JPH06262070A - 分離用樹脂及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 平均細孔半径が１０オングストローム以上、
７５オングストローム以下の細孔を有する多孔性有機重
合体粒子であり、液体クロマトグラフィーにおいて血清
アルブミン共存下で逆相分配モードにより有機低分子化
合物を分離した際に血清アルブミンの回収率が８０％以
上である分離用樹脂及び該樹脂を有機重合体粒子に、架
橋性ポリビニル単量体を２５重量％から１００重量％含
むビニル単量体、ラジカル重合開始剤および多孔質化溶
媒を含浸させた後、該粒子を該水性媒体に懸濁し、該懸
濁液を昇温後、重合反応の継続中に親水性ビニル単量体
を該懸濁液に添加することより製造する方法。 【効果】 本発明は、従来のシリカゲルを担体とし
て分離剤よりも耐久性が優れる多孔質有機重合体粒子か
らなる粒子表面が親水化された分離用樹脂に関するもの
であり、タンパク質共存下で有機低分子化合物を逆相分
配モードで分離する用途に好適であり、測定試料の除タ
ンパク質の必要がないという特徴を有する分離用樹脂で
ある。また、該分離用樹脂を簡便な方法により製造する
方法である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、多孔質構造を有し、粒
子内部の細孔表面は疎水的性質を有し、粒子表面が親水
化されており、特には液体クロマトグラフィー用充填
剤、各種分離用樹脂、吸着剤等の用途に好適であり、中
でも、タンパク質共存下で有機低分子化合物を逆相分配
モードで分離する用途に適した分離用樹脂及びその製造
法に関する。

【０００２】

【従来の技術】血清等のタンパク質成分を多量に含有す
る生体成分中の薬物や代謝物を液体クロマトグラフィー
により定量する場合、該タンパク質の分離剤への吸着に
よる弊害があるため、従来は定量する生体成分からの除
タンパク等の前処理が必要とされていた。

【０００３】しかし、このような前処理操作は、多くの
時間と労力を有し、且つ分析精度を悪化させるという問
題を有している。そこで、近年これらの除タンパク操作
を行うことなく直接タンパク質成分含有試料を注入し、
この試料中に含まれる各種成分を分離することのできる
分離剤が開発されている。これらの改良された分離剤
は、シリカゲルを担体として、その細孔内には疎水性、
外には親水性といった細孔内外に異なる性質を付与した
ものである。

【０００４】この分離剤を用いれば血清中のタンパク質
は巨大分子なので細孔内に入らないが、親水性の外表面
に吸着することもなく素通りし、比較的小さな薬物等の
分子は疎水性の内表面に吸着して分離されるというもの
である。このような分離剤の例としては、オクタデシル
シリカゲルの粒子表面にタンパク質をコートした分離剤
（特開昭６０−５６２５６号）や、疎水性シリカゲルの
外表面の疎水性基のみを酵素により切断し、更に親水性
基を導入した分離剤（特開昭６１−６５１５９号および
特開平１−１２３１４５号）が知られている。

【０００５】しかしながら従来知られている分離剤は、
シリカゲルを担体としている為、耐久性、特に耐アルカ
リ性に劣り、長期間の使用やアルカリでの回生処理に耐
えないという問題があった。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、この問題点
を解決した分離用樹脂を提供することを目的とし、特に
タンパク質の回収率が良好な逆相分配モードに適した分
離用樹脂および該樹脂を従来に無く簡便に製造できる方
法を提供することを目的とする。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、有機重合
体粒子からなる種粒子にビニル単量体を含浸させて重合
するシード重合法において、そのシード重合途中に親水
性ビニル単量体を添加することによって、多孔質構造を
有し、粒子表面が親水化され、しかも粒子内部の細孔表
面は疎水的性質を有している多孔性重合体粒子が得られ
ることを見いだし、本発明に至ったものである。

