JPH0644874B2 - シュクラロースの製造方法 - Google Patents
シュクラロースの製造方法Info
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- JPH0644874B2 JPH0644874B2 JP61249397A JP24939786A JPH0644874B2 JP H0644874 B2 JPH0644874 B2 JP H0644874B2 JP 61249397 A JP61249397 A JP 61249397A JP 24939786 A JP24939786 A JP 24939786A JP H0644874 B2 JPH0644874 B2 JP H0644874B2
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- C12P19/20—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an exo-1,4 alpha-glucosidase, e.g. dextrose
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明はラフイノースの新規テトラ塩素化誘導体、その
製造法および蔗糖より約６００×甘い強力な甘味剤シユ
クラロース（４，１′，６′−トリクロロ−４，１′，
６′−トリデオキシガラクトシユクロース、TGSとして
知られる）の製造に使用する方法に関する。
製造法および蔗糖より約６００×甘い強力な甘味剤シユ
クラロース（４，１′，６′−トリクロロ−４，１′，
６′−トリデオキシガラクトシユクロース、TGSとして
知られる）の製造に使用する方法に関する。
シユクラロースへの経路（例えば、Khan等、carbohydra
te Research,３９、１９７５、253；Faircloughら、Car
bohydrate Research、４０、１９７５、２８５−２９
８、米国特許第４，３６２，８６９号、英国特許第２，
０６５，６４８号参照）には、６位をブロツクしてその
位置の塩素化を防止し、４−、１′−および６′−位を
塩素化する蔗糖誘導体の生成を包含する。米国特許第
４，３６２，８６９号とFaircloughの方法では、蔗糖を
３つの主な位置（６−、１′−および６′−）でトリチ
ル化しついでパーアセチル化する。ついでトリチル基を
除いて、２，３，４，３′，４′−ペンタアセテートを
得る。４位のアセテートは、不活性溶媒中稀酢酸で処理
して、塩素化可能な２，３，６，３′，４′−ペンタア
セテートを得る特許方法の場合には、６位に移動させ
る。この方法はトリチル化、アセチル化、脱トリチル化
および異性化の結合工程を含むから、６位を塩素化させ
ない簡単な方法が要望されている。
te Research,３９、１９７５、253；Faircloughら、Car
bohydrate Research、４０、１９７５、２８５−２９
８、米国特許第４，３６２，８６９号、英国特許第２，
０６５，６４８号参照）には、６位をブロツクしてその
位置の塩素化を防止し、４−、１′−および６′−位を
塩素化する蔗糖誘導体の生成を包含する。米国特許第
４，３６２，８６９号とFaircloughの方法では、蔗糖を
３つの主な位置（６−、１′−および６′−）でトリチ
ル化しついでパーアセチル化する。ついでトリチル基を
除いて、２，３，４，３′，４′−ペンタアセテートを
得る。４位のアセテートは、不活性溶媒中稀酢酸で処理
して、塩素化可能な２，３，６，３′，４′−ペンタア
セテートを得る特許方法の場合には、６位に移動させ
る。この方法はトリチル化、アセチル化、脱トリチル化
および異性化の結合工程を含むから、６位を塩素化させ
ない簡単な方法が要望されている。
その他の方法（例えば、米国特許第４，３８０，４７６
号と英国特許第２，０７９，７４９号）では、６位を選
択的にアシル化し続いて２−、３−、３′−および４′
位の未保護ヒドロキシ基の存在下４−、１′−および
６′位を選択的に塩素化するものである。しかし、選択
的アシル化を実施するのは難しい。
号と英国特許第２，０７９，７４９号）では、６位を選
択的にアシル化し続いて２−、３−、３′−および４′
位の未保護ヒドロキシ基の存在下４−、１′−および
６′位を選択的に塩素化するものである。しかし、選択
的アシル化を実施するのは難しい。
したがつて、限られた工程でシユクラロースの簡単な製
造法が依然要望されている。
造法が依然要望されている。
選択的６−アシル化の別法として、６位に大きな基、例
えば糖を付加することである。このようなトリサツカラ
イドが出発物質として考慮される場合、２つの問題が即
おきる。
えば糖を付加することである。このようなトリサツカラ
イドが出発物質として考慮される場合、２つの問題が即
おきる。
先ず、このトリサツカライドは４位（転化）、１′−と
６′−位で、任意には６位の糖の位置され得ることが必
要である。しかし、６位に大きな糖基が存在すること
は、重要な４位が立体障害を受け、ハロゲン原子を付加
することが難しいことを意味する。
６′−位で、任意には６位の糖の位置され得ることが必
要である。しかし、６位に大きな糖基が存在すること
は、重要な４位が立体障害を受け、ハロゲン原子を付加
することが難しいことを意味する。
比較的普通のライト型のトリサツカライドはラフイノー
ス、Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−フラ
クトフラノシドである。ラフイノースの塩素化はHough
ら（CarbohydrateResearch、７１、８５−９３、１９７
９）により研究されている。４−、６−、１′−および
６′−位の蔗糖を塩素化しうる強力な塩素化剤、塩化ス
ルフリルを使つて、４−クロロ置換生成物が得られない
ことが分つた。モノ−、ジ−およびトリサツカライド混
合物は若干の塩素化メチルグリコシドと共に得られた。
