JPH05506855A - 免疫抑制剤および抗炎症剤としてのスピペロンの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 および　て してのスビペロンの 兄ｌ目と１景 本発明の分野は、免疫および炎症反応の抑制である。

免疫反応および炎症反応は動物を感染および他の外因性疾患から防御する、生命 にかかわる役割を果たしているけれども、これらの反応は時により、および条件 によっては関連する深刻な病的状態を伴う望ましくない病理学的反応を生じる。

このような反応の例には、外来臓器または組織移植物に対する宿主拒絶：移植片 中に存在するドナーの免疫細胞が宿主組織を攻撃する移植片対宿主病；自己免疫 成分が証明されまたは疑われる疾患、例えば慢性関節リウマチ、若年性関節リウ マチ、乾］性関節炎、乾鱒、らい逆転反応、らい性結節性紅斑、自己免疫性ブド ウ膜炎、多発性硬化症、アレルギー脳を髄炎、全身性紅斑性狼癒、急性壊死性出 血性脳症、特発性両側性進行性感音性聴力障害、再生不良性貧血、赤芽球ろう、 特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、強皮症、ウェーゲナー肉芽腫症、慢性活動 性肝炎、重症筋無力症、スティーブンズージコンソン症候群、特発性スプルー、 クローン病、グレープス眼症、サルコイド−シス、原発性胆汁性肝硬変、原発性 若年性糖尿病、後部ブドウ膜炎、間質性肺線維症、アレルギー性喘息、環境から の刺激、例えばドクツタ、花粉、虫刺され、およびある種の食物、に対する不適 切なアレルギー反応、および上記免疫反応のいずれかか、日焼けまたは熱、電気 、または化学火傷のような物理的原因因子に対する反応の結果生じる、炎症°が 包含される。免疫抑制剤および抗炎症剤として用いられてきた様々な治療剤には 、ステロイドホルモン、代謝拮抗剤例えばメトトレキセートおよびアザチオプリ ン、アルキル化剤例えばシクロホスファミドおよびブスルファン、および抗生物 質が包含される。

良且旦！１ 一般に、本発明は動物（例えば、ヒト、あるいはイヌまたはネコのような、愛玩 用または商業用目的で飼われる動物）を有効量のスビベロンで全身的に処置する ことによる、免疫応答を抑制し、あるいは該動物の炎症を治療する方法を特徴と する。このような免疫学的または炎症反応は、例えば、自己免疫成分が証明また は疑われる疾患（以下°自己免疫疾患”と呼ぶ）、例えば慢性関節リウマチ、若 年性関節リウマチ、乾庭性関節炎、乾］、らい逆転反応、らい性結節性紅斑、自 己免疫性ブドウ膜炎、多発性硬化症、アレルギー脳を髄炎、全身性紅斑性狼瘉、 急性壊死性出血性脳症、特発性両側性進行性感音性聴力障害、再生不良性貧血、 赤芽球ろう、特発性血小板減少症、多発性軟骨炎、強皮症、ウェーゲナー肉芽腫 症、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、スティーブンズージョンソン症候群、特発 性スプルー、クローン病、グレープス眼症、サルコイド−シス、原発性胆汁性肝 硬変、原発性若年性糖尿病、後部ブドウ膜炎、間質性肺線維症に起因し得、ある いは、アレルギー（例えばアレルギー性喘息）または移植に関連した免疫（例え ば移植片対宿主病、または宿主による移植物拒絶）に起因し得る。本発明の方法 で治療可能な炎症のその他の例には、免疫応答、あらゆる種類の関節炎、アトピ ー性皮膚炎またはその他の皮膚炎の例、アレルギー反応、あらゆる種類の喘息、 または自己免疫疾患（上記に挙げたものに追加して）、を包含する状態に起因し 得る、または未知の病因によるものであり得る、皮膚および粘膜の炎症反応が含 まれる。本発明の方法に用いられるスビベロンは、好ましくは以下の一般式を有 する。

ここで、 Ｒ＋ｌｌＨ，ＣＨ３−、Ｃｄ５−、シクロヘキシル、　４−（ＯＣＨ３）Ｃｄ＊ −。

３−（ＣＨ５）ＣｅＨｊ−、４−（ＣＨ５）Ｃｓ［＋４−、４−Ｘ−ＣｓＨａ− 、（ＣＦ３）２ＣＨ−。

ＣＨ３（ＣＨ２）３−、　（ＣＢ３１２Ｃ＋１ＣＨ２−、Ｃ［１３ＣＨ２ＣＨ（ Ｃ１ｈ）−、または（ＣＨ３）３Ｃ−： Ｒ２＝ＨまたはＣＨ３： ｌｈ４．　ＣＨ３，ＣＨ３ＣＨ２−、ＣＨ３Ｃｌｌ２Ｃ！１２−、　（ＣＨ３） ２ＣＨ−、またはＣＮ　（ＣＨ２＞２−　； Ｒａ＝Ｈ，Ｃ３Ｈ３ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２−、Ｃ６１（ｓＣＨ（ＣＨ３） （ＣＨ２）２−。

