JP4777495B2 - アルコール障害予防剤およびそれを含有する食品 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、摂取されたアルコールの体内への吸収を抑制することにより、アルコールそのものまたはその代謝物によって惹起される種々の疾病を予防しかつそれらの症状を緩和し得る、副作用の発現頻度が少ないアルコール障害予防剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
アルコール飲料やアルコール含有食品として経口的に摂取されたアルコールは、胃、十二指腸、小腸を主体とする消化管を通じて吸収された後、血液を通じて全身へ運搬される。体内に吸収されたアルコールの大半（通常、全体の約９０％）は、肝臓において代謝される；先ず、アルコールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ）が補酵素のニコチン酸アミドアデニンジヌクレオチドリン酸還元物（ＮＡＤＰＨ）やニコチン酸アミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）と共に作用し、その結果、酸化体である有害なアセトアルデヒドを産生する。次いで、産生されたアセトアルデヒドは、アルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ）とＮＡＤの作用により酢酸に酸化され、最終的に、水と二酸化炭素に変換され、呼気と共に体外へ排出される。
【０００３】
アルコールの体内への吸収速度は、デンプン、タンパク質および脂質などの栄養素に比べて非常に速く、血液を介して全身の組織へと拡散していくと同時に毛細血管の拡張作用も及ぼし、さらには顔面や上腕部の紅潮が惹起される。
血液を介して全身の組織へと拡散したアルコールは、血液脳関門を速やかに通過して大脳皮質へと到達し、その結果、感情や情動の変化、すなわち銘酊状態を引き起こす。酩酊状態の発現には、アルコールの直接作用のほか、その代謝物であるアセトアルデヒドや電解質とのバランス、生体アミン等が複雑に関係しているものと考えられている。中でも、人体に対し毒性および薬理作用が強いアセトアルデヒドは、二日酔いの気分不快感、頭痛の原因物質でもある。
【０００４】
アルコールの過剰摂取は、例えば、以下のような多くの臓器障害をもたらし得る。
（１）上部消化管（例えば、胃や十二指腸）において認められる消化器潰瘍：
これはアルコールの過剰摂取による臓器障害の最も典型的な例であり、粘膜侵害、防御因子である粘液分泌能の低下および胃粘膜血流量の低下が原因とされている。
（２）肝障害および肝障害の悪化促進：
アルコールの代謝によって産生されるアセトアルデヒドにより肝細胞内のミトコンドリアや微小管に障害が生じ、さらにはクッパー細胞や単球に作用したアセトアルデヒドによって炎症因子である活性酸素や一酸化窒素の産生が促進される。
（３）肝硬変：
クッパー細胞や単球から産生されるサイトカインが伊東細胞や類洞内皮細胞からのＩＶ型コラーゲンの産生を促進することに起因する。
（４）高脂血症や脂肪肝：
アルコールデヒドロゲナーゼが作用するのと同時に産生されるＮＡＤＨの蓄積によって、キサンチンオキシダーゼによる脂質の代謝経路が阻害されることに起因する。
【０００５】
前記のような臓器障害に対する治療薬の例として、消化器潰瘍（１）の治療には、シメチジン（「Cimetidine」）をはじめとするＨ２ブロッカー、プロトンポンプ阻害剤のオメプラゾール、粘膜保護剤のセトラキセートやスクラルファート、さらには抗コリン剤が適用されるが、これらは、血液中の顆粒球や血小板数の減少、ＧＯＴおよび／またはＧＰＴ検査値の上昇等の副作用を誘発し得る。
前記合成医薬品に比べて副作用が少ない天然物を使用した抗潰瘍剤としては、生薬のモッコウ（木香）由来のデヒドロコスツスラクトンおよびポリエチレングリコールを含有する製剤（特開平７−１３８１５７号公報）が研究されている。
【０００６】
また、肝障害（２）〜（４）に対する治療薬としては、アセトアルデヒドのトラップ剤や毒性軽減剤あるいは代謝促進剤などが種々報告されている。それらの例としては、D-penicillamineやL-methionine、さらにはclofibrate、γ-linolenic acid等が挙げられるが、いずれも合成製剤であり、また多種の副作用も誘発され得る。
【０００７】
他方、アルコールの過剰摂取は、前記のような臓器障害のみならず、前述のような酩酊状態から進行してアルコール依存症や中毒、強いてはアルコール精神病のような神経障害を引き起こすこともある。
アルコール依存患者に処方される飲酒防止剤としては、例えばジスルフィラムが挙げられる。このような飲酒防止剤は、アルコール摂取前に投与されると、アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼを阻害してアセトアルデヒドを蓄積させて、頭痛や気分不快感を誘発させることにより、アルコールの過剰摂取を予防できるが、体内へのアルコール吸収抑制作用は持たない。
【０００８】
体内へのアルコール吸収抑制作用を発現し得る製剤としては、アルコール自体とアセトアルデヒドの両者の毒性による生体への不都合な作用を低下させるために使用されるものである。このような製剤の例としては、体内へのアルコール吸収を抑制して、血中アルコール濃度を低下させることを目的とした茶サポニンおよび／またはキラヤサポニン含有アルコール吸収抑制剤（特開平４−１４５０２８号公報）；およびタラノキ、チクセツニンジン、セネガ、ムクロジ、セイヨウトチノキから抽出されたオレアノール酸（oleanolic acid）、プレセネゲニン（presenegenin）、ヘデラゲニン（hederagenin）および／またはプロトエシゲニン（protoaescigenin）をサポゲニンとする配糖体を含有するアルコール吸収抑制剤（特開平７−５３３８５号公報）等が挙げられる。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、摂取されたアルコールそのものまたはその代謝物が体内に吸収されるのを抑制して臓器障害および／または神経障害を予防するかまたはそれらの諸症状を緩和するためのアルコール障害予防剤であって、副作用の発現頻度がより少なく、かつより少ない投与量で効果を発揮し得るアルコール障害予防剤を提供することである。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
クスノキ科Lauraceaeの月桂樹（学名Laurus nobilis）は、特に小アジアから地中海諸国の日当たりの良い肥沃な土壌において広く栽培されている植物である。月桂樹の葉は、通常、ローレル、ローリエまたはベイリーフ等の名前で知られており、料理用のハーブや香辛料、特にブーケガルニとして使用されている。西洋諸国では、防腐、興奮、消化機能促進および芳香性健胃を目的とした民間治療薬として用いられるほか、入浴剤、発毛剤、さらにはリュウマチの痛みを軽減するための外用剤としても使用されている。
月桂樹の葉には、ピネン（pinene）、ボルネオール（borneol）をはじめとするモノテルペノイド；コスツノライド（costunolide）、デヒドロコスツスラクトン（dehydrocostuslactone）、β−オイデスモール（β-eudesmol）等のセスキテルペノイド；およびリグナン、フラボノイド、フェニルプロパノイドが含有されていることが種々の先行技術文献より既知である。
また、薬理学的見地において、天然物である月桂樹の種子からの抽出物が、ラットのエタノール誘発潰瘍を抑制し[Afifi F. V.ら著、J.Ethnopharmacol.、５８、第９〜１４頁（１９９７年）]、また月桂樹の葉からの抽出物は、ウサギにおける糖吸収を抑制し得ること[Gurman E.G.ら著、Fiziol Zh SSSR Im I M Sechenova、７８、第１０９〜１１６頁]が報告されている。
【００１１】
本発明者らは、クスノキ科の植物である月桂樹の葉の粉砕物を用い、齧歯類に対するアルコール吸収抑制作用を研究したところ、前記粉砕物からの脂溶性溶媒抽出物（特にメタノールまたはエタノール抽出物）および前記抽出物からの更なる脂溶性フラクションがいずれもγ−ラクトン環を有するセスキテルペン類を含有すること、およびそれらセスキテルペン類がアルコール吸収抑制活性を発現し得ることを見出した。
【００１２】
本発明者らは、他のクスノキ科の植物であるシンナモマム・カシア、デンダイウヤクおよびクロモジの一部位の粉砕物およびその脂溶性溶媒抽出物についても同様の評価を行なったところ、いずれもアルコール吸収抑制作用を発現し得ることも見出した。
従来から、アルコール吸収抑制作用を発現する天然物としてはサポニン含有植物が既知であるが、月桂樹をはじめとする前記クスノキ科植物からサポニン類を単離したという報告が未だなされていないことや、サポニン類は通常、高い水溶性を示すため、脂溶性溶媒には不溶であることなどから、サポニン類以外のアルコール吸収抑制作用に有効な成分の存在を前記クスノキ科植物の一部位中に確認した。
【００１３】
本発明者らは、更に研究を重ねた結果、前記セスキテルペン類が、α−置換されたγ−ブチロラクトン基を有するセスキテルペン類およびその誘導体の形態である場合に、より高いアルコール吸収抑制作用を表すという新たな知見を見出し、本発明を達成するに至った。
【００１４】
すなわち、本発明の第１態様は、クスノキ科の植物の一部位（特に好ましくは月桂樹の葉）の粉砕物またはその脂溶性溶媒抽出エキスを含有するアルコール障害予防剤である。特に好ましくは、前記脂溶性溶媒抽出エキスが、アルコール吸収抑制作用を発現し得る、α−置換されたγ−ブチロラクトン基を有するセスキテルペン類およびその誘導体を含有するものである。
本発明の第２態様のアルコール障害予防剤は、月桂樹以外の他のクスノキ科の植物の一部位として、例えば、シンナモマム・カシア（Cinnamomum cassia）およびその同属植物の樹皮（すなわちケイヒ）、テンダイウヤクの根またはクロモジの幹から選ばれるものを使用し、それらを、粉砕物またはその脂溶性溶媒抽出エキス、あるいは、それらに含まれるα−置換されたγ−ブチロラクトン基を有するセスキテルペン類またはその誘導体のいずれかの形態で含有することを特徴とする。
本発明は、第３態様として、上記クスノキ科の植物の一部位の粉砕物またはその脂溶性溶媒抽出エキスと共に、サポニン含有植物の一部位またはそれから得られる脂溶性溶媒抽出エキス、その脂溶性溶媒抽出エキスの粗サポニンフラクションあるいはそれらからの単離精製物も含有するアルコール障害予防剤も提供する。
さらに、本発明は、更なる態様として、前記アルコール障害予防剤を含有する食品も提供する。
【００１５】
【発明の効果】
本発明のアルコール障害予防剤は、飲酒やアルコール含有食品の摂取前に服用することにより、消化管からのアルコール吸収が抑制されて、血中アルコール濃度の上昇抑制、強いてはそれにより惹起される潰瘍やガンなどの胃腸管障害、肝疾患（例えば、アルコール性肝炎、脂肪肝、肝ガン）、糖尿病、高脂血症の発症、さらにはアルコール依存症または中毒症の発症も予防できる。
本発明のアルコール障害予防剤は、天然物由来であることから臨床で通常用いられている合成医薬品に比べて副作用の発現頻度が著しく低いため、より安全である。また薬効発現能力、すなわち体内へのアルコール吸収抑制作用が非常に高いことからより少量の投与量で効果を発揮するものである。