ス、Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−フラ
クトフラノシドである。ラフイノースの塩素化はHough
ら（CarbohydrateResearch、７１、８５−９３、１９７
９）により研究されている。４−、６−、１′−および
６′−位の蔗糖を塩素化しうる強力な塩素化剤、塩化ス
ルフリルを使つて、４−クロロ置換生成物が得られない
ことが分つた。モノ−、ジ−およびトリサツカライド混
合物は若干の塩素化メチルグリコシドと共に得られた。
我々自身の研究で分つたことは、ラフイノースとビルス
マイヤー試薬と反応させて、複雑な反応混合物を得たこ
とである。
マイヤー試薬と反応させて、複雑な反応混合物を得たこ
とである。
第２の問題は、適当に４，１′，６′−塩素化トリサツ
カライドが得られたとしても、糖を６位から除いてシユ
クラローズを遊離する有効な化学的又は酵素的方法を見
つけることが必要である。しかし、この分子の塩素化は
極性的に、構造的に、特に酵素が作用するのに適する未
塩素化糖からの配座の点で非常に異質のものにする。ガ
ラクトース環を除くのにラフイノースに作用する酵素
が、塩素置換基がグリコシド結合（すなわち、４位）に
近い位置に存在するラフイノースの塩素化誘導体に必ず
しも働かないことを、このことは意味している。これに
類似するものとして、蔗糖とシユクラロース間の差異で
ある。多くの微生物が蔗糖を急速に分解しうるが、シユ
クラロースはin vivoでは分解せず、ある土壌微生物に
よりゆつくり分解するだけである。
カライドが得られたとしても、糖を６位から除いてシユ
クラローズを遊離する有効な化学的又は酵素的方法を見
つけることが必要である。しかし、この分子の塩素化は
極性的に、構造的に、特に酵素が作用するのに適する未
塩素化糖からの配座の点で非常に異質のものにする。ガ
ラクトース環を除くのにラフイノースに作用する酵素
が、塩素置換基がグリコシド結合（すなわち、４位）に
近い位置に存在するラフイノースの塩素化誘導体に必ず
しも働かないことを、このことは意味している。これに
類似するものとして、蔗糖とシユクラロース間の差異で
ある。多くの微生物が蔗糖を急速に分解しうるが、シユ
クラロースはin vivoでは分解せず、ある土壌微生物に
よりゆつくり分解するだけである。
有用なシユクラロースの生産に対するこのアプローチの
要件は、トリサツカライドが蔗糖部分の４，１′−およ
び６′−位でのみ、そして多分第３環の１つ以上の位置
で塩素化されねばならないことかつ塩素化生成物が塩素
化ガラクトシユクロースを分解せず又はその部分を脱塩
素化せずに（１→６）−ガラクトシルリンクでのみ分解
せねばならないことである。
要件は、トリサツカライドが蔗糖部分の４，１′−およ
び６′−位でのみ、そして多分第３環の１つ以上の位置
で塩素化されねばならないことかつ塩素化生成物が塩素
化ガラクトシユクロースを分解せず又はその部分を脱塩
素化せずに（１→６）−ガラクトシルリンクでのみ分解
せねばならないことである。
驚いたことに、本発明者はラフイノースを塩素化して、
６−Ｏ−（６−クロロ−６−デオキシガラクトース）−
置換シユクラロースを得る方法を見出した。更に、この
テトラクロロ糖を分解して、シユクラロースを遊離する
酵素を見出した。
６−Ｏ−（６−クロロ−６−デオキシガラクトース）−
置換シユクラロースを得る方法を見出した。更に、この
テトラクロロ糖を分解して、シユクラロースを遊離する
酵素を見出した。
本発明によれば、新規化合物としてテトラクロラフイノ
ース、即ちＯ−α−Ｄ−６−クロロ−６−デオキシガラ
クトピラノシル−（１→６）α−Ｄ−４−クロロ−４−
デオキシガラクトピラノシル−（１→２）−β−Ｄ−
１，６−ジクロロ−１，６−ジデオキシフラクトフラノ
シド、又は４，１′，６′，−６″−テトラクロロ−
４，１′，６′，６″−テトラデオキシガラクトラフイ
ノースを供する。この化合物はTCRと呼ぶ。
ース、即ちＯ−α−Ｄ−６−クロロ−６−デオキシガラ
クトピラノシル−（１→６）α−Ｄ−４−クロロ−４−
デオキシガラクトピラノシル−（１→２）−β−Ｄ−
１，６−ジクロロ−１，６−ジデオキシフラクトフラノ
シド、又は４，１′，６′，−６″−テトラクロロ−
４，１′，６′，６″−テトラデオキシガラクトラフイ
ノースを供する。この化合物はTCRと呼ぶ。
また、本発明はトリアリールホスフインオキシド、例え
ばトリフエニルホスフインオキシドの存在下ラフイノー
スを塩化チオニルと反応させて、TCRを製造する方法を
供する。
ばトリフエニルホスフインオキシドの存在下ラフイノー
スを塩化チオニルと反応させて、TCRを製造する方法を
供する。
トリフエニルホスフインオキシド（TPPO）は５〜２５モ
ル％、例えば７．５〜１５％TPPおよび９５〜７５モル
％、例えば９２．５〜８５％TPPOの混合物を使つて、一
定比のトリフエニルホスフイン（TPP）が伴なうのが望
ましい。TPP／塩化チオニル塩素化剤の副産物がTPPOで
あるから、TPP自体も使用できる。このことは、反応が
進むにつれて、TPPOとTPPの混合物が発生することを意
味する。
ル％、例えば７．５〜１５％TPPおよび９５〜７５モル
％、例えば９２．５〜８５％TPPOの混合物を使つて、一
定比のトリフエニルホスフイン（TPP）が伴なうのが望
ましい。TPP／塩化チオニル塩素化剤の副産物がTPPOで
あるから、TPP自体も使用できる。このことは、反応が
進むにつれて、TPPOとTPPの混合物が発生することを意
味する。
他のトリアリールホスフインオキシドはTPPOの代りに、
特に３つのフエニル環の１つが重合体鎖に結合している
もの、例えばフエニルがスチレンにより置換されている
場合、RegenとLee（Ｊ．Org.Chem.４０、１６６９−１
６７０、１９７５）に記載されている試薬と代替するこ
とができる。
特に３つのフエニル環の１つが重合体鎖に結合している
もの、例えばフエニルがスチレンにより置換されている
場合、RegenとLee（Ｊ．Org.Chem.４０、１６６９−１
６７０、１９７５）に記載されている試薬と代替するこ