【０００８】また、多孔質構造と分離性能の関係を詳細
に検討した結果、平均細孔半径が一定の範囲においてタ
ンパク質が細孔内に進入せず、一方、有機低分子化合物
は細孔内に進入して良好に分離される範囲があることを
見いだし本発明に至ったものである。すなわち、本発明
は平均細孔半径が１０オングストローム以上、７５オン
グストローム以下の細孔を有する多孔性有機重合体粒子
であり、液体クロマトグラフィーにおいて血清アルブミ
ン共存下で逆相分配モードにより有機低分子化合物を分
離した際に血清アルブミンの回収率が８０％以上である
分離用樹脂及び有機重合体粒子に、架橋性ポリビニル単
量体を２５重量％から１００重量％含むビニル単量体、
ラジカル重合開始剤および多孔質化溶媒を含浸させた
後、該粒子を該水性媒体に懸濁し、該懸濁液を昇温後、
重合反応の継続中に親水性ビニル単量体を該懸濁液に添
加することを特徴とする該分離用樹脂の製造方法をその
要旨とする。

【０００９】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
分離用樹脂は、粒子径分布が狭い（粒子径単分散の）種
粒子を用い、これに更にビニル単量体を含浸させて重合
する所謂シード重合法を利用して製造することにより、
より優れた性能を与える分離用樹脂が製造できる。該シ
ード重合で用いられる有機重合体粒子（種粒子）は乳化
重合、ソープフリー乳化重合、分散重合、懸濁重合等の
一般に良く知られた造球重合により製造できる。中で
も、乳化重合、ソープフリー乳化重合、分散重合等で得
られる重合体粒子は懸濁重合により製造されたものに比
較しその粒子径分布が狭く好ましい。

【００１０】種粒子の組成としては、芳香族モノビニル
単量体および／または脂肪族モノビニル単量体からなる
重合体が好適である。これらは単独重合体もしくは２種
以上の単量体の共重合体の何れでも良く、１重量％以下
の架橋性ポリビニル単量体との共重合体であっても良
い。代表的には、ポリスチレンもしくはポリメタクリル
酸エステルからなる粒子が好ましい。種粒子の大きさは
０．１〜１０００μｍの範囲で、目的に応じ任意に選ぶ
ことができる。

【００１１】本発明において、前述の如く製造された有
機重合体粒子からなる種粒子に架橋性ポリビニル単量体
を２５重量％から１００重量％含むビニル単量体を含浸
させる。該架橋性ポリビニル単量体としては、芳香族ポ
リビニル単量体、脂肪族ポリビニル単量体が好適であ
り、芳香族ポリビニル単量体としては、ジビニルベンゼ
ンが、また、脂肪族ポリビニル単量体としては多価アル
コールのポリ（メタ）アクリレートやアルキレンポリ
（メタ）アクリルアミドが好ましい。その一例として、
エチレングリコールジ（メタ）アクリレート、ポリエチ
レングリコールジ（メタ）アクリレート、グリセロール
ジ（メタ）アクリレート、グリセロールトリ（メタ）ア
クリレート、アリルアシレート、トリメチロールプロパ
ントリ（メタ）アクリレート、テトラヒドロキシブタン
ジ（メタ）アクリレート、ペンタエリスリトールジ（メ
タ）アクリレート、１，４−シクロヘキサンジオールジ
（メタ）アクリレート、メチレンビスアクリルアミド等
が挙げられる。

【００１２】架橋性ポリビニル単量体以外のビニル単量
体としては、モノビニル単量体を使用する。該モノビニ
ル単量体としては、芳香族モノビニル単量体、脂肪族モ
ノビニル単量体が好ましい。芳香族モノビニル単量体と
しては、スチレン、ｔ−ブトキシカルボニルスチレン、
エチルスチレン、ハロアルキルスチレン、クロロスチレ
ン等のスチレン誘導体、安息香酸ビニル、ｐ−ｔ−ブチ
ル安息香酸ビニル等のカルボン酸ビニル等が好ましい。
また、脂肪族モノビニル単量体としては、モノ不飽和カ
ルボン酸、モノ不飽和カルボン酸エステル、アクリルア
ミド誘導体、モノ不飽和エーテル等が好ましく、その一
例としてメチル（メタ）アクリレート、イソブチル（メ
タ）アクリレート、ｔ−ブチル（メタ）アクリレート、
ステアリル（メタ）アクリレート、ベンジル（メタ）ア
クリレート等の（置換）アルキル（メタ）アクリレー
ト、グリシジル（メタ）アクリレート、グリセロールモ
ノ（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシエチル（メ
タ）アクリレート、シクロヘキサンカルボン酸ビニル、
ブタン酸ビニル、Ｎ−イソプロピル（メタ）アクリルア
ミド、（メタ）アクリルアミド、ｎ−オクタデシルビニ
ルエーテル、ｎ−ブチルビニルエーテル、アリルアルコ
ール等が挙げられる。