０６Ｈ５ＣＨ２ＣＨ（ＣＦ３）ＣＨ２−、Ｃ５ＨｓＣＨ２ｃＨ２ｃ［ｆ（Ｃｔｈ ）−。

Ｃｓｌ’１ｓＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２ｈ−、４−ＣＩ’１３ＣｓＦＩａＣＨ（Ｃ Ｈ３）（ＣＨ２）３−。

４−（Ｃ）＋３０）Ｃ６Ｈ４ＣＨ（Ｃ［＋３）　（ＣＥｈ）３．　４−Ｘ−Ｃｓ ＨａＣＨ（ＣＦ３）ＣＨ２−。

４−Ｘ−ＣｓＨａＣｔｌ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２＋、４−Ｘ−ＣａＨａＣＨ（Ｃ Ｈ３）（ＣＨ２）２−１４−Ｘ−ＣｓＨａ−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＬ）３−、Ｃ６ ｔｌｓＣＩｌ（ＯＣＨ３＞（ＣＦ［２）２−。

ＣＨ２ ４−（ＣＩ（３）ＣａＬＣＯ（ＣＨ２）３−、　４−（ＣＨ３０）Ｃ３Ｈ３ＣＨ （ＣＬ）３−。

４−Ｘ−ＣａＨａＣＯ（ＣＨ２）ａ−、４−Ｘ−ＣｅＨｎＣＯ（ＣＨ２）３−。

ｒ ここでｎｍ３または４；　Ｘ−Ｆ、　ＣＩまたはＢｒ；および、各ＡｒおよびＡ ｒｌは、独立に、Ｈ，ＣａＨｓ−、４−（ＣＨａ）Ｃ６）！ｎ−，４−（ＣＨ３ ０）ＣａＬ・−。

４−Ｘ−ＣｓＨ４−、３−（ＣＸ３）ＣｓＨａ−、２−ｆ　１−　二）Ｌｔ、ま たは４−Ｘ−ＣａＨａＣＨ２−であり、 そして、より好ましくは以下の式を有する。

Ｃａ）ｌｓ この活性化合物はＣＮ５−ブラインドスビベロン（ＣＮＳ−ｂｌｉｎｄ　５ｐｉ ｐｅｒｏｎ）であり得（以下に定義する）、および／または薬学的に許容し得る 希釈剤またはキャリアに組合わされ得る。

スビベロンが、無痛覚症および神経弛緩のような神経薬理学的副作用を主として 誘発し得ないような様式で、誘導または複合されている場合、これを°ＣＮ５− ブラインドスビベロン”と呼ぶ。このような組成物は好ましくは、シクロアミロ ース、例えばシクロデキストリンに結合したスビベロンを含み、該組成物のスビ ペロン部分は好ましくは上記のスビベロンの一般式、またはより好ましくは“ス ビベロン（１）”と名付けた式を有する。

スピベロンは、歴史的には精神分裂病の治療に有用なトランキライザーとして臨 床に用いられてきた、周知の薬剤である。それ故に、安全性および人に使用する 際のその他の重要な特徴はよく調べられている。しかし、その以前から知られて いる神経薬理学的活性に加えて、スビペロンは、本発明、の方法において、様々 な状態から生じる免疫および／または炎症反応に対する抑制剤として全身的に作 用するという、重要な能力が見いだされた。従って、これらの状態の治療に有用 な適用を冑している。本発明のＣＮ５−ブラインドスビペロンは、スビベロンが ＣＮ５−ブラインド型でないと誘発される神経弛緩のような、望ましくない神経 薬理学的副作用を伴うことなく、上記免疫および炎症反応を抑制することができ る。

しい　態　の号日 まず図面について説明する。

図１は、ＩＬ−１に誘発される炎症による足跡の腫れに対する全身投与のスピベ ロンの効果を示す棒グラフである。

図２は、ＩＬ−１に誘発される炎症によって浸潤した炎症細胞の数に対する、全 身投与スピペロンの効果を示す棒グラフである。

図３は、ＰＭＡに誘発される炎症による足跡の腫れに対する全身投与のスビペロ ンの効果を示す棒グラフである。

図４は、ＰＭＡに誘発される炎症によって浸潤した炎症細胞の数に対する、全身 投与スビベロンの効果を示す棒グラフである。

図５は、オキサシロンに誘導される皮膚接触過敏症による耳の腫れに対する、全 身投与のスビベロンの効果を示す棒グラフである。

図６は、オキサシロンに誘発される皮膚接触過敏症によって浸潤した炎症細胞の 数に対する、全身投与スピペロンの効果を示す棒グラフである。

スビベロンの　゛およびＡ 本願中で用いられる用語°スビベロン°は本発明の方法において活性な全ての分 子を意味し、以下の米国特許：第３．１５５゜６６９号：第３．１５５．６７０ 号：箪３．１５１，６６４号：および第３．２３８．２１６号の主題である。こ れらの特許は参考文献としてここに援用される。これらの各化合物の合成方法は 上記の４つの特許に開示されている。