とができる。
同様に、TPPOは同じように反応するスルフイド（TPPS）
により代替できる。
により代替できる。
トリアリールホスフイン／トリアリールホスフインオキ
シド又はスルフイド対ラフイノース比は３〜４モル／モ
ル、例えば約３．２モル／モルが望ましく、塩化チオニ
ル対ラフイノース比は８〜１５％モル／モル、例えば１
０〜１１モル／モルが望ましい。
シド又はスルフイド対ラフイノース比は３〜４モル／モ
ル、例えば約３．２モル／モルが望ましく、塩化チオニ
ル対ラフイノース比は８〜１５％モル／モル、例えば１
０〜１１モル／モルが望ましい。
反応はラフイノース用非オキシ溶媒と塩素化剤の存在下
で進行する。適当な溶媒にはアミンやアミド、特にピリ
ジンやルチジンの如き芳香族３級アミン、又はDMFの如
きＮ，Ｎ−ジアルキルアミドである。
で進行する。適当な溶媒にはアミンやアミド、特にピリ
ジンやルチジンの如き芳香族３級アミン、又はDMFの如
きＮ，Ｎ−ジアルキルアミドである。
反応は約０℃で始まり、続いて約１１０゜に一般に上げ
るのがよい。
るのがよい。
TCRはヘプタエステル、例えばヘプタアセテートの形で
単離し、ついでエステル基を稀アルコール性ナトリウム
アルコキシドで加水分解して除くのがよい。
単離し、ついでエステル基を稀アルコール性ナトリウム
アルコキシドで加水分解して除くのがよい。
本発明の別の特徴によれば、６位から６−クロロ−６−
デオキシ−ガラクトシル部分を除く作用を示す酵素の存
在下TCR溶液を温置して、シユクラロースを製造する方
法を供する。
デオキシ−ガラクトシル部分を除く作用を示す酵素の存
在下TCR溶液を温置して、シユクラロースを製造する方
法を供する。
この酵素は多くの入手可能な酵素から直接又はその酵素
を生産しうる微生物の培養から選択することができる。
ガラクトシダーゼは特に興味のあるものであるが、メリ
ビオース（Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→
６）−α−Ｄ−グルコピラノース）はラフイノースの成
分であるが、塩素化TCRは転化構成を有するという事実
に鑑みて、メリビアーゼは余り興味あるものとは考えら
れない。これらの酵素はラフイノースから蔗糖を遊離し
うるとしても、TCRについて何か有用な活性を示さない
ことが分つた。バクテリア、カビおよび植物由来の２０
数個のα−ガラクトシダーゼ酵素を試験したが、わずか
８つのものがTCR加水分解活性を示し、いずれもカビ由
来のものである。最も活性のある酵素はMortierella vi
nacea,Circinella musae株のものおよびAspergillus ni
ger（ノボ社提供）の一株のものであつた。驚いたこと
に、北海道製糖提供のMortierella vinacea var, raffi
noseutilizer（ATCC２００３４）由来のメリビアーゼは
最高活性であつた。それでも、TCRに対する反応率はラ
フイノース自体のわずか数％に過ぎない。それにも拘ら
ず、ラフイノースとTCRとの配座と構成上の有意な差を
考えて、この活性率でも予期できないもので、TCRは殆
んど完全にシユクラロースに加水分解される。
を生産しうる微生物の培養から選択することができる。
ガラクトシダーゼは特に興味のあるものであるが、メリ
ビオース（Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→
６）−α−Ｄ−グルコピラノース）はラフイノースの成
分であるが、塩素化TCRは転化構成を有するという事実
に鑑みて、メリビアーゼは余り興味あるものとは考えら
れない。これらの酵素はラフイノースから蔗糖を遊離し
うるとしても、TCRについて何か有用な活性を示さない
ことが分つた。バクテリア、カビおよび植物由来の２０
数個のα−ガラクトシダーゼ酵素を試験したが、わずか
８つのものがTCR加水分解活性を示し、いずれもカビ由
来のものである。最も活性のある酵素はMortierella vi
nacea,Circinella musae株のものおよびAspergillus ni
ger（ノボ社提供）の一株のものであつた。驚いたこと
に、北海道製糖提供のMortierella vinacea var, raffi
noseutilizer（ATCC２００３４）由来のメリビアーゼは
最高活性であつた。それでも、TCRに対する反応率はラ
フイノース自体のわずか数％に過ぎない。それにも拘ら
ず、ラフイノースとTCRとの配座と構成上の有意な差を
考えて、この活性率でも予期できないもので、TCRは殆
んど完全にシユクラロースに加水分解される。
M. vinacea var, raffinoseutilizerのペレツト化細胞
は日本のビート類の加工上１９６８年以来、アメリカで
はそれより以前に使われてきた（Obara J. & Hashimoto
S., Sugar Technology Reviews４、２０９、１９７６
／７７および米国特許第３，８６７，２５６号と第３，
９５７，５７８号、Narita等）。
は日本のビート類の加工上１９６８年以来、アメリカで
はそれより以前に使われてきた（Obara J. & Hashimoto
S., Sugar Technology Reviews４、２０９、１９７６
／７７および米国特許第３，８６７，２５６号と第３，
９５７，５７８号、Narita等）。
酵素処理は水溶液で行なうのがよく、反応には水を必要
とするが、α−ガラクトシダーゼは多くの有機溶媒中TC
Rをシユクラロースに激しく加水分解しうることが分か
つた。したがつて、この酵素は水不混和性有機溶媒にて
最も安定であり、活性であり、一方、TCRは親水性溶媒
でのみ非常に可溶性であることが分つた。したがつて、
酢酸エチル、ｎ−ブタノールおよびメチルイソブチルケ
トンの如き親水性であるが水不混和性有機溶媒がTCR加
水分解用溶媒として最も適していると考えられた。例え
ば、水性バツフアー（加水分解のため十分の水を供す
る）で予めで飽和した酢酸エチル中触媒的変換数（Kca
