JPH0551599B2

JPH0551599B2 -

Info

Publication number: JPH0551599B2
Application number: JP59022475A
Authority: JP
Inventors: Kenichi Myoshi; Minako Yanagya; Tatsuro Kawazoe
Original assignee: Wakunaga Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Wakunaga Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1984-02-09
Filing date: 1984-02-09
Publication date: 1993-08-03
Also published as: JPS60166695A

Description

【発明の詳細な説明】

発明の背景技術分野本発明は、一般に、新規オリゴヌクレオチド誘
導体に関する。さらに具体的には、本発明は、ヌ
クレオチドの3′−末端リン酸基延長上に適度な長
さのスペーサーを介して一級アミノ基を導入して
なるオリゴヌクレオチド誘導体に関する。本発明
は、また、このようなオリゴヌクレオチド誘導体
の製造法にも関する。先行技術近年、核酸の化学合成は新しい保護基の導入あ
るいはトリエステル法、ホスフアイト法等の新し
い縮合法の開発により飛躍的に進歩している。ま
た、遺伝子工学の急速な進歩とあいまつて、核酸
の化学合成がこの分野でも重要な意義をもつよう
になつてきた。例えば人工遺伝子を合成し、遺伝
子組換え操作を利用して有用物質の産生が行なわ
れている（インターフエロン：Nature、281，
544（1979）、白血球由来インターフエロン：
Nature、287，411（1980））。また、ハイブリツド
法のためのプローブとしての例（Nucl.Acids
Res.９，879（1981））、あるいはmRNAあるいは
一本鎖DNAから逆転写酵素あるいはDNAポリメ
ラーゼによつて、二本鎖DNAを合成する際に必
要な鋳型DNAに相補的なDNA断片（プライマ
ー）として利用する例（Nucl.Acids Res.８，
4057（1980））、等の応用例もある。このように、核酸の有機化学的合成手段は、生
体から単離できない特殊な配列をもつオリゴヌク
レオチドの合成を可能にし、分子生物学、遺伝子
工学等の研究に多大な寄与をするものである。本発明者らは現在まで、種々のオリゴヌクレオ
チドの合成を行なつてその応用を検討してきた
が、特にアフイニテイクロマトグラフイー用樹脂
あるいは非放射性アフイニテイプローブ等を開発
すべく鋭意努力を重ねた結果、これまでにこれら
の製造の際に有用な中間体であるオリゴヌクレオ
チド誘導体を見出した（特開昭59−27900号、特
開昭59−93098号、特開昭59−93099号および特開
昭59−93100号）。発明の概要今回、本発明者らは別の部位に官能基を導入す
べく鋭意研究を行なつた結果、新たに有用な化合
物である3′−アミノアルキルオリゴヌクレオチド
誘導体を見出した。要旨本発明によるオリゴヌクレオチド誘導体は、下
式〔〕で示されるものであること、を特徴とす
るものである。また、本発明による下式〔〕で示されるオリ
ゴヌクレオチド誘導体の製造法は、下式〔′〕
で示される化合物の3′−末端延長上のR²、5′−末
端のR³基、塩基部分およびリン酸部分の保護基
をすべて除去すること、を特徴とするものであ
る。〔ただし、ｐは任意の自然数であり、R⁰はリ
ン酸基の保護基であり、R¹は二価の直鎖または
分岐鎖の炭化水素残基であり、R²は水素または
アミノ基の保護基であり、R³基は水素またはヌ
クレオチドの5′−水酸基の保護基であり、B′はヌ
クレオチドを構成する塩基であつて必要に応じて
保護されたものであり、Ｂはヌクレオチドを構成
する塩基である（B′またはＢおよびR⁰が複数個
存在するときは、それらは同一でも異なつてもよ
い）。ただし、式〔′〕で示される化合物は、
R⁰，R²，R³およびB′に関してその少なくとも一
つにおいて保護されたものであるとする。〕効果本発明者らの合成した3′−アミノアルキル−オ
リゴデオキシリボヌクレオチドは、下記(1)〜(3)の
5′−アミノアルキルオリゴヌクレオチド特開昭59
−93100号の特徴に加えて、さらに(4)〜(7)の特徴
および利用価値を有するものである。 (1) いかなる塩基配列を有するアフイニテイーク
ロマトグラフ用オリゴクヌレオチド樹脂や非放
射性ハイブリダイゼイシヨンプローブも製造す
ることができる。 (2) 合成が非常に簡単であつて、大量合成が可能
である。 (3) 該オリゴヌクレオチドはその中に存在する他
の官能基（水酸基、リン酸基および塩基部分の
アミノ基など）よりも反応性が高い一級アミノ
基を有するので、反応条件等の設定により他の
化合物を選択的にアミノ基部分と結合させるこ
とが可能である。 (4) 本発明者らのさきに提案した5′−アミノアル
キル−オリゴヌクレオチドと対をなす化合物と
して、研究上および応用上重要である。 (5) 5′−末端側が普通のオリゴヌクレオチドと同
様に利用でき、たとえば〔³²Ｐ〕によりラベル
化が可能である。 (6) 3′−アミノアルキル−オリゴヌクレオチドと
5′−アミノアルキル−オリゴヌクレオチドを組
み合せて使用することができる。たとえば標識
物質（たとえばビオチン、２，４−ジニトロフ
エニル基など）をそれぞれのアミノ誘導体に付
加後、リンカーとして天然のDNAに結合させ、
それぞれの標識物質の性質を利用して特定の
DNAを分離または検出する。 (7) 前記の本発明者らの提案した5′−アミノアル
キル−オリゴヌクレオチドの合成方法を組み合
せることにより、本発明オリゴヌクレオチドの
5′−末端にもアミノアルキル基を導入すること
ができる。このビス−アミノ誘導体は、標識物
質を２倍付加できるので、その標識物質による
検出感度を倍に高めたり、異なる標識物質を挿
入して２つの検出方法を利用できるようにする
ことが可能である。発明の具体的説明オリゴヌクレオチド誘導体〔〕本発明によるオリゴヌクレオチド誘導体は、前
記の式〔〕で示されるものである（以下、化合
物〔〕という）。式中、記号

