SE501677C2 - Biologiskt aktiva vasopressinanaloger, farmaceutiska preparat innehållande dem samt deras användning för framställning av läkemedel - Google Patents

Description

10 15 20 25 30 35 501 677 Beskrivning av uppfinningen Föreliggande uppfinning tillhandahåller nya vasopressinanaloger med formeln o o n | cuzc-n-Phe-Thi-x-Asn-NncHc-Hyp-D-Arg-Gly-Nnz l 2 3 4 5 4 7 8 9 Cfl2cH2_---- S __ CH, där X är (S)-2-Amino-2-metyl-butansyra (CaMeAbu) eller Valin (Val), och D-Phe är D-Fenylalanin Thi är 2-Tienylalanin Asn är Asparagin Hyp är 4-trans-Hydroxiprolin D-Arg är D-Arginin Gly är Glycin.

Såsom framgår av testning av biologisk aktivitet, vilket beskrivs senare i texten, har de nya föreningarna enligt uppfinningen ca 15 gånger högre värden för gastrointestinal absorption än DDAVP, och 2 till 5 gånger högre intranasala absorptionsvärden.

En annan aspekt av uppfinningen är inriktad.på ett farmaceutiskt preparat som omfattar en vasopressinanalog enligt uppfinningen som aktiv ingrediens. Denna aspekt av uppfinningen är avsedd att omfatta varje användbart farmaceutiskt preparat så länge som det innehåller en vasopressinanalog enligt uppfinningen som aktiv ingrediens. Det farmaceutiska preparatet.är företrädesvis i form av ett oralt preparat, såsom en tablett eller kapsel, ett nasalt preparat, såsom en nässpray eller näsdroppar, eller ett intra- venöst preparat, såsom en injicerbar lösning. I ett farmaceu- tiskt preparat är den aktiva ingrediensen i kombination med farmaceutiskt acceptabla tillsatser och/eller spädmedel. Ett lämpligt farmaceutiskt acceptabelt spädmedel är isotonisk kok- 10 15 20 25 30 35 501 677 3 saltlösning. Beträffande de övriga farmaceutiskt acceptabla tillsatserna och spädmedlen så kan sådana återfinnas i littera- turen, t ex i den europeiska eller amerikanska farmakopén, och dessa tillsatser skall väljas i överensstämmelse med den specifika form av preparatet som skall användas för ett specifikt administreringssätt.

En ytterligare aspekt av uppfinningen är inriktad på en vaso- pressinanalog enligt uppfinningen för användning som ett läke- medel. Läkemedlet är företrädesvis ett antidiuretiskt medel.

En annan aspekt av uppfinningen är inriktad på användning av en vasopressinanalog enligt uppfinningen för framställning av ett läkemedel för behandling av diabetes insipidus. Uppfinningen omfattar också användning av en vasopressinanalog enligt uppfinningen för framställning av ett läkemedel för behandling av enures, särskilt nattlig sängvätning.

Ytterligare en annan aspekt av uppfinningen är inriktad på ett sätt att behandla en patient med diabetes insipidus eller enures, vilket omfattar administrering åt patienten av en anti- diuretisk effektiv mängd av en vasopressinanalog enligt upp- finningen eller ett farmaceutiskt preparat enligt uppfinningen. generell sygtesbeskrivnigg Vasopressin (VP)-analoger enligt uppfinningen kan framställas i enlighet med kända strategier för syntetisering av peptider, dvs steg för steg, genom bildning av peptidbindningar mellan aminosyrarester eller modifierade rester och slutlig ringslut- ning för att fullborda syntesen.

Alla VP-analoger som framställts i de nedan angivna exemplen syntetiserades genom fastfasteknik (J.M. Stewart, J.D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Company, 1984; och E. Atherton, R.C. Sheppard, Solid Phase Peptide Synthesis, 1989). 10 15 20 25 30 501 677 4 Peptiderna renades genom "reversed phase” kromatografi med en mobil fas som bestod av acetonitril/vatten/0, 1% TFA. Peptidernas acetatsalter framställdes sedan genom jonbyte. Peptidernas renhet och struktur bekräftades genom HPLC, aminosyraanalys och FAB-MS.

