JPH0570362A - 新規抗腫瘍性物質の製造 - Google Patents
新規抗腫瘍性物質の製造Info
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- JPH0570362A JPH0570362A JP3258402A JP25840291A JPH0570362A JP H0570362 A JPH0570362 A JP H0570362A JP 3258402 A JP3258402 A JP 3258402A JP 25840291 A JP25840291 A JP 25840291A JP H0570362 A JPH0570362 A JP H0570362A
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- antitumor
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 抗腫瘍性、もしくは、腫瘍細胞増殖抑制作用
を有する、食品素材から得ることができる新たな物質を
提供する。 【構成】 腫瘍細胞の増殖抑制活性を有しマツタケの子
実体の水抽出によって得ることができる物質であって、
次の（１）〜（６）の理化学的性質を有する抗腫瘍性物
質。（１）熱によって沈殿し活性が低下する、（２）硫
酸アンモニウムにより塩析される、（３）プロテアーゼ
処理により活性が低下する、（４）活性においてグリコ
シダーゼの影響を受けない、（５）紫外吸収スペクトル
において波長２７５ｎｍ付近に吸収極大が認められる、
（６）ゲルろ過法による推定分子量がチログロブリンの
ものと同等もしくはそれ以上である。マツタケの子実体
を水による抽出に付し、該水抽出物から分子量が少なく
とも３，５００までの画分を除去することを特徴とす
る、上記の抗腫瘍性物質の製造法。上記の物質を抗腫瘍
剤に用いることができる。
を有する、食品素材から得ることができる新たな物質を
提供する。 【構成】 腫瘍細胞の増殖抑制活性を有しマツタケの子
実体の水抽出によって得ることができる物質であって、
次の（１）〜（６）の理化学的性質を有する抗腫瘍性物
質。（１）熱によって沈殿し活性が低下する、（２）硫
酸アンモニウムにより塩析される、（３）プロテアーゼ
処理により活性が低下する、（４）活性においてグリコ
シダーゼの影響を受けない、（５）紫外吸収スペクトル
において波長２７５ｎｍ付近に吸収極大が認められる、
（６）ゲルろ過法による推定分子量がチログロブリンの
ものと同等もしくはそれ以上である。マツタケの子実体
を水による抽出に付し、該水抽出物から分子量が少なく
とも３，５００までの画分を除去することを特徴とす
る、上記の抗腫瘍性物質の製造法。上記の物質を抗腫瘍
剤に用いることができる。
Description
【０００１】〔発明の背景〕
【産業上の利用分野】本発明は、マツタケ（Tricholoma
matsutake ）の子実体の水抽出物に由来し腫瘍細胞の
増殖抑制活性を有する抗腫瘍性物質およびその製造方法
に関するものである。
matsutake ）の子実体の水抽出物に由来し腫瘍細胞の
増殖抑制活性を有する抗腫瘍性物質およびその製造方法
に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】食用キノコの抗腫瘍性物質に関する研究
は多く行われ、また、これに関する数多くの特許出願が
なされている。マツタケ（Tricholoma matsutake ）に
ついては、その培養した菌糸体を用いた発明が特公昭５
４−８７１０号、昭５７−１２３０号の各公報に記載さ
れているが、この抗腫瘍性物質は菌糸体からは微量にし
か得ることができない。
は多く行われ、また、これに関する数多くの特許出願が
なされている。マツタケ（Tricholoma matsutake ）に
ついては、その培養した菌糸体を用いた発明が特公昭５
４−８７１０号、昭５７−１２３０号の各公報に記載さ
れているが、この抗腫瘍性物質は菌糸体からは微量にし
か得ることができない。
【０００３】〔発明の概要〕
【発明が解決しようとする課題】マツタケの抗腫瘍性物
質に関し、子実体を用いた例はまだ報告されていない。
また、一般に化学物質の生理活性はその化学構造に依存
するところが大きいため、抗腫瘍性を有する新規な化合
物に対しては不断の希求があるといえよう。本発明は、
抗腫瘍活性を有し、食品素材から実用的な量を得ること
ができる新たな物質を提供することを目的とする。
質に関し、子実体を用いた例はまだ報告されていない。
また、一般に化学物質の生理活性はその化学構造に依存
するところが大きいため、抗腫瘍性を有する新規な化合
物に対しては不断の希求があるといえよう。本発明は、
抗腫瘍活性を有し、食品素材から実用的な量を得ること
ができる新たな物質を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、種々の食品素
材の中でマツタケ（Tricholoma matsutake ）の水抽出
物中に特に高い抗腫瘍活性を有する物質が存在している
ことを見出すことにより上記目的を達成した。すなわ
