JPH06253890A - （ｒ）−マンデル酸の製造法 - Google Patents
（ｒ）−マンデル酸の製造法Info
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- JPH06253890A JPH06253890A JP5079997A JP7999793A JPH06253890A JP H06253890 A JPH06253890 A JP H06253890A JP 5079997 A JP5079997 A JP 5079997A JP 7999793 A JP7999793 A JP 7999793A JP H06253890 A JPH06253890 A JP H06253890A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 （Ｒ）−マンデル酸と（Ｓ）−マンデル酸の
混合物に（Ｓ）−マンデル酸を不斉的に代謝する微生物
またはその処理物を作用させて残存する（Ｒ）−マンデ
ル酸と、（Ｓ）−マンデル酸より生成したベンゾイル蟻
酸をふくむ反応液に酵母を加えてさらに反応させてベン
ゾイル蟻酸を（Ｒ）−マンデル酸に還元して反応液中の
（Ｒ）−マンデル酸の量を増加させることにより、原料
マンデル酸中の（Ｒ）−マンデル酸量より多くの（Ｒ）
−マンデル酸をえる。 【効果】 光学分割剤あるいは光学活性医薬農薬の合成
中間体として有用な（Ｒ）−マンデル酸を効率的に製造
することができる。
混合物に（Ｓ）−マンデル酸を不斉的に代謝する微生物
またはその処理物を作用させて残存する（Ｒ）−マンデ
ル酸と、（Ｓ）−マンデル酸より生成したベンゾイル蟻
酸をふくむ反応液に酵母を加えてさらに反応させてベン
ゾイル蟻酸を（Ｒ）−マンデル酸に還元して反応液中の
（Ｒ）−マンデル酸の量を増加させることにより、原料
マンデル酸中の（Ｒ）−マンデル酸量より多くの（Ｒ）
−マンデル酸をえる。 【効果】 光学分割剤あるいは光学活性医薬農薬の合成
中間体として有用な（Ｒ）−マンデル酸を効率的に製造
することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は酸性光学分割剤、セファ
ロスポリン系抗生物質の側鎖修飾剤などとして需要の多
い（Ｒ）−マンデル酸の製造法に関する。
ロスポリン系抗生物質の側鎖修飾剤などとして需要の多
い（Ｒ）−マンデル酸の製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術と問題点】（Ｒ）−マンデル酸の製造法と
しては、アミグダリンを加水分解してえる方法が古くか
ら知られている。またラセミ体マンデル酸と光学活性ア
ミン類とのジアステレオマー塩形成法によりえる光学分
割法が知られており、工業的には光学分割剤としてα−
メチルベンジルアミンによる方法が採用されている
（Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，５５巻、４１１
頁、１９３３年）。
しては、アミグダリンを加水分解してえる方法が古くか
ら知られている。またラセミ体マンデル酸と光学活性ア
ミン類とのジアステレオマー塩形成法によりえる光学分
割法が知られており、工業的には光学分割剤としてα−
メチルベンジルアミンによる方法が採用されている
（Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，５５巻、４１１
頁、１９３３年）。
【０００３】近年、微生物あるいは酵素を用いる方法と
して、ラセミ体マンデル酸エステルの不斉加水分解
（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５４巻、２４５３頁、１９
８９年など）や不斉エステル化（Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅ
ｍ．Ｓｏｃ．，１１３巻、９３６０頁、１９９１年）、
ベンゾイルギ酸の不斉還元（Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３１巻、２１５頁、１
９８９年、特開昭５７−１９８０９６号など）、ベンズ
アルデヒドのシアンヒドリン化と加水分解の組合せ（特
開昭６３−２１９３８８号など）、マンデロニトリルの
不斉加水分解（特開平３−２７７２９２号、特開平２−
８４１９８号、欧州特開０４４６４８Ａ２号）、マンデ
ル酸アミドの不斉加水分解（特開昭６２−５５０９８
号、特開昭６１−８８８９４号）、フェニルグリオキザ
ールにグリオキサラーゼＩ，ＩＩを作用させる方法
（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，４６巻、４６８２頁、１９
