JPH06174712A - 特異的抗体検出のためのクロマトグラフ抗原サンドイッチ試験およびその装置 - Google Patents
特異的抗体検出のためのクロマトグラフ抗原サンドイッチ試験およびその装置Info
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- JPH06174712A JPH06174712A JP5221268A JP22126893A JPH06174712A JP H06174712 A JPH06174712 A JP H06174712A JP 5221268 A JP5221268 A JP 5221268A JP 22126893 A JP22126893 A JP 22126893A JP H06174712 A JPH06174712 A JP H06174712A
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-
- G—PHYSICS
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明は試料中の特異的抗体の検出のための
簡単で迅速な単一工程アッセイを提供する。 【構成】 本試験は２ゾーンクロマトグラフ装置を使用
し、ここで２ゾーンとは検出粒子に付着された粒子を含
む検出ゾーンおよび、クロマトグラフマトリックスに結
合された抗原または抗原類似体を含む捕捉ゾーンであ
る。
簡単で迅速な単一工程アッセイを提供する。 【構成】 本試験は２ゾーンクロマトグラフ装置を使用
し、ここで２ゾーンとは検出粒子に付着された粒子を含
む検出ゾーンおよび、クロマトグラフマトリックスに結
合された抗原または抗原類似体を含む捕捉ゾーンであ
る。
Description
【０００１】
【従来の技術】イムノアッセイは現在では良く知られた
診断産業の手段である。そのようなアッセイは試験試料
中の被検体の存在を検出するために抗原抗体反応の特異
性を利用している。
診断産業の手段である。そのようなアッセイは試験試料
中の被検体の存在を検出するために抗原抗体反応の特異
性を利用している。
【０００２】標的被検体が抗体である場合、通常、検出
物上に被覆された抗ＩｇＧまたは抗ＩｇＭのような抗化
学種抗体がアッセイに使用される。この型の検出系はも
し試料中に過剰に非特異的抗体が存在すると特異的また
は非特異的抗体の両方に結合する傾向があるので、単一
工程アッセイに組み込ませることは困難である。一般的
に血清がこのケースにあてはまる。
物上に被覆された抗ＩｇＧまたは抗ＩｇＭのような抗化
学種抗体がアッセイに使用される。この型の検出系はも
し試料中に過剰に非特異的抗体が存在すると特異的また
は非特異的抗体の両方に結合する傾向があるので、単一
工程アッセイに組み込ませることは困難である。一般的
に血清がこのケースにあてはまる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従って、そのような単
一工程アッセイを用いる別の技術が必要とされている。
一工程アッセイを用いる別の技術が必要とされている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は試料中の特異的
抗体を検出するための簡単で迅速な単一工程アッセイを
提供する。特に、本試験は２ゾーンクロマトグラフ装置
（２ゾーンとは検出ゾーンおよび捕捉ゾーンである）を
使用する。
抗体を検出するための簡単で迅速な単一工程アッセイを
提供する。特に、本試験は２ゾーンクロマトグラフ装置
（２ゾーンとは検出ゾーンおよび捕捉ゾーンである）を
使用する。
【０００５】検出ゾーンは抗原または抗原類似物で被覆
された検出粒子から成り、捕捉ゾーンはクロマトグラフ
マトリックスに結合された抗原または抗原類似物であ
る。アッセイにおいて、特異的抗体を含む試料は検出ゾ
ーン（捕捉ゾーンの上流にある）の上流で装置にのせら
れる。特異的抗体は最初に検出ゾーン粒子に結合し、こ
れらの複合体は検出信号が読みとられる捕捉ゾーンに結
合するようになるであろう。
された検出粒子から成り、捕捉ゾーンはクロマトグラフ
マトリックスに結合された抗原または抗原類似物であ
る。アッセイにおいて、特異的抗体を含む試料は検出ゾ
ーン（捕捉ゾーンの上流にある）の上流で装置にのせら
れる。特異的抗体は最初に検出ゾーン粒子に結合し、こ
れらの複合体は検出信号が読みとられる捕捉ゾーンに結
合するようになるであろう。