ち、本発明による抗腫瘍性物質は、腫瘍細胞の増殖抑制
活性を有しマツタケの子実体の水抽出によって得ること
ができる物質であって、次の（１）〜（６）の理化学的
性質を有するものである。 （１）熱によって沈殿し活性が低下する。 （２）硫酸アンモニウムにより塩析される。 （３）プロテアーゼ処理により活性が低下する。 （４）活性においてグリコシダーゼの影響を受けない。 （５）紫外吸収スペクトルにおいて波長２７５ｎｍ付近
に吸収極大が認められる。 （６）ゲルろ過法による推定分子量がチログロブリンの
ものと同等もしくはそれ以上である。 また、本発明による上記抗腫瘍性物質の製造法は、マツ
タケの子実体を水による抽出に付し、該水抽出物から分
子量が少なくとも３５００までの画分を除去すること、
を特徴とするものである。
材の中でマツタケ（Tricholoma matsutake ）の水抽出
物中に特に高い抗腫瘍活性を有する物質が存在している
ことを見出すことにより上記目的を達成した。すなわ
ち、本発明による抗腫瘍性物質は、腫瘍細胞の増殖抑制
活性を有しマツタケの子実体の水抽出によって得ること
ができる物質であって、次の（１）〜（６）の理化学的
性質を有するものである。 （１）熱によって沈殿し活性が低下する。 （２）硫酸アンモニウムにより塩析される。 （３）プロテアーゼ処理により活性が低下する。 （４）活性においてグリコシダーゼの影響を受けない。 （５）紫外吸収スペクトルにおいて波長２７５ｎｍ付近
に吸収極大が認められる。 （６）ゲルろ過法による推定分子量がチログロブリンの
ものと同等もしくはそれ以上である。 また、本発明による上記抗腫瘍性物質の製造法は、マツ
タケの子実体を水による抽出に付し、該水抽出物から分
子量が少なくとも３５００までの画分を除去すること、
を特徴とするものである。
【０００５】〔発明の具体的説明〕抗腫瘍性物質 本発明による抗腫瘍性物質は、腫瘍細胞の増殖抑制活性
を有しマツタケの子実体の水抽出によって得ることがで
きる物質であって、前記したような（１）〜（６）の理
化学的性質を有するものである。具体的には、本発明抗
腫瘍性物質は、（１）１００℃１０分間の加熱で活性が
消失する、（２）９０％飽和の硫安分画で活性が沈殿に
移行する、（３）プロテアーゼ（たとえばトリプシン）
の作用により若干失活する、（４）活性に関してグリコ
シダーゼ（グルコアミラーゼあるいはエンドガラクトシ
ダーゼ）の影響を受けない、（５）紫外吸収スペクトル
において波長２７５ｎｍの付近に吸収極大が認められ
る、という理化学的性質を有しており、このことから本
発明物質はタンパク質性であると考えられる。また、担
体としてトヨパールＨＷ６５Ｓ（東ソー社製）を用いた
ゲルろ過法による分子量推定によれば、本発明物質の分
子量は６０万以上、更に具体的にはチログロブリンの分
子量（６６９，０００）と同等もしくはそれ以上、と考
えられる。マツタケの菌糸体から得られている抗腫瘍性
物質（特公昭５４−８７１０号、５７−１２３０号公
報）は、熱水抽出により得られる多糖を主体とする物質
でinvivo での効果を有するものであり、上記したよう
な性質を有する本発明物質とは明らかに異なるものであ
る。また、本発明物質の抗腫瘍活性は、後述するように
マウス正常細胞（具体的には胎児線維芽細胞）を腫瘍ウ
イルス（具体的にはポリオーマウイルス）で形質転換し
た細胞を用い、この細胞の増殖抑制を測定することによ
って確認された。
を有しマツタケの子実体の水抽出によって得ることがで
きる物質であって、前記したような（１）〜（６）の理
化学的性質を有するものである。具体的には、本発明抗
腫瘍性物質は、（１）１００℃１０分間の加熱で活性が
消失する、（２）９０％飽和の硫安分画で活性が沈殿に
移行する、（３）プロテアーゼ（たとえばトリプシン）
の作用により若干失活する、（４）活性に関してグリコ
シダーゼ（グルコアミラーゼあるいはエンドガラクトシ
ダーゼ）の影響を受けない、（５）紫外吸収スペクトル
において波長２７５ｎｍの付近に吸収極大が認められ
る、という理化学的性質を有しており、このことから本
発明物質はタンパク質性であると考えられる。また、担
体としてトヨパールＨＷ６５Ｓ（東ソー社製）を用いた
ゲルろ過法による分子量推定によれば、本発明物質の分
子量は６０万以上、更に具体的にはチログロブリンの分
子量（６６９，０００）と同等もしくはそれ以上、と考
えられる。マツタケの菌糸体から得られている抗腫瘍性
物質（特公昭５４−８７１０号、５７−１２３０号公
報）は、熱水抽出により得られる多糖を主体とする物質
でinvivo での効果を有するものであり、上記したよう
な性質を有する本発明物質とは明らかに異なるものであ
る。また、本発明物質の抗腫瘍活性は、後述するように
マウス正常細胞（具体的には胎児線維芽細胞）を腫瘍ウ
イルス（具体的にはポリオーマウイルス）で形質転換し
た細胞を用い、この細胞の増殖抑制を測定することによ
って確認された。
【０００６】抗腫瘍性物質の製造方法 マツタケの子実体の水抽出およびこの抽出物より得られ
る目的物、すなわち本発明による抗腫瘍性物質、の取得
は、種々の食品素材等からのタンパク質の抽出に慣用さ
れる任意の手段によって行うことができるが、基本的に
