JPH0575394B2

JPH0575394B2 -

Info

Publication number: JPH0575394B2
Application number: JP60015390A
Authority: JP
Inventors: Hitoshi Yamashita; Shinzo Nishi
Original assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1985-01-31
Filing date: 1985-01-31
Publication date: 1993-10-20
Also published as: JPS61176600A

Description

【発明の詳細な説明】

（産業上の利用分野）本発明は、ヒト正常組織由来細胞の細胞培養液
より採取した新規な組織型プラスミノーゲンアク
チベーターに対して特異性を有するモノクロナル
抗体およびその使用に関する。（従来の技術）リンパ球細胞と哺乳動物（例えば、マウスやラ
ツト）に由来する骨髄腫細胞との間の融合は、試
験管内において増殖し、複製可能な雑種細胞を産
み出すこと（Kohler and Milstein，Nature
256，495−497頁、1975年）を可能にした。この
ような雑種細胞は、予め決つた特異性のある均一
な抗体（モノクロナル抗体）を分泌するという特
質を有することから、種々のホルモン、蛋白質等
に対するモノクロナル抗体を産生する雑種細胞を
作製し、それらにより産生されたモノクロナル抗
体を種々の研究に利用する試みがなされてきた
（E.Dale Servier et al.，Clinical Chemistry
Vo1.27，No.11，1797〜1806，1981）。しかし、ヒト正常細胞由来の新規な組織型プラ
スミノーゲン・アクチベーターに対するモノクロ
ナル抗体については、いかなる知見もなかつた。プラスミノーゲンアクチベーターとしては今
日、尿または培養腎細胞から分離精製されたウロ
キナーゼ、およびストレプトコツキより採取され
るストレプトキナーゼが血栓溶解剤として実用に
供されている。しかし、これらはフイブリンに対する親和性の
点で劣るので、治療に際し必要な効果を得るには
大量に投与する場合が多く、内出血等の副作用が
発現することが知られている。すなわち、これら
によつて循環血液中で生成されるプラスミンは、
血中のプラスミンインヒビターと結合して速やか
に失活するため、治療効果をあげるためには、こ
れらを大量に投与して、血中のプラスミンインヒ
ビターの量を上回るプラスミンを生成する必要が
ある。しかし、大量のプラスミンが生成されると
フイブリノーゲンを分解して、出血傾向という副
作用を引き起すことになる。これに対しフイブリ
ンに親和性が高く、フイブリン上でプラスミンを
生成することができれば、循環血液中のプラスミ
ンインヒビターの影響を受けることなく、少量で
フイブリンを分解することができ、循環血液中の
フイブリノーゲンを分解する作用も弱くなる。か
かる実情からフイブリン親和性が高く、少量でか
つ血栓溶解活性が高く、副作用の少ない血栓溶解
剤が望まれている。一方、近年フイブリン親和性の高いプラスミノ
ーゲンアクチベーターが人黒色腫細胞培養液より
分離精製されている（特開昭57−28009号公報参
照）。しかしながら、これは腫瘍細胞を原料とす
るものであるから、抗原性、発癌性に問題があ
り、実用に供し得ないものである。これに対して、最近、ヒト正常組織由来の細胞
培養液より、下記の性質を有する新規な組織型プ
ラスミノーゲンアクチベーターが見出され、分離
精製された（特開昭59−51220号）。ａ分子量：63000±10000 ｂ等電点：7.0〜8.5 ｃフイブリンに対する親和性：ありｄコンカナバリンＡに対する親和性：ありｅ至適PH：７〜9.5 ｆ抗ウロキナーゼ特異抗体と反応しない該プラスミノーゲンアクチベーターの大きな利
点は、フイブリンに対する親和性が極めて高く、
また、ヒト正常細胞培養液より分離したものであ
るから、上述した各種プラスミノーゲンアクチベ
ーターの種々欠点を有しない副作用の少ない血栓
溶解剤となり得ることである。また、人黒色腫細胞由来のプラスミノーゲンア
クチベーターでは、人血清アルブミン添加による
安定化効果がない（Thromb Haemostas、48巻
３号、294〜296頁、1982年）のに対して、該プ
ラスミノーゲンアクチベーターでは安定化効果が
あり、長期保存、凍結乾燥による失活がないな