本発明のアルコール障害予防剤は、従来既知のサポニン含有植物の有効部分またはそれから得られる抽出エキス、該抽出エキスのフラクションあるいはそれらからの単離精製物をも含有することにより、体内へのアルコール吸収抑制作用をさらに増強できる。
本発明は、前記アルコール障害予防剤を含有する食品として提供され得ることから、患者が簡易に経口摂取できる。
【００１６】
【発明の実施の形態】
本発明のアルコール障害予防剤は、クスノキ科の植物の一部位の粉砕物またはそれから得られる脂溶性溶媒抽出エキスを含有するものである。特に好ましくは、本発明のアルコール障害予防剤は、前記脂溶性抽出エキスから単離・精製される、式：
【化３】
（式中、Ｒ1は、メチル基またはメチレン基を表す。）
で表されるα−置換されたγ−ブチロラクトン基を有するセスキテルペン類およびその誘導体を含有する。前記誘導体は、式：
【化４】
（式中、Ｒ1は、メチル基またはメチレン基を表す。）
で表されるα−置換されたγ−ブチロラクトン還元型基を有するものであってよい。
【００１７】
本発明の第１の態様としては、クスノキ科の植物の一部位として、月桂樹の葉を使用する。
【００１８】
前記α−置換されたγ−ブチロラクトン基を有するセスキテルペン類およびその誘導体は、例えば以下の手順で得ることができる。
先ず、月桂樹の乾燥葉の粉砕物を、有機脂溶性溶媒（特に、メタノールやエタノール）中で、好ましくは１０〜３０℃において２４〜３６時間冷浸抽出した後、溶媒を蒸発させて脂溶性溶媒抽出エキスを得る。溶媒蒸発は、特に好ましくは、４５℃以下の温度において減圧下（特に、９０〜１８０ｍｍＨｇ以下）で行なわれる。
次に、得られた脂溶性溶媒抽出エキスを、体積比１：１の酢酸エチル／水混合液を用いて酢酸エチル層および水層に分離し、その酢酸エチル層を、ヘキサン／酢酸エチル（＝３０／１〜０／１００(v/v)）混合溶媒をキャリアーとして使用する順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー法に付する。有効成分を含むフラクションを、カラムクロマトグラフィー法に付し、その後、さらに高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法に付すことにより、所望のα−置換されたγ−ブチロラクトン基を有するセスキテルペン類が単離・精製できる。
【００１９】
本発明において、カラムクロマトグラフィー法では、好ましくはChromatorexＯＤＳカラムを用い、またキャリアーとしてメタノール系溶媒、特に、メタノール／水＝６０／４０〜１００／０(v/v)混合溶媒系を好ましく使用する。さらに、後続するＨＰＬＣ法では、好ましくはＣ１８系カラムを用い、かつキャリアーとしてメタノール系溶媒、詳しくは、メタノール／水＝５０／５０〜８０／２０(v/v)混合溶媒系を好ましく使用する。
【００２０】
上記のような方法で単離・精製されるα−置換されたγ−ブチロラクトン基を有するセスキテルペン類の具体例としては、コスツノライド（１）、サンタマリン（２）、デヒドロコスツスラクトン（３）、エレマンチン（４）、ザルザニンＣ（５）、スピラフォライド（６）、マグノリアライド（７）、ザルザニンＤ（８）、レイノシン（９）、3-α-アセトキシオイデスマ-1,4(15),11(13)-トリエン-12,6-α-オライド（１０）、3-オキシオイデスム-6βH-1,4,11-トリエン-6,13-オライド（１１）等が挙げられる。以下にこれら化学種の化学式を表す。
【化５】
【００２１】
本発明では、上記α−置換されたγ−ブチロラクトン基を有するセスキテルペン類を、更に転化することによって得られる誘導体の形態で使用してもよい。
本発明のアルコール障害予防剤には、より高いアルコール吸収抑制作用を発現することから、例えばデヒドロコスツスラクトン（３）の誘導体、特にγ-ラクトン環またはアセタール環を有する還元体(3b)または(3c)の形態が特に好ましく例示される。以下のスキームＩに、デヒドロコスツスラクトン（３）からの誘導体の調製を示す。
【化６】
【００２２】
上記スキームＩにおいて、11α-メチル-6,12-ジオール誘導体（３ａ）は、デヒドロコスツスラクトン（３）を、テトラヒドロフラン溶媒中、０℃で水素化アルミニウムリチウム（ＬｉＡｌＨ4）で処理することにより得られる。あるいは、デヒドロコスツスラクトン（３）をメタノール溶媒中、０℃において水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ4）で還元した後、クロマトグラフィーに付することにより、モッコラクトン（３ｂ）、11α-メチル-ラクトール混合物（３ｃ、α体とβ体とのモル比＝１：１）および11α-メチル-12-メチレン誘導体（３ｄ）をそれぞれ単離することができる。
ただし、上記スキームＩ中、11α-メチル-6,12-ジオール誘導体(3a)（未環化ラクトン体）および11α-メチル-12-メチレン誘導体(3d)（脱ケトン還元体）はいずれも、本発明における特徴的な官能基（γ−ラクトン環基またはアセタール環基）を有しないことから、本発明の好ましい誘導体には包含されない。
【００２３】
本発明のアルコール障害予防剤は、前記クスノキ科の植物の一部位（例えば、月桂樹の葉の粉砕物）を、成人の場合、１回の服用量につき少なくとも２５０ｍｇ、好ましくは５００〜２,５００ｍｇの量で含有し、より好ましくは、上述の手順により得られる脂溶性溶媒抽出エキスを、成人の場合、１回の服用量につき少なくとも５０ｍｇ、好ましくは１００〜５００ｍｇの量で含有する。
本発明のアルコール障害予防剤において、前記α−置換されたγ−ブチロラクトン基を有するセスキテルペン類およびその誘導体を特徴的な成分とする場合、成人の場合、１回の服用量につき、少なくとも５ｍｇ、好ましくは２５〜５０ｍｇの量で使用する。
【００２４】
本発明の第２の態様において、使用するクスノキ科の植物の一部位は、前述の月桂樹の葉に限定されるものではなく、例えば、シンナモマム・カシアおよびその同属植物の樹皮（すなわちケイヒ）、テンダイウヤクの根、クロモジの幹等であってもよい。本発明では、いずれの植物の一部位を用いる場合においても、より好ましくは、その粉砕物またはその脂溶性溶媒抽出エキスおよびそのフラクションあるいはそれらからの単離精製物の形態で使用する。
【００２５】
ここで、ケイヒ（Cinnamomi cortex）は、Cinnamomum cassiaの樹皮であり、中国、ベトナムなどで栽培されている。ケイヒは、ケイアルデヒドを含有し、特有の香味を持つことから、スパイスや菓子の原料として使用されている。また、ケイヒは、日本薬局方にも収載されており、芳香性健胃薬や漢方方剤の処方に広く用いられている。
【００２６】
テンダイウヤク（Lindera strychnifolia）は、中国の浙江省天台を主な産地とする植物であり、通常、その根部分を乾燥して使用する。テンダイウヤクは、精油類を含むことから、漢方では、芳香性健胃薬、鎮痛、鎮座薬として用いられている。本発明においても、根部分を使用する。
【００２７】
クロモジ（Lindera umbellata）は、漢名を烏樟または釣樟と呼ばれ、漢方では、その根皮や樹皮を胃腸カタル、胃潰瘍、脚気、浮腫の治療薬として用いている。また、枝を折ると特有の芳香を発することから、枝葉は石鹸などの香料に使用されている。本発明では、幹部位を使用する。
【００２８】
前記クスノキ科植物は、生薬市場において一般に流通しているものを表記したものであり、また、前記植物の一部位も同様に、例示であって、本発明はこれらに限定されるものではない。
本発明では、上記植物の該当部分を、当該分野において通常使用される粉砕手段によって微粉砕した形態で使用される。あるいは、前記月桂樹の葉について記載したのと同様の抽出溶媒・方法を用いて、抽出エキスを作製し、使用することもできる。
【００２９】
本発明のアルコール障害予防剤は、製剤全重量に対し、クスノキ科植物の一部位から得られる有効な脂溶性溶媒抽出エキスを、成人の場合、１回の服用量につき少なくとも５０ｍｇ、好ましくは１００〜５００ｍｇの量で含有し得る。
【００３０】
本発明のアルコール障害予防剤は、そのアルコール吸収抑制作用を高めるために、さらにトンブリ、タラノキの芽および樹皮、チクセツニンジンの根、セネガの根、ムクロジの果皮、セイヨウトチノキの種子から選ばれるサポニン含有植物の一部位またはそれから得られる脂溶性溶媒抽出エキスまたはその粗サポニンフラクションあるいはそれらからの単離精製物を含有していてもよい。
【００３１】
トンブリは、ヨーロッパ原産のアカザ科ホウキギ(Kochia scoparia)の果実であり、主に中国および日本国内では秋田県で栽培されており、国内では、「畑のキャビア」という触込みで食品として市販されている。トンブリ（ホウキギの種子）は、momordin Icを初めとするトリテルペン配糖体のサポニンを含有し、乾燥品は、中国で地膚子(ジフシ：Kochiae fructus）という生薬として用いられている。
【００３２】
タラノキ（Arallia elta SEEM）は、ウコギ科の植物で、国内では主に芽の部分が食用に利用されている。これは、elatoside Ｉ等のサポニンを含有する。本発明では、芽部分を使用するが、所望により樹皮および根皮も包含してよい。
【００３３】
チクセツニンジン（Panax phizome）は、ウコギ科の植物トチバニンジン（Panax japonicus）の根茎を加工した生薬で、chikusetsu saponin類を含有する。福井県、長野県、山形県等で栽培されており、日本薬局方においては、健胃薬として用いられている。本発明では、その根部分を使用する。
【００３４】
セネガは、ヒメハギ科の植物で、一般にセネガ（Polygala senega Linne）またはヒロハセネガ（Polygala senega Linne var. latifoloa Torrery et Glay）の根のことを指す。去痰薬の原料として北アメリカで、また国内では北海道や兵庫県で栽培されており、日本薬局方のセネガシロップにも配剤されている。presenigeninをゲニンとするトリテルペンサポニンであるsenegin-等を含有する。本発明では、根部分を使用する。
【００３５】
ムクロジ（Sapindus mukurossi）は、ムクロジ科の植物で、別名Japanese Soapnut Treeとも呼ばれる。これは、hederageninをアグリコンとするサポニンのsapindoside類を含み、去痰薬として用いられる。本発明では、その果皮を使用する。
【００３６】
セイヨウトチノキ（Aesculus hippocastanum）は、escin-Iaをはじめとするサポニンを含有し、ヨーロッパでは、抗炎症剤の原料として使用されている。本発明では、その種子を使用する。
【００３７】
前記サポニン含有植物の一部位は、そのままの形態で使用される場合、好ましくは、十分に乾燥させた後、当該分野において通常使用される粉砕手段により微粉砕した形態で使用される。
【００３８】
次に、上記サポニン含有植物の一部位からの抽出エキスまたはそのフラクションの抽出方法および単離・精製方法を以下に示す。
【００３９】
