣｙｓＡｒｇＧ１ｙＶａｎＡｌｐＡｒｇＡ ｒｇ８４１ＴｒｐＶａ１ｇｅｒＧユｕＣｙｓａｏ　ａｓ　ｓ。

Ｌｙｅ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｃｈｉｎ　Ｓｓｒ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　＾ユａ 　Ｌｅｕ　丁ｈｒ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｇ１ｎ９５　ユロ０　ユ０５ Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｖｍｌ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　ｋｘｇ　丁ｒｐ　Ｘｌｅ　Ａｒｇ　 Ｘｌｅ　Ｓｅｒ　丁ｈｒ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｖａｎ１ユ０　１１５　ユ２０ Ｃｙ−丁ｈｒ　Ｌ＠ｕ　Ｌ＠ｕ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　丁ｈｒ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａ １ｍユ２５　ユ３０ （２）配列番号、７３に関する情報 （ｉ）　ｆ！列の特徴： （Ａ）配列の長さ　１３０アミノ酸 （Ｂ）配列の２．アミ／＠ （Ｄ）トポロジー　直鎖状 （χ１）配列番号ニア３： Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｓａｔ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ａｌｅ　Ｍａｒ　 Ａｒｇ　Ａｒｇ　ＧユｙＧユｕ　Ｌ参ｕ　Ａｌａ１　５　１０　ｌ５ Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ａｓｐ　入１ｍ　Ｖａｌ　５＠ｒ　Ｇｌｙ　丁ｒｐ　Ｖａｌ　 丁ｈｒ　Ａｓｐ　入ｒｇ　Ａ９　丁ｈｒ入１１Ｃｙｓ　Ｌｙ＠　Ａｌｍ　入＠ｐ 　ｋｅｎ　ｘｌａ　Ｇｌｕ　Ｇｌ＋ａ　Ｏｌｙ　Ｃ１ｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　入１ ａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ６５　フ０　フ５ Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｃｙｍ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　 ＭＬ−Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ｓｉｒ　Ｇｌｖ　Ｃｙｍｎｏ　ｓｓ　ｓ。

Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ａｌａ　 Ｌａｖａ　丁ｈｒ　人工ａ　ＭＰ　Ａｌａ　Ｇ１ｎ９５　ユ００　ユロ５ ０１ｙ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｕｙ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｔｒｐ　Ｘｈ＊　入ｒｇ　Ｘ ｌｅ　丁ｈｒ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　ｅｙｓ　Ｖａｌｌｌｏ　１１５　！２０ ｃｙ−丁ｈｒ　！Ｊ％Ｉ　ＬａＩＩ　Ｓｅｔ　Ａｒｇ　丁’ｈｒ　Ｇｌｙ　ＪＬ ｒｇ　Ａｌａ（２）配列番号　７４に関する情報。

（１）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ　４アミノ酸 （Ｂ）配列の型　アミノ酸 （Ｄ）トポロジー　直鎖状 （ｘｌ）配列番号・７４ 工１ｍ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ （２）　ｆ！配列番号７５に関する情報（１）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ　５アミノ酸 （Ｂ）配列の型、アミ７ｍ１ （ｐ）トポロジー　直鎮状 （ｘｌ）配列番号・７５ Ｃ１ｕ　工ＩＩＩ　Ｌｙｓ　丁ｈｒ　Ｇｌｙ（２）配列番号、７６に関する情報 − （ｉ）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ　６アミノ酸 （Ｂ）配列の豐二アミノ酸 （ｐ）トボフジーー直鎖状 （ｘｌ）配列番号　７６ ｃｌｕ　Ｘｌｅ　Ｌｙｅ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　入１！