【式】は、2′−デオキシリボヌクレオシドの3′−および5′−水酸基を除いたデオキシ
リボヌクレオシド残基を示すのに慣用されている
ものであつて、具体的には下記の構造のものであ
る。置換基Ｂはヌクレオチドを構成する塩基を示
し、通常はアデニン、チミン、シトシンまたはグ
アニンである。化合物〔〕中にＢが複数個存在
するときは、それらは同一でも異なつてもよい。ｐは、自然数を示し、化合物〔〕の重合度を
示すものである。その場合のｐは合成及び精製が
可能ならば、いかなる数でもよいが、実用的には
１〜40程度、特に１〜20程度、である。基R¹は化合物〔〕のヌクレオチド部分の3′−
末端リン酸基とアミノ部分とを連結する二価の直
鎖または分岐鎖の炭化水素残基である。この部分
はヌクレオチド鎖の延長および脱保護に影響を及
ぼさずかつその条件で安定であればいかなるもの
でもよい。特に、炭素数２〜20程度の直鎖または
分岐鎖のアルキレン基が適当である。化合物〔〕の合成一般的説明化合物〔〕、すなわち本発明による3′−アミ
ノアルキルオリゴヌクレオチド、は合目的的な任
意の方法によつて合成することができる。一つの好ましい方法は、前記の式〔′〕のオ
リゴヌクレオチド誘導体、すなわちオリゴデオキ
シヌクレオチドの3′−末端リン酸基に基R¹を介し
て一級アミノ基を有し、この一級アミノ基、ヌク
レオチドの塩基部分およびリン酸基部分ならびに
5′−末端水酸基のうちの少なくとも一つが保護さ
れたものであるもの、のすべての保護基を除去す
ることからなるものである。一方、式〔′〕の化合物は、たとえば3′−末
端水酸基以外が保護されたヌクレオチドとアミノ
基が保護されたアミノアルミルアルコールとをリ
ン酸基を介して縮合させ、必要に応じて鎖長を伸
ばす方法によつて合成することができる。第１図は、この好ましい合成法の一例を示すフ
ローチヤートである。フローチヤート中の記号
は、下記の意味を持つ（その意義ないし詳細は、
後記した通りである）。 R⁰ リン酸基を保護する置換基である。 R¹ 二価の直鎖または分岐鎖の炭化水素残基で
ある。 R² 水素またはアミノ基の保護基である。 R³ 水素または5′−末端水酸基の保護基である。ｍ，ｎ，ｐ任意自然数ｂ塩基 B′ 必要に応じて保護された塩基。通常はN⁶−
ベンゾイルアデニン、Ｎ−イソブチリルグアニ
ン、N⁶−ベンゾイルシトシンおよびチミン
（すなわち保護不要）より選択される。