サポニン含有植物の粉砕物を、有機溶媒、最も好ましくはメタノール中で、７０〜９０℃の温度において、３〜９時間還流抽出を行なった後、溶媒を減圧下（約１８０ｍｍＨｇ）で、留去することにより、脂溶性溶媒抽出エキスを得る。これを水に分散させて、酢酸エチルで洗浄した後、ｎ-ブタノールで粗サポニン類を含むフラクションを得る。続いて、このフラクションを、逆相シリカゲカラムクロマトグラフィー（キャリアー；メタノール／水＝３０／７０（v/v））によって分画することにより、所望のサポニンフラクションが単離精製され得る。
【００４０】
本発明のアルコール障害予防剤は、前記サポニン含有植物の粉砕物を、１回の服用量につき少なくとも２００ｍｇ、好ましくは５００〜１,０００ｍｇの量で含有し得る。あるいは、前記粉砕物から得られる抽出エキスまたはその粗サポニンフラクションあるいはそれらからの単離精製物を、成人の場合、１回の服用量につき５〜２００ｍｇ、好ましくは２５〜１００ｍｇの量で含有し得る。
【００４１】
本発明のアルコール障害予防剤は、錠剤、顆粒剤、細粒剤、カプセル剤等の剤型で投与することができる。
【００４２】
本発明のアルコール障害予防剤の投与量は、年齢、症状等によって変化し得るが、例えば、成人における有効量は、１回につき、５０〜１,０００ｍｇ、好ましくは５０〜５００ｍｇであって、これを食前30分位に１日３回服用するのが好ましい。
【００４３】
さらに、本発明は、第２の態様して、前記アルコール障害予防剤を含有する食品も提供する。添加し得る食品の種類には、特に限定はないが、該植物には特有の風味があるため、例えば、ドリンク剤等の飲料やキャンディ等の甘味の強い食品に添加することが好ましい。
このような飲食物におけるアルコール障害予防剤の添加量は、対象食品の種類に応じ、食品本来の味を損なわない範囲で添加すればよく、通常対象食品に対し、０.０１〜１重量％の範囲で添加すればよい。
【００４４】
【実施例】
以下の実施例により、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に不当に限定されるものではない。
【００４５】
本明細書における調製例および実施例で単離・精製された化合物はいずれも、炭素１３（13Ｃ）および水素（1Ｈ）核磁気共鳴、質量分析、赤外線および紫外線吸収スペクトルおよび施光度を測定し、それら測定値を文献値と比較することにより同定を行ない、各化学構造を確認した。
【００４６】
調製例１
月桂樹の乾燥葉５kgを細かく刻み、そこへメタノール１.５〜５.０ｋｇ添加し、２５℃において３６時間、冷浸抽出した。次いで、それを濾過した。濾液を、４５℃以下の温度で減圧下（１８０ｍｍＨｇ以下）、メタノールを完全に留去して、メタノール抽出エキス９９９ｇを得た。
【００４７】
調製例２
月桂樹の乾燥葉１ｋｇを用い、溶媒としてエタノールを用いたこと以外は、上記と同様にしてエタノール抽出エキス６９ｇを得た。
【００４８】
調製例３
調製例１で得たメタノール抽出エキス３６６ｇを、酢酸エチル／水（＝１／１(v/v)）混合液を用いて分配した後、得られた酢酸エチルフラクションを、ヘキサン／酢酸エチル（＝３０／１〜１／１(v/v)）混合キャリアーを用いてシリカゲルカラムに通してカラムクロマトグラフィーを行ない、酢酸エチルフラクションをさらに分画して１１のフラクションを得た。その中で、セスキテルペン類含有フラクションであるフラクション＃４と＃７をさらにＨＰＬＣにより精製した。
【００４９】
前記フラクション＃４（２３.３ｇ）を、Chromatorex ＯＤＳカラム[フジシリシア社製、キャリアー；メタノール／水（＝７０／３０(v/v)）]により、逆相カラムクロマトグラフィーを行なった。溶離した粗フラクションを、次いで、ナカライテスク社製ＨＰＬＣ[Cosmosil ５Ｃ１８カラム、キャリアー；メタノール／水（＝６５／３５(v/v)）]を用いて精製することにより、γ-ラクトン環を有するセスキテルペン類として、コスツノライド(1)（収量：７６７ｍｇ）を単離・精製した。
【００５０】
調製例４
調製例３で得たセスキテルペン類含有フラクション＃４（２３.３ｇ）を、調製例３とは別に、Chromatorex ＯＤＳカラム[フジシリシア社製、キャリアー；メタノール／水（＝８０／２０(v/v)）]により、逆相カラムクロマトグラフィーを行なった。溶離した粗フラクションを、次いで、ナカライテスク社製ＨＰＬＣ[Cosmosil ５Ｃ１８カラム、キャリアー；メタノール／水（＝８０／２０(v/v)）]を用いて精製することにより、γ-ラクトン環を有するセスキテルペン類として、コスツノライド(1)（収量：１２ｍｇ）、デヒドロコスツスラクトン(3)（収量：３４.１ｍｇ）、エレマンチン(4)（収量：１７.４ｍｇ）、スピラフォライド(6)（収量：８９.８ｍｇ）をそれぞれ単離・精製した。
【００５１】
調製例５
調製例３で得た活性物質を含むフラクション＃７（３.７６ｇ）を、Chromatorex ＯＤＳカラム[フジシリシア社製、キャリアー；メタノール／水（＝８０／２０(v/v)）]により、逆相カラムクロマトグラフィーを行なった。次いで、得られた粗フラクションを、ナカライテスク社製ＨＰＬＣ[Cosmosil ７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム、キャリアー；メタノール／水（＝５０／５０〜６５／３５(v/v)）]を用いて精製することにより、γ-ラクトン環を有するセスキテルペン類として、サンタマリン(2)（収量：５２１.８ｍｇ）、ザルザニン Ｃ(5)（収量：６２.５ｍｇ）およびマグノリアライド(7)（収量：４７.４ｍｇ）を単離・精製した。
【００５２】
調製例６
ここでは、先に調製例４で得たデヒドロコスツスラクトン(3)を用い、その誘導体としての還元体４種を、先に説明したスキームＩに従って調製した。
デヒドロコスツスラクトン(3)１５０ｍｇ（０．６５ミリモル）のテトラヒドロフラン（５．０ｍｌ）溶液を水素化アルミニウムリチウム（ＬｉＡｌＨ4）６２ｍｇで処理し、混合物を０℃３０分間攪拌した。反応混合物を水性飽和エーテルおよび次いで４ＮのＫＯＨ水溶液を添加して停止し、全量を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出液を塩水で洗浄した。その後、ＭｇＳＯ4粉末によって乾燥させて、濾過した。濾液から溶媒を減圧下で除去して、残渣を回収し、ＨＰＬＣ［ＹＭＣパックＯＤＳ−Ａ 内径4.6×250ｍｍ（メタノール−水体積比＝７０：３０）］で精製することにより、11α-メチル-6,12-ジオール誘導体(3a)（化合物名の後に付した符号および化学構造は上述のスキームＩ参照；６６ｍｇ、収率４６％）を得た。
【００５３】
さらに、デヒドロコスツスラクトン(3)６００ｍｇ（２．６ミリモル）のメタノール（１０．０ｍＬ）溶液を水素化ホウ酸ナトリウム（ＮａＢＨ4）１００ｍｇで処理して、混合物を０℃で１時間攪拌した。反応混合物をアセトンで停止し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出物を塩水で洗浄した後、ＭｇＳＯ4粉末により乾燥した。減圧下での濾液からの溶媒の除去により、残渣を得た。それをＨＰＬＣ［ＹＭＣパックＯＤＳ−Ａ 内径4.6×250ｍｍ（メタノール−水体積比＝７５：２５）］で精製して、モッコラクトン(3b)（１０６ｍｇ、収率１８％）、11α-メチル-ラクトール混合物(3c)（４８９ｍｇ、収率７０％）および11α-メチル-12-メチレン誘導体(3d)（５３ｍｇ、収率９％）をそれぞれ単離した（化合物名の後に付した符号および化学構造はいずれも上述のスキームＩ参照）。
【００５４】
単離・精製された化合物(3a)〜(3d)について、以下の装置及び条件で、炭素１３（13Ｃ）および水素（1Ｈ）核磁気共鳴、質量分析、赤外線および紫外線吸収スペクトルおよび施光度をそれぞれ測定し、それら測定値を文献値と比較することにより同定を行ない、各化学構造を確認した：13Ｃ−ＮＭＲスペクトル＝内部標準としてテトラメチルシランを用いたＪＮＭ−ＬＡ500（１２５ＭＨｚ）分光計；1Ｈ−ＮＭＲスペクトル＝ＪＮＭ−ＬＡ500（５００ＭＨｚ）分光計；ＥＩ−ＭＳおよび高解像度ＭＳ＝ＪＯＥＬ ＪＭＳ−ＧＣＭＡＴＥ質量分析装置；ＦＡＢ−ＭＳおよび高解像度ＭＳ＝ＪＯＥＬ ＪＭＳ−ＳＸ 102Ａ質量分析装置；ＩＲ分光器＝島津ＦＴＩＲ−８１００分光器；および比施光度＝ホリバ製ＳＥＰＡ−３００デジタル偏光計（Ｌ＝５ｃｍ）。
単離・精製のための各種クロマトグラフィーでは、以下の実験条件を使用した。
（１）順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー＝シリカゲルＢＷ−200（フジ・シリシア・ケミカル・リミテッド、150〜350メッシュ）。
（２）ＴＬＣ＝シリカゲル60Ｆ254（メルク、０．２５ｍｍ）（順相）またはシリカゲルＲＰ−１８ 60Ｆ254（メルク、０．２５ｍｍ）（逆相）でプレコートしたＴＬＤプレート。
（３）逆相ＨＰＴＬＣ＝シリカゲルＲＰ−１８ 60ＷＦ254S（メルク、０．２５ｍｍ）（順相）でプレコートしたＴＬＤプレート。
ＴＬＣの検出は、１％Ｃｅ（ＳＯ4）2−１０％硫酸を噴霧し、加熱することにより行なった。
【００５５】
調製例７
ベトナム産ケイヒの粉砕物１ｋｇにメタノール３Ｌを加え、１５〜２５℃において時々かき混ぜながら３６時間抽出を行ない、濾過した。得られた濾液を、４５℃以下の温度において減圧下（１８０ｍｍＨｇ以下）、完全に留去することにより、ケイヒのメタノール抽出エキス（収量：１７２ｇ）を得た。
【００５６】
調製例８
テンダイウヤクの根の乾燥粉砕物１ｋｇを用いたこと以外は、上記調製例６と同様の手順により、テンダイウヤクのメタノール抽出エキス（収量：２７ｇ）を得た。
【００５７】
調製例９
クロモジの幹の乾燥粉砕物１ｋｇを用いたこと以外は、上記調製例６と同様の手順により、クロモジのメタノール抽出エキス（収量：３８ｇ）を得た。
【００５８】
調製例１０
地膚子(ジフシ)１ｋｇの粉砕物１kgにメタノール１.５〜５.０ｋｇを加えて、８０〜９０℃で３時間加熱抽出し、冷却した後、濾過した。得られた濾液を、４５℃以下の温度において減圧下（１８０ｍｍＨｇ以下）、完全に留去することにより、トンブリのメタノール抽出エキス（収量：１２１.０ｇ）を得た。このエキスを水に分散させ、酢酸エチルで洗浄した後、ｎ-ブタノールで抽出し、サポニンフラクション（収量：２０.１ｇ）を得た。
【００５９】
調製例１１
タラノキの樹皮の乾燥粗切品１ｋｇを用いたこと以外は、上記調製例９と同様の方法で、タラノキの樹皮のメタノール抽出エキス（収量：３４.０ｇ）を得た。このエキスを水に分散させ、酢酸エチルで洗浄した後、ｎ-ブタノールで抽出し、サポニンフラクション（収量：０.７ｇ）を得た。
【００６０】
実施例１
上記調製例１および２で得られた月桂樹の葉のメタノールおよびエタノール抽出エキス、およびメタノール抽出エキスの酢酸エチルフラクションまたは水フラクションおよび単離・精製されたγ-ラクトン環を有するセスキテルペン類（コスツノライド(1)およびデヒドロコスツスラクトン(3)）を用い、以下の方法に従ってアルコール吸収抑制作用を試験した。