Följande förkortningar har använts: Boc = t-butyloxikarbonyl Fmoc = fluorenylmetyloxikarbonyl H-CaMeAbu-OH = (S)-2-amino-2-metyl-butansyra Hyp = 4-trans-hydroxiprolin Thi = 2-tienylalanin TBTU = 2-(IH-bensotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetrametyl- uronium-tetrafluoroborat DH? = dimetylformamid TFA = trifluoroättiksyra Aminosyraderivaten var från Bachen1AG, Schweiz, med undantag för (S)-2-amino-2-metyl-butansyra (H-CaMeAbu-OH) som var från Janssen Chimica (art.nr. 29 .005 . 02) . Fmoc-gruppen infördes genom standardmetoder (P.B.W. Ten Kortenaar et al., Int. J. Peptide Protein Res. 27, 1986, 398) , och NaFmoc-S-(3-t-butyloxikarbonyl- propyH-cystein, som syntetiserades genom att följa den procedur som publicerats av Z. Procházka et al., Collect. Czech. Chem.

Commun., 57, 1992, 1335.

Referensföreningen DDAVP syntetiserades av Ferring AB, Malmö, Sverige, på känt sätt, och referensföreningen enligt Exempel 3 syntetiserades också av Ferring AB, Malmö, Sverige. Sistnämnda förening har beskrivits av M. Zaoral et al. i Peptides 1986, sid. 468 Tabell 2. (1987 Walter de Gruyter & Co., Berlin. New York). 10 15 20 25 30 35 501 677 5 Exemæl l .9 f? lcnzc-D-Phe-Thi-canezabu-Asn-Nnfflc-Hyp-n-Arg-Gly-NH, CHZCHZ S C32 Peptiden syntetiserades genom fastfastekník, Pmoc/tBu-strategi användes, med undantag för D-Phe, där Boc-D-Phe-OH användes som aminosyraderivat. TentaGel-S RAM-harts (1 g, 0,2 mmol/g; RAPP Polymere S 30 023) användes som fastfas. Peptiden klyvdes från hartset och skyddsgrupper avlägsnades med TFA/ etanditiol/anisol 9S:2,5:2,5 (1,5 h; rumstemperatur). Det mesta av vätskan avdunstades och peptiden fälldes ut med dietyleter, varpå den frystorkades i vatten. Cykliseringen mellan positionerna 1 och 2 utfördes i torr DMF med TBTU (1-2 ekvivalenter) och N-metyl- morfolin (15-20 ekvivalenter) . koncentrationen av peptiden var 1 mg/ml. Reaktionstiden var 4 timmar vid rumstemperatur.

Lösningsmedlet avdunstades och peptiden fälldes ut med dietyl- eter. Rening utfördes på en "reversed-phase" kolonn med aceto- nitril/vatten/0,l% TFA som elueringsmedel. Fraktioner av acceptabel renhet indunstades och återstoden sattes på en ”reversed-phase" kolonn. Kolonnen tvättades med 0,2 M ammonium- acetat och vatten. Peptiden eluerades med en blandning av aceto- nitril/vatten/ 1% ättiksyra. Fraktioner av acceptabel renhet indunstades och frystorkades . Peptidstrukturen bekräftades genom HPLC, aminosyraanalys och FAB-MS-analys.

Utbyte 36 mg, 99% renhet.

Xêm I II clznzc-D-Phe-rhi-val-Asn-Nacnc-Hyp-n-Arg-Gly-nn, cnzcnz s ca, 10 15 20 25 30 35 501 677 6 Peptiden syntetiserades och renades med användning av samma strategi som i Exempel 1.

Utbyte 77 mg, 99% renhet.

Exemæl å (Referens) O ll ll çI-IZC-D-Tyr-Phe-Val-Asn-NHFHC-Pro-D-Arg-Gly-NHZ CHZCHZ S CHZ Peptiden syntetiserades och renades med användning av samma strategi som i Exempel 1.