【式】二価のリン酸化剤なお、デオキシオリゴリボヌクレオチドの合成
法は既に各種のものが公知であつて、保護基の種
類およびその導入ないし除去ならびに縮合その他
について上記以外の詳細は核酸の化学合成に関す
る成書や総説、たとえば「ヌクレオシド・ヌクレ
オチドの合成」（丸善1977年）、「核酸有機化学」
（化学同人1979年）、「核酸」（朝倉書店1979年）、
Tetrahedron，34，31（1978）、有合化、34，723
（1978）および化学の領域、33，566（1979）等、
を参照されたい。化合物

〔０〕、〔0′〕、〔Ｉ〕、〔〕および〔′
〕
ならびにその合成これらの各式で示される化合物（以下、それぞ
れ化合物

〔０〕、〔0′〕、〔Ｉ〕、〔〕、および
〔′〕という）は、前記の式で示されるものであ
る。R¹は前記した通りに定義されるものであり、
R⁰，R²およびR³は、それぞれ水素あるいはリン
酸基、一級アミノ基または5′−末端水酸基の保護
基であり、B′はヌクレオチドを構成する塩基で
あつて、必要に応じて保護されたものである。本
発明化合物〔〕は化合物〔′〕の保護基をす
べて除去することからなる方法で製造することが
好ましいから、化合物〔′〕はR⁰，R²，R³およ
びＢの少なくとも一つが保護されたものでなけれ
ばならない。リン酸基を保護するR⁰は、オルトクロロフエ
ニル基が代表的である。一級アミノ基を保護する
R²は、トリフルオロアセチル基またはｏ−ニト
ロフエニルスルフエニル基が代表的である。5′−
末端水酸基を保護するR³はジメトキシトリチル
基が代表的である。ｍおよびｎは合成および精製が可能であるなら
ばいかなる数でもよいが、実用的には１〜40程
度、特に１〜20程度、である。ｍ＋ｎは前記した
ｐの定義を充足するものでなければならない。なお、二価のリン酸化剤の基Ｘは、トリアゾー
ルまたはベンゾトリアゾールであることが好まし
い。式〔′〕で示されている化合物は、式〔〕
（ｍ＝１）から出発し、通常用いられる保護ヌク
レオチド（化合物〔0′〕）を順次縮合させること
によつて合成することができる。化合物〔′〕の合成法をその一実施態様（第
１図）について示せば、下記の通りである。ま
ず、第１図において、化合物

〔０〕（ｍ＝１）に
二価のリン酸化剤（たとえば、ホスホジトリアゾ
リド、ホスホジクロリドまたはホスホジベンゾト
リアゾリド等）を作用させてリン酸化し、ついで
化合物〔Ｉ〕（この化合物はアミノアルキレンア
ルコール（NH₂−R¹−OH）のアミノ基をR²で
保護することにより得ることができる）を縮合さ
せることにより化合物〔〕（ｍ＝１）を得る。なお、化合物

