JPH06165692A - トランスフォーミング成長因子β１に対するモノクローナル抗体 - Google Patents
トランスフォーミング成長因子β１に対するモノクローナル抗体Info
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- JPH06165692A JPH06165692A JP3150450A JP15045091A JPH06165692A JP H06165692 A JPH06165692 A JP H06165692A JP 3150450 A JP3150450 A JP 3150450A JP 15045091 A JP15045091 A JP 15045091A JP H06165692 A JPH06165692 A JP H06165692A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 トランスフォーミング成長因子β１に対する
モノクローナル抗体及びそれを産生するハイブリドーマ
細胞を提供することを目的とする。 【構成】 ヒトトランスフォーミング成長因子β１の完
全アミノ酸配列中の第７８番目から第１０９番目のアミ
ノ酸配列からなるペプチド化合物を抗原として用いるこ
とによって、特異性の高い反応性を有するトランスフォ
ーミング成長因子β１に対するモノクローナル抗体が得
られる。
モノクローナル抗体及びそれを産生するハイブリドーマ
細胞を提供することを目的とする。 【構成】 ヒトトランスフォーミング成長因子β１の完
全アミノ酸配列中の第７８番目から第１０９番目のアミ
ノ酸配列からなるペプチド化合物を抗原として用いるこ
とによって、特異性の高い反応性を有するトランスフォ
ーミング成長因子β１に対するモノクローナル抗体が得
られる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ヒトトランスフォーミ
ング成長因子β１（以下ヒトＴＧＦ−β１）の完全アミ
ノ酸配列中に含まれる１部分のアミノ酸配列からなるペ
プチド化合物に対して特異的に反応することを特徴とす
るＴＧＦ−β１に対するモノクローナル抗体及びそれを
産生するハイブリドーマ細胞に関するものである。
ング成長因子β１（以下ヒトＴＧＦ−β１）の完全アミ
ノ酸配列中に含まれる１部分のアミノ酸配列からなるペ
プチド化合物に対して特異的に反応することを特徴とす
るＴＧＦ−β１に対するモノクローナル抗体及びそれを
産生するハイブリドーマ細胞に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ＴＧＦ−β１はＴＧＦ−βファミリーと
よばれるタンパク質群〔Ｊ．Ｍａｓｓａｇｅ，Ｃｅｌ
ｌ，４９，４３７−４３８（１９８７）〕の中で最初に
発見されたタンパク質であり、分子量約２５，０００、
１１２個のアミノ酸残基で構成されるポリペプチド（分
子量約１２，５００）のホモ２量体である。ＴＧＦ−β
１は、血小板と骨組織中に多く含まれ、動物体を構成す
る細胞の増殖・分化の調節に関与する重要なタンパク質
として注目されている〔Ｍ．Ｂ．Ｓｐｏｒｎ ｅｔａ
ｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３３，５３２−５３４（１９
８６）〕。ＴＧＦ−βは、動物種間でアミノ酸配列が極
めて高く保存されており、例えば、ＴＧＦ−β１におい
ては、わかっているだけでヒト、サル、ウシ、ブタ、ニ
ワトリでは完全に一致、マウスにおいてもわずか１カ所
アミノ酸が違っているにすぎない〔Ｍ．Ｂ．Ｓｐｏｒｎ
ｅｔ．ａｌ．，Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗ
ｔｈＦａｃｔｏｒ−βｓ，Ｋ．Ａ．Ｐｉｅｚ，Ｍ．Ｂ．
Ｓｐｏｒｎ Ｅｄｓ．（Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ａ
ｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ），１−６，
（１９９０）；Ｒ．Ｄｅｒｙｃｋ．ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６１，４３７７−４３７９
（１９８６）〕。
よばれるタンパク質群〔Ｊ．Ｍａｓｓａｇｅ，Ｃｅｌ
ｌ，４９，４３７−４３８（１９８７）〕の中で最初に
発見されたタンパク質であり、分子量約２５，０００、
１１２個のアミノ酸残基で構成されるポリペプチド（分
子量約１２，５００）のホモ２量体である。ＴＧＦ−β
１は、血小板と骨組織中に多く含まれ、動物体を構成す
る細胞の増殖・分化の調節に関与する重要なタンパク質
として注目されている〔Ｍ．Ｂ．Ｓｐｏｒｎ ｅｔａ
ｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３３，５３２−５３４（１９
８６）〕。ＴＧＦ−βは、動物種間でアミノ酸配列が極
めて高く保存されており、例えば、ＴＧＦ−β１におい
ては、わかっているだけでヒト、サル、ウシ、ブタ、ニ
ワトリでは完全に一致、マウスにおいてもわずか１カ所
アミノ酸が違っているにすぎない〔Ｍ．Ｂ．Ｓｐｏｒｎ
ｅｔ．ａｌ．，Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗ
ｔｈＦａｃｔｏｒ−βｓ，Ｋ．Ａ．Ｐｉｅｚ，Ｍ．Ｂ．
Ｓｐｏｒｎ Ｅｄｓ．（Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ａ
ｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ），１−６，
（１９９０）；Ｒ．Ｄｅｒｙｃｋ．ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６１，４３７７−４３７９
（１９８６）〕。
【０００３】ＴＧＦ−β１は繊維芽細胞のコラーゲン形
成を刺激する作用を有しており〔Ｒ．Ｍｏｎｔｅｓｃｏ
ｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８５，４８９４−４８９７（１
