JPH0572373B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

〔産業上の利用分野〕 本発明はアミノ酸誘導体のエナンチオマーを液
体クロマトグラフイーによつて光学分割する分離
方法に関する。 〔従来の技術〕 これまで液体クロマトグラフイーを用いたアミ
ノ酸誘導体の光学分割には大井らによるJ.
Chromatogr.，257，111（1983）に記載のものが
ある。しかし、この方法では、アミノ酸自身の光
学純度を知るために、液体クロマトグラフイーで
光学分割可能な特殊な誘導体に換え、分割したに
すぎず、これらの誘導体を光学分割後に光学活性
なアミノ酸に変換することは困難である。従つ
て、この方法は光学活性なアミノ酸を得るための
前駆体とはなり得ない誘導体の分割例であり、一
般の誘導体には適用できなかつた。 〔発明が解決しようとする問題点〕 光学活性なアミノ酸の製造工業においては前駆
体であるアミノ酸誘導体を経由して光学活性なア
ミノ酸を製造する方法が広く用いられており、こ
の工程においてアミノ酸誘導体のエナンチオマー
を分析することは重要であるが、このようなアミ
ノ酸誘導体のエナンチオマーを液体クロマトグラ
フイーにより分離するための充填剤は知られてい
なかつた。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明者らは、光学活性アミノ酸の製造プロセ
スにおけるアミノ酸誘導体の光学異性体分析及び
その分取に用いられる分離方法として分離基材
（液体クロマトグラフイー用充填剤）を鋭意検討
した結果、シリカゲルにＬ−プロリンの銅塩を結
合した充填剤を用いることにより上記問題点を解
決しうることを見い出し本発明を完成した。 即ち本発明はシリカゲルにＬ−プロリンの銅塩
を結合してなる充填剤を用いる液体クロマトグラ
フイーによる下記の一般式〔〕，〔〕で示され
る化合物のエナンチオマーの分離方法である。

【化】

【化】 〔但し、式中Ｘは水素又はホルミル、C₁〜C₁₀
のアミル基、カルバモイル基、Ｎ−モノ又はジ−
（C₁〜C₁₀のアルキル及び／又はアリール）カルバ
モイル基、C₁〜C₁₀のアルキル又はアリールオキ
シカルボニル基を表わし、Ｙは水酸基、アミノ
基、フエノキシ基、C₁〜C₁₀のアルコキシ基（た
だしＸが水素の場合はＹは水酸基でない）を表わ
し、ＲはRCH（NH₂）COOHが天然又は人工の
アミノ酸であるような有機性置換基を表わすが、
Ｒは水素，−NHX，−COYではない〕 シリカゲルを担体として使用する本発明の充填
剤は下記の一般式（）で示される。

【化】 〔但し、式中Y¹，Y²，Y³のうち、少なくとも
１つはシリカゲル及びシリカゲルとのシロキサン
結合部分を表わし、残りはそれぞれ水素、炭素数
１〜６のアルキル基、炭素数６〜14のアリール
基、炭素数７〜20のアリールアルキル基、ハロゲ
ン、ヒドロキシ基、または炭素数１〜６のアルコ
キシ基もしくはこれら任意の組合せを表わす。Ｘ
は炭素数１〜20のスペーサーを表わす。ＲはＬ−
プロリンの銅塩を表わす〕 上記一般式（）で示される充填剤のスペーサ
ー部分を形成させるシラン処理剤としては公知の
いかなるものでも用いられるが、具体的には３−
クロロプロピルトリメトキシシラン、３−クロロ
ペロピルジメトキシメチルシラン、３−クロロプ
ロピルメチルジクロロシラン、３−クロロプロピ
ルトリクロロシラン、３−ブロモプロピルジメチ
ルクロロシラン、３−ブロモプロピルトリクロロ
シラン、３−ブロモプロピルトリメトキシシラ
ン、２−（３，４−エポキシシクロヘキシルエチ
ル）トリメトキシシラン、３−グリシドキシプロ
ピルトリメトキシシラン、ジエトキシ−３−グリ
シドキシプロピルメチルシラン、３−グリシドキ
シプロピルジメチルエトキシシラン、８−ブロモ
オクチルトリクロロシランなどが例示される。 本発明の分離方法としては一般式（）で示す
物質を液体クロマトグラフイーの充填剤として用
い、移動相に２価の銅の強酸塩の水溶液を用いる
のが好ましい。２価の銅の強酸塩としては例えば
塩化第二銅、硝酸第二銅、硫酸銅、過塩素酸銅及
びこれらの水和物であり、これらの水溶液として
使用する。 本発明に於て上記一般式〔〕，〔〕で示され
るアミノ酸誘導体のエナンチオマーを分離する液
体クロマトグラフイーに使用する円筒カラムはガ
ラス製もしくはステンレススチール製のいずれで
もよいが、通常は使用圧力と耐圧能力から撰択さ
れる。またカラムの大きさはいかなるものでも原
理的には可能であるが、試料の注入量、分析時
間、溶媒流量などから適当なものが撰択される。 上記一般式（）で示される充填剤は、上記カ
ラムに充填されるが、充填方法としては乾式ある
いは湿式法のいずれの方法も可能であるが、小さ
いカラムでは通常の高い理論段数が得られる湿式
法即ちスラリー法で充填するのが良い。充填され
たカラムはポンプと接続され溶媒が流されるが、
ポンプとカラムの間に注入器をもうけておき、そ
こから溶媒中に分離すべきエナンチオマーを注入
し、カラム中で分割が行なわれる。分割されたエ
ナンチオマーはカラム出口に設けられた検出器で
検出されるが検出の方法は可能ないかなる方法で
もよい。 本発明によつて光学分割される化合物の具体例
を上げると、〔〕式でＸ＝−COCH₃，Ｙ＝−
OHで示されるＮ−アセチルアミノ酸に代表され
るＮ−アシルアミノ酸、Ｘ＝−CONH₂，Ｙ＝−
OHで示されるＮ−カルバモイルアミノ酸、Ｘ＝
−Ｈ，Ｙ＝−NH₂で示されるアミノ酸の酸アミ
ド、