より詳細には、以下の式を有するスビペロンの形態が、本発明に使用され得る。

ここで、 Ｒ１”Ｈ，ＣＨ３−、Ｃ６Ｈ５−、シクロヘキシル、　４−（ＯＣＨ３）Ｃ６Ｈ ，ｌ−。

３−（ＣＮ５）ＣｓＨ４−、４−（Ｃ’Ｈ３）Ｃ６Ｈ４−、４−Ｘ−Ｃ６Ｈａ− 、（ＣＨ３）２ＣＨ−。

ＣＨ３（ＣＨ２ｈ−、（ＣＨ３ｈＣ１ｌＩＣＴ１２−、　ＣＨ３ＣＨ２）ｌ（Ｃ ＴＩ３）−、または（ＣＨ３）３Ｃ−； １２！ＨまたはＣＨ３； Ｒ３−Ｈ，ＣＨ３，ＣＬＣＨ２−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−、（ＣＨｉ）ａｃＨ− 、またはＣＮ　（ＣＨ２）２−　： Ｒ４・Ｈ，Ｃ６Ｈ３ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２−、Ｃ６Ｈ６ＣＨ（ＣＮ５）（ ＣＨ２）２−。

Ｃ６Ｈ３ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−、Ｃａ［ｌ５ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３ ）−。

Ｃ３）１５ｃＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）３−、４−ＣＨ３Ｃｅ■４ｃＨ（ＣＨ３） 　（ＣＨ２）３−。

４−（ＣＨ３０）ＣｓＨａＣＨ（Ｃ［ｆａ）（ＣＨ２）ｔ、　４−Ｘ−ＣａＨｊ ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−。

４−Ｘ−Ｃ６Ｈ４ＣＩＩ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２−、４−Ｘ−Ｃａ）ＩａＣＨ（ ＣＨ３）（ＣＨ２）２−。

４−Ｘ−ＣａＨａ−ＣＨ（ＣＨａ）（ＣＨ２）３−、　ＣａＦＩｓＣＦ［（ＯＣ Ｈ３）（ＣＨ２）２−。

４−（ＣＮ５）Ｃ６Ｈ４ＣＯ（ＣＨ２ｈ−、４−（ＣＨ３０）Ｃ８Ｈ４Ｃ○（Ｃ Ｈ２）ｉ−。

４−Ｘ−Ｃ，■４ｃｏ（ＣＨ２ｈ−、４−Ｘ−Ｃ３ＨａＣＯ（ＣＨ２ｈ−。

２−チェニル−ＣＯ（ＣＨ２）３−、またはＡｒ１−ｃＩ（（ｃ＋ｔ２Ｌ−であ り、ｒ ここでｎ＝３または４．　Ｘ＝Ｆ、　ＣＩまたはＢｒ：および、各ＡｒおよびＡ ｒ１は、独立に、■、　Ｃ６Ｈ５−、４−（ＣＮ５）ＣｓＨ４−、４−（ＣＨ３ ０）ＣａＨａ−。

４Ｊ−Ｃ６Ｈ４−、３−（ＣＸ３）Ｃ６Ｈ４−、２−ｆＸニル、または４−Ｘ− ＣａＨ４ＣＨ２−である。

本発明の方法に特に有用なスビペロンの形態には、Ｒ＋−ＣａＨｓ−、４−（Ｘ ）−Ｃ６Ｈ４−、または４−（ＣＮ５）ＣｓＬ−；　Ｒ２：ＨまたはＣＨ３：　 Ｒ３＝Ｈ，ＣＨ３，またＩｔ　ＣＨ３ＣＨ２−；およびＲ４＝４−Ｘ−Ｃ６１１ ４ＣＯ（ＣＨ２）３−または２−チェニル−Ｇｏ（ＣＴＩ２）３−であるものが 含まれ、特にＲ１＝Ｃ８１１５−、４−（Ｂｒ）−Ｃ６■じ、または４−（ＣＩ ）−Ｃａｌｌａ−；　Ｒ２４またはＣＨ３：　Ｒ３”Ｈ，Ｃ）１３．またはＣＨ ３ＣＨ２−；およびＲａ−４−Ｘ−ＣＪａＣＯ（Ｃ［１２＞３−または２−チェ ニル−〇〇　（ＣＩ（２）　３−であるものが含まれる。

実施例１〜３で用いられているスピベロンの特定の形態は８−［３−（ｐ−フル オロベンゾイル）プロピル】−１−フェニル−１，３，１ｌ−１−リアザスビロ ［４，５］デカン−４−オンである。本願中で”スビペロン（１）”と呼ばれる この化合物は以下の構造式を有する。