８１年）が知られている。しかし、これらの方法は操作
が繁雑であったり、基質が高価であったり、基質の溶解
度が低かったり、基質の使用菌に対する毒性のため高濃
度の生産に不適であったり、またえられる（Ｒ）−マン
デル酸の光学純度が低いなど、工業的製法としてはさら
に改良が望まれる。
して、ラセミ体マンデル酸エステルの不斉加水分解
（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５４巻、２４５３頁、１９
８９年など）や不斉エステル化（Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅ
ｍ．Ｓｏｃ．，１１３巻、９３６０頁、１９９１年）、
ベンゾイルギ酸の不斉還元（Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３１巻、２１５頁、１
９８９年、特開昭５７−１９８０９６号など）、ベンズ
アルデヒドのシアンヒドリン化と加水分解の組合せ（特
開昭６３−２１９３８８号など）、マンデロニトリルの
不斉加水分解（特開平３−２７７２９２号、特開平２−
８４１９８号、欧州特開０４４６４８Ａ２号）、マンデ
ル酸アミドの不斉加水分解（特開昭６２−５５０９８
号、特開昭６１−８８８９４号）、フェニルグリオキザ
ールにグリオキサラーゼＩ，ＩＩを作用させる方法
（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，４６巻、４６８２頁、１９
８１年）が知られている。しかし、これらの方法は操作
が繁雑であったり、基質が高価であったり、基質の溶解
度が低かったり、基質の使用菌に対する毒性のため高濃
度の生産に不適であったり、またえられる（Ｒ）−マン
デル酸の光学純度が低いなど、工業的製法としてはさら
に改良が望まれる。
【０００４】本発明者らは、上に述べたような（Ｒ）−
マンデル酸製造技術の問題点を克服すべく種々研究した
結果、微生物またはその処理物（酵素を含む）を用いる
（Ｒ，Ｓ）−マンデル酸の不斉代謝による方法が、
（Ｒ，Ｓ）−マンデル酸自体は安価に市場に供給されて
いることから有利であるとの考に立って、広く目的に適
した微生物を探究し、アクロモバクター，アルカリゲネ
ス、フラボバクテリウム、ミクロコッカス，パラコッカ
ス、およびプロテウスの各属あるいはシュードモナス・
フルバ，シュードモナス・ダクネ、シュードモナス・ク
ルシビエの各菌種に属する微生物が（Ｓ）−マンデル酸
にエナンチオマー特異的に作用することをみいだし、先
に出願した（特願平４−１３２９９）。その後、ラセミ
型マンデル酸の不斉資化を利用する（Ｒ）−マンデル酸
の製法の出願が公開され、ギベレラ、ブレビバクテリウ
ム、ロドスポリジウム、ロドトルラの各属の微生物が
（Ｓ）−マンデル酸を不斉的に代謝して（Ｒ）−マンデ
ル酸を残留することが示されている。
マンデル酸製造技術の問題点を克服すべく種々研究した
結果、微生物またはその処理物（酵素を含む）を用いる
（Ｒ，Ｓ）−マンデル酸の不斉代謝による方法が、
（Ｒ，Ｓ）−マンデル酸自体は安価に市場に供給されて
いることから有利であるとの考に立って、広く目的に適
した微生物を探究し、アクロモバクター，アルカリゲネ
ス、フラボバクテリウム、ミクロコッカス，パラコッカ
ス、およびプロテウスの各属あるいはシュードモナス・
フルバ，シュードモナス・ダクネ、シュードモナス・ク
ルシビエの各菌種に属する微生物が（Ｓ）−マンデル酸
にエナンチオマー特異的に作用することをみいだし、先
に出願した（特願平４−１３２９９）。その後、ラセミ
型マンデル酸の不斉資化を利用する（Ｒ）−マンデル酸
の製法の出願が公開され、ギベレラ、ブレビバクテリウ
ム、ロドスポリジウム、ロドトルラの各属の微生物が
（Ｓ）−マンデル酸を不斉的に代謝して（Ｒ）−マンデ
ル酸を残留することが示されている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】上記したラセミ型マンデ
ル酸の不斉資化を利用する方法では、えられる（Ｒ）−
マンデル酸の光学純度は極めて高いが、原理的に用いた
ラセミ型マンデル酸の５０％以上を（Ｒ）−マンデル酸
としてえられない欠点がある。本発明者らは、（Ｓ）−
マンデル酸の酸化によりベンゾイル蟻酸が生成して、し
かもそれがかなりの量で反応液中に残存することを見出
し、これを酵母を用いて還元すると生成したベンゾイル
蟻酸から不斉的に（Ｒ）−マンデル酸が生成して、もと
のラセミ型マンデル酸に対して５０％以上の（Ｒ）−マ
ンデル酸を反応液中にえることができることをみいだし
た。本方法により、ラセミ型マンデル酸から５０％以上
の収量で効率的に（Ｒ）−マンデル酸を製造することが
可能となった。すなわち、本発明は従来知られているベ
