JPH06237658A - ハンカチノキの大量増殖法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 ハンカチノキの新枝の一部をホルモン含有培
地で培養してシュートを発生させ、これをホルモン含有
培地で継代培養してマルチプルシュートを得、更に活性
炭及びホルモン含有培地で発根させることによるハンカ
チノキの組織培養による大量増殖法。 【効果】 この方法により、ハンカチノキの種苗が、実
生、サシキ、ツギキ法によらずに大量生産可能となっ
た。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は花の観賞用として有用な
ハンカチノキ（Ｄａｖｉｄｉａ ｉｎｖｏｌｕｃｒａｔ
ａ ＤＡＩＬＬ）の幼苗を組織培養により大量に増殖す
る方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】ハンカチノキは中国原産の一属一種の樹
木であり、花の苞が白色で大きいため観賞用として利用
されている。ハンカチノキの多くはヨーロッパで育成さ
れた実生苗を輸入したり、中国から輸入した種子をまき
つけて実生苗を養成することにより、育成されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、種子か
ら実生苗を養成する場合、発芽率が極めて低く、大量の
実生苗を得ることができなかった。また、樹木の増殖手
段として通常用いられるサシキ法によっては発根が困難
であり、ツギキ法も考えられるが実生台木が不足してお
り、クローン増殖技術も進まなかった。一方、最近、草
本類だけでなく樹木に対しても組織培養による幼苗の大
量生産の試みがなされているが、成功した樹種は少ない
のが現状である。従って、本発明の目的は組織培養によ
りハンカチノキの幼苗を大量生産する方法を提供するこ
とにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】そこで、本発明者はハン
カチノキ組織のシュート増殖法に着目して種々検討した
結果、シュート発生、継代培養によるマルチプルシュー
トの形成及び発根工程について、それぞれ特定の組成を
有する合成培地を用いて行うことにより、よく伸長した
シュートが得られ、良好な分岐した根を持ち、成長可能
な幼苗が大量に得られることを見出し、本発明を完成す
るに至った。

【０００５】すなわち、本発明は、（１）ハンカチノキ
の新枝の茎端又は節を有する茎軸を、サイトカイニン類
及びオーキシン類を含有する合成培地で培養して新しい
シュートを発生させ、（２）当該新しいシュートを分離
し、サイトカイニン類及びオーキシン類を含有する合成
培地で継代培養を繰り返してマルチプルシュートを形成
させ、（３）得られたマルチプルシュートの中からよく
伸長したシュートを選択して活性炭及びオーキシン類を
含有する合成培地で培養して発根させることを特徴とす
るハンカチノキの組織培養による大量増殖法を提供する
ものである。

【０００６】以下、本発明のハンカチノキの大量増殖法
について、工程毎に詳細に説明する。

【０００７】本発明の第１工程は、ハンカチノキの外植
体からシュートを発生させる工程である。外植体とし
て、ハンカチノキの新しく伸びた枝の茎端（茎頂）又は
節を有する茎軸を用いる。当該外植体は約１〜３cm、特
に２cm程度が好ましく、葉は切りおとして用いる。また
外植体は、培養に先立ち、表面を滅菌処理しておくのが
好ましい。

【０００８】シュート発生用の培地は、サイトカイニン
類及びオーキシン類を含有する合成培地である。サイト
カイニン類としては、Ｎ⁶−ベンジルアミノプリン（Ｂ
ＡＰ）、カイネチン、ゼアチン、ゼアチンリボシド、イ
ソペンテニルアデニン等が挙げられるが、ＢＡＰが特に
好ましい。オーキシン類としては、インドール−３−酢
酸、β−インドール酪酸（ＩＢＡ）、２，４−ジクロロ
フェノキシ酢酸、α−ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）等が挙
げられるが、ＮＡＡが特に好ましい。合成培地中にサイ
トカイニン類は１〜２０μM 、オーキシン類は０．１〜
５μM 含有させるのが好ましい。シュート発生用の合成
培地としては、ＭＳ培地〔Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ ａｎｄ
Ｓｋｏｏｇ：Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｌａｎｔ．１５，４
７３〜４８７（１９６２）〕ＢＴＭ培地〔Ｂｒｏａｄ
ｌｅａｖｅｄ ｔｒｅｅ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ；ＣＨＡＬ
ＰＡ：Ｃｏｍｍｕ．Ｉｎｓｔ，Ｃｅｃｈｏｓｌｏｖ．１
２，２５５〜２７１（１９８１）〕、ＷＰＭ培地〔Ｗｏ
ｏｄｙ ｐｌａｎｔ ｍｅｄｉｕｍ；ＬＬＯＩＤ ａｎ
ｄ ＭＣＣＯＷＮ：Ｉｎｔ．Ｐｌａｎｔ．Ｐｒｏｐａｇ
ａｔｏｒ’ｓ Ｓｏｃ．３０，４２１〜４２７（１９８
０）〕及び後記表１の組成を有するＢＷ培地が挙げられ
るが、ＢＷ培地が特に好ましい。