ど、人黒色腫細胞由来のプラスミノーゲンアクチ
ベーターとは種々の異なる性質を有するものであ
る。（発明が解決しようとする問題点）プラスミノーゲンアクチベーターの取得法とし
ては、適当な生育培体中で人の正常組織由来細
胞、たとえば、人胎児の腎、腸、肺、心臓、輪尿
管、皮膚、包皮および全胎児由来の細胞、人の胎
盤由来の細胞あるいは人の腎、腸、肺、甲状腺、
心臓、輪尿管、皮膚由来の細胞等を用いた組織培
養液、特に好ましくは、人胎児の腎、肺および包
皮由来の細胞を用いた組織培養液を、蛋白質化学
において通常使用される方法、たとえば、担体に
よる吸着法、イオン交換法、分別沈殿法、ゲル
過法、電気泳動法、各種アフイニテイクロマトグ
ラフイーを組み合わせることにより精製する方法
等を挙げることができる。しかし、培養液中の該
プラスミノーゲンアクチベーターは微量であり、
また、通常使用される各種クロマト法では、該プ
ラスミノーゲンアクチベーターとの特異的結合も
弱く、高純度の該プラスミノーゲンアクチベータ
ーを取得することは困難であり、加えて回収率も
満足のいくものではなかつた。故に、高純度の該
プラスミノーゲンアクチベーターを高回収率で取
得する特異的精製法の開発が望まれている。一方、血栓症等の治療に際して、該プラスミノ
ーゲンアクチベーターの作用機構の研究、血中レ
ベルの確認等の手段として、該プラスミノーゲン
アクチベーターの高感度検出法の開発が望まれて
いる。（問題点を解決するための手段）本発明者らは、これらの問題点を克服するため
鋭意研究を重ねた結果、細胞融合により該プラス
ミノーゲンアクチベーターに対して特異性を有す
るモノクロナル抗体を取得することに成功し、こ
のモノクロナル抗体を用いれば、１段階で高純度
高収率に該プラスミノーゲンアクチベーターを精
製できることを見出し、本発明を成すに至つた。
また、該モノクロナル抗体は免疫定量等にも用い
ることができ、かつ保存した雑種細胞を培養すれ
ば、いつでも均一な該モノクロナル抗体を大量に
取得できるなど工業的に非常に有用である。すなわち、本発明は、ヒト正常組織由来細胞の
細胞培養液より採取した新規な組織型プラスミノ
ーゲンアクチベーターに対して特異性を有するモ
ノクロナル抗体およびその使用に関するものであ
る。以下、細胞融合方法について具体的に説明を加
える。 (a) 抗体産生細胞の調製抗体産生細胞の調製は、常法に準じて行えばよ
い。すなわち、抗原である該プラスミノーゲンア
クチベーターで動物を免疫し、その動物の抗体産
生細胞を取得する方法によればよい。動物としては、マウス、ラツト、ウサギ、モル
モツト、ヒツジ、ウマ、ウシなどが例示され、抗
体産細胞としては脾細胞、リンパ節細胞、末梢血
細胞などが使用される。 (b) 骨髄腫細胞の調整細胞融合方法において使用される骨髄種細胞に
は特に限定はなく、多くのマウス、ラツト、ウサ
ギ、ヒトなどの動物の細胞株が適用できる。使用
する細胞株は、好ましくは薬剤抵抗性のものであ
つて、未融合の骨髄腫細胞が選択培地で生存でき
ず、雑種細胞のみが増殖するようにすべきであ
る。最も普通に用いられるものは、８−アザグア
ニン抵抗性の細胞株で、これはヒポキサンチン・
グアニン・ホスホリポシル・トランスフエラーゼ
を欠損し、ヒポキサンチン−アミノブテリン−チ
ミジン（HAT）培地中では生育できない性質を
有する。また、使用する細胞株は、いわゆる「非
分泌型」のものであることが好ましい。たとえ
ば、マウス骨髄腫株MOPC−21由来のP₃／X63−
Ag8U1（P₃U1）、P₃／X63−Ag・６・５・３、
P₃／NS1−Ｉ−Ag4−１、Sp2／Ｏ−Ag14、ラツ
ト骨髄腫細胞210・RCY3・Ag1・２・３などが
好適に用いることができる。 (c) 細胞融合通常、イーグル最少基本培地（MEM）、ロズ
ウエル・パーク・メモリアル・インステイチユー
ト（RPMI）1640培地などの培地中で１〜５×
10⁷個の骨髄腫細胞と抗体産生細胞１〜５×10⁸個
を混合（混合比は通常１：４〜１：10）、細胞融
合が行われる。融合促進剤としては、平均分子量
が1000〜6000のポリエチレングリコール（PEG）
が好ましいが、他にウイルスなども使用できる。
PEGの使用濃度は通常30〜50％である。 (d) 雑種細胞の選択的増殖細胞融合を終えた細胞は、20％ウシ胎児血清含
有RPMI1640培地などで適当に希釈し、マイクロ
タイタープレートに10⁵〜10⁶程度に植えつける。
各ウエルに選択培地（たとえば、HAT培地）を
加え、以後適当に選択培地の交換を行ない、培養
する。骨髄腫細胞として８−アザグアニン抵抗性