ンゾイル蟻酸の不斉還元の方法で工業的実施に難点のあ
ったベンゾイル蟻酸の供給の問題と高価な補酵素の供給
の問題を解決し、また乳酸菌菌体を用いる還元が窒素気
流中で行われることのコストの問題を、安価、簡便に入
取しうることにより、実際的に解決したものといえる。
ル酸の不斉資化を利用する方法では、えられる（Ｒ）−
マンデル酸の光学純度は極めて高いが、原理的に用いた
ラセミ型マンデル酸の５０％以上を（Ｒ）−マンデル酸
としてえられない欠点がある。本発明者らは、（Ｓ）−
マンデル酸の酸化によりベンゾイル蟻酸が生成して、し
かもそれがかなりの量で反応液中に残存することを見出
し、これを酵母を用いて還元すると生成したベンゾイル
蟻酸から不斉的に（Ｒ）−マンデル酸が生成して、もと
のラセミ型マンデル酸に対して５０％以上の（Ｒ）−マ
ンデル酸を反応液中にえることができることをみいだし
た。本方法により、ラセミ型マンデル酸から５０％以上
の収量で効率的に（Ｒ）−マンデル酸を製造することが
可能となった。すなわち、本発明は従来知られているベ
ンゾイル蟻酸の不斉還元の方法で工業的実施に難点のあ
ったベンゾイル蟻酸の供給の問題と高価な補酵素の供給
の問題を解決し、また乳酸菌菌体を用いる還元が窒素気
流中で行われることのコストの問題を、安価、簡便に入
取しうることにより、実際的に解決したものといえる。
【０００６】本発明において最初の（Ｒ）−体と（Ｓ）
−体の混合物であるマンデル酸に作用させるのに使用す
る微生物は、（Ｓ）−マンデル酸を不斉的に代謝する微
生物、例えば、アルカリゲネス・フェカリス（Ａｌｃａ
ｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）ＡＴＣＣ ８７５
０、フラボバクテリウム属菌種（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ ｓｐ．）ＡＴＣＣ １４６５０、プロテウス
・ミタジリ（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｔａｊｉｒｉ）ＡＴ
ＣＣ ２１１３６があげられる。その他、不斉的に
（Ｓ）−マンデル酸を代謝することが知られている微生
物、すなわちシュードモナス属、アクロモバクター、ミ
クロコッカス・ブレビバクテリウム、ロドスポリジウ
ム、ロドトルラ、ギベレラの各属の菌株も使用できる。
特に好適な菌株は、（Ｓ）−マンデル酸の代謝がベンゾ
イル蟻酸でとどまり、ベンゾイル蟻酸の生成量が多いも
のである。
−体の混合物であるマンデル酸に作用させるのに使用す
る微生物は、（Ｓ）−マンデル酸を不斉的に代謝する微
生物、例えば、アルカリゲネス・フェカリス（Ａｌｃａ
ｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）ＡＴＣＣ ８７５
０、フラボバクテリウム属菌種（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ ｓｐ．）ＡＴＣＣ １４６５０、プロテウス
・ミタジリ（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｔａｊｉｒｉ）ＡＴ
ＣＣ ２１１３６があげられる。その他、不斉的に
（Ｓ）−マンデル酸を代謝することが知られている微生
物、すなわちシュードモナス属、アクロモバクター、ミ
クロコッカス・ブレビバクテリウム、ロドスポリジウ
ム、ロドトルラ、ギベレラの各属の菌株も使用できる。
特に好適な菌株は、（Ｓ）−マンデル酸の代謝がベンゾ
イル蟻酸でとどまり、ベンゾイル蟻酸の生成量が多いも
のである。
【０００７】ベンゾイル蟻酸を還元して（Ｒ）−マンデ
ル酸を生成する酵素、微生物は既に種々知られている
が、本発明でベンゾイル蟻酸の還元に用いられるのは酵
母である。酵母としてはベンゾイル蟻酸を不斉的に還元
して（Ｒ）−マンデル酸を生成する菌体であれば属の如
何を問わず使用できる。例えば、サッカロミセス・セレ
ビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｏｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉ
ｓｉａｅ）ＡＴＣＣ １８８４キャンジダ・ルゴーサ
（Ｃａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ）ＩＦＯ ５９１、ロ
ドトルラ・グルチニス（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｇｌ
ｕｔｉｎｉｓ）ＡＴＣＣ ２０１４７があげられる。
ル酸を生成する酵素、微生物は既に種々知られている
が、本発明でベンゾイル蟻酸の還元に用いられるのは酵