t）により規定したTCR加水分解率は水性バツフアーにお
ける場合に類似している。このことが意味することは、
この酵素は有機溶媒に懸濁した場合でも、その十分な触
媒活性を保持することである。水性バツフアーで予備飽
和させた各有機溶媒は単一の有機相として残ることを強
調することは肝要である。本発明は２相溶媒系に関する
ものでなく、酵素は有機相にて機能している。
とするが、α−ガラクトシダーゼは多くの有機溶媒中TC
Rをシユクラロースに激しく加水分解しうることが分か
つた。したがつて、この酵素は水不混和性有機溶媒にて
最も安定であり、活性であり、一方、TCRは親水性溶媒
でのみ非常に可溶性であることが分つた。したがつて、
酢酸エチル、ｎ−ブタノールおよびメチルイソブチルケ
トンの如き親水性であるが水不混和性有機溶媒がTCR加
水分解用溶媒として最も適していると考えられた。例え
ば、水性バツフアー（加水分解のため十分の水を供す
る）で予めで飽和した酢酸エチル中触媒的変換数（Kca
t）により規定したTCR加水分解率は水性バツフアーにお
ける場合に類似している。このことが意味することは、
この酵素は有機溶媒に懸濁した場合でも、その十分な触
媒活性を保持することである。水性バツフアーで予備飽
和させた各有機溶媒は単一の有機相として残ることを強
調することは肝要である。本発明は２相溶媒系に関する
ものでなく、酵素は有機相にて機能している。
上記した溶媒以外に、他の溶媒もTCR加水分解支持能に
ついて試験した。高度に水混和性溶媒（ジオキサン、ア
セトン、メタノール、THFなど）は３０％V/V水性バツフ
アーの存在下でも加水分解を維持できなかつた。疎水
性、水不混和性溶媒（ｎ−オクタノール、ニトロベンゼ
ン、ブチロニトリルなど）はTCR加水分解を維持できた
が、これらの溶媒におけるTCRの溶解度が低い(５％W/V
未満)ので、大規模の使用を制限している。親水性、水
不混和性溶媒（酢酸エチル、ｎ−ブタノール、メチルイ
ソブチルケトンなど）は高い触媒活性と高いTCR溶解度
を維持することができた。
ついて試験した。高度に水混和性溶媒（ジオキサン、ア
セトン、メタノール、THFなど）は３０％V/V水性バツフ
アーの存在下でも加水分解を維持できなかつた。疎水
性、水不混和性溶媒（ｎ−オクタノール、ニトロベンゼ
ン、ブチロニトリルなど）はTCR加水分解を維持できた
が、これらの溶媒におけるTCRの溶解度が低い(５％W/V
未満)ので、大規模の使用を制限している。親水性、水
不混和性溶媒（酢酸エチル、ｎ−ブタノール、メチルイ
ソブチルケトンなど）は高い触媒活性と高いTCR溶解度
を維持することができた。
第１表は水性バツフアーと比較して、各種溶媒（すべて
水性バツフアーで予め飽和させた）中５５℃でTCRとシ
ユクラロースの溶解度を示す。
水性バツフアーで予め飽和させた）中５５℃でTCRとシ
ユクラロースの溶解度を示す。
明かに、TCR溶解度は親水性水不混和溶媒にて最大であ
つた。他方、シユクラロースの溶解度には多くの変化が
みられた。これはバツチ反応について酢酸エチルやメチ
ルイソブチルケトンにおいてシユクラロースを選択的に
結晶化するのに使用でき、あるいは連続的充填床法をｎ
−ブタノールにて実施できる（すべての反応体と生成物
は可溶）。
つた。他方、シユクラロースの溶解度には多くの変化が
みられた。これはバツチ反応について酢酸エチルやメチ
ルイソブチルケトンにおいてシユクラロースを選択的に
結晶化するのに使用でき、あるいは連続的充填床法をｎ
−ブタノールにて実施できる（すべての反応体と生成物
は可溶）。
有機媒体中加水分解反応を行なう利点のうち、熱的安定
性（酢酸エチル中５５℃におけるα−ガラクトシダーゼ
の安定性は水溶液の場合より約５０％高い）が促進され
かつ基質溶解性（上記溶媒中のTCRの溶解度は５０％W/V
以上であるのに対し、水性バツフアーでは溶解度にわず
か１５％W/Vである）が増大した。
性（酢酸エチル中５５℃におけるα−ガラクトシダーゼ
の安定性は水溶液の場合より約５０％高い）が促進され
かつ基質溶解性（上記溶媒中のTCRの溶解度は５０％W/V
以上であるのに対し、水性バツフアーでは溶解度にわず
か１５％W/Vである）が増大した。
水性および有機系において、M. vinaceaメリビアーゼに
対し約５５℃とpH４．５−５．５である酵素最適温度と
pHで処理すべきは当然である。水−飽和有機溶媒中、こ
れは水性バツフアーのpHを意味する。この温度とpH５．
０で、生成シユクラロースは分解しないことが分つた。
対し約５５℃とpH４．５−５．５である酵素最適温度と
pHで処理すべきは当然である。水−飽和有機溶媒中、こ
れは水性バツフアーのpHを意味する。この温度とpH５．
０で、生成シユクラロースは分解しないことが分つた。
この酵素は例えばペレツトの超音波処理によつて生成す
る細胞のない抽出液として水性系に溶解又は分散するこ
とができ、あるいは床又はカラムに充填したペレツトと
して固定化の形で使用できる。他の有機系においては、
酵素は不溶性のまゝで残りかつまた床又はカラムで使用
できる。
る細胞のない抽出液として水性系に溶解又は分散するこ
とができ、あるいは床又はカラムに充填したペレツトと
して固定化の形で使用できる。他の有機系においては、
酵素は不溶性のまゝで残りかつまた床又はカラムで使用
できる。
シユクラロース生成物の分別は任意の便法、例えば蒸発
および有機溶媒に抽出して、クロマトグラフ技術によ
り、あるいは水性系や非水性系から選択的に結晶化して
行なうことができる。
および有機溶媒に抽出して、クロマトグラフ技術によ
り、あるいは水性系や非水性系から選択的に結晶化して
行なうことができる。
次の例により本発明を説明する。
例 １ (a)４，１′，６′，６″−テトラクロロ−４，１′，
６′，６″−テトラデオキシガラクトラフイノースヘプ
タアセテート 無水ラフイノース（４．０ｇ）、トリフエニルホスフイ
ンオキシド（５．９ｇ）およびトリフエニルホスフイン
（０．６６ｇ、TPPO １０重量％、全TPPOおよびTPP
３モル当量）のピリジン(40ml)の冷溶液に約０℃で、撹