〔０〕はｍ＞１でもよいが（この
化合物も通常のオリゴヌクレオチド合成法で製造
可能）、所望重合度Ｐを実現するには化合物

〔０〕
としてｍ＞１のものを用いるよりもｍ＝１の化合
物〔〕に化合物〔0′〕を１回ないし数回縮合さ
せることによる（詳細後記）方が好ましい。次に、化合物〔〕（ｍ＝１）に任意の通常の
合成に使用される保護ヌクレオチド（化合物
〔0′〕）を適当な回数縮合させることにより、目的
の鎖長ｐの化合物〔′〕を得ることができる。
縮合は縮合剤を用いることがふつうであつて、好
ましい縮合剤としてはトリイソプロピルベンゼン
スルホニルテトラゾリド、メシチレンスルホニル
テトラゾリドおよびメシチレンスルホニルニトロ
トリアゾリド等がある。また縮合はモノマー（ｎ
＝１）を順次縮合するよりも実施例に示すよう
に、ブロツク同士の縮合を行なうのが好ましい。
これは縮合回数が少なくてすむこと、精製が容易
なことなどによるものである。なお、反応条件等
の詳細は後記実験例を参照されたい。また、化合
物〔′〕の他の合成法をも含めた合成法の詳細
については、同時出願の特開昭60−166694号公報
の記載を参照されたい。化合物〔〕の合成化合物〔〕は、上記化合物〔′〕の保護基
をすべて除去することによつて得ることができ
る。各保護基の除去は、所与の保護基の種類およ
び反応性に応じて、適当な試薬を用いて適当な順
序で行なうことができる。好ましい方法の一つは、下記の通りである。す
なわち、先ず、リン酸トリエステル中のオルトク
ロロフエニル基（R⁰）および塩基部分のアシル
基は、0.5Mのテトラメチルグアニジン−ピリジ
ン−２−カルボアルドキシムのジオキサン−水
（９：１（ｖ／ｖ））溶液で処理後、アルカリ処理
（濃アンモニア水）を行なうことより除去される。
R²がトリフルオロアセチル基の場合は、アンモ
ニア処理によつて同時に脱離されるが、オルトニ
トロフエニルスルフエニル基である場合はメルカ
プトエタノール処理が必要である。R²として他
の保護基を用いた場合は、オリゴヌクレオチド部
分が安定な条件で、さらに別の処理を加えること
も可能である。次に、R³が未だ残つた状態の化合物〔′〕を
セフアデツクスＧ−50を用いて一度粗精製する。
これは、R³（ジメトキシトリチル基）を利用した
精製法を用いるためである。すなわち、逆相カラ
ムによるHPLCでまずR³をもつオリゴヌクレオ
チドを分離し、次に80％酢酸によつてR³を除去
する。これを再度逆相カラムによるHPLCで精製
して、目的の3′−アミノアルキルオリゴヌクレオ
チド〔〕を得る。なお、R³を直ちに除去し、
イオン交換クロマトグラフイーあるいはポリアク
リルアミドゲル電気泳動などにより精製すること
も可能である。実験例フローチヤート第１図のフローチヤートに従つて、本発明の化
合物〔〕を合成した。第１図で、記号は次の意味をもつ。 B′ ベンゾイル化アデニンまたはチミンＢアデニンまたはチミン R⁰ オルトクロロフエニル R¹ ヘキセン R² トリフルオロアセチル R³ ジメトキシトリチル R⁴ シアノエチル MSNT メシチレンスルホニルニトロトリア
ゾリド