Utbyte 23 mg, 99% renhet .

Biologisk aktivitet Föreningar undersöktes in vivo beträffande följande karakte- ristika: a) b) AnfiQiursLi§L_aLtixiLsf (ADM) Peptidernas antidiuretiska aktivitet bestämdes i den väl- etablerade råttmodellen som är baserad på kontinuerlig mätning av konduktiviteten hos urin som utsöndrats av râttan efter intravenös injektion av peptid (J. Medicinal cnem. (1919), 21, 352-ass).

Qastrointestinal absorption av ægtider [(Fm)v] Absorption av peptider som administrerats i tarmen genom ett kirurgiskt infört plaströr (10 cm distalt till pylo- rus) bestämdes genom jämförelse av den antidiuretiska effekten (area under kurva) efter intestinal administre- ring med antidiuretisk effekt efter intravenös administre- ring. Den antidiuretiska effekten följdes såsom beskrivits i J. Medicinal Chem. (1978) 21, 352-356. 10 15 20 25 c) ntranasa ab Absorption av peptider som administrerats i en volym av 30 pl i näshålan genom en PE20 kanyl som var ansluten till en Hamilton-spruta (införd 10 mm utan kirurgi), bestämdes genom jämförelse av den antidiuretiska effekten (area under kurva) efter intranasal administrering med den antidiuretiska effekten efter intravenös administrering. tinav tide (Fwhn 501 677 Den antidiuretiska effekten följdes såsom beskrivits (J.

Medícinal Chem. (1978) 21, 352-356).

Resultat: Förening AD” (Pmh (Fmhn [IU/pmol) [%] [%] Ilx. 1 631 1.3 42 2,.. 2 ' "EBEE ''''''''' "fi ' 20 Ex. 3 (Referens)_ 1530 - 0.4 5 DDAVP (Referens) 1100 0.09 8 Det framgår tydligt att referensföreningarna DDAVP och den enligt Exempel 3 har en avsevärt lägre biotillgänglighet än föreningarna enligt uppfinningen (Exempel 1 och Exempel 2).

Claims (9)

10 15 20 25 30 501 677 PA V

1. Vasopressinanalog, k ä n n e t e c k n a d därav, att den har formeln o o H 'l cnzc-D-Phe-Thi-x-Asn-NHcHc-Hyp-D-Arg-Gly-NH, l 2 3 4 5 6 7 8 9 CHZCHZ __________ s ___CHZ där X är (S)-2-Amino-2-metyl-butansyra (CaMeAbu) eller Valin (Val), och D-Phe är D-Fenylalanin Thi är 2-Tienylalanin Asn är Asparagin Hyp är 4-trans-Hydroxiprolin D-Arg är D-Arginin Gly är Glycin.

2. Farmaceutiskt preparat, k ä n n e t e c k n a t därav, att det omfattar en vasopressinanalog enligt kravet l som aktiv ingrediens.

3. Farmaceutiskt preparat enligt kravet 2, k å n n e t e c k n a t därav,att det är i form av ett oralt preparat. 10 15 20 25 501 677

4. Farmaceutiskt preparat enligt kravet 2, k ä n n e t e c k n a t därav, att det är i form av ett nasalt preparat.

5. Farmaceutiskt preparat enligt kravet 2, k ä n n e t e c k n a t därav, att det är i form av ett intravenöst preparat.

6. Vasopressinanalog enligt kravet 1, * k å n n e t e c k n a d därav, att den är för användning som ett läkemedel.

7. Vasopressinanalog enligt kravet 6, k ä n n e t e c k n a d därav, att läkemedlet är ett antidiuretiskt medel.

8. Användning av en. vasopressinanalog enligt kravet 1 för framställning av ett läkemedel för behandling av diabetes insipidus.

9. Användning av en vasopressinanalog enligt kravet l för framställning av ett läkemedel för behandling av enures.