１（２）配列番号　７７に関 する情報・ （１）配列の特徴 （Ａ）配列の長さ　４　アミノ酸 （Ｂ）配列のフ・アミノ酸 （Ｄ）トポロジー　直鎖状 （ｘｌ）配列番号　７７ ！ｏｒ　Ｐｒｏ　Ｖｌｌｌ　Ｌｙｅ Ｔｙｒ　＾ユａ　Ｇｌｕ　ＨＬｍ　ＬＹ＃　！ｏｒＡｒｇ　Ｔｙｒ　＾ｌａ　Ｇ Ｌｕ　ＨＬｍ　Ｌｙｓ　５＠ｒｌ　５フ （ｘｌ）配列番号　８１ Ａｚｇ　？ｙｒ＾ｌａ　Ｇｌｕ　Ｈｉｓ　Ｌｙｓ　！＠ｒ　ＨＬｍユ５８ Ｔｙｒ　入１ａ　Ｇｌｕ　ＨＬｗ　Ｌｙｅ　ｆｅ＠ｔ　１１１ｇ１　５フ （Ｂ）配列の：　アミノ酸 （Ａ）配列の長さ　４７　アミノ酸 Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｃｙｍ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　 ｌ：’ｙｓ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｃ１ｙ　Ａｌａ　０１ｙ１　ｓ　ユＯｉｓ τｈｒ　Ｃｙｍ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　ｅｙｅ　Ａｌｍ　ＡＬａ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　 Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｔｈｅ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　ＴｈｒτｈｘＣＹ箇τｈｒｋＬａＴ ｈｒＧｌｙ＾１ａＧ１ｙＡｌａｅｙｓＧｌｙλユａＡｌａｃｌｙＴｈ：Ｃｙｍ　 ｅｙｓ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　ＣＹｍ　Ｇｌｙ　Ｃｙ−Ｔｈｅ　ｅｙｓ　Ｔ ｈｘ　人工ａ　Ｇｌｙ　入１ａＧ工ｙ１　５　ｉｏ　ｉｓ 丁’ｈｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　λ１ａｃｙ−人１ｍ　Ａｌｍ　Ａｌａ　Ｃ’ｙｓ　 Ａｌｍ　Ａｌａ　丁ｈｒ　λ１１　丁ｈｘ　丁ｈｒτｈｒ　Ｔｈｒ　丁ｈｘ　丁 ｈｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ａｌａ　入１ａ　Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　ＣＹＪＩ　 Ｏｌｙ　人工ａ　丁ｈｒ（ｘｌ）配列番号　９５ Ｃｙｓ　ＣＹｍ　Ｇｌｙ　ＣＹｍ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｃ１ｙ　Ｃｙｗｌ　Ｔｈｅ 　Ｃｙａ　Ｔｈｅ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｇｌｙｌ　５　ユＯｉｓ τｈｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　ｈＬａ　ＣＹｍ　Ａｌｍ　Ａｌａ　Ｏｌｙ　Ｃｙｓ　 Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　丁ｈｒｅｙｓ　Ｃｙｓ　ａｚｙ　（ ”ｙｓ　Ｃ１ｙ　Ｃｙｓ　ａｌｙ　ｃｙｓ　丁ｈｒ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　 Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｇｌｙｌ　Ｓ　１０　ユＳ τｈｒ　ＣＹｍ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ａｌｍ　Ａｌａ　Ｃ１ｙ　Ｃｙｓ　 入１ａ　Ｇｌｙ　Ｔｈｅ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　τｈｘＴｈｒ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ａ ｌａ　Ｔｈｒ　ｃｌｙ　Ａｌａ　Ｏｌｙ　Ａｌａ　ｃｙｓ　Ａｌｍ　Ａｌｍ　Ａ ｌａ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ３５　４０　’　４５ ｅｙｓ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　 ｃｌｙ　Ｃｙｓ　Ｃｙｍ　Ｇｌｙ　Ａｌｍ　Ａｌａｌ　５　１０　１５ Ｔｈｒ　Ｔｈｅ　Ｃｙｍ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　＾ｌｅａ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｃｙｓ 　Ｃ１ｙ　ｅｙｓ　Ａｌａ　Ｃ１ｙ　Ｃ１ｙ　Ａｌａ２０　２５　３Ｏ Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　 Ｃｙｓ　Ｃｙｓ　Ｔｈｅ　丁ｈｒ　入１ａ　ＴｈｒコＳ　４０　４１ （２）配列番号　９８に関する情報・ （Ａ）配列の長さ　４５アミノ酸 ＣＢ）配列の：　アミノ酸 ｅｙｓ　Ｑｌｙ　Ｇｌｙ　Ｃｙｍ　Ｔｈｒ　ＣｙｍＡｌａ　Ｏｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇ ｌｙ　Ｃｙｓ　Ｃｙｍ　Ｇｌｙ＾λｍ　Ａｌａｌ　Ｓ　１０　１５ Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｃｙ−Ａｌａ　丁ｈｒ　Ａｌａ　Ｃｙｍ　Ａ ｌａ　Ｃｙｓ　＾１皐　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｃｙ廖ａｎｙ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｇｌ ｙ　Ｔｈｒ　Ｃｙｍ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｇｌ ｙ　Ａｌａ　丁ｈｒ（２）配列番号：９９に関する情報 ｅｙｓ　Ｇｌｙ　Ｏｌｙ　ｅｙｓ　丁ｈｒ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　 Ｃ１ｙ　Ｃｙｓ　ｅｙｅ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　＾１畠ユ５ユＱ１５ 丁ｈｒ　丁ｈｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　ｅｙｓ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　ｊＬｌａ　ＣＹｍ 　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　入１ａＴｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｈｅ　 λ工＆　丁ｈｒ　ＣＹｍ　Ｏｌｙ　入１ａ　Ｔｈｅ　Ｃ１ｙ　ｅｙ−τｈｈ−人 工１　λ１暑　丁ｈｒ２）配列番号　１００に関する情報 Ｃｙｓ　Ｏｌｙ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　Ａｌｍ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　 Ｃ１ｙ　ｅｙｓ　Ｃｙｓ　Ｃ１ｙ　Ａｌａ　Ａｌａｌ　５　１０　１５ Ｔｈｒ　Ｔｈｅ　Ｃｙ−Ｃ１ｙ　ｅｙｓ　Ａｌａ　Ａｌｍ　Ａｌａ　ＣＹｍ　Ｇ ｌｙ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　ｃｘｙ　入１ａＴｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ａｌ ａ　丁ｈｒ　Ｃｐｓ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｃ１ｙ　ＣＹｍ　Ｔｈｒ　Ａｌ ａ　入１ａ　丁ｈｒＦＩ（スｍΣ１ ｔ２”ｉＥｉ！ＥＩ　ｌ１ｌｌＥ　！Ｆｉ円ｔｉＷ’ｊＴ　ν’ｎ’）　Ｈ’４ ’４”Ｍ”　Ｈ’Ａ’ａ’ｊ　”、’ａ’４ビ１９蕾ロ：ＧＵＲＥ　３ １　ＣＧＡＧＡＧＡＴＧＣＴＣＴＧＡＧ　ＡＧＡ　ＴＧＣＴＣＣＣＡＣＴＣＣＣ ＣＣＡＧＧ　ＣＴＣＣＣＴ　ＣＣＧＩ　Ｇｌｕ　ＡＸｑ　Ｃｙｓ　ｓｅｒ　Ｇｌ ｕ　Ａｒｑ　ＣｙＥｉ　Ｓｅｒ　Ｈｉｓ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ａｒ９　Ｌｅｕ　ｐ ｒｏ　Ｐｒ。