はマツタケの子実体を水で抽出し、この抽出物について
透析等の手段により分子量約３，５００以下の物質を除
去し、この画分を好ましくは更に濃縮もしくは凍結乾燥
することにより目的物を得ることができる。抽出の対象
となるマツタケの子実体は、抽出の効率を考慮すれば抽
出材料としては細かく破砕したものであることが好まし
い。本発明による抗腫瘍性物質の製造方法の具体的な好
ましい例の一つは、次のように示すことができる。ま
ず、生のもしくは冷凍したマツタケ子実体を（冷凍した
ものの場合は解凍後）、ホモジナイザー等で破砕し、こ
れに適当量好ましくは２倍量程度の水を加え適当な時
間、たとえば数分間程度攪拌抽出する。抽出物を低温下
（好ましくは４℃程度）で遠心分離（通常５，０００〜
１０，０００r.p.m.、１０〜４５分の条件）し、粗抽出
液を得る。これを凍結乾燥等により濃縮し（たとえば体
積が１／１〜１／２０程度になるまで）好ましくは、分
画分子量約３５００の透析膜を用いて、低温下（好まし
くは１〜１０℃程度）で水に対して適当な時間、好まし
くは一昼夜程度透析する。透析内容物を低温下（好まし
くは１〜１０℃程度）で遠心分離（好ましくは５，００
０〜１０，０００r.p.m.、１０〜４５分）し、上清を凍
結乾燥して、褐色の目的物を得ることができる（図１参
照）。この目的物は、必要に応じて塩析およびカラムク
ロマトグラフィー等の精製手段によって更に純度を増加
させることができる。このようにして得られる目的物
は、前記したような（１）〜（６）の物理化学的性質を
有し、腫瘍細胞の増殖抑制活性を有している（後記実験
例参照）。なお、本発明物質を後記の抗腫瘍剤として使
用する場合、通常は活性物質としてマツタケ子実体の水
抽出物を透析したものを用いるが、必要があればこの透
析前のものを用いてもよい。
る目的物、すなわち本発明による抗腫瘍性物質、の取得
は、種々の食品素材等からのタンパク質の抽出に慣用さ
れる任意の手段によって行うことができるが、基本的に
はマツタケの子実体を水で抽出し、この抽出物について
透析等の手段により分子量約３，５００以下の物質を除
去し、この画分を好ましくは更に濃縮もしくは凍結乾燥
することにより目的物を得ることができる。抽出の対象
となるマツタケの子実体は、抽出の効率を考慮すれば抽
出材料としては細かく破砕したものであることが好まし
い。本発明による抗腫瘍性物質の製造方法の具体的な好
ましい例の一つは、次のように示すことができる。ま
ず、生のもしくは冷凍したマツタケ子実体を（冷凍した
ものの場合は解凍後）、ホモジナイザー等で破砕し、こ
れに適当量好ましくは２倍量程度の水を加え適当な時
間、たとえば数分間程度攪拌抽出する。抽出物を低温下
（好ましくは４℃程度）で遠心分離（通常５，０００〜
１０，０００r.p.m.、１０〜４５分の条件）し、粗抽出
液を得る。これを凍結乾燥等により濃縮し（たとえば体
積が１／１〜１／２０程度になるまで）好ましくは、分
画分子量約３５００の透析膜を用いて、低温下（好まし
くは１〜１０℃程度）で水に対して適当な時間、好まし
くは一昼夜程度透析する。透析内容物を低温下（好まし
くは１〜１０℃程度）で遠心分離（好ましくは５，００
０〜１０，０００r.p.m.、１０〜４５分）し、上清を凍
結乾燥して、褐色の目的物を得ることができる（図１参
照）。この目的物は、必要に応じて塩析およびカラムク
ロマトグラフィー等の精製手段によって更に純度を増加
させることができる。このようにして得られる目的物
は、前記したような（１）〜（６）の物理化学的性質を
有し、腫瘍細胞の増殖抑制活性を有している（後記実験
例参照）。なお、本発明物質を後記の抗腫瘍剤として使
用する場合、通常は活性物質としてマツタケ子実体の水
抽出物を透析したものを用いるが、必要があればこの透
析前のものを用いてもよい。
【０００７】抗腫瘍活性の測定 抗腫瘍活性の測定は、一般的に行なわれている方法、た
とえば腫瘍を移植したマウスを用いる方法（文献１参
照）によってin vivo で行うことができるが、下記に示
すように、腫瘍ウィルスで形質転換させた動物細胞を用
いてin vitroで細胞増殖抑制作用を測定することによ
り、研究に要する設備、費用あるいは時間等の点におい
てin vivo 法と比較して著しく有利となる。in vitroで
の細胞増殖抑制作用の測定方法の好ましい例は、具体的
には次に記載するようなものである。すなわち、マウス
胎児線維芽細胞（たとえば３Ｔ３（スイスアルビノマウ
ス由来）、ＢＡＬＢ／３Ｔ３（ＢＡＬＢ／ｃ マウス由
来））等の正常細胞およびこれらをポリオーマウイルス
（たとえばＳＶ４０）等の腫瘍ウィルスで形質転換させ
た細胞を好ましくは１０％血清（３Ｔ３系の場合にはウ
シ胎児血清、ＢＡＬＢ／３Ｔ３系の場合には仔ウシ血
清）含有の培地（好ましくはダルベッコ変法イーグル培
地）に適当な濃度、たとえば２×１０4 個／mlとなるよ
うに播種し、通常２４時間、３７℃、５％ＣＯ2 下に培
養する。ここに、本発明物質のリン酸緩衝液（以下ＰＢ
Ｓという）溶液を加えさらに４８時間程度培養し、この
時の細胞数をＭＴＴ法により測定し、コントロールの細
胞数に対する％で表す（後記実験例および図１を参