上述の形態のスビベロンのいずれかの免疫抑制および／または抗炎症剤としての 利用可能性は、その化合物を合成し実施例１〜３に記載の生物学的アッセイの１ またはそれ以上を試験することにより、好都合に測定され得る。

スピベロンの中　経糸にゴーする　ａを　ａするスピペロンは無痛覚症および神 経弛緩の活性を含む、重要な神経薬理学的性質を宵する。これらは、歴史的に精 神分裂病の治療のためのトランキライザーとしての使用に寄与したが、　しかし 免疫抑制または好炎症剤として用いられる場合には、これらは一般に望ましくな い副作用をもたらす。このような神経弛緩の性質を１太しようとする努力のなか で、Ｍｏｅｒｌｅｉｎら（Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｎｕｃｌ、　Ｍｅｄ、　Ｂｉｏｌ、 １２：３５３−３５６．　１９８５＞は、この化合物の親油性と、従ってその脳 血管関門を通過する潜在能力とを増大するように設計された、多数の形態のスピ ベロンを合成した。彼らの発見は、化合物の脳血液関門を通過する能力が理想的 にはｉ上止されるように、本発明の方法で使用する化合物を選択するためにも、 指針とすることができる。

スピペロンの中枢神経系（ＣＮＳ）に対する影響を減少させるその他の方法には 、以下のような当該技術分野に周知の、確立されたいくつかのアプローチが含ま れる：（ａ）有機化学の標準的方法を用いて、大きな成分く例えば、アルブミン またはポリエチレングリコール）に共有結合させることにより、分子の大きさを 増大させること。

＜ｂ＞標準的な有機合成方法を適用して電荷を有する側鎖の１またはそれ以上を 分子に追加するか、あるいは既に存在する側鎖をより極性に変化させることによ り、分子の全体の親水性を増大させること： （ｃ）　（ａ）および（ｂ）の組合せ；または（（１）シクロアミロース（例え ばβ−シクロデキストリンのようなシクロデキストリン）ような、環状分子と非 共有結合性の複合体を形成させること。シクロアミロースの水酸基は、シクロア ミロースによって形成される環の外側表面は親水性で、内側表面は親油性となる ように、空間的に配置されている。

水溶液中で使用すると、この構造は°ゲスト分子°と呼ばれる、水よりも極性が 低く好適なデイメンシヨンを有する分子（またはその部分）を親油性の内部間隙 に組み込ませ、シクロアミロース／ゲスト分子複合体は脳血液関門に対して、関 門を浸透し得ない比較的大きく極性の化合物として呈示される。このような複合 体は当該分野で周知の任意の方法で調製し得る。これには、ジゴキシンとの複合 体にされたβ−シクロデキストリンを開示する米国特許第４．５５５．５０４号 が含まれる。

上述の方法のいずれかで変化され、または複合体にされた、免疫および／または 炎症反応の抑制能力を示す（ＣＮＳに対する影響を許容可能なレベルにまで低下 させた）スビペロンは、本願中で゛ＣＮ５−ブラインドスビベロン°と呼ばれる 。あらゆる特定のＣＮ５−ブラインドスビベロン本体の、免疫抑制または抗炎症 剤としての効力は、以下の実施例１〜３に記載の任意のアッセイで好都合に試験 され得る。同じ本体が、スビベロンに見られる神経薬理学的副作用を誘発できる か否かは、例えばＥｄｄｙら、　Ｊ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　１０７：３８５ （１９５３＞および１１０：１３５（１９５４）のホットプレート試験でアッセ イし得る。

塗１」口１又惣 スビベロンは薬学的に許容し得る塩または複合体の形態で提供され得る。本願で 用いられる用語”薬学的に許容し得る塩または複合体”とは、親化合物の所望の 生物学的活性を保持し、望ましくない毒性作用を、もしもあったとしても最小し か示さない、塩または複合体のことを指す。このような塩の例は（ａ）無機酸（ 例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸および硝酸等）を用いて形成される酸付 加塩、および酢酸、シュウ酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、 安息香酸、タンニン酸、パモン酸（ｐａｍｏｉｃ　ａｃｆｄ）、アルギン酸、ポ リグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、およびポリ ガラクトウロン酸のような有機酸を用いて形成される［：　（ｂ）亜鉛、カルシ ウム、ビスマス、／イリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コノ望ルト、 二・ノケル、およびカドミウム等のような多価金属、またはＮ、Ｎ−ジベンジル エチレン−ジアミンまたはエチレンジアミンから形成される有機カチオンを用い て形成された塩基付加塩：または（Ｃ）　（ａ）と（ｂ）との組合せ、例えばタ ンニン酸亜鉛塩等、である。この組成物は経口投与のための火剤、錠剤、カプセ ル、また（ま液体：患者の皮膚に適用するためのクリーム、ゲル、ローシヨン、 スプレー、または軟膏１ｍ則またはスプレーとして鼻から投与され得る液体二ま たは静脈内、皮下、非経口、または腹腔内投与可能な液体の形態であり得る。こ の治療用組成物はまた、バモン酸（ｐａ＋ｍｏｉｃ　ａｃｉｄ）のような親油性 の塩と複合させた、オイルのエマルジョンまたは分散物の形態か、あるいは、皮 下または筋肉内投与のための生分解性徐放製剤の形態であり得る。最大の効力の ために、ゼロ次元の放出が望ましい。ゼロ次元の放出は、治療用組成物の投与の ための、埋め込み可能なまたは外部のポンプを用いて得ることができる。