【０００９】第１工程の培養は、２５±２℃、３，００
０ルックス程度の光照射１６時間日長下で４０〜６０日
間位行うのが好ましい。当該培養により、植えた外植体
より開葉したシュートが発生する。

【００１０】本発明の第２工程は、シュートを継代培養
してマルチプルシュートを形成させる工程である。この
工程は、第１工程で発生したシュートを外植体から切り
とり、サイトカイニン類及びオーキシン類を含有する合
成培地で継代培養することにより行われる。サイトカイ
ニン類、オーキシン類及び合成培地としては、第１工程
と同じものを用いることができる。サイトカイニン類は
第１工程で用いたもののうち、中〜高濃度のものが好ま
しい。シュートの移植にあたっては、外植体基部に形成
されたカルスを切りおとし、外植体から長く伸びたシュ
ートは二分して、培地に２〜３mmの深さに挿入移植する
のが好ましい。

【００１１】第２工程の培養は、２５±２℃、３，００
０ルックス光照射１６時間日長下で４０〜５０日毎に培
地をとりかえて行うのが好ましい。かくして継代培養す
ることにより、７〜８継代で培養物の幼令化がおこり、
７継代以降にマルチプルシュートが形成される。形成さ
れたマルチプルシュートの中から３cm以上に伸長したシ
ュートを選択して発根工程に供し、短かいシュート及び
長いシュートを切りとったあとの培養体の基部は更に継
代培養に供される。

【００１２】本発明の第３工程は、マルチプルシュート
の中から選択したシュートを発根させ、幼苗を得る工程
であり、シュートを活性炭及びオーキシン類を含有する
合成培地で培養することにより行われる。

【００１３】第３工程に用いられる合成培地としては、
第１工程、第２工程と同じ組成でもよいが、後記表１に
示した１／２ＢＷ培地（ＢＷ培地の無機成分の１／２濃
度＋ミオイノシトール＋塩酸チアミン＋ニコチン酸＋シ
ョ糖１０ｇ／ｌ）が好ましい。活性炭は、０．１〜０．
５ｗ／ｖ％の濃度含有させるのが好ましい。また、オー
キシン類としては前述のものが挙げられるが、ＩＢＡ、
ＮＡＡ等を組み合せて用いるのが好ましい。オーキシン
類の濃度は、合計で１〜２０μM とするのが好ましい。

【００１４】第３工程の培養は、２５±２℃、３，００
０ルックス光照射１６時間日長下に行われる。マルチプ
ルシュートは培養１４〜２０日頃から発根を始め、３０
〜５０日で幼苗として利用できる。

【００１５】得られたハンカチノキの幼苗は、鉢上げ馴
化することにより種苗として供給することができる。馴
化は、例えば次の如くして行うことができる。幼苗の根
についた寒天を洗いおとし、例えばメトロミック＋フヨ
ウライト（商品名）の人工培地をつめたビニールポット
に移植する。移植を終わったポットは温室内の噴霧灌水
下において馴化する。最初の１か月間は、白色クレモナ
シェードでベット全体を覆って高湿に保つ。馴化に当っ
て特に重要なのは予備馴化の手だてで、鉢出し前の２０
〜２５日間、培養室内での培養器具のキャップをゆるめ
ることにより、幼苗を培養室内の湿度に馴らすことであ
る。

【００１６】

【実施例】次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明する
が、本発明はこれに何ら限定されるものではない。