９８８）〕、創傷治療薬としての応用が現在検討されて
いる。また、ＴＧＦ−β１は、炎症、癌形成、骨形成、
動脈硬化、免疫抑制等との関与についても注目されてお
り、医学、薬学における研究開発ターゲットとしての重
要性が増している〔石井健久ら、現代化学増刊１８号
「サイトカイン」、１９９−２１２（１９９０）〕。
成を刺激する作用を有しており〔Ｒ．Ｍｏｎｔｅｓｃｏ
ｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８５，４８９４−４８９７（１
９８８）〕、創傷治療薬としての応用が現在検討されて
いる。また、ＴＧＦ−β１は、炎症、癌形成、骨形成、
動脈硬化、免疫抑制等との関与についても注目されてお
り、医学、薬学における研究開発ターゲットとしての重
要性が増している〔石井健久ら、現代化学増刊１８号
「サイトカイン」、１９９−２１２（１９９０）〕。
【０００４】更に、癌患者の尿中にＴＧＦ−βタイプの
活性成分が多量に排泄されるとの報告もなされており
〔Ｒ．Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｐｎ．Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（ＧＡＮＮ），７７，５６０−５
６７（１９８６）〕、癌診断のためのＴＧＦ−β１の定
量、あるいはＴＧＦ−β１の機能解析等に用いることの
できるＴＧＦ−β１に対する抗体の研究も活発に行なわ
れている。例えば、特開平２−１５２９８８号公報に
は、ＴＧＦ−β１の完全アミノ酸配列中に含まれる１部
分のアミノ酸配列からなるペプチド化合物を抗原として
用いて得られる抗血清（ポリクローナル抗体）が報告さ
れている。ＴＧＦ−β１に対する抗血清についての他の
報告としては、Ｌ．Ｒ．Ｅｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．，２６１，１２
３６２−１２３６７（１９８６）；Ｌ．Ｅ．Ｇｅｎｔｒ
ｙ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，
７，３４１８−３４２７（１９８７）；Ｓ．Ｃｈｅｉｆ
ｅｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，４８，４０９−４１
５（１９８７）；Ｋ．Ｃ．Ｆｌａｎｄｅｒｓ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７，７３９−７４
６（１９８８）などがある。
活性成分が多量に排泄されるとの報告もなされており
〔Ｒ．Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｐｎ．Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（ＧＡＮＮ），７７，５６０−５
６７（１９８６）〕、癌診断のためのＴＧＦ−β１の定
量、あるいはＴＧＦ−β１の機能解析等に用いることの
できるＴＧＦ−β１に対する抗体の研究も活発に行なわ
れている。例えば、特開平２−１５２９８８号公報に
は、ＴＧＦ−β１の完全アミノ酸配列中に含まれる１部
分のアミノ酸配列からなるペプチド化合物を抗原として
用いて得られる抗血清（ポリクローナル抗体）が報告さ
れている。ＴＧＦ−β１に対する抗血清についての他の
報告としては、Ｌ．Ｒ．Ｅｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．，２６１，１２
３６２−１２３６７（１９８６）；Ｌ．Ｅ．Ｇｅｎｔｒ
ｙ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，
７，３４１８−３４２７（１９８７）；Ｓ．Ｃｈｅｉｆ
ｅｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，４８，４０９−４１
５（１９８７）；Ｋ．Ｃ．Ｆｌａｎｄｅｒｓ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７，７３９−７４
６（１９８８）などがある。
【０００５】これらに報告された抗体は、いずれもポリ
クローナル抗体であり、抗原に用いたペプチド化合物の
アミノ酸配列のいずれかの部分を認識する多種類の抗体
の混合物である。従って、この抗体を用いて抗原部位を
厳密に分析するのは極めて困難である。更には、ポリク
ローナル抗体はウサギ等の動物を免疫して得られる血清
から取得されるものであり、これを多量に得るには多数
の動物を使用することが必要であり、また同じ性質を有
する抗体が常に得られるとは限らない。従ってポリクロ
ーナル抗体の開発には多くの困難が伴なう。
クローナル抗体であり、抗原に用いたペプチド化合物の
アミノ酸配列のいずれかの部分を認識する多種類の抗体
の混合物である。従って、この抗体を用いて抗原部位を
厳密に分析するのは極めて困難である。更には、ポリク
ローナル抗体はウサギ等の動物を免疫して得られる血清
から取得されるものであり、これを多量に得るには多数
の動物を使用することが必要であり、また同じ性質を有
する抗体が常に得られるとは限らない。従ってポリクロ
ーナル抗体の開発には多くの困難が伴なう。
【０００６】一方、ＴＧＦ−β１に対するモノクローナ
ル抗体の研究に関する報告もなされており、例えば特開
平２−１２６１５７号公報にはヒトＴＧＦ−β１に対す
るモノクローナル抗体が記載されている。また、Ｊ．
Ｒ．Ｄａｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．，１４２，１５３６−１５４１（１９８９）及び
Ｃ．Ｌｕｃａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．，１４５，１４１５−１４２２（１９９０）にも同
様のモノクローナル抗体が報告されている。これらのモ
ノクローナル抗体は、すべてＴＧＦ−βそのもののタン
パクを抗原として用いて得られたモノクローナル抗体で
あり、ＴＧＦ−βタンパクのどの抗原部位を特異的に認