株を用いれば、未融合の骨髄腫細胞は、HAT培
地中では10日目ぐらいまで全部死滅し、また、抗
体産生細胞は正常細胞であるから、インビトロ
（invitro）では長時間生育できない。したがつ
て、培養10〜14日ぐらいから生育してくるものは
すべて雑種細胞である。 (e) 抗体産生雑種細胞の検索雑種細胞のスクリーニングは常法によればよ
く、特に限定はない。たとえば、雑種細胞の増殖
したウエルの上清の一部を採取し、該プラスミノ
ーゲンアクチベーターと反応させたのち、酵素、
ラジオアイソトープケイ光物質、発行物質で標識
した第２抗体との反応によつて標識量を測定し、
抗ヒト組織型プラスミノーゲンアクチベーターの
存在を検定することができる。 (f) クローニング各ウエル中には２種以上の雑種細胞が生育して
いる可能性があるので、限界希釈法などによりク
ローニングを行ない、モノクロナル抗体産生雑種
細胞を取得する。 (g) 抗体取得最も純粋なモノクロナル抗体は、所望の雑種細
胞を10％程度のウシ胎児血清を含むRPMI1640培
地などの適当な培養液で培養し、その培養上清液
から得ることができる。一方、さらに大量の抗体を取得するためには、
骨髄腫細胞の由来動物と同系の動物にブリスタン
（２，６，10，14−テトラメチルペンタデカン）
などの鉱物油を腹腔内投与し、その後、雑種細胞
を投与することにより、インビボ（in vivo）で
雑種細胞を大量に増殖させればよい。この場合、
10〜18日位で腹水腫瘍を形成し、血清および腹水
中に高濃度の抗体が生ずる。 (h) モノクロナル抗体の精製腹水からの抗ヒト組織型プラスミノーゲンアク
チベーターモノクロナル抗体の精製は、通常の血
清からの抗体の回収方法に準じた方法、例えば、
Hudsonら（Practical Immunology，Blackwell
Sci.Pub.，1976年）を適用することができる。本発明で用いる人正常組織由来細胞の細胞培養
液は、プラスミノーゲンアクチベーター産生能を
高めた種々の培養液中で培養したものを用いるこ
とができ、たとえば、特開昭54−107510号公報、
特開昭54−107511号公報記載の培養液等が挙げら
れる。本発明において抗原として用いる新規組織型プ
ラスミノーゲンアクチベーターの分離精製法の骨
子は、正常細胞培養液を次の工程に付すことであ
る。 (1) 硫酸アンモニウム塩析法 (2) 抗ウロキナーゼIgGセフアロースクロマトグ
ラフイー (3) フイブリンセフアロースクロマトグラフイー (4) コンカナバリンＡセフアロースクロマトグラ
フイー (5) セフアデツクスＧ−150ゲル過抗原物質として精製した新規組織型プラスミノ
ーゲンアクチベーターの力価測定は、次の方法で
行なつた（以下の実験についても同様）。 95％凝固フイブリノーゲン（プラスミノーゲン
含量約50カゼイン単位／ｇ凝固蛋白）を原料とし
て作製した寒天加フイブリン平板を用い、ウロキ
ナーゼを標準品とするプレート法で測定した。該
プラスミノーゲンアクチベーター溶液を、１％ゼ
ラチン、0.1M塩化ナトリウムおよび0.1％窒化ナ
トリウムを含む0.067Mトリス塩酸緩衝液（PH
8.0）で希釈し、フイブリン平板上で10IU／mlの
ウロキナーゼと同じ溶解窓を示す本発明に用いる
プラスミノーゲンアクチベーター溶液の濃度を
10U／mlとした。本発明によれば、人正常細胞由来の新規組織型
プラスミノーゲンアクチベーターに対して特異性
があることを特徴とするモノクロナル抗体が雑種
細胞系によつて提供される。かくして得られた抗人組織型プラスミノーゲン
アクチベーターモノクロナル抗体は、不溶性担体
と化学的に結合することにより、該プラスミノー
ゲンアクチベーター精製に利用することができ
る。すなわち、カラムに充填された該不溶性担体
と該プラスミノーゲンアクチベーターを含む人正
常細胞由来培養液またはこれらの粗精製溶液を接
触せしめることにより、該プラスミノーゲンアク
チベーターは該不溶性担体に固定されてカラムに
保持される。次に、PH５〜９の洗浄液で該不溶性
担体を洗浄して未吸着不純物質を除去し、続いて
溶離液にて該不溶性担体から吸着した該プラスミ
ノーゲンアクチベーターを溶離せしめる。ここで
用いられる不溶性担体、不溶性担体と抗ヒト組織
型プラスミノーゲンアクチベーターモノクロナル
抗体との結合方法、溶離液等は、通常のアフイニ
テイークロマトグラフイーに用いられるものなら
どのようなものでも適用することができる。（発明の効果）本発明の抗体を用いれば、人正常細胞由来培養
