JPH05508849A - 下垂体後葉ホルモン誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 下垂体後葉ホルモン誘導体 本発明は、下垂体後葉ホルモンの誘導体に関し、更に詳細には競合的オキシトシ ンレセプター拮抗剤でありかつ過度の子宮収縮を抑制する新規なバットシン誘導 体に関する。

新規なバットシン誘導体は、バットシン分子をその１゜２．４位および所望によ り６位において改変するとともに、Ｃ末端を短縮し、所望により改変したもので ある。

背景および先行技術 オキシトシンは下垂体後葉ホルモンであり、このホルモンに特異的なレセプター はヒトを含む楠乳類の体内に見出されている。レセプター部位は、これまでに子 宮、乳分泌管および卵巣に見出されている。したがってオキシトシンレセプター 拮抗剤は、内因性のオキシトシン分泌が増加したりまたはレセプター密度が増加 した場合に競合的レセプターブロッカ−として用いることができる。

本出願人らは、以前に（ＥＰ−Ａ−０１１２８０９号明細書）バットシン分子の １．２．４および８位を改変することにより、動物およびヒトの試験（Ｍｅｌｉ ｎら、Ｊ、　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、、　ｉｌｌ、　１２５．１９８６）のいず れにおいても子宮の収縮を著しく抑制する類似体が得られることを示した。これ らの類似体は、このような関係においてはオキシトシンまたはパップレシンによ って誘導される収縮に拮抗することが示されており、臨床試験では、ある類似体 が月経病や早産と関連する過度の子宮収縮を打ち消すことが示された（Ａｋｅｒ ｌｕｎｄ、　Ａｃｔａ　０ｂｓｔ、　Ｇｙｎｅｃｏｌ、。

５ｃａｎｄ、、６６、　４５９．　１９８７；　Ａｋｅｒｌｕｎｄら、Ｂｒ、） 、０ｂｓｔ。

Ｇｙｎｅｃｏｌ、、　９４．１０４０．１９８７　）　、前記のＥＰ−Ａ明細書 に開示されている本出願人らの先行するバットシン誘導体は副作用がないと思わ れるが、半減期が限定されており、従って有効期間がかなり短い。分子の酵素学 的安定性およびその効果の期間は、単回投与では臨床上極めて重要である。本出 願人らの以前に報告したバットシン誘導体の有効期間は比較的短く、治療上の投 与量はかなり多いので、これらの誘導体はこれまでのところは病院での静脈内投 与によってのみ投与されてきた。

したがって、有効期間が長く、薬効が高い抑制剤が必要であり、またこれらの物 質を病院施設以外でも用いることができるようにするためには他の投与経路によ る投与も必要とされる。

ＥＰ−Ａ−０１８２６２７号明細書には、多数の構造的に類似したパップレシン 類似体、すなわち基本的なＶｌ−パップレシン拮抗薬であるといわれかつ高血圧 や虚血性心疾患の治療に有用なものが開示されている。本発明の化合物は、本発 明による化合物とＥＰ−Ａ−〇１８２６２７号明細書の化合物とを区別する条件 によって規定された一般構造式によって表わされている。

発明の説明 本発明は、ＥＰ−Ａ−０１１２８０９号明細書に開示された本出願人らの先行バ ットシン誘導体よりも薬効が高く、有効期間が長いバットシン誘導体である新規 な下垂体後葉ホルモン誘導体を提供する。本発明のバットシン誘導体は、下記の 一般式で表されるもの、である。

Ａ　−８−１１ｅ　−Ｃ−Ａｓｎ　−Ｄ　−Ｅ　−Ｆ（上記式中、 Ａ−Ｍｐａ（３−メルカプトプロピオニル残基；−８−ＣＨ−ＣＨ２−Ｃｏ−） またはＨｍｐ　（２−ヒドロキシ−３−メルカプトプロピオニル残基；Ｂ−Ｄ− Ｔｙ　ｒ、Ｄ−Ｔｙ　ｒ　（Ｅｔ）　、Ｄ−Ｐｈｅ。

Ｄ−Ｐｈｅ　（ｐ−Ｅｔ）またはＤ−Ｔｒｐ。

Ｃ−Ｔｈｒ、ＶａｌまたはＨｇｎ　（ホモグルタミン）、ＤｍＣｙｓまたはａ− Ａｂｕ Ｅ＝Ｐｒｏまたはペプチド結合、 Ｆ一式ＮＨ−（ＣＨ２）　ｍ−？Ｈ−Ｌに のＬ−またはＤ−残基、 ｍ＝０〜６、好ましくは０〜４、 ｎ−０〜６、好ましくは２〜４、 Ｌ−Ｈ％Ｃ０ＯＨ，Ｃｏ−ＮＨ２＊たハＣＨ２−ＯＨ。

但し、ＡがＭ　ｐ　ａであり、ＣがＴｈｒまたはＶａｌであり、ＤがＣｙｓであ るときには、ＬはＨではない）本明細書および請求の範囲において、慣用されて いる３字略号を用いてアミノ酸を表わした。

本発明は、また、活性成分として少なくとも１個の本発明によるバットシン誘導 体を、薬理学上許容可能な添加剤および／または希釈剤と組み合わせて含んでな る医薬組成物を包含する。薬理学上許容可能な希釈剤には、好ましくは等張食塩 水を用いることができる。他の薬理学上許容可能な添加剤については、例えば米 国薬局方に見出すことができ、これらの添加剤は、特定の投与経路用の組成物の 特定の形態に準じて選択することができる。

