JPH06256217A - トリオキサン誘導体標識抗体、抗原および免疫測定方法 - Google Patents
トリオキサン誘導体標識抗体、抗原および免疫測定方法Info
- Publication number
- JPH06256217A JPH06256217A JP6906793A JP6906793A JPH06256217A JP H06256217 A JPH06256217 A JP H06256217A JP 6906793 A JP6906793 A JP 6906793A JP 6906793 A JP6906793 A JP 6906793A JP H06256217 A JPH06256217 A JP H06256217A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antigen
- antibody
- labeled
- specific
- labeled antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Heterocyclic Compounds That Contain Two Or More Ring Oxygen Atoms (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 トリオキサン誘導体標識抗体、抗原および免
疫測定方法を提供する。 【構成】 （式中Ｒ1 及びＲ2 は同一または異って、それぞれ炭素
原子１乃至３個の置換又は非置換の脂肪族炭化水素基を
示し、Ｒ3 は２価の有機残基を示し、Ｒ4 は水素原子、
炭素原子１乃至３個の置換又は非置換の脂肪族炭化水素
基を示す。さらにＲ3 とＲ4 とが環構造を形成してもよ
い。Ｘはカルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシル基ま
たはメルカプト基を示す）で表わされるトリオキサン誘
導体と、特定の抗体または抗原とが共有結合しているこ
とを特徴とする標識抗体または標識抗原並びにこれを使
用する免疫測定方法である。
疫測定方法を提供する。 【構成】 （式中Ｒ1 及びＲ2 は同一または異って、それぞれ炭素
原子１乃至３個の置換又は非置換の脂肪族炭化水素基を
示し、Ｒ3 は２価の有機残基を示し、Ｒ4 は水素原子、
炭素原子１乃至３個の置換又は非置換の脂肪族炭化水素
基を示す。さらにＲ3 とＲ4 とが環構造を形成してもよ
い。Ｘはカルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシル基ま
たはメルカプト基を示す）で表わされるトリオキサン誘
導体と、特定の抗体または抗原とが共有結合しているこ
とを特徴とする標識抗体または標識抗原並びにこれを使
用する免疫測定方法である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は新規なトリオキサン誘導
体が標識された抗体、抗原および、それを用いる免疫測
定方法に関する。本発明の標識抗体および標識抗原は各
種診断薬として利用される。
体が標識された抗体、抗原および、それを用いる免疫測
定方法に関する。本発明の標識抗体および標識抗原は各
種診断薬として利用される。
【０００２】
【従来の技術】化学発光とは、原子ないし分子が化学反
応によって生ずるエネルギーによって励起されて光を発
する現象であり、化学発光性化合物として現在までに種
々の骨格を有するものが開発されている。ルミノール、
ルシゲニン、ロフィン、アクリジニウムエステル、シュ
ウ酸エステル、そしてトリオキサン骨格を有する５−
（９−アントリルアミノ）−３−イソプロピル−６，６
−ジメチル−１，２，４−トリオキサンにも化学発光能
があることが知られている（「生物発光と化学発光」今
井一洋編、広川書店出版、７５〜１５０ページ、１９８
９年）。
応によって生ずるエネルギーによって励起されて光を発
する現象であり、化学発光性化合物として現在までに種
々の骨格を有するものが開発されている。ルミノール、
ルシゲニン、ロフィン、アクリジニウムエステル、シュ
ウ酸エステル、そしてトリオキサン骨格を有する５−
（９−アントリルアミノ）−３−イソプロピル−６，６
−ジメチル−１，２，４−トリオキサンにも化学発光能
があることが知られている（「生物発光と化学発光」今
井一洋編、広川書店出版、７５〜１５０ページ、１９８
９年）。
【０００３】現在までに化学発光物質が標識された抗体
（抗原）についての報告としては、ルミノールを標識す
るものが特開昭６２−１２４４４６、特開平１−１４９
７７３に、アクリジニウムエステルを標識物質として用
いる方法として特開昭６０−１４６１５５、６３−５７
５７２、６３−１１２５６４、特開平１−２６１４６
１、１−１９９９４９、２−９６５６７、２−１３３４
６９、３−５０１７７２に、フェナントリジニウムエス
テルを用いる方法として特開昭６１−７６４６４が開示
されている。しかしながらルミノールは発光量子収率が
一般に低く、微量物質の検出に用いるのは困難である。
またアクリジニウムエステルやフェナントリジニウムエ
ステルは発光量子収率は比較的高いが、加水分解を受け
易くこれによって化学発光能を失うという欠点を有して
いる。従ってこれらのアクリジニウムエステル類を診断
用の標識物質として使用した場合、徐々に化学発光能の
低下が生じ信頼性に欠ける結果を与える。
（抗原）についての報告としては、ルミノールを標識す
るものが特開昭６２−１２４４４６、特開平１−１４９
７７３に、アクリジニウムエステルを標識物質として用
いる方法として特開昭６０−１４６１５５、６３−５７
５７２、６３−１１２５６４、特開平１−２６１４６
１、１−１９９９４９、２−９６５６７、２−１３３４
６９、３−５０１７７２に、フェナントリジニウムエス
テルを用いる方法として特開昭６１−７６４６４が開示
されている。しかしながらルミノールは発光量子収率が
一般に低く、微量物質の検出に用いるのは困難である。
またアクリジニウムエステルやフェナントリジニウムエ
ステルは発光量子収率は比較的高いが、加水分解を受け
易くこれによって化学発光能を失うという欠点を有して
いる。従ってこれらのアクリジニウムエステル類を診断
用の標識物質として使用した場合、徐々に化学発光能の
低下が生じ信頼性に欠ける結果を与える。
【０００４】従って、高感度でかつ安定であって再現性
のよい診断薬および免疫測定方法の開発が望まれている
のが現状である。
のよい診断薬および免疫測定方法の開発が望まれている
のが現状である。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明が解決しようと
する課題は、高感度でかつ安定であって再現性のよい診
断薬および免疫測定方法に用いることができる標識抗体
および標識抗原を提供することである。
する課題は、高感度でかつ安定であって再現性のよい診
断薬および免疫測定方法に用いることができる標識抗体
および標識抗原を提供することである。
【０００６】本発明が解決しようとする別の課題は、高
感度でかつ安定であって、しかも再現性のよい免疫測定
方法を提供することである。
感度でかつ安定であって、しかも再現性のよい免疫測定
方法を提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、一般式（１）
【０００８】
【化２】
【０００９】（式中Ｒ1 及びＲ2 は同一または異って、
それぞれ炭素原子１乃至３個の置換又は非置換の脂肪族
炭化水素基を示し、Ｒ3 は２価の有機残基を示し、Ｒ4
は水素原子、炭素原子１乃至３個の置換又は非置換の脂
肪族炭化水素基を示す。さらにＲ3 とＲ4 とが環構造を
形成してもよい。Ｘはカルボキシル基、アミノ基、ヒド
ロキシル基またはメルカプト基を示す）
それぞれ炭素原子１乃至３個の置換又は非置換の脂肪族
炭化水素基を示し、Ｒ3 は２価の有機残基を示し、Ｒ4
は水素原子、炭素原子１乃至３個の置換又は非置換の脂
肪族炭化水素基を示す。さらにＲ3 とＲ4 とが環構造を
形成してもよい。Ｘはカルボキシル基、アミノ基、ヒド
ロキシル基またはメルカプト基を示す）
【００１０】で表わされるトリオキサン誘導体と、特定
の抗体または抗原とが共有結合していることを特徴とす
る標識抗体または標識抗原に関する。
の抗体または抗原とが共有結合していることを特徴とす
る標識抗体または標識抗原に関する。
【００１１】さらに本発明によれば前記一般式（１）で
表わされるトリオキサン誘導体を標識した抗体または抗
原を用いる種々の免疫測定方法に関する。以下（Ａ）〜
（Ｈ）に、これらを列挙する。
表わされるトリオキサン誘導体を標識した抗体または抗
原を用いる種々の免疫測定方法に関する。以下（Ａ）〜
（Ｈ）に、これらを列挙する。
【００１２】（Ａ）一般式（１）で示される標識抗体ま
たは標識抗原と、試料中の測定対象物、いわゆる被検物
との免疫複合体を形成させ、しかる後、化学発光法によ
り該被検物を定量することを特徴とする免疫測定方法。
たは標識抗原と、試料中の測定対象物、いわゆる被検物
との免疫複合体を形成させ、しかる後、化学発光法によ