拌し乍ら塩化チオニル（８．６ml、１５モル当量）を加
えた。反応混合物を１時間で室温にもつていき、ついで
１０５−１１０℃で４．５時間加熱した。メタノール(1
0ml)を添加した後、溶液をシラツプ状まで濃縮した。こ
のシラツプのピリジン溶液（５０ml）を室温で２時間無
水酢酸（５ml）で処理した。TLC（エーテル／アセト
ン、４：１）で、少量生成物は早期移動し、主生成物は
遅く移動した。この溶液を濃縮し、エーテル／アセトン
（２：１、V/V）を使つてシリカゲルのカラムで溶離
し、シラツプとして、４，１′，６′，６″−テトラク
ロロ−４，１′，６′６″−テトラデオキシガラクトラ
フイノースヘプタアセテート（４．７５ｇ）を得た。TL
Cによれば、試料にはTPPOと遅く移動する不純物の存在
を示した。
６′，６″−テトラデオキシガラクトラフイノースヘプ
タアセテート 無水ラフイノース（４．０ｇ）、トリフエニルホスフイ
ンオキシド（５．９ｇ）およびトリフエニルホスフイン
（０．６６ｇ、TPPO １０重量％、全TPPOおよびTPP
３モル当量）のピリジン(40ml)の冷溶液に約０℃で、撹
拌し乍ら塩化チオニル（８．６ml、１５モル当量）を加
えた。反応混合物を１時間で室温にもつていき、ついで
１０５−１１０℃で４．５時間加熱した。メタノール(1
0ml)を添加した後、溶液をシラツプ状まで濃縮した。こ
のシラツプのピリジン溶液（５０ml）を室温で２時間無
水酢酸（５ml）で処理した。TLC（エーテル／アセト
ン、４：１）で、少量生成物は早期移動し、主生成物は
遅く移動した。この溶液を濃縮し、エーテル／アセトン
（２：１、V/V）を使つてシリカゲルのカラムで溶離
し、シラツプとして、４，１′，６′，６″−テトラク
ロロ−４，１′，６′６″−テトラデオキシガラクトラ
フイノースヘプタアセテート（４．７５ｇ）を得た。TL
Cによれば、試料にはTPPOと遅く移動する不純物の存在
を示した。
(b)４，１′，６′，６″−テトラクロロ−４，１′，
６′，６″−テトラデオキシガラクトラフイノースナト
リウムメトキシド／メタノール（５０ml）を使い、pH
９．５、室温で３時間上記シラツプ（４．７５ｇ）を脱
エステル化した。溶液をAmberlyst１５(H)+レジンで中
和し、濃縮して、半固形残渣を得、水で抽出した。不溶
性TPPOは濾別し、水抽出液は酢酸エチル／アセトン
（２：１V/V）を使い、シリカゲル（１００ｇ）のカラ
ムで溶離して精製し、純粋の４，１′，６′，６″−テ
トラクロロ−４，１′，６′，６″−テトラデオキシガ
ラクトラフイノース（１．４９ｇ、ラフイノース基準で
３２．６％）、〔α〕Ｄ＋８０゜（Ｃ０．７、アセト
ン）を得た。
６′，６″−テトラデオキシガラクトラフイノースナト
リウムメトキシド／メタノール（５０ml）を使い、pH
９．５、室温で３時間上記シラツプ（４．７５ｇ）を脱
エステル化した。溶液をAmberlyst１５(H)+レジンで中
和し、濃縮して、半固形残渣を得、水で抽出した。不溶
性TPPOは濾別し、水抽出液は酢酸エチル／アセトン
（２：１V/V）を使い、シリカゲル（１００ｇ）のカラ
ムで溶離して精製し、純粋の４，１′，６′，６″−テ
トラクロロ−４，１′，６′，６″−テトラデオキシガ
ラクトラフイノース（１．４９ｇ、ラフイノース基準で
３２．６％）、〔α〕Ｄ＋８０゜（Ｃ０．７、アセト
ン）を得た。
無水酢酸とピリジンでこの生成物を常法によりアセチル
化して、工程(a)の温アセテート、〔α〕Ｄ＋１３２゜
（Ｃ０．２５、アセトン）を得た。
化して、工程(a)の温アセテート、〔α〕Ｄ＋１３２゜
（Ｃ０．２５、アセトン）を得た。
ヘプタアセテートの質量分析データ：m/z、７５３、
〔（Ｍ＋１）+−２AcOH、オクテツト（４Cl）〕、５７
１〔４−クロロガラクトピラノシル−（１→６）−４−
クロロガラクトピラノシルカチオン、トリプレツト９：
６：１（２Cl）〕、３０７〔６−クロロガラクトピラノ
シルカチオン、ダブレツト３：１、（１Cl）〕、２８３
〔１，６−ジクロロフラクトフラノシルカチオン、トリ
プレツト９：６：１（２Cl）〕。
〔（Ｍ＋１）+−２AcOH、オクテツト（４Cl）〕、５７
１〔４−クロロガラクトピラノシル−（１→６）−４−
クロロガラクトピラノシルカチオン、トリプレツト９：
６：１（２Cl）〕、３０７〔６−クロロガラクトピラノ
シルカチオン、ダブレツト３：１、（１Cl）〕、２８３
〔１，６−ジクロロフラクトフラノシルカチオン、トリ
プレツト９：６：１（２Cl）〕。
TCRの質量分析データ：m/z５９６〔Ｍ＋NH4、オクテツ
ト、４Cl〕、３９６と３９８（重複ピーク）〔６−クロ
ロガラクトピラノシル−（１→６）−４−クロロガラク
トピラノシルカチオン（２Cl）：１，６−ジクロロフラ
クトシル−（２→１）−４−クロロガラクトピラノシル
カチオン（３Cl）〕、１９８〔６−クロロ−ガラクトピ
ラノシル＋NH4、ダブレツト（３：１）（１Cl）〕。
ト、４Cl〕、３９６と３９８（重複ピーク）〔６−クロ
ロガラクトピラノシル−（１→６）−４−クロロガラク
トピラノシルカチオン（２Cl）：１，６−ジクロロフラ
クトシル−（２→１）−４−クロロガラクトピラノシル
カチオン（３Cl）〕、１９８〔６−クロロ−ガラクトピ
ラノシル＋NH4、ダブレツト（３：１）（１Cl）〕。
４，１′，６′，６″−テトラクロロ−４，１′，
６′，６″−テトラデオキシガラクトラフイノースヘプ
タアセテートの1H−NMRデータ ４，１′，６′，６″−テトラクロロ−４，１′，
６′，６″−テトラデオキシガラクトラフイノースの13
C−NMRデータ 例 ２ ４，１′，６′，６″−テトラクロロラフイノ
ースヘプタアセテートを介してTCRの単離 無水ラフイノース（１０ｇ、１９．８ミリモル）／ピリ
ジン（３５ml、４３４ミリモル）溶液に、トリフエニル
ホスフインオキシド（１６ｇ、５７．５ミリモル）とト
リフエニルホスフイン（１．６ｇ、６．１ミリモル）を
加温、撹拌して溶解した。ついで塩化チオニル（１５m
l、２０７ミリモル）を０℃（氷−塩浴）で３０分混合