本発明の組成物は、静脈内、鼻腔内または腸内投与に好適な形態にすることがで きる。腸内投与に好適な形態としては、経口投与され、好ましくは胃では少なく とも完全には溶解しないが主として腸で溶解する層でコーティングされ、活性成 分が腸の粘膜を通して吸収されるようにされた錠剤が挙げられる。

本発明によるバットシン誘導体は、アゴニスト作用並びに抗利尿作用および血圧 作用が全くないので、臨床的な副作用の可能性が極めて低い。

図面の簡単な説明 第１図は、対照物質（ペプチド１）および本発明によるバットシン誘導体（ペプ チド２）を鼻腔内投与した後のインビボでのラット子宮に対する拮抗作用を示し たものである。

第２図は、第１図と同じペプチドを腸内投与した後のインビボでのラット子宮に 対する拮抗作用を示したものである。

第３図は、第１図と同じペプチドを静脈内投与した後のインビボでのラット子宮 に対する拮抗作用を示したものである。

第４図は、対照物質（ペプチド１）を１０−８モル／ｋｇの投与量でおよび本発 明によるバットシン誘導体（ペプチド３）を２Ｘ１０−９モル／ｋｇの投与量（ すなわち、対照物の投与量の５分の１）で静脈内投与した後の、インビボでのラ ット子宮に対する拮抗作用を示したものである。

第５図は、第４図と同じペプチドを８×１０−６モル／ｋｇの投与量で腸内投与 した後の、インビボでのラット子宮に対する拮抗作用を示す。

本発明によるバットシン誘導体の調製 本発明によるバットシン誘導体は、ペプチドの分野に周知の方法と類似のした方 法で調製することができる。

例えば、本発明による化合物は、例えばＬａｗ、　Ｈ，Ｂ、およびＤｕ　Ｖｉｇ ｎｅａｕｄ、　Ｖ、がＪｏｕｒｎａｌ　ｏｒ　ｔｈｅ　１ｓｅｒｉｃａｎＣｏｌ ｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｒ　Ｃｚｅｃｈｏｓｌｏｖａｋ　Ｃｈｅｍｌｃａｌ　Ｃｏ５ ｇ＋ｕｎｌｃａｔｉｏｎ。

２９、　（１９Ｂ４）、　２６４８−２８８２に報告し、Ｌａｒｓｓｏｎ、　Ｌ 、−Ｅ、。

Ｌｉｎｄｅｂｅｒｇ、　Ｇ、、　Ｍｅｌｉｎ、　Ｐ、およびＰｌｉｓｋａ、　Ｖ 、がＪｏｕｒｎａｌｏｒ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｌｓｔｒｙ、　２１． 　（１９７８）、　３５２−３５Ｂで改変した手法にしたがって、液相でアミノ 酸同士を増成カップリング（１ｎｃｒｅ＊ｅｎｔａｌ　ｃｏｕｐｌｉｎｇ）する 従来の方法で調製することができる。いわゆるペプチド結合を形成するアミノ酸 同士のカップリングは、第一のアミノ酸のＣ末端をカップリングさせた固相（通 常は樹脂）で開始し、次のアミノ酸のＣ末端を第一のアミノ酸のＮ末端などにカ ップリングさせることによって行うこともできる。最後に、形成したペプチドを 固相から分離する。

後記する実施例では、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、　Ｒ，Ｂ、、　Ｊ、　Ａｍ、　Ｃ ｈｅｗ。

Ｒ，、Ｃｈｅｗ、　Ｂｅｒ、、　（１９７０）、　１０３．７Ｈによる報告に従 って、このいわゆる固相法を用いた。

合成の一般的説明 下記の実施例に開示されたペプチドは固相法（Ｊ、Ｍ。

Ｓｔｅｗａｒｔ、　Ｊ、Ｄ、　Ｙｏｕｎｇ、固相ペプチド合成（Ｓｏｌｉｄ　Ｐ ｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｆｓ）　、　Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍ ｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ　）　を用いて合成した。

ペプチドは、液体クロマトグラフィ　（逆相）によって精製した。定常相はクロ マジル（Ｋｒｏｍａｓｉｌ　：商品名）、１３μ、１００　Ａ　−Ｃ１ｓ　（Ｅ 　Ｋ　Ａ　Ｎｏｂｅｌ、スエーデン）から構成され、移動相は０，１％トリフル オロ酢酸を含むアセトニトリル／水であった。純粋な生成物（ＨＰＬＣ分析）を 含むフラクションを集めて蒸発させ、生成物を水から凍結乾燥した。

ペプチドの純度および構造は、ＨＰＬＣ，アミノ酸分析およびＦＡＢ−ＭＳを用 いて決定された。

下記の略号を用いた。

Ｂｏｃ−ｔ−ブチルオキシカルボニル、Ｄ−Ｔｙ　ｒ　（Ｅ　ｔ）　−０−エチ ル−Ｄ−チロシル、Ｆｍｏｅ＝９−フルオレニルメトキシカルボニル、Ｆｍｏｅ ＯＮＳυ−９−フルオレニルメトキシカルボニル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミ ド、 Ｄ−Ｐｈｅ　（ｐ−Ｅ　ｔ）　−ｐ−エチル−Ｄ　−フェニルアラニル、 Ｍｐａｍ３−メルカプトプロピオン酸、Ｃｂｚ−カルボベンゾキシ、 Ｐｆｐ−ペンタフルオロフェニル、 −０Ｄｈｂｔ−３，４−ジヒドロ−４−オキソ−ベンゾトリアジン−３−オキシ −１ Ｔｈｒ　（ｔ−Ｂｕ）＝Ｏ−第三ブチル−スレオニル、ＤＣＣ−ジシクロへキシ ルカルボジイミド、ＨＯＢｔ−ヒドロキシベンゾトリアゾール。

Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ　（Ｃｂｚ）ＯＨのジシクロヘキシルアンモニウム塩の合成 Ｎδ−ベンジルオキシカルボニルオルニチン（５，３ｇ、２０ミリモル）を、水 （５０ｍｌ）とアセトニトリル（１００ｇ＋Ｉ）との混合物に懸濁した。ジイソ プロピルエチルアミン（３、４ｍｌ）およびＦｍｏｃ−ＯＮＳｕ（７，４ｇ、２ ２ミリモル）を加えた。室温で２時間撹拌した後、アセトニトリルを留去した。

残渣を１Ｍ塩酸で酸性にし、生成物を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル相を水 で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、蒸発させた。残渣を酢酸エチル に溶解し、ジシクロヘキシルアミン（４ｍｌ、２０ミリモル）を加えて、溶液を ヘキサンで希釈して、冷却した。結晶を濾別し、ヘキサンで洗浄した。収量１１ ．５ｇ　（８２％）。

Ｎα−第三ブチルオキシカルボニル−Ｄ、Ｌ−ｐ−エチル−フェニルアラニンペ ンタフルオロフェニルエステルおよびＮα−第三ブチルオキシカルボニル−〇− エチルーＤ−チロシンペンタフルオロフェニルエステルの合成Ｎα−第三ブチル オキシカルボニル−Ｄ、Ｌ−ｐ−エチルフ二ニルアラニン（Ａ、Ｌ、　Ｚｈｕｓ ｅ、　Ｋ、　Ｊｏｓｔ、　Ｅ。

Ｋａｓａｔ’１ｒｅｋ、　Ｊ、　Ｒｕｄｉｎｇｅｒ、　Ｃｏ１１ｅｃｔ１ｏｎ　 Ｃｚｅｃｈｏｓｌｏｖ。

Ｃｈｅｍ、Ｃｏｍｍｕｎ、、　２９．２６４８　（１９６４）　）　（０，８８ ｇ、　３ミリモル）、ペンタフルオロフェノール（０，６１ｇ。

３．３ミリモル）及びジシクロへキシルカルボジイミド（０，６８ｇ、３．３ミ リモル）を酢酸エチル（６１）に溶解した。室温で１時間撹拌した後、反応混合 物を氷上で２時間冷却した後、ジシクロへキシルウレアを濾別した。濾液を濃縮 し、ヘキサンで希釈して冷却した。生成物を濾別し、ヘキサンで洗浄した。収量 ０．８７ｇ（６３％）。融点：９５〜９６℃。

Ｎα−第三ブチルオキシカルボニル−〇−エチルーＤ−チロシンベンタフルオロ フェニルエステルを、同様の方法で、Ｎα−第三−ブチルオキシカルボニル−〇 −エチルーＤ−チロシンから合成した。収量７７％。融点：１０３〜１０４℃。

アミノ酸誘導体Ｉ〜１１１の合成の図 Ｉ　Ｐ　−Ｈ，Ｐ　−ｔ−Ｂｕ、Ｐ３ａｍＨＩＩ　Ｐ　−Ｆｍｏｃ、　Ｐ２−ｔ −Ｂｕ、　Ｐ３−Ｈ１ＩＩ　Ｐ”−ＦｍｏｃＳＰ２−ｔ−ＢｕＳＰ３−Ｐｆｐア ミノ酸誘酸誘導体台成 ホモシスチン（８，０６ｇ、３０ミリモル）を、液体アンモニア（３００ａｌ） 中でナトリウムで還元した。過剰のナトリウムを塩化アンモニウムで破壊しく溶 液が脱色された）、アンモニアを蒸発させた。残渣をヘリウムガスを通じた水（ １２０ａｌ、０℃）に溶解した。ｐＨを、１Ｍ塩酸で ８．１に調整した。第三ブチルアクリレ−）　（１７，４１，１２０ミリモル） を１５分以内で加えた後、溶液を撹拌下にて水素雰囲気中に一晩放置した。沈澱 生成物（Ｉ）を濾別し、エタノールおよびエーテルで洗浄して、乾燥した。

収量６．２ｇ（４１％）。

アミノ酸誘導体ＩＩの合成 誘導体１　（２，５ｇ、１０ミリモル）、水（１５ｍｌ）、アセトニトリル（１ ５ｍｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（１，７ｍ１）およびＦｍｏｃ−ＯＮＳ ｕ　（３，７４ｇ。

１１ミリモル）を、撹拌下にて３０分間放置した。アセトニトリルを留去し、残 渣を１Ｍ塩酸で酸性にした。生成物を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル相を水 で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、蒸発させた。

残渣を酢酸エチルに溶解し、ジシクロヘキシルアミン（２ｍｌ、ＩＯミリモル） を加えて、溶液をエーテルで希釈した。結晶（誘導体ｉ＋）を濾別しく５．５ｇ 、８４％）、８０％水／エタノールから再結晶した。