母である。酵母としてはベンゾイル蟻酸を不斉的に還元
して（Ｒ）−マンデル酸を生成する菌体であれば属の如
何を問わず使用できる。例えば、サッカロミセス・セレ
ビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｏｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉ
ｓｉａｅ）ＡＴＣＣ １８８４キャンジダ・ルゴーサ
（Ｃａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ）ＩＦＯ ５９１、ロ
ドトルラ・グルチニス（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｇｌ
ｕｔｉｎｉｓ）ＡＴＣＣ ２０１４７があげられる。
【０００８】これらの微生物は、ＡＴＣＣ（アメリ
カ）、ＩＦＯ（大阪、発酵研究所）などの菌株保存機関
から入取できる。酵母は市販のパン酵母なども使用でき
るが、酵母以外のベンゾイル蟻酸から（Ｒ）−マンデル
酸を生成する微生物では反応の方式、副反応による
（Ｒ）−マンデル酸の収率の低下、工程の繁雑なことな
どの欠点がある。
カ）、ＩＦＯ（大阪、発酵研究所）などの菌株保存機関
から入取できる。酵母は市販のパン酵母なども使用でき
るが、酵母以外のベンゾイル蟻酸から（Ｒ）−マンデル
酸を生成する微生物では反応の方式、副反応による
（Ｒ）−マンデル酸の収率の低下、工程の繁雑なことな
どの欠点がある。
【０００９】上記（Ｓ）−マンデル酸代謝微生物を培養
するための培地組成としては、通常これらの微生物が生
育しうるものであれば何れも使用できる。例えば炭素源
としてグルコース、フラクトース、シュクロースなどの
糖類、酢酸、クエン酸などの有機酸類、エタノール、グ
リセロールなどのアルコール類など、窒素源としてはペ
プトン、肉エキス，酵母エキス，蛋白質加水分解物、有
機酸アンモニウム，アミノ酸，硫酸アンモニウム、塩化
アンモニウムなどが使用でき、この他に、無機塩、微量
金属塩、ビタミンなどが必要に応じて適宜使用される。
高い代謝活性を誘導させるために、マンデル酸，ベンゾ
イルギ酸，フェノキシ酢酸，チオフェノキシ酢酸などを
培地に添加することも有用である。
するための培地組成としては、通常これらの微生物が生
育しうるものであれば何れも使用できる。例えば炭素源
としてグルコース、フラクトース、シュクロースなどの
糖類、酢酸、クエン酸などの有機酸類、エタノール、グ
リセロールなどのアルコール類など、窒素源としてはペ
プトン、肉エキス，酵母エキス，蛋白質加水分解物、有
機酸アンモニウム，アミノ酸，硫酸アンモニウム、塩化
アンモニウムなどが使用でき、この他に、無機塩、微量
金属塩、ビタミンなどが必要に応じて適宜使用される。
高い代謝活性を誘導させるために、マンデル酸，ベンゾ
イルギ酸，フェノキシ酢酸，チオフェノキシ酢酸などを
培地に添加することも有用である。
【００１０】上記微生物の培養は常法によればよく、例
えばｐＨ４〜１０、温度２０〜４０℃の範囲で好気的に
１〜１０日間培養する。（Ｒ，Ｓ）−マンデル酸に対す
る反応法としては、上記のように培養してえた微生物の
培養液あるいは遠心分離などによりえた菌体のけん濁液
に基質を添加する方法、菌体処理物（例えば菌体破砕
物、粗酵素、精製酵素などの菌体抽出物）あるいは、常
法により固定化した菌体または菌体処理物などに基質を
接触させる方法、微生物の培養時に基質を培地に添加し
て培養と同時に反応を行う方法などがある。
えばｐＨ４〜１０、温度２０〜４０℃の範囲で好気的に
１〜１０日間培養する。（Ｒ，Ｓ）−マンデル酸に対す
る反応法としては、上記のように培養してえた微生物の
培養液あるいは遠心分離などによりえた菌体のけん濁液
に基質を添加する方法、菌体処理物（例えば菌体破砕
物、粗酵素、精製酵素などの菌体抽出物）あるいは、常
法により固定化した菌体または菌体処理物などに基質を
接触させる方法、微生物の培養時に基質を培地に添加し
て培養と同時に反応を行う方法などがある。
【００１１】（Ｓ）−マンデル酸を代謝する反応液中の
基質濃度は通常０．１〜１０％（ｗ／ｖ）が好ましい。
微生物の生育と同時に反応させる場合、はじめから高濃
度に添加して反応させると菌の生育や反応が停止した
り、きわめて遅くなるので、基質の代謝に従って分割添
加する方法がよい。反応温度は５〜５０℃で、反応はｐ
Ｈ４〜１０の範囲で特に６．５〜８．０で行うことが好
ましい。反応時間は基質濃度、菌体あるいはその処理物
の濃度、その他の条件によって変るが、通常１〜１５０
時間で終了するように条件を設定するのが好ましい。菌
の代謝活性がなくならぬ限り反応は進行するので、より
長時間かけて反応させてもよいが効率的ではない。
基質濃度は通常０．１〜１０％（ｗ／ｖ）が好ましい。