物に加えた。反応混合物を室温にもつていつた（撹拌し
た場合は、発熱が経験された）。反応混合物を105−１
１０℃で加熱した。５分以内に、発熱が始まり、内部温
度は１５０℃に上つた。温度を３０分内に浴温まで下げ
た。加熱は４．５時間続けた。溶液を室温にもつてい
き、２４時間撹拌下室温で過剰の無水酢酸（約２５ml）
で処理した。別法として、アセチル化反応時間は１００
℃で反応を行なつて１時間まで減ずることができる。
６′，６″−テトラデオキシガラクトラフイノースヘプ
タアセテートの1H−NMRデータ ４，１′，６′，６″−テトラクロロ−４，１′，
６′，６″−テトラデオキシガラクトラフイノースの13
C−NMRデータ 例 ２ ４，１′，６′，６″−テトラクロロラフイノ
ースヘプタアセテートを介してTCRの単離 無水ラフイノース（１０ｇ、１９．８ミリモル）／ピリ
ジン（３５ml、４３４ミリモル）溶液に、トリフエニル
ホスフインオキシド（１６ｇ、５７．５ミリモル）とト
リフエニルホスフイン（１．６ｇ、６．１ミリモル）を
加温、撹拌して溶解した。ついで塩化チオニル（１５m
l、２０７ミリモル）を０℃（氷−塩浴）で３０分混合
物に加えた。反応混合物を室温にもつていつた（撹拌し
た場合は、発熱が経験された）。反応混合物を105−１
１０℃で加熱した。５分以内に、発熱が始まり、内部温
度は１５０℃に上つた。温度を３０分内に浴温まで下げ
た。加熱は４．５時間続けた。溶液を室温にもつてい
き、２４時間撹拌下室温で過剰の無水酢酸（約２５ml）
で処理した。別法として、アセチル化反応時間は１００
℃で反応を行なつて１時間まで減ずることができる。
混合物を熱トルエンで抽出して、生成物を単離した。ト
ルエン層を水性炭酸ナトリウム、水で洗い、脱水（Na2S
O4）しそして濾液を濃縮した。トルエン抽出液には炭水
化物とトリフエニルホスフインオキシド混合物から成る
固体２６ｇを含有した。更に黒い残渣をトルエンと水性
炭酸ナトリウムで撹拌し、黒色固形残渣を濾去し、第２
のトルエン抽出液を得、これを分別脱水（Na2SO4）し、
そして濃縮（４ｇ）した。一緒にした抽出液にジエチル
エーテルを加え、トリフエニルホスフインオキシド（１
５ｇ）を沈澱させた。エーテル抽出液をシラツプ状（約
１５ｇ）に濃縮し、メタノール（約１００ml）にとり、
１Ｍナトリウムメトキシド（pH１０）で２時間処理し
た。この溶液を酸性レジンで中和し、炭床で濾過した。
溶液を濃縮し、真空オーブン中４０℃で２４時間脱水し
た（１０．８ｇ）。残渣を水で抽出し、残存TPP＝０を
濾去し、濾液を濃縮し、TCR（５．３ｇ）を得た。TLC
（酢酸エチル：アセトン：水、８：６：１）により、炭
水化物の約８０％がTCRであつた。
ルエン層を水性炭酸ナトリウム、水で洗い、脱水（Na2S
O4）しそして濾液を濃縮した。トルエン抽出液には炭水
化物とトリフエニルホスフインオキシド混合物から成る
固体２６ｇを含有した。更に黒い残渣をトルエンと水性
炭酸ナトリウムで撹拌し、黒色固形残渣を濾去し、第２
のトルエン抽出液を得、これを分別脱水（Na2SO4）し、
そして濃縮（４ｇ）した。一緒にした抽出液にジエチル
エーテルを加え、トリフエニルホスフインオキシド（１
５ｇ）を沈澱させた。エーテル抽出液をシラツプ状（約
１５ｇ）に濃縮し、メタノール（約１００ml）にとり、
１Ｍナトリウムメトキシド（pH１０）で２時間処理し
た。この溶液を酸性レジンで中和し、炭床で濾過した。
溶液を濃縮し、真空オーブン中４０℃で２４時間脱水し
た（１０．８ｇ）。残渣を水で抽出し、残存TPP＝０を
濾去し、濾液を濃縮し、TCR（５．３ｇ）を得た。TLC
（酢酸エチル：アセトン：水、８：６：１）により、炭
水化物の約８０％がTCRであつた。
例 ３ TCRの直接的単離 無水ラフイノース（２０ｇ、３９．７ミリモル）のピリ
ジン（７０ml、８６８ミリモル）溶液を上記例に記載し
たように、トリフエニルホスフインオキシド（３２ｇ、
１１５ミリモル）、トリフエニルホスフイン（３．２
ｇ、１２．２ミリモル）および塩化チオニル（３０ml、
４１４ミリモル）で処理した。反応混合物を室温にもつ
ていき、１０５−１１０℃で約４．５時間加熱した。メ
チルイソブチルケトン（MIBK、３００ml）を熱反応混合
物（約７０゜）に加え、撹拌し、MIBK層をデカントし
た。黒色残渣を更に熱（約７０℃）MIBK（１００ml）で
抽出した。合わせたMIBK抽出液を冷水性炭酸ナトリウム
で洗い、脱水（CaSO4）し、濃縮してシラツプを得た。
このシラツプをメタノール（５０ml）にとり、室温で約
１時間ナトリウムメトキシド（pH１０）で処理し、TCR
を得た。TLC（酢酸エチル：アセトン：水、８：６：
１）により、主生成物は標準TCRと一致した。メタノー
ル溶液を酸性レジンで脱イオンし、活性炭で脱色し、濾
過し、濾液を濃縮し、固形残渣を得た。残渣を熱水で撹
拌し、濾過し、濾液を濃縮し、固形TCR（９．８ｇ、６
０％純度HPLC、収率２６％）を得た。
ジン（７０ml、８６８ミリモル）溶液を上記例に記載し
たように、トリフエニルホスフインオキシド（３２ｇ、
１１５ミリモル）、トリフエニルホスフイン（３．２
ｇ、１２．２ミリモル）および塩化チオニル（３０ml、
４１４ミリモル）で処理した。反応混合物を室温にもつ
ていき、１０５−１１０℃で約４．５時間加熱した。メ
チルイソブチルケトン（MIBK、３００ml）を熱反応混合
物（約７０゜）に加え、撹拌し、MIBK層をデカントし
た。黒色残渣を更に熱（約７０℃）MIBK（１００ml）で
抽出した。合わせたMIBK抽出液を冷水性炭酸ナトリウム
で洗い、脱水（CaSO4）し、濃縮してシラツプを得た。
このシラツプをメタノール（５０ml）にとり、室温で約
１時間ナトリウムメトキシド（pH１０）で処理し、TCR
を得た。TLC（酢酸エチル：アセトン：水、８：６：
１）により、主生成物は標準TCRと一致した。メタノー
ル溶液を酸性レジンで脱イオンし、活性炭で脱色し、濾
過し、濾液を濃縮し、固形残渣を得た。残渣を熱水で撹
拌し、濾過し、濾液を濃縮し、固形TCR（９．８ｇ、６