収量３．４ｇ　（５２％）。融点：１９８〜２０１℃。

アミノ酸誘導体Ｉ１１の合成 誘導体１１（３，４ｇ、５ミリモル）のジシクロヘキシルアンモニウム塩を酢酸 エチルに懸濁し、０．５ＮＨ２Ｓｏ４とともに振盪した。相分離を行い、有機相 を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、蒸発させた。残渣を酢酸エ チル（１０ｍｌ）に溶解した。ペンタフルオロフェノール（１，ｏ２ｇ、５．５ ミリモル）およびジシクロへキシルカルボジイミド（１，１３ｇ。

５．５ミリモル）を加えた。室温で１時間撹拌し、反応混合物を氷で２時間冷却 した後、ジシクロへキシルウレアを濾別した。濾液を濃縮し、ヘキサンで希釈し て、冷却した。生成物（Ｉｌｌ　）を濾別し、ヘキサンで洗浄した。

収量２．３ｇ　（７０％）。融点：５８〜５９℃。

実施例１ ペプチドｌ　（対照物−ＥＰ０１１２８０９号明細書に記載のペプチド）の調製 Ｍｐａ−Ｄ−Ｔｙ　ｒ　（Ｅ　ｔ　）−１］　ｅ−Ｔｈ　ｒ−Ａ　ｓ　ｎ−Ｃｙ ｓ−Ｐｒｏ−Ｏｒｎ−Ｇ　ｌ　ｙ−ＮＨ２Ｂｏｃ／ベンジル法を用いる合成の一 般的記述にしたがって、このペプチドを合成した。システィンとメルカプトプロ ピオン酸のチオール基をｐ−メトキシ−ベンジル基で保護した。アミノ酸の活性 化をＤＤＣ／ＨＯＢ　ｔを用いて行い、基Ｎα−Ｂｏｃを５０％トリフルオロ酢 酸の塩化メチレン溶液で除去した。樹脂はメチルベンズヒドリル型のものであり 装填量は０．７ミリモル／ｇであった。０．７ｇの量の樹脂を合成ごとに用いた 。

ペプチドを脱保護し、液体フッ化水素／アニゾール／エチルメチルスルフィドを ９０：５：５の比率で用いて樹脂から開裂させた。フッ化水素を蒸発させた後、 残渣を酢酸エチルに懸濁し、濾過して、追加の酢酸エチルで洗浄した。樹脂を酢 酸で摩砕して、ペプチドを得た。樹脂を濾別し、濾液を２０％酢酸のメタノール 溶液で希釈して、ペプチド濃度が約０．５ミリモル／リットルになるようにした 。この溶液を、微かな黄褐色が残るようになるまで０．１Ｍヨウ素のメタノール 溶液で処理した。

次いで、アセテート型のダウエックス（Ｄｏｖｅｘ）　１　ｘ　８イオン交換樹 脂（１０ｇ／リットル）を加え、混合物を濾過した。濾液を蒸発させ、残渣を水 から凍結乾燥した。

生成物は、合成の一般的記述にしたがって精製した。

収量２９　ａｇｏ純度（ＨＰＬＣ）：≧９９％。

Ｍｐａ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｅｔ）−１Ｉｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｏｒ ｎ−Ｎｌ２このペプチドは、実施例１のペプチドに対して用いた方法にしたがっ て合成し、精製した。

収量＝２５■ｇ０純度（ＨＰＬＣ）：≧９９％。

ＣＨ２Ｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｅｌ）−夏１ｓ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｎ）ＩＣＩＣ−Ｐｒ ｏ−Ｏｒｎ−ＮＨ２中間体１■およびＶの調製の図 ＋ｖ　ｚ−ｏ−樹脂、Ｐ２−ｔ−Ｂｕ、Ｖ　Ｚ−Ｎｌ２、　Ｐ２−７ンモ：’７ ム基。

中間体Ｖの中間体ｖ１への閉環およびペプチド３の脱保護このペプチドを、Ｆｍ ｏ　ｃ／第三ブチル法を用いる合成の一般的記述にしたがって合成した。樹脂は 、ポリアミドキーゼルグール型（ＰｅｐＳｙｎＫＢ、装填量０．０９ミリモル／ 　ｇ　）であり、合成ごとに２．２ｇを用いた。Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ　（Ｃｂｚ） −ＯＨを対称性無水物としての樹脂にカップリングさせた。他のアミノ酸誘導体 は活性エステル（４等量）としてカップリングさせた。下記の誘導体を用いた： Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＰ　ｆ　ｐ、誘導体ＩＩＩ　、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ−ＯＰｆ ｐ。

Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ　（ｔ−Ｂｕ）−０Ｄｈｂｔ％Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＰｆｐお よびＢｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ　（Ｅｔ）−０Ｐ　ｆ　ｐ　。

固相合成の後に、ペプチド樹脂１ｖを、４５：４５：１０の比率のトリフルオロ 酢酸／塩化メチレン／アニゾールで処理した（２Ｘ１５分）。次いで、ペプチド 樹脂を、塩化メチレン、５％ジイソプロピルエチルアミンの塩化メチレン溶液、 および塩化メチレンで洗浄した。次に、ペプチドを、アンモニア（１００ｍｌ） のメタノール（５０ｍｌ）溶液を用いて樹脂から開裂させた。樹脂を濾別して、 メタノール溶液を蒸発させた。残渣を少量のメタノールに溶解した。ペプチド（ Ｖ）をエーテルで沈澱させた。収量１３０　ａｇ。

ペプチドＶ（１００Ｂ）を、ジフェニル−ホスホリルアジド（ＤＰＰＡ、５０μ ｍ）およびに２ＨＰＯ４０１０■ｇ）のジメチルホルムアルデヒド（２５ｍｌ） 溶液で０℃で２４時間かけて環化した。

