JPH0583524B2

JPH0583524B2 -

Info

Publication number: JPH0583524B2
Application number: JP62225664A
Authority: JP
Inventors: Jujiro Shinho; Ritsu Yamazaki; Toshihiro Nohara; Yorihide Kaneshiro; Kajiro Nakajima; Hiroshi Ito
Original assignee: OOTA ISAN KK
Current assignee: OOTA ISAN KK
Priority date: 1987-09-08
Filing date: 1987-09-08
Publication date: 1993-11-26
Also published as: JPS6468318A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、葛植物（Pueraria lobata chwi）
より得られる抽出物又はその中の特定の画分を有
効成分として含有する肝障害の予防改善剤に関す
る。葛は古くから、葛デンプンとして和菓子の原料
に用いられる外、その根及び花はそれぞれ葛根、
葛花と称し、漢方処方中に配合されて来た。特
に、葛根葉、厚生省監修の「一般漢方処方の手引
き」によれば、漢方210の処方中９処方に配合さ
れており、その代表的処方である葛根湯では、葛
根が主薬となつている。一方、葛花は消酒、いわ
ゆる酒毒を解すことを目的とする葛花解醒湯に、
漢方方剤として処方され使用されている。葛植物にはフラボノイド、特に、ダイゼイン、
ゲニステイン、カツカライド等のイソフラボノイ
ド（薬誌79 757 1959）（Chem.Pharm.Bull23
2449 1975）及びサポニン、殊にトリテルペノイ
ドサポニン（Chem.Pharm.Bull.33 1293 1985）
がその主成分として既に見出されている。薬効に
ついては、発汗、解熱、鎮痙作用に関する報告を
主としている。すなわち、解熱作用（日薬理誌33
263 1941）鎮痙作用（薬誌79 863 1959）、血圧
降下作用（中華医誌54 265 1974）、胆汁分泌促
進作用（応用薬理５(2)247 1971）、アドレナリン
β受容器遮断作用（葯学学報15 218 1980）の外
に、摘出臓器に関するムスカリン様作用（応用薬
理５ 247 1971）とパパベリン様作用（Chem.
Pharm.Bull23 1798 1975）などの報告がある。
また、消酒効果に関連する報告としては、塚本、
福田等（Proc.symp.Wakan−Yaku 15 123
1982）（日大医誌42(8)887 1983）により、アルコ
ール代謝に関し、葛花中の成分でもイソフラボン
がアセトアルデヒドの生体内消失を促進すると言
う報告がなされている。このように、漢方における利用に比べて、これ
まで葛植物の薬効の解明はこれまで極めて不十分
であつた。本発明者等は、特に消酒効果に着目し、血中の
アルコール及びアセトアルデヒド量への影響を検
討した結果、意外にも、肝機能障害を予防もしく
は改善する効力が存すること、すなわち、四塩化
炭素誘発性並びに高脂肪食性肝障害に関し、葛根
及び葛花から得られる粗抽出物、殊にフラボノイ
ド及びサポニン並びにそれらの配糖体を比較的多
量に含有している画分が、これら肝機能の障害の
予防、並びに改善の効果を有していることを見出
した。すなわち、本発明は、葛植物の抽出物又はその
抽出物から得られたイソフラボノイド若しくはト
リテルペノイドサポニンを有効成分として含有す
る肝機能障害の予防改善剤を提供するものであ
る。本発明で有効成分として用いられる葛植物の抽
出物やイソフラボノイドやトリテルペノイドは、
例えば以下に示す公知方法により調製することが
できる。すなわち、葛植物の根若しくは花を低級脂肪族
アルコール類又は含水低級脂肪族アルコール類で
抽出を行い、その抽出液を減圧濃縮して抽出エキ
ス（葛花から得られたものを以下PF−MEと略
称）とする。これを水に懸濁し、同量のｎ−ブタ
ノールで分配し、得られたブタノール層をヘキサ
ンで脱脂後さらにｎ−ブタノール、酢酸エチル、
水にて分配を行い、この際生じる沈殿物よりイソ
フラボノイドを得た（葛根から得たものを以下、
PR−IFと略称、葛花から得たものを以下、PF−
IFと略称）、また、酢酸エチル及び水層はセフア
デツクスLH−20等を用いて通常の精製法を行い
トリテルペノイドサポニンを得た（葛花から得た
ものを以下、PF−SPと略称）。水及びｎ−ブタノールで分配し得られる水層部
をダイアイオンクロマトグラフイーで分離後、さ
らにセフアデツクスLH−20カラムクロマトグラ
フイー等で分離を重ねることによつてもイソフラ
ボノイドを得ることができる。なお、PF−IF、
PR−IF及びPF−SPの物性並びにこの成分中に
含有される物質は次のようにして確認することが
できる。まず、PF−IF又はPR−IFはそれぞれ褐白色、
黄白色の無晶形粉末で、無味ないしはわずかに甘
味を有する無臭粉末で、両者ともメタノール、希
メタノールに易溶、水、エタノールに可溶、クロ
ロホルム、エーテル、ヘキサン、四塩化炭素に難
溶である。これらの物質のUV吸収を測定する
と、イソフラボノイド特有の251nm付近の極大吸
収および263〜310nm付近にシヨルダーが観察さ
れた。さらに、これら物質を液体クロマトグラフ
イー等の通常の精製法を行い、PF−IF中よりイ
リソリドン、ゲニステイン、テクトリジン、カツ
カリドン、カツカチン、カツカライドを、PR−
IF中よりダイゼン、ダイジン、プエラリン、PG
−１、PG−３、フオルモノネチンを得た。これ
ら物質はそれぞれ融点、赤外線吸収、薄層クロマ
トグラフイー及びカーボン並びにプロトンNMR
等により物理恒数を測定又は計測することにより
確認された。したがつて、イソフラボノイド中には、一般式()