り該被検物を定量することを特徴とする免疫測定方法。
【００１３】（Ｂ）特定の抗原を定量する免疫測定方法
であって、一般式（１）で示される標識抗体を用いるこ
とを特徴とする 抗原−標識抗体複合体、もしくは 抗原−標識抗体複合体に含まれていない標識抗体 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。
であって、一般式（１）で示される標識抗体を用いるこ
とを特徴とする 抗原−標識抗体複合体、もしくは 抗原−標識抗体複合体に含まれていない標識抗体 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。
【００１４】（Ｃ）特定の抗体を用いて特定の抗原を定
量する免疫測定方法であって、一般式（１）で示される
標識抗体を用いることを特徴とする 抗体−抗原−標識抗体複合体、もしくは 抗体−抗原−標識抗体複合体に含まれていない標識
抗体 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。
量する免疫測定方法であって、一般式（１）で示される
標識抗体を用いることを特徴とする 抗体−抗原−標識抗体複合体、もしくは 抗体−抗原−標識抗体複合体に含まれていない標識
抗体 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。
【００１５】（Ｄ）特定の固相化抗体を用いて特定の抗
原を定量する免疫測定方法であって、一般式（１）で示
される標識抗体を用いることを特徴とする 固相化抗体−抗原−標識抗体複合体、もしくは 固相化抗体−抗原−標識抗体複合体に含まれていな
い標識抗体 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。
原を定量する免疫測定方法であって、一般式（１）で示
される標識抗体を用いることを特徴とする 固相化抗体−抗原−標識抗体複合体、もしくは 固相化抗体−抗原−標識抗体複合体に含まれていな
い標識抗体 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。
【００１６】（Ｅ）特定の固相化抗体と特定の抗体を用
いて特定の抗原を定量する免疫測定方法であって、一般
式（１）で示される標識抗体を用いることを特徴とする 固相化抗体−抗原−抗体−標識抗体複合体、もしく
は 固相化抗体−抗原−抗体−標識抗体複合体に含まれ
ていない標識抗体 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。
いて特定の抗原を定量する免疫測定方法であって、一般
式（１）で示される標識抗体を用いることを特徴とする 固相化抗体−抗原−抗体−標識抗体複合体、もしく
は 固相化抗体−抗原−抗体−標識抗体複合体に含まれ
ていない標識抗体 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。
【００１７】（Ｆ）特定の固相化抗原を用いて特定の抗
原を定量する免疫測定方法であって、一般式（１）で示
される標識抗体を用いることを特徴とする 固相化抗原−標識抗体複合体、もしくは 固相化抗原−標識抗体複合体に含まれていない抗原
−標識抗体複合体 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。
原を定量する免疫測定方法であって、一般式（１）で示
される標識抗体を用いることを特徴とする 固相化抗原−標識抗体複合体、もしくは 固相化抗原−標識抗体複合体に含まれていない抗原
−標識抗体複合体 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。
【００１８】（Ｇ）特定の固相化抗原と特定の抗体を用
いて特定の抗原を定量する免疫測定方法であって、一般
式（１）で示される標識抗体を用いることを特徴とする 固相化抗原−抗体−標識抗体複合体、もしくは 固相化抗原−抗体−標識抗体複合体に含まれていな
い標識抗体 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。
いて特定の抗原を定量する免疫測定方法であって、一般
式（１）で示される標識抗体を用いることを特徴とする 固相化抗原−抗体−標識抗体複合体、もしくは 固相化抗原−抗体−標識抗体複合体に含まれていな
い標識抗体 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。
【００１９】（Ｈ）特定の固相化抗体を用いて特定の抗
原を定量する免疫測定方法であって、一般式（１）で示
される標識抗原を用いることを特徴とする 固相化抗体−標識抗原複合体、もしくは 固相化抗体−標識抗原複合体に含まれていない標識
抗原 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。
原を定量する免疫測定方法であって、一般式（１）で示
される標識抗原を用いることを特徴とする 固相化抗体−標識抗原複合体、もしくは 固相化抗体−標識抗原複合体に含まれていない標識
抗原 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。
【００２０】以下、本発明を更に詳しく説明する。
【００２１】本発明の一般式（１）において示されるト
リオキサン誘導体で、Ｒ1 及びＲ2は、同一または、異
って、それぞれ炭素原子１乃至３個を有する置換または
非置換の低級脂肪族炭化水素基であって、例えば、メチ
ル基、エチル基、ｎ−プロピル基など、及びその置換さ
れた基を示す。Ｒ3 は２価の有機残基を示し、具体的に
は次のものを例示することができる。
リオキサン誘導体で、Ｒ1 及びＲ2は、同一または、異
って、それぞれ炭素原子１乃至３個を有する置換または
非置換の低級脂肪族炭化水素基であって、例えば、メチ
ル基、エチル基、ｎ−プロピル基など、及びその置換さ
れた基を示す。Ｒ3 は２価の有機残基を示し、具体的に
は次のものを例示することができる。
【００２２】
【化３】
【００２３】
【化４】
【００２４】
【化５】
【００２５】
【化６】
【００２６】
【化７】
【００２７】
【化８】
【００２８】
【化９】
【００２９】
【化１０】
【００３０】
【化１１】
【００３１】
【化１２】
【００３２】
【化１３】
【００３３】これらの式でｍ及びｎは１から１０までの
整数を示し、そしてＹは低級アルキル基、Ｚは低級アル
キレン基を示す。
整数を示し、そしてＹは低級アルキル基、Ｚは低級アル
キレン基を示す。
【００３４】また、一般式（１）において、Ｒ4 は、水
素原子もしくは炭素原子１乃至３個を有する置換または
非置換の低級脂肪族炭化水素基であって、メチル基、エ
チル基、ｎ−プロピル基など、及びその置換された基を
示す。さらにＲ3 とＲ4 は環構造を形成してもよく、具
体的には以下のものを例示することができる。
素原子もしくは炭素原子１乃至３個を有する置換または
非置換の低級脂肪族炭化水素基であって、メチル基、エ
チル基、ｎ−プロピル基など、及びその置換された基を
示す。さらにＲ3 とＲ4 は環構造を形成してもよく、具
体的には以下のものを例示することができる。
【００３５】
【化１４】
【００３６】
【化１５】
【００３７】
【化１６】
【００３８】
【化１７】
【００３９】
【化１８】
【００４０】
【化１９】
【００４１】
【化２０】
【００４２】またＸは抗体もしくは抗原と結合可能な置
換基であってカルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシル
基またはメルカプト基を示す。一般式（１）において示
されるトリオキサン誘導体の例を、以下に具体的に示
す。
換基であってカルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシル
基またはメルカプト基を示す。一般式（１）において示
されるトリオキサン誘導体の例を、以下に具体的に示
す。
【００４３】９−（６，６−ジメチル−３−イソプロピ
ル−２，４，５−トリオキサシクロヘキシル）アミノ−
Ｎ−カルボキシエチル−１０−アントラセンカルボキサ
ミド、９−（６，６−ジメチル−３−イソプロピル−
２，４，５−トリオキサシクロヘキシル）アミノ−Ｎ−
アミノエチル−１０−アントラセンカルボキサミド、９
−（６，６−ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５
−トリオキサシクロヘキシル）アミノ−Ｎ−ヒドロキシ
エチル−１０−アントラセンカルボキサミド、９−
（６，６−ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５−
トリオキサシクロヘキシル）アミノ−Ｎ−メルカプトエ
チル−１０−アントラセンカルボキサミド、１−（６，
６−ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５−トリオ
キサシクロヘキシル）アミノ−Ｎ−カルボキシエチル−