反応溶液を蒸発させた。残渣を水で処理した。水を傾瀉により除去し、残渣油状 物質をエーテルで処理し、沈澱（ペプチドＶｌ）を得た。収量５７１ｇ。

ペプチドｖ１のオルニチンの保護基を、１０：１の比率の液体フッ化水素／アニ ゾールを用いて除去した。フッ化水素を酢酸エチルおよび水に分配させた。ペプ チド３を含む水相を凍結乾燥した。ペプチドは、前記の方法にしたがって精製し た。

収量３８ｍｇ、純度（ＨＰＬＣ）：≧９９％。

合成には、２位におけるアミノ酸のカップリングでラセミ体（Ｂｏｃ−Ｄ、Ｌ− Ｐｈｅ−（ｐ−Ｅｔ）−ＯＰｆｐ）を用いた以外は除き、実施例３に開示された 方法と同じ方法を用いた。最初のカップリングではＢｏｃ−Ｄ、Ｌ−Ｐｈｅ　（ ｐ−Ｅｔ）−０Ｐｆｐ　１．１等量のみを用いて、鏡像異性体のいずれかがカッ プリングに有利とならないようにした。カップリングの時間は、通常の４５分間 に対して４時間まで増加やした。二番目のカップリングではＢｏｃ−Ｄ、Ｌ−Ｐ ｈｅ　（ｐ−Ｅｔ）−ＯＰｆｐＯ，８等量を用いた。（合成の一般的説明による ）精製では、それぞれＤ−Ｐｈｅ　（ｐ−Ｅｔ）およびＬ−Ｐｈｅ　（ｐ−Ｅｔ ）を用いてペプチド類似体を分離した。２位のアミノ酸（Ｌ−またはＤ−型）の 配置は、ペプチドのホウベン−ウニイル合成（Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙ　１Ｓｙｎ ｔｈｅｓｅ　ｖｏｎ　Ｐｅｐｔｉｄｅｎ）　、１５巻、第２部、６９５頁に記載 されている方法を用いて決定した。収量：１４ｍｇ、純度（ＨＰＬＣ）：≧９９ ％。

合成には、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＰｆｐを７位のＰｒｏが省略されているので使 用しなかったことを除き、実施例３に開示された方法と同じ方法を用いた。

収量：　４８　ｍｇ、純度（ＨＰＬＣ）：≧９９％。

実施例６ ペプチド６（既知−ＥＰ０１１２８０９号明細書に記載このペプチドは、２位に おいてＤ−Ｔｙｒ（Ｅｔ）をＤ−Ｔｒｐに代えた以外は、実施例１におけるペプ チドに用いた方法に従って、合成され、精製された。

収量：２６ｍｇ、純度（ＨＰＬＣ）：≧９９％。

実施例７ Ｍｐａ−Ｄ−Ｔｒｐ−１１ｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｏｒｎ−Ｎｌ ２このペプチドは、２位においてＤ−Ｔｙｒ（Ｅｔ）をＤ−Ｔｒｐに代えた以外 は、実施例２におけるペプチドに用いた方法に従って、合成され、精製された。

収量：２４ｒｘｇｏ純度（ＨＰＬＣ）：≧９９％。

このペプチドは、２位においてＤ−Ｔｙｒ（Ｅｔ）をＤ−Ｔｒｐに代えた以外は 、実施例３におけるペプチドに用いた方法に従って、合成され、精製された。

収量：４５■ｇ０純度（ＨＰＬＣ）：≧９９％。

実施例９ ペプチド９（既知−ＥＰ０１１２８０９号明細書に記載のペプチド）の調製 Ｍｐａ−Ｄ−Ｔｙｒ　（Ｅｔ　）−１１ｅ−Ｖａ　Ｉ　−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−Ｐｒ ｏ−Ｏｒｎ−Ｇ　Ｉ　ｙ−ＮＨ２このペプチドは、４位においてＴｈｒをＶａｌ に代えた以外は、実施例１におけるペプチドに用いた方法に従って合成され、精 製された。

収量：　２８　ａｇｏ純度（ＨＰＬＣ）：≧９９％。

Ｍｐａ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｅｔ）−１１ｅ−Ｖａｔ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｏｒ ｎ−ＮＨ，。

このペプチドは、４位のＴｈｒをＶａｔに代えた以外は、実施例２におけるペプ チドに用いた方法に従って、合成され、精製された。

収量：　２５　ａｇｏ純度（ＨＰＬＣ）：≧９９％。

薬理試験 本発明による化合物を、オキシトシン（ＯＴ）を作動薬として用いて、単離した ラット子宮および女性由来の子宮筋組織に対する子宮収縮効力に関して検討を行 った。

これらの化合物の拮抗的特性もこの標本によって評価した。また、作動薬として オキシトシンを用いるラット子宮のインビボ試験を行い、結果を対照物質である 、ペプチド１、すなわちＥＰ−Ａ−０１１２８０９号明細書に記載の化合物を用 いて得られた結果と比較した。