【００１７】実施例１ ハンカチノキ新枝の節つき茎軸又は茎端を切りとり、７
０％エタノール液に１分間、次いで１．０％次亜塩酸ナ
トリウム液に１５分間攪拌浸漬して表面殺菌を行った。
表面殺菌した外植体は滅菌水で洗浄したのち、滅菌濾紙
上で風乾し、切り口の損傷部分を切りおとしてから表１
のＢＷ培地にＢＡＰ及びＮＡＡを添加した培地に垂直に
植えた。培養は、２５±２℃、３，０００ルックス蛍光
灯照射１６時間日長下に４０日間行った。

【００１８】

【表１】

【００１９】その結果、表２に示すように外植体はサイ
トカイニン及びオーキシンを添加したＢＷ培地で良好な
シュート発生、伸長が見られた。

【００２０】

【表２】

【００２１】実施例２ 実施例１で得られたシュートを外植体から切り出し、前
記ＢＷ培地にＢＡＰ及びＮＡＡを添加した培地に、２〜
３mmの深さに挿入移植し、４０〜５０日毎に培地をとり
かえて継代培養した。培養は２５±２℃、３，０００ル
ックス蛍光灯照射１６時間日長下で行った。

【００２２】その結果、表３に示すように７継代目から
マルチプルシュートを形成し、継代培養を重ねるにつれ
て培養体数及びマルチプルシュート数が増加した。ま
た、添加するＢＡＰの濃度は５μM 程度が、ＮＡＡの濃
度は０．３〜１μM 程度が良好であった。

【００２３】

【表３】

【００２４】実施例３ 実施例２で得られたマルチプルシュートの中から３cm以
上のシュートを切り出し、表４の組成を有する１／２Ｂ
Ｗ培地に活性炭及びオーキシンを加えた培地に移植して
発根させた。培養は、２５±２℃、３，０００ルックス
蛍光灯照射１６時間日長下に３０日間行った。

【００２５】

【表４】

【００２６】その結果、表５に示すように、発根率に及
ぼす活性炭の効果はみられず、シュートあたりの発根根
数を減少させる傾向を示した。活性炭を加えない培地で
は根の分岐は全くみられなかったが、活性炭を添加した
培地に植えつけたシュートの根はほとんど分岐した。

【００２７】

【表５】

【００２８】実施例４ 実施例３で得られた幼苗を馴化させた。すなわち、幼苗
の根についた寒天を洗いおとし、（メトロミック＋フヨ
ウライト）の人工培地をつめたビニールポットに移植し
た。移植を終ったポットは温室内の噴霧灌水下において
馴化した。最初の１か月間は、白色クレモナシェードで
ベット全体を覆って高湿に保った。馴化に当っては、鉢
出し２０〜２５日間、培養室内での培養器具のキャップ
をゆるめることにより、幼苗を培養室内の湿度に馴らし
た。発根培地の組成と活着馴化率の関係を表６に示し
た。その結果、活性炭を入れない培地で発根育成した幼
苗は８０％内外の活着を示したのに対し、活性炭を入れ
た培地で発根育成した幼苗はほとんど１００％の活着を
示した。

【００２９】

【表６】

【００３０】

【発明の効果】本発明方法により、ハンカチノキの実
生、サシキ、ツギキ法によらず、組織培養による大量増
殖が可能になったので、野外に生育している母樹からガ
ラス器内に培養体を保持することにより、制御された環
境下で永年にわたりマルチプルシュートを得る増殖と得
られたシュートの発根による幼苗生産ができる。また、
花がよく着き、苞の大きい優良形質を持った母樹を選抜
することにより、クローン化することが容易である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 （１）ハンカチノキの新枝の茎端又は節
   を有する茎軸を、サイトカイニン類及びオーキシン類を
   含有する合成培地で培養して新しいシュートを発生さ
   せ、（２）当該新しいシュートを分離し、サイトカイニ
   ン類及びオーキシン類を含有する合成培地で継代培養を
   繰り返してマルチプルシュートを形成させ、（３）得ら
   れたマルチプルシュートの中からよく伸長したシュート
   を選択して活性炭及びオーキシン類を含有する合成培地
   で培養して発根させることを特徴とするハンカチノキの
   組織培養による大量増殖法。