【化】（式中、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆は、同一又
は異なつて、Ｈ、OH、OMe、グルコース、Ｏ−
グルコース、Ｏ−グルコースキシロースを意味す
る）で示されるイソフラボノイドが含まれていること
が分る。これらイソフラボノイドは何れも文献公知の化
合物である。すなわち、式中、R₁とR₃がOH基、R₂とR₆が
CH₃O基、R₄とR₅がＨである化合物はイリソリド
ンであり、R₁とR₃とR₆がOH基、R₂とR₄とR₆が
Ｈの化合物はゲニステインであり、R₁とR₆がOH
基、R₂がCH₃O基、R₃がＯ−グルコース、R₄と
R₅がＨの化合物はテクトリジンであり、R₁がOH
基、R₂とR₆がCH₃O基、R₃がＯ−グルコース、
R₄とR₅がＨの化合物はカツカリドンであり、R₁
とR₄とR₅がＨ、R₂とR₆がOH基、R₃がCH₃O基
の化合物はカツカチン、R₁がCH基、R₂とR₆が
CH₃O基、R₃がＯ−グルコース−キシロース（以
下、Ｏ−gul.−xyl.と略称）、R₄とR₅がＨなる化
合物はカツカライド、R₁とR₂とR₄とR₅がＨ、R₃
とR₆がOH基の化合物がダイゼインであり、R₁と
R₂とR₄とR₃がＨ、R₃がＯ−グルコース、R₆が
OH基である化合物がダイジンであり、R₁とR₂と
R₅がＨ、R₃とR₆がOH基、R₄がグルコースであ
る化合物がOH基、R₄がグルコースである化合物
がプエラリンであり、R₁とR₂がＨ、R₃とR₅とR₆
がOH基、R₄がグルコースの化合物はPG−１、
R₁とR₂がＨ、R₃とR₆がOH基、R₄がグルコース、
R₅がCH₃O基の化合物はPG−３、R₁とR₂とR₄と
R₅がＨ、R₃がOH基、R₆がCH₃O基の化合物はフ
オルモノネチンとしてそれぞれ知られている。一方、PF−SPは黄白色−褐色の粉末で、わず
かに苦味を有する無臭の粉末で、メタノール、希
メタノールに易溶、水、エタノールに可溶、クロ
ロホルム、エーテル、ヘキサン、四塩化炭素に難
溶である。この物質をさらに、液体クロマトグラ
フイー等の通常の精製法を行いPF−SP中より一
般式()