調製例１および２で得られたメタノールおよびエタノール抽出エキスの０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプル（ＡおよびＡ’）、前記調製例３で得られた酢酸エチルフラクションまたは水フラクションの各０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプル（Ｂ）および（Ｂ’）、並びに調製例３で単離されたコスツノライド(1)の０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプル（Ｃ）および前記調製例４で得たデヒドロコスツスラクトン(3)の０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプル（Ｃ’）をそれぞれ調製した。これらを、１８〜２０時間絶食したWistar系雄性ラット（体重１１０から１５０ｇ；１群５匹）に対しそれぞれ、５ｍＬ／ｋｇ体重の量で経口投与した。各サンプルの投与量を以下にまとめる。
【００６１】
サンプル（Ａ） ：１２５、２５０および５００ｍｇ／ｋｇ体重
サンプル（Ａ’）：１２５および２５０ｍｇ／ｋｇ体重
サンプル（Ｂ） ：１２５および２５０ｍｇ／ｋｇ体重
サンプル（Ｂ’）：１２５および２５０ｍｇ／ｋｇ体重
サンプル（Ｃ） ：２５および５０ｍｇ／ｋｇ体重
サンプル（Ｃ’）：２５および５０ｍｇ／ｋｇ体重
【００６２】
対照群として、同様の条件下のラット（体重１１０から１５０ｇ；１群５匹）に前記サンプルをいずれも投与しなかったものを用意した。
【００６３】
前記サンプルの投与から３０分後に、２０v/v％エタノール溶液を５ｍL／ｋｇ体重の割合で経口投与した。さらに、その０.５時間後、１時間後および２時間後、サンプルを投与したラットおよび対照群のラットにエーテル軽麻酔した後、眼底静脈より採血を行なった。
採取した血液は、直ちに氷冷し、０.３３Ｎ過塩素酸を加えてタンパク質を除去した。次いで、それを遠心分離に付した後、上清中のエタノール濃度を、ベーリンガー・マンハイム社製Ｆキット（エタノール）を用いて測定した。
実験結果は、平均値と標準誤差で表し、対照群との有意差検定には、Dunnettの多重比較検定を用いた。結果を表１に示す。
【００６４】
【表１】
表中、試験サンプル欄において
（Ａ）は、調製例１で得られたメタノール抽出エキスの０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプルを、
（Ａ’）は、調製例２で得られたエタノール抽出エキスの０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプルを、
（Ｂ）は、前記調製例３で得られた酢酸エチルフラクションの０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプルを、
（Ｂ’）は、前記調製例３で得られた水フラクションの０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプルを、
（Ｃ）は、調製例３で単離されたコスツノライド(1)の０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプルを、および
（Ｃ’）は、調製例４で単離されたデヒドロコスツスラクトン(3)の０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプル
をそれぞれ表し、また血中アルコール濃度結果の末尾の符号「*」および「**」は、Dunnettの多重比較検定で検定した対照との有意差：ｐが、０.０５または０.０１未満であったことを表す。
【００６５】
上記表１の結果より、本発明のγ-ラクトン環を有するセスキテルペン類として単離されたコスツノライドやデヒドロコスツスラクトンおよびこれらを含有する抽出エキスやフラクションが、高いアルコール吸収抑制作用を発現することが分かる。
【００６６】
実施例２
本実施例では、前記調製例４および６で得られたデヒドロコスツスラクトンおよびその誘導体（還元体 ４種）による、エタノール添加ラットにおける血中エタノール上昇抑制効果を調べた。
・動物および材料：
４〜６週のWistar系雄性ラット（体重８０〜１３０ｇ）を、紀和実験動物株式会社（和歌山、日本）から入手し、２３±２℃に空調した室内で飼育した。標準実験用飼料（ＭＦ、オリエンタル酵母、東京、日本）と水道水は自由に与えた。
実験前２０〜２２時間、絶食させたが、水は無制限に与えた。
・試験試料の調製：
前記調製例４および６で得られたデヒドロコスツスラクトンおよびその誘導体（還元体 ４種）を５％アラビアゴム溶液に懸濁させて試験サンプルとした。
前記試験サンプルを、２０〜２２時間絶食した前記Wistar系雄性ラットに対し、それぞれ５ｍＬ／ｋｇ体重の量で経口投与した。各サンプルの投与量を以下にまとめる。
デヒドロコスツスラクトン(3)：２５、５０ｍｇ／ｋｇ体重。
11α-メチル-6,12-ジオール誘導体 (3a)：５０ｍｇ／ｋｇ体重。
モッコラクトン(3b)：２５、５０ｍｇ／ｋｇ体重。
11α-メチル-ラクトール混合物(3c)：２５、５０ｍｇ／ｋｇ体重。
11α-メチル-12-メチレン誘導体(3d)：５０ｍｇ／ｋｇ体重。
【００６７】
対照群として、同様の条件下のラット（体重８０〜１３０ｇ；１群５匹、但し、11α-メチル-12-メチレン誘導体(3d)についての試験では１群４匹）に前記サンプルをいずれも投与しなかったものを用意した。
【００６８】
上記試験試料を、ラットに経口投与してから３０分経過後に、エタノール（２０v/v％、５ｍＬ／ｋｇ体重）を経口投与した。
エタノール投与から０．５時間、１時間および２時間後に、ラットの眼窩の静脈叢から血液試料を採取した。血液を即座に１０倍体積の氷冷した０．３３Ｎ過塩素酸と混合した後、遠心分離した（４℃、3000ｒｐｍ、１０分）。遠心分離された上清中の血中エタノール濃度を酵素法で測定した（Ｆ−キット（登録商標）エタノール、ベーリンガー・マンハイム製）。結果を表２にまとめる。
【表２】
上記表２の試験サンプル欄において、
(3)はデヒドロコスツスラクトンの５％アラビアゴム溶液への懸濁サンプルを、
(3a)は11α-メチル-6,12-ジオール誘導体の５％アラビアゴム溶液への懸濁サンプルを、
(3b)はモッコラクトンの５％アラビアゴム溶液への懸濁サンプルを、
(3c)は11α-メチル-ラクトール混合物の５％アラビアゴム溶液への懸濁サンプルを、および
(3d)は11α-メチル-12-メチレン誘導体(3d) の５％アラビアゴム溶液への懸濁サンプルを
それぞれ表し、また、血中アルコール濃度結果の末尾の符号「**」は、Dunnettの多重比較検定で検定した対照との有意差：ｐが、０.０１未満であったことを表す。
【００６９】
上記表２の結果より、デヒドロコスツスラクトン(3)およびその誘導体はいずれも高い血中アルコール濃度上昇抑制活性を発現することが分かる。特に、モッコラクトン(3b)（すなわち、エキソメチレン還元体）と11α-メチル-ラクトール混合物(3c)（すなわち、ケトン基還元体）が好ましい結果を示している。表２の結果において、未環化ラクトンである11α-メチル-6,12-ジオール誘導体(3a)は明らかに血中アルコール濃度上昇抑制活性が消失しており、また、11α-メチル-12-メチレン誘導体(3d)（すなわち、脱ケトン還元体）は前記活性を有するが、統計学的には有意でないことを示している。すなわち、血中アルコール濃度上昇抑制活性を発現するためには、構造中にγ-ラクトン環またはアセタール環の存在が必須であること、および前記環内にメチル基またはメチレン基の存在が好ましいことが分かる。
【００７０】
実施例３
調製例７〜９において得たケイヒ、テンダイウヤクおよびクロモジのメタノール抽出エキスの０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプルをそれぞれ調製した。これらのサンプルを用い、前記サンプルの投与から０.５時間後の血中アルコール濃度を測定したこと以外は、実施例１と同様の方法でアルコール吸収抑制作用を試験した。結果を表３に示す。
【００７１】
【表３】
上記表３の結果より、クスノキ科の植物より得たメタノール抽出エキスが、アルコール吸収抑制作用を発現することが分かる。
【００７２】
以下の実施例４および５では、前記調製例１で得られたメタノール抽出エキスに、前記調製例１０および１１で得られた各サポニン含有植物からのサポニンフラクションを添加することによって、アルコール吸収抑制作用の増強効果を調べた。
【００７３】
実施例４
調製例１で得られた月桂樹の葉からのメタノール抽出エキスの０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプル（Ａ）、調製例１０で得たトンブリのサポニンフラクションの０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプル（ａ−１）および月桂樹の葉からのメタノール抽出エキスとトンブリのサポニンフラクションの各０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプル（ａ−２）をそれぞれ試験サンプルとして用いたこと以外は、実施例１と同様にしてアルコール吸収抑制作用を試験した。
結果を表４に示す。
【００７４】
実施例５
調製例１０で得たトンブリのサポニンフラクションの代わりに、調製例１１で得たタラノキの樹皮のサポニンフラクションを用いたこと以外は、実施例４と同様にして、各アルコール障害予防剤としての試験サンプル（Ａ）、（ｂ−１）および（ｂ−２）を調製し、それらのアルコール吸収抑制作用を試験した。結果を表４に示す。
【００７５】
【表４】
【００７６】
上記表４の結果において、月桂樹の葉からのメタノール抽出エキスのみを含有するサンプル（Ａ）またはサポニン含有植物のサポニンフラクションのみを含有するサンプル（ａ−１）および（ｂ−１）に比べて、両者を共に含むサンプル（ａ−２）および（ｂ−２）は、より強いアルコール吸収抑制作用を示している。すなわち、月桂樹の葉からのメタノール抽出エキスにサポニン含有植物のサポニンフラクションを添加することで、優れた相乗作用を発現することが分かる。
【００７７】
以下の実施例６〜９には、上記調製例１〜９で得られたアルコール吸収抑制剤、および必要に応じて、前記アルコール吸収抑制剤と調製例１０および１１で得られたサポニン含有植物からの各サポニンフラクションと共に配合した食品の例を示す。
【００７８】
実施例６：錠剤
調製例２の抽出物１００重量部および乳糖１４８重量部に水を加え、混合し、押し出し造粒機で顆粒とし、乾燥した後、ステアリン酸マグネシウム２重量部を混合し、打錠機で１錠３００ｍｇの錠剤とした。１錠中、調製例２の抽出物の含有量は４０ｍｇであった。
【００７９】
実施例７：顆粒剤
調製例７の抽出物１００重量部、乳糖２９６重量部およびデキストリン４重量部に水を加え、混合し、押し出し造粒機で顆粒とし、乾燥した後、２ｇをスティック包装に付した。１包中、調製例７の抽出物の含有量は５００ｍｇであった。
【００８０】
【００８１】
上記処方の割合に従って、各成分を精製水に溶解し、全量を１００ｍＬとした後、１００ｍＬ褐色瓶に充填し、９８℃で３０分間加熱殺菌して、１本当たりの調製例２の抽出物および調製例１０の抽出物のサポニンフラクションの含有量がそれぞれ２５ｍｇのドリンク剤を得た。
【００８２】
【００８３】
常法に従って、グラニュー糖および水飴を加熱溶解し、１２０℃まで煮詰め、９５℃まで冷却した後、残りの成分を全て加え、均一に混和して、１粒２ｇのキャンディを製造した。キャンディ１粒中には、調製例２の抽出物および調製例１１の抽出物のサポニンフラクションをそれぞれ１０ｍｇ含まれていた。