肚立 スビベロンおよびＣＮ５−ブラインドスビベロンは、動物において全身的に作用 して免疫および炎症反応を抑制する能力を有する。このように、これらまたはそ の治療用組成物は、以下を含む多数の免疫および／または炎症性疾患の治療に有 用である：外来臓器または組織移植物の宿主による拒絶に関連するもの：移植片 対宿主病：自己免疫疾患、例えば慢性関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾痕 性関節炎、乾癖、らい逆転反応、らい性結節性紅斑、自己免疫性ブドウ膜炎、多 発性硬化症、アレルギー脳を髄炎、全身性紅斑性狼癒、急性壊死性出血性脳症、 特発性両側性進行性感音性聴力障害、再生不良性貧血、赤芽球ろう、特発性血小 板減少症、多発性硬化症、強皮症、ウェーゲナー肉芽膿症、慢性活動性肝炎、重 症筋無力症、スティーブンズージ葺ンソン症候群、特発性スプルー、クローン病 、グレープス眼症、サルコイド−シス、原発性胆汁性肝硬変、原発性若年性糖尿 病、後部ブドウ膜炎、間質性肺線維症：アレルギー性反応：および、日焼けまた は熱、電気、または化学火傷の結果生じる炎症。

：ｒＩ−に　れる２　の ２００単位の組換えヒトインターロイキン−１（−ｒｌＬ−１”；　Ｇｅｎｚｙ ｍｅ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、　Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、マサチューセッツ州： 比活性。

１００、０００単位／μｇ）を含有する０、　０５ｍ１のリン酸緩衝生理食塩水 （−ＰＢＳ”；　ＧＩＢＣＯ，Ｇｒａｎｄ　ｌ５ｌａｎｄ、ニューヨーク州）を 、１５匹のマウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雌マウス、６〜８週齢；　Ｊａｃｋｓｏｎ 　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、　Ｂａｒ　Ｈａｒｂｏｒ、メリーランド州；またはＢ ａ１ｂ／ｃ雌マウス、６〜８週齢、　Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｔｖｅｒ　Ｌａｂｏｒ ａｔｏｒｉｅｓ、にｉｎｇｓｔｏｎ　Ｆａｃｆｌｉｔｙ、　Ｓｔ。

ｎｅｒｉｄｇｅ、ニューヨーク州）の各々の右後足足諺の皮肉に注射した。同量 のＰＢＳを各マウスの左の後足足跡に注射した。ｒｌＬ−１を注射した１時間後 に、各マウスの右後方脇腹の皮下に以下のいずれかの一つを注射した：　０．１ ＊ＩのクレモホールＥＬ　（Ｃｒｅｗｏｐｈｏｒ　ＥＬ）＜ＲＡＳＦ　Ｃａｒｐ 、、ニューシャーシー州、から入手した薬学的キャリア）；　０．１＊Ｉのクレ モホールＥＬ中の３（ｌａｇ／ｋｇスビベロン（１）（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｆ ｃａｌ　Ｃｏ、、　Ｓｔ、　Ｌｏｕｔｓ、モンタナ州）：または０、１＊Ｉのク レモホールＥＬ中の１５０＋＊ｇ／ｋｇスビペロン（１）。ｒｌＬ−１注射の８ 時間後、バネで調節された技師用マイクロメーターで足跡の厚みを計測した。計 測した後、マウスを層殺し、右後足足誼組織の標本を１０％緩衝化ホルマリンで 少なくとも４８時間固定し、その後、パラフィン包埋されヘマトキシリンおよび エオシン染色した切片で行われる形態測定の標準法を用いて、浸潤細胞の顕微鏡 的評価を行うために調製した。標本は接眼グリッドを用いて、コード化された様 式で調べ、形態学的に同定された炎症細胞の全てを定量した。

スビベロンによる全身的治療はｒｌＬ−１に誘発される炎症の程度を、これらの 炎症が測定された各マウスの右と左の足跡の厚みの差（”Δ厚み°）として表さ れるか（図１）、または炎症細胞の浸潤の程度として表されるか（図２）によら ず、減少させた。

３０ｍｇ／ｋｇおよび１５０ｍｇ／ｋｇのスビベロンで処置したときのΔ厚みは 、無処置コントロールのΔ厚みよりもそれぞれ１０％および５０％少なかった（ 図１）が一方、検査した足跡組織の１２当り浸潤細胞数は、無処置コントロール に比べて、これら２つの投与量でそれぞれ約４０％および７５％減少した（図２ ）。