【化】 CH₃−、又はCH₂OH−基を意味する）で示されるトリテルペノイドサポニン３種、すな
わち３−Ｏ−［α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→
２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→２）−β
−Ｄ−グルクロノピラノシル］ソーヤサポゲノー
ルＢ（式中、R₇とR₈とがCH₂OH基を意味する
もの）、３−Ｏ−［α−Ｌ−ラムノピラノシル（１
→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→２）−
α−Ｄ−グルクロノピラノシル］ソフアラジオー
ル（式中、R₇がCH₃基、R₈がCH₂OH基を意味
するもの）、３−Ｏ−［α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→２）−α−Ｄ−アラビノピラノシン（１→
２）−α−Ｄグルクロノピラノシル］ソフアラジ
オール（式中、R₇がCH₃基、R₈が水素を意味
するもの）を白色無晶形粉末として得た。これはすべて公知
化合物である。これらの成分は後述する薬理試験から明らかな
ように実験的肝障害特に、四塩化炭素誘発性並び
に高脂肪食性の肝機能障害に対し予防および改善
効果を有しており、その効果は現在、肝障害治療
剤として臨床的に頻用されているグリチルリチン
製剤であるネオフアーゲンと比較して、同等若し
くはこれ以上の効果を示している。その上後述す
る通り極めて低毒性である。ところで、肝臓はエネルギー代謝、解毒、栄養
供給、免疫機能発現等多くの機能を司どり、生体
を正常に機能させる為に最も重要な臓器の１つで
ある。一方、肝機能疾患としてはウイルス性肝
炎、肝硬変の外、近年、食生活及び環境の変化に
伴うストレス、並びに飲酒による脂肪肝等があ
り、最後のものの多発は、社会的にも問題視され
ている。しかしながら、肝機能疾患に対する治療
にはウイルス抗体、インターフエロンと言つたウ
イルス性肝炎に対する検討が進められているのに
対比して、肝機能障害の治療及び改善を目的にし
た薬剤は、現状において、実際に臨床で使用に供
している薬剤が少ないにかかわらずその開発は活
発でなく、この治療は現在なお、安静、食事療法
によつている。それ故、葛植物中に含まれる既知
化合物フラノイド又はサポニンを有効成分とする
肝機能障害の予防並びに改善剤に関する本発明は
医療上極めて意義深い。本発明の肝機能障害の予防改善剤としては、殊
にイソフラボノイド又はトリテルペノイドサポニ
ンを有効成分とし、これらに固体もしくは液体の
医薬的に受容できる賦形剤を加えたものが有利で
ある。投与のための剤型としては、通常散剤、錠剤、
乳剤、カプセル剤、茶剤、顆粒剤、液剤（酒精
剤、チンキ剤、流エキス剤、シロツプ剤などを含
む）などの内服の形の他、座薬もしくは注射剤と
して体内に注入して用いてもよい。ここで使用される固体又は液体の賦形剤として
は、当該分野で公知のものが使用される。すなわ
ち、そのいくつかの具体例を列挙すると、散剤そ
の他の内服用粉末について、乳糖、澱粉、デキス
トリン、リン酸カルシウム、合成及び天然ケイ酸
アルミニウム、酸化マグネシウム、乾燥水酸化ア
ルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、乾燥酵
母などがあり、液剤における賦形剤としては、
水、グリセリン、単シロツプ、プロピレングリコ
ール、エタノール、脂肪油、エチレングリコー
ル、ポリエチレングリコール及びソルビトール等
が用いられる。次にイソフラボノイド及びトリテルペノイドサ
ポニンの製造並びに薬理実験の結果を示す。参考例１葛植物からのイソフラボノイド及びトリテルペ
ノイドサポニンの製造葛花を粗切し、その1.85Kgを10のメタノール
で温度80℃で還流抽出する。この操作を４回繰り
返し溶媒を除去しメタノールエキス（PF−ME）
632.8ｇを得、次に、このエキスをｎ−ブタノー
ルと水、各々１で分配し、水層部エキス345.8
ｇ及びブタノール層エキス287.0ｇを得た。この
ブタノールエキスをヘキサンで脱脂後、ｎ−ブタ
ノール、酢酸エチル、水、１対４対５の混液で分
配し、この時に生じる沈殿物通常の精製法に従い
精製し、イソフラボノイド（PF−IF）23.3ｇを
得た、一方、沈殿物以外の画分、水及びブタノー
ル、酢酸エチル画分はさらに、MCI gel
CHP20Pを用い10％〜50％メタノールで流下させ
得られる最初の画分をクロロホルムと水で分配
後、その水層部をボンダパツクC18を用い、ここ
では40％〜70％メタノールで流下させ得られる画
分から以下、通常の方法に従いトリテルペノイド
サポニン（PF−SP）50.0ｇを得ることができた。また、上記水層部エキス345.8ｇからもダイア
イオンクロマトグラフイー、セフアデツクスカラ
ムクロマドグラフイー等、通常の分離精製法を行
うことによつてもPF−IFを得ることもできる。さらに、葛根3.0Kgを粗切し、以下、上記、葛
花の分離法に準拠し操作し得られるブタノール層
エキス63.0ｇよりセフアデツクスLH−20を用い
メタノールで流下させることによつても47.0ｇの
イソフラボノイド（PR−IF）とトリテルペノイ
ドサポニン3.0ｇを得ることができる。次に、本発明の薬剤の肝機能障害の予防並びり
改善作用を以下、実験例を以つて説明する。実験例１四塩化炭素誘発性肝障害試験体重28〜36ｇの７週令ddy系雄性マウスに1.0％
アラビアゴムに懸濁した被検薬物を４日間毎日１
回経口投与し、最終投与後２時間目に動物にオリ
ーブ油に懸濁した四塩化炭素0.05ml／Kgを腹腔内
に投与し、この後24時間目に胸部切開後、心臓よ
り採血し、遠心分離にて血清を分離し、血清中の
GOT及びGPT活性をUV法にて測定した。ここでいう正常群とは被検薬物の代わりにアラ
ビアゴム溶液のみを投与し、四塩化炭素を投与し
ない群を指しまた、対照群とはアラビアゴム溶液
を経口的に、四塩化炭素を腹腔内に投与した群を
意味する。さらに、比較試験として現在、肝機能
疾患の治療薬として臨床で頻用されているグリチ
ルリチン製剤であるネオフアーゲンとの比較試験
を行つた。その結果表１に示す如くである。な
お、抑制率（％）は下記の式によつて算出した。抑制率＝対照群値−被検薬物群値／対照群値−正常群値
×100 この結果より、四塩化炭素誘発性肝障害時に上
昇するGOT値をPF−SP、PF−IF、PR−IF及び
比較試料として用いたネオフアーゲン共に統計的
にも有意に抑制した、中でも、PF−IF及びPR−
IFの効果は抑制率で約40〜50％と顕著で、この
効果は標準薬として用いたネオフアーゲンのそれ
をはるかに凌ぐものであつた。一方、GPT値の
上昇に関しても有意に抑制される傾向は認められ
たが、比較試料も含めて弱い効果であつた。