１０−アントラセンカルボキサミド、１−（６，６−ジ
メチル−３−イソプロピル−２，４，５−トリオキサシ
クロヘキシル）アミノ−Ｎ−アミノエチル−１０−アン
トラセンカルボキサミド、１−（６，６−ジメチル−３
−イソプロピル−２，４，５−トリオキサシクロキシ
ル）アミノ−Ｎ−ヒドロキシエチル−１０−アントラセ
ンカルボキサミド、１−（６，６−ジメチル−３−イソ
プロピル−２，４，５−トリオキサシクロキシル）アミ
ノ−Ｎ−メルカプトエチル−１０−アントラセンカルボ
キサミド、９−（６，６−ジメチル−３−イソプロピル
−２，４，５−トリオキサシクロヘキシル）アミノ−Ｎ
−カルボキシエチル−Ｎ−メチル−１０−アントラセン
カルボキサミド、９−（６，６−ジメチル−３−イソプ
ロピル−２，４，５−トリオキサシクロヘキシル）アミ
ノ−Ｎ−アミノエチル−Ｎ−メチル−１０−アントラセ
ンカルボキサミド、９−（６，６−ジメチル−３−イソ
プロピル−２，４，５−トリオキサシクロヘキシル）ア
ミノ−Ｎ−ヒドロキシエチル−Ｎ−メチル−１０−アン
トラセンカルボキサミド、９−（６，６−ジメチル−３
−イソプロピル−２，４，５−トリオキサシクロヘキシ
ル）アミノ−Ｎ−メルカプトエチル−Ｎ−メチル−１０
−アントラセンカルボキサミド、１−（６，６−ジメチ
ル−３−イソプロピル−２，４，５−トリオキサシクロ
ヘキシル）アミノ−Ｎ−カルボキシエチル−Ｎ−メチル
−１０−アントラセンカルボキサミド、１−（６，６−
ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５−トリオキサ
シクロヘキシル）アミノ−Ｎ−アミノエチル−Ｎ−メチ
ル−１０−アントラセンカルボキサミド、１−（６，６
−ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５−トリオキ
サシクロキシル）アミノ−Ｎ−ヒドロキシエチル−Ｎ−
メチル−１０−アントラセンカルボキサミド、１−
（６，６−ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５−
トリオキサシクロキシル）アミノ−Ｎ−メルカプトエチ
ル−Ｎ−メチル−１０−アントラセンカルボキサミド、
９−（６,6−ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５
−トリオキサシクロヘキシル）アミノ−１０−（４−カ
ルボキシピペリジノカルボニル）アントラセン、９−
（６，６−ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５−
トリオキサシクロヘキシル）アミノ−１０−（４−アミ
ノピペリジノカルボニル）アントラセン、９−（６,6−
ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５−トリオキサ
シクロヘキシル）アミノ−１０−（４−ヒドロキシピペ
リジノカルボニル）アントラセン、９−（６,6−ジメチ
ル−３−イソプロピル−２，４，５−トリオキサシクロ
ヘキシル）アミノ−１０−（４−メルカプトピペリジノ
カルボニル）アントラセン、１−（６,6−ジメチル−３
−イソプロピル−２，４，５−トリオキサシクロヘキシ
ル）アミノ−１０−（４−カルボキシピペリジノカルボ
ニル）アントラセン、１−（６，６−ジメチル−３−イ
ソプロピル−２，４，５−トリオキサシクロヘキシル）
アミノ−１０−（４−アミノピペリジノカルボニル）ア
ントラセン、１−（６，６−ジメチル−３−イソプロピ
ル−２，４，５−トリオキサシクロキシル）アミノ−１
０−（４−ヒドロキシピペリジノカルボニル）アントラ
セン、１−（６,6−ジメチル−３−イソプロピル−２，
４，５−トリオキサシクロキシル）アミノ−１０−（４
−メルカプトピペリジノカルボニル）アントラセン等。
ル−２，４，５−トリオキサシクロヘキシル）アミノ−
Ｎ−カルボキシエチル−１０−アントラセンカルボキサ
ミド、９−（６，６−ジメチル−３−イソプロピル−
２，４，５−トリオキサシクロヘキシル）アミノ−Ｎ−
アミノエチル−１０−アントラセンカルボキサミド、９
−（６，６−ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５
−トリオキサシクロヘキシル）アミノ−Ｎ−ヒドロキシ
エチル−１０−アントラセンカルボキサミド、９−
（６，６−ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５−
トリオキサシクロヘキシル）アミノ−Ｎ−メルカプトエ
チル−１０−アントラセンカルボキサミド、１−（６，
６−ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５−トリオ
キサシクロヘキシル）アミノ−Ｎ−カルボキシエチル−
１０−アントラセンカルボキサミド、１−（６，６−ジ
メチル−３−イソプロピル−２，４，５−トリオキサシ
クロヘキシル）アミノ−Ｎ−アミノエチル−１０−アン
トラセンカルボキサミド、１−（６，６−ジメチル−３
−イソプロピル−２，４，５−トリオキサシクロキシ
ル）アミノ−Ｎ−ヒドロキシエチル−１０−アントラセ
ンカルボキサミド、１−（６，６−ジメチル−３−イソ
プロピル−２，４，５−トリオキサシクロキシル）アミ
ノ−Ｎ−メルカプトエチル−１０−アントラセンカルボ
キサミド、９−（６，６−ジメチル−３−イソプロピル
−２，４，５−トリオキサシクロヘキシル）アミノ−Ｎ
−カルボキシエチル−Ｎ−メチル−１０−アントラセン
カルボキサミド、９−（６，６−ジメチル−３−イソプ
ロピル−２，４，５−トリオキサシクロヘキシル）アミ
ノ−Ｎ−アミノエチル−Ｎ−メチル−１０−アントラセ
ンカルボキサミド、９−（６，６−ジメチル−３−イソ
プロピル−２，４，５−トリオキサシクロヘキシル）ア
ミノ−Ｎ−ヒドロキシエチル−Ｎ−メチル−１０−アン
トラセンカルボキサミド、９−（６，６−ジメチル−３
−イソプロピル−２，４，５−トリオキサシクロヘキシ
ル）アミノ−Ｎ−メルカプトエチル−Ｎ−メチル−１０
−アントラセンカルボキサミド、１−（６，６−ジメチ
ル−３−イソプロピル−２，４，５−トリオキサシクロ
ヘキシル）アミノ−Ｎ−カルボキシエチル−Ｎ−メチル
−１０−アントラセンカルボキサミド、１−（６，６−
ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５−トリオキサ
シクロヘキシル）アミノ−Ｎ−アミノエチル−Ｎ−メチ
ル−１０−アントラセンカルボキサミド、１−（６，６
−ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５−トリオキ
サシクロキシル）アミノ−Ｎ−ヒドロキシエチル−Ｎ−
メチル−１０−アントラセンカルボキサミド、１−
（６，６−ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５−
トリオキサシクロキシル）アミノ−Ｎ−メルカプトエチ
ル−Ｎ−メチル−１０−アントラセンカルボキサミド、
９−（６,6−ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５
−トリオキサシクロヘキシル）アミノ−１０−（４−カ
ルボキシピペリジノカルボニル）アントラセン、９−
（６，６−ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５−
トリオキサシクロヘキシル）アミノ−１０−（４−アミ
ノピペリジノカルボニル）アントラセン、９−（６,6−
ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５−トリオキサ
シクロヘキシル）アミノ−１０−（４−ヒドロキシピペ
リジノカルボニル）アントラセン、９−（６,6−ジメチ
ル−３−イソプロピル−２，４，５−トリオキサシクロ
ヘキシル）アミノ−１０−（４−メルカプトピペリジノ
カルボニル）アントラセン、１−（６,6−ジメチル−３
−イソプロピル−２，４，５−トリオキサシクロヘキシ
ル）アミノ−１０−（４−カルボキシピペリジノカルボ
ニル）アントラセン、１−（６，６−ジメチル−３−イ
ソプロピル−２，４，５−トリオキサシクロヘキシル）
アミノ−１０−（４−アミノピペリジノカルボニル）ア
ントラセン、１−（６，６−ジメチル−３−イソプロピ
ル−２，４，５−トリオキサシクロキシル）アミノ−１
０−（４−ヒドロキシピペリジノカルボニル）アントラ
セン、１−（６,6−ジメチル−３−イソプロピル−２，
４，５−トリオキサシクロキシル）アミノ−１０−（４
−メルカプトピペリジノカルボニル）アントラセン等。
【００４４】本発明の標識抗体また標識抗原は、一般式
（１）で表わされるトリオキサン誘導体を様々な結合様
式で抗体および抗原に標識することにより製造される。
（１）で表わされるトリオキサン誘導体を様々な結合様
式で抗体および抗原に標識することにより製造される。
【００４５】本発明において標識抗体とすることができ
る抗体は、各種抗原に対する全ての抗体を使用すること
ができ、たとえば、各種ステロイドホルモンに対する抗