照）。ＭＴＴ法は、要約すれば、まず測定の４時間前に
細胞にＭＴＴ（３‐（４，５‐dimethylthiazol ‐２‐
ｙｌ）‐２，５‐diphenyl tetrazolium bromide）のＰ
ＢＳ溶液を加えて更に４時間培養する。培養上清を除い
た後に塩酸酸性 （０．０４Ｎ）イソプロパノールを加えて生細胞のミト
コンドリアの作用により生成したホルマザンを溶解した
後、溶液の５９５ｎｍの吸光度（対照６５５ｎｍ）を測
定する、という方法である（文献２，３参照）。上記の
ような測定方法により、本発明物質は、図３に示される
ように終濃度２μｇ／mlで既に細胞増殖阻害作用を示
す。また、ＩＣ50（半数阻害濃度）は約４０〜１０μｇ
／mlであり、２０μｇ／mlで４種類の細胞ともほぼ死滅
する。特筆すべき事は、濃度１０μｇ／mlの場合、形質
転換細胞がほぼ死滅するのに対し、正常細胞が７０〜８
０％の増殖を示すことである。
とえば腫瘍を移植したマウスを用いる方法（文献１参
照）によってin vivo で行うことができるが、下記に示
すように、腫瘍ウィルスで形質転換させた動物細胞を用
いてin vitroで細胞増殖抑制作用を測定することによ
り、研究に要する設備、費用あるいは時間等の点におい
てin vivo 法と比較して著しく有利となる。in vitroで
の細胞増殖抑制作用の測定方法の好ましい例は、具体的
には次に記載するようなものである。すなわち、マウス
胎児線維芽細胞（たとえば３Ｔ３（スイスアルビノマウ
ス由来）、ＢＡＬＢ／３Ｔ３（ＢＡＬＢ／ｃ マウス由
来））等の正常細胞およびこれらをポリオーマウイルス
（たとえばＳＶ４０）等の腫瘍ウィルスで形質転換させ
た細胞を好ましくは１０％血清（３Ｔ３系の場合にはウ
シ胎児血清、ＢＡＬＢ／３Ｔ３系の場合には仔ウシ血
清）含有の培地（好ましくはダルベッコ変法イーグル培
地）に適当な濃度、たとえば２×１０4 個／mlとなるよ
うに播種し、通常２４時間、３７℃、５％ＣＯ2 下に培
養する。ここに、本発明物質のリン酸緩衝液（以下ＰＢ
Ｓという）溶液を加えさらに４８時間程度培養し、この
時の細胞数をＭＴＴ法により測定し、コントロールの細
胞数に対する％で表す（後記実験例および図１を参
照）。ＭＴＴ法は、要約すれば、まず測定の４時間前に
細胞にＭＴＴ（３‐（４，５‐dimethylthiazol ‐２‐
ｙｌ）‐２，５‐diphenyl tetrazolium bromide）のＰ
ＢＳ溶液を加えて更に４時間培養する。培養上清を除い
た後に塩酸酸性 （０．０４Ｎ）イソプロパノールを加えて生細胞のミト
コンドリアの作用により生成したホルマザンを溶解した
後、溶液の５９５ｎｍの吸光度（対照６５５ｎｍ）を測
定する、という方法である（文献２，３参照）。上記の
ような測定方法により、本発明物質は、図３に示される
ように終濃度２μｇ／mlで既に細胞増殖阻害作用を示
す。また、ＩＣ50（半数阻害濃度）は約４０〜１０μｇ
／mlであり、２０μｇ／mlで４種類の細胞ともほぼ死滅
する。特筆すべき事は、濃度１０μｇ／mlの場合、形質
転換細胞がほぼ死滅するのに対し、正常細胞が７０〜８
０％の増殖を示すことである。
【０００８】抗腫瘍剤 上述のように、本発明物質は、腫瘍細胞増殖抑制活性を
有しており、抗腫瘍剤として有用である。抗腫瘍剤とし
ての本発明化合物は合目的的な任意の投与経路、具体的
には、静脈内投与、動脈内投与、経口投与、皮下投与、
筋肉内投与、舌下投与、などにより投与することができ
る。本発明物質を薬剤として投与する場合は、投与方
法、投与目的により、注射剤、懸濁剤、錠剤、顆粒剤等
の形状で投与することができ、また、これらの製剤を製
造するには、通常の可溶化剤、保存剤、賦形剤、安定剤
等を添加することができる。
有しており、抗腫瘍剤として有用である。抗腫瘍剤とし
ての本発明化合物は合目的的な任意の投与経路、具体的
には、静脈内投与、動脈内投与、経口投与、皮下投与、
筋肉内投与、舌下投与、などにより投与することができ
る。本発明物質を薬剤として投与する場合は、投与方
法、投与目的により、注射剤、懸濁剤、錠剤、顆粒剤等
の形状で投与することができ、また、これらの製剤を製
造するには、通常の可溶化剤、保存剤、賦形剤、安定剤
等を添加することができる。
【０００９】〔実験例〕
実験例１： 評価物質の抽出 冷凍したマツタケ子実体３９３ｇを解凍後、ホモジナイ
ザーで破砕し、これに２倍量の水を加え数分間攪拌抽出
した。抽出物を低温下（４℃）遠心分離 （８０００r.p.m.、３０min.）し、粗抽出液１０４０ml
を得た。これを凍結乾燥により体積を１０分の１程度に
濃縮し、透析膜スペクトラ／ポア６（分画分子量３５０
０、スペクトラム社製）を用いて、低温下水に対して一
昼夜透析した。この高分子画分の透析内容物を低温下遠
心分離（８０００r.p.m.、３０min.）し、上清を凍結乾
燥して、褐色の粉末０．９７１ｇを得た（図１参照）。
他の種々の食品素材（後記表１参照）について、上記の
方法と同様にして水抽出物の高分子画分の凍結乾燥物を
調製した。
ザーで破砕し、これに２倍量の水を加え数分間攪拌抽出
した。抽出物を低温下（４℃）遠心分離 （８０００r.p.m.、３０min.）し、粗抽出液１０４０ml