液またはこれらの粗精製プラスミノーゲンアクチ
ベーター溶液中に含まれる不純物質を１段階で容
易に分離除去することができ、極めて高い純度の
該プラスミノーゲンアクチベーターを高回収率で
取得することができる。さらに、該不溶性担体は新規組織型プラスミノ
ーゲンアクチベーターを脱着せしめたのち、洗浄
液で洗浄するだけで何回でも使用することができ
るので、組織型プラスミノーゲンアクチベーター
精製工程に簡便さを与えることができるなど多く
の利点を有し、工業的に極めて有用である。ま
た、本発明における抗ヒト組織型プラスミノーゲ
ンアクチベーターモノクロナル抗体の異なる利用
方法としては、臨床等における該プラスミノーゲ
ンアクチベーターの免疫定量が挙げられる。該プ
ラスミノーゲンアクチベーターの血中での作用機
構の研究など、凝固線溶系の解析に該モノクロナ
ル抗体を導入することにより、感度の高い微量定
量が可能になる。（実施例）次に、本発明を以下の実施例により詳細に説明
する。実施例１抗原の精製人肺細胞培養液５に硫安を300ｇ／の割合
で加え、４℃下一晩放置する。生じた沈殿を遠心
分離し、0.1％ツイン80を含む生理食塩水で溶解
する。得られた溶解液は液量500ml、該プラスミ
ノーゲンアクチベーター活性は30U／mlであつ
た。これを抗ウロキナーゼIgGセフアロースカラ
ム（1.6×２cm）に通過させた後、フイブリンセ
フアロースカラム（2.6×40cm）に連続的に吸着
させる。0.1％ツイン80を含む0.5MNaCl溶液で充
分洗浄後、0.1％ツイン80を含む0.5M Arginine
溶液で該プラスミノーゲンアクチベーターを溶出
する。この溶液は液量200ml、活性71U／mlであ
つた。これを0.1％ツイン80を含む生理塩水に透
析後、コンカナバリンＡセフアロースカラム
（1.6×15cm）に吸着させ、1MNaCl、0.1％ツイン
80を含む0.01Mリン酸緩衝液（PH7.0）で洗浄後、
当該溶液から0.4M α−Ｄ−methylmannoside、
2M KSCNおよび0.1％ツイン80を含む0.01Mリ
ン酸緩衝液（PH7.0）まで直線的に濃度を変え、
該プラスミノーゲンアクチベーターを溶出する。
得られた溶液は液量35ml、活性320U／mlであつ
た。これを限外過で濃縮後、1M NaCl、0.1％
ツイン80を含む0.01Mリン酸緩衝液（PH7.0）で
平衡化したセフアデツクスＧ−150カラム（1.6×
90cm）でゲル過を行ない、活性のある部分を集
める。得られた溶液は液量16ml、活性450U／ml、
比活性4910U／mgであつた（回収率48％）。マウスの免疫上述の如く精製した該プラスミノーゲンアクチ
ベーター100μgをフロイント・コンブリート・ア
ジユバントに乳濁化させ、マウスBALB／ｃ〓
群の皮下に２週間の間隔をあけて３回投与し、免
疫を行なつた。これらのマウスの中で、該プラス
ミノーゲンアクチベーターに対する血清抗体価が
最も高いマウスに該プラスミノーゲンアクチベー
ター100μgを腹腔内注射し、免疫を完了した。細胞融合最終免疫の３日後にマウスを殺し、脾臓を取り
出し、細断した後、ステンレスメツシユで圧迫、
過し、イーグルズ・ミニマム・エツセンシヤ
ル・メデイウム（MEM）に浮遊させ、脾臓細胞
浮遊液を得た。この脾細胞とマウス骨髄腫細胞
P₃／X63−Ag8U1（P₃U1）をそれぞれ血清を含有
しないMEMで３回洗浄し、脾細胞とP₃U1とを
10：１で混合して遠心後（800回転、５分）沈殿
を軽くほぐし、44％ポリエチレングリコール
2000／MEM溶液１mlを徐々に加え、37℃温水中
で１分間遠心管をゆつくり回転させて細胞融合を
行なつた。１分後MEM1mlを加えゆつくり回転
させ、さらに毎分１mlの割合でMEMを添加し、
計10mlとした後、600回転、５分間遠心して上清
を徐去した。この細胞沈殿物を10％ウシ胎児血清
含有ロズウエル・パーク・メモリアル・インステ
イチユート（RPMI）1640培地にP₃U1が５×10⁵
個／mlになるように懸濁し、96ウエルマイクロプ
レート（リンプロ社製）に0.1mlずつ植えつけた。１日後、HAT（ヒポキサンチン１×10^-4Ｍ、ア
ミノプテリン４×10^-7Ｍ、チミジン1.6×10^-5Ｍ）
を含んだRPMI1640−10％FCS培地（HAT培地）
を各ウエルに0.1mlずつ添加し、その後、３〜４
日毎に1/2量HAT培地で交換して、HAT選択を
進めた。雑種細胞は７日目ぐらいからいくつかの
ウエルで生育が認められ、10〜14日後にはほぼ全