インビトロ試験、女性 子宮筋層からの組織を、帝王切開（ルンド医科大学（ｔｈｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉ ｔｙ　ｏｆ’　Ｌｕｎｄ）、スウェーデン）で得た。妊婦からの組織切片を、子 宮峡部から摘出した。等良性収縮を単離した組織（２Ｘ　２　Ｘ　２０　ｍｓ） で測定し、収縮は静止張力１０ｍＮでグラスフォーストランスデユーサ−（Ｇｒ ａｓｓ　ｆｏｒｃｅ　ｔｒａｎｓｄｕｓｅｒ）　（Ｆ　Ｏ３）およびポリグラフ （ＰＯＳ）によって記録した。クレブス−リンゲル（１，５ミリモル／リットル ）緩衝液を３７℃で緩衝液として用いた。作動薬（オキシトシン）の投与量は、 単独でまたは対照物質であるペプチド１もしくは本発明によるペプチド２〜４を 投与してから２分後に所定の濃度（０，１マイクロモル／リットル）になるまで 加えた。

対照および試験物質のそれぞれを少なくとも２回、無作為化した方法で同じ組織 標本に投与し、４個の組織標本を平行して試験した。子宮筋層に対する効果は、 作動薬の添加後１０分間の記録曲線を積分することによって測定された。阻害は 、実験の開始時と終了時にのみ作動薬を投与した時の平均効果の百分率として表 わした。それぞれの阻害剤（ペプチド２〜４）の阻害率を、いわゆる４点試験（ ４−ｐｏｉｎｔ　ｔｅｓｔ）にしたがって対照物質（ペプチド１）と比較した（ Ｓｔｉ；ｒｓｅｒ　、　１９６８年）。この結果を、第１表、ａ欄に示す。

インビトロ試験、ラット 自然発情期のスブラーグドウレイ（Ｓｐｒａｑｕｅ　Ｄａｖｌｅｙ）ラット（体 重約２５０　ｇ）を、腟スミアによって選択した。約２０ｉｏ＋の長さの切片を 子宮角の中央から切り取り、次の組成の改変ロック溶液（ｍＭ：ＮａＣ１１５３ 、ＫＣｌ５．６３、Ｃａ　Ｃ１２０、５４１、Ｎ　ａ　ＨＣＯ３５，９５、およ びグルコース　２．７８）１０ｍｌを含む器官容器に取り付けた。溶液に３０℃ で５％Ｃ０２を含む酸素を通気した。子宮収縮を３０分間で安定化させた。収縮 は、グラスフォーストランスデユーサ−（Ｆｔ。

０３）により荷重１．５ｇで等長的に記録した。類似体の拮抗的効果をｐ　Ａ　 ２値として算出した（Ｒｕｄｉｎｇｅｒ、　Ｊ。

及びＫｒｅｊｃｉ、　！、、　Ｅｘｐｅｒｌｅｎｔｉａ、　１８．　（１９８２ ）、　５１１５−５Ｈ）。

ｐ　Ａ　２はペプチドの阻害特性の尺度であり、作動薬の投与量の効果をその投 与量の半分の効果にまで減少させる拮抗剤のモル濃度の負の対数として５Ｃｈｉ ｌｄによって定義された （Ｓｃｈｉｌｄ、Ｈ，Ｏ，、Ｂｒ１ｔ１ｓｈ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒ ｍａｃｏｌｏｇｙ、２゜（１９４７）、　１８９−２０６　）。拮抗剤の可能性 ある作動薬とじての効果は、せいぜい４　ｎｍｏｌ／ｇｌの濃度に対応する様々 な量のペプチドを、子宮標本を含む容器に加えることによって検討した。いずれ の場合にも、作動薬効果は見られなかった。結果は、第１表、ｂ欄に示される通 りである。

インビボ試験、ラット 自然発情期のスブラーグドウレイラット（２５０ｇ）を、イナクチン（０，５■ ｇ／　１００　ｇ体重、腹腔内）で麻酔した。子宮筋活性は、子宮腔に固定し、 改変ロック溶液を満たしたカテーテルで記録した。カテーテルをシニタットハム Ｃ５ｔａｔｈａｔａ　）　Ｐ　２３　ｄ　）ランスデニーサーに接続し、濃度を グラス・ポリグラフ（７Ｄ型）で記録した。試験は、方法Ａ−Ｆと呼ばれる６つ の異なった方法で行った。

方法Ａ 比較拮抗薬試験。　オキシトシンを静脈内に輸液した（０．０５μｇ／分／１０ ０ｇ体重）。規則的な収縮パターンが得られたならば、拮抗薬（０，８〜８．０ Ｈｇ／１００ｇ体重）を０．２１の容積で静脈内に投与した。

記録した曲線を、拮抗薬の注射の直前および直後の１５分間に亙って積分した。

オキシトシンの注入によって生じる子宮収縮の大きさの増加の抑制を、対照ペプ チドｌによって生じる抑制の値を１００としたものと比較した。

結果は、第１表、Ａ欄に示される通りである。

方法Ｂ 拮抗薬試験。　阻害投与量（１，Ｄ、）。［１，Ｄ、＝作動薬のある投与量（２ ｘ）による効果を投与量の半分（ｘ）の効果に対応する効果まで阻害する拮抗薬 の投与量コ　。

最初に、オキシトシン（２・１０−４〜５・１０″″３マイクロモル／　ｋｇ） の投与量−効果曲線を行った。１０〜３０■ｇ　Ｈｇの管内収縮圧に対応する効 果を生じかつ投与量−効果曲線の線形部分にあるオキシトシン投与量（２ｘ）を 選択する。これらの効果は、注射後１５分間に亙って記録した積分曲線の真の値 として測定する。