【０００６】検出ゾーンは抗原で被覆された検出粒子を
含んでいる。真の一工程アッセイの為に検出は視覚的な
読みだしができなければならないが、他の検出手段（例
えば、蛍光、ＵＶ）もまた使用でき、唯一の基準はその
表面に抗原を結合させる能力である。
含んでいる。真の一工程アッセイの為に検出は視覚的な
読みだしができなければならないが、他の検出手段（例
えば、蛍光、ＵＶ）もまた使用でき、唯一の基準はその
表面に抗原を結合させる能力である。
【０００７】検出物は粒子状の物質である。有用な粒子
の一つは読みだし物質として色素または他の着色物質を
含むサックである。使用されるサックは天然の赤血球、
赤血球ゴースト、リポソーム（単一膜、しばしば小胞と
称される、または多重膜）、ポリマーマイクロカプセル
（例えば、コアセルベーションまたは表面間重合化で作
製されたもの）などを含む多くの種類のサックを使用で
きるが、それらに制限されるわけではない。着色粒子
（例えば、ラテックスまたは他の重合性粒子）および沈
澱性または不溶性金属、非金属および合金もまた有用で
ある。
の一つは読みだし物質として色素または他の着色物質を
含むサックである。使用されるサックは天然の赤血球、
赤血球ゴースト、リポソーム（単一膜、しばしば小胞と
称される、または多重膜）、ポリマーマイクロカプセル
（例えば、コアセルベーションまたは表面間重合化で作
製されたもの）などを含む多くの種類のサックを使用で
きるが、それらに制限されるわけではない。着色粒子
（例えば、ラテックスまたは他の重合性粒子）および沈
澱性または不溶性金属、非金属および合金もまた有用で
ある。
【０００８】検出粒子の選択の第一の基準は抗原と結合
できる能力および試験条件下での読みだしが視覚的に行
えることである。
できる能力および試験条件下での読みだしが視覚的に行
えることである。
【０００９】信号発生物質は試験条件下検出可能な信号
を示す任意の物質が可能であるが、好適であるのは目で
見える着色色素またはピグメントである。ＵＶまたは蛍
光発色性の他の色素もまた使用できるが、特別の装置の
使用を必要とするため検出が複雑になる。最も好適な検
出粒子は着色ラテックスである。
を示す任意の物質が可能であるが、好適であるのは目で
見える着色色素またはピグメントである。ＵＶまたは蛍
光発色性の他の色素もまた使用できるが、特別の装置の
使用を必要とするため検出が複雑になる。最も好適な検
出粒子は着色ラテックスである。
【００１０】本分野で良く知られた手段により、抗原は
検出粒子の表面に試料中の特異的抗体と反応して複合体
が形成することを可能にするような幾何学的配位で結合
される。この複合体は続いてクロマトグラフマトリック
スを通過させ、本分野では良く知られた手段によりマト
リックス上に固定された抗原を含む（低分子量抗原の場
合、クロマトグラフマトリックス上への固定の前に抗原
を担体高分子へ結合させる必要がある）捕捉ゾーンへ移
動させる。標識抗原／抗体／結合抗原”サンドイッチ”
（これが検出される）を形成させるためにこのゾーンの
結合抗原に多価特異的抗体も結合される。
検出粒子の表面に試料中の特異的抗体と反応して複合体
が形成することを可能にするような幾何学的配位で結合
される。この複合体は続いてクロマトグラフマトリック
スを通過させ、本分野では良く知られた手段によりマト
リックス上に固定された抗原を含む（低分子量抗原の場
合、クロマトグラフマトリックス上への固定の前に抗原
を担体高分子へ結合させる必要がある）捕捉ゾーンへ移
動させる。標識抗原／抗体／結合抗原”サンドイッチ”
（これが検出される）を形成させるためにこのゾーンの
結合抗原に多価特異的抗体も結合される。
【００１１】本アッセイは非常に特異的である抗原／抗
体複合体の形成に基づいているので特異的抗体に対し非
常に選択的である。
体複合体の形成に基づいているので特異的抗体に対し非
常に選択的である。
【００１２】クロマトグラフマトリックスとしては本分
野で既知の種々のマトリックスが使用でき、シリカ、ポ
リアクリルアミド、アルミナおよび好適なものとしてニ
トロセルロースが挙げられる。さらに、本アッセイは好
適には薄層クロマトグラフ装置（ＴＬＣ）形式で実施さ
れるが、カラムクロマトグラフィーのような任意の他の
匹敵するクロマトグラフ形式でもまた実施できる。
野で既知の種々のマトリックスが使用でき、シリカ、ポ
リアクリルアミド、アルミナおよび好適なものとしてニ
トロセルロースが挙げられる。さらに、本アッセイは好
適には薄層クロマトグラフ装置（ＴＬＣ）形式で実施さ