【表】実験例２高脂肪食誘発性肝障害試験体重28〜36ｇの７週令ddy系雄性マウスに高脂
肪食（薬誌 92 879 1972）を５日間普通に摂取
させると同時に1.0％アラビアゴムに懸濁した被
検薬物をこの間毎日１回経口的に与えた。最終投
与日に試験動物を一夜絶食させ、即ち、試験開始
日より６日目に胸部切開後心臓より直接採血を行
い、以下遠心分離により血清を分離し、この血清
中のGPT活性をUV法にて測定した。ここでいう正常群とは高脂肪食でなく普通食で
飼育し、被検薬物の代わりにアラビアゴムのみを
投与した群を指し、また、対照群とは高脂肪食で
飼育し、被検薬物の代わりにアラビアゴムを経口
的に投与した群を意味する。さらに、比較試験と
して実験例１同様に肝機能疾患治療薬であるネオ
フアーゲンとの比較をおこなつた。その結果は表
２に示すごとくである。なお、抑制率（％）は下
記の式によつて算出した。抑制率＝対照群値−被検薬物群値／対照群値−正常群
値×100 この結果より、高脂肪食誘発性肝障害時に上昇
するGPT値をPF−ME、PF−SP並びにPF−IF
が有意な抑制効果を示し、この効果が比較試験と
して用いたネオフアーゲンに比し、特に、PF−
IFでは投与用量250mg／Kgで抑制率73.0％と比較
試料のそれを、はるかに凌ぐものであつた。次に本発明に関する薬剤の安全性を知る目的で
PF−ME、PF−SP、PF−IF及びPR−IFの経口
投与での急性毒性試験をddy−系雄性マウスを用
いて行つた。その結果、PF−ME10000mg／Kg、
他の３種薬剤は3000〜5000mg／Kg、で72時間以内
における死亡内における死亡例は全く認められな
かつた。これらの結果は本発明の薬剤が有効量を
考慮するとき極めて毒性が低く安全性の高い肝機
能障害改善及び予防剤であることを示すものであ
る。次に、人間に対する有効投与量は、これまでの
肝機能障害予防並びに改善作用及び急性毒性試験
等から考えて、その有効投与量は患者の年齢、体
重、疾患の程度によつて異なるが、通常成人で１
日量として、PF−MEで4000〜16000mg、殊に
5000〜10000mg、PF−SPで250〜1000mg、殊に
300〜600mg、PF−IFで50〜200mg、殊に60〜120
mg、PR−IFで60〜240mg、殊に80〜160mgを症状
に合わせて１日３〜４回に分けて経口的服用が適
当である。