を得た。これを凍結乾燥により体積を１０分の１程度に
濃縮し、透析膜スペクトラ／ポア６（分画分子量３５０
０、スペクトラム社製）を用いて、低温下水に対して一
昼夜透析した。この高分子画分の透析内容物を低温下遠
心分離（８０００r.p.m.、３０min.）し、上清を凍結乾
燥して、褐色の粉末０．９７１ｇを得た（図１参照）。
他の種々の食品素材（後記表１参照）について、上記の
方法と同様にして水抽出物の高分子画分の凍結乾燥物を
調製した。
【００１０】実験例２： 抗腫瘍性物質のスクリーニン
グ マウス胎児線維芽細胞３Ｔ３（スイスアルビノマウス由
来）、ＢＡＬＢ／３Ｔ３（ＢＡＬＢ／ｃ マウス由
来）、及びこれらをポリオーマウイルスＳＶ４０で形質
転換させた３Ｔ３‐ＳＶ４０、ＢＡＬＢ／３Ｔ３‐ＳＶ
４０を１０％血清（３Ｔ３系はウシ胎児血清、ＢＡＬＢ
／３Ｔ３系は仔ウシ血清）含有の培地（ダルベッコ変法
イーグル培地）に２×１０4 個／mlとなるように播種
し、２４時間、３７℃、５％ＣＯ２下に培養した。ここ
に、実験例１で調製した各凍結乾燥サンプルのリン酸緩
衝液（以下ＰＢＳという）溶液を加えさらに４８時間培
養し、この時の細胞数を前記のＭＴＴ法により測定し、
コントロールの細胞数に対する％で表した。表１に示さ
れるように、マツタケ子実体の水抽出物は著しく高い抗
腫瘍性（腫瘍細胞の増殖抑制作用）を示した。
グ マウス胎児線維芽細胞３Ｔ３（スイスアルビノマウス由
来）、ＢＡＬＢ／３Ｔ３（ＢＡＬＢ／ｃ マウス由
来）、及びこれらをポリオーマウイルスＳＶ４０で形質
転換させた３Ｔ３‐ＳＶ４０、ＢＡＬＢ／３Ｔ３‐ＳＶ
４０を１０％血清（３Ｔ３系はウシ胎児血清、ＢＡＬＢ
／３Ｔ３系は仔ウシ血清）含有の培地（ダルベッコ変法
イーグル培地）に２×１０4 個／mlとなるように播種
し、２４時間、３７℃、５％ＣＯ２下に培養した。ここ
に、実験例１で調製した各凍結乾燥サンプルのリン酸緩
衝液（以下ＰＢＳという）溶液を加えさらに４８時間培
養し、この時の細胞数を前記のＭＴＴ法により測定し、
コントロールの細胞数に対する％で表した。表１に示さ
れるように、マツタケ子実体の水抽出物は著しく高い抗
腫瘍性（腫瘍細胞の増殖抑制作用）を示した。
【００１１】実験例３： マツタケ子実体の水抽出物の
活性測定 実験例２に示した活性測定法を用いて、マツタケ子実体
の水抽出物の濃度と細胞増殖抑制の経時変化を検討し
た。この結果、図３に示すように、本発明物質は終濃度
２μｇ／mlで既に細胞増殖阻害作用を示している。ま
た、ＩＣ50（半数阻害濃度）は約４０〜１０μｇ／mlで
あり、２０μｇ／mlで４種類の細胞ともほぼ死滅してい
る。特筆すべき事は、濃度１０μｇ／mlの場合、形質転
換細胞がほぼ死滅するのに対し、正常細胞が７０〜８０
％の増殖を示していることである。
活性測定 実験例２に示した活性測定法を用いて、マツタケ子実体
の水抽出物の濃度と細胞増殖抑制の経時変化を検討し
た。この結果、図３に示すように、本発明物質は終濃度
２μｇ／mlで既に細胞増殖阻害作用を示している。ま
た、ＩＣ50（半数阻害濃度）は約４０〜１０μｇ／mlで
あり、２０μｇ／mlで４種類の細胞ともほぼ死滅してい
る。特筆すべき事は、濃度１０μｇ／mlの場合、形質転
換細胞がほぼ死滅するのに対し、正常細胞が７０〜８０
％の増殖を示していることである。
【００１２】実験例４： マツタケ子実体水抽出物の物
理化学的性質の検討 （ａ）熱の影響 マツタケ子実体水抽出物のＰＢＳ溶液を沸騰水中１０分
間加熱し、冷却後生じた沈殿を遠心分離により取り除き
細胞増殖抑制活性を測定した。図４に示されるように、
水抽出物の活性は上記の加熱により、著しく低下するこ
とが確認された。
理化学的性質の検討 （ａ）熱の影響 マツタケ子実体水抽出物のＰＢＳ溶液を沸騰水中１０分
間加熱し、冷却後生じた沈殿を遠心分離により取り除き
細胞増殖抑制活性を測定した。図４に示されるように、
水抽出物の活性は上記の加熱により、著しく低下するこ
とが確認された。
【００１３】（ｂ）硫酸アンモニウム処理の影響 マツタケ子実体水抽出物の水溶液に硫酸アンモニウムを
９０％飽和となるように溶解し、遠心分離により上清と
沈殿を得た。各々を水に対して十分透析して硫酸アンモ
ニウムを除き、引続き凍結乾燥した。各々を等量の容積
ＰＢＳに溶解し、未処理のものとの活性を比較した。図
２に示されるように本水抽出物中の活性のほとんどが沈
殿画分に移行することが確認された。
９０％飽和となるように溶解し、遠心分離により上清と
沈殿を得た。各々を水に対して十分透析して硫酸アンモ
ニウムを除き、引続き凍結乾燥した。各々を等量の容積
ＰＢＳに溶解し、未処理のものとの活性を比較した。図
２に示されるように本水抽出物中の活性のほとんどが沈
殿画分に移行することが確認された。
【００１４】（ｃ）プロテアーゼ処理の影響 マツタケ子実体水抽出物のＰＢＳ溶液にトリプシン（５
００：１、w/w ）を加え、３７℃で２４時間作用させた
ものについて活性を測定した。図４に示されるように、
本抽出物のトリプシン処理物は、未処理のものに比べ若
干の活性の低下を示した。
００：１、w/w ）を加え、３７℃で２４時間作用させた