〔実施例〕

以下、本発明を実施例をもつて詳述するが、本
発明はこれらに限定されるものではない。 合成例 １ シリカゲルLichrosorb SI 100、粒径10μm（E.
Merck社製）を真空中で５時間、120〜150℃に
加熱し、乾燥する。乾燥したシリカゲル20gを無
水ベンゼン120mlに懸濁し、そこにグリシドキシ
プロピルトリメトキシシラン８mlを加え、乾燥窒
素気流下、加熱還流する。このとき生成するメタ
ノールは系外に除くようにして３時間反応させ
る。反応終了後室温に冷却し、グラスフイルター
で過する。得られた修飾シリカゲルは無水ベン
ゼンで洗つた後、真空中40℃で乾燥する。Ｌ−プ
ロリンのナトリウム塩1.24gを無水メタノール30
mlに溶解し、これに上記修飾シリカゲル3.5gを加
え懸濁させ室温で４日間振盪する。修飾したシリ
カゲルは過し、メタノールで洗つた後、硫酸銅
2gを純水50mlに溶解した水溶液中に移して銅塩
とした。これを再び過し、純水で洗うことによ
り、Ｌプロリンの銅塩が化学的に結合したシリカ
ゲルを得た。 実施例 １ 合成例１で得られた充填剤を用いて種々のアミ
ノ酸誘導体のラセミ体の光学分割を行なつた。即
ち、平均粒径が10μmで、平均細孔径が100Åの金
多孔性シリカゲルに結合したＬプロリンの銅塩の
充填剤を拘束液体クロマトグラフイー用ステンレ
スカラム（25cm×0.46cm）に充填し、2.5×10^-4Ｍ
硫酸銅水溶液を溶媒に用いて流速１ml／分、室温
でアミノ酸誘導体のラセミ体の光学分割を行なう
と、次の表−１の様な結果が得られた。

【表】

【表】 イシン
表−１中K′，α，R_Sは夫々次の如く定義され
る。 容量比（K′）＝〔（対掌体の保持時間）−
（デツドタイム）〕／デツドタイム 分離係数（α）＝より強く吸着される対掌体の容量比／
より弱く吸着される対掌体の容量比 分離度（R_S）＝２×（より強く吸着される対掌体とより
弱く吸着される対掌体の両ピーク間の距離）／両ピーク
のバンド幅の合計 表−１のα，R_Sの値が示すように、各々の化
合物において、エナンチオマーであるＤ体・Ｌ体
の溶出時間に十分な差が認められ、なおかつ、ピ
ークとしても良く分離されていることから、本発
明の方法がエナンチオマーの定性・定量分析及び
分取に用いうる光学分割法でしることがわかつ
た。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 下記の一般式〔〕又は〔〕で示される化
   合物のエナンチオマーを、シリカゲルにＬ−プロ
   リンの銅塩を結合してなる充填剤を用いる液体ク
   ロマトグラフイーによつて分離することを特徴と
   する分離方法。 【式】【式】 〔但し、式中Ｘは水素又はホルミル、C₁〜C₁₀
   のアシル基又はカルバモイル基、Ｎ−モノ又はジ
   −（C₁〜C₁₀のアルキル及び／又はアリール）カル
   バモイル基、C₁〜C₁₀のアルキル又はアリールオ
   キシカルボニル基を表わし、Ｙは水酸基、アミノ
   基、フエノキシ基、C₁〜C₁₀のアルコキシ基（た
   だしＸが水素のときはＹは水酸基でない）を表わ
   し、ＲはRCH（NH₂）COOHが天然又は人工の
   アミノ酸であるような有機置換基を表すが、Ｒは
   −Ｈ，−NHX，−COYではない〕