識するかについては不明であり、ＴＧＦ−βに対する反
応特異性の面では十分に満足し得るものではない。
ル抗体の研究に関する報告もなされており、例えば特開
平２−１２６１５７号公報にはヒトＴＧＦ−β１に対す
るモノクローナル抗体が記載されている。また、Ｊ．
Ｒ．Ｄａｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．，１４２，１５３６−１５４１（１９８９）及び
Ｃ．Ｌｕｃａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．，１４５，１４１５−１４２２（１９９０）にも同
様のモノクローナル抗体が報告されている。これらのモ
ノクローナル抗体は、すべてＴＧＦ−βそのもののタン
パクを抗原として用いて得られたモノクローナル抗体で
あり、ＴＧＦ−βタンパクのどの抗原部位を特異的に認
識するかについては不明であり、ＴＧＦ−βに対する反
応特異性の面では十分に満足し得るものではない。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、ヒトＴ
ＧＦ−β１の完全アミノ酸配列中に含まれる１部分のア
ミノ酸配列からなるペプチド化合物を数種類作製し、そ
れらを抗原として用いてモノクローナル抗体を作製し、
それらの反応性について種々検討した結果、ヒトＴＧＦ
−β１の完全アミノ酸配列中に含まれる特定のアミノ酸
配列部分に対して特に高い反応性を有するモノクローナ
ル抗体を得ることに成功し本発明を完成させた。従っ
て、本発明の目的は、ＴＧＦ−β１に対して特異性の高
い反応性を有するモノクローナル抗体及びそれを産生す
るハイブリドーマ細胞を提供することにある。
ＧＦ−β１の完全アミノ酸配列中に含まれる１部分のア
ミノ酸配列からなるペプチド化合物を数種類作製し、そ
れらを抗原として用いてモノクローナル抗体を作製し、
それらの反応性について種々検討した結果、ヒトＴＧＦ
−β１の完全アミノ酸配列中に含まれる特定のアミノ酸
配列部分に対して特に高い反応性を有するモノクローナ
ル抗体を得ることに成功し本発明を完成させた。従っ
て、本発明の目的は、ＴＧＦ−β１に対して特異性の高
い反応性を有するモノクローナル抗体及びそれを産生す
るハイブリドーマ細胞を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明は、ヒトトランス
フォーミング成長因子β１の完全アミノ酸配列中に含ま
れる下記式（Ｉ）に示すアミノ酸配列からなるペプチド
化合物に対して特異的に反応することを特徴とするトラ
ンスフォーミング成長因子β１に対するモノクローナル
抗体に関する。
フォーミング成長因子β１の完全アミノ酸配列中に含ま
れる下記式（Ｉ）に示すアミノ酸配列からなるペプチド
化合物に対して特異的に反応することを特徴とするトラ
ンスフォーミング成長因子β１に対するモノクローナル
抗体に関する。
【化３】 （NH2 側）Cys-Val-Pro-Gln-Ala-Leu-Glu-Pro-Leu-Pro-Ile- Val-Tyr-Tyr-Val-Gly-Arg-Lys-Pro-Lys-Val-Glu- Gln-Leu-Ser-Asn-Met-Ile-Val-Arg-Ser-Cys （COOH側) （Ｉ） 更に本発明は、上記のモノクローナル抗体を産生するハ
イブリドーマ細胞に関する。
イブリドーマ細胞に関する。
【０００９】ヒトＴＧＦ−β１の完全アミノ酸配列は既
に公知であり〔Ｒ．Ｄｅｒｙｎｅｋｅｔ ａｌ．，Ｎａ
ｔｕｒｅ，３１６，７０１−７０５（１９８５）〕、上
記式（Ｉ）に示すアミノ酸配列は、ヒトＴＧＦ−β１単
量体の１１２個のアミノ酸残基からなる完全アミノ酸配
列のうちＮ末端側から数えて７８番目から１０９番目ま
でのアミノ酸配列部分に相当する。本発明のモノクロー
ナル抗体は、この７８番目から１０９番目までのアミノ
酸配列部分からなるペプチド化合物に対して特異的に反
応する性質を有する。他方、７８番目から１０９番目ま
でのうちの８８番目から１０７番目までのアミノ酸配
列、即ち下記式（ＩＩＩ）に示されるアミノ酸配列から
なるペプチド化合物に対しては実質的に反応しない性質
を有する。
に公知であり〔Ｒ．Ｄｅｒｙｎｅｋｅｔ ａｌ．，Ｎａ
ｔｕｒｅ，３１６，７０１−７０５（１９８５）〕、上
記式（Ｉ）に示すアミノ酸配列は、ヒトＴＧＦ−β１単
量体の１１２個のアミノ酸残基からなる完全アミノ酸配
列のうちＮ末端側から数えて７８番目から１０９番目ま
でのアミノ酸配列部分に相当する。本発明のモノクロー
ナル抗体は、この７８番目から１０９番目までのアミノ
酸配列部分からなるペプチド化合物に対して特異的に反
応する性質を有する。他方、７８番目から１０９番目ま
でのうちの８８番目から１０７番目までのアミノ酸配
列、即ち下記式（ＩＩＩ）に示されるアミノ酸配列から
なるペプチド化合物に対しては実質的に反応しない性質
を有する。
【化４】
【００１０】従って、本発明のモノクローナル抗体は、
ヒトＴＧＦ−β１の完全アミノ酸配列中の特に７８番目
から８７番目のアミノ酸配列部分、即ち下記式（ＩＩ）
に示すアミノ酸配列を特異的に認識する性質を有すると
考えられる。
ヒトＴＧＦ−β１の完全アミノ酸配列中の特に７８番目
から８７番目のアミノ酸配列部分、即ち下記式（ＩＩ）
に示すアミノ酸配列を特異的に認識する性質を有すると
考えられる。
【化５】 （NH2 側）Cys-Val-Pro-Gln-Ala-Leu-Glu-Pro-Leu-Pro-（COOH側) （ＩＩ） ヒトＴＧＦ−β１の、この７８番目から８７番目のアミ
ノ酸配列部分は、わかっているだけで、サル、ブタ、ウ
シ、ニワトリ、マウスにおいて一致しているので、これ
ら、ヒト以外のＴＧＦ−β１にも特異的に認識する性質
を有すると考えられる。一方、本発明のモノクローナル
抗体は、ＴＧＦ−β２に対しては実質的に反応性を示さ
ない。ＴＧＦ−β２はＴＧＦ−β１と同様に血小板と骨
組織中に見出され、１１２個のアミノ酸残基で構成され
るポリペプチドのホモ２量体である。ＴＧＦ−β２はＴ
ＧＦ−βファミリーに属するタンパク質であり、ＴＧＦ
−β１とのアミノ酸配列の相同性が７１％である〔Ｒ．