ものについて活性を測定した。図４に示されるように、
本抽出物のトリプシン処理物は、未処理のものに比べ若
干の活性の低下を示した。
【００１５】（ｄ）グルコシダーゼの影響 マツタケ子実体水抽出物の０．０１Ｍ酢酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ４．５）溶液にグルコアミラーゼ（Rhizopus
niveus由来、生化学工業社製）を１Ｕ加え、３７℃で
１８時間作用させた。また、本抽出物の０．０１Ｍ酢酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．８）溶液にエンド‐β‐ガ
ラクトシダーゼ（Escherichia freundii由来、生化学
工業社製）を０．０３Ｕ加え、３７℃で１８時間作用さ
せた。それぞれの酵素処理物について活性を測定した。
その結果、図５に示されているように、いずれの酵素処
理によっても本抽出物の活性の低下は認められなかっ
た。
衝液（ｐＨ４．５）溶液にグルコアミラーゼ（Rhizopus
niveus由来、生化学工業社製）を１Ｕ加え、３７℃で
１８時間作用させた。また、本抽出物の０．０１Ｍ酢酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．８）溶液にエンド‐β‐ガ
ラクトシダーゼ（Escherichia freundii由来、生化学
工業社製）を０．０３Ｕ加え、３７℃で１８時間作用さ
せた。それぞれの酵素処理物について活性を測定した。
その結果、図５に示されているように、いずれの酵素処
理によっても本抽出物の活性の低下は認められなかっ
た。
【００１６】（ｅ）ゲルろ過 マツタケ子実体水抽出物の０．０５Ｍ炭酸水素アンモニ
ウム溶液についてトヨパールＨＷ６５Ｓ（東ソー社製）
を担体として用いるゲルろ過を行った。図６はその溶出
パターンである。溶出したものを５つのフラクションに
分けて活性を測定したところフラクション２に活性が認
められた。また、分子量推定のために標準タンパク質と
して、チログロブリン、β‐アミラーゼ、アルコールデ
ヒドロゲナーゼを流した。これより本水抽出物の分子量
はチログロブリン（分子量６６９，０００）と同等かそ
れ以上と推定された。
ウム溶液についてトヨパールＨＷ６５Ｓ（東ソー社製）
を担体として用いるゲルろ過を行った。図６はその溶出
パターンである。溶出したものを５つのフラクションに
分けて活性を測定したところフラクション２に活性が認
められた。また、分子量推定のために標準タンパク質と
して、チログロブリン、β‐アミラーゼ、アルコールデ
ヒドロゲナーゼを流した。これより本水抽出物の分子量
はチログロブリン（分子量６６９，０００）と同等かそ
れ以上と推定された。
【００１７】（ｆ）紫外吸収スペクトル マツタケ子実体水抽出物の水溶液について紫外吸収スペ
クトルを測定したところ、波長２７５ｎｍ付近に吸収極
大が認められた。以上の実験例の結果より、マツタケ子
実体抽出物は、（１）水溶性である、（２）非透析画分
に存在し、およその分子量はチログロブリン（分子量６
６９，０００）と同等かそれ以上である、（３）熱に対
して不安定である、（４）硫酸アンモニウムにより塩析
される、（５）プロテアーゼにより活性が低下するが、
グリコシダーゼの影響は受けない、という特徴を有して
いるといえる。以上より、マツタケ子実体水抽出物に含
まれている本発明物質は、タンパク質であると考られ
る。
クトルを測定したところ、波長２７５ｎｍ付近に吸収極
大が認められた。以上の実験例の結果より、マツタケ子
実体抽出物は、（１）水溶性である、（２）非透析画分
に存在し、およその分子量はチログロブリン（分子量６
６９，０００）と同等かそれ以上である、（３）熱に対
して不安定である、（４）硫酸アンモニウムにより塩析
される、（５）プロテアーゼにより活性が低下するが、
グリコシダーゼの影響は受けない、という特徴を有して
いるといえる。以上より、マツタケ子実体水抽出物に含
まれている本発明物質は、タンパク質であると考られ
る。
【００１８】 表１ 抗腫瘍性スクリーニング結果 （水抽出、高分子画分） 3T3 3T3/SV40 BALB A31 BALB/SV40 ラッキョウ （100 μｇ/ml ） 93.3 97.8 80.6 90.8 （10μｇ/ml ） 94.0 102.7 99.8 97.8 松茸 3.2 0.2 0.6 2.7 49.9 44.4 69.7 4.4 メンマ 66.2 63.2 85.3 74.2 83.2 91.2 100.3 85.1 やわらぎ 87.9 84.3 91.5 102.2 87.7 96.3 89.5 97.8 イカ肉 75.6 89.5 88.0 75.2 82.2 94.0 81.6 84.1 ねり梅 83.5 93.0 77.5 107.7 75.6 92.4 79.2 87.9 葉唐辛子（葉） 32.1 57.1 61.0 84.9 58.4 74.8 71.9 84.2 葉唐辛子（実） 40.8 23.3 48.7 73.3 87.1 87.5 76.9 106.7 スサビノリ 72.5 82.3 84.3 88.7 79.4 