４７　ＣＡＴ　ＣＣＣＣＣＴ　ＣＡＴ　ＴＴｒ　ＣＣＴ　ＣＣＴ　ＣＣＣＣＡＧ 　ＴＧＴ　ＧＴＣＡＡＴ　ＧＧＡ　ＧＴＣＣＴＡ　ＡＣＣ１６Ｈｌｓ　Ｐｒｏ　 Ｐｒｏ　Ｈｉｓ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　ＰｒＯＧｉｎ　Ｃｙｓ　Ｖａｌ　Ａ ｓｎ　ＧＩＹＶａｌ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ９５α：Ａ　ＴＣＣＴＣＧ　ＡＣＡ　ＴＴ ＧＴＣＧ　ＣＣＴ　ｆｆＴ　ＣＣＴ　ＣＣＴ　ＣＣＡ　ＧＡＧ　ＴＧＧ　ＧＡＳ 　ＣＴＴ　ＣＴＴ３２　ｐｒｏ　Ｓｅｒ　Ｓａｒ　Ｔｈｒ　ＩＪｕ　Ｓｅｒ　Ｐ ｒｏ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｔｒｐ　Ａｇｐ　Ｌｅｕ　k ｅｕ １４３　ＴＴＣＣＣＣＣＧＡ　ＧＴＧ　ＧＴＣ口’Ｇ　ＴＣＴ　ＡＧＧ　ＧＧＴ 　ＧＣＣＧＣＴ　ＧＣＣＧＧＧ　ＣＣＣＣＣＴ　ＣＴＧ４８　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　 Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ａｌａ　 Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　kａｕ １９１　ＧＴＣ’Ｉ’Ｉ’ＣＣ’１℃ＣＴＧ　ＧＡＧ　ＡＣＴ　ＧＧＡ　ＧＣＣ ＴＴＴ　ＣＧＧ　ＧＡＧ　ＴＣＡ　ＧＣＡ　ＧＧＣＧＣＣＣfＧ ６４　Ｍａｌ　Ｐｈｅ　Ｌａｕ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｐ ｈｅ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　`ｒｇ ２３９　ＧＣＣＭＣＣＧＣＡＧＣＣＡＧ　ＣＧＡ　ＧＧＧ　ＧＴに　ＡＧＣＧＡ Ｔ　ＡＣＴ　ＴＣＡ　ＣＣＧ　ＧＣＧ　ＡＧＴ　ＣＡＴ８０　ＡＬａ　Ａｓｎ　 ＡＸｑ　Ｓｅｒ　Ｇｉｎ　Ａｘｑ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　’ｒｈｒ 　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　ｓａｒ@Ｈｉｓ ２８７　ＣＡＧ　ＧＧＴ　ＧＡＧ　ＣＴＧ　ＧＣＣＧＴＧ　ＴＧＣＧＡＴ　ＧＣ Ａ　ＧＴＣＡＧＴ　ＧＴＣＴＧＧ　ＧＴＧ　ＡＣＡ　ＧＡＣ９６Ｇｉｎ　Ｇｌｙ 　Ｇｌｕ　Ｌａｕ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｍａｌ　Ｓｅｒ 　Ｖａｌ　Ｔｒｐ　Ｍａｌ　Ｔｈｒ　Ａ唐■ ３３５　ＣＣＣＴＧＧ　ＡＣＴ　ＧＣＴ　ＧＴＧ　ＧＡＣＴ’ｌ’Ｇ　ＧＧＴ　 ＧＴＧ　ＣＴＣＧＡＧ　ＧＴＧ　ＧＡＧ　ＧＴＧ−ｎ　ＧＧb １１２Ｐｒｏ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　Ｖ ａｌ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｍａｌ　Ｌｅｕ　fｌｙ ３８３　ＧＡＧ　ＧＴＧ　ＣＣＴ　ＧＣＡ　ＧＣＴ　ＧＴＣＧＧＣＡＧＴ　ＴＣ ＣＣＴＣＣＧＣＣＡＧ　ＣＡＣＴＴＣＴＴＴ　ＧＴＴ１２Ｂ　Ｇｌｕ　Ｍａｌ　 Ｐｒｏ　ＡＬａＡＬａ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　ｋｌＧｉｎ 　Ｈｌｓ　Ｐｈｅ　Ｐｈａ　ＶａP ４３１　ＧＣＣＣＧＣＴＴＣＧＡＧ　ＧＣＣＧＡＴ　ＡＡＡ　ＴＣＴ　ＧＡＧ　 ＧＭ　ＧＧ？’　ＧＧＣＣＣＧ　ＧＧＧ　ＧＴＡ　ＧＧＴ１４４　Ａｌａ　Ａｒ ｇ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ａｊｐ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌ ｙ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ@Ｇｌｙ ４７９　ＧＧＡ　ＧＧＧ　ＧＣＴ　ＧＣＣＧＣＣＧＧＧ　ＧＴＧ　ＴＧＧ　ＡＣ ＣＧＧＧα；Ｇ　ＣＡＣＴＧＧ　ＧＴＧ　ＴＣＴ　ＧＡＧ１６０　Ｇｌｙ　Ｇｌ ｙ　Ａｌａ　ＡＬａ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　ＶａＩＴｒｐ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ 　Ｈｉｓ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　fｌｕ ５２７　ＴＧＣＭＧ　ＧＣＣＭＧ　ＣＡＧ　ＴＣＣＴＡＴ　ＧＴＧ　ＣＧＧ　Ｇ ＣＡ　’ｆ’１℃ＡＣＣＧＣＴ　ＧＡＴ　ＧＣＣＣＡＧ１７６　Ｃｙｓ　Ｌ７ｓ 　Ａｌａ　