【表】ることを示す。
さらに、以下、実施例により本発明を具体的に
説明する。それらの例は本発明をより詳細に説明
するものであつて、決してそれら記載により限定
されるものではない。実施例１ (a) 顆粒の製造法 PF−IF又はPR−IF10ｇを細末とし、これに、
それぞれ乳糖139ｇおよびステアリン酸マグネシ
ウム１ｇを混合、この混合物を打錠して直径20mm
のスラツク錠とする。これを粉砕、整粒、篩別し
て20〜50メツシユの顆粒剤を得た。なお、この顆粒剤は症状に合わせて、１回量
100〜270mg（PF−IF又はPR−IFとして20〜54mg
に相当）で、１日３〜４回服用できる。 (b) カプセル剤の製造法上記の顆粒剤もしくはそれを細末としたもの
125mgをNo.３のゼラチンカプセルに充填してカプ
セル剤を得た。なお、本カプセル剤は、症状に合わせて、１回
１〜２カプセル、１日３回まで服用できる。さらに、PF−ME並びにPF−SPに就いても、
上記製造法に従い顆粒剤、カプセル剤を作製し服
用することができる。実施例２ PF−IF又はPR−IF10ｇを細末とし、これをそ
れぞれ乳糖88ｇ、微結晶セルロース20ｇ及びステ
アリン酸マグネシウム７ｇと混合し、この混合物
を単発式打錠にて打錠して径７mm、重量125mgの
錠剤を製造した。なお、本錠剤は、１錠中にPF−IF又はPR−IF
を10mg含有する。本錠剤は１回２〜３錠を１日３
〜４回服用することができる。さらに、PF−ME並びにPF−SPに就いても、
上記製造法に従い錠剤を作製し服用することがで
きる。

Claims

【特許請求の範囲】１葛植物の抽出物又はその抽出物から得られた
イソフラボノイド若しくはトリテルペノイドサポ
ニンを有効成分として含有する肝機能障害の予防
改善剤。２経口的又は非経口的に投与する特許請求の範
囲第１項記載の肝機能障害の予防改善剤。