ｄｅ Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，
６，３６７３（１９８７）〕。本発明で得られるモノク
ローナル抗体は、Ｈ鎖はＩｇＧ１、Ｌ鎖はχであるサブ
クラスに属するものである。
ノ酸配列部分は、わかっているだけで、サル、ブタ、ウ
シ、ニワトリ、マウスにおいて一致しているので、これ
ら、ヒト以外のＴＧＦ−β１にも特異的に認識する性質
を有すると考えられる。一方、本発明のモノクローナル
抗体は、ＴＧＦ−β２に対しては実質的に反応性を示さ
ない。ＴＧＦ−β２はＴＧＦ−β１と同様に血小板と骨
組織中に見出され、１１２個のアミノ酸残基で構成され
るポリペプチドのホモ２量体である。ＴＧＦ−β２はＴ
ＧＦ−βファミリーに属するタンパク質であり、ＴＧＦ
−β１とのアミノ酸配列の相同性が７１％である〔Ｒ．
ｄｅ Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，
６，３６７３（１９８７）〕。本発明で得られるモノク
ローナル抗体は、Ｈ鎖はＩｇＧ１、Ｌ鎖はχであるサブ
クラスに属するものである。
【００１１】以上に示したように、本発明のモノクロー
ナル抗体は、特異性の高い反応性を示し、癌診断でのＴ
ＧＦ−β１の定量、ＴＧＦ−β１の機能解析、医薬製造
におけるＴＧＦ−β１のアフィニティークロマトグラフ
ィーへの応用等に利用できる。以下に本発明のモノクロ
ーナル抗体の製造について説明する。本発明のモノクロ
ーナル抗体を製造するために用いる抗原である上記式
（Ｉ）に示されるアミノ酸配列からなるペプチド化合物
は、通常の固相法による化学合成により作製することが
できる。例えば、アプライドバイオシステムズ社製４３
０Ａペプチド合成機により、ペプチド鎖を合成し脱保護
次いで固相からのペプチド鎖の開裂を行ない、高速液体
クロマトグラフィーにより精製することにより上記式
（Ｉ）に示すアミノ酸配列からなる精製ペプチド化合物
を得ることができる。
ナル抗体は、特異性の高い反応性を示し、癌診断でのＴ
ＧＦ−β１の定量、ＴＧＦ−β１の機能解析、医薬製造
におけるＴＧＦ−β１のアフィニティークロマトグラフ
ィーへの応用等に利用できる。以下に本発明のモノクロ
ーナル抗体の製造について説明する。本発明のモノクロ
ーナル抗体を製造するために用いる抗原である上記式
（Ｉ）に示されるアミノ酸配列からなるペプチド化合物
は、通常の固相法による化学合成により作製することが
できる。例えば、アプライドバイオシステムズ社製４３
０Ａペプチド合成機により、ペプチド鎖を合成し脱保護
次いで固相からのペプチド鎖の開裂を行ない、高速液体
クロマトグラフィーにより精製することにより上記式
（Ｉ）に示すアミノ酸配列からなる精製ペプチド化合物
を得ることができる。
【００１２】ペプチド化合物で動物を免疫後、動物から
脾臓細胞を取得する。動物としては、マウス、ラット、
などが使用され、これらの動物への抗原の投与は常法に
従って行なわれる。例えば、完全フロイントアジュバン
ト、不完全フロイントアジュバントなどのアジュバント
とペプチド化合物との懸濁液もしくは乳化液を調製し、
これを動物の静脈、皮下、皮内、腹腔内等に数回投与す
ることによって動物を免疫化する。免疫化された動物か
ら抗体産生細胞である脾臓細胞を取得し、これとミエロ
ーマ細胞とをそれ自体公知の方法〔Ｇ．Ｋｏｈｌｅｒ
ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６，４９５（１９７
５）〕により融合することにより、本発明のハイブリド
ーマ細胞を作製することができる。
脾臓細胞を取得する。動物としては、マウス、ラット、
などが使用され、これらの動物への抗原の投与は常法に
従って行なわれる。例えば、完全フロイントアジュバン
ト、不完全フロイントアジュバントなどのアジュバント
とペプチド化合物との懸濁液もしくは乳化液を調製し、
これを動物の静脈、皮下、皮内、腹腔内等に数回投与す
ることによって動物を免疫化する。免疫化された動物か
ら抗体産生細胞である脾臓細胞を取得し、これとミエロ
ーマ細胞とをそれ自体公知の方法〔Ｇ．Ｋｏｈｌｅｒ
ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６，４９５（１９７
５）〕により融合することにより、本発明のハイブリド
ーマ細胞を作製することができる。
【００１３】使用するミエローマ細胞株としては、マウ
スではＰ３Ｕ１株〔ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓ ｉｎ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ，８１，１−７（１９７８）〕，Ｐ３ｘ６３Ａｇ
８〔Ｎａｔｕｒｅ，２５６，４９５（１９７５）〕など
が挙げられる。細胞融合を行なうに際しては、ポリエチ
レングリコール、センダイウイルスなどの融合促進剤、
細胞融合後のハイブリドーマ細胞の選抜にはヒポキサン
チン・アミノプテリン・チミジン（ＨＡＴ）培地が常法
により使用できる。
スではＰ３Ｕ１株〔ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓ ｉｎ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ，８１，１−７（１９７８）〕，Ｐ３ｘ６３Ａｇ
８〔Ｎａｔｕｒｅ，２５６，４９５（１９７５）〕など
が挙げられる。細胞融合を行なうに際しては、ポリエチ
レングリコール、センダイウイルスなどの融合促進剤、
細胞融合後のハイブリドーマ細胞の選抜にはヒポキサン
チン・アミノプテリン・チミジン（ＨＡＴ）培地が常法
により使用できる。
【００１４】目的とするハイブリドーマ細胞の選別は、
上記式（Ｉ）に示すアミノ酸配列からなるペプチド化合
物を吸着させたマイクロプレートを用いた酵素免疫測定
法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ法（ＲＩＡ）
により実施することができる。このようにして得られる
ハイブリドーマ細胞からモノクローナル抗体を製造する