ウエルで雑種細胞が増殖した。抗体産生細胞の検索とクローニング雑種細胞の生育してきたウエルの培養上清50μ
をとり、ポリスチレン製の96ウエルマイクロプ
レート上に固定した該プラスミノーゲンアクチベ
ーターとインキユベーシヨンし、これと結合する
ものを探したところ（EIA法）、２ウエルに強い
抗体活性を認めた。この２ウエルについて、96ウ
エルマイクロプレートに１個／ウエルの濃度で細
胞を植え付ける限界希釈法によりクローニングを
行ない、２個のクローン（H4D，H12A）が得ら
れた。クローニングした細胞を10％ウシ胎児血清
含有RPMI−1640培地を用いて培養を拡大し、細
胞を集め、15％ウシ胎児血清および10％ジメチル
スルホキシドを含有するRPMI−1640培地中で液
体窒素内に貯蔵した。雑種細胞の腹水化該プラスミノーゲンアクチベーターに対して結
合能を示す抗体を産生する雑種細胞（H12A）の
１×10⁷個を、あらかじめ0.2mlのプリスタン
（２，６，10，14−テトラメチルペンタデカン）
を腹腔内に投与しておいたBALB／ｃマウスの
腹腔内に接種することにより腹水化を行なつた。
雑種細胞を腹腔に投与して10日後、３〜５ml／匹
の腹水を採取した。実施例２モノクロナル抗体の精製実施例１で得られた腹水10mlから、Hudsonら
（Practical Immunology Blackwell Sci.Pub.，
1976年）の方法に準じてモノクロナル抗体を精製
した。まず、腹水10mlに硫安を2.66ｇ加え（35％飽
和）、４℃下一晩放置する。生じた沈殿を遠心分
離し、0.01Mリン酸緩衝液（PH８）5.5mlで溶解
し、100倍量の同緩衝液に一晩透析した。透析後
10000回転、５分間遠心分離して上澄み液７mlを
得た。このサンプルを充分量の0.01Mリン酸緩衝
液（PH８）で平衡化しておいたDEAEセフアロー
スカラム（フアルマシア社製）20mlにかけ、A₂₈₀
が0.02以下になるまで0.01Mリン酸緩衝液（PH
８）で洗浄した後、当該溶液から0.2MNaClを含
む0.01Mリン酸緩衝液（PH８）まで直線的に濃度
を変え、該モノクロナル抗体を分画溶出した。モ
ノクロナル抗体分画はEIAによる抗体活性および
SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法により
決定し、最終的にH12Aモノクロナル抗体溶液24
ml、41.6mgを精製取得した。実施例３モノクロナル抗体の物理化学的性質以下の物性測定は、実施例２で精製したモノク
ロナル抗体を用いて行なつた。ａ分子量：152000±5000 SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法によ
る還元形態において測定した。この試験では10％
ゲルを用いてPeason A.M.ら（Biohim.Biophys.
Acta.，490，27−34頁、1977年）の方法にした
がつて実施した。ｂ IgGサブクラス：IgG_2b ２％agar gelを用いたimmunodiffusion test
（Practical Immunolong，Blackwell Sci.Pub.，
107〜115頁、1976年）にて測定。クラスー特異性
抗体はウサビ抗マウスIgG1，G2a，G2b（MILES
社）を使用した。ｃ等電点：6.9〜7.2 薄層ゲル等電点電気泳動法にて等電点分画し測
定した。この試験では、アンフオライトとしてフ
アルマライトPH５〜８（フアルマシア社）を用い
てZ.L.Awdchら（Nature，219，66〜67頁、1980
年）の方法にしたがつて実施した。ｄアミノ酸配列（Ｎ末端）配列解析はEdman分解（Edman et at.，
European J.Biochem.，１，80，1967年）に基
いて行なつた。サンプルを気相プロテインシーケ
ンサー（Applied Biosystems社製、Model
470A）のカートリツジに導入し、予め作成した
プログラムを用いて自動的にcoupling、cleavage
およびconversion反応を行なつた。得られた
PTH（フエニルチオヒダントイン）−アミノ酸を
アセトニトリル／H₂Ｏ／TFA（トリフルオロ酢
酸）＝33／67／0.02（ｖ／ｖ／ｖ）に溶解し、逆相
高圧液体クロマトグラフ（カラム：4.6φ×30cm、
センシユー科学製SEQ−４）に注入し、その保
持時間を標準PTH−アミノ酸の保持時間と比較
することによつて各PTH−アミノ酸を同定した。得られたアミノ酸配列は下記のとおりである。