体、各種腫瘍マーカーに対する抗体、各種感染症に対す
る抗体、各種ペプチドホルモンに対する抗体、各種薬剤
に対する抗体、その他各種の抗体などである。
る抗体は、各種抗原に対する全ての抗体を使用すること
ができ、たとえば、各種ステロイドホルモンに対する抗
体、各種腫瘍マーカーに対する抗体、各種感染症に対す
る抗体、各種ペプチドホルモンに対する抗体、各種薬剤
に対する抗体、その他各種の抗体などである。
【００４６】前記において、ステロイドホルモンとして
は、たとえば、Ｔ4 、Ｔ3 、Ｔ3 Ｕ、ＴＳＨ、ＴＢＧ、
ＦＴ4 、ＦＴ3 、サイクログロブリン、コーチゾール、
エストラジオール、エストリオール、プロゲステロン、
テストステロン、１７−ＯＨＰ、エストロゲンなどが挙
げられる。
は、たとえば、Ｔ4 、Ｔ3 、Ｔ3 Ｕ、ＴＳＨ、ＴＢＧ、
ＦＴ4 、ＦＴ3 、サイクログロブリン、コーチゾール、
エストラジオール、エストリオール、プロゲステロン、
テストステロン、１７−ＯＨＰ、エストロゲンなどが挙
げられる。
【００４７】腫瘍マーカーとしては、たとえば、ＣＥ
Ａ、ＡＦＰ、β２−Ｍ、フェリチン、ＳＣＣ、ＰＡＰ、
ＳＰａｎ、γ−Ｓｍ、ＣＡ１９−９、ＣＡ１２５、ＣＡ
５０、ＮＳＥ、ＰＳＡ、ＴＰＡなどが挙げられる。
Ａ、ＡＦＰ、β２−Ｍ、フェリチン、ＳＣＣ、ＰＡＰ、
ＳＰａｎ、γ−Ｓｍ、ＣＡ１９−９、ＣＡ１２５、ＣＡ
５０、ＮＳＥ、ＰＳＡ、ＴＰＡなどが挙げられる。
【００４８】感染症としては、たとえば、ＨＡＡｂ、Ｈ
Ａ（ＩｇＭ）Ａｂ、ＨＢｓＡｂ、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡ
ｂ、ＨＢｃＡｇ、ＨＢｃＡｂ、ＨＢｃ（ＩｇＭ）Ａｂ、
ＨＤＶＡｂ、ＨＩＶ、ＣＭＶ、ＡＴＬ、ＲＳＶ、風疹、
クラミディアＡｂ、淋菌、梅毒、マイコプラズマなどが
挙げられる。
Ａ（ＩｇＭ）Ａｂ、ＨＢｓＡｂ、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡ
ｂ、ＨＢｃＡｇ、ＨＢｃＡｂ、ＨＢｃ（ＩｇＭ）Ａｂ、
ＨＤＶＡｂ、ＨＩＶ、ＣＭＶ、ＡＴＬ、ＲＳＶ、風疹、
クラミディアＡｂ、淋菌、梅毒、マイコプラズマなどが
挙げられる。
【００４９】ペプチドホルモンとしては、たとえば、Ｐ
ＴＨ、ＰＲＬ、インスリン、グリカゴン、ガストリン、
ＦＳＨ、ＬＨ、ＨＣＧ、ＰＦ4 、セクレチン、Ｃ−ペプ
チド、レニン、ＰＳＴＩ、カルトシン、ソマトメジン、
ＨＧＨ、ＡＣＴＨ、ＡＤＨなどが挙げられる。
ＴＨ、ＰＲＬ、インスリン、グリカゴン、ガストリン、
ＦＳＨ、ＬＨ、ＨＣＧ、ＰＦ4 、セクレチン、Ｃ−ペプ
チド、レニン、ＰＳＴＩ、カルトシン、ソマトメジン、
ＨＧＨ、ＡＣＴＨ、ＡＤＨなどが挙げられる。
【００５０】薬剤としては、たとえば、フェニトイン、
フェノバルビタール、カルバマゼピン、バルプロ酸、プ
リミドン、エトサクシミド、トブラマイシン、リドカイ
ン、プロカインアミド、ＮＡＰＡ、ゲンタマイシン、カ
ナマイシン、ジベカシン、ストレプトマイシン、ネチル
マイシン、アミカシン、ジゴキシン、ジギトキシン、キ
ニジン、テオフィリン、メソトレキセート、アセトアミ
ノフェン、サリチル酸、シクロスポリンなどが挙げられ
る。
フェノバルビタール、カルバマゼピン、バルプロ酸、プ
リミドン、エトサクシミド、トブラマイシン、リドカイ
ン、プロカインアミド、ＮＡＰＡ、ゲンタマイシン、カ
ナマイシン、ジベカシン、ストレプトマイシン、ネチル
マイシン、アミカシン、ジゴキシン、ジギトキシン、キ
ニジン、テオフィリン、メソトレキセート、アセトアミ
ノフェン、サリチル酸、シクロスポリンなどが挙げられ
る。
【００５１】その他の抗体としては、たとえば、Ｉｇ
Ｅ、アルゲニン特異ＩｇＥ、ＣＫ−ＭＢ、免疫複合体
（Ｃ３ｄ−、Ｃ１ｑ−）、ミオグロビン、ＩｇＧ、Ｉｇ
Ａ、ＩｇＭ、Ｃ３、Ｃ４、抗サイクログロブリン抗体、
抗マイクロソーム抗体、ＲＦ、ＡＮＡ、便潜血、Ｄ−ダ
イマー、ヒスタミンなどが挙げられる。
Ｅ、アルゲニン特異ＩｇＥ、ＣＫ−ＭＢ、免疫複合体
（Ｃ３ｄ−、Ｃ１ｑ−）、ミオグロビン、ＩｇＧ、Ｉｇ
Ａ、ＩｇＭ、Ｃ３、Ｃ４、抗サイクログロブリン抗体、
抗マイクロソーム抗体、ＲＦ、ＡＮＡ、便潜血、Ｄ−ダ
イマー、ヒスタミンなどが挙げられる。
【００５２】本発明において標識抗原とすることができ
る抗原は、たとえば、各種ステロイドホルモン、各種腫
瘍マーカー、各種ペプチドホルモン、その他各種の抗原
などである。
る抗原は、たとえば、各種ステロイドホルモン、各種腫
瘍マーカー、各種ペプチドホルモン、その他各種の抗原
などである。
【００５３】前記において、ステロイドホルモンは、た
とえば、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）などである。
とえば、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）などである。
【００５４】腫瘍マーカーは、たとえば、癌胎児性抗原
（ＣＥＡ）、ＡＦＰ、フェリチン、ＣＡ１９−９などで
ある。
（ＣＥＡ）、ＡＦＰ、フェリチン、ＣＡ１９−９などで
ある。
【００５５】ペプチドホルモンは、たとえば、ヒトプロ
ラクチン（ＰＲＬ）、インスリン（ＩＲＩ）、黄体形成
ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）などで
ある。
ラクチン（ＰＲＬ）、インスリン（ＩＲＩ）、黄体形成
ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）などで
ある。
【００５６】薬剤は、たとえば、フェニトイン、フェノ
バルビタール、カルバマゼピン、バルプロ酸、プリミド
ン、エトサクシミド、トラマイシン、リドカイン、プロ
カインアミド、ＮＡＰＡ、ゲンクマイシン、カナマイシ
ン、ジベカシン、ストレプトマイシン、ネチルマイシ
ン、アミカシン、ジゴキシン、ジギトキシン、キニジ
ン、テオフィリン、メソトレキセート、アセトアミノフ
ェン、サリチル酸、シクロスポリンなどである。
バルビタール、カルバマゼピン、バルプロ酸、プリミド
ン、エトサクシミド、トラマイシン、リドカイン、プロ
カインアミド、ＮＡＰＡ、ゲンクマイシン、カナマイシ
ン、ジベカシン、ストレプトマイシン、ネチルマイシ
ン、アミカシン、ジゴキシン、ジギトキシン、キニジ
ン、テオフィリン、メソトレキセート、アセトアミノフ
ェン、サリチル酸、シクロスポリンなどである。
【００５７】その他の抗原としては、たとえば、抗原と
して作用するＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、Ｃ3 、
Ｃ4 などの抗体などである。
して作用するＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、Ｃ3 、
Ｃ4 などの抗体などである。
【００５８】一般式（１）で表わされるトリオキサン誘
導体は、直接もしくはスペーサーを介することにより抗
体および抗原に結合することが可能である。なお「酵素
免疫測定法、編集石川栄治、河合忠、宮井潔、医学書院
（１９８７）」や「生物化学実験法２７、酵素標識法、
石川栄治著、学会出版センター（１９９１）」に例示さ
れている結合様式および標識方法を用いて製造すること
ができる。
導体は、直接もしくはスペーサーを介することにより抗
体および抗原に結合することが可能である。なお「酵素
免疫測定法、編集石川栄治、河合忠、宮井潔、医学書院
（１９８７）」や「生物化学実験法２７、酵素標識法、
石川栄治著、学会出版センター（１９９１）」に例示さ
れている結合様式および標識方法を用いて製造すること
ができる。
【００５９】前記結合様式を以下具体例を挙げて説明す
る。ただし、本発明はこれらに限定されない。
る。ただし、本発明はこれらに限定されない。
【００６０】
【化２１】
【００６１】
【化２２】
【００６２】
【化２３】
【００６３】
【化２４】
【００６４】
【化２５】
【００６５】
【化２６】
【００６６】
【化２７】
【００６７】
【化２８】
【００６８】
【化２９】
【００６９】
【化３０】
【００７０】
【化３１】
【００７１】
【化３２】
【００７２】
【化３３】
【００７３】式中、Ａはトリオキサン誘導体、Ｂは抗体
または抗原、Ｒはメチレン、エチレン、プロピレン等の
２価の有機残基を示し、ｍは１から１０までの整数を示
す。
または抗原、Ｒはメチレン、エチレン、プロピレン等の
２価の有機残基を示し、ｍは１から１０までの整数を示
す。
【００７４】本発明の第１（Ａ）の免疫測定方法は、被
分析物である抗原と特異的に結合することができるトリ
オキサン誘導体標識抗体（以下標識抗体と称す）を用い
るアッセイ法であって、抗原と過剰の標識抗体は、抗原
抗体反応を行い抗原−標識抗体複合体を形成し、また形
成に関与しない標識抗体は残存する。これらを分離した
後、抗原−標識抗体複合体または残存した標識抗体にそ
れぞれ特定の塩基を反応させて化学発光を検出する。こ
の場合、被分析物中の抗原の量の増加に伴い抗原−標識
抗体複合体の発光量は増加し、標識抗体の発光量は減少
する。