【００１３】これらビニル単量体の量は使用する種粒子
の大きさと目的とする粒子の大きさを考慮して適宜決定
される。種粒子に含浸させるビニル単量体中の架橋性ポ
リビニル単量体の量は２５重量％から１００重量％であ
り、好ましくは４０重量％から１００重量％である。更
に、種粒子に含浸させる多孔質化溶媒としては、シード
重合時に相分離剤として作用し、粒子の多孔質化を促進
する有機溶媒である脂肪族あるいは芳香族炭化水素類、
エステル類、ケトン類、アルコール類、エーテル類が挙
げられる。このような有機溶媒としては、例えばトルエ
ン、キシレン、シクロヘキサン、オクタン、イソオクタ
ン、酢酸ブチル、フタル酸ジメチル、フタル酸ジブチ
ル、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、ジ
ブチルエーテル、１−ヘキサノール、２−オクタノー
ル、デカノール、ラウリルアルコール、シクロヘキサノ
ール等が挙げられ、これらは単独もしくは混合して使用
する。

【００１４】シード重合時のラジカル重合開始剤は過酸
化ベンゾイル、ブチルパーオキシヘキサノエート等の過
酸化物系開始剤、アゾビスイソブチロニトリル、アゾビ
スイソバレロニトリル等のアゾ系開始剤が好ましい。こ
れら重合開始剤は、ビニル単量体或いは多孔質化溶媒に
溶解し、ビニル単量体の含浸と同時に、またはその前後
に種粒子に含浸される。

【００１５】また、これらビニル単量体、多孔質化溶
媒、ラジカル重合開始剤等を種粒子に含浸させる際に、
場合により種粒子に対して親和性が高い溶媒で希釈し含
浸させることも好ましく、必要に応じ、重合開始剤をこ
の溶媒に溶解し添加することもできる。このような溶媒
としては、アルコール、アセトン、テトラヒドロフラ
ン、ジオキサン等の水混和性低沸点溶媒やジクロロエタ
ン、塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素等が挙げられ
る。これら含浸を促進する溶媒は、シード重合開始のた
めに重合温度に昇温される前に減圧留去することが好ま
しい。

【００１６】本発明では、このようにビニル単量体、多
孔質化溶媒、重合開始剤を含浸させ、種粒子を肥大化さ
せた後、水性媒体中に懸濁して重合を行う。該水性媒体
中には、シード重合中に凝集、変形、融着することを防
止し、その分散安定性を増す為に、分散安定剤を含有さ
せる。該分散安定剤としては公知のアニオン系、ノニオ
ン系の界面活性剤、およびポリビニルピロリドン、ポリ
エチレンイミン、ビニルアルコール−酢酸ビニルコポリ
マー等の合成高分子が好適であり、特にビニルアルコー
ル−酢酸ビニルコポリマーが好ましい。中でも、その重
合度が５００前後である比較的低分子量のビニルアルコ
ール−酢酸ビニルコポリマーが特に好ましい。

【００１７】シード重合は、重合温度に昇温されること
によって開始される。この重合温度は使用する重合開始
剤の種類にもよるが、５０℃〜８０℃が好ましい。ま
た、シード重合の重合時間は、重合開始剤の半減期前後
またはそれ以上が好ましく、例えば、３時間〜４８時間
が好ましい。本発明において、シード重合は公知の一般
的な方法によって実施できるが、乳化重合法またはソー
プフリー乳化重合法で製造された０．１〜１．５μｍの
重合体粒子を種粒子とする場合には、まずフタル酸ジブ
チル等の膨潤助剤による一次膨潤の後、シード重合する
ことにより１００μｍ程度までの粒子径が均一な多孔質
粒子が製造できる方法（Ｊ．Ｕｇｅｌｓｔａｄら、Ｍａ
ｋｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒｅ Ｃｈｅｍｉｅ、第８０
巻、７３７頁、１９７９年）が好適に用いられる。