次に、半分投与量（ｘ）に対する作動薬の効果（ｅｆｆ　ｘ）を計算する。その 後、少なくとも２つの投与量の拮抗薬（ペプチド１〜４）を作動薬の投与量（２ ｘ）と組み合わせて注射する。阻害についての投与量−効果曲線を内挿すること によって、作動薬の投与量（Ｘ）の効果（ｅｆｆ　ｘ）に対応する拮抗薬の投与 量、すなわちＩＤ投与量、が得られる。結果は、第１表、Ｂ欄に示される通りで ある。

方法Ｃ 拮抗薬試験、効果持続時間。　最大効果の約５０％（Ｅ　Ｄ　５ｏ）に対応する 効果（この効果はそれぞれ作動薬および拮抗薬の投与後１５分間に亙って測定さ れ、この収縮曲線を積分した）を生じるような作動薬の投与量を選択する（５・ １０〜５・１０−３マイクロモル／　ｋｇ）。

次に、作動薬の投与量と組み合わせて、作動薬の投与量のみの効果の少なくとも ５０％の抑制を生じる拮抗薬（ペプチド］〜１０）の投与量０．８〜４・１０− ８モル／ｋｇを投与する。次に、作動薬の投与量のみを２０分間隔で注射すると 、阻害効果は連続的に低下する。

阻害剤の投与から作動薬の効果の阻害の７５％が止む間での時間は、内挿するこ とによって得られる。結果は、第１表、Ｃ欄に示される通りである。

方法り 拮抗薬試験、　鼻腔内投与。

比較すると、ペプチドの生物学的有用性の尺度が得られる。

オキシトシン（ＯＴ）を、静脈内に輸液して（０６５μｇ／分／ｋｇ）、作動薬 の効果を引き出す。規則的な収縮パターンが得られたときに、拮抗薬（０，０１ 〜０．１μｇ　／　ｋｇ）を静脈内に０．２１の容積で投与した。

２つの異なる投与量の効果を検討した。効果が止んだら、１５分後にペプチドを 、鼻腔内に１回分の投与量（０，１〜１．０μｇ　／　ｋｇ）で投与した。この 際、ペプチドは、等張食塩水中１０μｍの容積で、細管であって、その先端がラ ットの鼻腔内に１０ｍ１入っているものを通して投与した。この洗浄は、食道に 導入されている追加の管を通して食塩水（２０ｍｌ／時）で１０分間潅流するこ とによって行った。結果は、第１図に示される通りでと同様である ペプチドは、約２０ｃｍの長さの小腸の切片、すなわち腸のこの部分の両端を結 紮によって腸の残りの部分から結紮し、これらの両端にチューブを固定して洗浄 およびペプチド投与を行うようにしたもの、にカテーテルを介して投与した。洗 浄液体を空気によって追い出した後、膓１０ｃｍ当たり食塩水の１１容積で末端 の膓チューブを介してペプチドの投与を行った。結果は、第２図および第５図に 示されるとおりである。

図では１０　モル／ｋｇであり、第４図では１Ｏ−８（対照）および２Ｘ１０＝ （ペプチド３）であること以外は、この方法は方法りと同様である。結果は第３ 図および第５図に示されるとおりである。

〉 第１表から、Ｃ末端を短縮した誘導体のｐ　Ａ　２値として測定されたラット子 宮に対する拮抗薬効果によれば、対照物質（ペプチド１）および分子の長さが通 常のものである既知のペプチド６および９の値と比較して本質的に変わらないこ とが明らかである（ペプチド２〜５．７．８および１０）。妊婦の子宮に対する 効果は、ペプチド２．４．５．８および１０の阻害活性は保持されるが、完全長 のそれぞれのペプチド（それぞれ、ペプチド１、ペプチド６およびペプチド９） と比較してペプチド３および７の阻害効力はかなり増加している。

インビボでは、効力は、ペプチド２〜４．７．８および１０では５倍まで増加し 、すなわちそれらは完全な長の類似する既知のペプチドと比較して相応の低い投 与量で注射することができる。阻害効果の持続期間は、ペプチド５では変わらず 、ペプチド２および７で少なくとも２倍、ペプチド３で３倍、およびペプチド４ および８で４倍またはそれ以上増加する。

第１〜５図により、本発明によるペプチド２および３が鼻腔内、腸内および静脈 内投与において対照物質ペプチド１と更に比較された。ペプチド２および３は、 ペプチド１と比較して非常に強く長い効果を有するため、阻害を定量化すること は困難であることが明らかである。

更に、ペプチド２および３並びにペプチド１の静脈内投与による拮抗的効果は、 阻害効果におｌする対応する差を生じないことが明らかである。

これらの結果は、本発明によるペプチド２および３がペプチド１と比較して鼻お よび腸粘膜を通して更に容易に吸収されることを示しているが、これにより鼻腔 内または腸内投与に好適な薬学組成物でこれらのペプチドを投与することが可能 になる。したがって、非病院施設において治療を行うことができる。

下垂体倹素ホルモンに関するかぎり、単にＣ末端グリシンアミノ酸残基を除くこ とによりて（ペプチド２．７および１０）、完全な分子長を有する対応する類似 体（ペプチド１．６および９）と比較して、インビボでの効力が約３倍、効果持 続期間が２倍に上昇する類似体が得られる。ペプチド３および４は、いずれもα −Ａｂｕ６誘導体であり、下垂体倹素作動薬から以前に知られていたものと同様 に、効果持続期間が更に長い。