分析物である抗原と特異的に結合することができるトリ
オキサン誘導体標識抗体（以下標識抗体と称す）を用い
るアッセイ法であって、抗原と過剰の標識抗体は、抗原
抗体反応を行い抗原−標識抗体複合体を形成し、また形
成に関与しない標識抗体は残存する。これらを分離した
後、抗原−標識抗体複合体または残存した標識抗体にそ
れぞれ特定の塩基を反応させて化学発光を検出する。こ
の場合、被分析物中の抗原の量の増加に伴い抗原−標識
抗体複合体の発光量は増加し、標識抗体の発光量は減少
する。
【００７５】本発明の第２（Ｂ）の免疫測定方法は、被
分析物である抗原と特異的に結合することができる特定
の抗体及び標識抗体を用いるアッセイ法であって、まず
特定の抗体と抗原が抗原抗体反応を行い抗体−抗原複合
体を形成し、さらに抗体−抗原複合体と過剰の標識抗体
は、抗原抗体反応を行い抗体−抗原−標識抗体複合体を
形成し、また形成に関与しない標識抗体は残存する。こ
れらを分離した後、抗原−標識抗体複合体または残存し
た標識抗体にそれぞれ特定の塩基を反応させて化学発光
を検出する。この場合、抗原の量の増加に伴い抗体−抗
原−標識抗体複合体の発光量は増加し、標識抗体の発光
量は減少する。
分析物である抗原と特異的に結合することができる特定
の抗体及び標識抗体を用いるアッセイ法であって、まず
特定の抗体と抗原が抗原抗体反応を行い抗体−抗原複合
体を形成し、さらに抗体−抗原複合体と過剰の標識抗体
は、抗原抗体反応を行い抗体−抗原−標識抗体複合体を
形成し、また形成に関与しない標識抗体は残存する。こ
れらを分離した後、抗原−標識抗体複合体または残存し
た標識抗体にそれぞれ特定の塩基を反応させて化学発光
を検出する。この場合、抗原の量の増加に伴い抗体−抗
原−標識抗体複合体の発光量は増加し、標識抗体の発光
量は減少する。
【００７６】本発明の第３（Ｃ）の免疫測定方法は、被
分析物である抗原と特異的に結合することができる特定
の固相化抗体及び標識抗体を用いるアッセイ法であっ
て、まず特定の固相化抗体と抗原が抗原抗体反応を行い
固相化抗体−抗原複合体を形成し、さらに固相化抗体−
抗原複合体と過剰の標識抗体は、抗原抗体反応を行い固
相化抗体−抗原−標識抗体複合体を形成し、また形成に
関与しない標識抗体は残存する。これらを分離した後、
固相化抗体−抗原−標識抗体複合体または残存した標識
抗体にそれぞれ特定の塩基を反応させて化学発光を検出
する。この場合、抗原の量の増加に伴い固相化抗体−抗
原−標識抗体複合体の発光量は増加し、標識抗体の発光
量は減少する。
分析物である抗原と特異的に結合することができる特定
の固相化抗体及び標識抗体を用いるアッセイ法であっ
て、まず特定の固相化抗体と抗原が抗原抗体反応を行い
固相化抗体−抗原複合体を形成し、さらに固相化抗体−
抗原複合体と過剰の標識抗体は、抗原抗体反応を行い固
相化抗体−抗原−標識抗体複合体を形成し、また形成に
関与しない標識抗体は残存する。これらを分離した後、
固相化抗体−抗原−標識抗体複合体または残存した標識
抗体にそれぞれ特定の塩基を反応させて化学発光を検出
する。この場合、抗原の量の増加に伴い固相化抗体−抗
原−標識抗体複合体の発光量は増加し、標識抗体の発光
量は減少する。
【００７７】本発明の第４（Ｄ）の免疫測定方法は、被
分析物である抗原と特異的に結合することができる特定
の固相化抗体及び特定の抗体を用い、特定の抗体と特異
的に結合することのできる標識抗体を用いるアッセイ法
であって、まず特定の固相化抗体と抗原が抗原抗体反応
を行い固相化抗体−抗原複合体を形成し、さらに固相化
抗体−抗原複合体と特定の抗体が抗原抗体反応を行い固
相化抗体−抗原−抗体複合体を形成する。これに過剰の
標識抗体を反応させると、固相化抗体−抗原−抗体−標
識抗体複合体を形成し、形成に関与しない標識抗体は残
存する。これらを分離した後、固相化抗体−抗原−抗体
−標識抗体複合体または残存した標識抗体にそれぞれ特
定の塩基を反応させて化学発光を検出する。この場合、
抗原の量の増加に伴い固相化抗体−抗原−抗体−標識抗
体複合体の発光量は増加し、標識抗体の発光量は減少す
る。
分析物である抗原と特異的に結合することができる特定
の固相化抗体及び特定の抗体を用い、特定の抗体と特異
的に結合することのできる標識抗体を用いるアッセイ法
であって、まず特定の固相化抗体と抗原が抗原抗体反応
を行い固相化抗体−抗原複合体を形成し、さらに固相化
抗体−抗原複合体と特定の抗体が抗原抗体反応を行い固
相化抗体−抗原−抗体複合体を形成する。これに過剰の
標識抗体を反応させると、固相化抗体−抗原−抗体−標
識抗体複合体を形成し、形成に関与しない標識抗体は残
存する。これらを分離した後、固相化抗体−抗原−抗体
−標識抗体複合体または残存した標識抗体にそれぞれ特
定の塩基を反応させて化学発光を検出する。この場合、
抗原の量の増加に伴い固相化抗体−抗原−抗体−標識抗
体複合体の発光量は増加し、標識抗体の発光量は減少す
る。
【００７８】本発明の第５（Ｅ）の免疫測定方法は、被
分析物である抗原と特異的に結合することができる標識
抗体、被分析物である抗原を標識した固相化抗原を用い
るアッセイ法であって、まず抗原と過剰の標識抗体が抗
原抗体反応を行い抗原−標識抗体複合体を形成する。こ
れに過剰の固相化抗原を反応させると、残存する標識抗
体が抗原抗体反応を行い固相化抗原−標識抗体複合体を
形成する。これらを分離した後、固相化抗原−標識抗体
複合体または抗原−標識抗体複合体にそれぞれ特定の塩
基を反応させて化学発光を検出する。この場合、抗原の
量の増加に伴い固相化抗原−標識抗体複合体の発光量は
減少し、抗原−標識抗体複合体の発光量は増加する。
分析物である抗原と特異的に結合することができる標識
抗体、被分析物である抗原を標識した固相化抗原を用い
るアッセイ法であって、まず抗原と過剰の標識抗体が抗
原抗体反応を行い抗原−標識抗体複合体を形成する。こ
れに過剰の固相化抗原を反応させると、残存する標識抗
体が抗原抗体反応を行い固相化抗原−標識抗体複合体を
形成する。これらを分離した後、固相化抗原−標識抗体
複合体または抗原−標識抗体複合体にそれぞれ特定の塩
基を反応させて化学発光を検出する。この場合、抗原の
量の増加に伴い固相化抗原−標識抗体複合体の発光量は
減少し、抗原−標識抗体複合体の発光量は増加する。
【００７９】本発明の第６（Ｆ）の免疫測定方法は、被
分析物である抗原と特異的に結合することができる特定
の抗体、特定の抗体と特異的に結合することができる標
識抗体、被分析物である抗原を標識した固相化抗原を用
いるアッセイ法であって、まず抗原と過剰の特定の抗体
が抗原抗体反応を行い、抗原−抗体複合体を形成する。
これに過剰の固相化抗原を反応させると、残存する特定
の抗体が抗原抗体反応を行い固相化抗原−抗体複合体を
形成する。これらを分離した後、固相化抗原−抗体複合
体に過剰の標識抗体を反応させると、固相化抗原−抗体
−標識抗体複合体を形成し、形成に関与しない標識抗体
は残存する。これらを分離した後、固相化抗原−抗体−
標識抗体複合体または残存した標識抗体にそれぞれ特定
の塩基を反応させて化学発光を検出する。この場合、抗
原の量が増加するに伴い固相化抗原−抗体−標識抗体複
合体の発光量は減少し、標識抗体複合体の発光量は増加
する。
分析物である抗原と特異的に結合することができる特定
の抗体、特定の抗体と特異的に結合することができる標
識抗体、被分析物である抗原を標識した固相化抗原を用
いるアッセイ法であって、まず抗原と過剰の特定の抗体
が抗原抗体反応を行い、抗原−抗体複合体を形成する。
これに過剰の固相化抗原を反応させると、残存する特定
の抗体が抗原抗体反応を行い固相化抗原−抗体複合体を
形成する。これらを分離した後、固相化抗原−抗体複合
体に過剰の標識抗体を反応させると、固相化抗原−抗体
−標識抗体複合体を形成し、形成に関与しない標識抗体
は残存する。これらを分離した後、固相化抗原−抗体−
標識抗体複合体または残存した標識抗体にそれぞれ特定
の塩基を反応させて化学発光を検出する。この場合、抗
原の量が増加するに伴い固相化抗原−抗体−標識抗体複
合体の発光量は減少し、標識抗体複合体の発光量は増加
する。
【００８０】本発明の第７（Ｇ）の免疫測定方法は、被
分析物である抗原と特異的に結合することができる固相
化抗体、被分析物である抗原にトリオキサン誘導体を標
識した標識抗原（以下、標識抗原と称す）を用いるアッ
セイ法であって、抗原と一定量の標識抗原の混合物を固
相化抗体と反応させると、固相化抗体−標識抗原複合体
と固相化抗体−抗原複合体を形成し、形成に関与しない
標識抗原と抗原は残存する。固相（前者）と液相（後
者）を分離した後、それぞれに特定の塩基を反応させて
化学発光を検出する。この場合、抗原の量が増加するに
伴い固相の発光量は減少し、液相の発光量は増加する。
分析物である抗原と特異的に結合することができる固相
化抗体、被分析物である抗原にトリオキサン誘導体を標
識した標識抗原（以下、標識抗原と称す）を用いるアッ
セイ法であって、抗原と一定量の標識抗原の混合物を固
相化抗体と反応させると、固相化抗体−標識抗原複合体
と固相化抗体−抗原複合体を形成し、形成に関与しない