０％純度HPLC、収率２６％）を得た。
例 ４ シユクラロース（少量）水溶液の調製 例１のテトラクロロガラクトラフイノース（２０mg）を
０．１Ｍ−クエン酸塩／リン酸塩バツフアー（pH５．
０）（２ml）と共にスクリユートツプボトルに入れ、１
％（W/V）溶液を得た。この水レベルは必要に応じ水を
添加して次のインキユベーシヨン中維持した。
０．１Ｍ−クエン酸塩／リン酸塩バツフアー（pH５．
０）（２ml）と共にスクリユートツプボトルに入れ、１
％（W/V）溶液を得た。この水レベルは必要に応じ水を
添加して次のインキユベーシヨン中維持した。
Mortierella uinacea uar raffinoseutilizer（ATCC２
００３４）（北海道製糖より供給）のペレツト化細胞状
のメリビアーゼを加え（１０mg）、混合物を５５℃で１
００時間までインキユベーシヨンした。加水分解度は酢
酸エチル：エタノール：水（４５：５：１）で溶出した
試料２５０μをTLC分析するかあるいはアセトニトリ
ル２０％（V/V）により溶出したWater DextropakＣ１８
逆相カラムでHPLCにより定期的に行ない、生成物は屈折
率検出器を使つて測定した。結果は第１図にプロツトし
た。例えば、約５３％が４８時間後に加水分解し、約７
０％が９０時間に加水分解した。生成物をクロマトグラ
フイにより分離し、シユクラロース以外に、６−クロロ
ガラクトースとTCRの存在を検出した。TCRはこのシステ
ムでは１５％（W/V）まで使用できる。水溶液中に、酵
素は５．８Mmのミカエリス定数（Km）と５２．５mg／酵
素ｇ／１時間のＫcatを示す。
００３４）（北海道製糖より供給）のペレツト化細胞状
のメリビアーゼを加え（１０mg）、混合物を５５℃で１
００時間までインキユベーシヨンした。加水分解度は酢
酸エチル：エタノール：水（４５：５：１）で溶出した
試料２５０μをTLC分析するかあるいはアセトニトリ
ル２０％（V/V）により溶出したWater DextropakＣ１８
逆相カラムでHPLCにより定期的に行ない、生成物は屈折
率検出器を使つて測定した。結果は第１図にプロツトし
た。例えば、約５３％が４８時間後に加水分解し、約７
０％が９０時間に加水分解した。生成物をクロマトグラ
フイにより分離し、シユクラロース以外に、６−クロロ
ガラクトースとTCRの存在を検出した。TCRはこのシステ
ムでは１５％（W/V）まで使用できる。水溶液中に、酵
素は５．８Mmのミカエリス定数（Km）と５２．５mg／酵
素ｇ／１時間のＫcatを示す。
例 ５ Mortierella uinacea uar raffinoseutilizer（ATCC２
００３４）（３ｇ）のペレツトは、ラフイノース５％W/
V含有０．１Ｍクエン酸塩、リン酸塩バツフアーpH５．
０の溶液にて水和し、１１cm×０．９cmカラムに充填
し、水ジヤケツトで床容量７cm3にした。このカラムは
循環水流ポンプを使つて５５℃に維持した。TCRをシユ
クラロースを加水分解するのに使用した場合、５０％転
換についてカラムの半減期は１３日であることが分つ
た。
００３４）（３ｇ）のペレツトは、ラフイノース５％W/
V含有０．１Ｍクエン酸塩、リン酸塩バツフアーpH５．
０の溶液にて水和し、１１cm×０．９cmカラムに充填
し、水ジヤケツトで床容量７cm3にした。このカラムは
循環水流ポンプを使つて５５℃に維持した。TCRをシユ
クラロースを加水分解するのに使用した場合、５０％転
換についてカラムの半減期は１３日であることが分つ
た。
例 ６ TCRをシユクラロースに加水分解しうる微生物 α−ガラクトシダーゼ活性を有すると報告された微生物
はATCCから得た。１ｇ／酵母エキス＋５ｇ／ラフイ
ノースを含有する無機塩培地（Jayasuria，１９５５Jou
rnal of General Microbiology１２ ４１９−４２８）
１１０mlを含む５００ml振盪フラスコにて３００℃で培
養した。細胞は生育対数期に遠心分取（５０００回転／
分、１０分）し、クエン酸塩／リン酸塩バツフアーpH
５．０の５倍容量にて再懸濁し、氷浴にて０℃に維持
し、最大出力でMSEソニチーター（Dawe Soniprobe Type
1130Ａ）にて３×２０秒バーストにより破壊した。生
成懸濁液を３０分遠心分離（１７，０００回転／分）
し、残渣と上清液はｐ−ニトロフエニルα−Ｄ−ガラク
トピラノシド（Sigma）を使つて、細胞くず乾燥重量ｇ
当りα−ガラクトシダーゼ活性単位で試験した。上清液
には殆んど酵素活性は検出されなかつた。ついで陽性の
培養物は例４のようにTRC加水分解について試験し、結
果は細胞残渣乾燥重量ｇ／１時間当りのmgシユクラロー
スで示した（７０％転換率）。結果は次の通りである。
はATCCから得た。１ｇ／酵母エキス＋５ｇ／ラフイ
ノースを含有する無機塩培地（Jayasuria，１９５５Jou
rnal of General Microbiology１２ ４１９−４２８）
１１０mlを含む５００ml振盪フラスコにて３００℃で培
養した。細胞は生育対数期に遠心分取（５０００回転／
分、１０分）し、クエン酸塩／リン酸塩バツフアーpH
５．０の５倍容量にて再懸濁し、氷浴にて０℃に維持
し、最大出力でMSEソニチーター（Dawe Soniprobe Type
1130Ａ）にて３×２０秒バーストにより破壊した。生
成懸濁液を３０分遠心分離（１７，０００回転／分）
し、残渣と上清液はｐ−ニトロフエニルα−Ｄ−ガラク
トピラノシド（Sigma）を使つて、細胞くず乾燥重量ｇ
当りα−ガラクトシダーゼ活性単位で試験した。上清液
には殆んど酵素活性は検出されなかつた。ついで陽性の
培養物は例４のようにTRC加水分解について試験し、結
果は細胞残渣乾燥重量ｇ／１時間当りのmgシユクラロー
スで示した（７０％転換率）。結果は次の通りである。
例７ 有機培地におけるシユクラロースの生産 例１のTCR（２３mg）を５mlスクリユートツプガラスビ
ンに入れ、水性バツフア（酢酸ナトリウム、５０mM、pH
５．０）で予め飽和させた有機溶媒を加え、２０mM