【発明の属する技術分野】
本発明は、摂取されたアルコールの体内への吸収を抑制することにより、アルコールそのものまたはその代謝物によって惹起される種々の疾病を予防しかつそれらの症状を緩和し得る、副作用の発現頻度が少ないアルコール障害予防剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
アルコール飲料やアルコール含有食品として経口的に摂取されたアルコールは、胃、十二指腸、小腸を主体とする消化管を通じて吸収された後、血液を通じて全身へ運搬される。体内に吸収されたアルコールの大半（通常、全体の約９０％）は、肝臓において代謝される；先ず、アルコールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ）が補酵素のニコチン酸アミドアデニンジヌクレオチドリン酸還元物（ＮＡＤＰＨ）やニコチン酸アミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）と共に作用し、その結果、酸化体である有害なアセトアルデヒドを産生する。次いで、産生されたアセトアルデヒドは、アルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ）とＮＡＤの作用により酢酸に酸化され、最終的に、水と二酸化炭素に変換され、呼気と共に体外へ排出される。
【０００３】
アルコールの体内への吸収速度は、デンプン、タンパク質および脂質などの栄養素に比べて非常に速く、血液を介して全身の組織へと拡散していくと同時に毛細血管の拡張作用も及ぼし、さらには顔面や上腕部の紅潮が惹起される。
血液を介して全身の組織へと拡散したアルコールは、血液脳関門を速やかに通過して大脳皮質へと到達し、その結果、感情や情動の変化、すなわち銘酊状態を引き起こす。酩酊状態の発現には、アルコールの直接作用のほか、その代謝物であるアセトアルデヒドや電解質とのバランス、生体アミン等が複雑に関係しているものと考えられている。中でも、人体に対し毒性および薬理作用が強いアセトアルデヒドは、二日酔いの気分不快感、頭痛の原因物質でもある。
【０００４】
アルコールの過剰摂取は、例えば、以下のような多くの臓器障害をもたらし得る。
（１）上部消化管（例えば、胃や十二指腸）において認められる消化器潰瘍：
これはアルコールの過剰摂取による臓器障害の最も典型的な例であり、粘膜侵害、防御因子である粘液分泌能の低下および胃粘膜血流量の低下が原因とされている。
（２）肝障害および肝障害の悪化促進：
アルコールの代謝によって産生されるアセトアルデヒドにより肝細胞内のミトコンドリアや微小管に障害が生じ、さらにはクッパー細胞や単球に作用したアセトアルデヒドによって炎症因子である活性酸素や一酸化窒素の産生が促進される。
（３）肝硬変：
クッパー細胞や単球から産生されるサイトカインが伊東細胞や類洞内皮細胞からのＩＶ型コラーゲンの産生を促進することに起因する。
（４）高脂血症や脂肪肝：
アルコールデヒドロゲナーゼが作用するのと同時に産生されるＮＡＤＨの蓄積によって、キサンチンオキシダーゼによる脂質の代謝経路が阻害されることに起因する。
【０００５】
前記のような臓器障害に対する治療薬の例として、消化器潰瘍（１）の治療には、シメチジン（「Cimetidine」）をはじめとするＨ２ブロッカー、プロトンポンプ阻害剤のオメプラゾール、粘膜保護剤のセトラキセートやスクラルファート、さらには抗コリン剤が適用されるが、これらは、血液中の顆粒球や血小板数の減少、ＧＯＴおよび／またはＧＰＴ検査値の上昇等の副作用を誘発し得る。
前記合成医薬品に比べて副作用が少ない天然物を使用した抗潰瘍剤としては、生薬のモッコウ（木香）由来のデヒドロコスツスラクトンおよびポリエチレングリコールを含有する製剤（特開平７−１３８１５７号公報）が研究されている。
【０００６】
また、肝障害（２）〜（４）に対する治療薬としては、アセトアルデヒドのトラップ剤や毒性軽減剤あるいは代謝促進剤などが種々報告されている。それらの例としては、D-penicillamineやL-methionine、さらにはclofibrate、γ-linolenic acid等が挙げられるが、いずれも合成製剤であり、また多種の副作用も誘発され得る。
【０００７】
他方、アルコールの過剰摂取は、前記のような臓器障害のみならず、前述のような酩酊状態から進行してアルコール依存症や中毒、強いてはアルコール精神病のような神経障害を引き起こすこともある。
アルコール依存患者に処方される飲酒防止剤としては、例えばジスルフィラムが挙げられる。このような飲酒防止剤は、アルコール摂取前に投与されると、アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼを阻害してアセトアルデヒドを蓄積させて、頭痛や気分不快感を誘発させることにより、アルコールの過剰摂取を予防できるが、体内へのアルコール吸収抑制作用は持たない。
【０００８】
体内へのアルコール吸収抑制作用を発現し得る製剤としては、アルコール自体とアセトアルデヒドの両者の毒性による生体への不都合な作用を低下させるために使用されるものである。このような製剤の例としては、体内へのアルコール吸収を抑制して、血中アルコール濃度を低下させることを目的とした茶サポニンおよび／またはキラヤサポニン含有アルコール吸収抑制剤（特開平４−１４５０２８号公報）；およびタラノキ、チクセツニンジン、セネガ、ムクロジ、セイヨウトチノキから抽出されたオレアノール酸（oleanolic acid）、プレセネゲニン（presenegenin）、ヘデラゲニン（hederagenin）および／またはプロトエシゲニン（protoaescigenin）をサポゲニンとする配糖体を含有するアルコール吸収抑制剤（特開平７−５３３８５号公報）等が挙げられる。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、摂取されたアルコールそのものまたはその代謝物が体内に吸収されるのを抑制して臓器障害および／または神経障害を予防するかまたはそれらの諸症状を緩和するためのアルコール障害予防剤であって、副作用の発現頻度がより少なく、かつより少ない投与量で効果を発揮し得るアルコール障害予防剤を提供することである。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
クスノキ科Lauraceaeの月桂樹（学名Laurus nobilis）は、特に小アジアから地中海諸国の日当たりの良い肥沃な土壌において広く栽培されている植物である。月桂樹の葉は、通常、ローレル、ローリエまたはベイリーフ等の名前で知られており、料理用のハーブや香辛料、特にブーケガルニとして使用されている。西洋諸国では、防腐、興奮、消化機能促進および芳香性健胃を目的とした民間治療薬として用いられるほか、入浴剤、発毛剤、さらにはリュウマチの痛みを軽減するための外用剤としても使用されている。
月桂樹の葉には、ピネン（pinene）、ボルネオール（borneol）をはじめとするモノテルペノイド；コスツノライド（costunolide）、デヒドロコスツスラクトン（dehydrocostuslactone）、β−オイデスモール（β-eudesmol）等のセスキテルペノイド；およびリグナン、フラボノイド、フェニルプロパノイドが含有されていることが種々の先行技術文献より既知である。
また、薬理学的見地において、天然物である月桂樹の種子からの抽出物が、ラットのエタノール誘発潰瘍を抑制し[Afifi F. V.ら著、J.Ethnopharmacol.、５８、第９〜１４頁（１９９７年）]、また月桂樹の葉からの抽出物は、ウサギにおける糖吸収を抑制し得ること[Gurman E.G.ら著、Fiziol Zh SSSR Im I M Sechenova、７８、第１０９〜１１６頁]が報告されている。
【００１１】
本発明者らは、クスノキ科の植物である月桂樹の葉の粉砕物を用い、齧歯類に対するアルコール吸収抑制作用を研究したところ、前記粉砕物からの脂溶性溶媒抽出物（特にメタノールまたはエタノール抽出物）および前記抽出物からの更なる脂溶性フラクションがいずれもγ−ラクトン環を有するセスキテルペン類を含有すること、およびそれらセスキテルペン類がアルコール吸収抑制活性を発現し得ることを見出した。
【００１２】
本発明者らは、他のクスノキ科の植物であるシンナモマム・カシア、デンダイウヤクおよびクロモジの一部位の粉砕物およびその脂溶性溶媒抽出物についても同様の評価を行なったところ、いずれもアルコール吸収抑制作用を発現し得ることも見出した。
従来から、アルコール吸収抑制作用を発現する天然物としてはサポニン含有植物が既知であるが、月桂樹をはじめとする前記クスノキ科植物からサポニン類を単離したという報告が未だなされていないことや、サポニン類は通常、高い水溶性を示すため、脂溶性溶媒には不溶であることなどから、サポニン類以外のアルコール吸収抑制作用に有効な成分の存在を前記クスノキ科植物の一部位中に確認した。
【００１３】
本発明者らは、更に研究を重ねた結果、前記セスキテルペン類が、α−置換されたγ−ブチロラクトン基を有するセスキテルペン類およびその誘導体の形態である場合に、より高いアルコール吸収抑制作用を表すという新たな知見を見出し、本発明を達成するに至った。
【００１４】
すなわち、本発明の第１態様は、クスノキ科の植物の一部位（特に好ましくは月桂樹の葉）の粉砕物またはその脂溶性溶媒抽出エキスを含有するアルコール障害予防剤である。特に好ましくは、前記脂溶性溶媒抽出エキスが、アルコール吸収抑制作用を発現し得る、α−置換されたγ−ブチロラクトン基を有するセスキテルペン類およびその誘導体を含有するものである。
本発明の第２態様のアルコール障害予防剤は、月桂樹以外の他のクスノキ科の植物の一部位として、例えば、シンナモマム・カシア（Cinnamomum cassia）およびその同属植物の樹皮（すなわちケイヒ）、テンダイウヤクの根またはクロモジの幹から選ばれるものを使用し、それらを、粉砕物またはその脂溶性溶媒抽出エキス、あるいは、それらに含まれるα−置換されたγ−ブチロラクトン基を有するセスキテルペン類またはその誘導体のいずれかの形態で含有することを特徴とする。
本発明は、第３態様として、上記クスノキ科の植物の一部位の粉砕物またはその脂溶性溶媒抽出エキスと共に、サポニン含有植物の一部位またはそれから得られる脂溶性溶媒抽出エキス、その脂溶性溶媒抽出エキスの粗サポニンフラクションあるいはそれらからの単離精製物も含有するアルコール障害予防剤も提供する。
さらに、本発明は、更なる態様として、前記アルコール障害予防剤を含有する食品も提供する。
【００１５】
【発明の効果】
本発明のアルコール障害予防剤は、飲酒やアルコール含有食品の摂取前に服用することにより、消化管からのアルコール吸収が抑制されて、血中アルコール濃度の上昇抑制、強いてはそれにより惹起される潰瘍やガンなどの胃腸管障害、肝疾患（例えば、アルコール性肝炎、脂肪肝、肝ガン）、糖尿病、高脂血症の発症、さらにはアルコール依存症または中毒症の発症も予防できる。
本発明のアルコール障害予防剤は、天然物由来であることから臨床で通常用いられている合成医薬品に比べて副作用の発現頻度が著しく低いため、より安全である。また薬効発現能力、すなわち体内へのアルコール吸収抑制作用が非常に高いことからより少量の投与量で効果を発揮するものである。