方法としては、通常の細胞培養法や腹水形成法によりハ
イブリドーマ細胞を培養し、培養上清液あるいは腹水を
通常の精製工程に付すことによって目的とするモノクロ
ーナル抗体を得ることができる。
上記式（Ｉ）に示すアミノ酸配列からなるペプチド化合
物を吸着させたマイクロプレートを用いた酵素免疫測定
法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ法（ＲＩＡ）
により実施することができる。このようにして得られる
ハイブリドーマ細胞からモノクローナル抗体を製造する
方法としては、通常の細胞培養法や腹水形成法によりハ
イブリドーマ細胞を培養し、培養上清液あるいは腹水を
通常の精製工程に付すことによって目的とするモノクロ
ーナル抗体を得ることができる。
【００１５】
【発明の効果】以上に詳述した通り、本発明では特異性
の高いＴＧＦ−β１に対するモノクローナル抗体及びそ
れを産生するハイブリドーマ細胞が提供される。このモ
ノクローナル抗体は癌診断におけるＴＧＦ−β１の定
量、医薬製造の際のＴＧＦ−β１のアフィニテイークロ
マトグラフィー、ＴＧＦ−β１の機能解析等に利用する
ことができる。このモノクローナル抗体は、それを産生
するハイブリドーマ細胞を培養することによって大量に
製造することが可能である。
の高いＴＧＦ−β１に対するモノクローナル抗体及びそ
れを産生するハイブリドーマ細胞が提供される。このモ
ノクローナル抗体は癌診断におけるＴＧＦ−β１の定
量、医薬製造の際のＴＧＦ−β１のアフィニテイークロ
マトグラフィー、ＴＧＦ−β１の機能解析等に利用する
ことができる。このモノクローナル抗体は、それを産生
するハイブリドーマ細胞を培養することによって大量に
製造することが可能である。
【００１６】
１．抗原として用いるペプチド化合物の合成 ヒトＴＧＦ−β１の完全アミノ酸配列（１１２個のアミ
ノ酸残基）のうち、Ｎ末端側からかぞえて７８番目から
１０９番目までの配列の前記式（Ｉ）に示すペプチド化
合物（以下、Ａ７８／１０９ペプチド）を、アプライド
バイオシステム製４３０Ａペプチド合成機により化学合
成した。固相に形成されたペプチドを脱保護、固相から
の切断を行なった後、逆相高速液体クロマトグラフィー
（資生堂製、ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＣ Ｃ18）にて精製
して、高純度Ａ７８／１０９ペプチドを得た。
ノ酸残基）のうち、Ｎ末端側からかぞえて７８番目から
１０９番目までの配列の前記式（Ｉ）に示すペプチド化
合物（以下、Ａ７８／１０９ペプチド）を、アプライド
バイオシステム製４３０Ａペプチド合成機により化学合
成した。固相に形成されたペプチドを脱保護、固相から
の切断を行なった後、逆相高速液体クロマトグラフィー
（資生堂製、ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＣ Ｃ18）にて精製
して、高純度Ａ７８／１０９ペプチドを得た。
【００１７】２．Ａ７８／１０９ペプチド抗原によるマ
ウスの免疫 精製Ａ７８／１０９ペプチドを抗原として、Ｂａｌｂ／
ｃ系マウス（６週令、メス）に対し、計４回免疫を行な
った。初回は、精製Ａ７８／１０９ペプチド５０μｇを
３０μｌのＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）に溶解
し、次に、５０％（Ｗ／Ｖ）のポリビニルピロリドン
（メルク製、平均分子量２５，０００）溶液を６０μｌ
加え、室温で２時間攪拌後、１１０μｌの完全フロイン
トアジュバント（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ
Ａｄｊｕｖａｎｔ、ディフコ製）を混合、乳化し、そ
の溶液をマウスの皮下に投与した。２回目、３回目は、
初回免疫から２週間間隔で行ない、初回免疫と同じ処理
をしたペプチド液に不完全フロイントアジュバント（Ｉ
ｎｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ Ａｄｊｕｖａ
ｎｔ、ディフコ製）を混合、乳化し、その溶液をマウス
の腹腔内に投与した。最終免疫は、２００μｇの精製Ａ
７８／１０９ペプチドを１００μｌのＰＢＳに溶解し、
そのままマウス尾静脈に投与し、その３日後に、免疫し
たマウスの脾臓細胞を細胞融合に用いた。
ウスの免疫 精製Ａ７８／１０９ペプチドを抗原として、Ｂａｌｂ／
ｃ系マウス（６週令、メス）に対し、計４回免疫を行な
った。初回は、精製Ａ７８／１０９ペプチド５０μｇを
３０μｌのＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）に溶解
し、次に、５０％（Ｗ／Ｖ）のポリビニルピロリドン
（メルク製、平均分子量２５，０００）溶液を６０μｌ
加え、室温で２時間攪拌後、１１０μｌの完全フロイン
トアジュバント（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ
Ａｄｊｕｖａｎｔ、ディフコ製）を混合、乳化し、そ
の溶液をマウスの皮下に投与した。２回目、３回目は、
初回免疫から２週間間隔で行ない、初回免疫と同じ処理
をしたペプチド液に不完全フロイントアジュバント（Ｉ
ｎｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ Ａｄｊｕｖａ
ｎｔ、ディフコ製）を混合、乳化し、その溶液をマウス
の腹腔内に投与した。最終免疫は、２００μｇの精製Ａ
７８／１０９ペプチドを１００μｌのＰＢＳに溶解し、
そのままマウス尾静脈に投与し、その３日後に、免疫し
たマウスの脾臓細胞を細胞融合に用いた。
【００１８】３．細胞融合による抗体産生ハイブリドー
マの作製 免疫した脾臓細胞と、同系マウスの骨髄腫細胞（ミエロ
ーマ細胞）であるＰ３Ｕ１株を約５：１〜１０：１の割
合で混合し、５０％（Ｗ／Ｖ）ポリエチレングリコール
溶液（ベーリンガーマンハイム製、細胞融合用、平均分
子量１，５００）を融合促進剤として使用し、常法に従
い細胞融合を行なった。細胞融合後、感作脾臓細胞換算