れるが、カラムクロマトグラフィーのような任意の他の
匹敵するクロマトグラフ形式でもまた実施できる。
【００１３】好適な実施態様においては、ＴＬＣ装置は
図１に示したように配置される。簡単に説明すると、試
料は検出ゾーン（２）の上流のクロマトグラフ媒質
（１）に導入される。検出ゾーンを移動した後、試料は
続けて捕捉ゾーン（３）を移動し、そこで抗体／抗原複
合体は結合され、検出される。
図１に示したように配置される。簡単に説明すると、試
料は検出ゾーン（２）の上流のクロマトグラフ媒質
（１）に導入される。検出ゾーンを移動した後、試料は
続けて捕捉ゾーン（３）を移動し、そこで抗体／抗原複
合体は結合され、検出される。
【００１４】
【実施例】以下の実施例は本発明のある好適な実施態様
を例示するものであるが、全ての実施態様の例示を意味
するものではない。
を例示するものであるが、全ての実施態様の例示を意味
するものではない。
【００１５】実施例１ 抗ビオチン系 本実施例においては、クロマトグラフマトリックスとし
て８μｍのニトロセルロースを含むＴＬＣ装置が図１に
示したように配置された。検出ゾーンは３μｌのビオチ
ニル化赤色ラテックスを含んでおり、捕捉ゾーンはＣＡ
ＭＡＧ ＴＬＣ塗布装置により直線状に装置に噴霧され
たビオチニル化ＢＳＡを含んでいる。膜上のビオチニル
化ＢＳＡの密度は１μｇ／ｃｍであった。
て８μｍのニトロセルロースを含むＴＬＣ装置が図１に
示したように配置された。検出ゾーンは３μｌのビオチ
ニル化赤色ラテックスを含んでおり、捕捉ゾーンはＣＡ
ＭＡＧ ＴＬＣ塗布装置により直線状に装置に噴霧され
たビオチニル化ＢＳＡを含んでいる。膜上のビオチニル
化ＢＳＡの密度は１μｇ／ｃｍであった。
【００１６】試料は検出ゾーンの上流の装置の表面にの
せられ、系の捕捉ゾーン中の赤色の発色を視覚により観
察した。正常ウサギ血清および抗ビオチン抗体を含むウ
サギ血清の二つの試料が試験された。
せられ、系の捕捉ゾーン中の赤色の発色を視覚により観
察した。正常ウサギ血清および抗ビオチン抗体を含むウ
サギ血清の二つの試料が試験された。
【００１７】特異的抗ビオチン抗体を含む血清のみが陽
性の結果を与えた。
性の結果を与えた。
【００１９】２０μｇ／ｍｌのアフィニティにより精製
された抗ビオチン抗体を接種した正常ウサギ血清を含む
第三の試料も同様に試験されて陽性の結果が得られ、少
なくとも２０μｇ／ｍｌの感度が示された。検出ラテッ
クスの迅速な移動を確実にするためにこの実施例のすべ
ての試料にトリトンＸ−１００（最終濃度１％ｗ／ｖ）
が添加された。
された抗ビオチン抗体を接種した正常ウサギ血清を含む
第三の試料も同様に試験されて陽性の結果が得られ、少
なくとも２０μｇ／ｍｌの感度が示された。検出ラテッ
クスの迅速な移動を確実にするためにこの実施例のすべ
ての試料にトリトンＸ−１００（最終濃度１％ｗ／ｖ）
が添加された。
【００２０】実施例２ 抗ウサギＩｇＧ系 本実施例では実施例１で使用されたものと類似の装置が
使用された、ただし、検出にはウサギＩｇＧで被覆され
た青色に着色された０．４８μｍラテックス粒子（０．
４８μｍ）が使用され、捕捉ゾーンはニトロセルロース
上にマイクロピペッターによりウサギＩｇＧがスポット
された；青色ラテックス検出粒子はニトロセルロースへ
の塗布に先だってＰＢＳ、１０％ＢＳＡ、５％スクロー
ス、０．２％トリトンＸ−１００（ｐＨ７．７）を含む
溶液と１：１で混合された。
使用された、ただし、検出にはウサギＩｇＧで被覆され
た青色に着色された０．４８μｍラテックス粒子（０．
４８μｍ）が使用され、捕捉ゾーンはニトロセルロース
上にマイクロピペッターによりウサギＩｇＧがスポット
された；青色ラテックス検出粒子はニトロセルロースへ
の塗布に先だってＰＢＳ、１０％ＢＳＡ、５％スクロー
ス、０．２％トリトンＸ−１００（ｐＨ７．７）を含む
溶液と１：１で混合された。
【００２１】正常ヤギ血清（１／２０希釈）、抗ウサギ
ＩｇＧを含むヤギ血清（１／２０希釈）および１０％
（ｖ／ｖ）の正常ウサギ血清を加えた抗ウサギＩｇＧを
含むヤギ血清（１／２０希釈）の三つの血清が試験され
た。
ＩｇＧを含むヤギ血清（１／２０希釈）および１０％
（ｖ／ｖ）の正常ウサギ血清を加えた抗ウサギＩｇＧを
含むヤギ血清（１／２０希釈）の三つの血清が試験され
た。
【００２２】第二の試料のみが陽性の結果を与え抗ウサ
ギ抗体の特異性が示された（第三の試料に添加されたウ
サギＩｇＧを含んでいる正常ウサギ血清は抗ウサギＩｇ