【式】Ｘはトリアゾールまたはベンゾトリアゾール実施例１−１ピリジン共沸により無水にした化合物

〔０〕
（B′＝Ｎ−ベンゾイルアデニン、ｍ＝１）（1.31g、
2mM）にｏ−クロロフエニルホスホジトリアゾ
リドのジオキサン溶液（7ml／mM、2.8mM）を
加えて２時間反応させる。薄層クロマトグラフイ
ーにより反応の完了を確認した後、ピリジン共
沸、トルエン共沸により無水にした化合物〔Ｉ〕
（トリフルオロアセチル−６−アミノヘキサノー
ル）（640mg、3mM）及び１−メチル−イミダゾ
ール（500mg、6mM）を加えて一夜反応させる。
反応終了後、溶媒を留去し、クロロホルムで抽出
し、水、0.5Mリン酸二水素ナトリウム水溶液、
飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、および水で順次
洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥する。クロロ
ホルムを留去後、シリカゲルシヨートカラム（ク
ロロホルムのメタノール溶液、０→４％）で精製
して、目的の化合物〔〕（ｍ＝１）を得る。収率1.50g、70％この化合物〔〕（B′＝Ｎ−ベンゾイルアデニ
ン、ｍ＝１）（500mg、0.48mM）を取り、２％−
ベンゼンスルホン酸のクロロホルム−メタノール
（７：3v／ｖ）溶液（10ml）中で、室温にて３分
間で脱トリチル化する。飽和炭酸水素ナトリウム
および水で洗浄後、クロロホルムを留去する。こ
れに、化合物〔0′〕（B′＝Ｎ−ベンゾイルアデニ
ン、ｎ＝２）（1.03g、0.72mM）をピリジン−ト
リエチルアミン−水（３：１：1v／ｖ）20mlで
室温で30分処理してR⁴を除去しかつ溶媒を完全
に留去した化合物を加え、共沸させて無水とす
る。これに無水ピリジン（5ml）およびメシチレ
ンスルホニルニトロトリアゾリド（以下MSNT
と記す）（430mg、1.44mM）を加えて、２時間反
応させる。薄層クロマトグラフイーで反応の完了
を確認した後、濃縮する。トルエン共沸によりピ
リジンを除去したのち、２％ベンゼンスルホン酸
のクロロホルム−メタノール（７：3v／ｖ）溶
液処理（6ml、室温、５分間）して、脱トリチル
化する。常法により抽出を行ない、シリカゲルで
精製して、目的の化合物〔′〕（B′＝Ｎ−ベン
ゾイルアデニン、ｐ＝３、R³＝Ｈ）を得る。収
量410mg（0.23nM）、48％実施例１−２化合物