で５×１０6 ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度になるように１０
％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地（日水製薬製）にヒ
ポキサンチン、アミノプテリン、チミジンを加えた培地
（ＨＡＴ培地）に懸濁し、９６ウエルマイクロプレート
（住友ベークライト製、ＭＳ−８０９６Ｆ）に１ウエル
あたり１００μｌずつ分注した。融合細胞をＣＯ2 イン
キュベーター（３７℃、５％ＣＯ2 、９５％Ａｉｒ）で
培養し、ＨＡＴ培地で増殖可能なハイブリドーマ細胞の
みを選択培養した。融合細胞を分注した４８０ウエル
中、４０４ウエルにコロニー形成が認められた。そこ
で、ハイブリドーマ細胞培養上清中の抗体の有無を確認
するために、ＥＬＩＳＡ法による分析を行なった。
マの作製 免疫した脾臓細胞と、同系マウスの骨髄腫細胞（ミエロ
ーマ細胞）であるＰ３Ｕ１株を約５：１〜１０：１の割
合で混合し、５０％（Ｗ／Ｖ）ポリエチレングリコール
溶液（ベーリンガーマンハイム製、細胞融合用、平均分
子量１，５００）を融合促進剤として使用し、常法に従
い細胞融合を行なった。細胞融合後、感作脾臓細胞換算
で５×１０6 ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度になるように１０
％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地（日水製薬製）にヒ
ポキサンチン、アミノプテリン、チミジンを加えた培地
（ＨＡＴ培地）に懸濁し、９６ウエルマイクロプレート
（住友ベークライト製、ＭＳ−８０９６Ｆ）に１ウエル
あたり１００μｌずつ分注した。融合細胞をＣＯ2 イン
キュベーター（３７℃、５％ＣＯ2 、９５％Ａｉｒ）で
培養し、ＨＡＴ培地で増殖可能なハイブリドーマ細胞の
みを選択培養した。融合細胞を分注した４８０ウエル
中、４０４ウエルにコロニー形成が認められた。そこ
で、ハイブリドーマ細胞培養上清中の抗体の有無を確認
するために、ＥＬＩＳＡ法による分析を行なった。
【００１９】９６ウエルＥＬＩＳＡ用プレート（住友ベ
ークライト製、ＭＳ−３５９６Ｆ／Ｈ）に４００ｎｇ／
ウエルになるように精製Ａ７８／１０９ペプチド液を分
注し、１晩、風乾する。ブロッキング液（雪印製、ブロ
ックエース、４倍希釈液）を１５０μｌ／ウエルで分注
し、３７℃、２０分インキュベーションして、０．０５
％Ｔｗｅｅｎ２０（シグマ製）含有ＰＢＳ（以下ＰＢＳ
−Ｔ）で洗浄後、各ハイブリドーマ細胞培養上清を５０
μｌ／ウエルで分注し、３７℃、１時間インキュベーシ
ョンする。ＰＢＳ−Ｔで洗浄後、第２抗体として、ビオ
チン標識ウマ由来抗マウスＩｇＧ抗体（ベクターラボラ
トリーズ製、２００倍希釈液）を加え、３７℃、２０分
インキュベーションする。ＰＢＳ−Ｔで洗浄後、アビジ
ン標識アルカリフォスファターゼ（ベクターラボラトリ
ーズ製、５００倍希釈液）を加え、３７℃、２０分イン
キュベーションする。最後に、ＰＢＳ−Ｔで洗浄して、
０．０６％ｐ−ニトロフェニルリン酸（和光純薬製）で
３７℃、３０分発色させて、４０５ｎｍの吸光度をマイ
クロプレートリーダー（東ソー製、ＭＰＲ−Ａ４）で測
定し、抗体の有無を判定した。４０４ウエル中、最終的
に抗体陽性となったウエルの細胞を限外希釈法によるク
ローニングを２回繰返して行ない、クローン化ハイブリ
ドーマ細胞を得た。ハイブリドーマ細胞の産生するモノ
クローナル抗体は、１０％ＦＣＳ含有Ｅ−ＲＤＦ培地
（極東製薬製）で培養し、その培養上清をモノクローナ
ル抗体含有液として用いた。
ークライト製、ＭＳ−３５９６Ｆ／Ｈ）に４００ｎｇ／
ウエルになるように精製Ａ７８／１０９ペプチド液を分
注し、１晩、風乾する。ブロッキング液（雪印製、ブロ
ックエース、４倍希釈液）を１５０μｌ／ウエルで分注
し、３７℃、２０分インキュベーションして、０．０５
％Ｔｗｅｅｎ２０（シグマ製）含有ＰＢＳ（以下ＰＢＳ
−Ｔ）で洗浄後、各ハイブリドーマ細胞培養上清を５０
μｌ／ウエルで分注し、３７℃、１時間インキュベーシ
ョンする。ＰＢＳ−Ｔで洗浄後、第２抗体として、ビオ
チン標識ウマ由来抗マウスＩｇＧ抗体（ベクターラボラ
トリーズ製、２００倍希釈液）を加え、３７℃、２０分
インキュベーションする。ＰＢＳ−Ｔで洗浄後、アビジ
ン標識アルカリフォスファターゼ（ベクターラボラトリ
ーズ製、５００倍希釈液）を加え、３７℃、２０分イン
キュベーションする。最後に、ＰＢＳ−Ｔで洗浄して、
０．０６％ｐ−ニトロフェニルリン酸（和光純薬製）で
３７℃、３０分発色させて、４０５ｎｍの吸光度をマイ
クロプレートリーダー（東ソー製、ＭＰＲ−Ａ４）で測
定し、抗体の有無を判定した。４０４ウエル中、最終的
に抗体陽性となったウエルの細胞を限外希釈法によるク
ローニングを２回繰返して行ない、クローン化ハイブリ
ドーマ細胞を得た。ハイブリドーマ細胞の産生するモノ
クローナル抗体は、１０％ＦＣＳ含有Ｅ−ＲＤＦ培地
（極東製薬製）で培養し、その培養上清をモノクローナ
ル抗体含有液として用いた。
【００２０】４．ハイブリドーマ細胞が産生するモノク
ローナル抗体のサブクラスの決定 クローンが産生するモノクローナル抗体のサブクラスを
決定した。方法としては、バイオラッド製マウスタイパ
ーキットを使用し、その取扱説明書に従って決定した。
モノクローナル抗体のサブクラスはＨ鎖はＩｇＧ１、Ｌ
鎖はχであった。このモノクローナル抗体を以後、３Ｈ
１０と呼称する。モノクローナル抗体３Ｈ１０を産生す
るハイブリドーマ細胞を１９９１年６月１２日に微工研
に寄託し受託番号微工研菌寄第１２３０２（ＦＥＲＭ
Ｐ−１２３０２）が付与された。
ローナル抗体のサブクラスの決定 クローンが産生するモノクローナル抗体のサブクラスを
決定した。方法としては、バイオラッド製マウスタイパ
ーキットを使用し、その取扱説明書に従って決定した。
モノクローナル抗体のサブクラスはＨ鎖はＩｇＧ１、Ｌ
鎖はχであった。このモノクローナル抗体を以後、３Ｈ
１０と呼称する。モノクローナル抗体３Ｈ１０を産生す
るハイブリドーマ細胞を１９９１年６月１２日に微工研