89.0 79.5 85.2 パプリカ 58.9 55.6 93.2 109.5 96.3 96.0 89.6 96.7 ガーリックミンチ 63.4 65.9 87.4 74.6 85.7 85.0 91.3 90.8 宗田節 59.6 54.8 93.1 71.0 66.6 73.1 94.9 98.2 ヒトエグサ 61.5 51.3 63.2 68.8 69.1 67.9 60.8 88.0 からし菜 53.7 50.3 79.9 91.3 78.6 85.1 84.0 89.8 昆布 53.5 39.4 22.3 23.3 75.6 65.1 55.2 89.0 かつを内臓 50.2 37.5 24.1 39.3 82.0 85.0 79.6 87.4 きくらげ 87.5 96.5 83.1 98.1 91.0 98.0 84.8 96.5 イカゴロ（生） 81.1 86.3 83.5 102.1 86.3 94.9 80.5 88.3 イカゴロ（塩） 79.8 55.9 66.6 86.5 78.3 80.8 75.7 77.8 豆腐よう 90.0 91.3 81.1 88.3 88.5 92.6 77.5 88.8 ザーサイ 47.4 30.9 28.7 10.6 78.7 88.3 73.7 92.3 楽京発酵液 90.0 90.9 74.9 82.9 85.8 92.1 76.4 88.1 ゆず果汁 80.9 89.7 77.0 87.1 81.1 93.0 85.5 89.7 梅酢ストレート 55.1 76.5 75.9 98.5 78.6 86.6 76.8 83.6
【００１９】＜参考文献＞ 文献１ Kikuo Nomoto,Chikao Yoshikumi,Kenichi Matsunaga,Ta
kayosyi Fujii andKenji Takeya”Restoration of Anti
body-forming Capacities by PS-K inTumor-bearing Mi
ce”Gann 66(1975)365-374 文献２ Tim Mosmann ”Rapid Colorimetric Assay for Cellula
r Growth and Survival:Application to Proliferation
and Cytotoxicity Assays”Journal of Immunological
Methods 65(1983)55,63 文献３ Lora M.Green,Jeanne L,Reade and Carl F,Ware ”Rapi
d Colormetric Assayfor Cell Viability:Application
to the Quantitation of Cytotoxic andGrowth Inhibit
ory Lymphokines ”Journal of Immunological Methods
70(1984)257-268
kayosyi Fujii andKenji Takeya”Restoration of Anti
body-forming Capacities by PS-K inTumor-bearing Mi
ce”Gann 66(1975)365-374 文献２ Tim Mosmann ”Rapid Colorimetric Assay for Cellula
r Growth and Survival:Application to Proliferation
and Cytotoxicity Assays”Journal of Immunological
Methods 65(1983)55,63 文献３ Lora M.Green,Jeanne L,Reade and Carl F,Ware ”Rapi
d Colormetric Assayfor Cell Viability:Application
to the Quantitation of Cytotoxic andGrowth Inhibit
ory Lymphokines ”Journal of Immunological Methods
70(1984)257-268
【００２０】
【発明の効果】本発明物質は、すぐれた抗腫瘍活性、も
しくは腫瘍細胞の増殖抑制活性を有しており、マツタケ
子実体の水抽出によって容易に得ることができる。本発
明物質が上記のような生理活性を有することは当業者に
とって思いがけなかったことと解される。
しくは腫瘍細胞の増殖抑制活性を有しており、マツタケ
子実体の水抽出によって容易に得ることができる。本発
明物質が上記のような生理活性を有することは当業者に
とって思いがけなかったことと解される。
【図１】種々の食品素材の抽出凍結乾燥サンプルの作成
方法を示す説明図。
方法を示す説明図。
【図２】マツタケ子実体抽出物の活性の硫酸アンモニウ
ム処理による影響を示す説明図。
ム処理による影響を示す説明図。
【図３】マツタケ子実体抽出物の濃度と細胞（３Ｔ３、
３Ｔ３／ＳＶ４０、ＢＡＬＢ、ＢＡＬＢ／ＳＶ４０）増
殖抑制の関係を示す説明図。
３Ｔ３／ＳＶ４０、ＢＡＬＢ、ＢＡＬＢ／ＳＶ４０）増
殖抑制の関係を示す説明図。
【図４】マツタケ子実体抽出物の活性の熱およびトリプ