〔０〕（B′＝チミン、ｍ＝１、1.10g
2mM）、ジトリアゾリド溶液（7ml／mM、
2.8mM）、化合物〔Ｉ〕（トリフルオロアセチル
−６−アミノヘキサノール、640mg 3mM）およ
び１−メチルイミダゾール（500mg、6mM）を加
えて以下実施例１−１と同様に反応させ、精製し
て、化合物〔〕（B′＝チミン、ｍ＝１）、1.13g
（60％）を得る。この化合物〔〕（270mg、0.3mM）を同様に
脱トリチル化後、脱シアノエチル化した化合物
〔0′〕（B′＝チミン、ｎ＝２、R⁴＝Ｈ、530mg、
0.44mM）と無水ピリジン（2ml）中MSNT（260
mg、0.88mM）を用いて縮合させる。２％ベンゼ
ンスルホン酸により脱トリチル化後、抽出精製し
て、目的の化合物〔′〕（B′＝チミン、ｐ＝３、
R³＝Ｈ）、230mg、52％を得る。実施例１−３実施例１−１で合成した化合物〔〕（B′＝Ｎ
−ベンゾイルアデニン、ｍ＝３）（210mg、
0.12mM）および脱シアノエチル化した化合物
〔0′〕（B′＝Ｎ−ベンゾイル−アデニン、ｎ＝
３、R⁴＝Ｈ、300mg、0.15mM）を無水ピリジン
2ml中MSNT（220mg、0.75mM）を用いて縮合さ
せる。２％ベンゼンスルホン酸処理後、精製し
て、目的のヘキサマー〔′〕（B′＝Ｎ−ベンゾ
イルアデニン、ｐ＝６、R³＝Ｈ）240mg（59％）
を得る。実施例１−４実施例１−２で合成した化合物〔〕（B′＝チ
ミン、ｍ＝３、R³＝Ｈ、110mg、0.075mM）およ
び脱シアノエチル化した化合物〔0′〕（B′＝チミ
ン、ｎ＝３、R⁴＝Ｈ、155mg、0.10mM）を無水
ピリジン（2ml）中MSNT（130mg、0.45mM）を
用いて縮合させる。脱トリチル化後精製して、目
的のヘキサマー〔′〕（B′＝チミン、ｐ＝６、
R³＝Ｈ）120mg（52％）を得る。実施例１−５実施例１−３で合成した化合物〔〕（B′＝Ｎ
−ベンゾイルアデニン、ｐ＝６、R³＝Ｈ、220
mg、0.065mM）および脱シアノエチル化した化
合物〔0′〕（B′＝Ｎ−ベンゾイルアデニン、ｎ＝
６、R⁴＝Ｈ、250mg、0.5mM）を無水ピリジン中
MSNTを用いて一夜放置して縮合させる。反応
後濃縮し、シリカゲルシヨートカラムで精製し
て、目的のドデカマー〔′〕（B′＝Ｎ−ベンゾ
イルアデニン、ｐ＝12、R³＝DMTr）220mg（45
％）を得る。実施例１−６実施例１−４で合成した化合物〔〕（B′＝チ
ミン、ｎ＝６、R³＝Ｈ、50mg、0.02mM）および
脱シアノエチル化した化合物〔0′〕（B′＝チミン、
ｎ＝６、R⁴＝Ｈ、170mg、0.06mM）を無水ピリ
ジン2ml中MSNT（100mg、0.33mM）と共に一夜
放置して縮合させる。反応後濃縮し、シリカゲル
シヨートカラムで精製して、目的のドデカマー
〔′〕（B′＝チミン、ｐ＝12、R³＝DMTr）50mg
（54％）を得る。実施例２−１実施例１−５で合成した化合物〔〕（B′＝Ｎ
−ベンゾイルアデニン、ｐ＝12）を約20mg取り、
0.5Mテトラメチルグアニジン−ピリジン−２−
カルボアルドキシムのジオキサン−水（９：
1v／ｖ）溶液（0.5M TMG−Oximeと略す）
200μlを加えて室温で16時間処理する。これに濃
アンモニア水2.5mlを加えて、50℃で６時間処理
する。濃縮後、50mM重炭酸トリエチルアンモニ
ウム緩衝液（TEAB緩衝液PH7.5）1mlを溶かし、
エーテル1mlで３回洗浄する。水層を取り、セフ
アデツクスＧ−50（1.5cm×120cm、5mM TEAB
緩衝液）で分離する。最初に溶出される分画を集
め（第２図）、さらに逆相カラム（μ
Bondapak C18、10→30％アセトニトリル／
50mM TEAA緩衝液、PH7.2）を用いた高速液体
クロマトグラフイーで精製する（第３図）。トリ
チル基をもつメインピーク（25％アセトニトリル
付近に溶出する。）を分取し、80％酢酸中10分間
処理して脱トリチル化し、再度逆相カラム（０→
20％アセトニトリル）で精製する（第４図）。目
的の3′−アミノヘキシル−ドデカアデニル酸
〔〕（Ｂ＝アデニン、ｐ＝12）は15％アセトニト
リル付近に溶出される。また、3′−アミノヘキシルドデカチミジル酸
〔〕（B′＝チミン、ｐ＝12）は、実施例１−６
で得た化合物〔〕（B′＝チミン、ｐ＝12、R³＝
DMTr）を用いて実施例２−１と同様の方法で
脱保護、精製することにより得られる。実施例２−２実施例１−３で合成した化合物〔〕（B′＝Ｎ
−ベンゾイルアデニン、ｐ＝６、R³＝Ｈ）約20
mgをとり、0.5M TMG−Oxime溶液200μlを加え
て処理、続いて濃アンモニア水で処理する。セフ
アデツクスG50（1.5cm×120cm、50mM TEAA緩
衝液PH7.5）により粗精製した後（図５）、逆相カ
ラム（μ Bondapak C18、０→20％アセトニト
リル／50mM TEAA緩衝液、PH7.2）を用いた高
速液体クロマトグラフイーで精製する（第６図）。
化合物〔〕（Ｂ＝アデニン、ｐ＝６）がメイン
ピークとして得られた。この場合、反応中間体であるためあらかじめト
リチル基が除去されていたが、純度が高かつたた
め良好な分離精製ができた。確認実施例２−１および２−２で得られた化合物
〔〕（Ｂ＝アデニン、ｐ＝12）および（Ｂ＝アデ
ニン、ｐ＝６）とマーカーとしてトリデカアデニ
ル酸（A13）およびトリデカチミジル酸（T13）
を0.02ODずつとり〔γ³²−Ｐ〕ATPおよびT4ポ
リヌクレオチドキナーゼを用いて、5′水酸基を³²
Ｐでリン酸化する。これを20％ポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動（7M尿素）により分析し、目的
物の確認および純度の検定を行なつた。その電気
泳動パターンのオートラジオグラフを第７図に示
す。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の化合物を合成する方法の一
例を示すフローチヤートである。第２図は、実施
例２−１の脱保護中間体のセフアデツクスＧ−50
での溶出パターンを示したものである。第３図お
よび第４図は、実施例２−１におけるμ
Bondapak C18を用いた高速液体クロマトグラフ
イーの溶出パターンを示したものであつて、第３
図がトリチル体、第４図が化合物〔〕（Ｂ＝ア
デニン、ｐ＝12、R³＝Ｈ）のパターンである。
第５図および第６図は、中間体である実施例１−
３の化合物を脱保護精製（実施例２−２）したも
ののセフアデツクスG50のパターンおよびμ
Bondapak C18による高速液体クロマトグラフイ
ーの溶出パターンである。第７図は、20％ポリア
クリルアミドゲル電気泳動（7M尿素）パターン
のオートラジオグラフである。Ａ……A13、Ｂ……化合物〔〕（Ｂ＝アデニ
ン、Ｐ＝12）、Ｃ……化合物〔〕（Ｂ＝アデニ
ン、ｐ＝６）、Ｄ……T13。なお、第３〜７図は、
いずれも模写したものである。