【表】

【表】（式中、Pcaはピロリドンカルボン酸、Ｘは未同
定残基を表わす。）実施例４免疫吸着クロマトグラフイーによる新規組織型
プラスミノーゲンアクチベーターの精製人胎児肺細胞培養液５に硫安を300ｇ／の
割合で加え、４℃下一晩放置する。生じた沈殿を
遠心分離し0.1％ツイン80を含む生理食塩水で溶
解する。得られた溶解液は液量460ml、該プラス
ミノーゲンアクチベーター活性は80U／mlであつ
た。この粗精製液を、0.1％ツイン80を含む生理
食塩水で十分に洗浄したH12Aモノクロナル抗体
を化学的に結合したセフアロース、フアルマシア
社（抗体３mg／ml担体）のカラム（0.9cmφ，0.5
ml）に通した。未吸着分画を0.1％ツイン80を含む生理食塩水
で洗浄除去後、カラムに吸着保持された該プラス
ミノーゲンアクチベーターを0.5M NaCl、0.1％
ツイン80を含む0.2M Gly−HCl緩衝液（PH2.5）
で溶出した。得られた溶液は液量2.4ml、活性
13800U／mlであつた。溶出した分画の吸光度
A₂₈₀と該プラスミノーゲンアクチベーターの活性
の関係を図面に示し、原料の粗精製液と溶出分画
の性質を下表に示した。

【表】上表から、免疫吸着クロマトグラフイーにより
比活性が一段階で約520倍に上昇し、28200U／mg
という非常に高純度の該プラスミノーゲンアクチ
ベーターが90％という高回収率で得られた。（全活性回収率は96％）

【図面の簡単な説明】

図面はH12Aモノクロナル抗体を用いたアフイ
ニテイークロマトパターンであり、縦軸の黒丸実
線は溶出液の吸光度（A₂₈₀）、破線は溶出液に含
まれる該プラスミノーゲンアクチベーター活性、
横軸は溶出液量を示す。

Claims

【特許請求の範囲】１人の正常組織由来細胞の細胞培養液より採取
した組織型プラスミノーゲンアクチベーターに対
する下記の性質を有するモノクロナル抗体。ａ分子量：152000±5000 ｂ IgGサブクラス：IgG_2b ｃ等電点：6.9〜7.2 ｄＬ鎖およびＨ鎖可変領域Ｎ末端アミノ酸配列【表】【表】（式中、Pcaはピロリドンカルボン酸、Ｘは未
同定残基を表わす。）