ペプチド３および７は更に、単離したヒト子宮筋層に関して阻害効果が実質的に 強化され、これはレセプターの親和性が高いことを示していることも注目される 。

Ｆｉｇ、３ ラット子音インビボ 静脈内投与 子宮内圧 ＯＴ　輸液２ｘ１０−８／ｈ １σ８ ０Ｔ　輸液２冨１０−８／ｈ ｆｆｌ　与ｆｉ　：　ｍｏｌｅｓ／ｋ（ｊ０ｍ１ｎ 要　約　書 下垂体後部ホルモンの誘導体、更に正確には新規なバットシン誘導体が開示され ている。新規なバッドシン誘導体は式（１）によって表される （式中、ＡｍＭｐａまたはＨｍｐ。

Ｂ−Ｄ−Ｔｙｒ％Ｄ−Ｔｙｒ　（Ｅｔ）　、Ｄ−Ｐｈｅ。

Ｄ−Ｐｈｅ　（ｐ−Ｅｔ）またはＤ−Ｔｒｐ。

Ｃ−Ｔｈｒ％ＶａｌまたはＨｇｎ。

ＤｍＣｙ　ｓまたはａ　Ａ　ｂ　ｕ　５Ｅ−Ｐｒｏまたはペプチド結合、 Ｆ−（ａ）、但しｍｍＯ〜６　；　ｎ−０〜６　；　Ｌ＃Ｈ。

Ｃ０ＯＨ，Ｃ０ＮＨまたはＣ１１２０Ｈ；　Ｋ■ＩＩＩ、（ｂ）またはＤ−若し くはＬ−アミノ酸残基であり、但し、ＡがＭｐａであり、ＣがＴｈｒまたはＶａ ｌであり、ＤがＣｙｓであるときには、ＬはＨではない）。更に、新規なバット シン誘導体を含み、好ましくは静脈内、鼻腔内または腸内投与に好適な形態の医 薬組成物が記載される。

これらの組成物は、過度の子宮筋収縮の治療に特に使用されるものである。

国際調査報告 １．１．−１２−。１□１灯／ＳＥ　９１１０飄７７Ｉ吻陶−−＾−−−舛屯に Ｔ／ＳＥ　９１１００４７７国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．下記式を有することを特徴とする、バントシン誘導体。 【配列があります】 （上記式中、 Ａ＝Ｍｐａ（３−メルカプトプロピオニル残基；−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ− ）またはＨｍＰ（２−ヒドロキシ−３−メルカプトプロピオニル残基；▲数式、 化学式、表等があります▼、 Ｂ＝Ｄ−Ｔｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ（Ｅｔ）、Ｄ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐ−Ｅｔ）ま たはＤ−Ｔｒｐ、Ｃ＝Ｔｈｒ、ＶａｌまたはＨｇｎ（ホモグルタミン）、Ｄ＝Ｃ ｙｓまたはα−Ａｂｕ（α−アミノブタン酸残基；▲数式、化学式、表等があり ます▼ Ｅ＝Ｐｒｏまたはペプチド結合、 Ｆ＝式▲数式、化学式、表等があります▼のＬ−またはＤ−残基、 ｍ＝０〜６、 ｎ＝０〜６、 Ｌ＝Ｈ、ＣＯＯＨ、ＣＯ−ＮＨ２またはＣＨ２−ＯＨ、Ｋ＝Ｈ、▲数式、化学式 、表等があります▼またはＤ−若しくはＬ−アミノ酸残基、但し、ＡがＭｐａで あり、ＣがＴｈｒまたはＶａｌであり、ＤがＣｙｓであるときには、ＬはＨでは ない）２．Ａ＝Ｍｐａ、 Ｂ＝Ｄ−Ｔｙｒ（Ｅｔ）、 Ｃ＝Ｔｈｒ、 Ｄ＝Ｃｙｓ、 Ｅ＝Ｐｒｏおよび Ｆ＝Ｏｒｎ−ＮＨ２、である請求の範囲第１項に記載のバソトシン誘導体。 ３．Ａ＝Ｍｐａ、 Ｂ＝Ｄ−Ｔｙｒ（Ｅｔ）、 Ｃ＝Ｔｈｒ、 Ｄ＝α−Ａｂｕ、 Ｅ＝Ｐｒｏおよび Ｆ＝Ｏｒｎ−ＮＨ２、である請求の範囲第１項に記載のバソトシン誘導体。 ４．Ａ＝Ｍｐａ、 Ｂ＝Ｄ−Ｐｈｅ（ｐ−Ｅｔ）、 Ｃ＝Ｔｈｒ、 Ｄ＝α−Ａｂｕ、 Ｅ＝Ｐｒｏおよび Ｆ＝Ｏｒｎ−ＮＨ２、である請求の範囲第１項に記載のバソトシン誘導体。 ５．活性成分として、請求の範囲第１項に記載の少なくとも一つのバントシン誘 導体を薬理学上許容される添加剤および／または希釈剤と組み合わされて含むこ とを特徴とする、医薬組成物。 ６．組成物が静脈内投与に好適な形態である、請求の範囲第５項に記載の医薬組 成物。 ７．鼻内投与に好適な形態である、請求の範囲第５項に記載の組成物。 ８．腸内投与に好適な形態である、、請求の範囲第５項に記載の組成物。 ９．過度の子宮筋収縮の治療に用いられる、請求の範囲第５〜８項のいずれか一 項に記載の組成物。 １０．請求の範囲第５〜８項のいずれか一項に記載の医薬組成物を治療上有効な 量で投与することを特徴とする、過度の子宮筋収縮を緩和する方法。