【００１８】また、分散重合により製造された１〜１０
μｍの重合体粒子を種粒子とし、シード重合する方法
（例えば特開昭６４−２６６１７号公報）も好適に使用
できる。本発明ではシード重合開始後、該重合反応継続
中、ビニル単量体等を含浸させた種粒子を含む懸濁液に
添加される親水性ビニル単量体としては、グリセロール
モノ（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシエチル（メ
タ）アクリレート等の水酸基を１個以上有する（メタ）
アクリル酸エステル、、Ｎ−イソプロピル（メタ）アク
リルアミド、アクリルアミド、メタクリルアミド、グリ
シジル（メタ）アクリレート等が挙げられ、特に、上記
多孔質化溶媒よりも水性媒体の方に分配しやすい親水性
ビニル単量体が好適である。また、水性媒体に添加する
親水性ビニル単量体の一部にグリセロールジ（メタ）ア
クリレート、ペンタエリスリトールジ（メタ）アクリレ
ート等の親水性であり、架橋性のポリビニル単量体を使
用することも可能であるが、該架橋性ポリビニル単量体
の使用量は水性媒体に添加する親水性ビニル単量体の１
％以下であることが好ましい。親水性ビニル単量体の添
加量は、シード重合に先立ち種粒子に予め含浸させるビ
ニル単量体に対し１〜３０重量％であり、好ましくは２
〜２０重量％である。親水性ビニル単量体の添加時期
は、所定の重合温度に昇温し、シード重合を開始した
後、０．５〜１２時間の間、好ましくは１〜６時間の間
に、一括もしくは分割して添加する。分割して添加する
場合は、例えば１０〜６０分毎に添加する方法が好まし
い。親水性ビニル単量体は、そのまま添加するか、もし
くは溶媒で希釈または溶解して添加する。

【００１９】本発明ではシード重合を開始後、懸濁液に
親水性ビニル単量体を添加するに際し、重合開始剤、特
に過硫酸カリウム等の水溶性開始剤を同時に添加するこ
とも好ましい。シード重合開始後に水性媒体に対し重合
開始剤を添加しない場合には、シード重合に先立ち水性
媒体中に亜硝酸ナトリウム等の水中重合禁止剤を添加す
ることが好ましい。

【００２０】本発明においては、重合完結後、種粒子と
して用いた有機重合体粒子の良溶媒を用いて洗浄するこ
とにより、種粒子由来の重合体の一部または全部を除去
することによっても、所望の多孔度の樹脂が得られる。
本発明方法により、親水性ビニル単量体が粒子表面で重
合することにより、粒子表面が親水化されたことは、簡
便には重量の増加や明らかな物性の変化により検証でき
るが、更に分析的には元素分析や赤外吸収スペクトルの
測定により確認できる。

【００２１】本発明方法で得られる多孔性重合体粒子の
ＢＥＴ法で測定した乾燥状態での細孔物性としては、平
均細孔半径は１０〜７５オングストローム、好ましくは
１５〜６０オングストロームであり、細孔容積として
０．２〜１．８ｍｌ／ｇ、好ましくは０．４〜１．２ｍ
ｌ／ｇであり、細孔表面積として１〜２０００ｍ²／
ｇ、好ましくは５〜１５００ｍ²／ｇである。平均細孔
半径が１０オングストローム以下の場合は、有機低分子
化合物に対する分離性が悪くなり、一方、７５オングス
トローム以上では、タンパク質が細孔内部まで拡散する
ようになり、細孔表面で吸着されることにより回収率が
低下する。

【００２２】本発明では、所望の平均細孔半径を有する
樹脂とするために、使用する単量体や多孔質化溶媒等の
種類や量及び重合条件等を適宜選択して製造する。液体
クロマトグラフィーにより、血清アルブミンの共存下逆
相分配モードで有機低分子化合物を分離する条件で、本
発明の樹脂の血清アルブミンの回収率を、得られたクロ
マトグラムのピーク面積より算出することにより定量し
た血清アルブミン回収率は８０％以上であり、好ましく
は９０％以上、更に好ましくは９５％以上である。