本発明のアルコール障害予防剤は、従来既知のサポニン含有植物の有効部分またはそれから得られる抽出エキス、該抽出エキスのフラクションあるいはそれらからの単離精製物をも含有することにより、体内へのアルコール吸収抑制作用をさらに増強できる。
本発明は、前記アルコール障害予防剤を含有する食品として提供され得ることから、患者が簡易に経口摂取できる。
【００１６】
【発明の実施の形態】
本発明のアルコール障害予防剤は、クスノキ科の植物の一部位の粉砕物またはそれから得られる脂溶性溶媒抽出エキスを含有するものである。特に好ましくは、本発明のアルコール障害予防剤は、前記脂溶性抽出エキスから単離・精製される、式：
【化３】
で表されるα−置換されたγ−ブチロラクトン基を有するセスキテルペン類およびその誘導体を含有する。前記誘導体は、式：
【化４】
で表されるα−置換されたγ−ブチロラクトン還元型基を有するものであってよい。
【００１７】
本発明の第１の態様としては、クスノキ科の植物の一部位として、月桂樹の葉を使用する。
【００１８】
前記α−置換されたγ−ブチロラクトン基を有するセスキテルペン類およびその誘導体は、例えば以下の手順で得ることができる。
先ず、月桂樹の乾燥葉の粉砕物を、有機脂溶性溶媒（特に、メタノールやエタノール）中で、好ましくは１０〜３０℃において２４〜３６時間冷浸抽出した後、溶媒を蒸発させて脂溶性溶媒抽出エキスを得る。溶媒蒸発は、特に好ましくは、４５℃以下の温度において減圧下（特に、９０〜１８０ｍｍＨｇ以下）で行なわれる。
次に、得られた脂溶性溶媒抽出エキスを、体積比１：１の酢酸エチル／水混合液を用いて酢酸エチル層および水層に分離し、その酢酸エチル層を、ヘキサン／酢酸エチル（＝３０／１〜０／１００(v/v)）混合溶媒をキャリアーとして使用する順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー法に付する。有効成分を含むフラクションを、カラムクロマトグラフィー法に付し、その後、さらに高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法に付すことにより、所望のα−置換されたγ−ブチロラクトン基を有するセスキテルペン類が単離・精製できる。
【００１９】
本発明において、カラムクロマトグラフィー法では、好ましくはChromatorexＯＤＳカラムを用い、またキャリアーとしてメタノール系溶媒、特に、メタノール／水＝６０／４０〜１００／０(v/v)混合溶媒系を好ましく使用する。さらに、後続するＨＰＬＣ法では、好ましくはＣ１８系カラムを用い、かつキャリアーとしてメタノール系溶媒、詳しくは、メタノール／水＝５０／５０〜８０／２０(v/v)混合溶媒系を好ましく使用する。
【００２０】
上記のような方法で単離・精製されるα−置換されたγ−ブチロラクトン基を有するセスキテルペン類の具体例としては、コスツノライド（１）、サンタマリン（２）、デヒドロコスツスラクトン（３）、エレマンチン（４）、ザルザニンＣ（５）、スピラフォライド（６）、マグノリアライド（７）、ザルザニンＤ（８）、レイノシン（９）、3-α-アセトキシオイデスマ-1,4(15),11(13)-トリエン-12,6-α-オライド（１０）、3-オキシオイデスム-6βH-1,4,11-トリエン-6,13-オライド（１１）等が挙げられる。以下にこれら化学種の化学式を表す。
【化５】
本発明では、上記α−置換されたγ−ブチロラクトン基を有するセスキテルペン類を、更に転化することによって得られる誘導体の形態で使用してもよい。
本発明のアルコール障害予防剤には、より高いアルコール吸収抑制作用を発現することから、例えばデヒドロコスツスラクトン（３）の誘導体、特にγ-ラクトン環またはアセタール環を有する還元体(3b)または(3c)の形態が特に好ましく例示される。以下のスキームＩに、デヒドロコスツスラクトン（３）からの誘導体の調製を示す。
【化６】
上記スキームＩにおいて、11α-メチル-6,12-ジオール誘導体（３ａ）は、デヒドロコスツスラクトン（３）を、テトラヒドロフラン溶媒中、０℃で水素化アルミニウムリチウム（ＬｉＡｌＨ4）で処理することにより得られる。あるいは、デヒドロコスツスラクトン（３）をメタノール溶媒中、０℃において水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ4）で還元した後、クロマトグラフィーに付することにより、モッコラクトン（３ｂ）、11α-メチル-ラクトール混合物（３ｃ、α体とβ体とのモル比＝１：１）および11α-メチル-12-メチレン誘導体（３ｄ）をそれぞれ単離することができる。
ただし、上記スキームＩ中、11α-メチル-6,12-ジオール誘導体(3a)（未環化ラクトン体）および11α-メチル-12-メチレン誘導体(3d)（脱ケトン還元体）はいずれも、本発明における特徴的な官能基（γ−ラクトン環基またはアセタール環基）を有しないことから、本発明の好ましい誘導体には包含されない。
【００２３】
本発明のアルコール障害予防剤は、前記クスノキ科の植物の一部位（例えば、月桂樹の葉の粉砕物）を、成人の場合、１回の服用量につき少なくとも２５０ｍｇ、好ましくは５００〜２,５００ｍｇの量で含有し、より好ましくは、上述の手順により得られる脂溶性溶媒抽出エキスを、成人の場合、１回の服用量につき少なくとも５０ｍｇ、好ましくは１００〜５００ｍｇの量で含有する。
本発明のアルコール障害予防剤において、前記α−置換されたγ−ブチロラクトン基を有するセスキテルペン類およびその誘導体を特徴的な成分とする場合、成人の場合、１回の服用量につき、少なくとも５ｍｇ、好ましくは２５〜５０ｍｇの量で使用する。
【００２４】
本発明の第２の態様において、使用するクスノキ科の植物の一部位は、前述の月桂樹の葉に限定されるものではなく、例えば、シンナモマム・カシアおよびその同属植物の樹皮（すなわちケイヒ）、テンダイウヤクの根、クロモジの幹等であってもよい。本発明では、いずれの植物の一部位を用いる場合においても、より好ましくは、その粉砕物またはその脂溶性溶媒抽出エキスおよびそのフラクションあるいはそれらからの単離精製物の形態で使用する。
【００２５】
ここで、ケイヒ（Cinnamomi cortex）は、Cinnamomum cassiaの樹皮であり、中国、ベトナムなどで栽培されている。ケイヒは、ケイアルデヒドを含有し、特有の香味を持つことから、スパイスや菓子の原料として使用されている。また、ケイヒは、日本薬局方にも収載されており、芳香性健胃薬や漢方方剤の処方に広く用いられている。
【００２６】
テンダイウヤク（Lindera strychnifolia）は、中国の浙江省天台を主な産地とする植物であり、通常、その根部分を乾燥して使用する。テンダイウヤクは、精油類を含むことから、漢方では、芳香性健胃薬、鎮痛、鎮座薬として用いられている。本発明においても、根部分を使用する。
【００２７】
クロモジ（Lindera umbellata）は、漢名を烏樟または釣樟と呼ばれ、漢方では、その根皮や樹皮を胃腸カタル、胃潰瘍、脚気、浮腫の治療薬として用いている。また、枝を折ると特有の芳香を発することから、枝葉は石鹸などの香料に使用されている。本発明では、幹部位を使用する。
【００２８】
前記クスノキ科植物は、生薬市場において一般に流通しているものを表記したものであり、また、前記植物の一部位も同様に、例示であって、本発明はこれらに限定されるものではない。
本発明では、上記植物の該当部分を、当該分野において通常使用される粉砕手段によって微粉砕した形態で使用される。あるいは、前記月桂樹の葉について記載したのと同様の抽出溶媒・方法を用いて、抽出エキスを作製し、使用することもできる。
【００２９】
本発明のアルコール障害予防剤は、製剤全重量に対し、クスノキ科植物の一部位から得られる有効な脂溶性溶媒抽出エキスを、成人の場合、１回の服用量につき少なくとも５０ｍｇ、好ましくは１００〜５００ｍｇの量で含有し得る。
【００３０】
本発明のアルコール障害予防剤は、そのアルコール吸収抑制作用を高めるために、さらにトンブリ、タラノキの芽および樹皮、チクセツニンジンの根、セネガの根、ムクロジの果皮、セイヨウトチノキの種子から選ばれるサポニン含有植物の一部位またはそれから得られる脂溶性溶媒抽出エキスまたはその粗サポニンフラクションあるいはそれらからの単離精製物を含有していてもよい。
【００３１】
トンブリは、ヨーロッパ原産のアカザ科ホウキギ(Kochia scoparia)の果実であり、主に中国および日本国内では秋田県で栽培されており、国内では、「畑のキャビア」という触込みで食品として市販されている。トンブリ（ホウキギの種子）は、momordin Icを初めとするトリテルペン配糖体のサポニンを含有し、乾燥品は、中国で地膚子(ジフシ：Kochiae fructus）という生薬として用いられている。
【００３２】
タラノキ（Arallia elta SEEM）は、ウコギ科の植物で、国内では主に芽の部分が食用に利用されている。これは、elatoside Ｉ等のサポニンを含有する。本発明では、芽部分を使用するが、所望により樹皮および根皮も包含してよい。
【００３３】
チクセツニンジン（Panax phizome）は、ウコギ科の植物トチバニンジン（Panax japonicus）の根茎を加工した生薬で、chikusetsu saponin類を含有する。福井県、長野県、山形県等で栽培されており、日本薬局方においては、健胃薬として用いられている。本発明では、その根部分を使用する。
【００３４】
セネガは、ヒメハギ科の植物で、一般にセネガ（Polygala senega Linne）またはヒロハセネガ（Polygala senega Linne var. latifoloa Torrery et Glay）の根のことを指す。去痰薬の原料として北アメリカで、また国内では北海道や兵庫県で栽培されており、日本薬局方のセネガシロップにも配剤されている。presenigeninをゲニンとするトリテルペンサポニンであるsenegin-等を含有する。本発明では、根部分を使用する。
【００３５】
ムクロジ（Sapindus mukurossi）は、ムクロジ科の植物で、別名Japanese Soapnut Treeとも呼ばれる。これは、hederageninをアグリコンとするサポニンのsapindoside類を含み、去痰薬として用いられる。本発明では、その果皮を使用する。
【００３６】
セイヨウトチノキ（Aesculus hippocastanum）は、escin-Iaをはじめとするサポニンを含有し、ヨーロッパでは、抗炎症剤の原料として使用されている。本発明では、その種子を使用する。
【００３７】
前記サポニン含有植物の一部位は、そのままの形態で使用される場合、好ましくは、十分に乾燥させた後、当該分野において通常使用される粉砕手段により微粉砕した形態で使用される。
【００３８】
次に、上記サポニン含有植物の一部位からの抽出エキスまたはそのフラクションの抽出方法および単離・精製方法を以下に示す。
【００３９】
サポニン含有植物の粉砕物を、有機溶媒、最も好ましくはメタノール中で、７０〜９０℃の温度において、３〜９時間還流抽出を行なった後、溶媒を減圧下（約１８０ｍｍＨｇ）で、留去することにより、脂溶性溶媒抽出エキスを得る。これを水に分散させて、酢酸エチルで洗浄した後、ｎ-ブタノールで粗サポニン類を含むフラクションを得る。続いて、このフラクションを、逆相シリカゲカラムクロマトグラフィー（キャリアー；メタノール／水＝３０／７０（v/v））によって分画することにより、所望のサポニンフラクションが単離精製され得る。