シン処理による影響を示す説明図。
シン処理による影響を示す説明図。
【図５】マツタケ子実体抽出物の活性のグリコシダーゼ
処理による影響を示す説明図。
処理による影響を示す説明図。
【図６】マツタケ子実体抽出物のゲルろ過の結果を示す
説明図。
説明図。
Claims (2)
- 【請求項１】腫瘍細胞の増殖抑制活性を有しマツタケの
子実体の水抽出によって得ることができる物質であっ
て、次の（１）〜（６）の理化学的性質を有する、抗腫
瘍性物質。 （１）熱によって沈殿し活性が低下する。 （２）硫酸アンモニウムにより塩析される。 （３）プロテアーゼ処理により活性が低下する。 （４）活性においてグリコシダーゼの影響を受けない。 （５）紫外吸収スペクトルにおいて波長２７５ｎｍ付近
に吸収極大が認められる。 （６）ゲルろ過法による推定分子量がチログロブリンの
ものと同等もしくはそれ以上である。 - 【請求項２】マツタケの子実体を水による抽出に付し、
該水抽出物から分子量が少なくとも３５００までの画分
を除去することを特徴とする、請求項１に記載された抗
腫瘍性物質の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3258402A JPH0570362A (ja) | 1991-09-10 | 1991-09-10 | 新規抗腫瘍性物質の製造 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3258402A JPH0570362A (ja) | 1991-09-10 | 1991-09-10 | 新規抗腫瘍性物質の製造 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0570362A true JPH0570362A (ja) | 1993-03-23 |
Family
ID=17319738
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3258402A Pending JPH0570362A (ja) | 1991-09-10 | 1991-09-10 | 新規抗腫瘍性物質の製造 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0570362A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5302699A (en) * | 1992-09-04 | 1994-04-12 | Director Of National Food Research Institute, Ministry Of Agriculture, Forestry And Fisheries | Antitumorigenic protein, method of preparing it and antitumorigenic composition containing the protein as active component |
| WO2013069821A1 (en) * | 2011-11-10 | 2013-05-16 | Michio Tani | Malignant tumor treatment agent and food and drink including same |
| CN113969302A (zh) * | 2021-11-09 | 2022-01-25 | 四川旅游学院 | 一种松茸蛋白肽的制备工艺 |
-
1991
- 1991-09-10 JP JP3258402A patent/JPH0570362A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5302699A (en) * | 1992-09-04 | 1994-04-12 | Director Of National Food Research Institute, Ministry Of Agriculture, Forestry And Fisheries | Antitumorigenic protein, method of preparing it and antitumorigenic composition containing the protein as active component |
| WO2013069821A1 (en) * | 2011-11-10 | 2013-05-16 | Michio Tani | Malignant tumor treatment agent and food and drink including same |
| JP2013103886A (ja) * | 2011-11-10 | 2013-05-30 | Michishi Tani | 悪性腫瘍治療剤及びそれを含む飲食品 |
| CN113969302A (zh) * | 2021-11-09 | 2022-01-25 | 四川旅游学院 | 一种松茸蛋白肽的制备工艺 |
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