Ｌ７Ｓ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｔ３Ｆｒ　Ｖａｌ　Ｍｑ　Ａｌａ　Ｌｅｕ 　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｌａ@Ｇ１ｎ ５７５　ＧＧＣＣＧ’ｌ’　ＧＴＧＧＡＣＴＧＧＣＧＡ　ｇ　ＡＴＴ　ＣＭ　Ａ Ｔ’Ｔ　ＧＧＣＡＣＡ　ＧＣＣＴＧＴ　ＧＴＣＴＧＣ１９２ＧＬｙ　Ａｒｇ　Ｖ ａｌ　Ａｓｐ　ｒｒｐ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　工１ａ　Ｇｉｎ工ｌａ　Ｇｌｙ　Ｔｈ ｒ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｖａ工Ｃｙ■ ６２３　ＡＣＡ　ＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＧＧ　ＡＣＴ　ＧＧＣＣＧＧ　ＧｅＣＴ ＧＡ　ＧＡＣＴＴＡＴＡ　Ｃαス圓〜にＴ２Ｏ８Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｌａｕ　Ｓａ ｒ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｌａ　ＯＰ會６７１　ＧＧＴＣＡＧＧ ＣＡＧ　ＡＡＡＡＡ−一−８°：；−ロ８；呂　目ヨ謂８　エ８＄呂；三；８国 際調査報告 ””　ＰｅＴｔｍｔｒ＋ｏ　ｌ−ｍ−Ｉ−ｍ　ｔｚｎ　−ｍｔｓ　煽を国際調査 報告 フロント・べ・−ジの続き （５Ｄ［酎、ｃｔ、′−職別記号　庁内整理祉号Ａ６　］、、Ｋ　３９／３９５ 　Ｎ　９２８４　４ＣＣ０７Ｋ　７１０４　８３１８−４Ｈ ７１０６８３１８−４Ｎ−（ ７／１０　ＺＮＡ　７５３７−４Ｈ １３１００８５１７−４Ｈ Ｃ１２Ｐ　２１１００　Ｃ８２１４−４Ｂ２１１０８　８２１４−４Ｂ Ｃ１２Ｑ　１／６８　７８２３−４Ｂ ／／　Ｃ０７Ｋ　９９：００　８３１８−４Ｈ（８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、Ｂ Ｅ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、　ＥＳ、　ＦＲ，ＧＢ、　ＧＲ，ＩＴ、　ＬＵ、　ＮＬ、　ＳＥＩ　ＡＵ 、　ＣＡ、ＪＰ、　ＵＳ 卜゛　１

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ＮＴ−４をコードする単離された核酸。 ２．成熟ヒトＮＴ−４のための図１記載の核酸配列を有する請求項１の単離され た核酸。 ３．請求項１の核酸を含有するベクター。 ４．請求項１の核酸を含有する宿主細胞。 ５．動物種起源のＮＴ−４を含有し、該動物種の不純物ポリペプチドを含有しな い組成物。 ６．ＮＴ−４がヒト起源である請求項５の組成物。 ７．ストリンジェント条件下でＮＴ−４をコードするＤＮＡとハイブリダイズす る核酸、但しＮＧＦ、ＢＤＮＦまたはＮＴ−３をコードする核酸を除く。 ８．ヒトＮＴ−４βのための図３記載の核酸を含有する請求項７の核酸。 ９．ヒトＮＴ−４γのための図４記載の核酸を含有する請求項７の核酸。 １０．ヒトＮＴ−４Δのための図５記載の核酸を含有する請求項７の核酸。 １１．免疫原ポリペプチドまたは非タンパク性ポリマーに結合したＮＴ−４を含 有する組成物。 １２．薬学的に許容し得る担体内に、有効量のＮＴ−４を含有する医薬組成物。 １３．さらに、ＮＧＦ、ＢＤＮＦまたはＮＴ−３をも含有する請求項１２の組成 物。 １４，ＮＴ−４と結合し得るが、ＮＧＦ、ＢＤＮＦまたはＮＴ−３とは結合する ことができない抗体。 １５．ＮＴ−４と結合し得るモノクローナル抗体。 １６．ＮＧＦ、ＢＤＮＦまたはＮＴ−３とは交差反応しない請求項１５のモノク ローナル抗体。 １７．哺乳類に有効量のＮＴ−４を投与することを含む神経変性性疾患または損 傷した神経細胞の治療方法。 １８．哺乳類がヒトである請求項１７の方法。 １９．有効量のＮＧＦ、ＢＤＮＦまたはＮＴ−３をも哺乳類に投与することを含 む請求項１７の方法。 ２０．神経変性性疾患がハンチントン病、アルツハイマー症、ＡＬＳまたはパー キンソン病であり、損傷した神経細胞が外傷によるものである請求項１７の方法 。 ２１．請求項１４の抗体を用いてインビトロまたはインビボでＮＴ−４を検出す る方法。 ２２．ＮＴ−４の混合物を請求項１４の抗体を結合させたカラムに通すことを含 む、ＮＴ−４の精製法。 ２３．請求項４の宿主細胞を培養し、宿主細胞培養物からＮＴ−４を回収するこ とを含むＮＴ−４の製造法。 ２４．ＮＴ−４を宿主細胞培養培地から回収する請求項２３の方法。