（１．１５％W/V）溶液を得た。M. uinacea uar raffin
oseutilizer(ATCC 20034)のペレツト化細胞α−ガラク
トシダーゼを各ビンに加え（１００mg）、１％V/V水性
バツフアーを加え、３０秒間撹拌し、ついで５５℃、１
００rpmで水浴振盪機中にガラスビンをおいて反応を開
始させた。定期的に、試料を取り、溶離剤として２０％
水性アセトニトリルを使つて、逆相（Waters Dextropak
Ｃ１８）カラムを取りつけたHPLCシステムに２５μ
を注入し、生成したシユクラロースと残存TCRを測定し
た。２４時間のインキユベーシヨン中シユクラロースの
生成に及ぼす有機溶媒の効果は第２図に示す。第２図に
は、TCRをシユクラロースの経時的加水分解過程を水性
バツフアー（曲線１）についておよび３つの溶媒、メチ
ルイソブチルケトン(2)、酢酸エチル(3)ならびにｎ−ブ
タノール(4)についてプロツトしてある。メチルイソブ
チルケトンおよび水性バツフアーにおける加水分解反応
は類似していた。酢酸エチルとｎ−ブタノールでは低率
と転換がそれぞれ得られた。すべての場合、２４時間に
おいて５０％以上の転換が観られ、水性バツフアーとメ
チルイソブチルケトンにおいては７０％の転換率であつ
た。
ンに入れ、水性バツフア（酢酸ナトリウム、５０mM、pH
５．０）で予め飽和させた有機溶媒を加え、２０mM
（１．１５％W/V）溶液を得た。M. uinacea uar raffin
oseutilizer(ATCC 20034)のペレツト化細胞α−ガラク
トシダーゼを各ビンに加え（１００mg）、１％V/V水性
バツフアーを加え、３０秒間撹拌し、ついで５５℃、１
００rpmで水浴振盪機中にガラスビンをおいて反応を開
始させた。定期的に、試料を取り、溶離剤として２０％
水性アセトニトリルを使つて、逆相（Waters Dextropak
Ｃ１８）カラムを取りつけたHPLCシステムに２５μ
を注入し、生成したシユクラロースと残存TCRを測定し
た。２４時間のインキユベーシヨン中シユクラロースの
生成に及ぼす有機溶媒の効果は第２図に示す。第２図に
は、TCRをシユクラロースの経時的加水分解過程を水性
バツフアー（曲線１）についておよび３つの溶媒、メチ
ルイソブチルケトン(2)、酢酸エチル(3)ならびにｎ−ブ
タノール(4)についてプロツトしてある。メチルイソブ
チルケトンおよび水性バツフアーにおける加水分解反応
は類似していた。酢酸エチルとｎ−ブタノールでは低率
と転換がそれぞれ得られた。すべての場合、２４時間に
おいて５０％以上の転換が観られ、水性バツフアーとメ
チルイソブチルケトンにおいては７０％の転換率であつ
た。
別の実験では、水性バツフアーと酢酸エチルでは酵素は
ミカエリス／メンテン速度論を示した。酢酸エチル中Km
とKcatは夫々１６．４mM TCRと５６．３mgシユクラロー
ス／ｇペレツト／時間であつた。酢酸エチル中TCR加水
分解の時間コースは２０mM TCRでの水性バツフアーにお
けるものより低かつた理由は酢酸エチル中のTCRの高Km
によるものであつて、低触媒活性によるものではなかつ
た。５０mM TCRを使用した場合、酢酸エチル中のTCR加
水分解の率と転換は水性バツフアーの場合に類似してい
た。
ミカエリス／メンテン速度論を示した。酢酸エチル中Km
とKcatは夫々１６．４mM TCRと５６．３mgシユクラロー
ス／ｇペレツト／時間であつた。酢酸エチル中TCR加水
分解の時間コースは２０mM TCRでの水性バツフアーにお
けるものより低かつた理由は酢酸エチル中のTCRの高Km
によるものであつて、低触媒活性によるものではなかつ
た。５０mM TCRを使用した場合、酢酸エチル中のTCR加
水分解の率と転換は水性バツフアーの場合に類似してい
た。
第１図と第２図はTCRのシユクラロースへの加水分解率
を示す。
を示す。
フロントページの続き (72)発明者 キザー サルタン マフテイ イギリス国バークシヤー アールジー２ ８イーエイ，リーデイング，シンフイール ド ライズ ピースヘブン（番地なし) (72)発明者 リアツ アメツド カーン イギリス国バークシヤー，ソニング，オー ルド バス ロード，ラムジイ （番地な し) (72)発明者 ピーター サムエル ジエームス チーサ ム イギリス国ケント，ノース アツシユフオ ード，ブラボーン リーズ，プロスペクト ウエイ 59 (72)発明者 アンドリユー ジヨン ハツキング イギリス国バークシヤー アールジー１ ６エツチピー，リーデイング，バス ロー ド，バレリー コート 28 (72)発明者 ジヨナサン セス ドーデイツク イギリス国バークシヤー アールジー４ ７エスワイ，リーデイング，ケイバーシヤ ム，ヘムデイーン ロード 71
Claims (5)
- 【請求項１】６位から６-クロロ-６-デオキシガラクト
シル部分を除去するMortierella vinacea，Circinellam
uscae又はAspergillus niger株由来の酵素の存在下Ｏ-
α-Ｄ-６-クロロ-６-デオキシガラクトピラノシル-(1→
6)-α-Ｄ-４-クロロ-４-デオキシガラクトピラノシル-
(1→2)-β-Ｄ-1,6-ジクロロ-1,6-ジデオキシフラクトフ
ラノシド(TCR)の溶液を温置することを特徴とする、シ
ュクラロースの製造法。 - 【請求項２】酵素はMortierella vinacea var, raffino
seutilizer由来のものである、特許請求の範囲第1項記
載の方法。 - 【請求項３】TCRを水溶液又は水不混和性の親水性有機
溶媒に溶解する、特許請求の範囲第1項または第2項に記
載の方法。 - 【請求項４】溶媒はメチルイソブチルケトン、酢酸エチ
ル又はn-ブタノールである、特許請求の範囲第3項記載
の方法。 - 【請求項５】55℃の温度とpH4.5〜5.5で行なう、特許請
求の範囲第1項から第4項のいずれか1項に記載の方法。
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