微生物の生育と同時に反応させる場合、はじめから高濃
度に添加して反応させると菌の生育や反応が停止した
り、きわめて遅くなるので、基質の代謝に従って分割添
加する方法がよい。反応温度は５〜５０℃で、反応はｐ
Ｈ４〜１０の範囲で特に６．５〜８．０で行うことが好
ましい。反応時間は基質濃度、菌体あるいはその処理物
の濃度、その他の条件によって変るが、通常１〜１５０
時間で終了するように条件を設定するのが好ましい。菌
の代謝活性がなくならぬ限り反応は進行するので、より
長時間かけて反応させてもよいが効率的ではない。
【００１２】反応後、反応液中には（Ｒ）−マンデル酸
が残存し、（Ｓ）−マンデル酸の代謝により生成したベ
ンゾイル蟻酸が蓄積する。このベンゾイル蟻酸を不斉的
に（Ｒ）−マンデル酸に還元するため、酵母を反応液に
加えて更に培養すればよい。この際、糖または糖と燐酸
塩を反応液に添加することにより、より効率的還元が可
能である。これは糖の代謝により反応に必要な還元型の
補酵素が反応系に供給されるためと考えられる。この還
元の為の反応は静置でも好気的な培養でもよいが、好気
的培養の方が効率がよい。反応はベンゾイル蟻酸の
（Ｒ）−マンデル酸への還元が実質的に終了するまで続
けられる。
が残存し、（Ｓ）−マンデル酸の代謝により生成したベ
ンゾイル蟻酸が蓄積する。このベンゾイル蟻酸を不斉的
に（Ｒ）−マンデル酸に還元するため、酵母を反応液に
加えて更に培養すればよい。この際、糖または糖と燐酸
塩を反応液に添加することにより、より効率的還元が可
能である。これは糖の代謝により反応に必要な還元型の
補酵素が反応系に供給されるためと考えられる。この還
元の為の反応は静置でも好気的な培養でもよいが、好気
的培養の方が効率がよい。反応はベンゾイル蟻酸の
（Ｒ）−マンデル酸への還元が実質的に終了するまで続
けられる。
【００１３】かくして反応後反応液中に残存および生成
した（Ｒ）−マンデル酸は、反応液から遠心分離などの
方法により菌体を除いた後、上澄液を酸性としてジエチ
ルエーテルで抽出し、抽出液から溶媒を留去した後、温
ベンゼンに溶解して冷やすことにより結晶として析出さ
せて分離する。必要により更に精製する。その他公知の
方法を適用して回収することができる。
した（Ｒ）−マンデル酸は、反応液から遠心分離などの
方法により菌体を除いた後、上澄液を酸性としてジエチ
ルエーテルで抽出し、抽出液から溶媒を留去した後、温
ベンゼンに溶解して冷やすことにより結晶として析出さ
せて分離する。必要により更に精製する。その他公知の
方法を適用して回収することができる。
【００１４】
【実施例】以下実施例により本発明をより具体的に説明
する。実施例においてマンデル酸の分析、マンデル酸の
光学純度の決定のための（Ｒ）−体と（Ｓ）−体の分別
定量は高速液体クロマトグラフィーによった。それらの
条件は次のとおりである。 マンデル酸の分析 カラム：ＴＳＫ ＧＥＬ ＯＤＳ−８０ＴＭ（トーソー
株式会社製品） 移動相：０．１％Ｈ３ＰＯ４＋２５％アセトニトリル 流 速：１．０ｍｌ／分， 検 出：ＵＶ ２１０ｎ
ｍ （Ｒ）−体と（Ｓ）−体の分別定量 カラム：ＭＣＩ ＧＥＬ ＣＲＳ−１ＯＷ 移動相：２ｍＭ ＣｕＳＯ４＋１５％アセトニトリル 流 速：１．３ｍｌ／分， 検 出：ＵＶ ２５４ｎ
ｍ 実施例中の物質濃度％は（Ｗ／Ｖ）で示した。
する。実施例においてマンデル酸の分析、マンデル酸の
光学純度の決定のための（Ｒ）−体と（Ｓ）−体の分別
定量は高速液体クロマトグラフィーによった。それらの
条件は次のとおりである。 マンデル酸の分析 カラム：ＴＳＫ ＧＥＬ ＯＤＳ−８０ＴＭ（トーソー
株式会社製品） 移動相：０．１％Ｈ３ＰＯ４＋２５％アセトニトリル 流 速：１．０ｍｌ／分， 検 出：ＵＶ ２１０ｎ
ｍ （Ｒ）−体と（Ｓ）−体の分別定量 カラム：ＭＣＩ ＧＥＬ ＣＲＳ−１ＯＷ 移動相：２ｍＭ ＣｕＳＯ４＋１５％アセトニトリル 流 速：１．３ｍｌ／分， 検 出：ＵＶ ２５４ｎ
ｍ 実施例中の物質濃度％は（Ｗ／Ｖ）で示した。
【００１５】実施例１ ラセミ型マンデル酸２．０％、燐酸二カリウム０．７５
％、燐酸一カリウム０．２５％、硫酸マグネシウム・７
水塩０．０１％、酵母エキス０．３％、Ｌ−グルタミン
酸ナトリウム０．２％、ピルビン酸０．５％の組成の滅
菌培地（ｐＨ７．０）３０ｍｌを入れた３００ｍｌの三
角フラスコに、アルカリゲネス・フェカリスＡＴＣＣ８
７５０を植菌して、２６℃、２２０ｒｐｍで８日間振と
う培養した結果、（Ｓ）−マンデル酸が代謝されて
（Ｒ）−マンデル酸が９．１４ｇ／リットルの濃度に残
留した。同時に培養液中にベンゾイル蟻酸が４．８３ｇ
／リットルの濃度に生成した。この培養液１０ｍｌに、
別に培養してえたサッカロミセス・セレビシエＡＴＣＣ