に寄託し受託番号微工研菌寄第１２３０２（ＦＥＲＭ
Ｐ−１２３０２）が付与された。
【００２１】５．得られたハイブリドーマ細胞が産生す
るモノクローナル抗体のＡ７８／１０９ペプチドとＡ８
８／１０７ペプチドとの反応性 得られたモノクローナル抗体３Ｈ１０について、抗原に
用いたＡ７８／１０９ペプチドと、この中に含まれるヒ
トＴＧＦ−β１の８８番目から１０７番目までの配列の
前記式（ＩＩＩ）に示すペプチド化合物（Ａ８８／１０
７ペプチド）との反応性を確認した。Ａ８８／１０７ペ
プチドは、実施例１で示した方法と同じ方法で化学合成
し、逆相高速液体クロマトグラフィーにて精製し、高純
度Ａ８８／１０７ペプチドを得た。その反応性は、実施
例３で示したＥＬＩＳＡ法で評価した。その結果、３Ｈ
１０モノクローナル抗体は、Ａ７８／１０９ペプチドに
は強く反応したが、Ａ８８／１０７ペプチドには、反応
しなかつた。その結果を表１に示した。
るモノクローナル抗体のＡ７８／１０９ペプチドとＡ８
８／１０７ペプチドとの反応性 得られたモノクローナル抗体３Ｈ１０について、抗原に
用いたＡ７８／１０９ペプチドと、この中に含まれるヒ
トＴＧＦ−β１の８８番目から１０７番目までの配列の
前記式（ＩＩＩ）に示すペプチド化合物（Ａ８８／１０
７ペプチド）との反応性を確認した。Ａ８８／１０７ペ
プチドは、実施例１で示した方法と同じ方法で化学合成
し、逆相高速液体クロマトグラフィーにて精製し、高純
度Ａ８８／１０７ペプチドを得た。その反応性は、実施
例３で示したＥＬＩＳＡ法で評価した。その結果、３Ｈ
１０モノクローナル抗体は、Ａ７８／１０９ペプチドに
は強く反応したが、Ａ８８／１０７ペプチドには、反応
しなかつた。その結果を表１に示した。
【表１】
【００２２】６．得られたモノクローナル抗体のヒトＴ
ＧＦ−β１及びヒトＴＧＦ−β２との反応性（ＥＬＩＳ
Ａ法） モノクローナル抗体３Ｈ１０を用いて、Ａ７８／１０９
ペプチド、ヒトＴＧＦ−β１、及びヒトＴＧＦ−β２に
対する反応性を確認した。Ａ７８／１０９ペプチド、精
製ヒトＴＧＦ−β１（宝酒造製、ヒト血小板由来）なら
びに、精製ヒトＴＧＦ−β２（ナカライテスク製、ヒト
ガン細胞由来）をＥＬＩＳＡ用マイクロプレートに適当
な濃度（０〜１００ｎｇ／ウエル）で固相化したものと
モノクローナル抗体液とを反応させ、実施例３で示した
ＥＬＩＳＡ法で評価した。その結果、３Ｈ１０モノクロ
ーナル抗体は、Ａ７８／１０９ペプチド、ヒトＴＧＦ−
β１には反応するが、ヒトＴＧＦ−β２にはほとんど反
応しなかった。結果を図１に示した。
ＧＦ−β１及びヒトＴＧＦ−β２との反応性（ＥＬＩＳ
Ａ法） モノクローナル抗体３Ｈ１０を用いて、Ａ７８／１０９
ペプチド、ヒトＴＧＦ−β１、及びヒトＴＧＦ−β２に
対する反応性を確認した。Ａ７８／１０９ペプチド、精
製ヒトＴＧＦ−β１（宝酒造製、ヒト血小板由来）なら
びに、精製ヒトＴＧＦ−β２（ナカライテスク製、ヒト
ガン細胞由来）をＥＬＩＳＡ用マイクロプレートに適当
な濃度（０〜１００ｎｇ／ウエル）で固相化したものと
モノクローナル抗体液とを反応させ、実施例３で示した
ＥＬＩＳＡ法で評価した。その結果、３Ｈ１０モノクロ
ーナル抗体は、Ａ７８／１０９ペプチド、ヒトＴＧＦ−
β１には反応するが、ヒトＴＧＦ−β２にはほとんど反
応しなかった。結果を図１に示した。
【００２３】７．得られたモノクローナル抗体のヒトＴ
ＧＦ−β１との反応性（ウエスタンブロッティング法） 得られたモノクローナル抗体について、ヒトＴＧＦ−β
１に対する反応性について、ウエスタンブロッティング
法で確認した。精製ヒトＴＧＦ−β１をＳＤＳ（ドデシ
ル硫酸ナトリウム、ナカライテスク製）で処理し、同時
に、２−メルカプトエタノールで処理したもの（還元処
理）と、しなかったもの（非還元処理）の２つについ
て、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル（１６％、テフコ
製）電気泳動で分離した〔Ｕ．Ｋ．Ｌａｅｍｍｌｉ，Ｎ
ａｔｕｒｅ，２２７，６８０，（１９７０）〕。泳動
後、Ｔｏｗｂｉｎらの方法〔Ｈ．Ｔｏｗｂｉｎ，ｅｔ．
ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ，７６，４３５０，（１９７９）〕に準じてウエスタ
ンブロッティング法を行なった。用いたモノクローナル
抗体液は実施例３で作製したハイブリドーマ細胞培養上
清を原液のまま用い、検出は、ベクスタインＡＢＣ−Ａ
Ｐキット（ベクターラボラトリーズ製）でおこなった。
その結果、非還元処理ヒトＴＧＦ−β１（分子量約２
５，０００）、および還元処理ヒトＴＧＦ−β１（分子
量約１２，５００）のいずれに対しても、３Ｈ１０は強
く反応した。結果を図２に示した。
ＧＦ−β１との反応性（ウエスタンブロッティング法） 得られたモノクローナル抗体について、ヒトＴＧＦ−β
１に対する反応性について、ウエスタンブロッティング
法で確認した。精製ヒトＴＧＦ−β１をＳＤＳ（ドデシ
ル硫酸ナトリウム、ナカライテスク製）で処理し、同時
に、２−メルカプトエタノールで処理したもの（還元処
理）と、しなかったもの（非還元処理）の２つについ
て、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル（１６％、テフコ
製）電気泳動で分離した〔Ｕ．Ｋ．Ｌａｅｍｍｌｉ，Ｎ
ａｔｕｒｅ，２２７，６８０，（１９７０）〕。泳動
後、Ｔｏｗｂｉｎらの方法〔Ｈ．Ｔｏｗｂｉｎ，ｅｔ．
ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ，７６，４３５０，（１９７９）〕に準じてウエスタ
ンブロッティング法を行なった。用いたモノクローナル
抗体液は実施例３で作製したハイブリドーマ細胞培養上
清を原液のまま用い、検出は、ベクスタインＡＢＣ−Ａ
Ｐキット（ベクターラボラトリーズ製）でおこなった。
その結果、非還元処理ヒトＴＧＦ−β１（分子量約２
５，０００）、および還元処理ヒトＴＧＦ−β１（分子
量約１２，５００）のいずれに対しても、３Ｈ１０は強
く反応した。結果を図２に示した。
【００２４】
【図１】モノクローナル抗体のＡ７８／１０９ペプチ