標識抗原と抗原は残存する。固相（前者）と液相（後
者）を分離した後、それぞれに特定の塩基を反応させて
化学発光を検出する。この場合、抗原の量が増加するに
伴い固相の発光量は減少し、液相の発光量は増加する。
【００８１】本発明の第１（Ａ）ないし第７（Ｇ）の免
疫測定方法において、発光量から被分析物中の抗原量を
定量するためには、予めこれらの方法において濃度が明
確化された抗原を用いて検量線を作製することが必要で
ある。
疫測定方法において、発光量から被分析物中の抗原量を
定量するためには、予めこれらの方法において濃度が明
確化された抗原を用いて検量線を作製することが必要で
ある。
【００８２】本発明の第１（Ａ）ないし第７（Ｇ）に記
載の、抗原−標識抗体複合体、抗原−抗体複合体、抗原
−固相化抗体複合体、抗原−抗体複合体、抗体−標識抗
体複合体、固相化抗原−標識抗体複合体、固相化抗原−
抗体複合体、固相化抗体−標識抗原複合体の形成におい
て、水溶液中で反応させることが望ましい。前記反応さ
せる際のｐＨは、一般にｐＨ４〜１０の範囲が好まし
く、抗原抗体反応を阻害しないｐＨで反応させるのが好
ましい。
載の、抗原−標識抗体複合体、抗原−抗体複合体、抗原
−固相化抗体複合体、抗原−抗体複合体、抗体−標識抗
体複合体、固相化抗原−標識抗体複合体、固相化抗原−
抗体複合体、固相化抗体−標識抗原複合体の形成におい
て、水溶液中で反応させることが望ましい。前記反応さ
せる際のｐＨは、一般にｐＨ４〜１０の範囲が好まし
く、抗原抗体反応を阻害しないｐＨで反応させるのが好
ましい。
【００８３】前記反応を行う際のｐＨの調製は、公知の
酸性からアルカリ性の水溶液、または緩衝液等により行
うことができる。前記水溶液または緩衝液としては、例
えば塩酸、炭酸、酢酸、リン酸、ホウ酸等の水溶液、酢
酸ナトリウム緩衝液、トリスヒドロキシアミノメタン緩
衝液、コハク酸緩衝液、２−ヒドロキシ−１，２，３−
プロパントリカルボン酸緩衝液、モノフタル酸カリウム
緩衝液、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸緩衝
液、リン酸ナトリウム緩衝液、リン酸カリウム緩衝液、
炭酸水素ナトリウム緩衝液、イミダゾール緩衝液等を挙
げることができ、使用に際しては単独もしくは混合物と
して用いることができる。また反応温度は一般に０〜５
０℃の範囲であることが望ましく、特に４〜４０℃の範
囲であることが望ましい。前記温度以外では、反応が阻
害される傾向にあるため好ましくない。
酸性からアルカリ性の水溶液、または緩衝液等により行
うことができる。前記水溶液または緩衝液としては、例
えば塩酸、炭酸、酢酸、リン酸、ホウ酸等の水溶液、酢
酸ナトリウム緩衝液、トリスヒドロキシアミノメタン緩
衝液、コハク酸緩衝液、２−ヒドロキシ−１，２，３−
プロパントリカルボン酸緩衝液、モノフタル酸カリウム
緩衝液、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸緩衝
液、リン酸ナトリウム緩衝液、リン酸カリウム緩衝液、
炭酸水素ナトリウム緩衝液、イミダゾール緩衝液等を挙
げることができ、使用に際しては単独もしくは混合物と
して用いることができる。また反応温度は一般に０〜５
０℃の範囲であることが望ましく、特に４〜４０℃の範
囲であることが望ましい。前記温度以外では、反応が阻
害される傾向にあるため好ましくない。
【００８４】本発明のアッセイ法において被分析物と標
識抗体もしくは抗原を含む複合体と複合体の形成に関与
しない標識抗体もしくは抗原は分離させることが望まし
い。分離操作を行わずに化学発光を測定した場合は、被
分析物の量に応じた発光量を得ることが困難である。前
記分離操作は、公知の方法を用いることができ、沈澱
法、ゲル濾過法、各種クロマトグラフィー、電気泳動
法、固相化抗体もしくは固相化抗原を用いる方法等を用
いることができる。
識抗体もしくは抗原を含む複合体と複合体の形成に関与
しない標識抗体もしくは抗原は分離させることが望まし
い。分離操作を行わずに化学発光を測定した場合は、被
分析物の量に応じた発光量を得ることが困難である。前
記分離操作は、公知の方法を用いることができ、沈澱
法、ゲル濾過法、各種クロマトグラフィー、電気泳動
法、固相化抗体もしくは固相化抗原を用いる方法等を用
いることができる。
【００８５】さらに本発明のアッセイ方法において用い
る化学発光を測定するためには、公知の化学発光測定装
置「光電子増倍管（フォトマルチプライヤー）」を用い
ることにより容易に測定することができる。
る化学発光を測定するためには、公知の化学発光測定装
置「光電子増倍管（フォトマルチプライヤー）」を用い
ることにより容易に測定することができる。
【００８６】さらに本発明に用いる固相化抗原もしくは
固相化抗体に使用される固相は、ポリマービーズ、ポリ
マーチューブ、ポリマーシート、ガラスビーズ、ガラス
チューブ、ガラスシート、紙等を挙げることができる
が、これらに限定されない。
固相化抗体に使用される固相は、ポリマービーズ、ポリ
マーチューブ、ポリマーシート、ガラスビーズ、ガラス
チューブ、ガラスシート、紙等を挙げることができる
が、これらに限定されない。
【００８７】本発明の免疫測定方法に用いる化学発光の
検出は、様々なアルカリ条件下で行うことができる。好
ましくはｐＨ１０以上の条件にすることが好ましい。ｐ
Ｈ１０以下ではトリオキサン誘導体の分解が進行し難
く、発光を観測するのが難しい。さらに化学発光検出の
際に用いる溶媒は、水、緩衝液のみならず各種有機溶媒
を用いることが可能である。前記有機溶媒としては極性
溶媒が好ましく、例えばメチルスルホキシド、メチルホ
ルムアミド、ＨＭＰＡ、ジオキサン、アセトニトリル、
メチルアルコール、エチルアルコール、ｔ−ブチルアル
コールまたはニトロメタンなどを用いることができる。
また本発明の検出系に用いる塩基としては、例えばカリ
ウム−ｔ−ブトキシド、水酸化ナトリウム、水酸化カリ
ウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリ
ウム、テトラブチルアンモニウムヒドロキシド等を用い
ることができ、さらに前記塩基を含む水溶液もしくは有
機溶媒を用いることができる。
検出は、様々なアルカリ条件下で行うことができる。好
ましくはｐＨ１０以上の条件にすることが好ましい。ｐ
Ｈ１０以下ではトリオキサン誘導体の分解が進行し難
く、発光を観測するのが難しい。さらに化学発光検出の
際に用いる溶媒は、水、緩衝液のみならず各種有機溶媒
を用いることが可能である。前記有機溶媒としては極性
溶媒が好ましく、例えばメチルスルホキシド、メチルホ
ルムアミド、ＨＭＰＡ、ジオキサン、アセトニトリル、
メチルアルコール、エチルアルコール、ｔ−ブチルアル
コールまたはニトロメタンなどを用いることができる。
また本発明の検出系に用いる塩基としては、例えばカリ
ウム−ｔ−ブトキシド、水酸化ナトリウム、水酸化カリ
ウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリ
ウム、テトラブチルアンモニウムヒドロキシド等を用い
ることができ、さらに前記塩基を含む水溶液もしくは有
機溶媒を用いることができる。
【００８８】
【発明の効果】本発明のトリオキサン誘導体標識抗体お
よび標識抗原は、抗原抗体反応に基づく免疫測定方法に
用いることが可能である。さらに、本発明の免疫測定方
法により被分析物の検出と定量を高感度に再現性良く行
うことができる。
よび標識抗原は、抗原抗体反応に基づく免疫測定方法に
用いることが可能である。さらに、本発明の免疫測定方
法により被分析物の検出と定量を高感度に再現性良く行
うことができる。
【００８９】
【実施例】以下本発明を実施例及び比較例に基づいて具
体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるもので
はない。
体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるもので
はない。
【００９０】実施例１ 構造式（２）で表わされる９−（６，６−ジメチル−３
−イソプロピル−２，４，５−トリオキサシクロヘキシ
ル）アミノ−１０−（４−カルボキシピペリジノカルボ
ニル）アントラセン標識抗ＴＳＨ−ＩｇＧの調製
−イソプロピル−２，４，５−トリオキサシクロヘキシ
ル）アミノ−１０−（４−カルボキシピペリジノカルボ
ニル）アントラセン標識抗ＴＳＨ−ＩｇＧの調製
【００９１】
【化３４】
【００９２】９−（６，６−ジメチル−３−イソプロピ
ル−２，４，５−トリオキサシクロヘキシル）アミノ−
１０−（４−カルボキシピペリジノカルボニル）アント
ラセンの５１ｍｇ（０.1ｍｍｏｌ) をジメチルホルムア
ミド１ｍｌに溶解させた後、ジシクロヘキシルカルボジ
イミド３２ｍｇ（０.1５ｍｍｏｌ）とＮ−ヒドロキシス
クシンイミド１８ｍｇ（０.1５ｍｍｏｌ）を加え、−２
０℃にて２時間、さらに室温にて一晩反応させた。次に
この反応溶液を、予め抗ＴＳＨ−ＩｇＧの６ｍｇ（３８
μｍｏｌ）を含む１０ｍＭリン酸バッファー (ｐＨ７.