１８８２４の細胞０．４ｇ（湿重量）とグルコース０．
５ｇ、燐酸二カリウム０．０７５ｇ、燐酸一カリウム
０．０２５ｇを加えて２６℃、２２０ｒｐｍで９６時間
振とう培養した結果、培養液中の（Ｒ）−マンデル酸濃
度は１２．５１ｇ／リットル、ベンゾイル蟻酸の濃度は
１．８７ｇ／リットルで、（Ｒ）−マンデル酸の光学純
度（ｅ．ｅ．）は１００％であった。
％、燐酸一カリウム０．２５％、硫酸マグネシウム・７
水塩０．０１％、酵母エキス０．３％、Ｌ−グルタミン
酸ナトリウム０．２％、ピルビン酸０．５％の組成の滅
菌培地（ｐＨ７．０）３０ｍｌを入れた３００ｍｌの三
角フラスコに、アルカリゲネス・フェカリスＡＴＣＣ８
７５０を植菌して、２６℃、２２０ｒｐｍで８日間振と
う培養した結果、（Ｓ）−マンデル酸が代謝されて
（Ｒ）−マンデル酸が９．１４ｇ／リットルの濃度に残
留した。同時に培養液中にベンゾイル蟻酸が４．８３ｇ
／リットルの濃度に生成した。この培養液１０ｍｌに、
別に培養してえたサッカロミセス・セレビシエＡＴＣＣ
１８８２４の細胞０．４ｇ（湿重量）とグルコース０．
５ｇ、燐酸二カリウム０．０７５ｇ、燐酸一カリウム
０．０２５ｇを加えて２６℃、２２０ｒｐｍで９６時間
振とう培養した結果、培養液中の（Ｒ）−マンデル酸濃
度は１２．５１ｇ／リットル、ベンゾイル蟻酸の濃度は
１．８７ｇ／リットルで、（Ｒ）−マンデル酸の光学純
度（ｅ．ｅ．）は１００％であった。
【００１６】実施例２ ラセミ型マンデル酸１．５％、燐酸二カリウム０．７５
％、燐酸一カリウム０．２５％、硫酸マグネシウム・７
水塩０．０１％、ペプトン１．０％、酵母エキス０．３
％、肉エキス０．５％、微量元素溶液５ｍｌ／リットル
の組成の滅菌培地（ｐＨ７．０）３０ｍｌを入れた３０
０ｍｌの三角フラスコに、プロテウス・ミタジリＡＴＣ
Ｃ２１１３６を植菌して、２６℃、２２０ｒｐｍで１４
４時間振とう培養したとき（Ｓ）−マンデル酸が代謝さ
れて培養液中に（Ｒ）−マンデル酸が６．２ｇ／リット
ル、ベンゾイル蟻酸が８．７７ｇ／リットルの濃度に生
成した。この培養液１０ｍｌに、別に培養してえたサッ
カロミセス・セレビシエＡＴＣＣ１８８２４の細胞０．
４ｇ（湿重量）とグルコース０．５ｇ、燐酸二カリウム
０．０７５ｇ、燐酸一カリウム０．０２５ｇを加えて２
６℃、２２０ｒｐｍで９６時間振とう培養したとき、培
養液中の（Ｒ）−マンデル酸濃度は１１．０ｇ／リット
ル、ベンゾイル蟻酸の濃度は４．０７ｇ／リットルで、
（Ｒ）−マンデル酸の光学純度（ｅ．ｅ．）は１００％
であった。用いた微量元素溶液の組成は次の化合物を水
にとかして１リットルとしたものである：ＣａＣｌ２・
２Ｈ２Ｏ １０ｇ，ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ １０ｇ，Ｍ
ｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏ ５ｇ，Ｎａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ
５ｇ，ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ １ｇ，ＺｎＳＯ４・７
Ｈ２Ｏ １ｇ，ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ １ｇ，ＮｉＣｌ
２・６Ｈ２Ｏ １ｇ，Ｈ３ＢＯ４ １ｇ，ＥＤＴＡ・２
Ｎａ ２０ｇ。
％、燐酸一カリウム０．２５％、硫酸マグネシウム・７
水塩０．０１％、ペプトン１．０％、酵母エキス０．３
％、肉エキス０．５％、微量元素溶液５ｍｌ／リットル
の組成の滅菌培地（ｐＨ７．０）３０ｍｌを入れた３０
０ｍｌの三角フラスコに、プロテウス・ミタジリＡＴＣ
Ｃ２１１３６を植菌して、２６℃、２２０ｒｐｍで１４
４時間振とう培養したとき（Ｓ）−マンデル酸が代謝さ
れて培養液中に（Ｒ）−マンデル酸が６．２ｇ／リット
ル、ベンゾイル蟻酸が８．７７ｇ／リットルの濃度に生
成した。この培養液１０ｍｌに、別に培養してえたサッ
カロミセス・セレビシエＡＴＣＣ１８８２４の細胞０．
４ｇ（湿重量）とグルコース０．５ｇ、燐酸二カリウム
０．０７５ｇ、燐酸一カリウム０．０２５ｇを加えて２
６℃、２２０ｒｐｍで９６時間振とう培養したとき、培
養液中の（Ｒ）−マンデル酸濃度は１１．０ｇ／リット
ル、ベンゾイル蟻酸の濃度は４．０７ｇ／リットルで、
（Ｒ）−マンデル酸の光学純度（ｅ．ｅ．）は１００％
であった。用いた微量元素溶液の組成は次の化合物を水
にとかして１リットルとしたものである：ＣａＣｌ２・
２Ｈ２Ｏ １０ｇ，ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ １０ｇ，Ｍ
ｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏ ５ｇ，Ｎａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ
５ｇ，ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ １ｇ，ＺｎＳＯ４・７
Ｈ２Ｏ １ｇ，ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ １ｇ，ＮｉＣｌ
２・６Ｈ２Ｏ １ｇ，Ｈ３ＢＯ４ １ｇ，ＥＤＴＡ・２
Ｎａ ２０ｇ。
【００１７】実施例３ （Ｓ）−マンデル酸の代謝にフラボバクテリウム属菌種
ＡＴＣＣ１４６５８を用いる他は実施例２と同様に実施
した。酵母菌体を添加する前の培養液中には（Ｒ）−マ
ンデル酸が７．４５ｇ／リットル、ベンゾイル蟻酸が
５．７０ｇ／リットルの濃度に生成し、酵母を添加して
培養後の培養液中には（Ｒ）−マンデル酸が１１．２５
ｇ／リットルの濃度に生成した。この（Ｒ）−マンデル
酸の光学純度（ｅ．ｅ．）は１００％であった。ベンゾ
イル蟻酸は２．０９ｇ／リットルの濃度に残留した。
ＡＴＣＣ１４６５８を用いる他は実施例２と同様に実施
した。酵母菌体を添加する前の培養液中には（Ｒ）−マ
ンデル酸が７．４５ｇ／リットル、ベンゾイル蟻酸が
５．７０ｇ／リットルの濃度に生成し、酵母を添加して
培養後の培養液中には（Ｒ）−マンデル酸が１１．２５
ｇ／リットルの濃度に生成した。この（Ｒ）−マンデル
酸の光学純度（ｅ．ｅ．）は１００％であった。ベンゾ
イル蟻酸は２．０９ｇ／リットルの濃度に残留した。
【００１８】実施例４ （Ｓ）−マンデル酸の代謝により生成したベンゾイル蟻
酸の不斉還元に酵母としてキャンジダ・ルゴーサＩＦＯ
５９１を用いるほかは実施例３と同様に実施した。酵母
菌体を添加前の培養液中の（Ｒ）−マンデル酸は７．４
５ｇ／リットル、ベンゾイル蟻酸は５．７０ｇ／リット
ルの濃度であり、酵母菌体を添加して培養液の培養液中
には（Ｒ）−マンデル酸が１１．０２ｇ／リットルの濃
度に生成し、その光学純度は１００％であった。ベンゾ
イル蟻酸は２．７４ｇ／リットルの濃度に残留した。
酸の不斉還元に酵母としてキャンジダ・ルゴーサＩＦＯ
５９１を用いるほかは実施例３と同様に実施した。酵母
菌体を添加前の培養液中の（Ｒ）−マンデル酸は７．４
５ｇ／リットル、ベンゾイル蟻酸は５．７０ｇ／リット
ルの濃度であり、酵母菌体を添加して培養液の培養液中
には（Ｒ）−マンデル酸が１１．０２ｇ／リットルの濃
度に生成し、その光学純度は１００％であった。ベンゾ
イル蟻酸は２．７４ｇ／リットルの濃度に残留した。
【００１９】実施例５ （Ｓ）−マンデル酸の代謝により生成したベンゾイル蟻
酸の不斉還元に酵母としてロドトルラ・グルチニスＡＴ
ＣＣ２０１４７を用いるほか実施例４と同様に実施し
た。酵母を加えてからの培養後の培養液には（Ｒ）−マ
ンデル酸が１１．２ｇ／リットルの濃度に生成し、その
光学純度は１００％であった。
酸の不斉還元に酵母としてロドトルラ・グルチニスＡＴ
ＣＣ２０１４７を用いるほか実施例４と同様に実施し
た。酵母を加えてからの培養後の培養液には（Ｒ）−マ
ンデル酸が１１．２ｇ／リットルの濃度に生成し、その
光学純度は１００％であった。
【００２０】実施例６ 実施例１と同様に実施して、（Ｒ）−マンデル酸１３．
２１ｇ／リットル、ベンゾイル蟻酸１．０２ｇ／リット
ルをふくむ培養液をえた。この培養液２００ｍｌから遠
心分離により菌体を除いた上澄液を塩酸を用いてｐＨ
１．５として、ジエチルエーテル１００ｍｌで２回抽出
し、抽出液から溶媒を留去した後、７０℃でベンゼン２
０ｍｌにとかし、室温に放置した。析出した結晶をろ別
乾燥して（Ｒ）−マンデル酸１．５７ｇをえた。純度９
２％で光学純度（ｅ．ｅ．）は１００％であった。
２１ｇ／リットル、ベンゾイル蟻酸１．０２ｇ／リット
ルをふくむ培養液をえた。この培養液２００ｍｌから遠
心分離により菌体を除いた上澄液を塩酸を用いてｐＨ
１．５として、ジエチルエーテル１００ｍｌで２回抽出
し、抽出液から溶媒を留去した後、７０℃でベンゼン２
０ｍｌにとかし、室温に放置した。析出した結晶をろ別
乾燥して（Ｒ）−マンデル酸１．５７ｇをえた。純度９
２％で光学純度（ｅ．ｅ．）は１００％であった。
【００２１】
【発明の効果】本発明によれば、光学分割剤として、ま
た光学活性医薬農薬の合成中間体として有用な（Ｒ）−
マンデル酸を効率的（原料のラセミ型マンデル酸の５０
％以上）に製造することができる。
た光学活性医薬農薬の合成中間体として有用な（Ｒ）−
マンデル酸を効率的（原料のラセミ型マンデル酸の５０
％以上）に製造することができる。
フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:20） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:37） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:38） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:85） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:72）
Claims (5)
- 【請求項１】 （Ｒ）−マンデル酸と（Ｓ）−マンデル
酸の混合物に（Ｓ）−マンデル酸を不斉的に代謝する微
生物またはその処理物を作用させて残存する（Ｒ）−マ
ンデル酸とベンゾイル蟻酸が含有する反応液に酵母を加
えてさらに反応させ、ベンゾイル蟻酸を（Ｒ）−マンデ
ル酸に還元して反応液中の（Ｒ）−マンデル酸の量を残
存した（Ｒ）−マンデル酸の量より増加させた後に反応
液から（Ｒ）−マンデル酸を採取することを特徴とする
（Ｒ）−マンデル酸の製造法。 - 【請求項２】 （Ｒ）−マンデル酸と（Ｓ）−マンデル
酸の混合物に作用させる微生物がアルカリゲネス、アク
ロモバクター、フラボバクテリウム、ミクロコッカス、
パラコッカス、プロテウス、およびシュードモナスの何
れかの属に属する微生物であることを特徴とする請求項
１記載の方法。 - 【請求項３】 反応液中に生成したベンゾイル蟻酸を還
元させるのに使用する酵母がサッカロミセス、キャンジ
ダ、ロドトルラの何れかの属に属する酵母であることを
特徴とする請求項１記載の方法。 - 【請求項４】 反応液中に生成したベンゾイル蟻酸を還
元させるのに酵母とともに糖、または糖と燐酸塩を反応
液に添加することを特徴とする請求項１記載の方法。 - 【請求項５】 ベンゾイル蟻酸を還元するのに酵母とと
もに糖または糖と燐酸を反応液に添加することを特徴と
する請求項３記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5079997A JPH06253890A (ja) | 1993-03-01 | 1993-03-01 | （ｒ）−マンデル酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5079997A JPH06253890A (ja) | 1993-03-01 | 1993-03-01 | （ｒ）−マンデル酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06253890A true JPH06253890A (ja) | 1994-09-13 |
Family
ID=13705942
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5079997A Pending JPH06253890A (ja) | 1993-03-01 | 1993-03-01 | （ｒ）−マンデル酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06253890A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0596466A2 (en) * | 1992-11-05 | 1994-05-11 | Tanabe Seiyaku Co., Ltd. | The process for producing D-mandelic acid |
| CN100372926C (zh) * | 2005-06-23 | 2008-03-05 | 华东理工大学 | 恶臭假单胞菌及其在拆分扁桃酸外消旋体中的应用 |
-
1993
- 1993-03-01 JP JP5079997A patent/JPH06253890A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0596466A2 (en) * | 1992-11-05 | 1994-05-11 | Tanabe Seiyaku Co., Ltd. | The process for producing D-mandelic acid |
| EP0596466A3 (en) * | 1992-11-05 | 1995-04-05 | Tanabe Seiyaku Co | Process for the production of D-mandelic acid. |
| CN100372926C (zh) * | 2005-06-23 | 2008-03-05 | 华东理工大学 | 恶臭假单胞菌及其在拆分扁桃酸外消旋体中的应用 |
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