【００４０】
本発明のアルコール障害予防剤は、前記サポニン含有植物の粉砕物を、１回の服用量につき少なくとも２００ｍｇ、好ましくは５００〜１,０００ｍｇの量で含有し得る。あるいは、前記粉砕物から得られる抽出エキスまたはその粗サポニンフラクションあるいはそれらからの単離精製物を、成人の場合、１回の服用量につき５〜２００ｍｇ、好ましくは２５〜１００ｍｇの量で含有し得る。
【００４１】
本発明のアルコール障害予防剤は、錠剤、顆粒剤、細粒剤、カプセル剤等の剤型で投与することができる。
【００４２】
本発明のアルコール障害予防剤の投与量は、年齢、症状等によって変化し得るが、例えば、成人における有効量は、１回につき、５０〜１,０００ｍｇ、好ましくは５０〜５００ｍｇであって、これを食前30分位に１日３回服用するのが好ましい。
【００４３】
さらに、本発明は、第２の態様して、前記アルコール障害予防剤を含有する食品も提供する。添加し得る食品の種類には、特に限定はないが、該植物には特有の風味があるため、例えば、ドリンク剤等の飲料やキャンディ等の甘味の強い食品に添加することが好ましい。
このような飲食物におけるアルコール障害予防剤の添加量は、対象食品の種類に応じ、食品本来の味を損なわない範囲で添加すればよく、通常対象食品に対し、０.０１〜１重量％の範囲で添加すればよい。
【００４４】
【実施例】
以下の実施例により、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に不当に限定されるものではない。
【００４５】
本明細書における調製例および実施例で単離・精製された化合物はいずれも、炭素１３（13Ｃ）および水素（1Ｈ）核磁気共鳴、質量分析、赤外線および紫外線吸収スペクトルおよび施光度を測定し、それら測定値を文献値と比較することにより同定を行ない、各化学構造を確認した。
【００４６】
調製例１
月桂樹の乾燥葉５kgを細かく刻み、そこへメタノール１.５〜５.０ｋｇ添加し、２５℃において３６時間、冷浸抽出した。次いで、それを濾過した。濾液を、４５℃以下の温度で減圧下（１８０ｍｍＨｇ以下）、メタノールを完全に留去して、メタノール抽出エキス９９９ｇを得た。
【００４７】
調製例２
月桂樹の乾燥葉１ｋｇを用い、溶媒としてエタノールを用いたこと以外は、上記と同様にしてエタノール抽出エキス６９ｇを得た。
【００４８】
調製例３
調製例１で得たメタノール抽出エキス３６６ｇを、酢酸エチル／水（＝１／１(v/v)）混合液を用いて分配した後、得られた酢酸エチルフラクションを、ヘキサン／酢酸エチル（＝３０／１〜１／１(v/v)）混合キャリアーを用いてシリカゲルカラムに通してカラムクロマトグラフィーを行ない、酢酸エチルフラクションをさらに分画して１１のフラクションを得た。その中で、セスキテルペン類含有フラクションであるフラクション＃４と＃７をさらにＨＰＬＣにより精製した。
【００４９】
前記フラクション＃４（２３.３ｇ）を、Chromatorex ＯＤＳカラム[フジシリシア社製、キャリアー；メタノール／水（＝７０／３０(v/v)）]により、逆相カラムクロマトグラフィーを行なった。溶離した粗フラクションを、次いで、ナカライテスク社製ＨＰＬＣ[Cosmosil ５Ｃ１８カラム、キャリアー；メタノール／水（＝６５／３５(v/v)）]を用いて精製することにより、γ-ラクトン環を有するセスキテルペン類として、コスツノライド(1)（収量：７６７ｍｇ）を単離・精製した。
【００５０】
調製例４
調製例３で得たセスキテルペン類含有フラクション＃４（２３.３ｇ）を、調製例３とは別に、Chromatorex ＯＤＳカラム[フジシリシア社製、キャリアー；メタノール／水（＝８０／２０(v/v)）]により、逆相カラムクロマトグラフィーを行なった。溶離した粗フラクションを、次いで、ナカライテスク社製ＨＰＬＣ[Cosmosil ５Ｃ１８カラム、キャリアー；メタノール／水（＝８０／２０(v/v)）]を用いて精製することにより、γ-ラクトン環を有するセスキテルペン類として、コスツノライド(1)（収量：１２ｍｇ）、デヒドロコスツスラクトン(3)（収量：３４.１ｍｇ）、エレマンチン(4)（収量：１７.４ｍｇ）、スピラフォライド(6)（収量：８９.８ｍｇ）をそれぞれ単離・精製した。
【００５１】
調製例５
調製例３で得た活性物質を含むフラクション＃７（３.７６ｇ）を、Chromatorex ＯＤＳカラム[フジシリシア社製、キャリアー；メタノール／水（＝８０／２０(v/v)）]により、逆相カラムクロマトグラフィーを行なった。次いで、得られた粗フラクションを、ナカライテスク社製ＨＰＬＣ[Cosmosil ７５Ｃ１８−ＯＰＮカラム、キャリアー；メタノール／水（＝５０／５０〜６５／３５(v/v)）]を用いて精製することにより、γ-ラクトン環を有するセスキテルペン類として、サンタマリン(2)（収量：５２１.８ｍｇ）、ザルザニン Ｃ(5)（収量：６２.５ｍｇ）およびマグノリアライド(7)（収量：４７.４ｍｇ）を単離・精製した。
【００５２】
調製例６
ここでは、先に調製例４で得たデヒドロコスツスラクトン(3)を用い、その誘導体としての還元体４種を、先に説明したスキームＩに従って調製した。
デヒドロコスツスラクトン(3)１５０ｍｇ（０．６５ミリモル）のテトラヒドロフラン（５．０ｍｌ）溶液を水素化アルミニウムリチウム（ＬｉＡｌＨ4）６２ｍｇで処理し、混合物を０℃３０分間攪拌した。反応混合物を水性飽和エーテルおよび次いで４ＮのＫＯＨ水溶液を添加して停止し、全量を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出液を塩水で洗浄した。その後、ＭｇＳＯ4粉末によって乾燥させて、濾過した。濾液から溶媒を減圧下で除去して、残渣を回収し、ＨＰＬＣ［ＹＭＣパックＯＤＳ−Ａ 内径4.6×250ｍｍ（メタノール−水体積比＝７０：３０）］で精製することにより、11α-メチル-6,12-ジオール誘導体(3a)（化合物名の後に付した符号および化学構造は上述のスキームＩ参照；６６ｍｇ、収率４６％）を得た。
【００５３】
さらに、デヒドロコスツスラクトン(3)６００ｍｇ（２．６ミリモル）のメタノール（１０．０ｍＬ）溶液を水素化ホウ酸ナトリウム（ＮａＢＨ4）１００ｍｇで処理して、混合物を０℃で１時間攪拌した。反応混合物をアセトンで停止し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出物を塩水で洗浄した後、ＭｇＳＯ4粉末により乾燥した。減圧下での濾液からの溶媒の除去により、残渣を得た。それをＨＰＬＣ［ＹＭＣパックＯＤＳ−Ａ 内径4.6×250ｍｍ（メタノール−水体積比＝７５：２５）］で精製して、モッコラクトン(3b)（１０６ｍｇ、収率１８％）、11α-メチル-ラクトール混合物(3c)（４８９ｍｇ、収率７０％）および11α-メチル-12-メチレン誘導体(3d)（５３ｍｇ、収率９％）をそれぞれ単離した（化合物名の後に付した符号および化学構造はいずれも上述のスキームＩ参照）。
【００５４】
単離・精製された化合物(3a)〜(3d)について、以下の装置及び条件で、炭素１３（13Ｃ）および水素（1Ｈ）核磁気共鳴、質量分析、赤外線および紫外線吸収スペクトルおよび施光度をそれぞれ測定し、それら測定値を文献値と比較することにより同定を行ない、各化学構造を確認した：13Ｃ−ＮＭＲスペクトル＝内部標準としてテトラメチルシランを用いたＪＮＭ−ＬＡ500（１２５ＭＨｚ）分光計；1Ｈ−ＮＭＲスペクトル＝ＪＮＭ−ＬＡ500（５００ＭＨｚ）分光計；ＥＩ−ＭＳおよび高解像度ＭＳ＝ＪＯＥＬ ＪＭＳ−ＧＣＭＡＴＥ質量分析装置；ＦＡＢ−ＭＳおよび高解像度ＭＳ＝ＪＯＥＬ ＪＭＳ−ＳＸ 102Ａ質量分析装置；ＩＲ分光器＝島津ＦＴＩＲ−８１００分光器；および比施光度＝ホリバ製ＳＥＰＡ−３００デジタル偏光計（Ｌ＝５ｃｍ）。
単離・精製のための各種クロマトグラフィーでは、以下の実験条件を使用した。
（１）順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー＝シリカゲルＢＷ−200（フジ・シリシア・ケミカル・リミテッド、150〜350メッシュ）。
（２）ＴＬＣ＝シリカゲル60Ｆ254（メルク、０．２５ｍｍ）（順相）またはシリカゲルＲＰ−１８ 60Ｆ254（メルク、０．２５ｍｍ）（逆相）でプレコートしたＴＬＤプレート。
（３）逆相ＨＰＴＬＣ＝シリカゲルＲＰ−１８ 60ＷＦ254S（メルク、０．２５ｍｍ）（順相）でプレコートしたＴＬＤプレート。
ＴＬＣの検出は、１％Ｃｅ（ＳＯ4）2−１０％硫酸を噴霧し、加熱することにより行なった。
【００５５】
調製例７
ベトナム産ケイヒの粉砕物１ｋｇにメタノール３Ｌを加え、１５〜２５℃において時々かき混ぜながら３６時間抽出を行ない、濾過した。得られた濾液を、４５℃以下の温度において減圧下（１８０ｍｍＨｇ以下）、完全に留去することにより、ケイヒのメタノール抽出エキス（収量：１７２ｇ）を得た。
【００５６】
調製例８
テンダイウヤクの根の乾燥粉砕物１ｋｇを用いたこと以外は、上記調製例６と同様の手順により、テンダイウヤクのメタノール抽出エキス（収量：２７ｇ）を得た。
【００５７】
調製例９
クロモジの幹の乾燥粉砕物１ｋｇを用いたこと以外は、上記調製例６と同様の手順により、クロモジのメタノール抽出エキス（収量：３８ｇ）を得た。
【００５８】
調製例１０
地膚子(ジフシ)１ｋｇの粉砕物１kgにメタノール１.５〜５.０ｋｇを加えて、８０〜９０℃で３時間加熱抽出し、冷却した後、濾過した。得られた濾液を、４５℃以下の温度において減圧下（１８０ｍｍＨｇ以下）、完全に留去することにより、トンブリのメタノール抽出エキス（収量：１２１.０ｇ）を得た。このエキスを水に分散させ、酢酸エチルで洗浄した後、ｎ-ブタノールで抽出し、サポニンフラクション（収量：２０.１ｇ）を得た。
【００５９】
調製例１１
タラノキの樹皮の乾燥粗切品１ｋｇを用いたこと以外は、上記調製例９と同様の方法で、タラノキの樹皮のメタノール抽出エキス（収量：３４.０ｇ）を得た。このエキスを水に分散させ、酢酸エチルで洗浄した後、ｎ-ブタノールで抽出し、サポニンフラクション（収量：０.７ｇ）を得た。
【００６０】
実施例１
上記調製例１および２で得られた月桂樹の葉のメタノールおよびエタノール抽出エキス、およびメタノール抽出エキスの酢酸エチルフラクションまたは水フラクションおよび単離・精製されたγ-ラクトン環を有するセスキテルペン類（コスツノライド(1)およびデヒドロコスツスラクトン(3)）を用い、以下の方法に従ってアルコール吸収抑制作用を試験した。
調製例１および２で得られたメタノールおよびエタノール抽出エキスの０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプル（ＡおよびＡ’）、前記調製例３で得られた酢酸エチルフラクションまたは水フラクションの各０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプル（Ｂ）および（Ｂ’）、並びに調製例３で単離されたコスツノライド(1)の０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプル（Ｃ）および前記調製例４で得たデヒドロコスツスラクトン(3)の０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプル（Ｃ’）をそれぞれ調製した。これらを、１８〜２０時間絶食したWistar系雄性ラット（体重１１０から１５０ｇ；１群５匹）に対しそれぞれ、５ｍＬ／ｋｇ体重の量で経口投与した。各サンプルの投与量を以下にまとめる。