２：　ＰＭＡに　れる：　の アセトンに１ｍｇ／アセトンｋｇで溶解したホルボール−１２−ミリステート− １３−アセテート（”ＰＭＡ”、　Ｓｉｇ＋ｓａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、） の１０μｌを、１５匹のＢａ１ｂ／ｃマウスの各々の右耳の内側表面に塗った。

ＰＭＡを塗った１時間後、マウスを実施例１に記載のように、スビベロン（１） またはキャリア（クレモホールＥＬ）で全身的に処置した。ＰＭ＾塗布の直前ま たは１８時間後に、耳の厚みをバネのついた技師用マイクロメーターで測定した 。耳の厚みの測定値の”Δ厚み“は、１８時間値からベースライン値を引いた値 を表す。次に、マウスを殺し、耳組織の標本をｐＨ７，４の０．１Ｍカコジル酸 ナトリウム緩衝液中の２，０％バラホルムアルデヒド、２．５％グルタルアルデ ヒドおよび０．０２５％ＣａＣｌ２からなる固定化溶液で、４℃で２４時間で固 定した。橋本をｐＨ７，４のＯ，１Ｍカコジル酸ナトリウム緩衝液中で、さらに ２４時間貯蔵した後、古い緩衝液を除去して新鮮なカコジレート緩衝液を加えた 。その後、標本をプラスチック包埋しギムザ染色した１μｍ切片で行われる形態 測定の標準法を用いて、形態学的に同定される浸潤炎症細胞を顕微鏡的に定量す るために調製した。

図３に示すように、３０ｍｇ／ｋｇおよび１５０＊ｇ／ｋｇで全身投与したスピ ベロンは、ＰＭＡに誘発される炎症に関連する耳の膿れを、スピベロンを与えな かったコントロールで観察した耳の腫れと比べて、それぞれ４０％および６０％ 減少できる。さらに、炎症細胞の浸潤は、３０ｍｇ／ｋｇおよび１５０ｍｇ／ｋ ｇのスビベロンで処置されたマウスの耳組織で、それぞれ約２０％および６５％ 減少した（図４）。

３ニオキサゾロンに　れ　”・　の １５匹のＢａ１ｂ／Ｃマウスの腹部を電気バリカンで剃った。アセトン：オリー ブ油の４：１　ｖ：ｖ中の４％ｖ／ｖオキサシロン（Ｓｉｇ＋＊ａ　Ｃｈｅｍｉ ｃａｌ　Ｃｏ、）溶液の５０μｍを剃った腹部に塗り、５μｌを各々のマウスの 各後足足置に塗った。５から７日後、各々のマウスの右耳の内側表面と外側表面 の両方に、０．４％オキサシロン溶液の１０μｌを塗ることにより、マウスをオ キサシロンに対する接触過敏についてチャレンジした。オキサシロンのチャレン ジ１時間後、マウスに実施例１に記載のようにキャリア（クレモホールＥＬ）中 のスビベロン（１）、またはキャリア単独を全身投与した。オキサシロンのチャ レンジの直前または２４時間後に、耳の厚みを実施例２に記載のように、技師用 のマイクロメーターで測定してΔ厚みを計算した。測定値が得られた後、マウス を殺し、耳の組織を実施例２に記載のように浸潤炎症細胞の測定用に処理した。

図５に示すように、スビベロンはオキサシロンの誘発する接触過敏に関連した耳 の腫れを、無処置コントロールのマウスが示す腫れの程度に比べて、３０ｍｇ／ ｋｇおよびＩＳＧａｇ／ｋｇのスビベロン全身投与量に対してそれぞれ、約６８ ％および８ｏ％抑制できる。同じ投与量のスビベロンが、オキサシロンでチャレ ンジしたマウスの炎症細胞浸潤を、スビベロンを与えないコントロールのマウス に比べて、それぞれ約３５％および８０％抑制した（図６）。

他の実施態様は、以下の請求の範囲の内に入る。

大ピイロソ役）１　、　ｒｒｃ＋／ｋｑＦＩＧ、　１ 人σＡ！ａン投テ斐　・ｍ鎗９ 人ピ公ロン投ｎ　・ｍｇ／ｋｇ ＦＩＧ、　３ 人ピへ゛ロン役シ１１ｍｇ／に９ 人ピベロン投う生　・１９水９ ＦＩＧ、　５ 人げマロン投テ１１ｍ９Ｎ９ ＦＩＧ、　６ 要約書 哺乳動物を有効量のスピベロンで処置することにより、哺乳動物における免疫反 応を抑制し、あるいは炎症を治療する方法：およびＣＮＳにブラインドなスビベ ロンを含む組成物。

補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）平成４年９月１６日

Claims (25)