Ｇに結合し、反応を阻害するであろう）。
ギ抗体の特異性が示された（第三の試料に添加されたウ
サギＩｇＧを含んでいる正常ウサギ血清は抗ウサギＩｇ
Ｇに結合し、反応を阻害するであろう）。
【００２３】上に示した本発明の多くの変更および変形
が本発明の精神および範囲から離れることなくできるで
あろうことは明かである。記載されてきた特定の実施態
様はただ例示として与えられたものであり、本発明は付
随する特許請求の範囲の項によってのみ制限される。
が本発明の精神および範囲から離れることなくできるで
あろうことは明かである。記載されてきた特定の実施態
様はただ例示として与えられたものであり、本発明は付
随する特許請求の範囲の項によってのみ制限される。
【図１】図１は本発明のクロマトグラフ装置を表してお
り、クロマトグラフマトリックス（１）、検出ゾーン
（２）および捕捉ゾーンが示されている。
り、クロマトグラフマトリックス（１）、検出ゾーン
（２）および捕捉ゾーンが示されている。
【図２】図２は捕捉ゾーン中で形成される複合体を表し
ており、検出粒子（１）、検出粒子表面上の抗原
（２）、クロマトグラフマトリックス上に結合された抗
原（３）および特異的抗体（４）が示されている。
ており、検出粒子（１）、検出粒子表面上の抗原
（２）、クロマトグラフマトリックス上に結合された抗
原（３）および特異的抗体（４）が示されている。
Claims (10)
- 【請求項１】 検出ゾーンおよび前記検出ゾーンの下流
の捕捉ゾーンを含むクロマトグラフマトリックスからな
るが、その際、検出ゾーンは抗原または抗原類似体で被
覆された検出粒子から成り、捕捉ゾーンはクロマトグラ
フフマトリックスに結合された抗原または抗原類似体を
含んでいる、抗原に対して特異的な抗体のための単一工
程イムノアッセイを実施するための装置。 - 【請求項２】 クロマトグラフマトリックスがシリカ、
ナイロン、グラスファイバー、ポリアクリルアミド、ア
ルミナ、およびニトロセルロースから成る群より選択さ
れる請求項１に記載の装置。 - 【請求項３】 検出粒子が視覚的に読み取り可能な請求
項１に記載の装置。 - 【請求項４】 検出粒子が沈澱性または不溶性の金属、
沈澱性または不溶性の非金属、色素または着色物質を含
むサック、および沈澱性または不溶性の合金から成る群
より選択される請求項１に記載の装置。 - 【請求項５】 （ｉ）検出ゾーンおよび捕捉ゾーンを含
む装置のクロマトグラフマトリックスへ試料をのせる
が、その際、試料は前記検出ゾーンの上流にのせられ
る； （ｉｉ）前記試料は最初に抗原ー抗体複合体が形成され
るように前記抗原または抗原類似体で被覆された検出粒
子を含む前記検出ゾーンを、続いて形成された抗原ー抗
体複合体が前記抗原または抗原類似体に結合するように
前記クロマトグラフマトリックスへ結合されている抗原
または抗原類似体を含む前記捕捉ゾーンを移動させ；そ
して （ｉｉｉ）粒子の存在を捕捉ゾーンで観察するが、その
際、粒子の存在は特異的抗体の存在を示している；こと
から成る試料中の抗原に対して特異的な抗体の存在を決
定する方法。 - 【請求項６】 クロマトグラフマトリックスがシリカ、
ナイロン、グラスファイバー、ポリアクリルアミド、ア
ルミナ、およびニトロセルロースから成る群より選択さ
れる請求項５に記載の方法。 - 【請求項７】 検出粒子が視覚的に読み取り可能な請求
項５に記載の方法。 - 【請求項８】 検出粒子が色素または着色物質を含んで
いるサックである請求項５に記載の方法。 - 【請求項９】 検出粒子が沈澱性または不溶性の金属、
沈澱性または不溶性の非金属、および沈澱性または不溶
性の合金から成る群より選択される請求項５に記載の方
法。 - 【請求項１０】 装置が薄層クロマトグラフ形式である
請求項５に記載の方法
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US94135092A | 1992-09-04 | 1992-09-04 | |
| US941350 | 1997-09-30 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06174712A true JPH06174712A (ja) | 1994-06-24 |
Family
ID=25476326
Family Applications (1)
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