0）中に添加し、室温で３０分間、４℃で一晩反応させ
た。反応終了後、ファルマシア社製セファデックスＧ−
２５カラム〔溶離溶媒１０ｍＭリン酸バッファー (ｐＨ
７.0）〕を用いてＩｇＧ分画を取り出した。
ル−２，４，５−トリオキサシクロヘキシル）アミノ−
１０−（４−カルボキシピペリジノカルボニル）アント
ラセンの５１ｍｇ（０.1ｍｍｏｌ) をジメチルホルムア
ミド１ｍｌに溶解させた後、ジシクロヘキシルカルボジ
イミド３２ｍｇ（０.1５ｍｍｏｌ）とＮ−ヒドロキシス
クシンイミド１８ｍｇ（０.1５ｍｍｏｌ）を加え、−２
０℃にて２時間、さらに室温にて一晩反応させた。次に
この反応溶液を、予め抗ＴＳＨ−ＩｇＧの６ｍｇ（３８
μｍｏｌ）を含む１０ｍＭリン酸バッファー (ｐＨ７.
0）中に添加し、室温で３０分間、４℃で一晩反応させ
た。反応終了後、ファルマシア社製セファデックスＧ−
２５カラム〔溶離溶媒１０ｍＭリン酸バッファー (ｐＨ
７.0）〕を用いてＩｇＧ分画を取り出した。
【００９３】実施例２ 抗ＴＳＨ−ＩｇＧ固相化試験管の調製
【００９４】ポリスチレンチューブ（１３×７２ｍｍ）
に、抗ＴＳＨ−ＩｇＧの６０μｇを含む１０ｍＭリン酸
バッファー (ｐＨ７.0）２００μｌを加え、４℃にて一
昼夜放置させた。内容物を除去した後、０.0５％（ｗ／
ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含む０.1５Ｍ食塩水にて洗浄し、
ウサギＩｇＧの６０μｇを含む１０ｍＭリン酸バッファ
ー (ｐＨ７.0）３００μｌを加え、４℃にて一昼夜放置
させた。内容物を除去した後、０.1ｍｏｌ／ｌのＮａＣ
ｌ、１ｇ／ｌウシアルブミン、１ｇ／ｌナトリウムアジ
ドを含む１０ｍＭリン酸バッファー (ｐＨ７.0）にて洗
浄した後、４℃にて保存した。
に、抗ＴＳＨ−ＩｇＧの６０μｇを含む１０ｍＭリン酸
バッファー (ｐＨ７.0）２００μｌを加え、４℃にて一
昼夜放置させた。内容物を除去した後、０.0５％（ｗ／
ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含む０.1５Ｍ食塩水にて洗浄し、
ウサギＩｇＧの６０μｇを含む１０ｍＭリン酸バッファ
ー (ｐＨ７.0）３００μｌを加え、４℃にて一昼夜放置
させた。内容物を除去した後、０.1ｍｏｌ／ｌのＮａＣ
ｌ、１ｇ／ｌウシアルブミン、１ｇ／ｌナトリウムアジ
ドを含む１０ｍＭリン酸バッファー (ｐＨ７.0）にて洗
浄した後、４℃にて保存した。
【００９５】抗ＴＳＨ−ＩｇＧ固相化試験管に、濃度が
明確化されたＴＳＨの標準血清溶液（予めＴＳＨを除い
た血清に特定量のＴＳＨを加えて調製したもの）２００
μｌを加えて、室温にて２時間軽く振盪させた。次に
０.0５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含む１０ｍＭリン
酸バッファー (ｐＨ７.0）２ｍｌで３回洗浄し、実施例
１にて調製したトリオキサン誘導体標識抗ＴＳＨ−Ｉｇ
Ｇのリン酸バッファー溶液 (ｐＨ７.0）２００μｌを加
え、室温にて２時間反応させた。０.0５％（ｗ／ｖ）Ｔ
ｗｅｅｎ２０を含む１０ｍＭリン酸バッファー (ｐＨ
７.0）２ｍｌで３回洗浄した後、固相化試験管にジメチ
ルスルホキシド ２００μｌを加え、続いて１０ｍＭ
カリウム−ｔ−ブトキシドを含むジメチルスルホキシド
溶液 ２００μｌを加え化学発光させた。この発光を東
北電子産業社製 ＣＬＤ−１００を用いて測定した。
明確化されたＴＳＨの標準血清溶液（予めＴＳＨを除い
た血清に特定量のＴＳＨを加えて調製したもの）２００
μｌを加えて、室温にて２時間軽く振盪させた。次に
０.0５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含む１０ｍＭリン
酸バッファー (ｐＨ７.0）２ｍｌで３回洗浄し、実施例
１にて調製したトリオキサン誘導体標識抗ＴＳＨ−Ｉｇ
Ｇのリン酸バッファー溶液 (ｐＨ７.0）２００μｌを加
え、室温にて２時間反応させた。０.0５％（ｗ／ｖ）Ｔ
ｗｅｅｎ２０を含む１０ｍＭリン酸バッファー (ｐＨ
７.0）２ｍｌで３回洗浄した後、固相化試験管にジメチ
ルスルホキシド ２００μｌを加え、続いて１０ｍＭ
カリウム−ｔ−ブトキシドを含むジメチルスルホキシド
溶液 ２００μｌを加え化学発光させた。この発光を東
北電子産業社製 ＣＬＤ−１００を用いて測定した。
【００９６】各種ＴＳＨの量に対する化学発光量を図１
に示す。
に示す。
【００９７】実施例３−１ 血清中に含まれるＴＳＨの定量
【００９８】ＴＳＨ濃度未定の血清を４サンプル用意し
た。ＴＳＨの標準血清溶液の代わりにＴＳＨ濃度未定の
血清を用いた以外は実施例２と同様に反応させ、それぞ
れのサンプルについて２回測定を行った。得られた化学
発光の結果と実施例２において作製した検量線から求め
たＴＳＨの量を表１に示す。
た。ＴＳＨの標準血清溶液の代わりにＴＳＨ濃度未定の
血清を用いた以外は実施例２と同様に反応させ、それぞ
れのサンプルについて２回測定を行った。得られた化学
発光の結果と実施例２において作製した検量線から求め
たＴＳＨの量を表１に示す。
【００９９】
【表１】
【０１００】２回測定の値より同時再現性が非常に高い
ことが明らかである。
ことが明らかである。
【０１０１】実施例３−２ 血清中に含まれるＴＳＨの定量
【０１０２】実施例３−１と同様の操作を実施例３−１
の測定から１週間後に改めて行った。その結果を表１に
併せて示す。
の測定から１週間後に改めて行った。その結果を表１に
併せて示す。
【０１０３】実施例３−１で得られた結果と非常によく
一致しており、日差再現性に高いことが明らかである。
一致しており、日差再現性に高いことが明らかである。
【０１０４】比較例１ アクリジニウム−Ｉ〔４−（２−スクシンイミジロキシ
カルボニルエチル）フェニル−１０−メチルアクリジニ
ウム−９−カルボキシレート フルオロスルホネート〕
（株式会社同仁化学研究所製）５８ｍｇ（０.1ｍｍｏ
ｌ) のジメチルホルムアミド１ｍｌ溶液を、予め抗ＴＳ
Ｈ−ＩｇＧ ６ｍｇ（３８μｍｏｌ）を含む１０ｍＭリ
ン酸バッファー (ｐＨ７.0）中に添加し、室温で３０分
間、更に４℃で一昼夜反応させた。反応終了後、ファル
マシア社製セファデックスＧ−２５カラム（溶離溶媒１
０ｍＭリン酸バッファー (ｐＨ７.0））を用いてＩｇＧ
分画を取り出した。
カルボニルエチル）フェニル−１０−メチルアクリジニ
ウム−９−カルボキシレート フルオロスルホネート〕
（株式会社同仁化学研究所製）５８ｍｇ（０.1ｍｍｏ
ｌ) のジメチルホルムアミド１ｍｌ溶液を、予め抗ＴＳ
Ｈ−ＩｇＧ ６ｍｇ（３８μｍｏｌ）を含む１０ｍＭリ
ン酸バッファー (ｐＨ７.0）中に添加し、室温で３０分
間、更に４℃で一昼夜反応させた。反応終了後、ファル
マシア社製セファデックスＧ−２５カラム（溶離溶媒１
０ｍＭリン酸バッファー (ｐＨ７.0））を用いてＩｇＧ
分画を取り出した。
【０１０５】比較例２ 検量線の作製
【０１０６】トリオキサン誘導体標識抗ＴＳＨ−ＩｇＧ
の１０ｍＭリン酸バッファー溶液の代わりに、アクリジ
ニウム−Ｉ標識抗ＴＳＨ−ＩｇＧの１０ｍＭリン酸バッ
ファーを用いた以外は、実施例３−１と同様に反応を行
い検量線を作製した。その結果を図１に併せて示す。
の１０ｍＭリン酸バッファー溶液の代わりに、アクリジ
ニウム−Ｉ標識抗ＴＳＨ−ＩｇＧの１０ｍＭリン酸バッ
ファーを用いた以外は、実施例３−１と同様に反応を行
い検量線を作製した。その結果を図１に併せて示す。
【０１０７】比較例３ 血清中に含まれているＴＳＨの定量
【０１０８】実施例３−１に用いた血清を比較例２と同
様に反応させ、それぞれのサンプルについて２回測定を
行い、比較例２において作製した検量線から求めたＴＳ
Ｈの量を表２に示す。
様に反応させ、それぞれのサンプルについて２回測定を
行い、比較例２において作製した検量線から求めたＴＳ
Ｈの量を表２に示す。
【０１０９】
【表２】
【０１１０】同時再現性は比較的高い値を示している。
【０１１１】比較例４ 血清中に含まれているＴＳＨの定量
【０１１２】比較例３と同様の操作を比較例３を実施し
てから１週間後に改めて行った。その結果を表２に併せ
て示す。
てから１週間後に改めて行った。その結果を表２に併せ
て示す。
【０１１３】前回測定値よりも下回る結果が得られてお
り、日差再現性に乏しいことがわかる。
り、日差再現性に乏しいことがわかる。
【図１】ＴＳＨ検量線を示すグラフ図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ０７Ｄ 405/12 ２１１ 7602−4Ｃ
Claims (9)
- 【請求項１】 下記一般式（１） 【化１】 （式中Ｒ1 及びＲ2 は同一または異って、それぞれ炭素
原子１乃至３個の置換又は非置換の脂肪族炭化水素基を
示し、Ｒ3 は２価の有機残基を示し、Ｒ4 は水素原子、
炭素原子１乃至３個の置換又は非置換の脂肪族炭化水素
基を示す。さらにＲ3 とＲ4 とが環構造を形成してもよ
い。Ｘはカルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシル基ま
たはメルカプト基を示す）で表わされるトリオキサン誘
導体と、特定の抗体または抗原とが共有結合しているこ
とを特徴とする標識抗体または標識抗原。 - 【請求項２】 請求項１に記載の標識抗体または標識抗
原と、試料中の測定対象物との免疫複合体を形成させ、
しかる後、化学発光法により試料中の測定対象物を定量
することを特徴とする免疫分析方法。 - 【請求項３】 特定の抗原を定量する免疫測定方法であ
って、請求項１に記載の標識抗体を用いることを特徴と
する 抗原−標識抗体複合体、もしくは 抗原−標識抗体複合体に含まれていない標識抗体 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。 - 【請求項４】 特定の抗体を用いて特定の抗原を定量す
る免疫測定方法であって、請求項１に記載の標識抗体を
用いることを特徴とする 抗体−抗原−標識抗体複合体、もしくは 抗体−抗原−標識抗体複合体に含まれていない標識
抗体 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。 - 【請求項５】 特定の固相化抗体を用いて特定の抗原を
定量する免疫測定方法であって、請求項１に記載の標識
抗体を用いることを特徴とする 固相化抗体−抗原−標識抗体複合体、もしくは 固相化抗体−抗原−標識抗体複合体に含まれていな
い標識抗体 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。 - 【請求項６】 特定の固相化抗体と特定の抗体を用いて
特定の抗原を定量する免疫測定方法であって、請求項１
に記載の標識抗体を用いることを特徴とする 固相化抗体−抗原−抗体−標識抗体複合体、もしく
は 固相化抗体−抗原−抗体−標識抗体複合体に含まれ
ていない標識抗体 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。 - 【請求項７】 特定の固相化抗原を用いて特定の抗原を
定量する免疫測定方法であって、請求項１に記載の標識
抗体を用いることを特徴とする 固相化抗原−標識抗体複合体、もしくは 固相化抗原−標識抗体複合体に含まれていない抗原
−標識抗体複合体 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。 - 【請求項８】 特定の固相化抗原と特定の抗体を用いて
特定の抗原を定量する免疫測定方法であって、請求項１
に記載の標識抗体を用いることを特徴とする 固相化抗原−抗体−標識抗体複合体、もしくは 固相化抗原−抗体−標識抗体複合体に含まれていな
い標識抗体 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。 - 【請求項９】 特定の固相化抗体を用いて特定の抗原を
定量する免疫測定方法であって、請求項１記載の標識抗
原を用いることを特徴とする 固相化抗体−標識抗原複合体、もしくは 固相化抗体−標識抗原複合体に含まれていない標識
抗原 の化学発光を測定することにより特定の抗原を定量する
免疫測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6906793A JPH06256217A (ja) | 1993-03-05 | 1993-03-05 | トリオキサン誘導体標識抗体、抗原および免疫測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6906793A JPH06256217A (ja) | 1993-03-05 | 1993-03-05 | トリオキサン誘導体標識抗体、抗原および免疫測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06256217A true JPH06256217A (ja) | 1994-09-13 |
Family
ID=13391865
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6906793A Pending JPH06256217A (ja) | 1993-03-05 | 1993-03-05 | トリオキサン誘導体標識抗体、抗原および免疫測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06256217A (ja) |
-
1993
- 1993-03-05 JP JP6906793A patent/JPH06256217A/ja active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4923819A (en) | Time-resolved fluorescence immunoassay | |
| JP2952013B2 (ja) | 不均一系イムノアッセイ | |
| JP4163869B2 (ja) | 検出方法 | |
| US4104029A (en) | Procedure for the assay of pharmacologically immunologically and biochemically active compounds in biological fluids | |
| US6251581B1 (en) | Assay method utilizing induced luminescence | |
| JPS6145778B2 (ja) | ||
| JPH0210382B2 (ja) | ||
| JPH11211727A (ja) | ポリエチレングリコール誘導化生体分子及び不均質検出法におけるその使用 | |
| US4231750A (en) | Methods for performing chemical assays using fluorescence and photon counting | |
| EP0170415B1 (en) | Phenanthridinium ester as a labelling compound in luminometric immunoassay | |
| JP3413415B2 (ja) | イムノアッセイ試薬およびそれを用いたイムノアッセイ法 | |
| US4637985A (en) | Assay processes and materials therefor | |
| AU2002311701B2 (en) | Kinetic assay | |
| AU2002311701A1 (en) | Kinetic assay | |
| JPH06501559A (ja) | 増幅不均一化学ルミネッセンスイムノアッセイ | |
| JPH11248706A (ja) | 非特異的吸着防止剤 | |
| JPS61250558A (ja) | 免疫分析方法 | |
| JPH08294397A (ja) | 免疫学的活性物質の測定方法 | |
| JPH06256217A (ja) | トリオキサン誘導体標識抗体、抗原および免疫測定方法 | |
| CA1301646C (en) | Method for diagnostic immunoassay by solid phase separation | |
| JPH07134126A (ja) | トリオキサン誘導体標識抗体・抗原および免疫測定方法 | |
| JPH06265547A (ja) | トリオキサン誘導体標識抗体、抗原および免疫測定方法 | |
| JPH0712814A (ja) | トリオキサン誘導体標識抗体・抗原および免疫測定方法 | |
| Messeri et al. | Luminescent immunoassay using isoluminol derivatives | |
| JPH1169996A (ja) | 発色方法、該方法を用いる酵素免疫測定法及びイムノクロマト法 |