【特許請求の範囲】
1. １．哺乳動物の免疫応答を抑制し、または炎症を治療する方法であって、該方法 は前記哺乳動物を有効量のスピペロンで全身的に処置することを包含する、方法 。
2. ２．前記免疫応答が自己免疫疾患に起因する、請求項１に記載の方法。
3. ３．前記自己免疫疾患が、慢性関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節 炎、乾癬、らい逆転反応、らい性結節性紅斑、自己免疫性ブドウ膜炎、多発性硬 化症、アレルギー脳脊髄炎、全身性紅斑性狼瘡、急性壊死性出血性脳症、特発性 両側性進行性感音性聴力障害、再生不良性貧血、赤芽球ろう、特発性血小板減少 症、多発性軟骨炎、強皮症、ウエーデナー肉芽腫症、慢性活動性肝炎、重症筋無 力症、スティープンスージョンソン症候群、特発性スプルー、クローン病、グレ ープス眼症、サルコイドーシス、原発性胆汁性肝硬変、原発性若年性糖尿病、後 部ブドウ膜炎、および間質性肺線維症からなる群から選択される、請求項２に記 載の方法。
4. ４．前記免疫応答がアレルギーに起因する、請求項１に記載の方法。
5. ５．前記アレルギーがアレルギー性喘息である、請求項４に記載の方法。
6. ６．前記免疫応答が移植に開運した免疫に起因する、請求項１に記載の方法。
7. ７．前記移植免疫が移植片対宿主病を含む、請求項６に記載の方法。
8. ８．前記移植免疫が前記哺乳動物による移植物拒絶を含む、請求項６に記載の方 法。
9. ９．前記炎症反応が皮膚または粘膜の炎症反応である、請求項１に記載の方法。
10. １０．前記炎症反応が未知の病因によるものである、請求項１に記載の方法。
11. １１．前記炎症反応が免疫応答を含む状態に起因する、請求項１に記載の方法。
12. １２．前記炎症反応が、任意の種類の関節炎；アトピー性皮膚炎；アレルギー反 応；および自己免疫疾患からなる群から選択される状態に起因する、請求項１に 記載の方法。
13. １３．前記状態が任意の種類の喘息である、請求項１２に記載の方法。
14. １４．前記哺乳動物がヒトである、請求項１に記載の方法。
15. １５．前記哺乳動物が愛玩用または商業用の目的で飼われる動物である、請求項 １に記載の方法。
16. １６．前記哺乳動物がイヌまたはネコである、請求項１５に記載の方法。
17. １７．前記スピペロンが薬学的に許容し得る希釈剤またはキャリアと組合せられ た、請求項１に記載の方法。
18. １８．前記スピペロンが以下の式を有する、請求項１に記載の方法： ▲数式、化学式、表等があります▼ ここで、 Ｒ１＝Ｈ，ＣＨ３−，Ｃ６Ｈ５−，シクロヘキシル，４−（ＯＣＨ３）Ｃ６Ｈ４ −，３−（ＯＨ３）Ｃ６Ｈ４−，４−（ＣＨ３）Ｃ６Ｈ４−，４−Ｘ−Ｃ６Ｈ４ −，（ＣＨ３）２ＣＨ−，ＣＨ３（ＣＨ２）３−，（ＣＨ３）２ＣＨＣＨ２−， ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−，または（ＣＨ３）３Ｃ−； Ｒ２＝ＨまたはＣＨ３； Ｒ３＝Ｈ，ＣＨ３，ＣＨ３ＣＨ２−，ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−，（ＣＨ３）２ＣＨ −，またはＣＮ（ＣＨ２）２−； Ｒ４＝Ｈ，Ｃ６Ｈ５ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２−，Ｃ６Ｈ５ＣＨ（ＣＨ３）（ ＣＨ２）２−，Ｃ６Ｈ５ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−，Ｃ６Ｈ５ＣＨ２ＣＨ２ ＣＨ（ＣＨ３）−，Ｃ６Ｈ５ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）３−，４−ＣＨ３Ｃ６Ｈ ４ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）３−，４−（ＣＨ３Ｏ）Ｃ６Ｈ４ＣＨ（ＣＨ３）（ ＣＨ２）３，４−Ｘ−Ｃ６Ｈ４ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−，４−Ｘ−Ｃ６Ｈ４ＣＨ （ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２−，４−Ｘ−Ｃ６Ｈ４ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）２−， ４−Ｘ−Ｃ６Ｈ４−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）３−，Ｃ６Ｈ５ＣＨ（ＯＣＨ３） （ＣＨ２）２−，▲数式、化学式、表等があります▼，Ｃ６Ｈ５ＣＯ（ＣＨ２） ３−，Ｃ６Ｈ５ＣＯ（ＣＨ２）４−，４−（ＣＨ３）Ｃ６Ｈ４ＣＯ（ＣＨ２）３ −，４−（ＣＨ３０）Ｃ６Ｈ４ＣＯ（ＣＨ２）３−，４−Ｘ−Ｃ６Ｈ４ＣＯ（Ｃ Ｈ２）３−，４−Ｘ−Ｃ６Ｈ４ＣＯ（ＣＨ２）３−，２−チェニル−ＣＯ（ＣＨ ２）３−，または▲数式、化学式、表等があります▼であり、ここでｎ＝３また は４：Ｘ＝Ｆ，Ｃ１またはＢｒ；および、各ＡｒおよびＡｒ１は、独立に、Ｈ， Ｃ６Ｈ５−，４−（ＣＨ３）Ｃ６Ｈ４−，４−（ＣＨ３Ｏ）Ｃ６Ｈ４−，４−Ｘ −Ｃ６Ｈ４−，３−（Ｃｘ３Ｃ６Ｈ４−，２−チェニル，または４−Ｘ−Ｃ６Ｈ ４ＣＨ２−である。
19. １９．前記スピペロンが以下の式を有する、請求項１８に記載の方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼
20. ２０．前記スピペロンがＣＮＳ−ブラインドスピペロンである、請求項１に記載 の方法。
21. ２１．ＣＮＳ−ブラインドスピペロンを含む組成物。
22. ２２．前記ＣＮＳ−ブラインドスピペロンがシクロアミロースに結合したスピペ ロンを含む、請求項２１に記載の組成物。
23. ２３．前記シクロアミロースがシクロデ牛ストリンである、請求項２２に記載の 組成物。
24. ２４．前記スピペロンが以下の式を有する、請求項２２に記載の組成物： ▲数式、化学式、表等があります▼ ここで、 Ｒ１＝Ｈ，ＣＨ３−，Ｃ６Ｈ５−，シクロヘキシル，４−（ＯＣＨ３）Ｃ６Ｈ４ −，３−（ＣＨ３）Ｃ６Ｈ４−，４−（ＣＨ３）Ｃ６Ｈ４−，４−Ｘ−Ｃ６Ｈ４ −，（ＣＨ３）２ＣＨ−，ＣＨ３（ＣＨ２）３−，（ＣＨ３）２ＣＨＣＨ２−， ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−，または（ＣＨ３）３Ｃ−； Ｒ２＝ＨまたはＣＨ３； Ｒ３＝Ｈ，ＣＨ３，ＣＨ３ＣＨ２−，ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−，（ＣＨ３）２ＣＨ −，またはＣＮ（ＣＨ２）２−； Ｒ４＝Ｈ，Ｃ６Ｈ５ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨピ，Ｃ６Ｈ５ＣＨ（Ｃｈ３）（Ｃ Ｈ２）２−，Ｃ６Ｈ５ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−，Ｃ６Ｈ５ＣＨ２ＣＨ２Ｃ Ｈ（ＣＨ３）−，Ｃ６Ｈ５ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）３−，４−ＣＨ３Ｃ６Ｈ４ ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）３−，４−（ＣＨ３Ｏ）Ｃ６Ｈ４ＣＨ（ＣＨ３）（Ｃ Ｈ２）３，４−Ｘ−Ｃ６Ｈ４ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−，４−Ｘ−Ｃ６Ｈ４ＣＨ（ ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ２−，４−Ｘ−Ｃ６Ｈ４ＯＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）２−，４ −Ｘ−Ｃ６Ｈ４−ＣＨ（ＣＨ３）（ＣＨ２）３−，Ｃ６Ｈ５ＣＨ（ＯＣＨ３）（ ＣＨ２）２−，▲数式、化学式、表等があります▼，Ｃ６Ｈ５ＣＯ（ＣＨ２）３ −，Ｃ６Ｈ５ＣＯ（ＣＨ２）４−，４−（ＣＨ３）Ｃ６Ｈ４ＣＯ（ＣＨ２）３− ，４−（ＣＨ３Ｏ）Ｃ６Ｈ４ＣＯ（ＣＨ２）３−，４−Ｘ−Ｃ６Ｈ４ＣＯ（ＣＨ ２）３−，４−Ｘ−Ｃ６Ｈ４ＣＯ（ＣＨ２）３−，２−チエニル−ＣＯ（ＣＨ２ ）３−，または▲数式、化学式、表等があります▼であり、ここでｎ＝３または ４；Ｘ＝Ｆ，Ｃ１またはＢｒ；および、各ＡｒおよびＡｒ１は、独立に、Ｈ，Ｃ ６Ｈ５−，４−（ＣＨ３）Ｃ６Ｈ４−，４−（ＣＨ３Ｏ）Ｃ６Ｈ４−，４−Ｘ− Ｃ６Ｈ４−，３−（ＣＸ３）Ｃ６Ｈ４−，２−チエニル，または４−Ｘ−Ｃ６Ｈ ４ＣＨ２−である。
25. ２５．前記スピペロンが以下の式を有する、請求項２４に記載の組成物。 ▲数式、化学式、表等があります▼発明の詳細な説明