【００６１】
サンプル（Ａ） ：１２５、２５０および５００ｍｇ／ｋｇ体重
サンプル（Ａ’）：１２５および２５０ｍｇ／ｋｇ体重
サンプル（Ｂ） ：１２５および２５０ｍｇ／ｋｇ体重
サンプル（Ｂ’）：１２５および２５０ｍｇ／ｋｇ体重
サンプル（Ｃ） ：２５および５０ｍｇ／ｋｇ体重
サンプル（Ｃ’）：２５および５０ｍｇ／ｋｇ体重
【００６２】
対照群として、同様の条件下のラット（体重１１０から１５０ｇ；１群５匹）に前記サンプルをいずれも投与しなかったものを用意した。
【００６３】
前記サンプルの投与から３０分後に、２０v/v％エタノール溶液を５ｍL／ｋｇ体重の割合で経口投与した。さらに、その０.５時間後、１時間後および２時間後、サンプルを投与したラットおよび対照群のラットにエーテル軽麻酔した後、眼底静脈より採血を行なった。
採取した血液は、直ちに氷冷し、０.３３Ｎ過塩素酸を加えてタンパク質を除去した。次いで、それを遠心分離に付した後、上清中のエタノール濃度を、ベーリンガー・マンハイム社製Ｆキット（エタノール）を用いて測定した。
実験結果は、平均値と標準誤差で表し、対照群との有意差検定には、Dunnettの多重比較検定を用いた。結果を表１に示す。
【００６４】
【表１】
（Ａ）は、調製例１で得られたメタノール抽出エキスの０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプルを、
（Ａ’）は、調製例２で得られたエタノール抽出エキスの０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプルを、
（Ｂ）は、前記調製例３で得られた酢酸エチルフラクションの０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプルを、
（Ｂ’）は、前記調製例３で得られた水フラクションの０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプルを、
（Ｃ）は、調製例３で単離されたコスツノライド(1)の０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプルを、および
（Ｃ’）は、調製例４で単離されたデヒドロコスツスラクトン(3)の０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプル
をそれぞれ表し、また血中アルコール濃度結果の末尾の符号「*」および「**」は、Dunnettの多重比較検定で検定した対照との有意差：ｐが、０.０５または０.０１未満であったことを表す。
【００６５】
上記表１の結果より、本発明のγ-ラクトン環を有するセスキテルペン類として単離されたコスツノライドやデヒドロコスツスラクトンおよびこれらを含有する抽出エキスやフラクションが、高いアルコール吸収抑制作用を発現することが分かる。
【００６６】
実施例２
本実施例では、前記調製例４および６で得られたデヒドロコスツスラクトンおよびその誘導体（還元体 ４種）による、エタノール添加ラットにおける血中エタノール上昇抑制効果を調べた。
・動物および材料：
４〜６週のWistar系雄性ラット（体重８０〜１３０ｇ）を、紀和実験動物株式会社（和歌山、日本）から入手し、２３±２℃に空調した室内で飼育した。標準実験用飼料（ＭＦ、オリエンタル酵母、東京、日本）と水道水は自由に与えた。
実験前２０〜２２時間、絶食させたが、水は無制限に与えた。
・試験試料の調製：
前記調製例４および６で得られたデヒドロコスツスラクトンおよびその誘導体（還元体 ４種）を５％アラビアゴム溶液に懸濁させて試験サンプルとした。
前記試験サンプルを、２０〜２２時間絶食した前記Wistar系雄性ラットに対し、それぞれ５ｍＬ／ｋｇ体重の量で経口投与した。各サンプルの投与量を以下にまとめる。
デヒドロコスツスラクトン(3)：２５、５０ｍｇ／ｋｇ体重。
11α-メチル-6,12-ジオール誘導体 (3a)：５０ｍｇ／ｋｇ体重。
モッコラクトン(3b)：２５、５０ｍｇ／ｋｇ体重。
11α-メチル-ラクトール混合物(3c)：２５、５０ｍｇ／ｋｇ体重。
11α-メチル-12-メチレン誘導体(3d)：５０ｍｇ／ｋｇ体重。
【００６７】
対照群として、同様の条件下のラット（体重８０〜１３０ｇ；１群５匹、但し、11α-メチル-12-メチレン誘導体(3d)についての試験では１群４匹）に前記サンプルをいずれも投与しなかったものを用意した。
【００６８】
上記試験試料を、ラットに経口投与してから３０分経過後に、エタノール（２０v/v％、５ｍＬ／ｋｇ体重）を経口投与した。
エタノール投与から０．５時間、１時間および２時間後に、ラットの眼窩の静脈叢から血液試料を採取した。血液を即座に１０倍体積の氷冷した０．３３Ｎ過塩素酸と混合した後、遠心分離した（４℃、3000ｒｐｍ、１０分）。遠心分離された上清中の血中エタノール濃度を酵素法で測定した（Ｆ−キット（登録商標）エタノール、ベーリンガー・マンハイム製）。結果を表２にまとめる。
【表２】
(3)はデヒドロコスツスラクトンの５％アラビアゴム溶液への懸濁サンプルを、
(3a)は11α-メチル-6,12-ジオール誘導体の５％アラビアゴム溶液への懸濁サンプルを、
(3b)はモッコラクトンの５％アラビアゴム溶液への懸濁サンプルを、
(3c)は11α-メチル-ラクトール混合物の５％アラビアゴム溶液への懸濁サンプルを、および
(3d)は11α-メチル-12-メチレン誘導体(3d) の５％アラビアゴム溶液への懸濁サンプルを
それぞれ表し、また、血中アルコール濃度結果の末尾の符号「**」は、Dunnettの多重比較検定で検定した対照との有意差：ｐが、０.０１未満であったことを表す。
【００６９】
上記表２の結果より、デヒドロコスツスラクトン(3)およびその誘導体はいずれも高い血中アルコール濃度上昇抑制活性を発現することが分かる。特に、モッコラクトン(3b)（すなわち、エキソメチレン還元体）と11α-メチル-ラクトール混合物(3c)（すなわち、ケトン基還元体）が好ましい結果を示している。表２の結果において、未環化ラクトンである11α-メチル-6,12-ジオール誘導体(3a)は明らかに血中アルコール濃度上昇抑制活性が消失しており、また、11α-メチル-12-メチレン誘導体(3d)（すなわち、脱ケトン還元体）は前記活性を有するが、統計学的には有意でないことを示している。すなわち、血中アルコール濃度上昇抑制活性を発現するためには、構造中にγ-ラクトン環またはアセタール環の存在が必須であること、および前記環内にメチル基またはメチレン基の存在が好ましいことが分かる。
【００７０】
実施例３
調製例７〜９において得たケイヒ、テンダイウヤクおよびクロモジのメタノール抽出エキスの０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプルをそれぞれ調製した。これらのサンプルを用い、前記サンプルの投与から０.５時間後の血中アルコール濃度を測定したこと以外は、実施例１と同様の方法でアルコール吸収抑制作用を試験した。結果を表３に示す。
【００７１】
【表３】
【００７２】
以下の実施例４および５では、前記調製例１で得られたメタノール抽出エキスに、前記調製例１０および１１で得られた各サポニン含有植物からのサポニンフラクションを添加することによって、アルコール吸収抑制作用の増強効果を調べた。
【００７３】
実施例４
調製例１で得られた月桂樹の葉からのメタノール抽出エキスの０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプル（Ａ）、調製例１０で得たトンブリのサポニンフラクションの０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプル（ａ−１）および月桂樹の葉からのメタノール抽出エキスとトンブリのサポニンフラクションの各０.５％アラビアゴムの水性懸濁液サンプル（ａ−２）をそれぞれ試験サンプルとして用いたこと以外は、実施例１と同様にしてアルコール吸収抑制作用を試験した。
結果を表４に示す。
【００７４】
実施例５
調製例１０で得たトンブリのサポニンフラクションの代わりに、調製例１１で得たタラノキの樹皮のサポニンフラクションを用いたこと以外は、実施例４と同様にして、各アルコール障害予防剤としての試験サンプル（Ａ）、（ｂ−１）および（ｂ−２）を調製し、それらのアルコール吸収抑制作用を試験した。結果を表４に示す。
【００７５】
【表４】
上記表４の結果において、月桂樹の葉からのメタノール抽出エキスのみを含有するサンプル（Ａ）またはサポニン含有植物のサポニンフラクションのみを含有するサンプル（ａ−１）および（ｂ−１）に比べて、両者を共に含むサンプル（ａ−２）および（ｂ−２）は、より強いアルコール吸収抑制作用を示している。すなわち、月桂樹の葉からのメタノール抽出エキスにサポニン含有植物のサポニンフラクションを添加することで、優れた相乗作用を発現することが分かる。
【００７７】
以下の実施例６〜９には、上記調製例１〜９で得られたアルコール吸収抑制剤、および必要に応じて、前記アルコール吸収抑制剤と調製例１０および１１で得られたサポニン含有植物からの各サポニンフラクションと共に配合した食品の例を示す。
【００７８】
実施例６：錠剤
調製例２の抽出物１００重量部および乳糖１４８重量部に水を加え、混合し、押し出し造粒機で顆粒とし、乾燥した後、ステアリン酸マグネシウム２重量部を混合し、打錠機で１錠３００ｍｇの錠剤とした。１錠中、調製例２の抽出物の含有量は４０ｍｇであった。
【００７９】
実施例７：顆粒剤
調製例７の抽出物１００重量部、乳糖２９６重量部およびデキストリン４重量部に水を加え、混合し、押し出し造粒機で顆粒とし、乾燥した後、２ｇをスティック包装に付した。１包中、調製例７の抽出物の含有量は５００ｍｇであった。
【００８０】
上記処方の割合に従って、各成分を精製水に溶解し、全量を１００ｍＬとした後、１００ｍＬ褐色瓶に充填し、９８℃で３０分間加熱殺菌して、１本当たりの調製例２の抽出物および調製例１０の抽出物のサポニンフラクションの含有量がそれぞれ２５ｍｇのドリンク剤を得た。
【００８２】
常法に従って、グラニュー糖および水飴を加熱溶解し、１２０℃まで煮詰め、９５℃まで冷却した後、残りの成分を全て加え、均一に混和して、１粒２ｇのキャンディを製造した。キャンディ１粒中には、調製例２の抽出物および調製例１１の抽出物のサポニンフラクションをそれぞれ１０ｍｇ含まれていた。
Claims (2)
- 下記式（１）、（３）、（３ｂ）または（３ｃ）のいずれかで表わされる化合物を有効成分とするアルコール障害予防剤：
- さらにサポニン含有植物の一部位またはそれから得られる脂溶性溶媒抽出エキス、該脂溶性溶媒抽出エキスの粗サポニンフラクションあるいはそれらからの単離精製物を含有し、前記サポニン含有植物の一部位が、トンブリ、タラノキの芽および樹皮、チクセツニンジンの根、セネガの根、ムクロジの果皮、セイヨウトチノキの種子から選ばれる少なくとも１種である請求項１に記載のアルコール障害予防剤。
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