【００２３】

【実施例】以下、本発明を実施例により説明するが、本
発明はこれら実施例により何ら限定されるものではな
い。

【００２４】実施例１ （１）ポリスチレン種粒子の調製 水（超純水を更にアルゴンをバブリングしながら沸騰さ
せた後、冷却したもの）３００ｍｌに塩化ナトリウム
０．２７ｇを溶解させ、これに蒸留精製したスチレン５
ｍｌを加えた。これらを室温においてメカニカルスター
ラーで緩やかに攪拌しながらさらに２０分間アルゴンを
バブリングして反応容器の中を置換した後、容器を密閉
した。容器の温度を７５℃にあげ、同時に攪拌速度を３
５０ｒｐｍにあげた。この状態を３０分間保った後、水
２７．８ｍｌに溶解させた過硫酸カリウム０．２１ｇを
加え重合を開始した。最初透明であった溶液は約２０分
で乳濁しはじめた。重合開始から３０分後さらに５ｍｌ
のスチレンを加えた後、１時間毎に５ｍｌのスチレン
を、最終的に加えたスチレンが全量が４０ｍｌになるま
で加えた。重合時間は開始剤添加後２２．５時間であっ
た。重合後の乳化液は大まかに固形物を取り除いた後、
遠心分離（４５００ｒｐｍで３０分間）後上澄み液を捨
て、水を加えて再度粒子を分散させた後同様に遠心分離
し上澄み液を除去した。この操作を上澄み液が完全に透
明になるまで繰り返した。再度、水に分散させた後、光
学顕微鏡で粒子を観察したところ粒子径はほぼ１μｍの
極めて粒子径分布の狭い（単分散性の高い）ポリスチレ
ンビーズが得られていることが確認できた。ポリスチレ
ン粒子の重量を基とした収率は６５％であり、最終的に
調製したポリスチレン粒子の水分散液の濃度は９．５重
量％であった。この粒子径単分散ポリスチレン粒子分散
液を以後のシード重合に種粒子として使用した。

【００２５】（２）膨潤助剤による一次膨潤 フタル酸ジブチル０．９５ｍｌに過酸化ベンゾイル０．
０８５ｇを溶解させ、これにドデシル硫酸ナトリウム
０．０４ｇおよび水１０ｍｌを加え、超音波発生器を用
いて氷冷下に微分散液を調製した。このようにして調製
した膨潤助剤の微分散液に上記（１）で調製したポリス
チレン種粒子の水分散液（９．５重量％）を１．４ｍｌ
加えて、室温で緩やかに攪拌（マグネチックスターラ
ー、１２５ｒｐｍ）しながら膨潤助剤を種粒子に含浸さ
せた。この段階の膨潤完結は光学顕微鏡で確認したが、
２時間から４時間の間に完全に終了した。

【００２６】（３）分離用樹脂の調製 トルエン１０ｍｌおよびグリセロールジメタクリレート
９ｍｌをポリビニルアルコール（重合度５００、けん化
度８９％）１．９２ｇを水９０ｍｌに溶解させたものに
加えた。氷冷下に超音波発生器を用いて微分散液を調製
し、これを上記（２）において調製した一次膨潤粒子に
加え、同様に室温で緩やかに攪拌しながら（１２５ｒｐ
ｍ）微分散液を膨潤粒子に含浸させた（１時間で終了、
この操作を二次膨潤と呼ぶ）。二次膨潤が終了した懸濁
液を２００ｍｌのセパラブルフラスコに移し、緩やかに
攪拌しながら室温でアルゴンを２０分間バブリングし
た。亜硫酸ナトリウム０．０１ｇを懸濁液に加え、容器
を密閉したのち、温度を８０℃に上げてシード重合を開
始した。重合開始後１時間経過した時点で、グリセロー
ルモノメタクリレート１ｇを重合容器に添加した。攪拌
しながら更に２０時間重合を行った。この過程での二次
粒子の生成は認められなかった。重合終了後、懸濁液は
水２００ｍｌに注ぎ入れ、超音波発生器で粒子が均一に
分散するまで振とうした後、室温で一夜静置した。上澄
み液を捨てた後、メタノール２００ｍｌを加え同様に超
音波発生器で粒子を再度分散させた後、静置し粒子が完
全に沈降した後、上澄み液を捨てた。この操作をメタノ
ールで更に二回、テトラヒドロフランで二回繰り返した
後ミクロフィルター（住友電工製Ｆｌｕｏｒｏｐｏｒ
ｅ、ＦＰ−２００）で粒子をろ過し、室温で乾燥させた
後、重量を求めた。得られた粒子の重量は９．３ｇであ
り、用いたモノマーを基に算出した収率は８９％であっ
た。乾燥粒子の多孔度物性はＢＥＴ法による測定によ
り、平均細孔半径５０オングストローム、細孔表面積３
００ｍ²／ｇ、細孔容積０．８ｍｌ／ｇであった。