ド、ヒトＴＧＦ−β１及びヒトＴＧＦ−β２に対する反
応性を示すグラフである。
ド、ヒトＴＧＦ−β１及びヒトＴＧＦ−β２に対する反
応性を示すグラフである。
【図２】モノクローナル抗体のヒトＴＧＦ−β１に対す
る反応性についてのウエスタンブロット分析の結果を示
す写真である。
る反応性についてのウエスタンブロット分析の結果を示
す写真である。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年７月２０日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】モノクローナル抗体のＡ７８／１０９ペプチ
ド、ヒトＴＧＦ−β１及びヒトＴＧＦ−β２に対する反
応性を示すグラフである。
ド、ヒトＴＧＦ−β１及びヒトＴＧＦ−β２に対する反
応性を示すグラフである。
【図２】電気泳動を示す写真であって、具体的にはモノ
クローナル抗体のヒトＴＧＦ−β１に対する反応性につ
いてのウエスタンブロット分析結果を示す写真である。
クローナル抗体のヒトＴＧＦ−β１に対する反応性につ
いてのウエスタンブロット分析結果を示す写真である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (6)
- 【請求項１】 ヒトトランスフォーミング成長因子β１
の完全アミノ酸配列中に含まれる下記式（Ｉ）に示すア
ミノ酸配列からなるペプチド化合物に対して特異的に反
応することを特徴とするトランスフォーミング成長因子
β１に対するモノクローナル抗体。 【化１】 （NH2 側）Cys-Val-Pro-Gln-Ala-Leu-Glu-Pro-Leu-Pro-Ile- Val-Tyr-Tyr-Val-Gly-Arg-Lys-Pro-Lys-Val-Glu- Gln-Leu-Ser-Asn-Met-Ile-Val-Arg-Ser-Cys （COOH側) （Ｉ） - 【請求項２】 請求項１記載の式（Ｉ）に示すアミノ酸
配列中に含まれる下記式（ＩＩ）に示すアミノ酸配列部
分に対して特異的に反応する請求項１のモノクローナル
抗体。 【化２】 （NH2 側）Cys-Val-Pro-Gln-Ala-Leu-Glu-Pro-Leu-Pro-（COOH側) （ＩＩ） - 【請求項３】 トランスフォーミング成長因子β２に対
しては実質的に反応しない請求項１または２のモノクロ
ーナル抗体。 - 【請求項４】 Ｈ鎖はＩｇＧ１、Ｌ鎖はχのサブクラス
に属する請求項１〜３のいずれかのモノクローナル抗
体。 - 【請求項５】 請求項１〜４のいずれかのモノクローナ
ル抗体を産生するハイブリドーマ細胞。 - 【請求項６】 工業技術院微生物工業技術研究所に微工
研菌寄第１２３０２号（ＦＥＲＭ Ｐ−１２３０２）と
して寄託された請求項５のハイブリドーマ細胞。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3150450A JPH0768278B2 (ja) | 1991-06-21 | 1991-06-21 | トランスフォーミング成長因子β１に対するモノクローナル抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3150450A JPH0768278B2 (ja) | 1991-06-21 | 1991-06-21 | トランスフォーミング成長因子β１に対するモノクローナル抗体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06165692A true JPH06165692A (ja) | 1994-06-14 |
| JPH0768278B2 JPH0768278B2 (ja) | 1995-07-26 |
Family
ID=15497200
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3150450A Expired - Fee Related JPH0768278B2 (ja) | 1991-06-21 | 1991-06-21 | トランスフォーミング成長因子β１に対するモノクローナル抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0768278B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100378746B1 (ko) * | 1999-04-09 | 2003-04-07 | 한미약품공업 주식회사 | 체액내 활성 세포증식억제인자-베타1의 정량 방법 및 이를이용한 암 검사 방법 |
| US7151169B2 (en) | 1999-04-30 | 2006-12-19 | Cambridge Antibody Technology Limited | Specific binding members for TGFβ1 |
-
1991
- 1991-06-21 JP JP3150450A patent/JPH0768278B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| BIOCHEMISTY=1988 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100378746B1 (ko) * | 1999-04-09 | 2003-04-07 | 한미약품공업 주식회사 | 체액내 활성 세포증식억제인자-베타1의 정량 방법 및 이를이용한 암 검사 방법 |
| US7151169B2 (en) | 1999-04-30 | 2006-12-19 | Cambridge Antibody Technology Limited | Specific binding members for TGFβ1 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0768278B2 (ja) | 1995-07-26 |
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