Claims

【特許請求の範囲】１下式〔〕で示されるものであることを特徴
とする、オリゴヌクレオチド誘導体。〔ただし、ｐは任意の自然数であり、R¹は二
価の直鎖または分岐鎖の炭化水素残基であり、Ｂ
はヌクレオチドを構成する塩基である（Ｂが複数
個存在するときは、それらは同一でも異なつても
よい）。〕２塩基Ｂがアデニン、チミン、シトシンおよび
グアニンからなる群より選ばれたものである、特
許請求の範囲第１項記載のオリゴヌクレオチド誘
導体。３ R¹が炭素数２〜20の直鎖または分岐鎖のア
ルキレン基である、特許請求の範囲第１項または
第２項記載のオリゴヌクレオチド誘導体。４ｐが40までの自然数である、特許請求の範囲
第１〜３項のいずれか１項に記載のオリゴヌクレ
オチド誘導体。５下式〔′〕で示される化合物の3′−末端延
長上のR²、5′−末端のR³基、塩基部分およびリ
ン酸部分の保護基をすべて除去することを特徴と
する、下式〔〕で示されるオリゴヌクレオチド
誘導体の製造法。〔ただし、ｐは任意の自然数であり、R⁰はリ
ン酸基の保護基であり、R¹は二価の直鎖または
分岐鎖の炭化水素残基であり、R²は水素または
アミノ基の保護基であり、R³は水素またはヌク
レオチドの5′−水酸基の保護基であり、B′はヌク
レオチドを構成する塩基であつて必要に応じて保
護されたものであり、Ｂはヌクレオチドを構成す
る塩基である（B′またはＢおよびR⁰が複数個存
在するときは、それらは同一でも異なつてもよ
い）。ただし、式〔′〕で示される化合物は、
R⁰，R²，R³およびB′に関してその少なくとも一
つにおいて保護されたものであるとする。〕