【００２７】得られた粒子を内径４．６ｍｍ、長さ１５
０ｍｍの液体クロマトグラフィー用カラムに充填し、
０．１Ｍの硫酸ナトリウムを含む０．０２Ｍリン酸緩衝
液／アセトニトリル混合液（容量比＝９：１、ｐＨ７）
を溶離液とし、蛋白質（牛血清アルブミン、分子量６．
７万）と低分子薬物であるテオフィリン（Ｃ₇Ｈ₈Ｎ
₄Ｏ₂、分子量１８０）、バルビタール（Ｃ₈Ｈ₁₂Ｎ
₂Ｏ₃、分子量１８４）の分離を行った。結果を図１に示
す。尚、検出は紫外光検出器（波長２５０ｎｍ）により
行った。牛血清アルブミンは、細孔内部へ浸透できない
程度に分子量が大きいが、粒子に吸着することなくカラ
ムを素通りして溶出し、一方、低分子薬物は、細孔内部
に浸透し、テオフィリンよりも疎水性が強いバルビター
ルの方が粒子に強く吸着してテオフィリンよりも遅く溶
出することにより、三者の良好な分離が行われることが
わかった。液体クロマトグラフィーにより、カラムから
溶出した牛血清アルブミンの量をピーク面積より定量し
たところ、９９％であった。

【００２８】比較例１ 実施例１と全く同様に、二次膨潤まで行い、グリセロー
ルモノメタクリレートを添加しないで、シード重合を実
施した。得られた粒子を実施例１と全く同様にしてカラ
ムに充填し、蛋白質（牛血清アルブミン）と低分子薬物
（テオフィリン、バルビタール）の分離を行った。本比
較例では親水性単量体であるグリセロールモノメタクリ
レートをシード重合開始後に添加していない為、粒子最
外殻表面が親水化されておらず牛血清アルブミンが吸着
されて溶出しない結果となった（回収率３％）。これ
は、蛋白質により粒子表面が汚染される傾向があること
を示しており、血液中の薬物を前処理せずに注入し分析
する用途には耐久性が悪く好ましくない。

【００２９】

【発明の効果】本発明は、従来のシリカゲルを担体とし
て分離剤よりも耐久性が優れる多孔質有機重合体粒子か
らなる粒子表面が親水化された分離用樹脂に関するもの
であり、タンパク質共存下で有機低分子化合物を逆相分
配モードで分離する用途に好適であり、測定試料の除タ
ンパク質の必要がないという特徴を有する分離用樹脂で
ある。また、該分離用樹脂を簡便な方法により製造する
方法である。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の実施例１の分離用樹脂を用いて、タン
パク質と低分子薬物（テオフィリン、バルビタール）の
分離を行った際のクロマトグラムを示す図であり、それ
ぞれ、縦軸は吸光度、横軸は時間（分）を表す。

【符号の説明】

１：牛血清アルブミン、２：テオフィリン、３：バルビ
タール

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 平均細孔半径が１０オングストローム以
   上、７５オングストローム以下の細孔を有する多孔性有
   機重合体粒子であり、液体クロマトグラフィーにおいて
   血清アルブミン共存下で逆相分配モードにより有機低分
   子化合物を分離した際に血清アルブミンの回収率が８０
   ％以上である分離用樹脂。
2. 【請求項２】 有機重合体粒子に、架橋性ポリビニル単
   量体を２５重量％から１００重量％含むビニル単量体、
   ラジカル重合開始剤および多孔質化溶媒を含浸させた
   後、該粒子を該水性媒体に懸濁し、該懸濁液を昇温後、
   重合反応の継続中に親水性ビニル単量体を該懸濁液に添
   加することを特徴とする請求項１に記載の分離用樹脂の
   製造方法。